技术领域
[0001] 本
发明属于环境保护技术领域，具体涉及一种养殖业抗生素减量化制剂及其制备方法。
背景技术
[0002] 抗生素在养殖业的广泛应用有效控制了养殖动物各类
疾病的爆发，极大地促进了养殖业的发展，然而抗生素的长期大量使用带来的细菌耐药性甚至是多重耐药菌问题，已经严重威胁着生态安全及人类健康。抗生素的弊端日益显现，但禁止抗生素在养殖业的使用将会危及养殖动物的安全，直接影响全球食品供应，因此寻找合适的方法减少抗生素在养殖业的使用是目前亟待解决的问题。
[0003]
益生菌是一类从宿主主体内分离的正常有益菌群制成的活菌制剂及
微生物发酵产品。通过调节养殖动物肠道内微生物平衡产生有益影响，将其应用于养殖中，可以
预防病害、改善养殖动物肠道菌群、促进生长，可以大大降低养殖动物的死亡率。研究发现细菌可以通过分泌、识别、感应一种或多种
信号分子来实现相互间的信息交流，这种现象叫群体感应。细菌的群体感应参与许多生物学功能的调控，包括致病因子的表达、
生物膜的形成、抗生素的合成、生物发光及细菌耐药性等。细菌群体感应
抑制剂能够抑制多种微生物的群体感应现象，包括病原菌生物膜的形成。
[0004] 抗菌肽是由基因编码、核糖体合成的小分子多肽类物质，一般由10～50个
氨基酸组成，分子量小。迄今为止，已从昆虫、两栖类、
哺乳动物等各类生物中分离、鉴定出千余种抗菌肽。这些抗菌肽不仅具有广谱的抗细菌活性，还有抗
真菌、病毒和寄生虫的活性，甚至还具有抗
肿瘤的功能。抗菌肽免疫原性低，且还具有无残留毒性、不易产生耐药性等优点，成为一类极具潜
力的新型抗菌药。目前抗菌肽的抗菌活性已经引起了人们的广泛关注，其研究和应用已经成为生物制药领域的热点。经过对
现有技术文献的检索发现，李波等发表在《中国畜牧兽医》，2014，41(7)：99-103的文章中，将天蚕素抗菌肽添加到日粮中能够提高断奶仔猪生长性能，降低料重比和腹泻率，促使
机体产生非特异性免疫，并且并未对仔猪的生长指标产生不良影响。肖发沂等在《动物健康》，2019，55(1)：124-126上发表的文章中，发现在断奶仔猪的
基础饲料中添加1.0g/kg的抗菌肽(多肽菌素S100)，饲养28天后，与对照组相比，实验组仔猪的平均日增重提高11.31％，耗料增重比降低9.55％，腹泻率降低69.28％，脾脏指数与胸腺指数分别提高17.70％和20.49％。这些研究都表明，抗菌肽可以作为添加剂添加到饲料中，但到目前为止还没有将抗菌肽与细菌群体感应抑制剂复配并利用该类饲料添加剂应用于养殖业，用来减少抗生素使用量的报道。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于针对目前抗生素大量使用的问题，提供一种养殖业抗生素减量化制剂及其制备方法。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0007] 一种养殖业抗生素减量化制剂，减量化制剂按重量百分比计，70-80％抗菌肽、10-15％负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂、3-8％肠道益生菌剂和5-10％助剂。
[0008] 所述抗菌肽为天蚕素Cecropin、防御素Defensins、蛙皮素Magainins、
蜂毒素Melittins、百日咳杆菌素Bactenecins、死亡素Thanatin、组氨素Histatin、
蜜蜂抗菌肽Apidaecin、短杆菌肽S(Gramicidin S)、乳链菌肽(Nisin)、石斑鱼抗菌肽Epinecidin-1中的一种或几种。
[0009] 所述负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂为细菌群体感应抑制剂与缓释剂按
质量比为1：2-3混合，再置于-20℃环境中预冷30-60min，然后直接置于65-85℃环境预热1-3小时，使得细菌群体感应抑制剂负载在缓释剂上，即得；其中，缓释剂是60-120目大小的海泡石粉颗粒。
[0010] 所述细菌群体感应抑制剂为二
酮哌嗪类化合物、溴化呋喃酮类化合物、类黄酮、N-酰基高丝氨酸内酯类化合物中的一种或几种。
