针对TNF和IL-17的双特异性免疫结合剂
专利汇可以提供针对TNF和IL-17的双特异性免疫结合剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供工程改造的多价和多特异性结合蛋白、制备方法以及具体来说它们用于 预防 、诊断和/或 治疗 疾病 的用途。，下面是针对TNF和IL-17的双特异性免疫结合剂专利的具体信息内容。
1.一种包含多肽链的结合蛋白，其中所述多肽链包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：
VD1是第一重链可变结构域；
VD2是第二重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
X1是接头，前提是所述X1不是CH1；
X2是Fc区；
(X1)n，其中n是0或1；
(X2)n，其中n是0或1；且
其中
(a)VD1或VD2包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、
606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、
763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)VD1和VD2独立地包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、581、
591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、
741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807或809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)VD1包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807或809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且VD2包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或
811；或
(d)VD2包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807或809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且VD1包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或
811。
2.如权利要求1所述的结合蛋白，其中
(a)VD1或 VD2包 含 SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、
626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、
786、791、796、801、805、807或809，或36-41、88-97或48-72中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)VD1和VD2独立地包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、
621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、
781、786、791、796、801、805、807或809，或36-41、88-97或48-72中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)VD1包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、
636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、
796、801、805、807或809，或36-41、88-97或48-72中的任一者，且VD2包含SEQ ID NO:30、
32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、
593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、
743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811；或
(d)VD2包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、
636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、
796、801、805、807或809，或36-41、88-97或48-72中的任一者，且VD1包含SEQ ID NO:30、
32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、
593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、
743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811。
3.一种包含多肽链的结合蛋白，其中所述多肽链包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中：
VD1是第一轻链可变结构域；
VD2是第二轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
X1是接头，前提是所述X1不是CL；
X2不包含Fc区；
(X1)n，其中n是0或1；
(X2)n，其中n是0或1；且
其中
(a)VD1或VD2包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、
658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)VD1和VD2独立地包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、
596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768， 或 42-47、73-87 或
98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)VD1包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且VD2包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812；
(d)VD2包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且VD1包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812。
4.如权利要求3所述的结合蛋白，其中
(a)VD1或 VD2包 含 SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、
696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)VD1和VD2独立地包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、
686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)VD1包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、
716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且VD2包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、548、558、568、578、588、598、646、
656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或812；或
(d)VD2包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、
716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且VD1包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、548、558、568、578、588、598、646、
656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或812。
5.如权利要求1或3所述的结合蛋白，其中(X1)n是0和/或(X2)n是0。
6.一种包含第一多肽链和第二多肽链的结合蛋白，其中所述第一多肽链包含第一
VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中
VD1是第一重链可变结构域；
VD2是第二重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
X1是第一接头；
X2是Fc区；
(X1)n，其中n是0或1；
(X2)n，其中n是0或1；且
其中所述第二多肽链包含第二VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中
VD1是第一轻链可变结构域；
VD2是第二轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
X1是第二接头；
X2不包含Fc区；
(X1)n，其中n是0或1；
(X2)n，其中n是0或1；且
其中所述第一X1接头与所述第二X1接头相同或不同；
其中所述第一X1接头不是CH1和/或所述第二X1接头不是CL，且
其中
(a)所述VD1重链可变结构域或所述VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：
SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、
661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、
807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域或所述VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、
676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)所述VD1重链可变结构域和所述VD2重链可变结构域独立地包含三个来自以下
的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、
653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、
805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域和所述VD2轻链可变结构域独立地包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、
648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)所述VD1重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、
581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、
731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、
108、109、110、111、112、113、114、115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、
608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、
761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD1轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、
736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、
548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或
812；或
(d)所述VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、
581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、
731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD1重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、
108、109、110、111、112、113、114、115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、
608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、
761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、
736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD1轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、
548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或
812。
7.如权利要求6所述的结合蛋白，其中
(a)所述VD1重链可变结构域或所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、
561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、
711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域或所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID
NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、
768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)所述VD1重链可变结构域和所述VD2重链可变结构域独立地包含SEQ ID NO:541、
551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、
701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、
48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域和所述VD2轻链可变结构域独立地包含 SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、
746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)所述VD1重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD1轻链可变结构域包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812；或
(d)所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD1重链可变结构域包含SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD1轻链可变结构域包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812。
8.如权利要求1、3或6所述的结合蛋白，其中X1和/或X2是SEQ ID NO1-29中的任
一者。
9.如权利要求6所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两条第一多肽链和两条第二
多肽链。
10.如权利要求1、3或6所述的结合蛋白，其中所述Fc区是变异序列Fc区。
11.如权利要求1、3或6所述的结合蛋白，其中所述Fc区是来自IgG1、IgG2、IgG3、
IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的Fc区。
12.如权利要求6所述的结合蛋白，其中所述第一多肽链的所述VD1和所述第二多肽链
的所述VD1是分别获自相同的第一亲本抗体和第二亲本抗体或其抗原结合部分。
13.如权利要求6所述的结合蛋白，其中所述第一多肽链的所述VD1和所述第二多肽链
的所述VD1是分别获自不同的第一亲本抗体和第二亲本抗体或其抗原结合部分。
14.如权利要求6所述的结合蛋白，其中所述第一多肽链的所述VD2和所述第二多肽链
的所述VD2是分别获自相同的第一亲本抗体和第二亲本抗体或其抗原结合部分。
15.如权利要求6所述的结合蛋白，其中所述第一多肽链的所述VD2和所述第二多肽链
的所述VD2是分别获自不同的第一亲本抗体和第二亲本抗体或其抗原结合部分。
16.如权利要求13或15所述的结合蛋白，其中所述第一亲本抗体和所述第二亲本抗体
结合抗原上的不同表位。
17.如权利要求12至16中任一项所述的结合蛋白，其中所述第一亲本抗体或其抗原结
合部分结合第一抗原的效能不同于所述第二亲本抗体或其抗原结合部分结合第二抗原的效能。
18.如权利要求12至16中任一项所述的结合蛋白，其中所述第一亲本抗体或其抗原结
合部分结合第一抗原的亲和力不同于所述第二亲本抗体或其抗原结合部分结合第二抗原的亲和力。
19.一种能够结合两个抗原的结合蛋白，所述结合蛋白包含四条多肽链，其中两条多肽链包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中
VD1是第一重链可变结构域；
VD2是第二重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
X1是第一接头；
X2是Fc区；且
其中两条多肽链包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中
VD1是第一轻链可变结构域；
VD2是第二轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
X1是第二接头；
X2不包含Fc区；
(X1)n，其中n是0或1；且
(X2)n，其中n是0或1；
其中所述第一X1接头与所述第二X1接头相同或不同；
其中所述第一X1接头不是CH1和/或所述第二X1接头不是CL；
其中
(a)所述VD1重链可变结构域或所述VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：
SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、
661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、
807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域或所述VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、
676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)所述VD1重链可变结构域和所述VD2重链可变结构域独立地包含三个来自以下
的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、
653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、
805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域和所述VD2轻链可变结构域独立地包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、
648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)所述VD1重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、
581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、
731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、
