防治病原物侵染植物的方法
阅读：1040发布：2020-05-29
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1.式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐或含式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐的组合物用于预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害的用途，
其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
2.权利要求1所述的用途，其中所述的病原物为寄生在植物韧皮部的病原物，例如寄生在植物韧皮部的细菌(例如植原体属(Phytoplasma)、韧皮部杆菌属(Candidatus
Liberibacter spp.))。
3.权利要求1或2所述的用途，其中所述的病原物为韧皮部杆菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)、韧皮部杆菌非洲种(Candidatus Liberibacter africanus)、韧皮部杆菌美洲种(Candidatus Liberibacter americus)、Candidatus Liberibacter solanacearum、葡萄黄金化植原体(Grapevine flavescence doree phytoplasma)或梨衰退病植原体(Candidatus Phytoplasma pyri)。
4.权利要求1所述的用途，其中所述由病原物引起的侵染性病害为黄龙病、斑马片病、葡萄黄金病或梨衰退病。
5.权利要求1所述的用途，其中所述的植物为茄科植物(例如马铃薯、番茄、茄子、绿番茄、树番茄等)、伞形科植物(例如胡萝卜、芹菜等)、芸香科植物(例如柑橘属、枳属、金柑属、九里香属等)、葡萄科植物(例如葡萄)或蔷薇科植物(例如梨)。
6.权利要求1所述的用途，其中所述的组合物中还含有助剂。
7.一种预防或控制或治疗病原物侵染植物的方法，包括使用至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐来处理所述病原物、其栖息地或欲防止病原物侵袭的植物、植物的繁殖材料、土壤、有机基质、区域、物质或空间，其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
8.一种预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害的方法，包括将至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐施用至所述植物、其繁殖材料、其果实或其生长的土壤、有机基质、区域或空间，
其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
9.一种预防或控制或治疗病原物侵染植物的方法，包括使用包括至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐的组合物来处理所述病原物、其栖息地或欲防止病原物侵袭的植物、植物的繁殖材料、土壤、有机基质、区域、物质或空间，
其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
10.一种预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害的方法，包括：将包括至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐的组合物施用至所述植物、其繁殖材料、其果实或其生长的土壤、有机基质、区域或空间，其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
11.权利要求9或10所述的方法，其中所述的组合物中还含有助剂。
12.权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述的病原物为寄生在植物韧皮部的病原物，例如寄生在植物韧皮部的细菌(例如植原体属(Phytoplasma)、韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter spp.))。
13.权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述的病原物为韧皮部杆菌亚洲种
(Candidatus Liberibacter asiaticus)、韧皮部杆菌非洲种(Candidatus Liberibacter africanus)、韧皮部杆菌美洲种(Candidatus Liberibacter americus)、Candidatus Liberibacter solanacearum、葡萄黄金化植原体(Grapevine flavescence doree phytoplasma)或梨衰退病植原体(Candidatus Phytoplasma pyri)。
