中药组合物在制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用
阅读：58发布：2023-11-29
专利汇可以提供中药组合物在制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及中药领域，具体而言，提供了一种中药组合物在制备 预防 和/或 治疗 萎缩性 阴道 炎的药物中的应用。本发明提供的中药组合物，原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金 银 花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏，该中药组合物可以用于制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎，疗效显著。该中药组合物对阴道pH值增高，血液和尿液中雌 激素 减少，微生态多样性减少及细菌基因丰度下降等等症状都有显著的改善，可以有效预防 机体 患有萎缩性阴道炎的几率，同时对患有萎缩性阴道炎的治疗效果也非常显著，填补了萎缩性阴道炎特别是老年性阴道炎缺乏有效治疗手段的空白，避免了抗生素的滥用。该中药组合物的组分均为中草药，可以反复和长期使用。，下面是中药组合物在制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用专利的具体信息内容。
1.一种中药组合物在制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用；
所述中药组合物的原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物通过降低阴道pH值起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物通过提高血液和/或尿液中的E2含量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物通过提高血液中MDA和/或SOD含量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物通过增加肠道微生态多样性和/或丰度起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物通过抑制组织黏连和/或炎细胞浸润起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用；
优选地，所述中药组合物通过抑制炎症细胞因子和/或细胞黏附因子的表达量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用；
优选地，所述中药组合物通过抑制TGF-β和/或ICAM-1的表达量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
7.根据权利要求1-6任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的用量为0.12-
0.24g/kg/天；
优选地，所述中药组合物的剂型为口服剂型，优选为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、口服乳剂、口服混悬剂或口服溶液剂。
8.根据权利要求1-6任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物还包括药剂学上可接受的辅料；
优选地，所述药剂学上可接受的辅料包括淀粉、微晶纤维素、蔗糖、阿斯巴甜、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、微粉硅胶、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠的至少一种。
9.根据权利要求1-6任一项所述的应用，其特征在于，按重量份数计，所述中药组合物包括以下原料：黄柏87-348份、金银花90-350份、黄连87-348份、败酱草150-495份、白花蛇舌草165-500份、赤芍90-350份、牡丹皮87-348份、仙鹤草90-350份、车前子5-68份和泽泻
87-348份。
10.根据权利要求1-6任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：将水提膏、醇提膏和赋形粉混合干燥得到干燥物；
所述水提膏包括金银花、败酱草、白花蛇舌草和仙鹤草的水提取物；
所述醇提膏包括车前子、黄连、黄柏、赤芍和牡丹皮的醇提取物；
所述赋形粉包括泽泻粉。
中药组合物在制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎的药物中的
应用
技术领域
[0001] 本发明涉及中药领域，具体而言，涉及一种中药组合物在制备预防和/ 或治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用。