108、109、110、111、112、113、114、115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、
608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、
761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD1轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、
736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、
548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或
812；或
(d)所述VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、
581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、
731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD1重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、
108、109、110、111、112、113、114、115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、
608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、
761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、
736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD1轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、
548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或
812。
20.一种能够结合两个抗原的结合蛋白，所述结合蛋白包含四条多肽链，其中两条多肽链包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中
VD1是第一重链可变结构域；
VD2是第二重链可变结构域；
C是重链恒定结构域；
X1是第一接头；
X2是Fc区；
(X1)n，其中n是0或1；
(X2)n，其中n是0或1；且
其中两条多肽链包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中
VD1是第一轻链可变结构域；
VD2是第二轻链可变结构域；
C是轻链恒定结构域；
X1是第二接头；
X2不包含Fc区；
(X1)n，其中n是0或1；
(X2)n，其中n是0或1；且
其中所述第一X1接头与所述第二X1接头相同或不同；
其中所述第一X1接头不是CH1和/或所述第二X1接头不是CL
其中
(a)所述VD1重链可变结构域或所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、
561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、
711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域或所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID
NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、
768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)所述VD1重链可变结构域和所述VD2重链可变结构域独立地包含SEQ ID NO:541、
551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、
701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、
48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域和所述VD2轻链可变结构域独立地包含 SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、
746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)所述VD1重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD1轻链可变结构域包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812；或
(d)所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD1重链可变结构域包含SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD1轻链可变结构域包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812。
21.如权利要求1、3、6、19或20所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白与一种或多种靶标
2 -1 -1 3 -1 -1 4 -1 -1 5 -1 -1
的缔合速率常数(Kon)是至少约10M s 、至少约10M s 、至少约10M s 、至少约10M s 、
6 -1 -1
或至少约10M s ，如通过表面等离子体共振所测量。
22.如权利要求1、3、6、19或20所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白与一种或多种靶标-3 -1 -4 -1 -5 -1 -6 -1
的解离速率常数(Koff)是至多约10 s 、至多约10 s 、至多约10 s 、或至多约10 s ，如通过表面等离子体共振所测量。
23.如权利要求1、3、6、19或20所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白与一种或多种靶标-7 -8 -9 -10 -11
的解离常数(KD)是至多约10 M、至多约10 M、至多约10 M、至多约10 M、至多约10 M、至-12 -13
多约10 M、或至多10 M。
24.一种结合蛋白缀合物，其包含如权利要求1、3、6、19或20所述的结合蛋白，所述结合蛋白缀合物进一步包含药剂，其中所述药剂是免疫粘附分子、显影剂、治疗剂或细胞毒性剂。
25.如权利要求24所述的结合蛋白缀合物，其中所述显影剂是放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记或生物素。
26.如权利要求1、3、6、19或20所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白是结晶的结合蛋
白。
27.一种分离的核酸，所述核酸编码如权利要求1、3、6、19或20所述的结合蛋白氨基酸序列。
28.一种载体，所述载体包含如权利要求27所述的分离的核酸。
29.如权利要求28所述的载体，其中所述载体是pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV、pcDNA3.1TOPO、pEF6TOPO、pHybE、pBOS-hCγ1或pBJ。
30.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求28所述的载体。
31.如权利要求30所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。
32.如权利要求30所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
33.如权利要求32所述的宿主细胞，其中所述真核细胞是原生生物细胞、动物细胞、植物细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、禽类细胞、昆虫细胞或真菌细胞。
34.一种产生结合蛋白的方法，所述方法包括在足以产生所述结合蛋白的条件下在培
养基中培养如权利要求30至33中任一项中所述的宿主细胞。
35.一种蛋白质，所述蛋白质是由如权利要求34所述的方法产生。
36.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1、3、6、19、20或35所述的结合蛋白和药学上可接受的载剂。
37.如权利要求36所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含至少一种其它治疗
剂。
38.如权利要求37所述的药物组合物，其中所述其它治疗剂是显影剂、细胞毒性剂、
血管生成抑制剂、激酶抑制剂、协同刺激分子阻断剂、粘附分子阻断剂、抗细胞因子抗体或其功能片段、甲氨蝶呤(methotrexate)、环孢灵(cyclosporin)、雷帕霉素(rapamycin)、FK506、可检测标记或报道体、TNF拮抗剂、抗风湿药、肌肉松弛剂、麻醉药(narcotic)、非类固醇消炎药(NSAID)、止痛剂、麻醉剂(anesthetic)、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻断剂、抗微生物剂、抗牛皮癣药、皮质类固醇、合成代谢类固醇(anabolic steroid)、红细胞生成素(erythropoietin)、免疫剂、免疫球蛋白、免疫抑止剂、生长激素、激素替代药物、放射性医药剂、抗抑郁剂、抗精神病药、兴奋剂、哮喘药物、β促效剂、吸入型类固醇、肾上腺素或类似物、细胞因子或细胞因子拮抗剂。
39.如权利要求1、3、6、19、20或35所述的结合蛋白，所述结合蛋白是用于通过向受试者施用所述结合蛋白以便达成治疗来治疗所述受试者的疾病或病症。
40.如权利要求39所述的结合蛋白，其中所述病症是自体免疫性和发炎性病症、哮喘、类风湿性关节炎、僵直性脊椎炎、牛皮癣性关节炎、椎关节强硬性关节病变、牛皮癣、胃肠病症、发炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Chrohn’s disease)、葡萄膜炎和全身性红斑狼疮。
41.如权利要求40所述的结合蛋白，其中向所述受试者的所述施药是胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内(intracelial)、小脑内、脑室内、结肠内、子宫颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊椎内、滑膜内、胸腔内、子宫内、膀胱内、快速注射、经阴道、经直肠、经颊、舌下、鼻内或透皮施药。
42.一种用于产生能够结合两个抗原的结合蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
a)获得能够结合第一抗原的第一亲本抗体或其抗原结合部分；
b)获得能够结合第二抗原的第二亲本抗体或其抗原结合部分；
c)构建如权利要求1、3、6、19或20中任一项所述的多肽；
d)表达所述多肽链；
以使得产生能够结合所述第一抗原和所述第二抗原的结合蛋白。
43.如权利要求42所述的方法，其中
(a)所述VD1重链可变结构域或所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、
561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、
711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域或所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID
NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、
768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(b)所述VD1重链可变结构域和所述VD2重链可变结构域独立地包含SEQ ID NO:541、
551、561、571、581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、
701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、
48-72或88-97中的任一者，所述VD1轻链可变结构域和所述VD2轻链可变结构域独立地包含 SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、
746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
(c)所述VD1重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD1轻链可变结构域包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812；
(d)所述VD2重链可变结构域包含SEQ ID NO:541、551、561、571、581、591、601、606、
611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、
771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且所述VD1重链可变结构域包含SEQ ID NO:30、32、34、108、109、110、111、112、113、114、115、
121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、
651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803或811；所述VD2轻链可变结构域包含SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、
666、676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述VD1轻链可变结构域包含SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766或812。
44.如权利要求42所述的方法，其中所述Fc区是变异序列Fc区。
45.如权利要求42所述的方法，其中所述Fc区是来自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、
IgM、IgE或IgD的Fc区。
46.如权利要求42所述的方法，其中所述第一亲本抗体或其抗原结合部分(如果存
在)结合所述第一抗原的亲和力和/或效能不同于所述第二亲本抗体或其抗原结合部分
(如果存在)结合所述第二抗原的亲和力和/或效能。
47.一种通过免疫测定法测定试样中至少一种抗原或其片段的存在的方法，
其中所述免疫测定法包括使所述试样与至少一种结合蛋白和至少一种可检测标记接
触，其中所述至少一种结合蛋白包括如权利要求1、3、9、19、20或35所述的结合蛋白。
48.如权利要求48所述的方法，所述方法进一步包括：
(i)使所述试样与所述至少一种结合蛋白接触，其中所述结合蛋白结合于所述抗原或
其片段上的表位以形成第一复合物；
(ii)使所述复合物与所述至少一种可检测标记接触，其中所述可检测标记结合于所述
结合蛋白或所述抗原或其片段上未由所述结合蛋白结合的表位以形成第二复合物；以及(iii)基于由所述第二复合物中的所述可检测标记产生的信号来检测所述试样中所述
抗原或其片段的存在，其中所述抗原或其片段的存在与由所述可检测标记产生的所述信号成正相关。
49.如权利要求49所述的方法，所述方法进一步包括：
(i)使所述试样与所述至少一种结合蛋白接触，其中所述结合蛋白结合于所述抗原或
其片段上的表位以形成第一复合物；
(ii)使所述复合物与所述至少一种可检测标记接触，其中所述可检测标记与所述抗原
或其片段竞争结合于所述结合蛋白以形成第二复合物；以及
(iii)基于由所述第二复合物中的所述可检测标记产生的信号来检测所述试样中所述
抗原或其片段的存在，其中所述抗原或其片段的存在与由所述可检测标记产生的所述信号成反相关。
50.如权利要求48至50中任一项所述的方法，其中所述试样是来自患者且所述方法进
一步包括诊断、预测或评估所述患者的治疗性/防治性治疗的效率，且
其中如果所述方法进一步包括评估所述患者的治疗性/防治性治疗的功效，那么所述
方法任选进一步包括按照需要修改所述患者的所述治疗性/防治性治疗以提高功效。
51.如权利要求48至51中任一项所述的方法，其中所述方法适合于在自动系统或半自
动系统中使用。
52.如权利要求48至52中任一项所述的方法，其中所述方法测定所述样本中一种以上
抗原的存在。
53.一种通过免疫测定法测定试样中抗原或其片段的量或浓度的方法，
其中所述免疫测定法(a)采用至少一种结合蛋白和至少一种可检测标记及(b)包括将
由所述可检测标记产生的信号与包含所述抗原或其片段的对照物或校准物进行比较，
其中所述校准物任选是一系列校准物的一部分，其中各校准物就所述抗原或其片段的
浓度而言不同于所述系列中的其它校准物，
其中所述至少一种结合蛋白包括如权利要求1、3、9、19、20或35所述的结合蛋白。
54.如权利要求54所述的方法，所述方法进一步包括：
(i)使所述试样与所述至少一种结合蛋白接触，其中所述结合蛋白结合于所述抗原或
其片段上的表位以形成第一复合物；
(ii)使所述复合物与所述至少一种可检测标记接触，其中所述可检测标记结合于所述
抗原或其片段上未由所述结合蛋白结合的表位以形成第二复合物；以及
(iii)基于由所述第二复合物中的所述可检测标记产生的信号来测定所述试样中所述
抗原或其片段的量或浓度，其中所述抗原或其片段的量或浓度与由所述可检测标记产生的所述信号成正比。
55.如权利要求55所述的方法，所述方法进一步包括：
(i)使所述试样与所述至少一种结合蛋白接触，其中所述结合蛋白结合于所述抗原或
其片段上的表位以形成第一复合物；
(ii)使所述复合物与所述至少一种可检测标记接触，其中所述可检测标记与所述抗原
或其片段竞争结合于所述结合蛋白以形成第二复合物；以及
(iii)基于由所述第二复合物中的所述可检测标记产生的信号来测定所述试样中所述
抗原或其片段的量或浓度，其中所述抗原或其片段的存在与由所述可检测标记产生的所述信号成反比。
56.如权利要求54至56中任一项所述的方法，其中所述试样是来自患者且所述方法进
一步包括诊断、预测或评估所述患者的治疗性/防治性治疗的效率，且
其中如果所述方法进一步包括评估所述患者的治疗性/防治性治疗的功效，那么所述
方法任选进一步包括按照需要修改所述患者的所述治疗性/防治性治疗以提高功效。
57.如权利要求54至57中任一项所述的方法，其中所述方法适合于在自动系统或半自
动系统中使用。
58.如权利要求54至58中任一项所述的方法，其中所述方法测定所述样本中一种以上
抗原的量或浓度。
59.一种用于测定试样中抗原或其片段的存在、量或浓度的试剂盒，所述试剂盒包括
(a)用于测定所述试样中所述抗原或其片段的说明书，和
(b)至少一种结合蛋白，所述结合蛋白包括如权利要求1、3、9、19、20或35所述的结合蛋白。
60.一种包含至少一个重链可变区(VH区)的IL-17结合蛋白，所述重链可变区包含：
(a)三个来自以下的互补决定区(CDR)：SEQ ID NO:30、32、34、108-115、121-317、
527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、
673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者；或
(b)SEQ ID NO:30、32、34、108-115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、
603、608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、
751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者。
61.一种包含至少一个轻链可变区(VL区)的IL-17结合蛋白，所述轻链可变区包含：
(a)三个来自以下的互补决定区(CDR)：SEQ ID NO:31、33、35、116-120、318-526、
535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、
756、766和812中的任一者；或
(b)SEQ ID NO:31、33、35、116-120、318-526、535-539、548、558、568、578、588、598、
646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766和812中的任一者。
62.一种包含至少一个重链可变区(VH区)和至少一个轻链可变区(VL区)的IL-17
结合蛋白，其中所述VH区包含：
(a)三个来自以下的互补决定区(CDR)：SEQ ID NO:30、32、34、108-115、121-317、
527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、