14.权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述的植物为茄科植物(例如马铃薯、番茄、茄子、绿番茄、树番茄等)、伞形科植物(例如胡萝卜、芹菜等)、芸香科植物(例如柑橘属、枳属、金柑属、九里香属等)、葡萄科植物(例如葡萄)或蔷薇科植物(例如梨)。
15.权利要求8或10中任一项所述的方法，其中所述由病原物引起的侵染性病害为黄龙病、斑马片并、葡萄黄金病或梨衰退病。
16.权利要求1至6任一项所述的用途或权利要求7-10中任一项所述的方法，其中，R1、R2各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基；
例如，R1、R2各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基；
例如，R1、R2各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、C1-4烷基、C1-4烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
17.权利要求1至6任一项所述的用途或权利要求7-10中任一项所述的方法，其中R1为氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙基氧基、正丁基氧基、异丁基氧基、仲丁基氧基、叔丁基氧基、正戊基氧基、正己基氧基、硝基、羟基、氰基或氨基。
18.权利要求1至6任一项所述的用途或权利要求7-10中任一项所述的方法，其中R2为氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙基氧基、正丁基氧基、异丁基氧基、仲丁基氧基、叔丁基氧基、正戊基氧基正己基氧基、硝基、羟基、氰基或氨基。
19.权利要求1至6任一项所述的用途或权利要求7-10中任一项所述的方法，其中R1为氢、氟、氯、溴、甲基、甲氧基。
20.权利要求1至6任一项所述的用途或权利要求7-10中任一项所述的方法，其中R2为氢、氯、溴、甲基、甲氧基。
21.权利要求1至6任一项所述的用途或权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述的式I所示化合物选自：
防治病原物侵染植物的方法
技术领域
背景技术
[0002] 韧皮部寄生菌，是一类在植物韧皮部寄生的有害细菌，由于该类病菌主要寄生在植物的韧皮部，因此一旦在韧皮部定植繁殖，就会造成韧皮部组织坏死和筛管堵塞，影响植物体营养物质的输送和吸收，进而造成植物的病化及死亡。该类病菌易被木虱、蝉等飞虫携带传染，也可以通过嫁接传染。
[0004] 黄龙病是世界柑橘生产上的毁灭性病害，又称黄梢病、黄枯病、青果病、韧皮部衰退病，是由一种在植物韧皮部内寄生的韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter spp.)引起，能够侵染包括柑橘属、枳属、金柑属和九里香属等多种芸香科植物。台湾省的立枯病亦为黄龙病。韧皮部杆菌为一种类细菌(Bacterium-Like-Organisms)，菌体具双层膜，病原体的壁膜构造具有革兰氏阴性细菌壁膜的特性，所以也可称其为革兰氏阴性细菌。韧皮部杆菌可分为亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)非洲种(Candidatus Liberibacter africanus)和美洲种(Candidatus Liberibacter americus)。目前，对于黄龙病，国内外仍没有有效的治疗方法，该病主要分布在亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的近50个国家和地区。我国19个柑橘生产省(市、自治区)中已有11个受到该病危害，严重制约柑橘产业的健康发展。
[0005] 斑马片病主要由难培养细菌--茄科植物韧皮部寄生菌Candidatus Liberibacter solanacearum侵染植物所引起，该病菌经嫁接或木虱传播，不仅可侵染马铃薯、番茄、茄子、绿番茄、树番茄等茄科植物，同时还可侵染胡萝卜、芹菜等伞形科植物，严重影响作物的产量和品质。该病菌在分类地位上与黄龙病病菌相近，目前也没有有效的治疗手段，也是一种毁灭性的病害。
[0006] 葡萄黄金病由病原葡萄黄金化植原体(Grapevine flavescence doree phytoplasma)引起，其菌体形状不规则，存在病株的韧皮部，主要在寄主植物和介体叶蝉体内增殖，至今还不能在人工培养基上生长，主要表现为新梢没有产量，通常谢花后花称立即枯死，有时果粒皱缩，味极苦。经常旧病复发，植株完全萎蔫，发病树减产20％～30％，严重时整个葡萄庄园被毁，危害葡萄产业种植区。