[0011] 所述二酮哌嗪类化合物为Cyclo(Pro-Phe)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Pro-Val)、Cyclo(Pro-Leu)和Cyclo(Ala-Val)中的一种或几种；溴化呋喃酮类化合物为4-溴-5-乙烯基溴-3-正丁基呋喃酮、5-乙烯基溴-3-正丁基呋喃酮、4-溴-5-乙烯基溴代呋喃酮、4-溴-5-乙烯基溴-3-甲基呋喃酮、5-乙烯基溴-3-甲基呋喃酮中的一种或几种；类黄酮化合物为
儿茶素；N-酰基高丝氨酸内酯类化合物为4-(3-氯-苯
氧基)-N-(2-氧-四氢-噻吩-3-基)-丁酰胺、4-(4-氯-苯氧基)-N-(2-氧-四氢-噻吩-3-基)-丁酰胺、4-(4-氯-苯氧基)-N-(2-氧-四氢-呋喃-3-基)-丁酰胺、4-(4-氟-苯胺基)-N-(2-氧-四氢-呋喃-3-基)-丁酰胺中的一种或几种。
[0012] 所述肠道益生菌剂按重量百分比计，20-30％益生菌与40-60％
粪便干粉、15-20％
活性炭颗粒和5-10％
甜味剂混合制成；其中，益生菌是芽孢杆菌、乳酸菌、
沼泽红假单胞菌、硝化细菌、
酵母菌中的一种或几种的干粉；活性炭颗粒大小为200-400目；甜味剂为
安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯
蔗糖、山梨糖醇中的一种或几种；粪便干粉为畜、禽、鱼、虾所产生的粪便干粉。
[0013] 所述助剂按重量百分比计，海藻粉(8-12％)、大洋富钴结壳(5-10％)、秸秆粉(4-6％)、豆油(12-18％)、粗
纤维(5-10％)、虾蜕壳素(4-6％)、
腐殖酸钠(5-8％)、50％氯化胆
碱(2-4％)、10％喹
乙醇(1-3％)、
牛磺酸(3-8％)、露保细盐(5-8％)、乳酸
钙(2-3％)、
硫酸铜(0.5-2％)、硫酸亚
铁(1-3％)、双乙酸钠(1-2％)、加丽素粉红(0.5-2％)、氨基酸组剂(L-甘氨酸、赖氨酸、胱氨酸等)(5-8％)、维生素组剂(维生素A、B、C、E)(3-5％)、
粘合剂(2-
5％)、25％大蒜素(0.5-2％)、15％L-肉碱(0.5-1.5％)、叶酸(1-3％)、促生长因子(0.5-
2％)、辅酶Q10(0.5-1％)。
[0014] 一种养殖业抗生素减量化制剂的制备方法，按照上述计量计，将抗菌肽、负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂、肠道益生菌剂和助剂混合，即得制剂。
[0015] 一种养殖业抗生素减量化制剂的应用，所述制剂在养殖业中作为抗生素减量化制剂中的应用。
[0016] 通过采用本发明的养殖业抗生素减量化制剂，使用减量化制剂时，抗生素的使用量可降低30-100％。
[0017] 本发明所具有的优点：
[0018] 本发明利用抗菌肽、群体感应抑制剂、粪便干粉、益生菌剂及相关助剂作原料来制备减量化制剂，用以减少养殖业中抗生素的使用。所用原料简单，成本低廉，但却能使得目前养殖业中抗生素的使用量减少50-100％。
具体实施方式
[0019] 下面通过
实施例对本发明进一步说明，然而本发明并不局限于以下实施例。
[0020] 实施例1
[0021] 抗生素减量化制剂按重量百分比计，抗菌肽(80％)、负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂(10％)、肠道益生菌剂(5％)、助剂(5％)配制成混合物。
[0022] 所述助剂按如下质量比例混合：海藻粉(8％)、大洋富钴结壳(6％)、秸秆粉(6％)、豆油(12％)、粗纤维(10％)、虾蜕壳素(4％)、腐殖酸钠(5％)、50％氯化胆碱(2％)、10％喹乙醇(1％)、牛磺酸(8％)、露保细盐(5％)、乳酸钙(3％)、硫酸铜(0.5％)、硫酸亚铁(3％)、双乙酸钠(2％)、加丽素粉红(2％)、氨基酸组剂(L-甘氨酸：赖氨酸：胱氨酸＝2:2:1)(8％)、维生素组剂(维生素A：B：C：E＝1:1:1:1)(3％)、粘合剂(5％)、25％大蒜素(2％)、15％L-肉碱(0.5％)、叶酸(1％)、促生长因子(2％)、辅酶Q10(1％)。
[0023] 所述抗菌肽为天蚕素Cecropin与防御素Defensins的混合物，质量比为3:1。