673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者；或
(b)SEQ ID NO:30、32、34、108-115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、
603、608、613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、
751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者；且
所述VL区包含：
(c)三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116-120、318-526、535-539、548、558、
568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766和812中的任一者；或
(d)SEQ ID NO:31、33、35、116-120、318-526、535-539、548、558、568、578、588、598、
646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766和812中的任一者。
63.如权利要求62所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两个VH区和两个VL区。
64.如权利要求62所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含含有选自由以下组成的组
的一组氨基酸序列的至少一个VH区和至少一个VL区：SEQ ID NO:30和31；32和33；34和
35；108和118；108和119；109和116；110和117；111和120；112和117；113和120；114和117；115和117；527和537；527和538；528和535；529和536；530和539；531和536；
532和539；533和536；以及534和536。
65.如权利要求63所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白：
(a)调节IL-17的生物功能；
(b)中和IL-17；
(c)减弱IL-17结合它的受体的能力；
(d)减弱前人IL-17、成熟人IL-17或截短人IL-17结合它的受体的能力；和/或
(e)降低以下一者或多者：IL-17依赖性细胞因子产生、IL-17依赖性细胞杀伤、IL-17
依赖性发炎、IL-17依赖性骨侵蚀和IL-17依赖性软骨损伤。
66.如权利要求63所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有的缔合速率常数(Kon)为
2 -1 -1 3 -1 -1 4 -1 -1 5 -1 -1 6 -1 -1
至少约10M s ；至少约10M s ；至少约10M s ；至少约10M s ；或至少约10M s ，如
通过表面等离子体共振所测量。
67.如权利要求63所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有的解离速率常数(Koff)为
-3 -1 -4 -1 -5 -6 -1
至多约10 s ；至多约10 s ；至多约10 s-1；或至多约10 s ，如通过表面等离子体共振所测量。
68.如权利要求63所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有的解离常数(KD)为至多
-7 -8 -9 -10 -11 -12
约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；或至多
-13
10 M。
69.一种能够结合人IL-17的结合蛋白，所述结合蛋白包含：
(a)重链恒定区；
(b)轻链恒定区；
(c)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的重链可变区(VH区)：SEQ ID NO:30、32、
34、108-115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、613、618、623、628、
633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、
793、798、803和811；以及
(d)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的轻链可变区(VL区)：SEQ ID NO:31、33、
35、116-120、318-526、535-539、548、558、568、578、588、598、646、656、668、678、688、698、
708、718、728、738、748、756、766和812。
70.如权利要求62所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括免疫球蛋白分子、Fv、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合结合蛋白、单结构域结合蛋白、CDR移植结合蛋白、双功能抗体、人源化结合蛋白、多特异性结合蛋白、Fab、双重特异性结合蛋白、Fab’片段、双特TM
异性结合蛋白、F(ab’)2片段、DVD-Ig 、包含由在铰链区的二硫桥键连接的两个Fab片段的二价片段、由VH结构域和CH1结构域组成的Fd片段、由抗体的单个臂的VL结构域和VH结构域组成的Fv片段、dAb片段、分离的互补决定区(CDR)或单链结合蛋白。
71.如权利要求63所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白缀合于选自由放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素组成的组的显影剂。
72.如权利要求63所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白进一步包含选自由抗代
谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环霉素(anthracycline)、毒素和细胞凋亡剂组成的组的治疗剂或细胞毒性剂。
73.一种分离的核酸，所述核酸编码包含如权利要求62所述的氨基酸序列的结合蛋
白。
74.一种载体，所述载体包含如权利要求73所述的分离的核酸。
75.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求74所述的载体。
76.一种用于产生结合IL-17的蛋白质的方法，所述方法包括在足以产生结合IL-17的
结合蛋白的条件下在培养基中培养如权利要求75所述的宿主细胞的步骤。
77.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求62所述的结合蛋白和药学上可
接受的载剂。
78.一种用于治疗哺乳动物的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的如权
利要求77所述的药物组合物。
79.一种用于降低人IL-17活性的方法，所述方法包括使人IL-17与如权利要求62所
述的结合蛋白接触以使人IL-17活性降低。
80.一种用于降低罹患IL-17活性有害的病症的人受试者体内的人IL-17活性的方法，
所述方法包括向所述人受试者施用如权利要求62所述的结合蛋白以使所述人受试者体内的人IL-17活性降低和/或达成治疗。
81.一种用于治疗罹患IL-17有害的病症的患者的方法，所述方法包括在向所述
患者施用第二药剂之前、同时或之后向所述患者施用如权利要求62所述的结合蛋白，
其中所述第二药剂选自由以下组成的组：布替耐德(budenoside)；表皮生长因子；皮
质类固醇；环孢灵；柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)；氨基水杨酸盐；6-巯基嘌呤；硫唑嘌呤(azathioprine)；甲硝哒唑(metronidazole)；脂肪加氧酶抑制剂；美色拉嗪
(mesalamine)；奥色拉嗪(olsalazine)；巴柳氮(balsalazide)；抗氧化剂；血栓素
(thromboxane)抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1βmAb；抗IL-6或IL-6受体mAb；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-23、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF的抗体或促效剂；
CD2、CD3、CD4、CD8、CD-19、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或它们的配体的抗体；
甲氨蝶呤；环孢灵；FK506；雷帕霉素；霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil)；来氟米特(leflunomide)；NSAID；布洛芬(ibuprofen)；皮质类固醇；泼尼松龙(prednisolone)；
磷酸二酯酶抑制剂；腺苷促效剂；抗血栓剂；补体抑制剂；肾上腺素能药剂；IRAK、NIK、IKK、p38、MAP激酶抑制剂；IL-1β转化酶抑制剂；TNFα转化酶抑制剂；T细胞信号传导抑制剂；
金属蛋白酶抑制剂；柳氮磺胺吡啶；硫唑嘌呤；6-巯基嘌呤；血管收缩素转化酶抑制剂；可溶性细胞因子受体；可溶性p55TNF受体；可溶性p75TNF受体；sIL-1RI；sIL-1RII；sIL-6R；
消炎细胞因子；IL-4；IL-10；IL-11；IL-13；或TGFβ。
82.如权利要求80或81所述的方法，其中所述病症是自体免疫性和/或发炎性病症。
83.如权利要求82所述的方法，其中所述病症选自由自体免疫性和发炎性病症、哮喘、类风湿性关节炎、僵直性脊椎炎、牛皮癣性关节炎、椎关节强硬性关节病变、牛皮癣、胃肠病症、发炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、葡萄膜炎和全身性红斑狼疮组成的组。
84.如权利要求82所述的方法，其中所述病症选自由以下组成的组：免疫和发炎性疾
病、自体免疫性疾病、发炎、克罗恩氏病、牛皮癣(包括斑块牛皮癣)、关节炎(包括类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、骨关节炎或青少年特发性关节炎)、多发性硬化症、僵直性脊椎炎、椎关节强硬性关节病变、全身性红斑狼疮、葡萄膜炎、多发性硬化症、败血症和神经退化性疾病、神经元再生、脊髓损伤、原发性和转移性癌症、呼吸道病症；哮喘；过敏性和非过敏性哮喘；由于感染所致的哮喘；由于感染呼吸道融合性病毒(respiratory syncytial virus，RSV)所致的哮喘；慢性阻塞性肺病(COPD)；涉及气管发炎的病状；嗜酸性粒细胞增多症；纤维化和过量粘液产生；囊肿性纤维化；肺纤维化；异位性病症；异位性皮炎；荨麻疹；湿疹；过敏性鼻炎；过敏性肠胃炎；发炎性和/或自体免疫性皮肤病状；发炎性和/或自体免疫性胃肠器官病状；发炎性肠病(IBD)；溃疡性结肠炎；发炎性和/或自体免疫性肝脏病状；肝硬化；肝纤维化；由乙型和/或丙型肝炎病毒引起的肝纤维化；硬皮病；肿瘤或癌症；肝细胞癌；成胶质细胞瘤；淋巴瘤；霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)；病毒感染；
细菌感染；寄生虫感染；HTLV-1感染；1型保护性免疫反应的表达的抑止以及在疫苗接种期间1型保护性免疫反应的表达的抑止。
85.一种用于通过免疫测定法测定试样中IL-17或其片段的存在的方法，其中所述免
疫测定法包括使所述试样与至少一种如权利要求62所述的结合蛋白或其片段以及至少一种可检测标记接触。
86.如权利要求85所述的方法，其中所述方法进一步包括：
(i)使所述试样与所述至少一种结合蛋白或其片段接触，其中所述结合蛋白结合于所
述IL-17或其片段上的表位以形成第一复合物；
(ii)使所述复合物与所述至少一种可检测标记接触，其中所述可检测标记结合于所述
第一复合物上或所述IL-17或其片段上未由所述结合蛋白或其片段结合的表位以形成第二复合物；以及
(iii)基于由所述第二复合物中的所述可检测标记产生的信号来检测所述试样中所述
IL-17或其片段的存在，其中所述IL-17或其片段的存在与由所述可检测标记产生的所述信号成正相关。
87.如权利要求85所述的方法，其中所述方法进一步包括：
(i)使所述试样与所述至少一种结合蛋白或其片段接触，其中所述结合蛋白或其片段
结合于所述IL-17或其片段上的表位以形成第一复合物；
(ii)使所述复合物与所述至少一种可检测标记接触，其中所述可检测标记与所述
IL-17或其片段竞争结合于所述结合蛋白或其片段以形成第二复合物；以及
(iii)基于由所述第二复合物中的所述可检测标记产生的信号来检测所述试样中所述
IL-17或其片段的存在，其中所述IL-17或其片段的存在与由所述可检测标记产生的所述信号成反相关。
88.如权利要求85所述的方法，其中所述方法任选进一步包括诊断、预测或评估所述
患者的治疗性/防治性治疗的效率。
针对TNF和IL-17的双特异性免疫结合剂
片段形成独立折叠实体。多种接头可用于连接两个scFv片段且接头具有多达63个残基的长度(参见Nakanishi等(2001)Ann.Rev.Immunol.19:423-74)。尽管亲本scFv片段可通
常以可溶形式于细菌中表达，然而常观察到串联scFv分子在细菌中形成不溶性聚集体。因此，再折叠方案或使用哺乳动物表达系统常规用于产生可溶性串联scFv分子。Gracie等(1999)J.Clin.Invest.104(10):1393-401报道由转基因兔和牛体内表达针对CD28和黑素瘤相关蛋白多糖的串联scFv。在这个构建体中，两个scFv分子是通过CH1接头连接且获得双特异性抗体多达100mg/L的血清浓度。包括结构域次序变化或使用具有不同长度或可挠性的中间接头的多种策略用于允许于细菌中进行可溶性表达。少许研究已报道使用极短Ala3接头或富含甘氨酸/丝氨酸的长接头于细菌中表达可溶性串联scFv分子(参见Leung等(2000)J.Immunol.164(12):6495-502；Ito等(2003)J.Immunol.170(9):4802-9；Karni等(2002)J.Neuroimmunol.125(1-2):134-40)。在另一研究中，含有长度是3或6个残基的随机化中间接头的串联scFv谱系的噬菌体展示用于增浓以可溶性和活性形式于细菌中产生的那些分子。这个方法导致分离具有6氨基酸残基接头的串联scFv分子(参见Arndt
和Krauss(2003)Methods Mol.Biol.207:305-21)。不清楚这个接头序列是否代表可溶性表达串联scFv分子的一般解决方案。然而，这项研究说明串联scFv分子的噬菌体展示与定向突变诱发组合是增浓可以活性形式于细菌中表达的这些分子的强力工具。
细胞内表达具有结构VHA-VLB和VHB-VLA(VH-VL构型)或VLA-VHB和VLB-VHA(VL-VH构
型)的两条多肽链来产生。过去已产生多种不同双特异性双功能抗体且其中大多数可以可溶形式于细菌中表达。然而，比较研究说明可变结构域的取向可影响活性结合位点的表达和形成(参见Mack等(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA92(15):7021-5)。然而，于细菌中可溶性表达表示优于串联scFv分子的重要优势。然而，因为两条不同多肽链是在单一细胞内表达，所以可产生非活性均二聚体以及活性杂二聚体。这使得必须实施另外的纯化步骤以获得均质双特异性双功能抗体制剂。促使产生双特异性双功能抗体的一种方法是产生钮入孔(knob-into-hole)双功能抗体(参见Holliger等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.
USA90(14):6444-8.18)。这个方法已关于针对HER2和CD3的双特异性双功能抗体加以证实。在抗HER2或抗CD3可变结构域中，通过Val37与Phe交换以及Leu45与Trp交换在VH
结构域中引入大钮且通过使Phe98突变成Met且使Tyr87突变成Ala而在VL结构域中产
生互补孔。通过使用这个方法，双特异性双功能抗体的产生可自72％(通过亲本双功能抗体)增加至90％以上(通过钮入孔双功能抗体)。重要的是，由于这些突变，生产产率仅略微降低。然而，观察到若干所分析构建体的抗原结合活性降低。因此，这个相对精巧的方法需要分析多种构建体以鉴定产生结合活性未改变的杂二聚分子的那些突变。另外，所述方法需要在恒定区对免疫球蛋白序列进行突变修饰，由此产生非原生和非天然形式的抗体序列，其可导致免疫原性增加、体内稳定性不良、以及不合需要的药物动力学。
Immunotechnol.3(2):83-105；Ridgway等(1996)Protein Engin.9(7):617-21)。因此，单链双功能抗体组合串联scFv(所有单体都具有双特异性)与双功能抗体(于细菌中可溶性表达)的优势。
合蛋白中的VD1和VD2是重链可变结构域。在另一实施方案中，重链可变结构域是鼠类
重链可变结构域、人重链可变结构域、CDR移植重链可变结构域或人源化重链可变结构域。在另一实施方案中，VD1和VD2能够结合相同抗原。在另一实施方案中，VD1和VD2
能够结合不同抗原。在另一实施方案中，C是重链恒定结构域。在一实施方案中，X1是接头，前提是所述X1不是CH1。在一实施方案中，X1是包含以下氨基酸序列的接头：
AKTTPKLEEGEFSEAR(SEQ ID NO:1)；AKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:2)；AKTTPKLGG(SEQ ID NO:3)；SAKTTPKLGG(SEQ ID NO:4)；SAKTTP(SEQ ID NO:5)；RADAAP(SEQ ID NO:6)；
RADAAPTVS(SEQ ID NO:7)；RADAAAAGGPGS(SEQ ID NO:8)；RADAAAA(G4S)4(SEQ ID NO:9)；
SAKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:10)；ADAAP(SEQ ID NO:11)；ADAAPTVSIFPP(SEQ ID NO:12)；TVAAP(SEQ ID NO:13)；TVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:14)；QPKAAP(SEQ ID NO:15)；
QPKAAPSVTLFPP(SEQ ID NO:16)；AKTTPP(SEQ ID NO:17)；AKTTPPSVTPLAP(SEQ ID NO:18)；
AKTTAP(SEQ ID NO:19)；AKTTAPSVYPLAP(SEQ ID NO:20)；ASTKGP (SEQ ID NO:21)；
ASTKGPSVFPLAP(SEQ ID NO:22),GGGGS GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:23)；GENKVEYAPALMALS(SEQ ID NO:24)；GPAKELTPLKEAKVS(SEQ ID NO:25)；或GHEAA AVMQVQYPAS(SEQ ID NO:26)；
TVAAPSVFIFPPTVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:27)；和 ASTKGPSVFPLAPASTKGPSVFPLAP(SEQ ID NO:28)。在一实施方案中，X2是Fc区。在另一实施方案中，X2是变异Fc区。
RADAAPTVS(SEQ ID NO:7)；RADAAAAGGPGS(SEQ ID NO:8)；RADAAAA(G4S)4(SEQ ID NO:9)；
SAKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:10)；ADAAP(SEQ ID NO:11)；ADAAPTVSIFPP(SEQ ID NO:12)；TVAAP(SEQ ID NO:13)；TVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:14)；QPKAAP(SEQ ID NO:15)；
QPKAAPSVTLFPP(SEQ ID NO:16)；AKTTPP(SEQ ID NO:17)；AKTTPPSVTPLAP(SEQ ID NO:18)；
AKTTAP(SEQ ID NO:19)；AKTTAPSVYPLAP(SEQ ID NO:20)；ASTKGP(SEQ ID NO:21)；
ASTKGPSVFPLAP(SEQ ID NO:22),GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:23)；GENKVEYAPA LMALS(SEQ ID NO:24)；GPAKELTPLKEAKVS(SEQ ID NO:25)；或 GHEAAAVMQVQYPAS(SEQ ID NO:26)；
TVAAPSVFIFPP TVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:27)；和ASTKGPSVFPLAPASTKGP SVFPLAP(SEQ ID NO:28)。在一实施方案中，结合蛋白不包含X2。
在一些实施方案中，第二X1不是CL结构域。
716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；
