众所周知，动物细胞外液的自然调节包括各种激素的和神经机构的复合作用。近来，由心房制备的多肽激素实际上已在体钠，水和血压的稳态控制中起到重要作用，这种多肽激素被称作心房尿钠因子（ANF），但也可以称作心钠和心房肽，为了方便起见本文中将这种物质称作ANF。

人们已分离了ANF肽家族并且确定了它们的氨基酸顺序。并发现这些ANF肽的长度在21到126个氨基酸内变化，其普通的结构特征是连接在胱氨酸部分上的具有各种各样氨基或羧基末端顺序的一个或多个17个氨基酸的二硫环顺序。

人们已经发现ANF肽与各种组织接合的具体接合点，所说的组织包括肾脏，肾上腺，主动脉，和亲合力分布在50皮摩尔（PM）至500纤摩尔（nM）范围内的血管平滑肌〔尼德尔门，《高血压》1，469（1985）〕。此外，可以相信ANF与在脑中的具体受体接合并可能起到神经调节剂以及常用末梢激素的作用。

ANF肽的生物性质包括有效的利尿/钠尿和血管舒张/低血压活性以及对血管紧张肽原酶和醛类脂醇分泌物的抑制作用〔德博尔迪，“科学”230，767（1985）〕。因此，可以相信ANF、 和具有类似ANF生物活性的类似物将对患有如下特征疾病的病人提供有效的治疗，即体液，电解质，血压，眼内压，肾素或醛甾酮内环境平衡等异常，例如：高血压，肾病，醛甾酮过多症，心肌肥大，青光眼和充血性心力衰竭，但并不限于这些疾病。

人们已经从鼠心房组织中分离出了由28个氨基酸组成的有生物活性的ANF碎片，该ANF碎片有如下顺序：

其中，氨基酸Ser，表示氨基末端残基，Tyr28表示羧基末端残基，并且各个氨基酸用它们的顺序数值位置（即从氨基末端终端到羧基末端终端进行编号）来表示。这种肽用rANF1-28来表示。人们已经从人类心房组织中分离出一种具有类似生物活性的相应肽碎片，这种肽碎片与rANF1-28的不同之处只是用“Met”取代在rANF1-28位置12上的氨基酸“Ile”〔尼德尔门等，《高血压》7，469，（1985）〕。相应的人类ANF肽在本文中用hANF1-28表示。

申请人现已发现某些新化合物能有效地与ANF受体接合，并展示出类似ANF的生物效应。可以相信这些化合物在治疗患有如下特征疾病的病人是有效的，即体液、电解质、血压、眼内压、肾素、或醛甾酮内环境平衡等异常，例如高血压，肾病，醛甾酮曾多症，心肌肥大，青光眼和充血性心力衰竭，但并不仅限于这些疾病。

本发明涉及了新的化合物及其药物组合物。另一方面本发明还涉及了使用这些新化合物治疗患有如下特征疾病病人的方法，即体液、电解质、血压、眼内压、肾素或醛甾酮内环境平衡等异常，例如高血压、肾病、醛甾酮增多症、心肌肥大、青光眼和充血性心力衰端，但并不仅限于这些疾病。

更准确地说，本发明提供了化学式Ⅰ的化合物：

或其药物学上适用的无毒盐，

其中，

R1是氢、C1-6烷基、或化学式为

或R3-R5-NH-

的基，

式中R3和R4分别是氢或一个氨基保护基;

R5是1～10个氨基酸残基的多肽，

R2是氢或C1-6烷基且当R1和R2分别是烷基时，它们可以是 独立的链或它们也可以被碳原子结合在一起形成一个环烷基;

X1、X2和X3分别是C1-8的亚烷基;

m，n，p，q和t分别是整数0或1;

A8是一个键，phe（苯基丙氨酸），N-取代的C1-4烷基phe，α-C取代的C1-4烷基phe，或D-phe;

A9是一个键，-Gly（甘氨酸）、-Ala（丙氨酸），N-取代的C1-4烷基-Gly或-Ala，α-C取代的C1-4烷基-Gly或-Ala、或D-Ala;

A10是一个键，Gly、Ala、N-取代的C1-4烷基-Gly或-Ala，α-C取代的C1-4烷基-Gly或-Ala，或D-Ala;

A11是一个键，Arg（精氨酸），N-取代的C1-4烷基Arg、α-C-取代的C1-4烷基Arg、或D-Arg;

A12是一个键，Ile（异亮氨酸），Nle（正亮氨酸）、或Met（甲硫氨酸）;N-取代的C1-4烷基-Ile、-Nle或Met;α-C-取代的C1-4烷基-Ile，-Nle或Met;或D-Ile，D-Nle或D-Met;

A13是一个键，Asp（天冬氨酸）或Glu（谷氨酸）;N-取代的C1-4烷基-Asp或-Glu;α-C取代的C1-4烷基-Asp-Glu;或D-Asp或D-Glu;

A14是一个键，Arg，N-取代的C1-4烷基Arg，α-C-取代的C1-4烷基Arg，或D-Arg;

A15是一个键，Ile，Nle，或Met;N-取代的C1-4烷基-Ile，-Nle，或-Met;α-C-取代的C1-4烷 基-Ile，-Nle，或-Met;或D-Ile，D-Nle，或D-Met;

