技术领域
[0001] 本
发明涉及一种草鱼生态饲料，具体地，涉及一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料及其制备方法。
背景技术
[0002] 草鱼是我国四大家鱼之首，人工养殖区域主要分布于华南、华中、华东和西南地区，是我国重要大宗
淡水养殖品种之一。据2014中国渔业统计年鉴，草鱼养殖产量为约507万吨，在
淡水鱼类养殖产量中稳居第一。
[0003] 随着全价配合饲料技术的发展与升级，草鱼养殖周期内已经完全实现了全程饲料投喂，而且在不同养殖阶段内，不同营养档次的饲料产品非常丰富。然而，不同的饲料产品或不同营养档次的饲料产品对草鱼
健康状态却存在不同的影响。
[0004] 草鱼消化道是饲料收纳、消化、吸收和排泄的重要场所，其健康程度直接影响饲料的转化率和鱼体体质健康等。
发明内容
[0005] 在第一方面，本发明提供一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料。
[0006] 一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料，包括以下重量份的组分：鸡肉粉10-17份、鱿鱼膏1-3份、
发酵豆粕12-22份、菜粕20-35份、膨化
棉粕5-12份、干
酒糟及其可溶物(DDGS)5-15份、小麦8-18份、酱
油渣1-4份、豆油1-2份、
磷酸二氢
钙1-3份、氯化胆
碱0.1-0.2份、多维预混料0.15-0.2份、多矿预混料0.15-0.2份、毒素
吸附剂0.15-0.2份、面粉4-8份、乳酸菌发酵产物复合物0.1-0.5份、肠绒毛组织修复激活剂1-3份。
[0007] 优选的，一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料，包括以下重量份的组分：鸡肉粉15份、鱿鱼膏2份、发酵豆粕20份、菜粕30份、膨化棉粕10份、
干酒糟及其可溶物(DDGS)5份、小麦8份、酱油渣1份、豆油1份、磷酸二氢钙1.7份、氯化胆碱0.2份、多维预混料0.2份、多矿预混料0.2份、毒素吸附剂0.2份、面粉4份、乳酸菌发酵产物复合物0.5份、肠绒毛组织修复激活剂1份。
[0008] 优选的，一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料，包括以下重量份的组分：鸡肉粉13份、鱿鱼膏3份、发酵豆粕18份、菜粕35份、膨化棉粕7份、
干酒糟及其可溶物(DDGS)4份、小麦8份、酱油渣1份、豆油1份、磷酸二氢钙1.7份、氯化胆碱0.2份、多维预混料0.2份、多矿预混料0.2份、毒素吸附剂0.2份、面粉4份、乳酸菌发酵产物复合物0.3份、肠绒毛组织修复激活剂
1.2份。
[0009] 优选的，上述乳酸菌发酵产物复合物包含以下重量份组分：乳酪链球菌发酵产物40-45份，乳酸明串珠菌发酵产物30-35份，双歧杆菌发酵产物20-25份。
[0010] 进一步优选的，上述乳酸菌发酵产物复合物包含以下重量份组分：乳酪链球菌发酵产物45份，乳酸明串珠菌发酵产物35份，双歧杆菌发酵产物20份。
[0011] 进一步优选的，上述乳酸菌发酵产物复合物通过包括以下步骤的方法制备得到：分别将乳酪链球菌、乳酸明串珠菌和双歧杆菌接种于乳酸菌营养培养基中进行30-35℃厌