[0007] 梨衰退病主要由梨衰退病植原体(Candidatus Phytoplasma pyri，Pear decline phytoplasma)引起。梨衰退病植原体主要呈丝状，通常具有3层膜的分枝体，但缺少坚硬的细胞壁。病原植原体在体外至今还未培养成功。在生长季节，梨衰退植原体在韧皮部的筛管中增殖很快，一些梨树可能在几个月之内死亡。该病是梨树生长期间出现的一种病害，发病初期可造成损失达27％，此后7～8年果实产量可降低25％，给农户们造成了极大的损失。
[0008] 由于韧皮部寄生菌造成的植物病害，如黄龙病、斑马片病、葡萄黄金病、梨衰退病等，传染性强，目前针对该类病菌仍没有有效的防治手段。因此，寻找能够高效抑制并杀灭韧皮部寄生菌的化合物仍是本领域人员重点研究方向。发明内容
[0009] 发明人意外地发现式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐可以抑制寄生在植物韧皮部中的病原物的生长与繁殖，所以，式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐可用于预防或控制或治疗病原物侵染植物，或者用于预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害，例如黄龙病、斑马片病、葡萄黄金病及梨衰退病等。
[0010] 本申请涉及式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐或含式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐的组合物用于预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害的用途，
[0011]
[0013] 本申请还涉及一种预防或控制或治疗病原物侵染植物的方法，包括使用至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐来处理所述病原物、其栖息地或欲防止病原物侵袭的植物、植物的繁殖材料、土壤、有机基质、区域、物质或空间，
[0014]
[0015] 其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
[0016] 本申请还涉及一种预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害的方法，包括将至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐施用至所述植物、其繁殖材料、其果实或其生长的土壤、有机基质、区域或空间，[0017]
[0018] 其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
[0019] 本申请还涉及一种预防或控制或治疗病原物侵染植物的方法，包括使用包括至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐的组合物来处理所述病原物、其栖息地或欲防止病原物侵袭的植物、植物的繁殖材料、土壤、有机基质、区域、物质或空间，
[0020]
[0021] 其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
[0022] 本申请还涉及一种预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害的方法，包括：将包括至少一种有效量的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐的组合物施用至所述植物、其繁殖材料、其果实或其生长的土壤、有机基质、区域或空间，
[0023]
[0024] 其中R1、R2各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
[0025] 在某些实施方案中，本申请所述的病原物为寄生在植物韧皮部的病原物，例如寄生在植物韧皮部的细菌(例如植原体属(Phytoplasma)、韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter spp.))。
[0026] 在某些实施方案中，本申请所述的病原物为韧皮部杆菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)、韧皮部杆菌非洲种(Candidatus Liberibacter africanus)、韧皮部杆菌美洲种(Candidatus Liberibacter americus)、Candidatus Liberibacter solanacearum、葡萄黄金化植原体(Grapevine flavescence doree phytoplasma)或梨衰退病植原体(Candidatus Phytoplasma pyri)。