A16是一个键，Gly，Ala，N-取代的C1-4烷基-Gly或-Ala，α-C取代的C1-4烷基-Gly或-Ala，或D-Ala;

A17是一个键，Gly，Ala，N-取代的C1-4烷基-Gly或-Ala，α-C取代的C1-4烷基-Gly或-Ala，或D-Ala;

A18是一个键，Gln或Asn;N-取代的C1-4烷基-Gln或-Asn，α-C取代的C1-4烷基-Gln或-Asn，或D-Gln或D-Asn;

A19是一个键，Ser或Thr;N-取代的C1-4烷基-Ser或-Thr;α-C取代的C1-4烷基-Ser或-Thr，或D-Ser或D-Thr;

A20是一个键，Gly或Ala;N-取代的C1-4烷基-Gly或-Ala;α-C取代的C1-4烷基-Gly或-Ala;或D-Ala;

A21是一个键，Leu或Nle;N-取代的C1-4烷基-Leu或-Nle;α-C取代的C1-4烷基-Leu或-Nle;或D-Leu或D-Nle;

A22是一个键，Gly或Ala，N-取代的C1-4烷基-Gly或-Ala;α-C取代的C1-4烷基-Gly或-Ala;或D-Ala;

A24是一个键，Asn或Gln，N-取代的C1-4烷基Asn 或Gln，α-C-取代的C1-4烷基Asn或Gln，或D-Asn或D-Gln;

A25是一个键，Ser，N-取代的C1-4烷基Ser，α-C-取代的C1-4烷基Ser，或D-Ser;

A26是一个键，Phe，N-取代的C1-4烷基Phe，α-C取代的C1-4烷基Phe，或D-Phe;

A27是一个键，Arg，N-取代的C1-4烷基Arg，α-C-取代的C1-4烷基Arg，或D-Arg;

A28是一个键，Tyr（酪氨酸），N-取代的C1-4烷基Tyr，α-c-取代的C1-4烷基Arg，或D-Tyr;

Y是-OH，C1-6烷氧基、氨基、单或双C1-4烷基取代的氨基;

其中上面称为“A”的一个或多个氨基酸残基，或其衍生物可由一个或多个化学式为

二价基所取代，其中Z是C2-24亚烷基;

上面称为“A”的氨基酸残基，或其衍生物在不超过5个的条件下都是键，并且化学式Ⅰ的化合物其特征在于对ANF受体的接合常数不到500nM;

本发明一方面提供了一种治疗患有如下特征疾病病人的方法，即体液，电解质，血压，眼内压，肾素，或醛甾酮内环境平衡等异常，例如高血压，肾病，醛甾酮增多症，心肌肥大，青光眼和充血性心力 衰竭，但并不限于这些疾病。该治疗方法包括用一种在治疗学上有效量的化学式Ⅰ的化合物，或其药物学上适用的无毒盐施药给所说的病人。在实际治疗患有上述疾病病人时，化学式Ⅰ的化合物能够制成其生物上可适用的有效量药剂，用口服或肠胃外的任一种方式给药。通常，肠胃外的给药方式最好是皮下的，肌内的，静脉内的，经皮肤的，鼻内的，直肠的，等等方式给药。

本发明另一方面，为化学式Ⅰ化合物的给药提供了药物组合物。这些组合物包括治疗学上有效量的一种或多种化学式Ⅰ的化合物以及一种或多种药物学上适用的载体。

在本说明书中全部使用下列常用的氨基酸缩略语：

Ala    丙氨酸

Asn    天冬酰氨

Asp    天冬氨酸

Arg    精氨酸

Cys    半胱氨酸

Gln    谷氨酰胺

Glu    谷氨酸

Gly    甘氨酸

Ile    异亮氨酸

Leu    亮氨酸

Met    甲硫氨酸

Nle    正亮氨酸

phe    苯丙氨酸

Sar    肌氨酸

Ser    丝氨酸

Thr    苏氨酸

Tyr    酪氨酸

应当清楚的是作为肽分子的一部分，所涉及上列任何特殊氨基酸在这里可以表示为氨基酸的二价基，例如，“Gly”是化学式为

的二价基。

上面所列的氨基酸，除甘氨酸和肌氨酸外，由于它们的α-碳原子具有手性特征所以是旋光的。天然存在的氨基酸是L-构型。当然本文所用的特殊氨基酸指L-构型的那些氨基酸，除非特殊指定D-构型。例如，这里用Ser表示L-构型的丝氨酸，反之，用D-Ser表示相应的D-构型。

按照本领域的习惯，这里肽的结构通常表示成氨基酸末端在观测者的左方，而羧基末端在观测者的右方。除非另有说明，否则本文中所指的肽是由特指的氨基酸残基与普通肽键用本领域公知的方法键合而制得。

