使用包含稳定的二氧化氯和过氧化物的协同性制剂减少乙醇发酵中污染性微生物的长
阅读：470发布：2021-06-15
专利汇可以提供使用包含稳定的二氧化氯和过氧化物的协同性制剂减少乙醇发酵中污染性微生物的长专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且使用（a）稳定的二 氧 化氯（SCD）和（b）过氧化合物（PC）控制 发酵 工艺中污染性 微 生物 生长的方法。所述方法包括将SCD和PC加入发酵工艺的一个或多个步骤中。在该方法中，可将SCD和PC加入发酵液体培养基的一种或多种组分中，所述发酵液体培养基包括接种物、可发酵糖和工艺用 水 。，下面是使用包含稳定的二氧化氯和过氧化物的协同性制剂减少乙醇发酵中污染性微生物的长专利的具体信息内容。
1.控制发酵工艺中污染性微生物生长的方法，包括将组分(a)稳定的二氧化氯和(b)过氧化合物加入发酵工艺的一个或多个步骤中，其中所述发酵工艺包括(i)提供发酵容器；
(ii)提供接种物、可发酵糖和工艺用水；(iii)将所述接种物、可发酵糖和工艺用水单独或以任何组合引入发酵容器以提供发酵液体培养基；以及(iv)在所述接种物将所述可发酵糖转化成乙醇的温度下，在所述发酵容器中使所述接种物与所述可发酵糖接触，其中所述过氧化合物为过氧化氢。
2.根据权利要求1所述的方法，还包括将营养物质加入所述接种物、可发酵糖和工艺用水的一种或多种中，或直接加入所述发酵容器中。
3.根据权利要求2所述的方法，其中将所述稳定的二氧化氯和过氧化合物单独加入所述发酵工艺的一个或多个步骤中。
4.根据权利要求2所述的方法，还包括在将所述稳定的二氧化氯和过氧化合物加入所述发酵工艺的一个或多个步骤之前使所述稳定的二氧化氯与过氧化合物接触。
5.根据权利要求2所述的方法，其中在将所述接种物、可发酵糖或工艺用水引入所述发酵容器之前将稳定的二氧化氯或过氧化合物加入所述接种物、可发酵糖或工艺用水中。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述接种物为酵母种菌，所述酵母种菌通过使酵母起始培养物与营养物质组合物在增殖槽中接触而产生。
7.根据权利要求1或5所述的方法，其中所述发酵工艺为分批发酵，并且在将所述可发酵糖加入所述发酵容器之前将所述稳定的二氧化氯和过氧化合物加入所述发酵容器。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述发酵工艺为连续发酵工艺，并且将稳定的二氧化氯和过氧化合物混合，并且作为单一组合物加入酵母增殖步骤中或在所述接触步骤(iv)期间将其加入以产生所述酵母种菌。
9.根据权利要求2所述的方法，其中所述可发酵糖使用干磨方法获自玉米。
10.根据权利要求2所述的方法，其中所述可发酵糖使用湿磨方法获自玉米。
11.根据权利要求2所述的方法，其中所述可发酵糖为基于甘蔗或基于糖用甜菜或基于糖蜜的可发酵糖。
12.根据权利要求2所述的方法，其中所述稳定的二氧化氯为含二氧化氯的氧-氯络合物，所述含二氧化氯的氧-氯络合物选自二氧化氯与碳酸盐的络合物、二氧化氯与碳酸氢盐的络合物以及它们的混合物。
13.根据权利要求2所述的方法，其中所述稳定的二氧化氯为金属亚氯酸盐。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述金属亚氯酸盐为亚氯酸钠。
15.根据权利要求1所述的方法，其中以所述发酵液体培养基的总体积计，稳定的二氧化氯以提供0.0002％至5％的所述稳定的二氧化氯浓度的量加入；并且以所述发酵液体培养基的总体积计，所述过氧化合物以提供0.0002％至5％的浓度的量加入。
16.根据权利要求1所述的方法，还包括在所述接触步骤后，将稳定的二氧化氯和过氧化合物加入所述接触步骤的产物中。
17.根据权利要求1所述的方法，其中提供所述可发酵糖的步骤包括制备并储存碳水化合物原料，其中将稳定的二氧化氯和过氧化合物加入所述碳水化合物原料，并且其中所述碳水化合物原料包含可发酵糖，并且进一步地，其中以所述原料的总重量计，所述原料的碳水化合物含量为至少1重量％，并且以所述原料的总重量计，所述稳定的二氧化氯以10ppm至1000ppm的稳定的二氧化氯的量加入，并且以所述原料的总重量计，所述过氧化合物以
10ppm至1000ppm的过氧化合物的量加入。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述原料为基于糖的原料。
19.根据权利要求17所述的方法，其中所述原料为纤维素原料。
20.根据权利要求17所述的方法，其中以所述原料的总重量计，稳定的二氧化氯以
50ppm至500ppm的量加入，并且以所述原料的总重量计，所述过氧化合物以50ppm至500ppm的量加入，并且其中以原料的总重量计，所述原料的碳水化合物含量为1重量％至70重量％。
21.根据权利要求1所述的方法，其中所述发酵工艺还包括在步骤(iv)后，将稳定的二氧化氯和过氧化合物加入所述接触步骤的产物中，所述接触步骤的产物包含乙醇。
22.根据权利要求1所述的方法，其中所述发酵工艺还包括在步骤(iv)后，从所述接触步骤的产物中分离乙醇以提供剩余产物，所述接触步骤的产物包含乙醇，其中将所述剩余产物进料到发酵池或酒糟水槽中，并且所述发酵工艺还包括将所述稳定的二氧化氯和过氧化合物加入所述发酵池或酒糟水槽。
使用包含稳定的二氧化氯和过氧化物的协同性制剂减少乙醇
技术领域
[0001] 本发明涉及稳定的二氧化氯和过氧化合物的协同性组合和使用方法，尤其是在发酵工艺中。
背景技术