氧发酵，例如，35℃厌氧发酵24小时，离心收集发酵液后浓缩至原体积的5-15％，将三种活性乳酸菌发酵产物按比例混合，再将混合后的发酵产物与玉米芯粉按2-4：1的体积
质量比混合。
[0012] 优选的，所述乳酸菌营养培养基可以为市售的乳酸菌营养培养基，例如(MRS培养基)。
[0013] 优选的，所述肠绒毛组织修复激活剂包含以下重量份组分：
柠檬酸1-3份、紫薯粉2-5份、南瓜肉粉3-5份、桑叶15-25份、山药提取物20-25份、土茯苓提取物20-35份、赤芍提取物12-15份。
[0014] 进一步优选的，所述肠绒毛组织修复激活剂包含以下重量份组分：柠檬酸3份、紫薯粉5份、南瓜肉粉5份、桑叶15份、山药提取物25份、土茯苓提取物35份、赤芍提取物12份。
[0015] 进一步优选的，所述南瓜肉粉是南瓜肉的干燥微粉，优选新鲜的南瓜肉的干燥后
粉碎粉末，例如将南瓜肉37℃恒温烘干至水分为5-8％后粉碎得到的粉末。具体地，在一个优选的
实施例中，制备所述南瓜肉粉的步骤包括：将鲜摘南瓜去皮去籽后得到南瓜肉，将南瓜肉37℃恒温烘干至水分为5-8％，过80目粉碎机进行粉碎，获得的微粉即为南瓜肉粉。
[0016] 进一步优选的，所述山药提取物是山药的乙醚提取物，具体地，利用乙醚对粉碎后的山药进行热回流提取后蒸干干燥得到的提取物。
[0017] 进一步优选的，所述山药提取物通过包括以下步骤的方法制备得到：将山药粉碎后加入8-12倍体积的乙醚，热回流提取，3-6次，例如5次，每次1-3小时，例如2.5小时，合并提取液，过滤，减压浓缩，70℃以下蒸干获得浸膏，例如55℃，将浸膏经低温低压抽干
蒸汽处理得到水份含量为3-5％的粉末，即为山药提取物。
[0018] 进一步优选的，所述山药提取物通过包括以下步骤的方法制备得到：将山药粉碎后过80目筛网制成山药粉，加入10倍体积乙醚，热回流提取5次，每次2.5小时，合并提取液、过滤、减压浓缩，55℃恒温蒸干获得浸膏，将浸膏经低温低压抽干蒸汽处理形成水份为3-5％固态粉末，所获得的固态粉末即为山药提取物。
[0019] 进一步优选的，所述土茯苓提取物是通过将土茯苓乙醚提取后的残渣采用正丁醇提取后的蒸干提取物。
[0020] 进一步优选的，所述土茯苓提取物通过包括以下步骤的方法制备得到：按1:8-10的重量体积比向土茯苓中加入乙醚，加热回流，滤过，滤液蒸干，向残渣中加水溶解，再用正丁醇提取1-3次，合并提取液，用水洗涤2-4次，蒸干，获得的物质即为土茯苓提取物。
[0021] 进一步优选的，土茯苓提取物通过包括以下步骤的方法制备得到：按重量体积比1:10向土茯苓中加入乙醚，在旋转蒸馏仪中加热回流45min，滤过，滤液蒸干，按照土茯苓：
水的重量体积比1:20加水溶解，用正丁醇提取2次，合并提取液，用水洗涤3次，蒸干，获得的物质即为土茯苓提取物。
[0022] 进一步优选的，上述赤芍提取物通过将赤芍的无水
乙醇提取物后的残渣，采用氯仿提取后的蒸干提取物得到。
[0023] 进一步优选的，赤芍提取物通过包括以下步骤的方法制备得到：按重量体积比1:8-10向赤芍中加入无水乙醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用氯仿提取1-3次，合并提取液，萃取分离2-4次，蒸干，获得的物质即为赤芍提取物。
[0024] 进一步优选的，所述赤芍提取物通过包括以下步骤的方法制备得到：按重量体积比1:8向赤芍中加入无水乙醇，在旋转蒸馏仪中加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣按照赤芍：水的重量体积比1:18加水溶解，再用氯仿提取2次，合并提取液，萃取分离3次，蒸干，获得的物质即为赤芍提取物。