这里所用的术语“烷基”和“亚烷基”分别指单价或二价的烃基和亚烃基，例如CH3CH2-是一个烷基，而-CH2CH2-是相应的亚烷基。烷基和亚烷基，以及烷氧基或酰基的烷基/亚烷基部份也包括饱和的和不饱和的具有直链的，支链的或环状结构的烷基或亚烷基。例如，甲基，乙基，乙烯基，丙基，异丙基，丁基，丁烯基，异丁基，叔丁基，戊基，异戊基，仲戊基，环戊基，己 基，异己基，环己基，环己甲基，庚基，辛基，壬基，癸基，十一烷基、CH3-（CH2）12-CH2-，CH3-（CH2）15-CH2-，CH3-（CH2）18-CH2-CH3（CH2）21-CH2-等等和相应的亚烷基，但并不只限于此。烷氧基包括在与化学式1的化合物合并作为羧酸酯的羟基取代的烷基/亚烷基的范围内，例如甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，戊氧基，己氧基等以及相应的亚烷基，但并不限于这些。酰基包括与上述烷基/亚烷基一道每个基上有一个或两个羰基的基，例如乙酰基，苯甲酰基，琥珀酰等等，但并不限于这些，本文中所用的符号“S”特指硫原子。

在化学式Ⅰ的化合物中，一个或多个称为“A”的氨基酸可以用一个或多个通式为

的二价基取代。式中Z是C2-24的亚烷基。

通常，在化学式Ⅰ的化合物中，氨基酸残基可以逐一地被取代或将邻接的氨基酸残基作为一个单位取代。上面指出的二价基（在本文称作“间隔”基）是氨基取代羧酸，并通过普通肽键与化学式Ⅰ的化合物合併。Z部分是饱和的或不饱和的具有直链、支链或环状构型的亚烷基部分，可以由2-24碳原子所组成。一般优先用类似于从N-到羧基末端的间隔基部分取代一个氨基酸或一组邻接的氨基酸，其长度是从α-N末端到氨基酸或一组邻接氨基酸取代的α-羧基末端，以便在不是这样取代的氨基酸残基中保持大约相同的间隔关系。 例如最好用4-氨基丁酸或5-氨基戊酸的二价基取代一组两个邻接的氨基酸;用7-氨基庚酸或8-氨基辛酸的二价基取代一组三个邻接的氨基酸;用10-氨基癸酸或11-氨基十一酸的二价基取代一组四个邻接的氨基酸，等等。尽管上述结构的化合物一般是优选的，但是应该明白本发明并不限于上述这些化合物，而不能维持未取代的氨基酸之间的间隔关系的那些化合物也是在本发明的范围之内。

当需要用间隔基取代两个或多个邻接的氨基酸时，最好使用单一间隔基来取代之。然而，本发明是设想一组邻接氨基酸的基能够交替的被两个或多个间隔基取代，这些间隔基本身用肽键连接到一起。例如，虽然最好用8-氨基辛酸部分取代一组三个邻接的氨基酸，但是这些残基还能用两个邻接的3-氨基丙酸部分，或一个2-氨基乙酸部分和一个4-氨基丁酸部分取代。当然，已结合了多于一个间隔基的化学式Ⅰ的化合物也在本发明的范围内。通常结合有1～4个间隔基的化学式Ⅰ的化合物是最好的。

本发明提供了化学式1的化合物，其中称作“A”的氨基酸都可能不存在，即可能是一个键。然而，在本发明中，氨基酸的个数不大于5不可能存在于所要求的任何化合物中。

广义上来说，在本发明提供的化合物中，称作“A”的任一个氨基酸都能够用间隔基来取代。然而，可以相信在化合物的某些区域，氨基酸残基，或其衍生物应表现出容易有效地与ANF受体接合。应相信可以容易地与ANF受体结合的本发明的化合物的区域包括从大约A11至约A15的区域和在A27的区域。因此化学式1的化合物通常是本发明优选的实例，其中用A11至A15表示的肽部分和用A27表示的氨基酸部分不是键，不能用间隔基来取代。

同化合物的任何普通基一样，优选的某些基可以在分子中的各种位置上。申请人推荐了R1是氢或氨基的化学式Ⅰ化合物，还推荐了R1为下列基的化学式Ⅰ的化合物，R1是：

H-Ser-NH-;

H-Ser-Ser-NH-;

H-Arg-Ser-Ser-NH;

H-Arg-Arg-Ser-Ser-NH;

H-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-NH;

H-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-NH-。

这些化合物中，R3是氢并且R5是上面命名的氨基酸或肽。

此外，R3和R4可分别是该领域熟知及常用的普通氨基保护基，这些氨基保护基是在化学工艺中已知的对化学合成反应步骤中的伯氨基能有效的进行保护，并且在不导致化合物降解的条件下易于除去。对于R3和R4适宜的保护基有：甲酰、乙酰、三氟乙酰、邻苯二甲酰、甲苯磺酰基、苯磺酰基、苄氧基羰基，取代的苄氧基羰基（例如，对-氯基、对-溴基，对-氮基，对-甲氧基，邻-氯基，2，4-二氯基、和2，6-二氯衍生物），叔丁氧基羰基（BOC），叔-戊氧基羰基，异丙氧基羰基、2-（对-联苯）-异丙氧基羰基，烯丙氧基羰基，环戊氧基羰基、环己氧基羰基、金刚烷氧基羰基、苯硫羰基、和三苯甲基。优选的氨基保护基是叔-丁氧基羰基（BOC）。上述用R3和R4表示的特殊保护基的选择，利用，和合成在化学领域是周知的。

申请人还推荐化学式Ⅰ中具有表示为-（X1）m-（S）n- （X2）p-（S）q-（X3）t-二价基键的化合物。所说的二价基键是：

a.-CH2-S-S-CH2-（即式中的X1和X3是亚甲基;P是零;并且m，n，q，t分别是1）;

b.-CH2-（CH2）2-CH2-（即，式中X1和X3是亚甲基;X2是亚乙基;n和q是零;且m，p，t是1）;

c.