[0002] 在过去十年中，乙醇作为运输燃料的用途已显著提高。美国的乙醇生产从2000年的约64亿升提高至2009年的超过370亿升。乙醇工厂的数量从2000年的54个提高至2009年的170个。在拉丁美洲和欧洲已出现类似的生产和工厂建设的增多。在2007年，美国国会颁布了能源独立和安全法案（Energy Independence and Security Act）（H.R.6），其设定了到2022年1360亿升乙醇的可再生燃料标准。如果要达到该标准，则乙醇工业将继续成长。
[0003] 目前工业乙醇（例如燃料）和食用乙醇均通过发酵工艺从农业（天然）原料中大规模生产，其中通过接种酵母将糖转化成乙醇和二氧化碳。许多原料可用于提供发酵糖，包括潜在的任何淀粉或纤维素材料，它们包括几乎所有植物，因为任何淀粉或纤维素可为糖前体。一些尤其适于生产燃料乙醇的常用原料包括玉米、蜀黍、高粱、甘蔗、糖用甜菜和糖蜜。
[0004] 用于乙醇生产的原料是天然产品，因此，在所述原料中可能在天然情况下存在多种多样的微生物，诸如细菌、真菌和酵母。商业发酵工艺条件并非完全无菌，因此这些“污染性微生物”将在工艺中存在。在商业乙醇生产中，最成问题的微生物是产乳酸细菌和产乙酸细菌。此类细菌从多种来源进入该工艺，所述来源包括原材料、设备、工艺用水、空气和接种酵母等。通过随进料物质（原材料、水、空气、酵母）引入或由于利于细菌生长的条件导致的天然扩增，此类细菌的浓度可在加工环境中提高。用于酵母生产的最佳空气环境也极度有利于这些细菌的生长。由细菌产生的有机酸抑制了酵母的生长并因此降低了乙醇生产率。细菌还可消耗糖和其它营养物质，其旨在用于由酵母利用来产生所期望的产物，这导致了整个过程经济效益更低。
[0005] 大量的发酵工艺使用抗生素作为抗微生物组合物。这类用途已经变得不受欢迎，这是因为抗生素耐药细菌的可疑发展以及抗生素残余物在发酵副产物中的积累所致。抗生素耐药细菌是人类健康的重大问题。
[0006] 乙醇生产的副产物包括在对乙醇产物蒸馏后所收集的固体。此类固体包括含可溶物的干酒糟（DDGS）和含可溶物的湿酒糟（DWGS）。很多国家和地区正在考虑能限制或消除抗生素对乙醇生产的使用的管理措施。DDGS和DWGS作为动物饲料产品进行销售。
[0007] 对抗微生物处理的需求不断增长，这不仅是由于乙醇产量的增长，还由于乙醇生产设施尺度的扩张。虽然数年之前生产150-200百万升/年（MMly）的工厂被认为是大型设施，但是现在380MMly（或更高）的设施是工业标准。在分批补料加工中，单个发酵批次的体积已显著提高。为容纳该增加的容积，在最大的乙醇生产设施中进入发酵系统的原料（一旦其制备用于进入发酵，通常称为“醪（mash）”）的流速已从约2000-3000升/分钟提高至4500-6000升/分钟。
[0008] WO2007/149450描述了使用稳定的二氧化氯（SCD）来防止乙醇生产中的细菌污染。SCD在乙醇生产中显著的细菌生长发生前加入，其作为预防性而非补救性措施。污染性细菌在糖向酒精的发酵之前或其间的生长由此而基本被阻止，生产了增强接种酵母生长并且使接种酵母能够生产乙醇而不受由细菌产生的有机酸的抑制的条件。
[0009] 尽管一些方法是已知的，但是对用于解决发酵工业中含碳水化合物的原料和发酵工艺中污染性微生物的改善方法存在着需求。改善的方法应优选地是无抗生素并且并不生产在发酵副产物中积累的残余物或不产生抗生素耐药细菌。所述方法应在发酵工业中遇到的多种多样的pH范围和条件下有效。所述方法还应使用在使用前具有合理储存寿命的处理。对于改善当今较大体积发酵工艺的经济性也存在着需求。本发明满足这些需求。
发明内容
[0010] 本发明提供了使用（a）稳定的二氧化氯（SCD）和（b）过氧化合物（PC）的组合控制发酵工艺中污染性微生物生长的方法。所述方法包括将SCD和PC（诸如过氧化氢）加入发酵工艺的一个或多个步骤中，其中所述发酵工艺包括（i）提供接种物、可发酵糖和工艺用水；（ii）将接种物、可发酵糖和工艺用水单独或以任何组合引入发酵容器以提供发酵液体培养基（；iii）在接种物将可发酵糖转化成乙醇的温度下，在发酵容器中使所述接种物与所述可发酵糖接触。任选地，将营养物质加入接种物、可发酵糖和工艺用水的一种或多种中。还可将营养物质直接加入发酵容器中。在将接种物、可发酵糖或工艺用水中的每一种引入发酵容器之前可将SCD和PC加入这些物质中。作为另外一种选择，可直接将SCD和PC加入发酵容器中。
[0011] 可向该过程中单独加入稳定的二氧化氯和过氧化合物。当单独加入组分时，该组分可同时加入或以任何顺序按顺序加入。即，可在相同时间加入组分（同时），或者可在加入其它组分之前加入一种组分（按顺序）。作为另外一种选择，所述方法可包括将组分（a）和（b）在加入发酵工艺之前进行接触。
[0012] 本发明提供了用于控制发酵液体培养基中反应物（本文下文进行定义）和发酵工艺的产物中污染性微生物生长的方法。所述方法还控制了发酵系统的组件表面上的污染性微生物的生长。所述方法由以下步骤组成，基本上由以下步骤组成或包括以下步骤：将二氧化氯和过氧化合物加入反应物或发酵液体培养基中或加入发酵系统的表面上或容器中。
[0013] 本发明还提供了组分的组合，其可用于原位清洁（CIP）应用以处理发酵工艺中使用的设备表面。“CIP”在本文是指可清洁表面而无需拆解所述设备。
[0014] 所述方法包括加入有效量的包含SCD和PC的组分的组合，以控制污染性微生物的生长，而对于发酵工艺所用的接种物无有害影响。有效量根据组分的组合使用的方式而变化，但是可由本领域的技术人员根据本文的公开内容确定。以发酵液体培养基的总体积计，SCD通常以在发酵液体培养基中提供0.0002重量%至5重量%的SCD浓度的量加入。以发酵液体培养基的总体积计，PC通常还以在发酵液体培养基中提供0.0002重量%至5重量%的PC浓度的量加入。