背景技术
[0002] 萎缩性阴道炎：随着年龄的增长，身体中的内分泌雌激素开始减少，激素是一种对维持机体健康起着重要作用的荷尔蒙，雌激素明显减少会使阴道内壁变得干燥而弹性降低，阴道粘膜分泌物也减少，阴道润滑性减低致使整个阴道呈现皱缩(萎缩)。萎缩性阴道炎症常见于自然绝经及卵巢去势后妇女，也可鉴于产后闭经或者药物假绝经治疗的妇女。患有萎缩性阴道炎会出现阴道干燥、触痛/瘙痒、分泌物(血性)增多、反复阴道炎症、性交困难。激素的减少可能会造成：阴道上皮变薄、括约肌失去张力、失去弹性。会发生反复泌尿道感染、尿痛、尿频、尿急、小便失禁等症状。
[0003] 目前，针对萎缩性阴道炎特别是老年性阴道炎并没有特别好的预防和治疗方法。
[0004] 癃清片(或癃清胶囊)的有效成分包括泽泻，车前子，败酱草，金银花，牡丹皮，白花蛇舌草，赤芍，仙鹤草，黄连和黄柏。为清热通淋剂，具有清热解毒，凉血通淋之功效。用于下焦湿热所致的热淋，症见尿频、尿急、尿痛、腰痛、小腹坠胀；亦用于慢性前列腺炎湿热蕴结兼瘀血证，症见小便频急，尿后余沥不尽，尿道灼热，会阴少腹腰骶部疼痛或不适等。然而，该中药配方并没有得到全面的开发与利用。
[0005] 有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
[0007] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0008] 一种中药组合物在制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用；
[0009] 所述中药组合物的原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏。
[0010] 进一步地，所述中药组合物通过降低阴道pH值起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0011] 进一步地，所述中药组合物通过提高血液和/或尿液中的E2含量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0012] 进一步地，所述中药组合物通过提高血液中MDA和/或SOD含量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0013] 进一步地，所述中药组合物通过增加肠道微生态多样性和/或丰度起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0014] 进一步地，所述中药组合物通过抑制组织黏连和/或炎细胞浸润起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用；
[0015] 优选地，所述中药组合物通过抑制炎症细胞因子和/或细胞黏附因子的表达量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用；
[0016] 优选地，所述中药组合物通过抑制TGF-β和/或ICAM-1的表达量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0017] 进一步地，所述中药组合物的用量为0.12-0.24g/kg/天；
[0018] 优选地，所述中药组合物的剂型为口服剂型，优选为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、口服乳剂、口服混悬剂或口服溶液剂。
[0019] 进一步地，所述中药组合物还包括药剂学上可接受的辅料；
[0020] 优选地，所述药剂学上可接受的辅料包括淀粉、微晶纤维素、蔗糖、阿斯巴甜、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、微粉硅胶、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠的至少一种。
[0021] 进一步地，按重量份数计，所述中药组合物包括以下原料：黄柏87-348 份、金银花90-350份、黄连87-348份、败酱草150-495份、白花蛇舌草165-500 份、赤芍90-350份、牡丹皮87-348份、仙鹤草90-350份、车前子5-68份和泽泻87-348份。
[0022] 进一步地，所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：将水提膏、醇提膏和赋形粉混合干燥得到干燥物；
[0023] 所述水提膏包括金银花、败酱草、白花蛇舌草和仙鹤草的水提取物；
[0024] 所述醇提膏包括车前子、黄连、黄柏、赤芍和牡丹皮的醇提取物；
[0025] 所述赋形粉包括泽泻粉。