（即，式中X1是1，1-环戊二烯亚戊基，且X3是亚甲基;P是零;而m，n，q，t是1）;

d.-CH2-S-CH2-CH2-S-CH2-（即，式中X1和X3是亚甲基;X2是亚乙基;m，n，p，q，t是1）;

e.-C（CH3）2-S-S-C（CH3）2-（即，式中X1和X3是异亚丙基;P是零;m，n，q，t是1）;

f.-CH2-CH2-S-S-CH2-CH2-（即，式中X1和X3是亚乙基;P是零;m，n，q，t是1）;

化学式1中具有下列氨基酸残基的化合物一般也是优选的，当不是用间隔基取代时，所说的氨基酸残基存在于下列位置：

A8是phe，N-取代C1-4烷基phe，或D-phe;

A9是Gly或Ala，N取代C1-4烷基-Gly或Ala，或D-Ala;

A10是Gly;

A11是Arg;

A12是Ile，Nle，或Met;N-取代C1-4烷基-Ile，-Nle，-Met;D-Ile，D-Nle，D-Met;

A13是Asp，或Glu;

A14是Arg;

A15是Ile，Nle或Met;N-取代C1-4烷基-Ile，-Nle，Met;D-Ile，D-Nle，D-Met;

A16是Gly或Ala，N-取代C1-4烷基-Gly或-Ala，或D-Ala;

A17是Ala，N-取代C1-4烷基Ala，或D-Ala;

A18是Gln或Asn;

A19是Ser或Thr;

A20是Gly或Ala;

A21是Ieu，N-取代C1-4烷基Ieu，或D-Leu;

A22是Gly或Ala;

A24是Asn或Gln;

A25是Ser;

A26是phe，N-取代C1-4烷基phe、或D-phe;

A27是Arg，N-取代C1-4烷基Arg、D-Arg;

A28是Tyr，N-取代C1-4烷基Tyr，D-Tyr;

表1中表示的具体化学式Ⅰ的化合物是本发明最优选的化合物。然而表1中不能列出其全部化合物，但那些化合物也在本发明的范围之内，只不过列出了几种有代表性的优选的化合物。

表1

Apa表示5-氨基戊酸

Aoa表示8-氨基辛酸

Aua表示11-氨基十一酸

N-Me表示N-甲基（例如，N-Me-Ile15表示在位置15上的N-甲基异亮氨酸）

ANF表示rANF或hANF。

对每个命名的化合物，Y是氨基，羟基，甲氧基或乙氧基。

“基本结构”表示用和rANF或hANF同样的氨基酸在下标表明的位置上构成的化学式Ⅰ的化合物，例如“ANF8，10-28”表示该化合物用那些已知在位置A8和A10至A28的与rANF或hANF同样的氨基酸构成。R1，R2和（X1）m-（S）n-（X2）p-（S）q-（X3）t在表中有具体的命名。表中示出了间隔基的特征，它们的位置用上标来表示。例如，“Aoa17-19，20-22”表示化合物含有两个8-氨基辛酸间隔基，一个在A17到A19的位置，另一个在A20到A22的位置。

本发明的化合物可以用在本领域已熟知的各种工艺方法来制备。这些工艺方法包括固相连续和单元合成法，液相连续和单元合成法，基因无性繁殖系化和这些工艺的结合。固相连续方法可以通过已建立的自动方法来完成，例如用自动的肽合成仪来完成。在这个工艺中被保护氨基的氨基酸接合到在羧酸终端点上的树脂载体上，该氨基酸在氨基位置上脱保护得到期望的肽键，而下一个被护氨基的氨基酸在期望的顺序上偶合到肽键上。重复上述脱保护和偶合步骤直到合成期望的多肽。本发明的化合物就是这样从它们羧基末端到它们的氨基末端被合成。被护氨基的氨基酸可以是普通的氨基酸，及其衍生物或异构体，或间隔基。所用的树脂载体可以是在固相制备多肽工艺中经常使用的任何适用树脂。较好的树脂是与约0.5-3%的二乙烯基苯交联的聚苯乙烯，该树脂或被二苯甲基胺化，氯甲基化或被羟甲基化，从而为与最初引入的被护氨基的氨基酸形成酰胺或酯提供结合点。

Bodansky等人在〔化学工业（伦敦）38，1591-98（1966）〕中描述了羟甲基树脂的例子。斯图尔特等人在〔“固相肽合成”，第2版，皮尔斯化学公司，Rockford，Illinois（1984），第2章第54-55页〕中描述了氯甲基和二苯甲基胺树脂的制备。其中大部分树脂是可以在市场上买得到。一般地，将在肽的羧基末端上期望的被护氨基的氨基酸使用本领域熟知标准方法及实验操作接合到树脂上。例如，用Gisin的方法〔化学学报，56，1476（1973）〕可以将被护氨基的氨基酸接合到树脂上。当期望使用一种含有部分二苯甲酸胺的树脂作为树脂接合点时，被护氨基的氨基酸通过在树脂的α-羧酸和氨基部分之间的酰胺键偶合到该树脂上。这种偶合使用下面所描述的标准偶合方法来实现。许 多树脂一接合氨基酸在市场上可以买得到。