[0027] 在某些实施方案中，本申请所述由病原物引起的侵染性病害为黄龙病、斑马片并、葡萄黄金病或梨衰退病。
[0028] 在某些实施方案中，本申请所述的植物为茄科植物(例如马铃薯、番茄、茄子、绿番茄、树番茄等)、伞形科植物(例如胡萝卜、芹菜等)、芸香科植物(例如柑橘属、枳属、金柑属、九里香属等)、葡萄科植物(例如葡萄)或蔷薇科植物(例如梨)。
[0029] 在某些实施方案中，本申请所述的组合物中还含有助剂。
[0030] 在某些实施方案中，所述式I化合物中R1、R2各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
[0031] 在某些实施方案中，所述式I化合物中R1、R2各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
[0032] 在某些实施方案中，所述式I化合物中R1、R2各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、C1-4烷基、C1-4烷氧基、硝基、羟基、氰基、氨基。
[0033] 在某些实施方案中，所述式I化合物中R1为氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙基氧基、正丁基氧基、异丁基氧基、仲丁基氧基、叔丁基氧基、正戊基氧基、正己基氧基、硝基、羟基、氰基或氨基。
[0034] 在某些实施方案中，所述式I化合物中R2为氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙基氧基、正丁基氧基、异丁基氧基、仲丁基氧基、叔丁基氧基、正戊基氧基正己基氧基、硝基、羟基、氰基或氨基。
[0035] 在某些实施方案中，所述式I化合物中R1为氢、氟、氯、溴、甲基、甲氧基。
[0036] 在某些实施方案中，所述式I化合物中R2为氢、氯、溴、甲基、甲氧基。
[0037] 在某些实施方案中，所述的式I所示化合物选自：
[0038]
[0039] 本申请使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
[0040] 本申请中使用的术语所述“C1-8烷基”是指具有1-8个碳原子，如1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的直链或支链烷基，例如C1-6烷基、C1-4烷基。具体的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基。
[0041] 本申请中使用的术语“C1-8烷氧基”是指如前述定义的C1-8烷基上的碳原子与氧原子连接后得到的基团，例如“C1-6烷氧基”、“C1-4烷氧基”，具体的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基或丙氧基等。
[0042] 本申请中所使用的术语“氨基”是指NH2-。
[0043] 本申请中使用的术语“农业或林业化学上可接受的盐”意指在农业化学或林业化学可接受的并且具有母体化合物的所需药理学活性的本申请化合物的盐。这类盐包括：与无机酸或与有机酸形成的酸加成的盐，所述的无机酸诸如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等；所述的有机酸诸如乙酸，丙酸，己酸，环戊丙酸，乙醇酸，丙酮酸，乳酸，丙二酸，琥珀酸，苹果酸，马来酸，富马酸，酒石酸，柠檬酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，萘磺酸，樟脑磺酸，葡庚糖酸，葡糖酸，谷氨酸，羟基萘甲酸，水杨酸，硬脂酸，粘康酸等。
[0044] 本申请中使用的术语“有效量”表示足以防治有害病原物且不对被处理植物或植物繁殖材料引起显著损害的量。该量可以在宽范围内变化且取决于各种因素如待防治的病原物品种、被处理的植物或植物繁殖材料、气候条件、施用方式以及所用具体化合物。
[0045] 本申请中使用的术语“助剂”应理解为在农药剂型的加工和施用中，使用的各种辅助物料的总称，其与活性物质混合或结合以实现更好的施用，特别是施用于植物或植物繁殖材料。
[0047] 合适的溶剂和液体载体包括水和有机溶剂，如矿物油馏分，例如煤油、柴油；植物或动物来源的油；脂族、环状和芳族烃类，例如甲苯、石蜡、四氢萘、烷基化萘；醇类，如乙醇、丙醇、丁醇、苄醇、环己醇；二醇类；DMSO；酮类，例如环己酮；酯类，例如乳酸酯、碳酸酯、脂肪酸酯、γ-丁内酯；脂肪酸；膦酸酯；胺类；酰胺类，例如N-甲基吡咯烷酮，脂肪酸二甲基酰胺；以及它们的混合物。
[0048] 合适的固体载体或填料包括矿土，例如硅酸盐、硅胶、滑石、高岭土、石灰石、石灰、白垩、粘土、白云石、硅藻土、膨润土、硫酸钙、硫酸镁、氧化镁；多糖，例如纤维素、淀粉；肥料，例如硫酸铵、磷酸铵、硝酸铵、脲类；植物来源的产品，例如谷粉、树皮粉、木粉和坚果壳粉，以及它们的混合物。