[0024] 所述负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂为细菌群体感应抑制剂与缓释剂按质量比为1：2混合，再置于-20℃环境中预冷40min，然后直接置于65℃环境预热1小时，使得细菌群体感应抑制剂负载在缓释剂上，即得；其中，缓释剂是60目的海泡石粉颗粒。
[0025] 所述细菌群体感应抑制剂为Cyclo(Pro-Phe)、Cyclo(Pro-Tyr)、5-乙烯基溴-3-正丁基呋喃酮、儿茶素的混合物，其质量比为5:4:1:1。
[0026] 所述肠道益生菌剂为按如下的质量比：粪便干粉(40％)、益生菌干粉(30％)、活性炭颗粒(20％)和甜味剂(10％)。其中，粪便干粉为将健康生长的猪、牛、羊产生的粪便经30℃干燥后
粉碎至干粉。
[0027] 将硫酸黏菌素按1.0g/kg的重量比添加到饲料中喂养乳猪以
治疗大肠杆菌引发的肠道感染，三天后治愈，该组作为对照组；同时将上述获得的减量抑制剂以30wt％的比例添加到猪饲料中，再将硫酸黏菌素按0.5g/kg的重量比添加到含减量化制剂的饲料中喂养给大肠杆菌引发肠道感染的乳猪，作为实验组，发现三天后同样得到治愈，
硫酸盐黏菌素使用量降低了50％。
[0028] 实施例2
[0029] 抗生素减量化制剂按重量百分比计，抗菌肽(70％)、负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂(12％)、肠道益生菌剂(8％)、助剂(10％)配制成混合物。
[0030] 所述助剂按如下质量比例混合：海藻粉(12％)、大洋富钴结壳(5％)、秸秆粉(4％)、豆油(18％)、粗纤维(5％)、虾蜕壳素(6％)、腐殖酸钠(8％)、50％氯化胆碱(4％)、10％喹乙醇(3％)、牛磺酸(3％)、露保细盐(8％)、乳酸钙(2％)、硫酸铜(2％)、硫酸亚铁(1％)、双乙酸钠(1％)、加丽素粉红(0.5％)、氨基酸组剂(L-甘氨酸：赖氨酸：胱氨酸＝2:2:
1)(5％)、维生素组剂(维生素A：B：C：E＝1:1:1:1)(5％)、粘合剂(2％)、25％大蒜素(0.5％)、15％L-肉碱(1％)、叶酸(2％)、促生长因子(1.5％)、辅酶Q10(0.5％)。
[0031] 所述抗菌肽为天蚕素Cecropin与组氨素Histatin的混合物，质量比为4:1。
[0032] 所述负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂为细菌群体感应抑制剂与缓释剂按质量比为1：3混合，再置于-20℃环境中预冷60min，然后直接置于65℃环境预热3小时，使得细菌群体感应抑制剂负载在缓释剂上，即得；其中，缓释剂是100目的海泡石粉颗粒。
[0033] 所述细菌群体感应抑制剂为Cyclo(Pro-Val)、Cyclo(Pro-Leu)、4-溴-5-乙烯基溴代呋喃酮、4-溴-5-乙烯基溴-3-甲基呋喃酮的混合物，其质量比为5:3:2:1。
[0034] 所述肠道益生菌剂为按如下的质量比：粪便干粉(60％)、益生菌干粉(20％)、活性炭颗粒(15％)、甜味剂(5％)。其中，粪便干粉为将健康生长的鸡所产生的粪便经45℃干燥后粉碎至干粉。
[0035] 将土霉素粉末按每1kg体重30mg，一日三次口服量以治疗雏鸡白痢，发现连续服药4天后，得以治愈，该组作为对照组；同时将得到的抗生素减量化制剂以40wt％的比例添加到鸡饲料中，再将土霉素粉末按每1kg体重16mg，一日三次口服量以治疗雏鸡白痢，作为实验组，发现连续服药3天后，同样得以治愈，而土霉素的用量较对照组降低了60％。
[0036] 实施例3
[0037] 抗生素减量化制剂按重量百分比计，抗菌肽(75％)、负载细菌群体感应抑制剂(13％)、肠道益生菌剂(4％)、助剂(8％)配制成混合物。
[0038] 所述助剂按如下质量比例混合：海藻粉(9％)、大洋富钴结壳(10％)、秸秆粉(4％)、豆油(16％)、粗纤维(6％)、虾蜕壳素(4％)、腐殖酸钠(6％)、50％氯化胆碱(2.5％)、10％喹乙醇(2.5％)、牛磺酸(6％)、露保细盐(7％)、乳酸钙(3％)、硫酸铜(1.5％)、硫酸亚铁(2％)、双乙酸钠(1％)、加丽素粉红(1.5％)、氨基酸组剂(L-甘氨酸：赖氨酸＝2:1)(7％)、维生素组剂(维生素A：B：C：E＝1:2:1:2)(3％)、粘合剂(2％)、25％大蒜素(0.5％)、