[0015] 本发明的方法还提供了在碳水化合物原料中控制至少一种污染性微生物生长的方法，其中所述提供可发酵糖的步骤包括提供碳水化合物原料并使所述原料与SCD和PC接触，其中以总原料重量计，所述原料的碳水化合物含量是至少1重量%并且优选1重量%至70重量%，并且其中SCD和PC以有效量加入。通常，以原料的总重量计，SCD以10ppm至1000ppm的SCD的量加入，并且以原料的总重量计，PC通常以10ppm至1000ppm的过氧化合物的量加入。
具体实施方式
[0016] 本发明提供了用于控制污染性微生物生长的方法，所述方法包括以下步骤、基本上由以下步骤组成、或由以下步骤组成：将包含稳定的二氧化氯（SCD）和过氧化合物（PC）的组分的组合加入发酵工艺的一个或多个步骤中。以有效控制污染性微生物的生长而不抑制接种酵母将可发酵糖转化成乙醇和二氧化碳的能力的量将SCD和PC的协同性组合加入所述方法中。通常加入SCD和PC以在发酵液体培养基中提供0.0002重量%至5重量%的SCD浓度并在发酵液体培养基中提供0.0002重量%至5重量%的PC浓度，其各自以发酵液体培养基的总体积计。
[0017] 本发明在提供可发酵糖的步骤中还提供了在碳水化合物原料中控制至少一种污染性微生物生长的方法，所述方法包括以下步骤、基本上由以下步骤组成、或由以下步骤组成：提供碳水化合物原料以及将稳定的二氧化氯和过氧化合物加入所述原料中。
[0018] 定义
[0019] 以下术语具有如下所提供的定义以用于本文。
[0020] 含水介质是指基本上是水的介质，例如大于80%，优选大于90%，更优选大于95%的含水量。含水介质可为大于99%的水。工艺用水是含水介质的一个例子。
[0021] 碳水化合物原料是指用于制备可发酵糖或直接作为可发酵糖的原料。即，碳水化合物原料是可发酵糖或包含可发酵糖的组合物或可转化成可发酵糖的组合物。
[0022] 碳水化合物原料可包含至多100重量%的碳水化合物。以原料的总重量计，碳水化合物原料一般包含在1%和70%之间，优选在2%和40%之间的碳水化合物，其作为含水介质中的溶液或悬浮液。原料中的碳水化合物的量和组成可根据期望的最终用途而变化。例如玉米浆，它是获自湿磨方法的碳水化合物溶液，其可包含16.5%的碳水化合物。在湿磨方法中，将玉米浸渍或浸泡，然后分成多种组分。玉米浆是已将玉米长期浸泡后获得的含水液体，在此期间从玉米固体中提取可易于发酵的可溶性组分，其溶于浸泡水中。来自湿磨方法的淀粉组分可包含至多40重量%的碳水化合物。
[0023] 碳水化合物原料可包含其它组分，它们一般起到溶液和/或悬浮液助剂的作用。例如碳水化合物原料可包含酶、表面活性剂、分散剂、消泡组合物、矿物质、痕量元素、以及它们中两种或更多种的组合。这些组分以及作为助剂的其它组分是本领域的技术人员熟知的。
[0024] 应用于本文微生物生长的控制是指降低和/或防止靶向的非期望的污染性微生物生长。如本文所用的控制微生物的生长还包括将微生物群体维持于所期望的水平、将微生物群体降低至所期望的水平（部分地降低或甚至降低至不可检出的限度，例如零群体）和/或抑制微生物的生长。
[0025] 有效量在本文是指SCD和PC各自的量，在加入发酵工艺中时其以组合形式对于在对发酵工艺所用的接种物无有害影响的情况下控制污染性微生物的生长是有效的。
[0026] 可发酵糖是反应物和用于乙醇发酵工艺中的接种物的常用营养物质。可发酵糖是糖（例如葡萄糖）或淀粉，其通过酵母的作用转化成乙醇和二氧化碳。公式（1）示出了葡萄糖（C6H12O6）的工艺。
[0027] C6H12O6→2C2H5OH+2CO2 （1）
[0028] 如本文所用的可发酵糖是碳水化合物，所述碳水化合物来源于基本上包括糖、淀粉和/或纤维素的任何植物来源，其通常以糖、淀粉和/或纤维素的水溶液或水悬浮液的形式提供。淀粉和/或纤维素可通过本领域中已知的方法（例如使用酶）转化成用于本发明方法的可发酵糖。可发酵糖可来源于淀粉源或一种或多种纤维素材料源，诸如玉米、高粱、小麦、木屑、蜀黍、大麦、粟、甘蔗、糖用甜菜、糖蜜、乳清、马铃薯、小麦秸秆、玉米秸秆、柳枝稷、藻类、海藻和/或其它生物源。可发酵糖还可来源于果汁（例如葡萄、苹果）。作为另外一种选择，可发酵糖可来源于非传统的原料，诸如木材废料、蔗渣、纸材废料和市政固体垃圾。将这些来源转化成可发酵糖的方法是本领域的技术人员已知的。参见J.Y.Zhu等人，Bioresource Technology（2010），第101卷（13），第4992-5002页；以及A.L.Demain,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.，（2009），第36卷（3），第319-332页以供参考。
[0029] 可发酵糖使用干磨或湿磨方法方便地获自玉米。在干磨方法中，将玉米研磨成粗粉并且在不分离的情况下加工成其组成性组分，所述组成性组分基本上包含纤维、淀粉、油和蛋白质。在湿磨方法中，将玉米浸泡或浸没入水中，然后以机械方式分离成其组成性组分。将来自湿磨方法的玉米淀粉组分或来自干磨方法的粗粉（玉米面）与水和酶混合进行烹制以使淀粉增溶。
[0030] 玉米淀粉是多糖，即，由单个葡萄糖单元制成的聚合物。通过酶（α-淀粉酶）将玉米淀粉转化成较小（较短）的多糖，即糊精。使用酶（葡糖淀粉酶）将较小的多糖转化成葡萄糖（单糖），从而形成可发酵糖。
[0031] 作为玉米的替代品，可发酵糖可来源于糖蜜。糖蜜可获自包括甘蔗或糖用甜菜在内的多种来源，例如作为制造结晶糖工艺的副产物。糖蜜通常以糖浆而获得，在准备进行发酵中可向其中加入其它成分。这些其它成分包括甘蔗汁、甜菜汁、水和维生素或其它营养物质。是否加入其它成分中的一种或多种以及所加入的量应在糖蜜来源的可发酵糖中有所变化。
[0032] 作为玉米的替代品，可发酵糖可来源于甘蔗汁。甘蔗汁是用水从甘蔗中提取的汁。从甘蔗中提取汁还通过物理压碎、水中扩散或本领域的技术人员一般熟知的其它方法完成。参见例如H.V.Amorim等人在“The Alcohol Textbook”（2009），Nottingham University Press,Nottingham的第39-46页；以及EPA Food and Agricultural Industries