[0049] 合适的表面活性剂是表面活性化合物，如阴离子、阳离子、非离子和两性表面活性剂，以及它们的混合物。这类表面活性剂可以用作乳化剂、分散剂、加溶剂、润湿剂、渗透促进剂、保护性胶体或辅助剂。
[0050] 合适的阴离子表面活性剂是磺酸、硫酸、磷酸、羧酸的碱金属、碱土金属或铵盐以及它们的混合物。磺酸盐的实例是烷基芳基磺酸盐、二苯基磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、木素磺酸盐、脂肪酸和油的磺酸盐、乙氧基化烷基酚的磺酸盐、烷氧基化芳基酚的磺酸盐、缩合萘的磺酸盐、十二烷基-和十三烷基苯的磺酸盐、萘和烷基萘的磺酸盐、磺基琥珀酸盐或磺基琥珀酰胺酸盐。硫酸盐的实例是脂肪酸和油的硫酸盐、乙氧基化烷基酚的硫酸盐、醇的硫酸盐、乙氧基化醇的硫酸盐或脂肪酸酯的硫酸盐。磷酸盐的实例是磷酸盐酯。羧酸盐的实例是烷基羧酸盐以及羧化醇或烷基酚乙氧基化物。
[0051] 合适的阳离子表面活性剂包括季型表面活性剂，例如具有1或2个疏水性基团的季铵化合物，或长链伯胺的盐。
[0052] 合适的非离子表面活性剂包括烷氧基化物，N-取代的脂肪酸酰胺，胺氧化物，酯类，糖基表面活性剂，聚合物表面活性剂及其混合物。烷氧基化物的实例包括烷氧基化的醇、烷基酚、胺、酰胺、芳基酚、脂肪酸或脂肪酸酯的化合物。N-取代的脂肪酸酰胺的实例包括脂肪酸葡糖酰胺或脂肪酸链烷醇酰胺。酯类的实例包括脂肪酸酯，甘油酯或甘油单酯。糖基表面活性剂的实例包括脱水山梨醇、乙氧基化脱水山梨醇、蔗糖和葡萄糖酯或烷基聚葡糖苷。聚合物表面活性剂的实例包括乙烯基吡咯烷酮、乙烯醇或乙酸乙烯酯的均聚物或共聚物。
[0053] 合适的两性表面活性剂包括烷基甜菜碱和咪唑啉类。
[0055] 合适的防冻剂包括乙二醇、丙二醇、尿素和甘油。
[0056] 合适的消泡剂包括聚硅氧烷、长链醇和脂肪酸盐。
[0059] 本申请所述的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐或组合物可以依其本身使用，也可以根据其各自的物理和/或化学性质以制剂的形式使用。所述制剂形式可以是乳油、悬浮剂、可湿性粉剂、粉剂、粒剂、水剂、毒饵、母液、母粉、气雾剂、即用型溶液剂、粉剂、水包油乳剂、油包水乳剂、油剂、泡沫剂、糊剂等。
[0060] 应用本申请所述的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐或组合物处理所述病原物、其栖息地或欲防止病原物侵袭的植物、植物的繁殖材料、土壤、有机基质、区域、物质或空间时，可以使用常规处理方法进行处理，例如浸渍、喷雾、雾化、灌溉、蒸发、撒粉、起雾、撒播、发泡、涂抹、涂布、浇灌、滴灌、输液等处理方法。对于繁殖材料(别是对于种子)，还通过干种子处理、湿种子处理、浆液处理、结壳处理、涂覆一层或多层包衣等方式进行。还可通过超低量法施用活性物质，或者将活性物质制剂或活性物质本身注射到土壤或有机基质中。例如，本申请所述的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐或组合物可以通过向植物叶面喷洒进行施用，也可以通过树干输液进行施用。
[0061] 应用本申请所述的式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐或组合物处理叶片时，活性物质的一般施用剂量通常可以为10g至1000kg/ha。如果可以进行树干输液，那么剂量可以更低。对于种子处理的情况，施用的活性物质的剂量通常可以为每100kg种子0.1g至10kg。应清楚地理解，上述指定的剂量是作为本发明的说明性实例给出。本领域技术人员知道如何依据待处理的作物的性质调节施用的剂量。
[0062] 本申请所用术语“繁殖材料”应当被理解为表示植物的生殖部分，这些生殖部分可以用于该植物的繁殖，包括种子、植株、苗木(含试管苗)、果实、砧木、接穗、插条、叶片、芽体、块根、块茎、鳞茎、球茎、花粉、植物培养材料(含转基因植物)等。
[0063] 本申请所用浓度单位“M”表示mol/L，mM表示mmol/L，μM表示μmol/L。
[0064] 本申请中，术语“约”应理解为在指定数值的±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％、±0.1％、±0.05％或±0.01％以内。
[0065] 本发明的有益技术效果
[0066] 本申请所述式I所示化合物、其立体异构体、或其农业或林业化学上可接受的盐可以抑制寄生在植物韧皮部中的病原物的生长与繁殖，可用于预防或控制或治疗病原物，特别是寄生在植物韧皮部的病原物，例如寄生在植物韧皮部的细菌(例如植原体属(Phytoplasma)、韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter spp.))，侵染植物，还可以用于预防或控制或治疗植物的由病原物引起的侵染性病害，例如黄龙病、斑马片病、葡萄黄金病及梨衰退病等。