[0026] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0027] 本发明提供的中药组合物，原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏，该中药组合物可以用于制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎，疗效显著。本发明通过试验发现：该中药组合物对阴道pH值增高，血液和尿液中雌激素减少，微生态多样性减少及细菌基因丰度下降等等症状都有显著的改善，可以有效预防机体患有萎缩性阴道炎的几率，同时对患有萎缩性阴道炎的治疗效果也非常显著，填补了萎缩性阴道炎特别是老年性阴道炎缺乏有效治疗手段的空白，避免了抗生素的滥用。该中药组合物的组分均为中草药，安全性较好，可以反复和长期使用。附图说明
[0028] 图1为本发明实施例4中中药组合物对去势大鼠阴道pH值统计结果图；
[0029] 图2为本发明实施例4中中药组合物对去势大鼠阴道子宫指数和阴道指数统计结果图；
[0030] 图3为本发明实施例5中中药组合物对去势大鼠血清中雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)和黄体生成素(LH)统计结果图；
[0032] 图5为本发明实施例7中中药组合物对去势大鼠尿液中雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)和黄体生成素(LH)统计结果图；
[0034] 图6B为本发明实施例8中中药组合物对萎缩性阴道炎大鼠肠道微生物 Simpson指数统计结果图；
[0035] 图7A为本发明实施例8中中药组合物对萎缩性阴道炎大鼠肠道微生物 Chao指数统计结果图；
[0036] 图7B为本发明实施例8中中药组合物对萎缩性阴道炎大鼠肠道微生物 ACE指数统计结果图；
[0037] 图8A为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Aerococcus的影响结果图；
[0038] 图8B为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Actinomyces的影响结果图；
[0039] 图8C为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Anaerofustis的影响结果图；
[0040] 图8D为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Fimicutes_unclassified的影响结果图；
[0041] 图8E为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Muribaculaceae_unclassified的影响结果图；
[0042] 图8F为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Ruminococccaceae_NK4A214_group的影响结果图；
[0043] 图8G为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Flavobacteriaceae_uncultured的影响结果图；
[0044] 图8H为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Butyricimonas的影响结果图；
[0045] 图8I为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Candidatus_Saccharimonas的影响结果图；
[0046] 图8J为本发明实施例8中在属分类水平上中药组合物对大鼠肠道菌群 Clostridium_sensu_stricto_1的影响结果图；
[0047] 图9为本发明实施例9中中药组合物对去势大鼠子宫组织中 ICAM-1mRNA、TGF-βmRNA的表达影响结果图。
具体实施方式
[0048] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
[0049] 一种中药组合物在制备预防和/或治疗萎缩性阴道炎的药物中的应用，其中，中药组合物的原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏。
[0050] 本发明通过试验发现：该中药组合物对阴道pH值增高，血液和尿液中雌激素减少，微生态多样性减少及细菌基因丰度下降等等症状都有显著的改善，可以有效预防机体患有萎缩性阴道炎的几率，同时对患有萎缩性阴道炎的治疗效果也非常显著，填补了萎缩性阴道炎特别是老年性阴道炎缺乏有效治疗手段的空白，避免了抗生素的滥用。该中药组合物的组分均为中草药，安全性较好，可以反复和长期使用。
[0051] 老年女性进入绝经期后，卵巢功能逐渐衰退，导致机体神经—内分泌系统紊乱，雌激素水平迅速波动，容易诱发萎缩性阴道炎。老年性阴道炎在绝经妇女中的发生率高达30％，缘由绝经妇女卵巢功能衰退，雌激素水平下降，阴道抵抗力下降，极易受外部病菌的侵犯，诱发阴道炎症。
