一株毒杀植物寄生线虫的产紫青霉及其制备方法和应用
阅读：130发布：2020-06-12
专利汇可以提供一株毒杀植物寄生线虫的产紫青霉及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一株毒杀 植物 寄生 线虫 的产紫青霉及其制备方法和应用。该毒杀植物寄生线虫的产紫青霉的菌株号为MHZ111，其在中国 微 生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.11630。活性成分为用乙酸乙酯从产紫青霉MHZ111的培养物中提取得到的溶于乙酸乙酯的物质的植物寄生线虫 抑制剂 ，在活性成分含量为1.5g/L和1.0g/L时，对南方根结线虫二龄幼虫的杀伤 力 显著高于阿维菌素和噻唑膦；在活性成分含量为1.5g/L时，南方根结线虫几乎不能孵化，在活性成分含量为1.0g/L和1.5g/L时，对南方根结线虫 卵囊 孵化的抑制作用与阿维菌素和噻唑膦相当。，下面是一株毒杀植物寄生线虫的产紫青霉及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.产紫青霉（Penicillium purpurogenum），其菌株号为MHZ111，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.11630。
2.权利要求1所述产紫青霉的培养物，是将权利要求1所述的产紫青霉在微生物培养基中培养得到的培养容器内的物质，所述物质包括所述产紫青霉和所述产紫青霉的代谢物。
3.权利要求1所述的产紫青霉和/或权利要求2所述的培养物的下述任一种用途：
A1）在制备南方根结线虫抑制剂中的应用；
A2）在制备抑制南方根结线虫危害番茄药剂中的应用。
4.权利要求1所述的产紫青霉和/或权利要求2所述的培养物的下述任一种用途：
B1）在抑制南方根结线虫中的应用；
B2）在抑制南方根结线虫危害番茄中的应用。
一株毒杀植物寄生线虫的产紫青霉及其制备方法和应用
技术领域
背景技术
[0002] 植物寄生线虫是指能寄生于植物的各种组织，使植物发育不良，并且在感染寄主的同时会传播其他植物病原，造成植物出现疾病症状的一类线虫。它在世界上许多国家和地区发生和为害，种类多种多样。目前世界上已记载的植物寄生线虫约有200多属5000多种(陈立杰，段玉玺.2006.植物寄生线虫虫种资源的分类鉴定.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,24:s29-33)。据估计，全球每年因植物寄生线虫给农业、林业生产造成的损失高达1,570亿美元(Abad P,et al.2008.Genome sequence of the metazoan plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita.Nature Biotechnology,26:909-915)，而实际的损失远远超过估计，理由是许多线虫造成的危害因没有田间可见症状或专化性特征而未引起注意(王寿华.果树线虫学.北京:中国农业科技出版社,1994.P.1-5)，此外，世界范围内对线虫为害的新发现还在不断增加，而且一些更新的农业栽培体制使线虫问题更加突出，再者，线虫与其它生物相互作用而对植物产生的直接或间接影响还在急剧增加。从这种意义上说，线虫造成的危害较其它生物更加隐蔽！目前对植物有害的线虫约有3000多种，在我国主要有根结线虫、胞囊线虫、松材线虫、甘薯茎线虫等。根结线虫是农业上为害最大的一类线虫，病害发生后，一般减产10％-15％左右，严重的高达75％以上，甚至绝收(A.G.Whitehead,1998.Plant Nematode Control.ISBN0851991882 CAB International)。
根结线虫主要有南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)、花生根结线虫(Meloidogyne arenaria)和北方根结线虫(Meloidogyne hapla)，其中以南方根结线虫和爪哇根结线虫两种发生较普遍。南方根结线虫寄主范围很广，可以危害几百种植物。但近年来，化学杀线剂不仅成本高，而且防治效果不理想，同时新型的杀线剂开发少、能选择的范围窄，大多数品种的使用会杀灭一些捕食植物病原线虫的肉食线虫和土栖幼小动物，对土壤的活化、生态的保护、寄生线虫的天敌繁衍有很大副作用，甚至有的品种对人有致畸、致癌或影响生育之虞(侯金丽.2015.我国植物寄生线虫防治研究进展.现代农业科技.7:136)。21世纪称为环保世纪，一些有效的化学杀线剂的应用逐步受到限制，因此对植物寄生线虫的生物防治研究自然成为热点问题。