661、671、681、691、701、711、721、731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、
807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，VD1轻链可变结构域和VD2轻链可变结构域独立地包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、
676、686、696、706、716、726、736、746、758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且所述结合蛋白能够结合TNF；或
731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、108、
109、110、111、112、113、114115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、
613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、
773、778、783、788、793、798、803或811；VD1轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、
758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、548、558、568、578、
588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或812；或[0030] (d)VD2重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:541、551、561、571、
581、591、601、606、611、616、621、626、631、636、643、653、661、671、681、691、701、711、721、
731、741、753、763、771、776、781、786、791、796、801、805、807、809，或36-41、48-72或88-97中的任一者，且VD1重链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:30、32、34、108、
109、110、111、112、113、114、115、121-317、527-534、543、553、563、573、583、593、603、608、
613、618、623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、
773、778、783、788、793、798、803或811；VD2轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:546、556、566、576、586、596、648、658、666、676、686、696、706、716、726、736、746、
758、768，或42-47、73-87或98-107中的任一者，且VD1轻链可变结构域包含三个来自以下的CDR：SEQ ID NO:31、33、35、116、117、118、119、120、318-526、535-539、548、558、568、578、
588、598、646、656、668、678、688、698、708、718、728、738、748、756、766或812。
的Fc区、来自IgM的Fc区、来自IgE的Fc区或来自IgD的Fc区。
结合部分；b)获得结合IL-17的第二亲本抗体或其抗原结合部分；c)构建包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n的第一多肽链和第三多肽链，其中，VD1是所述第一亲本抗体或其抗原结合部分的第一重链可变结构域；VD2是所述第二亲本抗体或其抗原结合部分的第二重链可变结构域，所述第二亲本抗体可与所述第一亲本抗体相同或不同；C是重链恒定结构域；(X1)n是第一接头，其中所述(X1)n存在或不存在；且(X2)n是Fc区，其中所述(X2)n存在或
不存在；d)构建包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n的第二多肽链和第四多肽链，其中，VD1是所述第一亲本抗体或其抗原结合部分的第一轻链可变结构域；VD2是所述第二亲本抗体或其抗原结合部分的第二轻链可变结构域；C是轻链恒定结构域；(X1)n是第二接头，其中所述(X1)n存在或不存在；且(X2)n不包含Fc区，其中所述(X2)n存在或不存在；e)表达所述第一多肽链、所述第二多肽链、所述第三多肽链和所述第四多肽链；以使得产生结合第一抗原和第二抗原的结合蛋白。在一些实施方案中，第一X1与第二X1相同。在其它实施方案中，第一X1与第二X1不同。在一些实施方案中，第一X1不是CH1结构域。在一些实施方案中，第二X1不是CL结构域。
述结合蛋白展现的所需性质的第二亲本抗体或其抗原结合部分；c)构建包含VD1-(X1)
n-VD2-C-(X2)n的第一多肽链和第三多肽链，其中，VD1是获自所述第一亲本抗体或其抗原结合部分的第一重链可变结构域；VD2是获自所述第二亲本抗体或其抗原结合部分的第二重链可变结构域，所述第二亲本抗体可与所述第一亲本抗体相同或不同；C是重链恒定结构域；(X1)n是第一接头，其中所述(X1)n存在或不存在；且(X2)n是Fc区，其中所述(X2)n存在或不存在；d)构建包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n的第二多肽链和第四多肽链，其中，VD1是获自所述第一亲本抗体或其抗原结合部分的第一轻链可变结构域；VD2是获自所述第二亲本抗体或其抗原结合部分的第二轻链可变结构域；C是轻链恒定结构域；(X1)n是第二接头，其中所述(X1)n存在或不存在；且(X2)n不包含Fc区，其中所述(X2)n存在或不存在；e)表达所述第一多肽链、所述第二多肽链、所述第三多肽链和所述第四多肽链；以使得产生具有所需性质的能够结合第一抗原和第二抗原的双重可变结构域免疫球蛋白。在一些实施方案中，第一X1与第二X1相同。在其它实施方案中，第一X1与第二X1不同。在一些实施方案中，第一X1不是CH1结构域。在一些实施方案中，第二X1不是CL结构域。
dAb片段；分离的互补决定区(CDR)；单链抗体；或双功能抗体。
673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者；或
743、751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者。
756、766和812中的任一者；或
673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者；或
743、751、761、773、778、783、788、793、798、803和811中的任一者；且
536；以及534和536。
至少约10M s ；至少约10M s ；至少约10M s ；或至少约10M s ，如通过表面等离子体共振所测量。
至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；或至多10 M。
623、628、633、638、641、651、663、673、683、693、703、713、723、733、743、751、761、773、778、
783、788、793、798、803和811；以及
688、698、708、718、728、738、748、756、766和812。
10M s 、至少约10M s 、至少约10M s 、至少约10M s 、或至少约10M s ，如通过表面等离子体共振所测量。在一实施方案中，结合蛋白与一种或多种靶标的缔合速率常数(Kon)
2 -1 -1 3 -1 -1 3 -1 -1 4 -1 -1 4 -1 -1
介于约10M s 与约10M s 之间、介于约10M s 与约10M s 之间、介于约10M s 与
5 -1 -1 5 -1 -1 6 -1 -1
约10M s 之间、或介于约10M s 与约10M s 之间，如通过表面等离子体共振所测量。
量。在一实施方案中，结合蛋白与一种或多种靶标的解离速率常数(Koff)是约10 s 至约-4 -1 -4 -1 -5 -1 -5 -1 -6 -1
10 s 、约10 s 至约10 s 、或约10 s 至约10 s ，如通过表面等离子体共振所测量。
10 M、至多约10 M、至多约10 M、至多约10 M、至多约10 M、至多约10 M、或至多10 M。
-7 -8 -8
在一实施方案中，结合蛋白与它的靶标的解离常数(KD)是约10 M至约10 M、约10 M至约-9 -9 -10 -10 -11 -11 -12 -12 -13
10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、或约10 M至约10 M。
案中，放射性标记是：H、C、S、Y、Tc、In、 I、I、 Lu、Ho或 Sm。在另一实施方案中，治疗剂或细胞毒性剂是抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环霉素(anthracycline)、毒素或细胞凋亡剂。
pBOS-hCγ1、pHybE或pBJ。在一实施方案中，载体是美国专利公布号20090239259中所公开的载体。
烯]、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、顺丁烯二酸酐-烷基乙烯基醚共聚物、普洛尼克多元醇(pluronic polyols)、白蛋白、海藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原蛋白、血纤维蛋白、明胶、玻尿酸、寡糖、葡糖胺聚糖、硫酸化多糖、或其掺合物和共聚物。举例来说，成分可为白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟丙基-β-环糊精、甲氧基聚乙二醇或聚乙二醇。另一实施方案提供一种治疗哺乳动物的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的本文公开的组合物的步骤。
发炎性和/或自体免疫性胃肠器官病状；发炎性肠病(IBD)；溃疡性结肠炎；克罗恩氏病；
发炎性和/或自体免疫性肝脏病状；肝硬化；肝纤维化；由乙型和/或丙型肝炎病毒引
起的肝纤维化；硬皮病；肿瘤或癌症；肝细胞癌；成胶质细胞瘤；淋巴瘤；霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)；病毒感染；细菌感染；寄生虫感染；HTLV-1感染；1型保护性免疫反应的表达的抑止以及在疫苗接种期间1型保护性免疫反应的表达的抑止。
(olsalazine)；巴柳氮(balsalazide)；抗氧化剂；血栓素(thromboxane)抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1βmAb；抗IL-6或IL-6受体mAb；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-23、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF的抗体或促效剂；CD2、CD3、CD4、CD8、CD-19、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或它们的配体的抗体；甲氨蝶呤；环孢灵；FK506；
雷帕霉素；霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil)；来氟米特(leflunomide)；NSAID；
布洛芬(ibuprofen)；皮质类固醇；泼尼松龙(prednisolone)；磷酸二酯酶抑制剂；腺苷促效剂；抗血栓剂；补体抑制剂；肾上腺素能药剂；IRAK、NIK、IKK、p38、MAP激酶抑制剂；
IL-1β转化酶抑制剂；TNFα转化酶抑制剂；T细胞信号传导抑制剂；金属蛋白酶抑制剂；
柳氮磺胺吡啶；硫唑嘌呤；6-巯基嘌呤；血管收缩素转化酶抑制剂；可溶性细胞因子受体；可溶性p55TNF受体；可溶性p75TNF受体；sIL-1RI；sIL-1RII；sIL-6R；消炎细胞因子；IL-4；IL-10；IL-11；IL-13；或TGFβ。在一特定实施方案中，本文公开的药物组合物是通过胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内(intracelial)、小脑内、脑室内、结肠内、子宫颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊椎内、滑膜内、胸腔内、子宫内、膀胱内、快速注射、经阴道、经直肠、经颊、舌下、鼻内或透皮施药施用至患者。还提供至少一种针对至少一种结合蛋白的抗个体基因型抗体。抗个体基因型抗体包括含有包含免疫球蛋白分子的至少一部分的分子的任何蛋白质或肽，所述至少一部分是如但不限于可并入本文提供的结合蛋白中的重链或轻链的至少一个互补决定区(CDR)或其配体结合部分、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架区或其任何部分。
至少一种结合蛋白中的一者包括本文公开的结合蛋白，如DVD结合蛋白。方法可包括(i)使试样与至少一种捕集剂接触，所述捕集剂结合于抗原(或其片段)上的表位以形成捕集剂/抗原(或其片段)复合物，(ii)使所述捕集剂/抗原(或其片段)复合物与至少一种
检测剂接触，所述检测剂包含可检测标记且结合于抗原(或其片段)上未由捕集剂结合的表位，以形成捕集剂/抗原(或其片段)/检测剂复合物，以及(iii)基于由(ii)中所形成的捕集剂/抗原(或其片段)/检测剂复合物中的可检测标记产生的信号来测定抗原(或
其片段)在试样中的存在、量或浓度，其中至少一种捕集剂和/或至少一种检测剂是至少一种结合蛋白。
样中的任何抗原(或其片段)竞争结合于至少一种捕集剂，其中存在于试样中的任何抗原(或其片段)与可检测标记的抗原彼此竞争以分别形成捕集剂/抗原(或其片段)复合物
和捕集剂/可检测标记的抗原(或其片段)复合物，以及(ii)基于由(ii)中所形成的捕
集剂/可检测标记的抗原(或其片段)复合物中的可检测标记产生的信号来测定抗原(或
其片段)在试样中的存在、量或浓度，其中至少一种捕集剂是至少一种结合蛋白且其中由捕集剂/可检测标记的抗原(或其片段)复合物中的可检测标记产生的信号与抗原(或其
片段)在试样中的量或浓度成反比。
FcRn结合(Kim等(1994)Eur.J.Immunol.24:542-548)。破坏CH3结构域二聚化的突变对于其FcRn结合可能不具有更大不利影响，因为对于CH3二聚化重要的残基位于CH3b片状结构的内部界面上，而负责FcRn结合的区域位于CH2-CH3结构域的外部界面上。然而，半Ig分子可由于其尺寸小于规则抗体而在组织渗透方面具有某些优势。在一个实施方案中，置换本文提供的结合蛋白的恒定区(例如Fc区)中的至少一个氨基酸残基，以便破坏重链的二聚化，从而产生半DVD结合蛋白分子。IgG的消炎活性取决于IgG Fc片段的N连接聚糖的唾液酸化。已确定消炎活性的精确聚糖需求，以使得可产生适当IgG1Fc片段，由此产生具有极大增强效能的完全重组唾液酸化IgG1Fc(Anthony等(2008)Science320:373-376)。
(1989)Nature341:544-546；PCT公布号WO90/05144)；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。
此外，尽管Fv片段的两个结构域(VL和VH)由独立基因编码，但它们可使用重组方法由
合成接头接合，所述接头能够使它们制成其中VL和VH区配对形成单价分子的单一蛋白
质链(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等(1988)Science242:423-426；和Huston等
(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883)。所述单链抗体也意图涵盖于术语抗体的“抗原结合部分”内。也涵盖其它形式的单链抗体，如双功能抗体。双功能抗体是二价双特异性抗体，其中VH和VL结构域表达于单一多肽链上，但使用过短而不允许同一链上的两个结构域之间配对的接头，由此迫使所述结构域与另一链的互补结构域配对且产生两个抗原结合位点(参见例如Holliger等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448；
Poljak等(1994)Structure2:1121-1123)。所述抗体结合部分在本领域中是已知的
(Kontermann和Dubel编，Antibody Engineering(2001)Springer-Verlag.New York.第
790页(ISBN3-540-41354-5))。另外，单链抗体也包括“线性抗体”，其包含与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区的一对串联Fv区段(VH-CH1-VH-CH1)(Zapata等(1995)Protein Eng.8(10):1057-1062；和美国专利号5,641,870)。
如 Holliger 等 (1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448；Poljak 等 (1994)
Structure,2:1121-1123)。
性组合人抗体文库分离的抗体(Hoogenboom H.R.(1997)TIB Tech.15:62-70；Azzazy
H. 和 Highsmith W.E.(2002)Clin.Biochem.35:425-445；Gavilondo J.V. 和 Larrick J.W.(2002)BioTechniques29:128-145；Hoogenboom H. 和 Chames P.(2000)Immunology Today21:371-378)、自转殖人免疫球蛋白基因的动物(例如小鼠)分离的抗体(参
见 Taylor,L.D. 等 (1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295；Kellermann S-A. 和 Green L.L.(2002)Current Opinion in Biotechnology13:593-597；Little M. 等 (2000)
Immunology Today21:364-370)、或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列拼接至其它DNA序列的任何其它方式制备、表达、产生或分离的抗体。所述重组人抗体具有来源于人生殖系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，所述重组人抗体经受体外突变诱发(或当使用人Ig序列转基因动物时，经受体内体细胞突变诱发)，且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是尽管来源于且相关于人生殖系VH和VL序列，但可能不天然存在于体内人抗体生殖系谱系内的序列。
Proc.Nat.Acad.Sci,USA91:3809-3813描述且在选择性突变诱发位置、接触或高突变位置由活性增强氨基酸残基进行的选择性突变如美国专利号6,914,128中所述。
99％一致的CDR。人源化抗体包含实质上所有至少一个且通常两个可变结构域(Fab、Fab’、F(ab’)2、FabC、Fv)，其中所有或实质上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白(即供体抗体)的那些CDR区且所有或实质上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。在一实施方案中，人源化抗体也包含免疫球蛋白Fc区(通常人免疫球蛋白的Fc区)的至少一部分。
在一些实施方案中，人源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域。抗体也可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体仅含有人源化轻链。在一些实施方案中，人源化抗体仅含有人源化重链。在特定实施方案中，人源化抗体仅含有轻链和/或人源化重链的人源化可变结构域。
Ann.NY Acad.Sci.190:382-391；和 Kabat,E.A. 等 (1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版号91-3242)。对于重链可变区，高变区的范围是CDR1的氨基酸位置31至35、CDR2的氨基酸位置50至65以及CDR3的氨基酸位置95至102。对于轻链可变区，高变区的范围
是CDR1的氨基酸位置24至34、CDR2的氨基酸位置50至56以及CDR3的氨基酸位置89至
97。
确边界。由Kabat所述的系统(Kabat等Sequences of Proteins of Immunological
Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987)和 (1991)) 不 仅 提供可应用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，而且也提供界定三个CDR的精确残基边界。这些CDR可称为Kabat CDR。Chothia和同事(Chothia和Lesk(1987)J.Mol.