Handbook，第9.10.1.1章（甘蔗）和第0.10.1.2章（糖用甜菜），其购自http://www.epa.gov/ttnchie1/ap42/ch09/（访问于2011年12月18日）。甘蔗汁可无需进一步加工而使用，并作为可发酵糖直接加入发酵容器中。
Handbook，第9.10.1.1章（甘蔗）和第0.10.1.2章（糖用甜菜），其购自http://www.epa.gov/ttnchie1/ap42/ch09/（访问于2011年12月18日）。甘蔗汁可无需进一步加工而使用，并作为可发酵糖直接加入发酵容器中。
[0033] 出于本文的目的，用于生产碳水化合物原料和可发酵糖的步骤是发酵工艺的步骤。即，所述发酵工艺包括生产碳水化合物原料的步骤，以及将淀粉和/或纤维素转化成可发酵糖的步骤。
[0034] 在发酵工艺中，包括糖和淀粉在内的碳水化合物通常以发酵液体培养基的总体积计以约5至约40%（重量/体积），优选在约10至35%（重量/体积）的范围内的浓度存在于发酵液体培养基中。
[0035] 如本文所用的发酵液体培养基是指在发酵工艺期间在已加入所有反应物后发酵容器的内容物，并且其通常包含可发酵糖、接种物、任选的营养物质和工艺用水。
[0036] 如本文所用的发酵工艺是指包括使接种物（诸如酵母）在工艺用水中与可发酵糖和任选的营养物质接触以生产乙醇的方法。发酵工艺可为分批的或连续的。此外，出于本文的目的，发酵还包括用于制备或预处理反应物中的一种或多种的步骤，诸如由天然来源制备可发酵糖的工艺和酵母增殖。
[0037] 所述接触步骤在使接种物将糖转化成乙醇和二氧化碳的温度下进行。
[0038] 当通过干磨方法使用玉米作为原料产生乙醇时，发酵工艺可包括以下步骤中的一个或多个：对玉米制浆、液化、糖化、制备接种酵母（增殖）、发酵醪（接种物作用于糖上以生产乙醇的实际步骤）、分离并回收所得乙醇以及任选地再循环利用接种酵母废料。发酵工艺可包括以下步骤中的一个或多个：制备接种酵母、通过稀释、巴氏消毒或其它此类方法制备汁、发酵、分离并回收乙醇以及任选地再循环利用酵母。本领域的技术人员应当了解，这些加工步骤可根据原料有效性和工厂设计与工厂位置而变化。
[0039] 如本文所用的发酵系统包括组件（设备），诸如容器和管道，发酵工艺的一种或多种反应物和产物在其内和通过其存留或流通。此类设备具有可存在细菌和其它污染性（非期望的）微生物的表面。发酵系统的一部分是发酵容器——在其中进行使可发酵糖与接种物反应以生产乙醇的发酵步骤的容器。
[0040] 当通过干磨方法生产乙醇时，发酵系统可包括一种或多种容器，诸如浆液槽、液化槽、糖化槽、酵母增殖槽和发酵容器。此类容器及其用途对于本领域的技术人员是已知的。参见例如R.J.Bothast和M.A.Schlicher，Applied Microbiology and Biotechnology（2005），第67卷（1），第19-25页。当通过湿磨方法生产乙醇时，发酵系统可包括一种或多种容器，诸如浸槽（steep tank）、分离槽、酵母增殖槽和发酵容器。本领域的技术人员应当了解，这些加工步骤可根据原料有效性和工厂设计与工厂位置而变化。
[0041] 接种物是有目的地加入工艺来将原料（输入）转化成所期望的产物（输出）的任何微生物。出于本文的目的，接种物为能够将可发酵糖转化成乙醇的微生物。酵母是用于乙醇发酵的常用接种物。酵母是能够在有氧（具有氧气）或无氧（缺乏氧气）环境中生存并且生长的微生物。接种物还可选自能够将可发酵糖转化成乙醇的真菌和藻类。例如，可使用产乙醇细菌作为接种物通过纤维素生产乙醇。当根据本文所述方法而使用时，接种物细菌并非如产乳酸和产乙酸细菌那样受到稳定的二氧化氯和过氧化合物的不利影响。
[0042] 以下的讨论针对接种物是酵母的工艺。
[0043] 出于本文的目的，接种酵母是针对反应系统中的特定转化而特意选择的酵母。例如，可针对在酵母增殖中产生附加酵母（诸如用作面包酵母）而选择接种酵母；可针对用于产生酶的特定营养物质的代谢而选择接种酵母。在该具体的应用中，针对发酵可发酵糖来产生所期望质量和提高量的乙醇而选择接种酵母。接种酵母一般是由于它们完全发酵有效糖的能力、对高水平渗透胁迫、高温和高浓度乙醇的耐受而被选择的。酵母常用于乙醇发酵。酵母是能够在有氧（具有氧气）或无氧（缺乏氧气）环境中生存并且生长的微生物。用于本发明的方法的合适接种酵母包括但不限于啤酒糖酵母（Saccharomyces cerevisiae（S.cerevisiae））、葡萄汁酵母（Saccharomyces uvarum（S.uvarum））、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe（S.pombe））和克鲁维酵母属（Kluyveromyces sp）。
[0044] 可将接种酵母作为酵母种菌引入发酵容器，所述接种物为接种酵母的活化形式。即，在将接种酵母引入发酵容器之前通过在增殖槽中将酵母起始培养物接触营养组合物来增殖酵母（增加其量）以产生酵母种菌。营养组合物包含一种或多种可发酵糖、酶、附加的营养物质和水以生长或活化酵母。增殖槽是与发酵容器分离的容器并且在合适的温度条件下运行（例如68-104℉，20-40℃）。各接种物将具有增殖的优选温度。例如，30-32℃（86-90℉）的温度可能特别适于增殖。虽然据了解酵母增殖可在发酵工艺中于发酵容器内进行，但是酵母在增殖槽中的活化提供了高度活性的接种酵母。因此，将高度活性的酵母引入发酵容器。此类酵母增殖技术对于本领域的技术人员是已知的。参见例如E.Bellissimi等人，Process Biochemistry（2005），第40卷（6），第2205-2213页；和M.Knauf等人，Sugar Industry（2006），第131卷，第753-758页。