[0025] 优选的，所述多维预混料可以为市售的常用多维预混料，例如海因特淡水鱼多维预混料。
[0026] 优选的，所述多矿预混料可以为市售的常用多矿预混料，例如海因特淡水鱼多矿预混料。
[0027] 优选的，所述毒素吸附剂可以为常用的毒素吸附剂，例如脱霉蒙脱石。
[0028]
申请人经过多年对草鱼消化道组织形态的检测发现，对于全程饲料投喂的草鱼特别是二龄草鱼，当日均投饵率超过3％时，草鱼中后肠段肠绒毛出现不同程度的萎缩或发育不良的现象，其发生概率高达45％。这种现象的持续存在对摄入饵料在肠道消化产生不良影响，容易引起饲料在未完全消化吸收的情况下随着在消化的迁移而外排，不仅容易造成饵料系数虚高，也容易虚增单斤草鱼养殖饲料使用成本，同时受损的肠绒毛位点极易引起草鱼继发性肠炎的发生。因此，持续修复草鱼受损肠绒毛或促进肠绒毛生长发育可以有效的提升草鱼的饲料转化率，降低饵料系数，降低继发性肠炎发生
风险，特别是当草鱼进入高投饵率阶段时，效果更加显著。
[0029] 本发明提供这样的一种可以有效修复草鱼肠绒毛的生态饲料，通过修复草鱼肠绒毛，可以有效提高草鱼的饲料转化率，降低饵料系数，并且降低草鱼肠炎发生率。
[0030] 在第二方面，本发明提供一种上述修复草鱼肠绒毛的生态饲料的制备方法。
[0031] 一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料的方法，将所述饲料包含的组分粉碎、混合得到。
[0032] 优选的，一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料的方法，将所述饲料包含的组分粉碎、混合，再
挤压切割后得到。
[0033] 与
现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0034] 1、本发明的饲料配方通过优化的蛋白含量和脂类含量配比，添加的乳酸菌发酵产物复合物由多种活性乳酸菌的发酵物复合而成，为肠绒毛生长发育提供必要的微量元素和多种活性因子，对草鱼肠绒毛上皮细胞具有良好的生长调节作用，还可促进上皮细胞受损后的自主补位修复，增强肠绒毛上皮细胞之间的紧密连接；
[0035] 2、本发明饲料中添加的肠绒毛组织修复激活剂，富含多种活性
氨基酸和活性多糖类物质，还含有少量肠组织受损后修复所必需的酶原激活因子和细胞分化促进因子，可强
力修复草鱼肠绒毛萎缩或生长不良比较严重的组织位点，不仅可维持肠绒毛结构稳定，还可以促进肠绒毛生长发育，提高饵料转化吸收效率；
[0036] 3、本发明通过乳酸菌发酵产物复合物和肠绒毛组织修复激活剂的协同作用，对草鱼肠绒毛的修复具有意料不到的效果，继而对草鱼的生长、饲料转化率、肠炎发病率方面具有突出的有益的影响。
具体实施方式
[0037] 以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
[0038] 实施例1：
[0039] 一种修复草鱼肠绒毛的生态饲料，按重量份计，组成成分如下：鸡肉粉15份、鱿鱼膏2份、发酵豆粕20份、菜粕30份、膨化棉粕10份、干酒糟及其可溶物(DDGS)5份、小麦8份、酱油渣1份、豆油1份、磷酸二氢钙1.7份、氯化胆碱0.2份、多维预混料0.2份、多矿预混料0.2份、毒素吸附剂脱霉蒙脱石0.2份、面粉4份、乳酸菌发酵产物复合物0.5份、肠绒毛组织修复激活剂1份。将所述饲料包含的组分粉碎、混合，挤压切割后得到。