具体实施方式
[0067] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0068] 下面实施例中用到的化合物1-10均购自上海陶素生化科技有限公司。
[0069] 实施例1：对木瓜内生菌的抗菌实验
[0070] 1.1实验设备与试剂
[0071] 1.1.1实验设备
[0073] 1.1.2实验试剂
[0074] α-酮戊二酸(Sigma)、N-氨基甲酰甲基乙磺酸(Sigma)、TMN-FH昆虫培养基(Sigma)、胎牛血清(Gibco)、木瓜内生菌(Liberibacter crescens BT-1，上海宝录生物)等。
[0075] 1.2实验步骤：
[0076] 1.2.1培养基的配制
[0077] 配制方法见表1。
[0078] 表1 BM7培养基的配制
[0079]
[0080] 1.2.2抗菌实验
[0081] 由于韧皮部寄生菌至今不能体外人工培养，以致无法用韧皮部寄生菌进行体外抗菌药物的筛选，目前国际上认可度较高的方法为用韧皮部寄生菌类似菌--木瓜内生菌(Liberibacter crescens BT-1)进行体外抗菌药物的筛选。
[0082] 本实验采用木瓜内生菌进行体外抗菌实验。实验方法为：取经BM7培养基稀释的不同浓度的化合物(如药物水不溶，可适量加入DMSO助溶，但DMSO终浓度不超过1％)190μL于96孔板中，再向每孔中加入浓度为约2*106个/mL的复苏好的木瓜内生菌10μL，实验体系中药物化合物的终浓度分别为100.0mg/mL、10.0mg/mL、1.0mg/mL、0.1mg/mL、0.01mg/mL、
0.001mg/mL、0.0001mg/mL、0.00001mg/mL，菌的终浓度为约1*105个/孔。实验时，同时设立对照组，对照组190μL BM7培养基和浓度为约2*106个/mL的复苏好的木瓜内生菌10μL。然后将96孔板置于28.5℃培养箱培养120小时，用酶标仪测定600nm下的OD值。
0.001mg/mL、0.0001mg/mL、0.00001mg/mL，菌的终浓度为约1*105个/孔。实验时，同时设立对照组，对照组190μL BM7培养基和浓度为约2*106个/mL的复苏好的木瓜内生菌10μL。然后将96孔板置于28.5℃培养箱培养120小时，用酶标仪测定600nm下的OD值。
[0083] 根据下述公式计算药物的抗菌率：
[0084] 抗菌率％＝(OD值对照组-OD值给药组)/OD值对照组*100％
[0085] 1.3实验结果
[0086] 抗菌实验结果见表2。
[0087] 表2抗菌实验结果
[0088]
[0089] 1.4实验结论
[0090] 由上述抗菌实验结果知，化合物1、2、3、4在终浓度为0.0001mg/ml以上(含0.0001mg/ml)时有100％的抗菌效果，化合物5、6、7、8、9、10在终浓度为0.001mg/ml以上(含
0.001mg/ml)时有100％的抗菌效果。
0.001mg/ml)时有100％的抗菌效果。
[0091] 实施例2：对离体叶片中黄龙病病菌的抗菌实验
[0092] 2.1实验设备与试剂
[0093] 2.1.1实验设备
[0094] 实时荧光定量PCR仪(Roche)、离心机(Beckman)、超净工作台(苏州净化)，灭菌锅(Sanyo)、超微量核酸蛋白分析仪(Thermo)等。
[0095] 2.1.2实验试剂
[0096] CTAB-Triton DNA抽提液、蛋白酶K(10mg/mL)、1M二硫苏糖醇(DTT)、Tris-酚-氯仿-异戊醇混合液(其中Tris-酚、氯仿、异戊醇的体积比为25:24:1)、氯仿-异戊醇混合液(其中氯仿与异戊醇的体积比为24:1)、3M醋酸钠、异丙醇、75％乙醇、10×PCR Buffer、10mmol dNTPs，5u/μl rTaq等，以上试剂均购自TaKaRa。
[0097] 2.2实验方法
[0098] 2.2.1叶片采集并给药
[0099] 由于韧皮部寄生菌无法体外培养，所以我们采集新鲜的经PCR检测为100％带黄龙病菌的柑橘叶片进行药物杀菌效果实验。实验时，同时设置给药组和空白对照组。具体的给药方式为用液氮将带菌叶片磨碎后，称样分装至ep管中(50mg/管)，然后向每个ep管中加入1mL去离子水配制的不同浓度化合物1-10(如药物水不溶，可适量加入DMSO助溶，但DMSO终浓度不超过1％)，浸泡72小时，空白对照组加入等体积的去离子水，给药组中每个化合物设置6个终浓度梯度，分别为10.0mg/mL、1.0mg/mL、0.1mg/mL、0.01mg/mL、0.001mg/mL、
0.0001mg/mL。
0.0001mg/mL。
[0100] 2.2.2核酸提取及PCR检测