[0045] 对于连续发酵工艺，通常没有单独的酵母增殖槽。在连续方法中酵母可再循环利用或不可再循环利用。当无可用的再循环利用时，酵母在称为主发酵的阶段连续生长并生产乙醇。当有可用的再循环利用时，诸如在使用糖蜜或甘蔗汁作为可发酵糖的原料时的常见情况，通过与其它发酵组分分离来再循环利用酵母（通常使用离心）并且其通常在分离的槽（一般称为酵母再循环利用槽）内使用酸来调理酵母细胞以用于新的发酵循环。作为另外一种选择，可从发酵液体培养基中分离酵母，随后进行干燥并且固化为副产物。此类步骤是本领域的技术人员熟知的。参见例如，E.A.N.Fernandes等人，Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry（1998）第234卷（1-2），第113-119页；和L.C.Basso等人，FEMS Yeast Res（. 2008）vol.，第1155-1163页。
[0046] 相对于细菌，酵母可具有中等至缓慢的发酵速度。为补偿其代谢率，在大规模工业乙醇生产中可能需要大量的酵母一般以通常约1×105至1×107细胞/克发酵液体培养基的量将接种酵母加入发酵工艺。本领域的技术人员应当了解，该量可根据所使用的发酵工艺而变化。
[0047] 醪在本文用于指包含可发酵糖的组合物。醪包括在水中的混合谷物或其它可发酵碳水化合物的混合物，其在从可发酵糖与水的混合至任何调至和糖化之前直至完成发酵的任何阶段以用于乙醇生产，如Jacques,K.A.，Lyons,T.P.，Kelsall,D.R,“The Alcohol Textbook”，2003，423-424，Nottingham University Press,UK中所定义。
[0048] 在本发明的上下文中，微生物分两种，即期望的和污染性（非期望的）微生物。期望的微生物具有消耗营养物质以将可发酵糖转化成乙醇的能力。期望的微生物包括接种物，诸如酵母、啤酒糖酵母，其用于葡萄糖发酵成乙醇和二氧化碳。其它期望的微生物在其它生物精制方法中使用。期望的微生物通常不存在于碳水化合物原料中。当期望的微生物存在于碳水化合物原料中时，所存在的存活细胞的数量通常过低而不能有利地与还存在于所述原料中的其它微生物进行竞争。
[0049] 污染性微生物是与接种物进行竞争并且消耗可发酵糖和营养物质的微生物。污染性微生物生产非期望的产物并且/或者以远低于接种物所生产的速度来生产乙醇。
[0050] 污染性微生物包括细菌、真菌、野生的或污染的酵母以及能够代谢碳水化合物原料组分以维持微生物生存能力的其它微生物。污染性微生物污染碳水化合物原料、消耗原料以作为支持其生长食物来源、进行增殖并且因此耗尽了所述原料。
[0051] 污染性微生物如污染性酵母常存在于工业和食用乙醇生产中，并且可引起严重的污染事件，导致发酵工艺中的乙醇产量降低。这些不良微生物可通过可发酵糖（原料）、工艺用水、空气、操作人员和大量的其它来源而引入所述工艺。
[0052] 污染性微生物如细菌（包括乳酸菌（乳杆菌属的菌种））利用葡萄糖原料生成产物如乙酸和乳酸，它们不仅消耗原料并因此阻止原料转化成期望的产物，而且不利地影响生物精制过程中期望的微生物。例如，乙酸和乳酸不利地影响啤酒糖酵母将葡萄糖转化成乙醇的速率。其它污染性细菌包括片球菌属（Pediococcus）、肠球菌属（Enterococcus）、醋杆菌属（Acetobacter）、葡糖杆菌属（Gluconobacter）和梭菌属（Clostridium）。
[0053] 营养物质是指支持接种酵母或其它接种物微生物的生长和/或存活的元素，例如营养物质可为碳、氮、氧、硫、磷、镁和多种微量元素（诸如金属）的来源。碳源可为醇，诸如甲醇，或是烃，诸如辛烷。碳源还可为可发酵糖。氮源可为尿素、氨、铵盐或硝酸盐。盐诸如硫酸镁可提供镁和硫。磷可以钠盐或钾盐来供应，而氧可通过将空气引入所述工艺来供应。可使用其它形式的气态氧，诸如纯氧或氧/氮混合物。其它元素可直接加入或可天然存在于工艺组分中。
[0054] 如本文所使用，过氧化合物是指包含至少一个氧氧单键的化合物。优选的过氧化物选自氢过氧化物、有机过氧化物、无机过氧化物和释放过氧的化合物。
[0055] 氢过氧化物是通式R-O-O-H的化合物，其中R是氢或具有1至20个碳原子的直链烷基、支化烷基或环状烷基自由基，并且可任选地以一个或多个氧和/或羰基间隔。氢过氧化物的例子包括但不限于过氧化氢、过氧乙酸、叔丁基氢过氧化物、氢过氧化枯烯和乙醚氢过氧化物。
[0056] 有机过氧化物是具有通式R1-O-O-R2的化合物，其中R1和R2独立地为具有1至20个碳原子的直链烷基、支化烷基和/或环状烷基自由基，并且可任选地以一个或多个氧和/或羰基间隔。有机过氧化物的例子包括但不限于过氧化苯甲酰和过氧化二叔丁烷。
[0058] 释放过氧的化合物也用于本发明。更具体地，释放过氧的无氮化合物在本文定义为能够在加入水体系后释放过氧化氢或其它含氧自由基的任何无氮物质。释放过氧的化合物的例子包括过碳酸盐、过硼酸盐和过氧化物的碱金属、碱土金属和过渡金属化合物，以及它们的合适混合物。优选的释放过氧的化合物包括但不限于过碳酸钠、过硼酸钠、过氧化钠、过氧化钙、过氧化酶和过氧化锌。
[0059] 优选地，用于本发明的过氧化物是过氧化氢，本文称为“HP”。HP可在水中以33重量%至37重量%的浓度商购获得。商购获得的HP还可包含添加剂。添加剂包括稳定剂，诸如磷酸或其它矿物酸，以及抑制剂，诸如焦磷酸盐和锡酸盐化合物。