[0040] 其中，乳酸菌发酵产物复合物的组分为：乳酪链球菌发酵产物45份，乳酸明串珠菌发酵产物35份，双歧杆菌发酵产物20份，该发酵产物复合物的制备方法为：分别将乳酪链球菌、乳酸明串珠菌和双歧杆菌接种于乳酸菌营养培养基中进行35℃厌氧发酵24小时，离心收集发酵液后浓缩至原体积的10％，将三种活性乳酸菌发酵产物按比例混合，再将混合后的发酵产物与玉米芯粉按2：1的体积质量比混合。
[0041] 其中，肠绒毛组织修复激活剂的组分为：柠檬酸3份、紫薯粉5份、南瓜肉粉5份、桑叶15份、山药提取物25份、土茯苓提取物35份、赤芍提取物12份。其中，南瓜肉粉的制备为：将鲜摘南瓜去皮去籽后得到南瓜肉，将南瓜肉37℃恒温烘干至水分为5-8％，过80目粉碎机进行粉碎，获得的粉末即为南瓜肉粉。其中，山药提取物的制备方法如下：将山药粉碎后过
80目筛网制成山药粉，加入10倍体积乙醚，热回流提取5次，每次2.5小时，合并提取液、过滤、减压浓缩，55℃恒温蒸干获得浸膏，将浸膏经低温低压抽干蒸汽处理形成水份为3-5％固态粉末，所获得的固态粉末即为山药提取物；其中，土茯苓提取物的制备方法如下：按重量体积比1:10向土茯苓中加入乙醚，在旋转蒸馏仪中加热回流45min，滤过，滤液蒸干，按照土茯苓：水的重量体积比1:20加水溶解，用正丁醇提取2次，合并提取液，用水洗涤3次，蒸干，获得的物质即为土茯苓提取物；其中，赤芍提取物的制备方法如下：按重量体积比1:8向赤芍中加入无水乙醇，在旋转蒸馏仪中加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣按照赤芍：水的重量体积比1:18加水溶解，再用氯仿提取2次，合并提取液，萃取分离3次，蒸干，获得的物质即为赤芍提取物。
[0042] 实例2
[0043] 一种草鱼肠绒毛促生长型的生态饲料，按重量份计，组成成分如下：鸡肉粉13份、鱿鱼膏3份、发酵豆粕18份、菜粕35份、膨化棉粕7份、干酒糟及其可溶物(DDGS)4份、小麦8份、酱油渣1份、豆油1份、磷酸二氢钙1.7份、氯化胆碱0.2份、多维预混料0.2份、多矿预混料0.2份、毒素吸附剂0.2份、面粉4份、乳酸菌发酵产物复合物0.3份、肠绒毛组织修复激活剂
1.2份。将所述饲料包含的组分粉碎、混合，可选地挤压切割后得到。
[0044] 其中，乳酸菌发酵产物复合物的组分为：乳酪链球菌发酵产物40份，乳酸明串珠菌发酵产物35份，双歧杆菌发酵产物25份，该发酵产物复合物的制备方法为：分别将乳酪链球菌、乳酸明串珠菌和双歧杆菌接种于乳酸菌营养培养基中进行35℃厌氧发酵，离心收集发酵液后浓缩至原体积的15％，将三种活性乳酸菌发酵产物按比例混合，再将混合后的发酵产物与玉米芯粉按4：1的体积质量比混合。
[0045] 其中，肠绒毛组织修复激活剂的组分为：柠檬酸3份、紫薯粉5份、南瓜肉粉5份、桑叶20份、山药提取物20份、土茯苓提取物32份、赤芍提取物15份。其中，南瓜肉粉、山药提取物、土茯苓提取物、赤芍提取物的制备如实施例1所述。
[0046] 试验例1
[0047] 采用实施例1、实施例2制备的生态饲料以及从市场上购买的相同营养档次的草鱼颗粒饲料进行草鱼投喂试验，分别编号为1组、2组及对照组。从3000尾暂养的健康草鱼中随机挑选1800尾，草鱼平均为100g±5g，饲料全部按2.5％日均投饵率进行配料。