[0101] 根据CTAB法对给药的叶片进行黄龙病病菌DNA的提取，提取的DNA通过超微量核酸蛋白分析仪进行核酸纯度分析(具体DNA提取方法及纯度分析方法可见参考：丁浩，郑唐春，梁德洋，曲冠证，一种简易高效提取多种植物纯净DNA的方法，植物研究，2015,Vol.35，Issue(3):457-461，DOI:10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.021)，质量合格后运用实时荧光定量PCR仪进行基因检测，并记录相应的CT值。CT值是指扩增曲线达到阈值时的循环圈数，样本中菌含量越高，其对应的CT值越低，当CT值>35以上时，可以认为样本基本不含菌。
[0102] 2.3实验结果
[0103] 实验结果见表3。
[0104] 表3对离体叶片中黄龙病病菌的抗菌实验结果
[0105]
[0106]
[0107] 2.4实验结论
[0108] 由表3的实验结果可知，化合物1、2、3、4在终浓度为0.001mg/mL以上(含0.001mg/mL)时其CT值均值>35，说明化合物在0.001mg/ml以上(含0.001mg/mL)时具有完全杀灭离体叶片中黄龙病病菌的效果；化合物5、6、7、8、9、10在终浓度为0.01mg/mL以上(含0.01mg/mL)时其CT值均值>35，说明化合物在0.01mg/mL以上(含0.01mg/mL)时具有完全杀灭离体叶片中黄龙病病菌的效果。
[0109] 实施例3：对柑橘黄龙病的抗菌实验
[0110] 实验方法
[0111] 2018年5月在江西省赣州市安远县版石镇虎板村柑橘场选取210棵疑似感染黄龙病的病树并进行黄龙病检测，结果发现：其黄龙病发病率为100％。随机选取感染黄龙病的病树进行药物抗菌试验，每个试验组10株病树，采用树干输液法，输入不同浓度的药物水溶液(即化合物1-10的水溶液，如药物水不溶，可适量加入DMSO助溶，但DMSO终浓度不超过1％)，另随机选取10株作对照(输入清水)，从5月1日开始，每月初施药一次，每次施药
500mL，实验周期120天(共给药4次)。在每次给药前采集柑橘叶片并进行黄龙病病菌DNA的提取及PCR检测(DNA提取方法及PCR检测方法同实施例2中的2.2.2)，记录相应的CT值。
500mL，实验周期120天(共给药4次)。在每次给药前采集柑橘叶片并进行黄龙病病菌DNA的提取及PCR检测(DNA提取方法及PCR检测方法同实施例2中的2.2.2)，记录相应的CT值。
[0112] 实验结果
[0113] 实验结果见表4。
[0114] 表4对柑橘黄龙病的抗菌实验结果
[0115]
[0116]
[0117] 备注：＊＊表示与0天比，P<0.01有极显著的差异。
[0118] 实验结论
[0119] 由表4的实验结果可知，化合物1～10在浓度为0.001mg/mL和1.0mg/mL时给药60天后均表现出显著的抗菌效果，其中随着给药时间的延长，浓度为0.001mg/mL的化合物1～4在给药120天后柑橘树中基本检测不到黄龙病病菌的存在，浓度为1.0mg/mL的化合物1～10在给药120天后柑橘树中基本检测不到黄龙病病菌的存在。可见该系列化合物具有显著的抗黄龙病病菌的效果。
[0120] 实施例4：对离体叶片中斑马片病病菌的抗菌实验
[0121] 4.1实验设备与试剂
[0122] 4.1.1实验设备
[0123] 实时荧光定量PCR仪(Roche)、离心机(Beckman)、超净工作台(苏州净化)，灭菌锅(Sanyo)、超微量核酸蛋白分析仪(Thermo)等。
[0124] 4.1.2实验试剂
[0125] CTAB-Triton DNA抽提液、蛋白酶K(10mg/mL)、1M DTT、Tris-酚-氯仿-异戊醇混合液(其中Tris-酚、氯仿、异戊醇的体积比为25:24:1)、氯仿-异戊醇混合液(其中氯仿与异戊醇的体积比为24:1)、3M NaAC、异丙醇、75％乙醇、10×PCR Buffer、10mmol dNTPs，5u/μl rTaq等，以上试剂均购自TaKaRa。
[0126] 4.2实验步骤
[0127] 4.2.1叶片采集并给药
[0128] 由于斑马片病病菌无法体外培养，所以我们采集新鲜的经PCR检测为100％带斑马片病病菌的马铃薯叶片进行药物杀菌效果实验。实验时，同时设置给药组和空白对照组。具体的给药方式为用液氮将带菌叶片磨碎，称样分装至ep管中(50mg/管)，然后向每个ep管中加入1mL去离子水配制的不同浓度化合物1-10(如药物水不溶，可适量加入DMSO助溶，但DMSO终浓度不超过1％)，浸泡72小时，空白对照组加入等体积的去离子水。给药组中每个化合物设置3个终浓度梯度，分别为0.01mg/mL、0.001mg/mL、0.0001mg/mL。
[0129] 4.2.2核酸提取及PCR检测
[0130] 根据CTAB法对给药的叶片进行斑马片病病菌DNA的提取，提取的DNA通过超微量核酸蛋白分析仪进行核酸纯度分析(具体DNA提取方法及纯度分析方法可见参考：丁浩，郑唐春，梁德洋，曲冠证，一种简易高效提取多种植物纯净DNA的方法，植物研究，2015,Vol.35，Issue(3):457-461，DOI:10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.021)，质量合格后运用实时荧光定量PCR仪进行基因检测，并记录相应的CT值。