[0060] 防腐和保存是指处理碳水化合物原料以防止污染性微生物（诸如细菌）对碳水化合物的反应或消耗。保存在至少一个月的时长上提供稳定的碳水化合物原料，其不发生实质的改变，诸如由于微生物代谢导致的碳水化合物的反应或消耗。改变的一个量度是所保存原料的微生物群体。当适当保存时，碳水化合物原料不发生大于1log10CFU/ml或1log10CFU/g的原料中的微生物群体的增加。通常微生物群体用log10CFU/ml（用于液体原料）和log10CFU/g（用于固体/半固体原料）表示。log10CFU/g的表达方式也可用于液体原料。
[0061] 对于保存，变化的第二种度量为基于所述原料中特定酸类的浓度。酸是产生自污染性细菌对碳水化合物的反应和/或消耗的产物。例如，已知污染碳水化合物原料的某些细菌通过消耗碳水化合物而产生乳酸和乙酸。碳水化合物原料中提高浓度的乳酸和乙酸可用于显示所述原料是否适当地保存。当适当保存时，碳水化合物原料中的乳酸浓度低于0.60%（重量/体积），并且碳水化合物原料中的乙酸浓度低于0.30%（重量/体积）。
[0062] 本领域的技术人员还应理解，可使用其它的改变量度。例如，检测到非期望化合物（例如来自碳水化合物原料代谢的产物）的存在可指示改变。检测方法可包括分光光度测定法、色谱法以及本领域的技术人员已知的其它方法。其它量度可包括碳水化合物原料的物理变化如比重或粘度的改变。
[0063] 反应物是指接种物、可发酵糖、任选的营养物质以及发酵液体培养基中的其它任选组分。出于本文的目的，反应物还包括工艺用水。
[0064] 稳定的二氧化氯本文也称为“SCD”，是指一种或多种含二氧化氯的氧-氯络合物、一种或多种含亚氯酸根的化合物、当暴露于酸时能够形成二氧化氯的一种或多种其它物质以及它们的组合。因此，稳定的二氧化氯包含至少一种含二氧化氯的氧-氯络合物、含亚氯酸根的化合物或当暴露于酸时能够在液体基质中形成二氧化氯的物质。本文所定义的SCD是可商购获得的产品。
[0065] 优选的含二氧化氯的氧-氯络合物选自二氧化氯与碳酸盐的络合物、二氧化氯与碳酸氢盐的络合物以及它们的混合物。含亚氯酸根的化合物的例子包括金属亚氯酸盐，具体地包括碱金属亚氯酸盐和碱土金属亚氯酸盐。用作SCD（二氧化氯前体）的含亚氯酸根的化合物的具体例子是亚氯酸钠，其可用作工业级亚氯酸钠。
[0066] SCD优选地以水溶液的形式使用，诸如碱金属或碱土金属亚氯酸盐，通常为亚氯酸钠（NaClO2）。溶液中的亚氯酸钠在高于7的pH下一般是稳定的，但是当pH低于中性（pH7）时释放活性二氧化氯（ClO2）。SCD活化速率（即，活性ClO2从稳定形式释放的速率）随着pH降低而提高。
[0067] 多种SCD组合物，具体地包含二氧化氯的氧-氯络合物的确切化学组成尚未被完全理解。某些二氧化氯前体的制造或制备描述于Gordon的美国专利3,585,147和Lovely的美国专利3,591,515中。可商购获得的并且有用的稳定的二氧化氯的具体例子包括例如购自E.I.du Pont de Nemours and Company,Wilmington DE的ANTHIUM DIOXCIDE和FERMASURE；购自Bio-Cide International,Inc.,Norman,OK的OXINE和PUROGENE。
[0068] 可通过以下物质的溶液的形式提供SCD：一种或多种包含二氧化氯的氧-氯络合物、一种或多种含亚氯酸根的化合物或当暴露于酸时能够形成二氧化氯的一种或多种其它物质、以及它们的组合。溶液在液体培养基中以预定浓度的“有效二氧化氯”提供SCD。“有效二氧化氯”的浓度为基于二氧化氯从一种或多种包含二氧化氯的氧-氯络合物的完全（100%）释放和/或一种或多种含亚氯酸根的化合物向二氧化氯的完全（100%）转化和/或二氧化氯通过能够形成二氧化氯的一种或多种其它物质的完全（100%）形成。优选地，SCD溶液具有足量的SCD以具有以SCD溶液的总重量计在约0.002重量%至约40重量%范围内，优选在约2重量%至约25重量%范围内，更优选在约5重量%至约15重量%范围内的有效二氧化氯浓度。
[0069] SCD可以固体材料来提供，例如包含碱或碱土金属亚氯酸盐固体、惰性成分以及任选的干燥激活因子如干酸的组合物。
[0070] SCD也可以混合物（或浆液）形式提供，所述混合物包含碱或碱土金属亚氯酸盐和附加的固体碱或碱土金属亚氯酸盐的饱和溶液。此类浆液提供液体SCD，其具有比溶液形式中的活性成分更高的活性成分含量。
[0071] 本发明在下文中将术语SCD描述为稳定的碱金属亚氯酸盐，更具体地为亚氯酸钠（NaClO2）。通常，以溶液重量计，亚氯酸钠以包含5重量%至22重量%的水溶液使用。在下文中将SCD浓度描述为当将亚氯酸化学当量地转化成二氧化氯时的有效二氧化氯的浓度，“有效的ClO2”。在1g亚氯酸钠中的潜在的二氧化氯含量为0.597g。包含5重量%至22重量%的亚氯酸钠的亚氯酸钠溶液因此含有2.98重量%至13.13重量%的有效二氧化氯。ClO2的生成通过以下公式（2）示出：
[0072] 5NaClO2+4H+→4ClO（2 g）+2H2O+Cl-+5Na+ （2）
[0073] 其中一摩尔的NaClO2提供0.8摩尔的ClO（2 5:4比率）。（参见例如Ulllmann’s Encyclopedia of Industrial Chemistry,Wiley Online Library,http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/14356007.a06_483.pub2/pdf，访问于2010年9月
30日）。
30日）。
[0074] 提供由其它含亚氯酸根的化合物或由一种或多种包含二氧化氯的氧-氯络合物或由当暴露于酸时能够形成二氧化氯的一种或多种其它物质而产生ClO2的化学计量的公式对于本领域的技术人员是已知的。
[0075] 生长控制方法