根结线虫主要有南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)、花生根结线虫(Meloidogyne arenaria)和北方根结线虫(Meloidogyne hapla)，其中以南方根结线虫和爪哇根结线虫两种发生较普遍。南方根结线虫寄主范围很广，可以危害几百种植物。但近年来，化学杀线剂不仅成本高，而且防治效果不理想，同时新型的杀线剂开发少、能选择的范围窄，大多数品种的使用会杀灭一些捕食植物病原线虫的肉食线虫和土栖幼小动物，对土壤的活化、生态的保护、寄生线虫的天敌繁衍有很大副作用，甚至有的品种对人有致畸、致癌或影响生育之虞(侯金丽.2015.我国植物寄生线虫防治研究进展.现代农业科技.7:136)。21世纪称为环保世纪，一些有效的化学杀线剂的应用逐步受到限制，因此对植物寄生线虫的生物防治研究自然成为热点问题。
发明内容
[0003] 本发明所要解决的技术问题是如何防治植物寄生线虫。
[0004] 为解决以上技术问题，本发明提供了一株产紫青霉。
[0005] 本发明所提供的产紫青霉，其菌株号为MHZ111，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.11630。
[0006] 上述产紫青霉MHZ111可以分生孢子、菌丝或含有分生孢子和/或菌丝的菌丝体的形式存在。
[0007] 上述产紫青霉MHZ111的培养物也属于本发明的保护范围。
[0008] 本发明所提供的产紫青霉MHZ111的培养物，是将产紫青霉MHZ111在微生物培养基中培养得到的培养容器内的物质，所述物质包括所述产紫青霉和所述产紫青霉的代谢物。
[0009] 上述产紫青霉MHZ111的培养物中，所述微生物培养基可为固体培养基或液体培养基。
[0011] 为解决以上技术问题，本发明提供了植物寄生线虫抑制剂。
[0012] 本发明所提供的植物寄生线虫抑制剂，它的活性成分是产紫青霉MHZ111和/或产紫青霉MHZ111的代谢物。
[0013] 所述植物寄生线虫抑制剂具体可为用乙酸乙酯从产紫青霉MHZ111的培养物中提取得到的溶于乙酸乙酯的物质。
[0014] 上述植物寄生线虫抑制剂中，所述植物寄生线虫可为根结线虫。
[0015] 上述植物寄生线虫抑制剂中，所述根结线虫可为南方根结线虫。
[0016] 上述产紫青霉MHZ111和/或产紫青霉MHZ111的代谢物和/或产紫青霉MHZ111的培养物在制备植物寄生线虫抑制剂中的应用或在制备抑制植物寄生线虫危害番茄药剂中的应用也属于本发明的保护范围。
[0017] 上述产紫青霉MHZ111和/或产紫青霉MHZ111的代谢物和/或产紫青霉MHZ111的培养物在抑制植物寄生线虫中的应用或抑制植物寄生线虫危害番茄中的应用也属于本发明的保护范围。
[0018] 上述应用中，所述植物寄生线虫可为根结线虫。
[0019] 上述应用中，所述根结线虫可为南方根结线虫。
[0020] 上文中，所述植物寄生线虫抑制剂中，除所述活性成分外，还含有载体。所述载体可为农药领域常用的且在生物学上是惰性的载体。所述载体可为固体载体或液体载体；所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇；所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。
[0021] 所述植物寄生线虫抑制剂中，上述产紫青霉MHZ111可以分生孢子、菌丝或含有分生孢子和/或菌丝的菌丝体的形式存在。
[0022] 所述植物寄生线虫抑制剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