15％L-肉碱(1.5％)、叶酸(3％)、促生长因子(0.5％)、辅酶Q10(0.5％)。
[0039] 所述抗菌肽为石斑鱼抗菌肽Epinecidin-1、短杆菌肽S(Gramicidin S)、乳链菌肽(Nisin)中的混合物，质量比为3:1:1。
[0040] 所述负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂为细菌群体感应抑制剂与缓释剂按质量比为2：5混合，再置于-20℃环境中预冷50min，然后直接置于65℃环境预热40min，使得细菌群体感应抑制剂负载在缓释剂上，即得；其中，缓释剂是120目的海泡石粉颗粒。
[0041] 所述细菌群体感应抑制剂为Cyclo(Pro-Phe)、Cyclo(Ala-Val)、儿茶素、4-(3-氯-苯氧基)-N-(2-氧-四氢-噻吩-3-基)-丁酰胺的混合物，其质量比为4:4:2:1。
[0042] 所述肠道益生菌剂为按如下的质量比：粪便干粉(50％)、益生菌干粉(25％)、活性炭颗粒(17％)、甜味剂(8％)。其中，粪便干粉为将健康生长的罗非鱼、南美白对虾所产生的粪便经35℃干燥后粉碎至干粉。
[0043] 将氟苯尼考粉末按每1kg体重25mg，一日两次的口服量投喂给罗非鱼以治疗细菌性烂鳃病，发现连续服药5天后，得以治愈，该组作为对照组；同时将得到的抗生素减量化制剂以50wt％的比例添加到鱼饲料中，不投喂任何抗生素，作为实验组，发现连续服药10天后，同样得以治愈，而氟苯尼考的用量较对照组降低了100％。
[0044] 实施例4
[0045] 抗生素减量化制剂按重量百分比计，抗菌肽(75％)、负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂(12％)、肠道益生菌剂(6％)、助剂(7％)配制成混合物。
[0046] 所述助剂按如下质量比例混合：海藻粉(10％)、大洋富钴结壳(8％)、秸秆粉(5％)、豆油(15％)、粗纤维(8％)、虾蜕壳素(5％)、腐殖酸钠(6％)、50％氯化胆碱(3％)、10％喹乙醇(2％)、牛磺酸(5％)、露保细盐(6％)、乳酸钙(2.5％)、硫酸铜(1％)、硫酸亚铁(2％)、双乙酸钠(1.5％)、加丽素粉红(1％)、氨基酸组剂(L-甘氨酸：赖氨酸：胱氨酸＝2:3:
1)(6％)、维生素组剂(维生素A：B：C：E＝1:1:2:1)(4％)、粘合剂(3％)、25％大蒜素(1％)、
15％L-肉碱(1％)、叶酸(2％)、促生长因子(1％)、辅酶Q10(1％)。
[0047] 所述抗菌肽为蜜蜂抗菌肽Apidaecin、短杆菌肽S(Gramicidin S)、乳链菌肽(Nisin)、石斑鱼抗菌肽Epinecidin-1的混合物，其质量比为1:2:3:3。
[0048] 所述负载细菌群体感应抑制剂的缓释剂为细菌群体感应抑制剂与缓释剂按质量比为1：2混合，再置于-20℃环境中预冷1小时，然后直接置于65℃环境预热75min，使得细菌群体感应抑制剂负载在缓释剂上，即得；其中，缓释剂是80目大小的海泡石粉颗粒。
[0049] 所述细菌群体感应抑制剂为Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Pro-Val)、4-溴-5-乙烯基溴代呋喃酮的混合物，其质量比为3:2:1。
[0050] 所述肠道益生菌剂为按如下的质量比：粪便干粉(47％)、益生菌干粉(28％)、活性炭颗粒(18％)、甜味剂(7％)制备成肠道益生菌剂。；其中，粪便干粉为将健康生长的鱼、虾所产生的粪便经37℃干燥后粉碎至干粉。
[0051] 将氟苯尼考粉末按每1kg体重25mg，一日两次的口服量投喂给石斑鱼及南美白对虾以治疗其由弧菌引发的疾病，发现连续服药5天后，得以治愈，该组作为对照组；同时将得到的抗生素减量化制剂以45wt％的比例添加到饲料中，再将氟苯尼考粉末按1kg体重10mg，一日两次的口服量投喂给石斑鱼及南美白对虾，作为实验组，发现连续服药4天后，其由弧菌引发的疾病同样得以治愈，而氟苯尼考的用量较对照组降低了68％。