[0076] 本发明用于控制一种或多种污染性微生物的生长的方法，所述方法包括以下步骤、基本上由以下步骤组成或由以下步骤组成：将组分（a）稳定的二氧化氯（SCD）和（b）过氧化合物（PC）的组合加入发酵工艺的一个或多个步骤中。
[0077] 可将组分SCD和PC单独加入发酵工艺。当单独加入时，SCD和PC可同时（在相同时间）或以任何顺序按顺序（在不同时间）加入一个或多个不同的加工步骤中。
[0078] 在将反应物和组分引入发酵容器之前可将组分SCD和PC单独或以组合加入反应物（诸如接种物、可发酵糖或工艺用水）中的任一种中。
[0079] 作为另外一种选择，所述方法还可包括使组分SCD和PC在加入发酵工艺之前进行接触。优选地，使组分SCD和PC在加入之前进行接触并且因此作为单一组合物加入发酵工艺。
[0080] 发酵工艺可为分批的或连续的。在分批发酵中，优选在加入可发酵糖之前更优选在加入任何反应物之前将组分SCD和PC作为单一组合物（在加入前进行接触）加入或单独加入发酵容器中。在连续发酵工艺中，可在酵母增殖步骤或接触步骤中将组分SCD和PC作为单一组合物加入发酵容器中。如果成系列地使用超过一个发酵容器，优选地将所述组分加入系列中的第一发酵容器或主发酵容器中。
[0081] 优选地在生产显著量的乙醇之前或生产与污染性细菌的生长相关联的显著量的有机酸之前将SCD和PC加入所述工艺中。所谓“显著量的乙醇”是指以发酵液体培养基的总体积计，发酵液体培养基中乙醇的量不超过10重量%。所谓“显著量的有机酸”是指以发酵液体培养基的总体积计，发酵液体培养基中有机酸的量不超过0.3重量%。优选地在发酵工艺中，诸如在接种酵母增殖期间，已将接种酵母引入发酵容器之前或紧随其后，早期加入SCD和PC。
[0082] 在另一个实施例中，在将接种物引入发酵容器之前将SCD和PC加入发酵工艺中。在该实施例中，在将这些反应物中的任一种引入发酵容器之前可将SCD和PC加入可发酵糖或工艺用水或两者中，并且在将接种物引入发酵容器之前将混合的SCD/PC/可发酵糖和/或SCD/PC/工艺用水引入该发酵容器。例如，可将SCD和PC加入提供可发酵糖的一个或多个步骤中，诸如湿磨或干磨方法的一个或多个步骤。
[0083] 当发酵工艺包含基于甘蔗或基于糖用甜菜或基于糖蜜的糖时，其通常具有成系列的发酵容器，其具有第一、第二或甚至第三或更多的发酵容器作为系列容器，其中将发酵液体培养基连续地转移到各发酵容器中作为发酵循环一部分。在该实施例中，将SCD和PC优选加入第一发酵容器中。
[0084] 作为另外一种选择，在使用甘蔗或糖用甜菜或糖蜜作为可发酵糖的发酵工艺中，在使可发酵糖与接种物接触之前将SCD和PC加入可发酵糖中。在可发酵糖的储存期间可加入SCD和PC。本文将在储存期间加入SCD和PC的此类步骤设想为在将可发酵糖引入发酵容器之前提供可发酵糖的加工步骤。
[0085] 在加入反应物之前还可将SCD和PC加入空发酵容器中。
[0086] 在另一个替代方案中，对于甘蔗或糖蜜为可发酵糖并且在完成各发酵循环后对接种物再循环利用的分批方法中，可在开始发酵工艺的随后批次之前将SCD和PC加入酵母处理阶段（酵母增殖）。即，SCD和PC单独、同时地或作为混合的组合物加入酵母再循环物流，其通常称为酵母膏。
[0087] 在一个实施例中，将SCD和PC加入工艺用水中。本文将向工艺用水中加入SCD和PC的此类步骤设想为在将工艺用水引入发酵容器之前提供工艺用水的加工步骤。工艺用水包括任何水，所述水由外部来源或从发酵工艺的其它部分再循环而引入发酵工艺。
[0088] 在基于糖蜜的发酵工艺中，工艺用水包括用于在发酵前稀释引入的糖蜜的水、作为酵母制备方法的一部分而加入的水或从此前的发酵步骤再循环利用的水（包括酵母再循环物流）。
[0089] 在干磨发酵工艺中，工艺用水包括加入浸槽、浆液槽、酵母增殖或发酵容器中的水。工艺用水还可为干磨分批发酵工艺中的再循环物流，其中所述再循环物流是在完成发酵后产生的物流，并且常被称为回流或加工冷凝物。干磨发酵工艺的这些阶段对于本领域的技术人员是熟知的。参见例如R.J.Bothast和M.A.Schlicher，Applied Microbiology and Biotechnology，如上文所引用。
[0090] 发酵工艺还可包括或作为另外一种选择包括在接触步骤后，将SCD和PC加入该接触步骤的产物（其产物包含乙醇）中，将乙醇从产物中分离。作为另外一种选择，发酵工艺还可包括在接触步骤后，将乙醇从剩余产物中分离，其中将所述剩余产物进料到例如发酵池或酒糟水槽中，并且发酵工艺还可包括将SCD和PC加入发酵池或酒糟水槽。
[0091] 稳定的二氧化氯（SCD）和过氧化合物（PC）以提供控制一种或多种污染性微生物生长的有效量的量加入发酵工艺。通常，以发酵液体培养基的总体积计，SCD以提供0.0002重量%至5重量%的稳定的二氧化氯浓度的量加入。通常，以发酵液体培养基的总体积计，PC还以提供0.0002重量%至5重量%的浓度的量加入发酵工艺中。优选地向发酵工艺中加入SCD和PC以提供以发酵液体培养基的总体积计0.0005重量%至1重量%，更优选0.002重量%至1重量%的SCD浓度和0.001重量%至1重量%，更优选0.002重量%至1重量%的PC浓度。最优选地加入SCD和PC以在发酵液体培养基中产生以发酵液体培养基的总体积计0.005重量%至0.5重量%的SCD浓度和0.005重量%至0.5重量%的PC浓度。
[0092] 保存方法
[0093] 作为本发明用于在发酵工艺中控制污染性微生物生长的一个实施例，可加入SCD和PC以作为提供可发酵糖中的步骤。更具体地，如本文所定义，发酵工艺包括制备并储存碳水化合物原料的加工步骤，其中所述碳水化合物原料包括可发酵糖或其用于制备可发酵糖。因此，提供可发酵糖的步骤可包括使碳水化合物原料与SCD和PC接触。因此，本发明的方法还用于在碳水化合物原料的储存中防止降解。