[0052] 本研究对育龄大鼠采取卵巢摘除术，使其卵巢功能丧失，构造萎缩性阴道炎大鼠模型。结果显示造模后，大鼠阴道pH值明显升高，阴道、子宫体重指数显著降低，血清E2水平下降，说明造模后大鼠生殖器萎缩、性激素水平紊乱，该模型能够模拟萎缩性阴道炎的病理状态。采用中药组合物治疗后可小幅度地降低阴道pH值、增加血清中E2的含量。说明该药对改善生殖器萎缩、调节性激素分泌是有作用的。同时，血清中MDA和SOD 的含量增加显著，则又证明该方通过清除自由基，来明显改善细胞受损的程度。说明该中药组合物在治疗萎缩性阴道炎方面是通过降低体内自由基，改善内环境，调节激素分泌来发挥功效的。
[0053] 采用卵巢摘除法复制萎缩性阴道炎后，模型大鼠子宫组织中的炎症细胞因子(TGF-β)表达上调，细胞黏附因子(ICAM-1)也出现表达上调，提示该模型由于体内雌激素分泌不足，出现了妇科炎症中常见的组织黏连及炎细胞浸润等病理性改变。破坏了正常微生物稳态。而对模型大鼠进行的肠道菌群种类和总丰度的测定发现，该模型大鼠的肠道菌群种类和总丰度均明显降低。说明由于体内激素水平的变化，影响了某些肠道中的有益菌种的减少甚至造成了消失。而我们采用中药组合物治疗后，大鼠的肠道菌群种类和总丰度比模型组大鼠明显增加，趋近于空白对照组。因此，说明中药组合物对萎缩性阴道炎的大鼠肠道菌群具有明显的调节作用。
[0054] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物通过降低阴道pH值起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0055] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物通过提高血液和/或尿液中的 E2含量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0056] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物通过提高血液中MDA和/或 SOD含量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0057] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物通过增加肠道微生态多样性和/或丰度起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0058] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物通过抑制组织黏连和/或炎细胞浸润起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0059] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物通过抑制炎症细胞因子和/或细胞黏附因子的表达量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0060] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物通过抑制TGF-β和/或ICAM-1 的表达量起到预防和/或治疗萎缩性阴道炎的作用。
[0061] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物的用量为0.12-0.24g/kg/天， g/kg/天表示每天每1kg体重用量克数，例如，60kg体重的患者每天的用药量为7.2g-14.4g。在一些优选的实施方式中，给药频率可以根据不同的需求与症状适当的调整用量，可以为但不限为每天三次、每天两次、每天一次或每两天一次。在预防性应用中，以相对低频率的间隔长期给予相对低的剂量。在治疗性应用中，需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展被延缓或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善，在此之后，可以给予患者预防方案。
[0062] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物的剂型为口服剂型，优选为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、口服乳剂、口服混悬剂或口服溶液剂。
[0063] 在本发明的一些实施方式中，中药组合物还包括药剂学上可接受的辅料。药学上可接受的辅料是指生产药品和调配处方时，使用的的赋形剂和附加剂，是指除活性成分外，在安全性方面已进行了合理的评估，并且包含在药物制剂中的物质。同一药用辅料可用于不同给药途径的药物制剂，且有不同的作用和用途。药剂学上可接受的辅料包括淀粉、微晶纤维素、蔗糖、阿斯巴甜、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、微粉硅胶、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠的至少一种。