将每个氨基酸引入到多肽顺序中所用的α-氨基保护基可以是该工艺中已知的那些保护基。在已经考虑的氨基保护基中有如下几类：（1）酰基类保护基，例如甲酰，三氟乙酰，邻苯二甲酰，对-甲苯磺酰（tosyl），苯磺酰基，硝基苯亚磺酰，三苯甲基亚磺酰，邻硝基苯氧基乙酰，和α-氯丁酰;（2）芳族氨基甲酸乙酯类保护基，例如，苄氧基羰基，和取代的苄氧基羰基例如对-氯苄氧基羰基，对-甲基苄氧基羰基，对-硝基苄氧基羰基，对-溴苄氧基羰基，1-（对-联苯基）-1-甲基乙氧基羰基，α-，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧基羰基，和二苯甲基氧基羰基;（3）脂肪族的氨基甲酸乙酯类保护基例如叔丁氧基羰基（BOC），二异苯基甲氧基羰基，异丙氧基羰基，乙氧基羰基，和烯丙氧基羰基;（4）环烷基氨基甲酸乙酯类保护基，例如环戊氧基羰基，金刚烷基氧基羰基，和环己基氧基羰基;（5）硫代氨基甲酸乙酯类保护基例如苯基硫代羰基;（6）烷基类保护基例如三苯甲基（trityl）和苄基（BzL）;（7）三烃基硅烷保护基例如三甲基硅烷。较好的α-氨基保护基是叔-丁氧基羰基（BOC）。BOC作为α-氨基保护基对氨基酸的使用在Bodansky等人的“肽合成试验”中（Springer-Verlag，Berlin（1984），第20页）有叙述。

在将被护氨基的氨基酸偶合到树脂载体上后，可用任何适宜的方法除去α-氨基保护基，例如用三氟乙酸，二氯甲烷中的三氟乙酸，或在二噁烷中的盐酸（HCl）可除去α-氨基保护基。其脱保护步骤是在0℃和室温之间的温度下完成的。其它的标准裂开试剂可以用 于在本领域周知的条件下除去具体的氨基保护基。

在α-氨基保护基除去后，可以通过肽键将下一个期望的被护氨基的氨基酸偶合。重复该脱保护和偶合步骤直到获得所期望顺序的多肽。另外，多种氨基酸基在用树脂支承的氨基酸顺序偶合之前可以用溶液方法偶合。

适当偶合剂的选择和使用是本领域普通技术人员熟知的常识。特别适宜的偶合剂（此时将要加入的氨基酸是Gln，Asn，或Arg）是N，N-二环己基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑。这些试剂的使用防止了腈和内酰胺的形成。其它的偶合剂有（1）碳二亚胺（例如，N，N-二环己基碳二亚胺和N-乙基-N′-（γ-二甲基氨基丙基碳二亚胺）;（2）氨基氰（例如，N，N-二苄基氨基氰）;（3）烯酮亚胺;（4）异噁唑鎓盐（例如，N-乙基-5-苯异噁唑鎓-3-磺酸盐）;（5）含单环氮的芳香性杂环酰胺，在该杂环酰胺的环上含有1到4个氮，例如，咪唑酰胺，吡唑酰胺，和1，2，4-三唑酰胺（有用的具体杂环酰胺包括N，N-羰基二咪唑和N，N-羰基-二-1，2，4-三唑;（6）烷氧基化的乙炔（例如，乙氧基乙炔）;（7）与氨基酸的羧基部分形成混合酐的试剂（例如，氯甲酸乙酯和氯甲酸异丁酯）或将要偶合的氨基酸的对称酐（例如，BOC-Ala-O-Ala-BOC）;（8）含氮杂环化合物，且在其一个氮环上有一羟基（例如，N-羟基苯邻二甲酰亚胺，N-羟基琥珀酰胺，和1-羟基苯并三唑）。其它活性试剂和它们在肽偶合中的使用，卡博（Kapoor）在〔药理科学杂志，59，1-27（1970）〕上有描述。对本发明中所用的氨基酸来说一般较好的偶合方法是使用对称酐作为偶合剂。

对Gln，Asn，和Arg的优选偶合方法是在有树脂或树脂接合氨基酸或肽存在下用被护的氨基酸，或其衍生物或同分异构体与在N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中的N，N-二环己基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑（1∶1）反应。对其它氨基酸或间隔基来说，较好偶合方法是用被护的氨基酸，或其衍生物或异构体与在二氯甲烷中的N，N-二环己基碳二亚胺反应，从而形成对称酐，然后将该对称酐引入到含有树脂或树脂结合氨基酸或肽的固相反应器中。该偶合是在N，N-二甲基甲酰胺（DMF），或二氯甲烷，或DMF∶二氯甲烷（1∶1）介质中完成的。优选DMF介质。在合成的每一步骤中，偶合反应的完成是用凯泽（Kaistr）等人在〔分析生物化学34，595（1970）〕中描述的茚三酮试验来监测到的。如果发生未完全偶合，则重复偶合步骤。如果仍未完全偶合，脱保护的胺用适当的盖住剂盖住从而防止其继续合成。适宜的盖住剂及其应用在本领域中是众所周知的。适宜盖住剂的例子有乙酸酐和乙酰基咪唑。这些例子Stewart等人已有描述〔“固相肽合成”第二版，皮尔斯化学公司，Rockford，Ⅰ11（1984），第2章，第73页）。