[0094] 以总原料重量计，原料中的碳水化合物含量为至少1重量%，并且优选1重量%至70重量%。稳定的二氧化氯和过氧化合物以有效量加入。通常，以原料的总重量计，稳定的二氧化氯以10ppm至1000ppm的稳定的二氧化氯的量加入，并且以原料的总重量计，过氧化合物通常以10ppm至1000ppm的过氧化合物的量加入，其中本文的以ppm表示的所有量以重量/重量计。优选地，以原料的总重量计，稳定的二氧化氯以50ppm至500ppm，更优选100ppm至500ppm，并且最优选100ppm至200ppm的稳定的二氧化氯的量加入。优选地，以原料的总重量计，过氧化合物以50ppm至500ppm，更优选100ppm至500ppm，并且最优选100ppm至200ppm的过氧化合物的量加入。
[0095] 在该方法中，使SCD和PC与有效量的碳水化合物原料接触以防止碳水化合物发生非期望的微生物生长，并因此防止原料的劣化。原料劣化可通过存在的污染性微生物群体或微生物代谢物浓度如有机酸进行确定，所述微生物代谢物一般指示原料中非预期的或非期望的微生物活性。因此在加入SCD和PC后基本上防止了储存或运输原料中的微生物增殖。
[0096] 本发明还可用于在储存和运输期间控制污染性微生物，从而保存碳水化合物原料。
[0097] 令人惊讶地是，根据本发明处理的碳水化合物原料在至少一个月内保持稳定。所谓“稳定”在本文是指加入SCD和PC保存碳水化合物原料，其中上文将“保存”定义为通过污染性微生物防止碳水化合物的反应或消耗。稳定的碳水化合物原料不经受大于1log10CFU/ml或1log10CFU/g的原料中微生物群体的增加。CFU，菌落形成单位的缩写，它是原料中微生物群体的量度。CFU用于确定每单位体积或每单位质量的样品中存活的微生物细胞的数量或样品中的微生物污染程度。改变的第二个量度是所保存原料的pH。适当保存的原料的pH不应改变超过0.5个pH单位。然而，如上文所述，pH改变可能不足以在所有情况下监视碳水化合物原料的保存。
[0098] 所述碳水化合物原料如上文所定义。
[0099] 在本发明中，使用SCD和PC的组合作为防腐剂以用于碳水化合物原料，以阻止污染性微生物活性以及碳水化合物原料的后续劣化以作为提供可发酵糖中的步骤。污染性微生物包括如WO2007/149450中所公开的细菌和如2009年5月18日提交的美国专利申请序列号12/467,728中所公开的污染性酵母。所述组合抑制了某些细菌的生长，所述细菌引起碳水化合物的非期望分解，例如单糖分解成有害的酸并且还选择性地降低污染性酵母的活性。
[0100] 实例
[0101] 实例1
[0102] 在本实例中，稳定的二氧化氯（SCD）和过氧化物（HP）用于棋盘式测定（checkerboard assay）以确定其相互作用是否针对短乳杆菌（Lactobacillus brevis）（发酵工艺中的常见污染物）具有协同性。使用棋盘式测定方法来分析以渐增的浓度将它们混合的化合物之间的相互作用，以确定所述化合物是否协同地、叠加性或反协同地作用。（参见，M.Najjar，D.Kashtanov，M.Chikindas，Letters in Applied Microbiology，第45卷，（2007）13-18）。在32℃下将短乳杆菌（L.brevis）在MRS液体培养基（deMan Rogosa and Sharp broth,Difco Laboratories,Inc.,Sparks,MD）中过夜培养。然后将培养物稀释并且重悬浮于调节至pH4.8的新鲜MRS液体培养基中，然后加入（150μl）96孔平板的孔内（Becton,Dickinson and Co.,Franklin Lakes,NJ）。然后以下文“棋盘式”平板图中示出的浓度加入SCD（ 发酵添加剂，E.I.du Pont de Nemours and Co.,Wilmington
DE）和过氧化氢（30%，VWR International LLC,West Chester,PA）。将所述平板封盖并且在
32℃下孵育28小时。在孵育后，移除平板并且使用酶标仪在630nm下确定各孔的光密度。根据光密度，对各孔计分以确定是否存在抑制（NI）、部分抑制（PI）或完全抑制（CI）。
DE）和过氧化氢（30%，VWR International LLC,West Chester,PA）。将所述平板封盖并且在
32℃下孵育28小时。在孵育后，移除平板并且使用酶标仪在630nm下确定各孔的光密度。根据光密度，对各孔计分以确定是否存在抑制（NI）、部分抑制（PI）或完全抑制（CI）。
[0103] 表1：用于确定短乳杆菌对于用在pH4.8下的MRS液体培养基中的SCD和过氧化氢进行处理的反应的棋盘式测定。
[0104]
[0105] 为确定在SCD和过氧化氢之间是否发生了任何协同活性，如上文使用以下公式确定了抑制浓度比值（FIC）：
[0106] FIC=[SCD]/MICSCD+[HP]/MICHP。
[0107] 其中
[0108] [SCD]=提供部分抑制（PI）的SCD浓度
[0109] [HP]=提供部分抑制（PI）的HP浓度
[0110] MICSCD=提供完全抑制的SCD浓度
[0111] MICHP=提供完全抑制的HP浓度
[0112] 对于上文的棋盘式测定，确定FIC为0.35，这表明SCD和过氧化氢之间针对短乳杆菌的相互作用的协同效应。因此，实例1展示出过氧化氢和SCD的组合将能够降低在发酵工艺中使细菌失活所需的SCD剂量。
[0113] 实例2
[0114] 在本实例中，从商业乙醇工厂在液化步骤后立即获得玉米醪。将所述醪冷却至室温，然后如实例1中所述用短乳杆菌培养物对其接种。用SCD、HP以及两者的组合对50ml份接种玉米醪进行如下处理：
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