[0064] 在本发明一个优选地实施方式中，按重量份数计，中药组合物包括以下原料：黄柏87-348份、金银花90-350份、黄连87-348份、败酱草150-495 份、白花蛇舌草165-500份、赤芍90-350份、牡丹皮87-348份、仙鹤草90-350 份、车前子5-68份和泽泻87-348份。需要说明的是，黄柏典型但非限制性的为87份、137份、187份、237份、287份、337份或348份；金银花典型但非限制性的为90份、140份、190份、240份、290份、340份或350 份；黄连典型但非限制性的为87份、137份、187份、237份、287份、337 份或348份；赤芍典型但非限制性的为90份、140份、190份、240份、290 份、340份或350份；牡丹皮典型但非限制性的为87份、137份、187份、
237份、287份、337份或348份；仙鹤草典型但非限制性的为90份、140 份、190份、240份、290份、340份或350份；泽泻典型但非限制性的为 87份、137份、187份、237份、287份、337份或
348份；败酱草典型但非限制性的为150份、200份、250份、300份、350份、400份、450份或495份；白花蛇舌草典型但非限制性的为165份、215份、265份、315份、 365份、415份、465份或
500份；车前子典型但非限制性的为5份、15份、 25份、35份、45份、55份或68份。
237份、287份、337份或348份；仙鹤草典型但非限制性的为90份、140 份、190份、240份、290份、340份或350份；泽泻典型但非限制性的为 87份、137份、187份、237份、287份、337份或
348份；败酱草典型但非限制性的为150份、200份、250份、300份、350份、400份、450份或495份；白花蛇舌草典型但非限制性的为165份、215份、265份、315份、 365份、415份、465份或
500份；车前子典型但非限制性的为5份、15份、 25份、35份、45份、55份或68份。
[0065] 在本发明一个优选地实施方式中，中药组合物的制备方法包括以下步骤：将水提膏、醇提膏和赋形粉混合干燥得到干燥物，其中，水提膏包括金银花、败酱草、白花蛇舌草和仙鹤草的水提取物；醇提膏包括车前子、黄连、黄柏、赤芍和牡丹皮的醇提取物；赋形粉包括泽泻粉。
[0066] 在本发明一个优选地实施方式中，中药组合物的制备方法包括：黄柏、金银花、黄连、败酱草、白花蛇舌草、赤芍、牡丹皮、仙鹤草、车前子和泽泻，以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏。与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。
[0067] 下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。如无特别说明，本发明实施例中使用的细胞、药品及试剂均来源于正规而已购渠道：
[0068] 大鼠(SD)，购买于斯贝福(北京)生物技术有限公司(SCXK(京) 2016-0002)，雌性，200-220g。雌激素(estrogen，E2)放射免疫分析药盒：贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司，生产批号：724155；有效期至： 2018-09-30。促卵泡激素(FSH)放免分析药盒：贝克曼库尔特商贸(中国) 有限公司，生产批号：632283。黄体生成素(LH)放免分析药盒：贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司，生产批号：723556。超氧化歧化酶(SOD) 测定试剂盒：南京建成生物工程研究所提供。规格：100T/96样，批号： 20180319。丙二醛(MDA)测定试剂盒：南京建成生物工程研究所提供。规格：100T/96样。批号：20180319。注射用青霉素钠：哈药集团制药总厂，生产批号：18020402-2。千金方片：株洲千金药业股份有限公司生产。生产批号：201706022。
戊酸雌二醇片：Bayer生产。生产批号为：368A。
戊酸雌二醇片：Bayer生产。生产批号为：368A。
[0069] 实施例1中药组合物及制备
[0070] 黄柏、金银花、黄连、败酱草、白花蛇舌草、赤芍、牡丹皮、仙鹤草、车前子和泽泻，以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏。与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000 片，每片为0.60g，得到中药组合物。
[0071] 实施例2动物分组
[0072] 根据动物实验剂量设计要求，配制方法如下：采用粉碎机将中药药物片剂打碎，加纯净水配制成相应剂量浓度。
[0074] 中药组合物中剂量组：24片加纯净水打碎，研磨，加水定容至100ml，为临床人用剂量的6倍(即等效剂量)。