Biol.196:901-917；Chothia等(1989)Nature342:877-883)发现Kabat CDR内的某些子部分尽管在氨基酸序列层面上具有极大差异，但采用几乎相同的肽骨架构象。这些子部分被指定为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别表示轻链区和重链区。这些区域可称为Chothia CDR，其具有与Kabat CDR重叠的边界。界定与Kabat CDR重叠的CDR的其它边界已由Padlan(1995)FASEB J.9:133-139和MacCallum(1996)J.Mol.Biol.262(5):732-45)描述。其它CDR边界定义可能不严格遵循本文中系统之一，但将仍然与Kabat CDR重叠，但鉴于特定残基或残基群组或甚至整个CDR不会显著影响抗原结合的预测或实验研究结果而可将它们缩短或延长。本文所用的方法可利用根据任何这些系统定义的CDR，但某些实施方案使用Kabat或Chothia定义的CDR。
定法，其可获自Sapidyne Instruments(Boise,Idaho)。
“变体”也可用于描述已经差异性加工(如通过蛋白水解、磷酸化或其它翻译后修饰)，但仍保留它的生物活性或抗原反应性(例如结合IL-18的能力)的多肽或其片段。除非上下文另外相矛盾，否则本文中使用“变体”意图涵盖变体的片段。
RADAAPTVS(SEQ ID NO:7)；RADAAAAGGPGS(SEQ ID NO:8)；RADAAAA(G4S)4(SEQ ID NO:9)；
SAKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:10)；ADAAP(SEQ ID NO:11)；ADAAPTVSIFPP(SEQ ID NO:12)；TVAAP(SEQ ID NO:13)；TVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:14)；QPKAAP(SEQ ID NO:15)；
QPKAAPSVTLFPP(SEQ ID NO:16)；AKTTPP(SEQ ID NO:17)；AKTTPPSVTPLAP(SEQ ID NO:18)；
AKTTAP(SEQ ID NO:19)；AKTTAPSVYPLAP(SEQ ID NO:20)；ASTKGP(SEQ ID NO:21)；
ASTKGPSVFPLAP(SEQ ID NO:22),GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:23)；GENKVEYAPALMALS(SEQ ID NO:24)；GPAKELTPLKEAKVS(SEQ ID NO:25)；GHEAAAVMQVQYPAS(SEQ ID NO:26)；
TVAAPSVFIFPPTVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:27)；和 ASTKGPSVFPLAPASTKGPSVFPLAP(SEQ ID NO:28)。接头序列的选择是基于对若干Fab分子的晶体结构分析。在Fab或抗体分子结
构中的可变结构域与CH1/CL恒定结构域之间存在天然可挠性连接。这个天然连接包含约
10-12个氨基酸残基，其由来自V结构域的C端的4-6个残基和来自CL/CH1结构域的N端
的4-6个残基促成。DVD结合蛋白Ig是使用CL或CH1的N端5-6个氨基酸残基或11-12
个氨基酸残基分别作为DVD结合蛋白的轻链和重链中的接头来产生。CL或CH1结构域的
N端残基，特别是前5-6个氨基酸残基采用不具有强二级结构的环构象，因此可充当两个可变结构域之间的可挠性接头。因为CL或CH1结构域的N端残基是Ig序列的一部分，所以
CL或CH1结构域的N端残基是可变结构域的天然延伸，因此在很大程度上使潜在地由接头和接合产生的任何免疫原性最小化。
方案中，Fc区包括来自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的Fc区。
射性物质的实例包括 H、C、S、Y、Tc、 In、I、 I、Lu、 Ho或 Sm。
大。然而，DVD结合蛋白(一个臂)上的两个结合位点之间的距离要短得多，也在
范围内，从而允许适当连接CTLA-4。
性蛋白/病原体的快速清除。
向内在化受体和细胞内分子)，递送至大脑内部(靶向转铁蛋白受体和CNS疾病介体以
便穿过血脑屏障)。DVD结合蛋白也可充当通过结合抗原的非中和性表位而将所述抗
原递送至特定位置以及增加所述抗原的半衰期的载体蛋白。此外，DVD结合蛋白可被
设计来与植入患者中的医学装置物理连接或靶向这些医学装置(参见Burke等(2006)
Advanced Drug Deliv.Rev.58(3):437-446；Hildebrand等(2006)Surface and Coatings Technol.200(22-23):6318-6324；Drug/device combinations for local drug therapies and infection prophylaxis,Wu(2006)Biomaterials27(11):2450-2467；Mediation of the cytokine network in the implantation of orthopedic devices,Marques(2005)Biodegradable Systems in Tissue Engineer.Regen.Med.377-397)。简要来说，将适当类型的细胞引导至医学植入物的位置可促进正常组织功能治愈和恢复。或者，也提供通过与装置偶联或靶向装置的DVD来抑制在装置植入后释放的介体(包括但不限于细胞因
子)。举例来说，支架多年来已用于介入心脏病学中以清理阻塞的动脉以及改进血液向心肌的流动。然而，已知传统裸金属支架在一些患者中导致再狭窄(在处理的区域中动脉再变窄)且可产生血块。近来，已描述通过捕集在整个血液中循环的内皮祖细胞(EPC)
来减少再狭窄且防止出现血块的用抗CD34抗体涂布的支架。内皮细胞是内衬于血管，
从而允许血液平滑流动的细胞。EPC粘附于支架的硬表面，从而形成平滑层，其不仅促进治愈而且防止先前与使用支架相关的并发症：再狭窄和血块(Aoji等(2005)J.Am.Coll.Cardiol.45(10):1574-9)。除改进需要支架的患者的结果之外，对于需要心血管绕道手术的患者也具有意义。举例来说，用抗EPC抗体涂布的修复血管导管(人工动脉)将消除使用来自患者腿或臂的动脉进行绕道手术移植的需要。这将减少手术和麻醉时间，此又将减少冠状动脉手术死亡。DVD结合蛋白是以使得其结合于细胞表面标记物(如CD34)以及已涂布于植入装置上的蛋白质(或任何种类的表位，包括但不限于蛋白质、脂质和多糖)的方式来设计以有助于细胞募集。所述方法一般也可应用于其它医学植入物。或者，可将DVD结合蛋白涂布于医学装置上且在植入和自装置释放所有DVD(或可能需要其它新鲜DVD结合蛋白的任何其它需要，包括已装载的DVD结合蛋白的老化和变性)后，装置可通过将新鲜DVD结合蛋白全身性施用至患者来重新装载，其中DVD结合蛋白被设计来以一组结合位点结合于目标靶标(细胞因子、细胞表面标记物(如CD34)等)且以另一组结合位点结合于
装置上所涂布的靶标(包括任何种类的蛋白质、表位，包括但不限于脂质、多糖和聚合物)。
这个技术具有扩大涂布的植入物的适用性的优势。
和生长因子)表达于患病关节中。将抗TNF抗体或sTNFR融合蛋白全身性施用至RA小
鼠模型展示具有消炎性且具有关节保护性。RA患者中的TNF活性受静脉内施用的英利
昔单抗(infliximab)(一种嵌合抗TNF mAb)阻断的临床调查研究(Harriman G,Harper
LK,Schaible TF.1999Summary of clinical trials in rheumatoid arthritis using infliximab,an anti-TNFalpha treatment.Ann Rheum Dis58增刊1:I61-4)已提供证据表明TNF调控IL-6、IL-8、MCP-1和VEGF产生、免疫和发炎细胞向关节中的募集、血管生成和血液基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3水平降低。对类风湿性关节炎中的发炎路径的更好了解已导致鉴定类风湿性关节炎中涉及的其它治疗性靶标。如白介素-6拮抗剂(IL-6受体抗体MRA，由Chugai,Roche开发(参见Nishimoto,Norihiro等(2004)Arthritis Rheum.50(6):1761-1769)、CTLA4Ig( 阿 巴 西 普 (abatacept)，Genovese 等 (2005)N.Engl.J.Med.353:1114-23)和抗B细胞疗法(利妥昔单抗(rituximab)，Okamoto和
Kamatani(2004)N.Engl.J.Med.351:1909)的有希望治疗剂在去年已在随机化对照试验中加以测试。已鉴定其它细胞因子且其已在动物模型中显示有益处，包括白介素-15(治疗性抗体HuMax-IL_15、AMG714，参见Baslund等(2005)Arthritis Rheum.52(9):2686-2692)、白介素-17和白介素-18，且这些药剂的临床试验目前正在进行中。组合抗TNF和另一介体的双重特异性抗体疗法具有增强临床功效和/或患者适用范围的巨大潜力。举例来说，阻断TNF与VEGF两者可潜在根除均涉及于RA的病理生理异常中的发炎和血管生成。也涵盖用特异性DVD结合蛋白阻断RA中所涉及的其它靶标对，包括但不限于TNF与IL-18；TNF与IL-12；TNF与IL-23；TNF与IL-1β；TNF与MIF；TNF与IL-17；以及TNF与IL-15。除这些靶标对的常规安全性评估之外，可批准对于免疫抑止程度的特定测试且其有助于选择最佳靶标对(参见Luster等(1994)Toxicology92(1-3):229-43)。可使用临床前动物RA模型(如胶原蛋白诱发的关节炎小鼠模型)来评估DVD结合蛋白分子是否将适用于治疗类风湿性关节炎。其它适用模型也为本领域中所熟知(参见Brand(2005)Comp.Med.55(2):114-22)。基于亲本抗体对于人和小鼠直系同源物(othologue)的交叉反应性(例如对于人和小鼠TNF、人和小鼠IL-15等的反应性)，小鼠CIA模型中的验证研究可用“匹配代用抗体”来源的DVD结合蛋白分子进行；简要来说，基于两个(或更多个)小鼠靶标特异性抗体的DVD结合蛋白可在可能的程度上与用于人DVD结合蛋白构建的亲本人或人源化抗体的特征匹配(类似亲和力、类似中和效能、类似半衰期等)。