[0131] 4.3实验结果
[0132] 实验结果见表5。
[0133] 表5对离体叶片中斑马片病病菌的抗菌实验结果
[0134]
[0135] 4.4实验结论
[0136] 由表5的抗菌实验结果可知，与空白对照组比，化合物1～10在终浓度为0.0001mg/mL既有一定的抗菌效果，在终浓度为0.001mg/mL以上(含0.001mg/mL)时其CT值均值>35，说明该类化合物在0.001mg/mL以上(含0.001mg/mL)时具有完全杀灭离体叶片中斑马片病病菌的效果。
[0137] 实施例5：对离体叶片中葡萄黄金病病菌的抗菌实验
[0138] 5.1实验设备与试剂
[0139] 5.1.1实验设备
[0140] 同实施例2。
[0141] 5.1.2实验试剂
[0142] 同实施例2。
[0143] 5.2实验步骤
[0144] 5.2.1叶片采集并给药
[0145] 由于葡萄黄金病病菌无法体外培养，所以我们采集新鲜的经PCR检测为100％带葡萄黄金病病菌的葡萄叶片进行药物杀菌效果实验。实验时，同时设置给药组和空白对照组。具体的给药方式为用液氮将带菌叶片磨碎，称样分装至ep管中(50mg/管)，然后向每个ep管中加入1mL去离子水配制不同浓度化合物1-10(如药物水不溶，可适量加入DMSO助溶，但DMSO终浓度不要超过1％)，浸泡72小时，空白对照组加入等体积的去离子水。给药组中每个化合物设置3个终浓度梯度，分别为0.1mg/mL、0.001mg/mL、0.0001mg/mL。
[0146] 5.2.2核酸抽提及PCR检测
[0147] 根据CTAB法对给药的叶片进行葡萄黄金病病菌DNA的提取，提取的DNA通过超微量核酸蛋白分析仪进行核酸纯度分析(具体DNA提取方法及纯度分析方法可见参考：丁浩，郑唐春，梁德洋，曲冠证，一种简易高效提取多种植物纯净DNA的方法，植物研究，2015,Vol.35，Issue(3):457-461，DOI:10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.021)，质量合格后运用实时荧光定量PCR仪进行基因检测，并记录相应的CT值。
[0148] 5.3实验结果
[0149] 实验结果见表6。
[0150] 表6对离体叶片中葡萄黄金病病菌的抗菌实验结果
[0151]
[0152]
[0153] 5.4实验结论
[0154] 由表6的实验结果可知，与空白对照组比，化合物1～10在终浓度为0.0001mg/ml既有一定的抗菌效果，在终浓度为0.001mg/ml以上(含0.001mg/ml)时其CT值均值>35，说明该类化合物在0.001mg/ml以上(含0.001mg/ml)时具有完全杀灭离体叶片中葡萄黄金病病菌的效果。
[0155] 实施例6：对离体叶片中梨衰退病病菌的抗菌实验
[0156] 6.1实验设备与试剂
[0157] 6.1.1实验设备
[0158] 同实施例2。
[0159] 6.1.2实验试剂
[0160] 同实施例2。
[0161] 6.2实验步骤
[0162] 6.2.1叶片采集并给药
[0163] 由于梨衰退病病菌无法体外培养，所以我们采集新鲜的经PCR检测为100％带梨衰退病病菌的梨树叶片进行药物杀菌效果实验。实验时，同时设置给药组和空白对照组。具体的给药方式为用液氮将带菌叶片磨碎，称样分装至ep管中(50mg/管)，然后向每个ep管中加入1mL去离子水配制不同浓度化合物1-10(如药物水不溶，可适量加入DMSO助溶，但DMSO终浓度不要超过1％)，浸泡72小时，空白对照组加入等体积的去离子水。给药组中每个化合物设置3个终浓度梯度，分别为0.1mg/mL、0.001mg/mL、0.0001mg/mL。
[0164] 6.2.2核酸抽提及PCR检测
[0165] 根据CTAB法对给药的叶片进行梨衰退病病菌DNA的提取，提取的DNA通过超微量核酸蛋白分析仪进行核酸纯度分析(具体DNA提取方法及纯度分析方法可见参考：丁浩，郑唐春，梁德洋，曲冠证，一种简易高效提取多种植物纯净DNA的方法，植物研究，2015,Vol.35，Issue(3):457-461，DOI:10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.021)，质量合格后运用实时荧光定量PCR仪进行基因检测，并记录相应的CT值。
[0166] 6.3实验结果
[0167] 实验结果见表7。
[0168] 表7对离体叶片中梨衰退病病菌的抗菌实验结果
[0169]
[0170] 6.4实验结论
[0171] 由表7的检测结果可知，与空白对照组比，化合物1～10在终浓度为0.001mg/ml既有一定的抗菌效果，在终浓度为0.01mg/ml以上(含0.01mg/ml)时其CT值均值>35，说明该类化合物在0.01mg/ml以上(含0.01mg/ml)时具有完全杀灭离体叶片中梨衰退病病菌的效果。
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