[0024] 实验证明，活性成分为用乙酸乙酯从产紫青霉MHZ111的培养物中提取得到的溶于乙酸乙酯的物质的植物寄生线虫抑制剂，在活性成分含量为1.5g/L和1.0g/L时，对南方根结线虫二龄幼虫的杀伤力显著高于阿维菌素和噻唑膦；在活性成分含量为0.5g/L时，对南方根结线虫二龄幼虫的杀伤力和噻唑膦相当；在活性成分含量为0.3g/L时，对南方根结线虫二龄幼虫的杀伤力与阿维菌素相当；在活性成分含量为1.5g/L时，南方根结线虫几乎不能孵化，在活性成分含量为1.0g/L和1.5g/L时，对南方根结线虫卵囊孵化的抑制作用与阿维菌素和噻唑膦差异不显著。产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111固体发酵培养物在没有任何助剂填加的条件下，对番茄根结线虫病防效达80％以上。经产紫青霉MHZ111和/或其代谢物或产紫青霉MHZ111的培养物处理后的番茄苗根系发达，根结少，植株生长正常，对番茄安全。
[0025] 保藏说明
[0026] 菌种名称：产紫青霉(Penicillium purpurogenum)
[0027] 菌株编号：MHZ111
[0028] 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0029] 保藏机构简称：CGMCC
[0030] 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0031] 保藏日期：2015年11月6日
[0034] 图2为40X光学显微镜下菌株MHZ111分生孢子梗形态。
[0035] 图3为菌株MHZ111的ITS序列PCR扩增产物电泳图。
[0036] 图4为菌株MHZ111的18SrDNA序列PCR扩增产物电泳图。
[0037] 图5为植物寄生线虫抑制剂处理后番茄根系照片。
[0038] 图6为CK1处理后番茄根系照片。
具体实施方式
[0039] 下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0040] 下述实施例中的20％噻唑膦水乳剂为中迅农科股份有限公司产品，10％噻唑膦颗粒剂为日本石原产业株式会社产品，20％噻唑膦水乳剂中噻唑膦的供试终浓度为10mg/L，10％噻唑膦颗粒剂用量为50kg/hm2。
[0041] 下述实施例中的1.8％阿维菌素乳油为桂林集琦生化有限公司产品，1.8％阿维菌素乳油中阿维菌素乳油的供试终浓度为10mg/L。
[0042] 实施例1、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111的分离与鉴定
[0043] 1.1菌株分离
[0044] 菌株MHZ111采用稀释平板分离法从中国黑龙江漠河永冻土中分离得到。称取漠河-1永冻土10g放入90ml无菌水中，用1ml无菌移液管吸取1ml 10 浓度的菌液于一管9ml无菌水中，摇匀即为10-2浓度的菌液，同样方法，依次稀释到10-4。将上述10-2、10-3和10-4土壤菌液分别涂布到PDA平板上，吹干后倒置于25℃培养箱中培养3-5天，将分离到的真菌转接到PDA斜面上培养，待长好后，置于冰箱中保存。取编号为MHZ111的菌株进行下述鉴定。
[0045] 1.2菌株鉴定
[0046] 1.2.1菌株形态观察
[0047] 将菌株用接种针挑至马丁培养基(培养基配方：葡萄糖1g、蛋白胨0.5g、KH2PO4·3H2O 0.1g、MgSO4·7H2O 0.05g、0.1％孟加拉红溶液0.33ml、琼脂1.5～2g、蒸馏水100ml，自然pH，2％去氧胆酸钠溶液2ml(预先灭菌，临用前加入)，链霉素溶液(10000u/ml)0.33ml(临用前加入))平板中央，25℃培养箱中培养，72h后照相，并于显微镜下观察分生孢子梗及分生孢子的形态。从图1中可以看到菌株MHZ111在马丁培养基上生长迅速，菌落呈圆形，初在边缘产生白色菌丝，渐变为绿色，产孢量大。从图2显微镜下可以看到MHZ111菌丝有横隔，分生孢子梗顶端产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，分生孢子球形或椭圆形。鉴于分生孢子梗和菌落等典型形态特征，初步鉴定MHZ111为青霉属真菌。
[0048] 1.2.2分子生物学鉴定
[0049] 提取MHZ111菌株的基因组DNA，-20℃保存备用。采用真菌rDNA-ITS通用引物ITS1和ITS2和18SrDNA通用引物NS1和FR1对菌株基因组DNA进行PCR扩增，引物序列如下：