分 (Compston 和 Coles(2008)Lancet372:1502-1517；Trapp 和 Nave(2008)Annu.Rev.Neurosci.31:247-269)。数种机制可能解释MS中的轴突破坏。具有相关钙介导的神经毒性的神经递质谷氨酸的过度释放、氧化氮释放和随后轴突破坏、神经营养支持物的丧失、反义或轴突生长抑制分子(如RGM A、NOGO A、臂板蛋白(Semaphorin)、蝶素(Ephrin))的大量积聚可造成轴突引导的神经退化和成功轴突再生的丧失。在单一DVD结合蛋白分子中靶向针对如RGM A、NOGO A、臂板蛋白、蝶素的组分的中和活性与针对如IL-12、TWEAK、IL-23、CXCL13、CD40、CD40L、IL-18、VEGF、VLA-4、TNF、CD45RB、CD200、IFNγ、GM-CSF、FGF、C5、CD52和CCR2的促炎性细胞因子的中和活性将使得能够同时集中于发炎和神经退化，此是通过任何当前治疗MS原则都尚未达成的目标。刺激神经退化可补偿由在MS中所观察到的大量轴突神经退化所引起的功能损伤，从而有可能恢复丧失的大脑功能。
它认知功能。这些初步观察结果表明靶向一个以上疾病介体(例如A-b和促炎性细胞因子(如TNF))的特异性疗法对于慢性神经退化性疾病而言可提供甚至比关于靶向单一疾病机制(例如单独可溶性A-b)所观察到的治疗功效更好的治疗功效。
(例如转铁蛋白受体、胰岛素受体或RAGE)。DVD结合蛋白分子的功效可在临床前动物模型中验证，所述动物模型如过度表达淀粉状蛋白前体蛋白或RAGE且显现阿兹海默氏病
(Alzheimer's disease)样症状的转基因小鼠。另外，DVD结合蛋白分子可被构建并在动物模型中测试功效且可选择最佳治疗性DVD结合蛋白用于在人患者中测试。DVD结合蛋白分子也可用于治疗其它神经退化性疾病，如帕金森氏病(Parkinson's disease)。α-突触核蛋白涉及于帕金森氏病病理中。能够靶向α-突触核蛋白和发炎介体(如TNF、IL-1、MCP-1)的DVD结合蛋白分子可证明是帕金森氏病的有效疗法且也是实施方案。
神经突外生长增强分子(例如Nogo和神经营养因子)的功能，或阻断神经突外生长抑制
分子(例如Nogo)和促炎性分子(例如TNF)可能合乎需要(参见McGee等(2003)Trends
Neurosci.26:193)。
提及的其它分子(例如RGM A、MAG、OMGp)损害轴突再生长。可将所述类型的ab与任何
SCI-候选(髓磷脂-蛋白质)Ab组合。其它DVD结合蛋白靶标可包括以下各者的任何组合：
NgR-p75、NgR-Troy、NgR-Nogo66(Nogo)、NgR-Lingo、Lingo-Troy、Lingo-p75、MAG或Omgp。
另外，靶标也可包括与抑制神经突有关联的任何介体(可溶性介体或细胞表面介体)，例如Nogo、Ompg、MAG、RGM A、臂板蛋白、蝶素、可溶性A-b、促炎性细胞因子(例如IL-1)、趋化因子(例如MIP1a)、抑制神经再生的分子。抗nogo/抗RGM A或类似DVD结合蛋白分子的功
效可在脊髓损伤的临床前动物模型中验证。另外，这些DVD结合蛋白分子可被构建并在动物模型中测试功效且可选择最佳治疗性DVD结合蛋白用于在人患者中测试。另外，可构建DVD结合蛋白分子，其靶向单一受体上的两个不同配体结合位点，所述受体是例如结合三个配体Nogo、OMGp和MAG的Nogo受体和结合A-b和S100A的RAGE。此外，神经突外生长抑
制剂(例如nogo和nogo受体)也在预防免疫疾病(如多发性硬化症)中的神经再生中
起作用。已在多发性硬化症的动物模型中显示抑制nogo-nogo受体相互作用会促进恢复。
因此，可阻断一种免疫介体(例如细胞因子，如IL-12)和神经突外生长抑制剂分子(例如nogo或RGM)的功能的DVD结合蛋白分子可提供比单独阻断免疫或神经突外生长抑制剂分子更快且更大的功效。
结合蛋白、本文提供的组合疗法或组合物。在一特定实施方案中，肌肉内、静脉内、肿瘤内、经口、鼻内、肺部或皮下施用本文提供的防治剂或治疗剂。防治剂或治疗剂可通过任何适宜途径施用，例如通过输注或快速注射，通过经上皮或粘膜皮肤衬层(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，且可与其它生物活性剂一起施用。施药可为全身性或局部施药。
体(参见美国专利号4,980,286)，或通过直接注射，或通过使用微粒轰击(例如基因枪；
Biolistic,Dupont)，或用脂质或细胞表面受体或转染剂包覆，或通过将它与已知会进入核的同源盒样肽(homeobox-like peptide)连接来施用(参见例如Joliot等(1991)Proc.
Natl.Acad.Sci.USA88:1864-1868)。或者，可将核酸以细胞内方式引入且并入宿主细胞DNA内以便通过同源重组表达。
8℃之间储存于它的原始容器中，且本文提供的防治剂或治疗剂或药物组合物可在复原后1周内，例如5天内、72小时内、48小时内、24小时内、12小时内、6小时内、5小时内、3小时内或1小时内施用。在一替代实施方案中，一种或多种本文提供的防治剂或治疗剂或药物组合物是以液体形式提供于指示药剂的量和浓度的密闭容器中。在一实施方案中，液体形式的所施用组合物是以至少0.25mg/ml、至少0.5mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少
5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/kg、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少75mg/ml或至少100mg/ml提供于密闭容器中。液体形式可在2℃与8℃之间储存于它的原始容器中。
1-50mM L-甲硫氨酸(最优5-10mM)。其它适合增积剂包括甘氨酸、精胺酸，可以0-0.05％聚山梨醇酯-80(最优0.005-0.01％)形式包括在内。其它表面活性剂包括但不限于聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性剂。被制成用于胃肠外施用的可注射溶液形式的包含本文提供的结合蛋白的药物组合物可进一步包含适用作佐剂的试剂，如用于增加治疗性蛋白质(例如抗体)的吸收或分散的试剂。特别适用的佐剂是玻尿酸酶，如 (重组人玻尿
酸酶)。在可注射溶液中添加玻尿酸酶会改进胃肠外施药，特别是皮下施药后的人生物可用性。它也允许在较少疼痛和不适下达成较大注射部位体积(即大于1ml)，且使注射部位反应的发生率最小(参见WO2004078140和US2006104968)。
术的方法描述于Ausubel等(编)，Current Protocols in Molecular Biology,John
Wiley&Sons,NY(1993)； 和 Kriegler,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)中。基因疗法的各种方法的详细描述公开于美国专利公布号US20050042664中。
合蛋白/多克隆等)，包括放射性同位素检测(放射免疫测定法(RIA))和酶检测(酶免
疫测定法(EIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)(例如Quantikine ELISA测定法，R&D
Systems,Minneapolis,MN)))、竞争性抑制免疫测定法(例如正向和反向)、荧光偏振免疫测定法(FPIA)、酶倍增免疫测定技术(EMIT)、生物发光共振能量转移(BRET)和均质化学发光测定法等。在基于SELDI的免疫测定法中，将特异性结合目标分析物(或其片段)的捕集试剂连接至质谱分析探针(如预活化蛋白芯片阵列)的表面。随后将分析物(或其片
段)特异性捕集于生物芯片上，且所捕集的分析物(或其片段)通过质谱分析来检测。或者，可将分析物(或其片段)自捕集试剂洗脱且通过传统MALDI(基质辅助激光脱附/离子化)或通过SELDI来检测。化学发光微粒免疫测定法、特别是采用 自动分
析器(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)的化学发光微粒免疫测定法是优选免疫测定法的实例。
多种溶剂和盐以及任选清洁剂，(c)清洁剂，或(d)清洁剂和盐。预处理试剂在本领域
中是已知的，且可例如如Abbott TDx, 和 分析器(Abbott
Laboratories,Abbott Park,IL)上的测定法所用、如文献(参见例如Yatscoff等(1990)Clin.Chem.36:1969-1973；和Wallemacq等(1999)Clin.Chem.45:432-435)中所述和/或如可商购来采用所述预处理。另外，可如美国专利号5,135,875和6,660,843、欧洲专利公布号EU0471293、美国专利申请号20080020401中所述进行预处理。预处理试剂可为异质剂或均质剂。
为放射性标记(如 H、I、S、C、P和 P)、酶标记(如辣根过氧化酶、碱性过氧化酶、
葡萄糖6-磷酸脱氢酶等)、化学发光标记(如吖锭酯、硫酯或磺酰胺；鲁米诺、异鲁米诺(isoluminol)、啡锭酯(phenanthridinium ester)等)、荧光标记(如荧光素(例如5-荧光素、6-羧基荧光素、3’6-羧基荧光素、5(6)-羧基荧光素、6-六氯-荧光素、6-四氯荧光素、异硫氰酸荧光素等))、若丹明、藻胆蛋白(phycobiliprotein)、R-藻红素、量子点(例如硫化锌封盖的硒化镉)、测温标记或免疫聚合酶链反应标记。标记、标记程序和标记检测的绪论见于Polak和Van Noorden,Introduction to Immunocytochemistry，第2版，Springer Verlag,N.Y.(1997)；和 Haugland,Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals(1996)(其是由Molecular Probes,Inc.,Eugene,Oregon出版的组合手册和目录)中。荧光标记可用于FPIA中(参见例如美国专利号5,593,896)。吖锭化合物可在均
质或异质化学发光测定法中用作可检测标记(参见例如Adamczyk等(2006)Bioorg.Med.