在得到期望的氨基酸顺序后，肽便从树脂上裂开。这可以用本领域众所周知的方法来完成，例如用酯的水解法或酰胺键连到树脂上。最好用无水氟化氢中的二甲硫，对甲苯酚，甲苯硫酚，或茴香醚溶液从二苯甲基胺树脂中裂开肽。裂开反应最好是在约0℃和室温之间的温度下进行，并且允许该反应持续时间最好从约5分钟到约5小时。

作为本领域中熟知的固相肽合成法，在制备肽过程中许多氨基酸带有需要保护的侧链官能团。对于这些侧链官能团的适当的保护基的选择和使用对本领域的熟练人员是能够胜任的并且将取决于要保护的氨基酸和在肽中存在的其它被护氨基酸残基。这样侧链保护基的选择是关键的，因为在合成的脱保护和偶合步骤中，该保护基不一定要除去。例如，当BOC用作α-氨基保护基时，下列侧链保护基是合适的：对一甲苯磺酰（tosyl）部分可以用于保护氨基酸例如Lys和Arg的氨基侧链;对一甲苄基，乙酰氨基甲基，苄基（Bzl），或叔丁基磺酰部分可以用于保护氨基酸的含硫化物侧链，该氨基酸例如有半脱氨酸，高胱氨酸，青酶胺等或其衍生物;苄基（Bzl）或环己基酯部分可用于保护氨基酸例如Asp，Glu的羧酸侧链，苄基醚可用于保护氨基酸例如Ser和Thr的含羟基侧链;和2-溴苄酯基（2Br-Z）部分可用于保护氨基酸例如Tyr的含羟基侧链。这些侧链保护基的加上和除去是根据该领域中已知的标准实验和方法进行。用在无水氟化氢中的茴香醚（1∶10）溶液脱去这些侧链保护基是较好的。一般，在肽链合成完成后进行侧链保护基的脱保护，但这些基可以在任何适当的时间交替地脱除，最好是在肽从树脂上裂开的同时将这些侧链脱保护。

在肽从树脂上裂开以后，这里用-（X1）m-（s）n-（X2）p-（S）q-（X3）t表示的桥可以根据本领域熟知的标准方法和实践用共价键连到适当部分的侧链上来形成。例如，二硫化物键象-CH2-S-S-CH2-，-CH2-CH2-S-S-CH2-CH2-，和-C（CH3）2-S-S-C（CH3）2-通过氧化适当的硫化物来实现，此方法由Stewart 等人已描述〔“固相肽合成”，第2版，皮尔斯化学公司，Rockford，I11，（1984），第95页〕。烷基链例如-CH2-（CH2）2-CH2-的完成在美国专利4，161，521中有描述。其中P是1的键，例如-CH2-S-CH2-CH2-S-CH2-用Mosberg等人〔JACS 107，2986-87（1985）〕描述的方法完成。上述方法的描述在此参照并入本文。

需要的氨基酸，及其衍生物和异物体，间隔基均可以买到或可以根据该领域已知的标准实验和方法得到。

为了更完整地说明本发明化合物的制备，提供了下面的实施例。这些实施例仅是一个说明并不是在任何方面限制本发明的范围。

实施例1

〔Aoa24-26〕γANF5-23，27-28-NH2的制备。

〔Aoa24-26〕γANF5-28-NH2的结构如下：

即基本结构是γANF5-23，27-28;R1是H-Ser-Ser-NH-;R2是H;（X1）m-（S）n-（X2）p-（S）q-（X3）t-是-CH2-S-S-CH2-，间隔基是Aoa24-26;以及Y是-NH2。

这个肽的合成是根据标准固相肽合成操作方法，即使用了应用生物系统有限公司“提供的自动肽合成机，并用对一甲苄基氢基胺树脂（2%＝乙烯基苯/国际肽（Peptides    Intemrnational）作为固相载体完成的。Tyr的对称酐（带有BOC作为α-氨基保护基和2Br-Z作为侧链羟基保护基）是通过用保护的Tyr与N，N-二环己基碳二亚胺在二氯甲烷中反应形成的。然后将二氯甲烷换成二甲基甲酰胺。保护的Tyr通过把其对称酐溶液引入到含有树脂的固相反应器中并混合直到反应完成而偶合到树脂上。所说的酐应当以大约2倍的过剩量加入。被护Tyr的α-氨基保护基通过用树脂接合的Tyr衍生物与三氟乙酸反应除去。Arg带有BOC作为α-氨基保护基和对一甲苯磺酰（tosyl）基作为侧链氨基保护基）通过将保护的Arg在二甲基甲酰胺中并有树脂接合的Tyr衍生物的情况下与N，N-二环己基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑（1∶1）反应偶合到树脂接合的Tyr衍生物上。同样地，以下所说的氨基酸（都带有BOC作为α-氨基保护基）按上面描述的相同方法进行肽末端的α-氨基保护基的脱保护而后依次偶合到树脂接合肽之后，再偶合下述基团：