[0048] 从市场上购买的相同营养档次的草鱼颗粒饲料其营养组成为：
粗蛋白28％、脂肪6％、粗
纤维18％、赖氨酸2.5％、钙0.5-4％、粗灰分12％。
[0049] 对1组、2组、对照组的草鱼进行肠绒毛组织形分析、肠绒毛长度测定以及杯状细胞数量测定。
[0050] 肠绒毛组织形分析：分别在试验第30、60天对各个组的草鱼进行随机
采样，每组采集草鱼5尾，均通过解剖后分别取中肠样品，将中肠组织经过固定、放入全自动切片机，经浸蜡、包埋、脱水、
染色、脱水、透明和封片步骤后完成
组织切片的制作，在
显微镜中观察不同组草鱼中肠组织形态，分析比较肠绒毛完整性、肠绒毛上皮细胞、杯状细胞和乳糜淋巴管的形态完整性。
[0051] 肠绒毛长度测定：通过IPP6.0
软件对不同组肠组织样品的绒毛长度进行测定，并通过SPSS15软件进行差异显著性分析。
[0052] 杯状细胞数量测定：通过IPP6.0软件对不同组肠组织绒毛杯状细胞进行计数。
[0053] 分析及测定结果如下：
[0054] (1)肠绒毛组织形态分析
[0055] 观察分析可知，试验第0天时，1组、2组、对照组的草鱼中肠组织形态完整性良好，中肠绒毛局部出现上皮细胞脱落的现象，未发现
炎症细胞浸润，未发现游离红细胞浸润。整体分析1组、2组、对照组的草鱼中肠组织形态符合正常
组织学范畴。
[0056] 试验第30天时，1组、2组的草鱼中肠组织形态完整性良好，中肠绒毛局部上皮细胞脱落的现象获得显著的改善，无任何可见炎性病变或出血性病变，符合正常组织学范畴。对照组草鱼中肠组织出现明显的绒毛末端脱落，中间乳糜管局部结构受损，肠壁肌层出现局部溶解性
坏死，由此推断，对照组草鱼出现以局部性的绒毛坏死病变，伴随明显的机能衰退过程。
[0057] 试验第60天时，1组、2组草鱼中肠组织形态完整性良好，中肠绒毛局部上皮细胞脱落的现象获得显著的改善，无任何可见炎性病变或出血性病变，符合正常组织学范畴。对组草鱼中肠组织出现明显的绒毛末端脱落，中间乳糜管局部结构受损，肠壁肌层出现局部溶解性坏死，由此推断，对照组草鱼出现以局部性的绒毛坏死病变，伴随明显的机能衰退过程。
[0058] (2)肠绒毛长度测定结果
[0059] 在不同时间时，对三组的中肠绒毛长度进行测定，结果如表1所示。
[0060] 表1：
[0061]
[0062]
[0063] 从上表可以看出，试验第0天时，三个试验组草鱼中肠组织肠绒毛长度差异不显著(p>0.05)；随着投喂时间延长至30天时，1组和2组的草鱼中肠绒毛长度显著高于对照组(p<0.05)；当投喂时间延长至60天时，1组和2组的草鱼中肠绒毛长度仍然显著高于对照组(p<
0.05)。由此可见，投喂本发明饲料均可显著的提升草鱼肠绒毛长度，增加草鱼中肠消化吸收
接触表面积，促进消化机能的增强。
[0064] (3)肠绒毛杯状细胞计数结果
[0065] 杯状细胞是肠绒毛重要组成分之一，其数量的多少与肠绒毛的健康程度密切相关，与鱼体消化机能的强弱也密切相关。因此，杯状细胞的数量一定程度上反映出了肠绒毛的健康程度。从不同时间
节点采集的草鱼中肠组织绒毛两侧杯状细胞数量结果如表2所示。
[0066] 表2:
[0067]
[0068] 从表2可以看出，试验第0天时，三个试验组草鱼中肠组织肠绒毛两侧杯状细胞数量差异不显著(p>0.05)；随着投喂时间延长至30天时，1组和2组的草鱼中肠绒毛两侧杯状细胞数量显著高于对照组(p<0.05)；当投喂时间延长至60天时，1组和2组的草鱼中肠绒毛两侧杯状细胞数量仍然显著高于对照组(p<0.05)。由此可见，投喂本发明饲料均可显著的促进草鱼肠绒毛两侧杯状细胞的增殖分化，增加草鱼中肠消化吸收机能。