Chem.Lett.16:1324-1328)。
锭-9-甲酸酯芳酯。吖锭-9-甲酸酯芳酯的一实例是10-甲基-9-(苯氧基羰基)吖锭氟
磺酸酯(可购自Cayman Chemical,Ann Arbor,MI)。用于制备吖锭9-甲酸酯芳酯的方法描述于例如McCapra等(1965)Photochem.Photobiol.4:1111-21中。关于吖锭-9-甲酸酯芳酯和它的用途的更多细节阐述于美国专利公布号20080248493中。
结合蛋白可用作检测剂。在这方面，具有可结合分析物(或其片段)上的第一表位的第一结构域和可结合分析物(或其片段)上的第二表位的第二结构域的结合蛋白或DVD结合蛋白可用作捕集剂和/或检测剂。或者，一种具有可结合第一分析物(或其片段)上的表位的第一结构域和可结合第二分析物(或其片段)上的表位的第二结构域的结合蛋白或DVD结合蛋白可用作捕集剂和/或检测剂以检测且任选定量两种或更多种分析物。如果分析物可以一种以上形式(如单体形式和可为均聚或杂聚的二聚体/多聚体形式)存在于样
本中，那么具有可结合仅暴露于单体形式上的表位的结构域的一种结合蛋白或DVD结合蛋白和具有可结合二聚体/多聚体形式的不同部分上的表位的结构域的另一结合蛋白或DVD结合蛋白可用作捕集剂和/或检测剂，由此使得能够检测且任选定量不同形式的给定分析物。此外，采用在单一结合蛋白或DVD结合蛋白内和/或在结合蛋白或DVD结合蛋白之间具有差异亲和力的结合蛋白或DVD结合蛋白可提供亲合力优势。在如本文所述的免疫测定法的情形下，一般可有帮助或需要的是将一个或多个接头并入结合蛋白或DVD结合蛋白结构内。当存在接头时，最优地，接头可具有足够长度和结构可挠性以使得能够通过内部结构域结合表位以及通过外部结构域结合另一表位。在这方面，当结合蛋白或DVD结合蛋白可结合两种不同分析物且一种分析物大于另一种分析物时，合乎需要的是较大分析物由外部结构域结合。
举例来说，可首先使试样与至少一种捕集剂接触且随后(依序)与至少一种检测剂接触。或者，可首先使试样与至少一种检测剂接触且随后(依序)与至少一种捕集剂接触。在另一替代方案中，可使试样同时与捕集剂和检测剂接触。
在一依序竞争性抑制免疫测定法中，将针对目标分析物的捕集剂涂布于微量滴定板的孔或其它固体支撑物上。当添加含有目标分析物的样本至孔中时，目标分析物结合于捕集剂。在洗涤后，将已知量的能够结合捕集抗体的标记(例如生物素或辣根过氧化酶(HRP))的分析物添加至孔中。酶标记的底物用于产生信号。HRP的适合底物的一实例是3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)。在洗涤后，测量由标记的分析物所产生的信号且其与样本中的分析物的量成反比。在一典型竞争性抑制免疫测定法中，通常将针对目标分析物的抗体(即在本公开的情形下是结合蛋白和/或DVD结合蛋白)涂布于固体支撑物(例如微量滴定板的孔)
上。然而，不同于依序竞争性抑制免疫测定法，同时添加样本和标记的分析物至孔中。样本中的任何分析物与标记的分析物竞争结合于捕集剂。在洗涤后，测量由标记的分析物产生的信号且其与样本中分析物的量成反比。当然，存在这些形式的许多变化，例如当发生结合于固体支撑物时，无论形式是一步、两步、延迟的两步等，且这些形式将为本领域普通技术人员所认识。
Magnetic Beads,Invitrogen,Carlsbad,CA)或生物素(例如使用Power-BindTM-SA-MP抗生蛋白链菌素涂布的微粒(Seradyn,Indianapolis,IN))或抗物种特异性单克隆抗体(即在本公开的情形下是结合蛋白和/或DVD结合蛋白)涂布。必要或需要时，可使基质(例
如针对标记)衍生以使得与抗体(即在本公开的情形下是结合蛋白和/或DVD结合蛋白)
上的各种官能团具有反应性。所述衍生作用需要使用某些偶联剂，其实例包括但不限于顺丁烯二酸酐、N-羟基丁二酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺。需要时可将各自对于分析物具有特异性的一种或多种捕集剂(如抗体(或其片段)(即在本公开
的情形下是结合蛋白和/或DVD结合蛋白))在不同物理或可处理位置连接至固相(例如
像呈生物芯片构型(参见例如美国专利号6,225,047；PCT公布号WO99/51773；美国专利号6,329,209；PCT公布号WO00/56934；和美国专利号5,242,828))。如果捕集剂连接至作为固体支撑物的质谱分析探针，那么结合于探针的分析物的量可通过激光脱附离子化质谱分析来检测。或者，单一管柱可用不同珠粒填充，所述珠粒是用一种或多种捕集剂衍生，由此将分析物捕集于单一位置中(参见抗体衍生化珠粒基技术，例如Luminex(Austin,TX)的xMAP技术)。
条件下与至少一种检测剂接触。虽然出于明晰目的而说明为“第二”试剂(例如第二检测剂)，但实际上，在多种试剂用于捕集和/或检测时，至少一种检测剂可为用于免疫测定法中的第二试剂、第三试剂、第四试剂等。如果使捕集剂/分析物(或其片段)复合物与一种以上检测剂接触，那么形成(第一种或多种)捕集剂/分析物(或其片段)/(多种)检测
剂复合物。如同捕集剂(例如第一捕集剂)一样，当使至少一种(例如第二和任何随后)
检测剂与捕集剂/分析物(或其片段)复合物接触时，需要在与上述条件相似的条件下孵育一段时期以形成(第一种或多种)捕集剂/分析物(或其片段)/(第二种或多种)检测
剂复合物。优选地，至少一种检测剂含有可检测标记。可检测标记可在形成(第一种或多种)捕集剂/分析物(或其片段)/(第二种或多种)检测剂复合物之前、同时或之后结合
于至少一种检测剂(例如第二检测剂)。可使用在本领域中已知的任何可检测标记(参见上文论述，包括Polak和Van Noorden(1997)以及Haugland(1996)参考文献的论述)。
Sigma-Aldrich,St.Louis,MO。可使用的其它偶联剂在本领域中是已知的。用于使可检测标记结合于抗体的方法在本领域中是已知的。另外，可购买或合成已含有有助于可检测标记与试剂偶联的端基的许多可检测标记，如CPSP-吖锭酯(即9-[N-甲苯磺酰基-N-(3-羧基丙基)]-10-(3-磺丙基)吖锭甲酰胺)或SPSP-吖锭酯(即N10-(3-磺丙基)-N-(3-磺
丙基)-吖锭-9-甲酰胺)。
支撑物接触。如果至少一种第一捕集剂不结合于固体支撑物，那么对于定量标记的量，不必自试样移除(第一种或多种)捕集剂/分析物/(第二种或多种)检测剂复合物。
0.10％。
二特异性结合搭配物复合物。所述方法进一步包括通过检测或测量由在(ii)中形成的第一特异性结合搭配物/第二特异性结合搭配物复合物中的可检测标记产生的信号来测定试样中分析物的存在、量或浓度，其中由第一特异性结合搭配物/第二特异性结合搭配物复合物中的可检测标记产生的信号与试样中的分析物的量或浓度成反比。
(增大或减小)。
34周、约35周、约36周、约37周、约38周、约39周、约40周、约41周、约42周、约43周、约44周、约45周、约46周、约47周、约48周、约49周、约50周、约51周、约52周、约1.5年、约2年、约2.5年、约3.0年、约3.5年、约4.0年、约4.5年、约5.0年、约5.5.年、约
6.0年、约6.5年、约7.0年、约7.5年、约8.0年、约8.5年、约9.0年、约9.5年或约10.0年的时段自受试者获得第二试样。
19周、约20周、约21周、约22周、约23周、约24周、约25周、约26周、约27周、约28周、约29周、约30周、约31周、约32周、约33周、约34周、约35周、约36周、约37周、约38周、约39周、约40周、约41周、约42周、约43周、约44周、约45周、约46周、约47周、约
48周、约49周、约50周、约51周、约52周、约1.5年、约2年、约2.5年、约3.0年、约3.5年、约4.0年、约4.5年、约5.0年、约5.5年、约6.0年、约6.5年、约7.0年、约7.5年、约
8.0年、约8.5年、约9.0年、约9.5年或约10.0年)内进行重复监测，且初始测定法同样通常在疾病或病状发作的较长时段(例如约数小时、数天、数月或数年)内进行。
动和半自动系统(包括其中固相包括微粒的系统)中。
(如ELISA)关于样本和捕集试剂可能需要相对较长的孵育时间(例如约2小时)。类似
地，自动或半自动形式(例如 )可具有相对较短的孵育时间(例如对于
是约4分钟)，而非自动形式(如ELISA)可持续相对较长孵育时间(例如
约2小时)孵育检测抗体(如缀合物试剂)。
(参见例如美国专利号5,294,404)、 EIA(珠粒)和Quantum II以及其它平台。
另外，测定法、试剂盒和试剂盒组分可用于其它形式中，例如在电化学或其它手持型或定点照护型测定系统上采用。本公开例如适用于执行夹心免疫测定法的商业Abbott定点照护型( Abbott Laboratories)电化学免疫测定系统。免疫传感器以及它们的制
造和在单次使用测试装置中操作的方法描述于例如美国专利号5,063,081、7,419,821和
7,682,833；美国公布号20040018577和20060160164中。
Laboratories,Abbott Park,IL)中所用的 人校准物稀释剂，其包括含有
MES、其它盐、蛋白质阻断剂和抗微生物剂的缓冲液。另外，如2008年12月31日提交的美国专利申请号61/142,048所述，可例如在I-Stat筒形式中，使用与信号抗体连接的核酸序列作为信号放大剂获得提高的信号产生。
58(Kabat编号)处或在CDRH3中的残基95至100b处含有受限突变诱发。含有CDRH1和
CDRH2多样性的文库也具有框架生殖系回复突变A18V和L64Q以及在54(L/F)和78(V/A)
处的切换残基。CDRH3文库具有在100c(A/F)处的另一切换残基。
54、56和58(Kabat编号)处含有突变；第二文库在VH CDR3中的残基95至100、100a、101和102处含有突变；且第三文库在三个VL CDR中的残基28、30、31、32、50、53、92、93、94和
95处含有突变。为进一步增加hMAK195与人生殖系框架序列的一致性，将VH位置60(D/A)、
61(S/D)、62(T/S)、63(L/V)和65(S/G)处的二元简并性引入第一文库中。此外，将VL位置
24(K/R)、33(V/L)、54(R/L)、55(H/Q)、56(T/S)、91(H/S)和96(F/Y)处的二元简并性引入第三文库中。
A8 hMAK195-A8 hMAK195VL.1 hMAK195-AM11
B5 hMAK195-B5 hMAK195VL.1 hMAK195-AM13
rHC3 hMAK195rHC3 hMAK195VL.1 hMAK195-AM14
rHC18 hMAK195rHC18 hMAK195VL.1 hMAK195-AM15
rHC19 hMAK195rHC19 hMAK195VL.1 hMAK195-AM16
rHC22 hMAK195rHC22 hMAK195VL.1 hMAK195-AM17
rHC34 hMAK195rHC34 hMAK195VL.1 hMAK195-AM18
rHC60 hMAK195rHC60 hMAK195VL.1 hMAK195-AM19
S4-6 hMAK195S4-6 hMAK195S4-6 hMAK195-AM20
S4-12 hMAK195S4-12 hMAK195S4-12 hMAK195-AM21
S4-17 hMAK195S4-17 hMAK195S4-17 hMAK195-AM22
S4-18 hMAK195S4-18 hMAK195S4-18 hMAK195-AM23
S4-19 hMAK195S4-19 hMAK195S4-19 hMAK195-AM24
S4-24 hMAK195S4-24 hMAK195S4-24 hMAK195-AM25
S4-34 hMAK195S4-34 hMAK195S4-34 hMAK195-AM26
TNFα 重组人TNF-α/TNFSF1A R&D systems 210-TA
3000仪器( AB,Uppsala,Sweden)，使用操作HBS-EP(10mM HEPES[pH7.4]、
150mM NaCl、3mM EDTA和0.005％表面活性剂P20)进行基于表面等离子体共振的测量来测定结合蛋白与靶标抗原(例如纯化重组靶标抗原)的结合。所有化学品都自
AB(Uppsala,Sweden)或另外自如本文中所述的不同来源获得。举例来说，根据制造商说明书和程序使用标准胺偶联试剂盒将于10mM乙酸钠(pH4.5)中稀释的约5000RU山羊抗小
鼠IgG(Fcγ)片段特异性多克隆抗体(Pierce Biotechnology Inc,Rockford,Ill.,US)
在25μg/ml下跨越CM5研究级生物传感器芯片直接固定。用乙醇胺阻断生物传感器表面上未反应的部分。流槽2和4中的修饰的羧甲基聚葡萄糖表面用作反应表面。流槽1和3
中不含山羊抗小鼠IgG的未修饰羧甲基聚葡萄糖用作参考表面。关于动力学分析，在使用Biaevaluation4.0.1软件下将由1:1朗缪尔结合模型(Langmuir binding model)获得的速率方程式与所有八次注射的缔合和解离阶段同时拟合(使用整体拟合分析)。于HEPES缓冲盐水中稀释纯化抗体以跨越山羊抗小鼠IgG特异性反应表面进行捕集。在5μl/min的流动速率下将欲作为配体捕集的抗体(25μg/ml)注射于反应基质上。测定25μl/min-1 -1 -1
的连续流动速率下的缔合速率常数kon(M s )和解离速率常数koff(s )。通过在范围是
10-200nM的不同抗原浓度下进行动力学结合测量来获得速率常数。随后根据以下公式，由动力学速率常数计算抗体与靶标抗原之间反应的平衡解离常数(M)：KD＝koff/kon。随时间
6 -1 -1
变化记录结合且计算动力学速率常数。在这个测定法中，可测量快达10M s 的缔合速率-6 -1
和慢达10 s 的解离速率。
于测定培养基中稀释结合蛋白和对照IgG稀释至4X浓度且进行连续1:4稀释。于测定培
养基中稀释人TNF-α至400pg/mL。以1:2稀释方案将结合蛋白样本(200μL)添加至人
TNF-α(200μL)中且使其在室温下孵育0.5小时。
为定量活力，自孔移除100μL且添加10μL WST-1试剂(Roche目录号11644807001)。将板在测定条件下孵育3.5小时。在Spectromax190ELISA板读取器上在OD420-600nm下读
取各板。
中且在室温(RT)下孵育1小时。用PBS/Tween将板洗涤3次。将50μl连续稀释的生物
素-人IL-17添加至适当孔中且在室温下孵育1小时。用PBS/Tween将板洗涤3次。将于
PBS/0.1％BSA中以1:10,000稀释的50μl抗生蛋白链菌素-HRP添加至适当孔中且在室
温下孵育1小时。用PBS/Tween将板洗涤3次。将50μl TMB添加至适当孔中且使反应进
行1分钟。用每孔50μl2N H2SO4终止反应且在450nm下读取吸光度。
IL17-h10F7M10hIgG1/K突变体 0.03nM