Aoa;Cys，带有对一甲苄基作为侧链硫化物保护基;Gly;Leu，Gly;Ser带有Bzl醚作为侧链羟基保护基;Gln;Ala;Gly;Ile;Arg，带有甲苯磺酰基作 为侧链氨基保护基;Asp，带有环己基酯作为侧链羧酸保护基;Ile;Arg，带有甲苯磺酰基作为侧链氨基保护基;Gly;Gly;Phe;Cys，带有对甲苄基作为侧链硫化物保护基;Ser，带有Bzl醚作为侧链羟基保护基;Ser，带有Bzl醚作为侧链羟基保护基。

二甲基甲酰氨中的二环己基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑（1∶1）可作为偶合剂使用，从而将Arg，Asn和Gln衍生物偶合到树脂接合肽上。使用在二氯甲烷中的N，N-三环己基碳二亚胺以形成所有其它氨基酸衍生物的对称酐。

将所说肽与树脂分开，其侧链保护基通过树脂接合肽与在无水氟化氢中的苯甲醚溶液（1∶10）反应除去。用脱保护的肽与氰铁酸钾氧化形成二硫化物桥。所说肽用凝胶过滤色谱法，离子交换色谱法，渗析，和反相高性能液相色谱法（HPLC）提纯。

快速原子轰击质谱分析（FAB-MS）;

（M+H）+＝2341;

氨基酸分析（%）：Asp（0.73）;Glu（0.91）;Ser（2.78）;Gly（5.15）;Ala（1.01）;Arg（3.01）;Tyr（0.98）;Ile（1.95）;Leu（0.97）;Phe（0.93）;Aoa（1.01）。

用相同的方法，可以制备下列肽：

〔Aoa8-10〕γANF5-7，11-28NH2：

FAB-MS：（M+H）+＝2427;氨基酸分析（%）：Asp（1.24）;Glu（0.88）;Ser（3.72）;Gly（3.16）;Ala（1.07）;Arg（3.01）; Tyr（0.95）;Ile（1.95）;Leu（0.94）;Phe（0.98）;Aoa（1.07）。

〔Aoa17-19〕γANF5-16，20-28-NH2;

FAB-MS：（M+H）+＝2404;氨基酸分析（%）：Asp（1.31）;Ser（2.88）;Gly（5.18）;Arg（2.95）;Tyr（1.00）;Ile（2.03）;Leu（0.99）;Phe（1.94）;Aoa（0.70）;

〔Aoa20-22〕γANF5-19，23-28-NH2：

FAB-MS：（M+H）+＝2462;氨基酸分析（%）：Asp（0.98）;Ser（3.77）;Asn（0.63）;Gly（2.91）;Glu（0.85）;Arg（2.99）;Tyr（1.02）;Ile（2.33）;Phe（2.20）;Aoa（0.97）。

〔Aoa15-17〕γANF5-14，18-28-NH2：

FAB-MS：（M+H）+＝2447;氨基酸分析（%）：Asp（1.77）;Glu（0.96）;Ser（3.62）;Gly（4.21）;Arg（2.91）;Tyr（0.98）;Ile（0.77）;Lea（1.01）;Phe（2.11）;Gys（1.96）;Aoa（0.80）。

〔Aoa16-18〕γANF5-15，19-28-NH2：

FAB-MS：（M+H）+＝2433;氨基酸分析（%）： Asp（1.97）;Ser（4.08）;Gly（4.45）;Arg（2.96）;Tyr（0.95）;Ile（1.24）;Leu（0.96）;Phe（1.92）;Gys（1.46）;Aoa（0.26）。

〔Aoa8-10，17-19，20-22，24-26〕γANF5-7，11-16，23，27-28-NH2：

FAB-MS：（M+H）+＝1988;氨基酸分析（%）：Asp（0.81）;Ser（1.82）;Gly（1.03）;Arg（3.00）;Tyr（0.96）;Ile（1.74）;Cys（1.94）;Aoa（3.07）。

本发明的另一个方面提供了治疗具有如下特征疾病的患者的方法，即液体，电解液，血压，眼内压，肾素，醛甾酮内环境平衡等异常，如高血压，肾疾病，醛甾酮增多症，心肌肥大，青光眼，和充血性心力衰竭，但并不限于此范围内。这个治疗方法包括向所说的患者施以治疗上有效量的化学式Ⅰ的化合物或其在药物上可接受的无毒盐。这里所用的术语“患者”指的是患有上述疾病的温血动物，例如哺乳动物，当然，狗，猫，大鼠，小鼠，马，牛，羊和人类等动物均在上面所定义的术语范围内。治疗的有效量是一个可以单剂或多剂给药的量，即此量能使体液，电解质，肾素，醛甾酮，眼内压或血压参数的异常有很大的改变，对患者的疾病产生理想的治疗效果，从而使这些参数的一个或多个趋向更正常的水平。

在上面描述的对患有疾病患者的有效治疗中，可以任何生物可接受的方式给患者服用有效量的化学式1的化合物，包括口服和肠胃外给药。例如，化学式1的化合物可以通过口服、皮下、肌内、静脉 内，颅内;鼻内，直肠，等方式给药。一般较好的方式是肠胃外给药。