[0075] 中药组合物低剂量组：12片加纯净水打碎，研磨，加水定容至100ml，为临床人用剂量的3倍。
[0076] 大鼠购入后适应期经观察未见异常反应，饮食正常。采用按体重分层随机分配的方法将大鼠分为7组：空白对照组(sham)、模型对照组(model)、阳性对照组(YD)、雌二醇对照组(ER)、癃清片高(L-H)、中(L-M)、低剂量(L-L)组，除空白对照组为10只外，其余各组均在14只，随机编号。其中1-10号为正式实验动物，11-14号为实验备用动物。
[0077] 实施例3造模及给药
[0078] 造模：除空白对照组外，其余大鼠采用4.5％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉， 1mL/kg。仰卧位固定，腹部正下方剃毛，碘伏和75％酒精消毒手术区皮肤，纵向切口，在两侧寻找乳白色发亮脂肪团，卵巢包埋其中，以小镊子轻夹脂肪团拉出切口处，分离脂肪团后可见到粉红色的卵巢，剪取时，先将卵巢下输卵管用丝线结扎，再摘取卵巢，术后将子宫角送回腹腔，缝合切口。术后给予10万U青霉素单腹腔注射，连用3d预防感染。术后5d开始进行阴道涂片检查，连续检查5d，若不出现动情反应视为手术成功。术后自然喂养20d，使大鼠生殖器达到衰老状态。空白对照组行手术切口，找到卵巢但不切除，直接缝合。
[0079] 给药：于手术后20d开始给药，各剂量组分别灌胃相应受试药液10 mL/kg，1次/d，连续14d。空白对照组灌胃等体积纯净水，阳性对照组灌胃千金方1.8片/kg(为临床等效剂量)，雌二醇组给予0.1mg/kg(为临床等效剂量)。
[0080] 实施例4大鼠阴道pH值及子宫、阴道重量指数
[0081] 大鼠阴道pH值及子宫、阴道重量指数：采用pH试纸检测大鼠阴道内 pH值，剥离大鼠子宫和阴道，立刻精确称取大鼠子宫、阴道和大鼠体重:器官体重指数＝器官重量(mg)/体重(g)。
[0082] 与空白对照组相比，模型对照组阴道pH值升高明显，具有统计学意义 (P<0.05)。子宫指数和阴道指数均明显减少(P<0.01)。与模型对照组相比，中药组合物的各剂量组治疗后大鼠阴道pH值均有所降低(见图1)，子宫指数和阴道指数无变化(见图2)。(注：与sham比较，*P<0.05；与 model比较，#P<0.05)
[0083] 实施例5血清中卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成激素 (LH)水平测定[0084] 血清中卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成激素(LH)水平测定：采用45mg/kg戊巴比妥钠进行腹腔注射麻醉，剖开腹腔，取动脉血4ml，室温静置30min后，3000r/min离心10min，分离血清，－20℃保存备用。采用放射免疫法/酶联免疫法进行检测。
[0085] 与空白对照组相比，模型对照组血清中E2含量明显减少(P<0.05)； FSH的含量略有增加，但不具有统计学差异；LH的含量无变化。与模型对照组相比，中药组合物的各剂量组血清中E2含量增加明显，且有量效关系，但未见统计学差异。FSH和LH的含量变化不明显。具体数据见图3(注：与sham比较，*P<0.05)。
[0086] 实施例6血清中丙二醛(MDA)和超氧化歧化酶(SOD)的水平
[0087] 血清中丙二醛(MDA)和超氧化歧化酶(SOD)的水平：分别采用化学发光法进行检测。
[0088] 与空白对照组相比，模型对照组血清中MDA、SOD含量明显减少 (P<0.05)。与模型对照组相比，中药组合物的各剂量组MDA、SOD含量增加明显，尤以中药组合物高剂量组为甚，且具有统计学差异(P<0.05)。具体数据见图4(注：与sham比较，*P<0.05；与model比较，#P<0.05)。
[0089] 实施例7测定尿液中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成激素(LH)水平含量[0090] 测定尿液中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成激素(LH) 水平含量：采用代谢笼取24h尿液，采用化学发光法进行检测。
[0091] 与模型对照组相比，中药组合物的各剂量组尿液中E2含量增加明显，且有量效关系。尤以中药组合物高、中剂量组具有统计学差异(P<0.05)。而FSH和LH的含量变化不明显，具体数据见图5(注：与model比较， #P<0.05，##P<0.01)。
[0092] 实施例8 16SrRNA测序肠道菌群微生态变化