IL17-h10F7M11hIgG1/K突变体 0.04nM
IL17-h10F7M-A6hIgG1/K突变体 0.08nM
IL17-h10F7M-A11hIgG1/K突变体 0.04nM
IL17-h10F7M-A16hIgG1/K突变体 0.07nM
IL17-h10F7M-B13hIgG1/K突变体 0.06nM
IL17-h10F7M-B20hIgG1/K突变体 0.07nM
书和程序使用标准胺偶联试剂盒将于10mM乙酸钠(pH4.5)中稀释的约5000RU山羊抗人
IgG(Fcg)片段特异性多克隆抗体(Pierce Biotechnology Inc,Rockford,IL)在25μg/ml下跨越CM5研究级生物传感器芯片直接固定。用乙醇胺阻断生物传感器表面上未反应的部分。流槽2、3和4中的修饰的羧甲基聚葡萄糖表面用作反应表面。流槽1中含山羊IgG的修饰的羧甲基聚葡萄糖用作参考表面。关于动力学分析，在使用Biacore T200评估软件
1.0版下将由1:1朗缪尔结合模型获得的速率方程式与所有六次注射的缔合和解离阶段同时拟合(使用Rmax具有局部浮动的整体拟合分析)。于HEPES缓冲盐水中稀释纯化抗体
以跨越山羊抗人IgG特异性反应表面进行捕集。在50μl/min的流动速率下将欲作为配体捕集的抗体(1-5μg/ml)注射于反应基质上。对缔合阶段监测5分钟，而对解离阶段监测
10-60分钟以适应较缓慢的解离速率。在50μl/min的连续流动速率下测定缔合速率常数ka(单位是M-1s-1)和解离速率常数kd(单位是s-1)。视所测试IL-17的种类而定，通过在范围是0.78nM至100nM的六种不同抗原浓度下进行动力学结合测量来获得速率常数。在使用相同Biacore T200评估软件1.0版下计算缔合速率ka、解离速率kd和平衡解离常数KD。
Cytokine,9:794-800(1997))。
汇合。人IL-17A(R&D Systems，#317-IL/CF)或食蟹猕猴(cyno)IL-17A(在Abbott产生)
2+ 2+
于不含Ca 和Mg 的无菌PBS中复原，冷冻储存，新鲜解冻以供使用且于测定培养基中稀释至IL-17A/F是240pM(4X)或4nM(4X)。在单独板中制备抗体的连续稀释液(4X浓度)，与
相等体积的240pM(4X)人IL-17或食蟹猕猴IL-17A或4nM(4X)人IL-17A/F混合且在37℃
下孵育1小时。将HS27细胞(通常是50μl测定培养基中约20,000个细胞)添加至96
孔平底组织培养板(Costar#3599)的各孔中，接着添加50μl预孵育抗体+IL-17混合物。
人和食蟹猕猴IL-17A的最终浓度是60pM。人IL-17A/F的最终浓度是1nM。在37℃下孵
育细胞约24小时。随后收集培养基上清液。通过根据制造商说明书使用商业Meso Scale Discovery试剂盒(目录号L411AKB-1)测定上清液中的IL-6量来测量IL-17中和程度。
使用抗体的对数相对于IL-6量可变斜率拟合获得IC50值。
2+ 2+
于不含Ca 和Mg 的0.1％BSA/PBS中复原，等分且冷冻储存。于测定培养基中稀释新鲜
解冻的IL-17抗体至200μg/ml(4X)。在单独板中制备抗体的连续稀释液(4X浓度)，与相等体积的40ng/ml(4X)鼠类或大鼠IL-17A或100ng/mL兔IL-17A混合，且在37℃下孵育1
小时。
11μl培养基中的5.5ng/mL(10x)鼠类TNF-α添加至各孔。IL-17A的最终浓度是10ng/
ml(对于鼠类和大鼠)和25ng/mL(对于兔)。鼠类TNFα的最终浓度是0.55ng/mL。在
37℃下孵育细胞约24小时。随后收集培养基上清液。通过根据制造商说明书使用商业Meso Scale Discovery试剂盒(目录号K112AKA-4)测定上清液中的IL-6量来测量IL-17中和
程度。使用抗体的对数相对于IL-6量可变斜率拟合获得IC50值。
6
293E细胞(0.5x10/ml，活力>95％)中。在TC橱中在室温下形成DNA:PEI复合物持续15
分钟，随后添加至293E细胞中。24小时后，添加0.5％TN1至293E细胞。第5天，收集上清液以测量人IgG1效价。第7天收集细胞上清液且通过0.2μM PES过滤器过滤。通过根据制造商说明书使用蛋白质A琼脂糖亲和色谱法来纯化上清液。用0.1M甘氨酸(pH2.99)自管柱洗脱纯化DVD-Ig且立即透析至15mM组氨酸缓冲液(pH6.0)中。根据A280定量结
合蛋白且通过质谱和SEC进行分析。
的突变IgG1两者且展示在结合TNF和IL-17方面的活性相当。
添加至适当孔中且在室温(RT)下孵育1小时。用PBS/Tween将板洗涤3次。将50μl连
续稀释的生物素-人TNF或IL-17添加至适当孔中且在室温下孵育1小时。用PBS/Tween
将板洗涤3次。将于PBS/0.1％BSA中以1:10,000稀释的50μl抗生蛋白链菌素-HRP添
加至适当孔中且在室温下孵育1小时。用PBS/Tween将板洗涤3次。将50μl TMB添加至
适当孔中且使反应进行1分钟。用每孔50μl2N H2SO4终止反应且在450nm下读取吸光度。
结果展示于表19中。
制造商说明书和程序使用标准胺偶联试剂盒将于10mM乙酸钠(pH4.5)中稀释的约5000RU山羊抗人IgG(Fcγ)片段特异性多克隆抗体(Pierce Biotechnology Inc,Rockford,IL)在25ug/ml下跨越CM5研究级生物传感器芯片直接固定。用乙醇胺阻断生物传感器表面上未反应的部分。流槽2、3和4中的修饰的羧甲基聚葡萄糖表面用作反应表面。流槽1中含山羊IgG的修饰的羧甲基聚葡萄糖用作参考表面。关于动力学分析，在使用Biacore T200评估软件1.0版下将由1:1朗缪尔结合模型获得的速率方程式与所有六次注射的缔合和解离阶段同时拟合(使用Rmax具有局部浮动的整体拟合分析)。于HEPES缓冲盐水中稀释纯化抗体以跨越山羊抗人IgG特异性反应表面进行捕集。在50μl/min的流动速率下将欲作为配体捕集的抗体(1-5μg/ml)注射于反应基质上。对缔合阶段监测5分钟，而对解离阶段监测10-60分钟以适应较缓慢的解离速率。在50μl/min的连续流动速率下测定缔合速率常数ka(单位是M-1s-1)和解离速率常数kd(单位是s-1)。视所测试IL-17和TNFα的
种类而定，通过在范围是0.78nM至100nM的六种不同抗原浓度下进行动力学结合测量来获得速率常数。在使用相同Biacore T200评估软件1.0版下计算缔合速率ka、解离速率kd和平衡解离常数KD。
非必需氨基酸(#11140)和5.5X10 M2-巯基乙醇(#21985-023)。
孔接收50μL测定培养基，从而使体积达到100μL。
(200μL)添加至TNF(200μL)中且使其在室温下孵育0.5小时。
hMAK195-21-h10F7-M11.8DVD-Ig 0.013
hMAK195-24-h10F7-M11.8DVD-Ig 0.019
hMAK195-21-h10F7-A6.8DVD-Ig 0.019
hMAK195-24-h10F7-A6.8DVD-Ig 0.037
ShMAK195-21-h10F7-A16.8DVD-Ig 0.034
hMAK195-24-h10F7-A16.8DVD-Ig 0.044
hMAK199-1-h10F7-M10.8DVD-Ig 0.037
hMAK199-1-h10F7-M11.8DVD-Ig .031
hMAK199-10-h10F7-M10.8DVD-Ig 0.031
hMAK199-10-h10F7-M11.8DVD-Ig 0.031
hMAK199-6-h10F7-M10.8DVD-Ig 0.009
hMAK199-6-h10F7-M11.8DVD-Ig 0.009
hMAK199-4-h10F7-M11.8DVD-Ig .023
hMAK195-24-h10F7-M11.4DVD-Ig wt 0.021
hMAK199-4-h10F7-M11.4DVD-Ig wt 0.01
h10F7-M11-hMAK199-4.4DVD-Ig wt 4.195
h10F7-M11-hMAK199-4.8DVD-Ig wt >100nM
hMAK199-1-h10F7-M11.8QL DVD-Ig 0.027
hMAK199-1-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 0.033
hMAK199-4-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 0.014
hMAK195-21-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 0.01
h10F7-M10-MAK195-24DVD 2.558
Cytokine,9:794-800(1997))。
汇合。人IL-17A(R&D Systems，#317-IL/CF)或食蟹猕猴(cyno)IL-17A(在Abbott产生)
2+ 2+
于不含Ca 和Mg 的无菌PBS中复原，冷冻储存，新鲜解冻以供使用且于测定培养基中稀释至IL-17A/F是240pM(4X)或4nM(4X)。在单独板中制备抗体的连续稀释液(4X浓度)，与
相等体积的240pM(4X)人IL-17或食蟹猕猴IL-17A或4nM(4X)人IL-17A/F混合且在37℃
下孵育1小时。将HS27细胞(通常是50μl测定培养基中约20,000个细胞)添加至96
孔平底组织培养板(Costar#3599)的各孔中，接着添加50μl预孵育抗体+IL-17混合物。
人和食蟹猕猴IL-17A的最终浓度是60pM。人IL-17A/F的最终浓度是1nM。在37℃下孵
育细胞约24小时。随后收集培养基上清液。通过根据制造商说明书使用商业Meso Scale Discovery试剂盒(目录号L411AKB-1)测定上清液中的IL-6量来测量IL-17中和程度。
使用抗体的对数相对于IL-6量可变斜率拟合获得IC50值。
2+ 2+
于不含Ca 和Mg 的0.1％BSA/PBS中复原，等分且冷冻储存。于测定培养基中稀释新鲜
解冻的IL-17抗体至200μg/ml(4X)。在单独板中制备抗体的连续稀释液(4X浓度)，与相等体积的40ng/ml(4X)小鼠或大鼠IL-17A或100ng/mL兔IL-17A混合，且在37℃下孵育1
小时。
育细胞约24小时。随后收集培养基上清液。通过根据制造商说明书使用商业Meso Scale Discovery试剂盒(目录号K112AKA-4)测定上清液中的IL-6量来测量IL-17中和程度。
相对于用单独TNF诱导的基线IL-6水平，使用抗体的对数相对于IL-6量可变斜率拟合获得IC50值。
猕猴
hMAK195-21-h10F7-M11.8DVD-Ig 207 30 47 490 219
hMAK195-24-h10F7-M11.8DVD-Ig 200 36 33 251 206
hMAK195-21-h10F7-M10.8DVD-Ig 200 49
hMAK195-24-h10F7-M10.8DVD-Ig 200 61
hMAK195-21-h10F7-A6.8DVD-Ig 200 76
hMAK195-24-h10F7-A6.8DVD-Ig 200 62
hMAK195-21-h10F7-A16.8DVD-Ig 200 78
hMAK195-24-h10F7-A16.8DVD-Ig 200 81
hMAK195-21-h10F7-A11.8DVD-Ig 200 76
hMAK195-24-h10F7-A11.8DVD-Ig 200 81
hMAK195-21-h10F7-B13.8DVD-Ig 200 58
hMAK195-21-h10F7-B20.8DVD-Ig 200 44
hMAK199-1-h10F7-M10.8DVD-Ig 145 33
hMAK199-1-h10F7-M11.8DVD-Ig 200 29 33 248 211
hMAK199-10-h10F7-M10.8DVD-Ig 200 26
hMAK199-10-h10F7-M11.8DVD-Ig 200 33
hMAK199-6-h10F7-M10.8DVD-Ig 200 31
hMAK199-6-h10F7-M11.8DVD-Ig 200 32
hMAK199-4-h10F7-M11.8DVD-Ig 100 21 26 217 223
hMAK195-24-h10F7-M11.4DVD-Ig wt 200 170
hMAK199-4-h10F7-M11.4DVD-Ig wt 200 30
h10F7-M11-hMAk199-4.4DVD-Ig wt 40 57
h10F7-M11-hMAK199-4.8DVD-Ig wt 50 14
hMAK199-1-h10F7-M11.8QL DVD-Ig 100 24
hMAK199-1-h10F7-M11.8YTE DVD-Ig 100
hMAK199-1-h10F7-M10.8QL DVD-Ig NA
hMAK199-1-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 95 25 54 750 311
hMAK199-4-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 46 24 27 364 159
hMAK195-21-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 100 39 48 422 180
hMAK195-24-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 77 33 44 367 209
hMAK199-1-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 65
hMAK199-4-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 24
hMAK195-24-h10F7-M11.8DVD-Ig wt 27
静脉采集血液样本(50-100ul)于血清分离管中，使其在室温下凝结至少1小时，且在4℃下离心10分钟。将血清样本冷冻在-80℃下直至分析。
hMAK199-1-h10F7-M10.8DVD-Ig 0.16,0.21
hMAk199-1-h10F7-M11.8DVD-Ig 0.41
hMAk199-10-h10F7-M10.8DVD-Ig 0.30
hMAk199-10-h10F7-M11.8DVD-Ig 0.12
DVDABSL DVDABHC-SL DVDABLC-SL
DVDABLL DVDABHC-LL DVDABLC-LL
DVDBASL DVDBAHC-SL DVDBALC-SL
DVDBALL DVDBAHC-LL DVDBALC-LL
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3 一种农业杀虫剂