化学式1化合物的治疗有效量将在约每千克体重每天0.5微克（微克/千克/天）到约每千克体重每天50毫克（毫克/千克/天）之间变化。当然治疗上的有效剂量与许多因素有关。这些因素包括哺乳动物的种类;它的大小，年龄和一般健康状况;包括特殊疾病状态，包括疾病状态的程度或复杂情况或严重性;每个病人的反应;特定化合物的给药，给药方式;施用制剂的生物可行性;剂量摄生法的选择，伴随使用的药疗法，及其它有关情况，当然并不限于这些。对于任何具体情况所用的正确剂量可用现有技术工艺上习用的范围和在其它情况下观察到的相似结果来容易地确定。然而，上述剂量范围仅是举例说明并不是在任何方面限制本发明的范围。

另一方面，本发明提供了给患者施以化学式1化合物的药物组合物。这些组合物包括1种或多种有疗效量的化学式Ⅰ的化合物和一种或多种药学上可接受的载体。这些组合物使用在药学科学领域熟知的常用工艺和方法制备。在制备本发明的组合物时，化学式1的化合物通常将与载体混合，或用载体稀释，或将其封闭在胶囊、香囊，或其它容器形式的载体内。当化学式Ⅰ的化合物与一种或多种载体混合，或稀释，这样的载体可能是固体，半固体，或液体物质，从而充当化学式Ⅰ的化合物的媒介物，赋形剂，或培养基。因而该组合物可以以如下形式存在：片剂，粉剂，锭剂，香囊，扁囊剂，酏剂，乳剂，溶液，糖浆，凝胶，气溶胶（在固体或液体介质中），软膏，软和硬的明胶胶囊，栓剂，无菌注射溶液，无菌包装粉剂。

适宜载体，赋形剂和释释剂的一些例子有乳糖，葡萄糖、蔗糖、 山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶，磷酸钙，藻酸盐，硅酸钙，微晶质纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素，黄蓍胶，明胶，糖浆，甲基纤维素，甲基和对羟基苯甲酸丙酯，滑石，硬脂酸镁，水，和矿物油。附加组分可能还有润滑剂，湿润剂，乳化和悬浮剂，防腐剂，增甜剂，增香剂，或着色剂。用本领域熟知的标准方法和实践配制本发明的组合物以便在施以患者后，化学式1的化合物可被瞬间、持续、或推迟释放。

对于口服给药，化学式1的化合物可以与载体和稀释剂混合制成片剂或包含在明胶胶囊中。该混合物可以交替地溶于液体如10%葡萄糖溶液，等渗盐水，无菌水，等等中，从而可以静脉内给药或注射。如果需要的话，该溶液可以冻干和贮藏在无菌安瓿中，从而通过加入无菌注射用水重新构成肌内注射液。

最好用单位剂量的形式配制组合物，每一剂量含有从约5微克到约1000毫克，通常含有从约10微克到约100毫克的与药学上适宜的载体结合的一种或多种化学式1的化合物。术语“单位剂量形式”是指对人类或其它患者适用的作为单元剂量的物理上独立的单位。每一个单位含有计算出的适合于提供治疗上有效量的一种或多种化学式1化合物的预定数量，此时可以作为单剂量或多剂量摄生法的一部分给药。

已经证明，用体外方法可将天然存在的肽γANF1-28和其碎片接合到在各种组织膜上的特定ANF-接合点上，所说的这些组织包括血管平滑肌细胞，肾皮质细胞，肾上腺球状带细胞，肺组织和脑组织。一般可以相信，这样的接合点至少可以部分地反映通过ANF发挥其在人体内的生物活性的一种机制。也可以相信化学式1 的化合物是被接合到特定ANF-接合点上。化学式1化合物对特殊组织中特定ANF-接合点的体外接合亲和力可以测定，即采用已知的和本领域中所知的标准实践方法和程序，通过标准受体接合方法测定，例如Napier等人（Proc.Nat.Acad.Sci美国，81：5946-50，1984）和布克等人（科学，226：987-89，1984）的方法。例如，在有碘化的（125Ⅰ）γANF5-28存在下，用不同浓度的化学式1的化合物可以培养组织匀浆，碘化的（125I）γANF5-28的量大约等于其对高亲合力、特殊ANF接合点的离解常数（KD）。在各种浓度下，用化学式1的化合物从特殊ANF-接合点中替换125I-γANF5-28的量可以通过测量达到平衡时接合在该组织上的125I的量来测定。这些数据可以用来计算化学式1化合物对于所试验的特殊组织匀浆的KI。一般地，KI与所试验化合物对接合点的亲合力成反比。一般选用对任何特殊ANF受体的KI小于约500nM的化学式1的化合物。而那些对任何特殊ANF-受体的KI小于50nM的化学式1化合物是更好的。当然，应该明白，受体接合试验的结果取决于许多参数，这些参数包括试验系统的温度，所用pH值，试验化合物在试验系统中的溶解度，培养时间，所用125I-ANF的浓度，所用的天然存在的ANF肽，试验的类型，组织源，等等。一般地，与熟知的以及本领域中能认识到的标准试验和方法相一致的试验参数是较好的。

本申请是1987年5月21日申请的美国专利申请号为053166的部分继续申请。