[0093] 16SrRNA测序肠道菌群微生态变化：采用16SrRNA高通道测序进行测定，确定肠道细菌在PID发生发展中的变化情况，对环境样本中微生物丰度的评估，主要采用Chao指数与ACE指数。在属分类水平下对各组大鼠肠道微生物进行深入分析并计算OUT值，从而判断癃清片是否调节肠道菌群的变化。肠道微生物DNA的提取、扩增及16S rDNA的高通量测序，按照Qiagen QIAamp DNA Stool Mini Kit说明书进行肠道微生物DNA的提取，抽提所得DNA采用Qubit 2.0和0.8％琼脂糖凝胶电泳进行质检。按照实验操作说明对纯化的基因组DNA进行两轮PCR扩增，扩增的引物上游为5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’(SEQ ID NO.1)，下游为 5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’(SEQ ID NO.2)，完成测序样本文库的构建。按照MiSeq用户指南准备测序试剂，采用双末端测序程序进行测序并进行相应数据分析。
[0094] 8.1中药组合物对萎缩性阴道炎大鼠肠道微生态多样性与丰度的影响
[0095] 通过样本Alpha多样性分析可以反映肠道微生物的多样性和丰度。计算菌群多样性的指数有Shannon指数和Simpson指数，计算菌群丰度的指数有Chao指数和Ace指数。
[0096] 对大鼠肠道微生物Shannon指数和Simpson指数的影响
[0097] 评估环境样本微生物多样性，主要采用Shannon指数和Simpson指数， Shannon指数值越大，说明群落多样性越高；Simpson指数值越大，说明群落多样性越低。如图6A所示，与空白对照组相比，模型对照组Shannon指数显著下降(P<0.01)；与模型对照组相比，中药组合物高剂量组Shannon 指数显著上升(P<0.01)。如图6B所示，在Simpson指数中，模型对照组较空白对照组指数明显升高(P<0.05)，中药组合物高剂量组较模型对照组指数明显下降(P<0.05)。
[0098] 对大鼠肠道微生物Chao指数和Ace指数的影响
[0099] 评估环境样本中微生物菌群丰度，主要采用Chao指数和Ace指数。 Chao和Ace指数越大，说明群落中含有的OTU数目越多，群落的丰富度越大。如图7A所示，与空白对照组相比，模型对照组Chao指数明显下降 (P<0.05)；与模型对照组相比，中药组合物高剂量组Chao指数显著上升 (P<0.01)。如图7B所示，在Ace指数中，模型对照组较空白对照组Ace 指数明显下降(P<0.05)，中药组合物高剂量组较模型对照组Ace指数显著上升(P<0.01)。
[0100] 可见，与空白对照组大鼠相比，模型对照组大鼠肠道微生物出现多样性减少及细菌基因丰度下降，给予中药组合物治疗后肠道菌群多样性及丰度均得到一定程度改善。(注：与sham比较，*P<0.05，**P<0.01；与model 比较，#P<0.05，##P<0.01)[0101] 8.2中药组合物对萎缩性阴道炎大鼠肠道菌群构成及比例的影响
[0102] 研究发现大鼠肠道菌群序列主要分属于4个菌门，分别为厚壁菌门 (Firmicutes)，拟杆菌门(Bcteroidetes)，疣微菌门(Verrucomicrobia) 和放线菌门(Actinobacteria)。其中，拟杆菌门与厚壁菌门在整个大鼠肠道微生物中占主要部分，是肠道菌群中的绝对优势菌。
[0103] 在属分类水平上大鼠肠道菌群差异物种组间比较柱状图如图8A-8J所示：
[0104] 与空白对照组相比，模型对照组Aerococcus(图8A)，Actinomyces (图8B)，Anaerofustis(图8C)，Fimicutes_unclassified(图8D)， Muribaculaceae_unclassified(图8E)，Ruminococccaceae_NK4A214_group (图8F)，六个菌属OTU比例显著下降(P<0.05，P<0.01)；与模型对照组相比，雌激素组和中药组合物的高剂量组上述六个菌属OUT比例有不同程度升高，但中药组合物的高剂量组升高Aerococcus水平有统计学意义 (P<0.05，P<0.01)。(注：与sham比较，*P<0.05，**P<0.01；与model 比较，#P<0.05，##P<0.01)[0105] 与空白对照组相比，模型对照组Flavobacteriaceae_uncultured(图8G)， Butyricimonas(图8H)，Candidatus_Saccharimonas(图8I)， Clostridium_sensu_stricto_1(图8J)，四个菌属OTU比例显著升高(P<0.05， P<0.01)；经中药组合物治疗后，高剂量组OUT比例较模型组明显下降 (P<0.05，P<0.01)。(注：与sham比较，*P<0.05，**P<
0.01；与model 比较，#P<0.05，##P<0.01)
0.01；与model 比较，#P<0.05，##P<0.01)
[0106] 实施例9PCR检测大鼠子宫组织中ICAM-1mRNA、TGF-βmRNA 的表达
[0107] 采用实时定量荧光PCR(RealTime-PCR)检测大鼠子宫组织中 ICAM-1mRNA、TGF-βmRNA的表达。Real Time PCR检测目的基因引物如下表所示：
[0108]
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