[0069] 试验例2对生长性能相关指标的影响
[0070] 采用实施例1、实施例2制备的生态饲料以及从市场上购买的相同营养档次的草鱼颗粒饲料进行草鱼投喂试验，分别编号为1组、2组及对照组。从3000尾暂养的健康草鱼中随机挑选1800尾，草鱼平均为100g±5g，饲料全部按2.5％日均投饵率进行配料。
[0071] 从市场上购买的相同营养档次的草鱼颗粒饲料其营养组成为：粗蛋白28％、脂肪6％、粗纤维18％、赖氨酸2.5％、钙0.5-4％、粗灰分12％。
[0072] 试验周期内，分别在试验第0、61天时对各组草鱼进行称重，结合投喂饲料的净重量，依照以下公式计算各组草鱼饵料系数、增重率，结果如表3所示。
[0073] 饵料系数＝总投喂饲料重量(kg)/草鱼试验期间净增重(kg)
[0074] 增重率＝(试验末期草鱼重量(kg)-试验初期草鱼重量(kg))/60天
[0075] 表3：
[0076]组别 饵料系数 增重率
1组 1.23±0.01a 10.32±0.02b
2组 1.22±0.01a 10.33±0.03b
对照组 1.41±0.01b 9.23±0.01a
[0077] 从表3结果可知，试验周期内，1组和2组的饵料系数和增重率显著高于对照组(p<0.05)。由此可见，与普通草鱼饲料相比，投喂本发明实施例1、实施例2制备的生态饲料可以有效的降低草鱼饵料系数，提高草鱼增重率。
[0078] 试验例3
[0079] 采用实施例1、实施例2制备的生态饲料以及从市场上购买的相同营养档次的草鱼颗粒饲料进行草鱼投喂试验，分别编号为1组、2组及对照组。从3000尾暂养的健康草鱼中随机挑选1800尾，草鱼平均为100g±5g，饲料全部按2.5％日均投饵率进行配料。
[0080] 从市场上购买的相同营养档次的草鱼颗粒饲料其标签组分组成为：粗蛋白28％、脂肪6％、粗纤维18％、赖氨酸2.5％、钙0.5-4％、粗灰分12％。
[0081] 在试验周期内，持续观察和打捞各个试验组发病濒死草鱼，根据发病草鱼发病症状、病原鉴定结果，统计不同试验组间草鱼的存活率和肠炎死亡率，结果如表4所示。
[0082] 表4
[0083]组别 成活率 总体死亡率 肠炎死亡率
1组 100％ 0 0
2组 100％ 0 0
对照组 91％ 4％ 3％
[0084] 从表4的结果可知，连续60天，1组和2组草鱼均出现零发病零死亡，而对照组草鱼死亡率4％，归类于肠炎死亡的比率为3％。由此可见，与普通草鱼饲料相比，投喂本发明实施例1、实施例2制备的生态饲料可以有效的降低草鱼肠炎的死亡率。
[0085] 综合上述试验结果可知，与对照组相比，1组和2组可以显著的提升草鱼中肠绒毛长度、增加肠绒毛两侧杯状细胞数量具有显著的效果，同时对于维持中肠组织形态的完整性也有稳定的效果，也有利于降低肠炎发病风险。相比于市售同档次商品饲料的使用效果，本发明制备的生态饲料对草鱼肠绒毛具有显著的修复效果和肠炎发生
预防效果，也可显著的降低饵料系数和提高增重率。
[0086] 以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉
本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