[0050] ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG
[0051] ITS2：GCTGCGTTCTTCATCGATGC
[0052] NS1:CCA GTA GTC ATA TGC TTG TCT C
[0053] FR1:AIC CAT TCA ATC GGT AIT
[0054] rDNA-ITS PCR扩增的反应体系：10×PCR Buffer为2.5μL，dNTPs为1.5μL，TaqDNA聚合酶为0.7μL，引物为1.5μL，模板DNA为1.5μL，ddH2O为17.3μL，总体积为25μL。rDNA-ITS PCR扩增反应的条件为：94℃预变性2min，94℃变性45S，37℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环，72℃延伸10min。18SrDNA PCR扩增的反应体系：2.5ul 10*Ex Taq buffer，0.3ul Ex Taq，2ul dNTP，1ul NS1(10uM)，1ul FR1(10uM)，模板1ul，无菌去离子水补充体积至25ul。PCR反应条件：95℃5min，94℃30s、61℃1min、72℃1.5min 2个循环，94℃30s、60℃1min、72℃1.5min 2个循环，94℃30s、59℃1min、72℃1.5min 2个循环，94℃30s、58℃1min、72℃
1.5min2个循环，94℃30s、57℃1min、72℃1.5min 5个循环，94℃30s、56℃1min、72℃
1.5min2个循环，94℃30s、55℃1min、72℃1.5min 10个循环，94℃30s、54℃1min、72℃
1.5min 2个循环，94℃30s、53℃1min、72℃1.5min 5个循环，72℃10min。
1.5min2个循环，94℃30s、57℃1min、72℃1.5min 5个循环，94℃30s、56℃1min、72℃
1.5min2个循环，94℃30s、55℃1min、72℃1.5min 10个循环，94℃30s、54℃1min、72℃
1.5min 2个循环，94℃30s、53℃1min、72℃1.5min 5个循环，72℃10min。
[0055] 扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测，引物合成及PCR产物的纯化和序列测定委托上海生工生物工程技术服务有限公司完成。
[0056] rDNA-ITS和18SrDNA序列结果利用美国国家生物工程信息中心(NCBI，http：www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)的BLAST网络工具与GenBank数据库中相关真菌菌株的序列进行最高同源性比对，从DNA水平确定青霉属的种类。
[0057] 利用rDNA-ITS和18SrDNA通用引物进行PCR扩增，分别获得250bp左右和1800bp左右的片段(图3、图4)，而后测序获得rDNA-ITS序列(序列表中的序列1)和18SrDNA序列(序列表中的序列2)。将得到这两个序列与GenBank数据库中的已知青霉属进行同源性搜索BLAST比对(表1)，MHZ111的ITS序列与18SrDNA序列均与Penicillium purpurogenum同源性达100％。因此，从DNA遗传信息方面确定MHZ111菌株为产紫青霉(Penicillium
purpurogenum)。
purpurogenum)。
[0058] 表1菌株MHZ111rDNA-ITS和18SrDNA基因测序结果比对分析
[0059]
[0060]
[0061] 产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111已于2015年11月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11630。
[0062] 实施例2、植物寄生线虫抑制剂及其杀线虫活性
[0063] 1.产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111的培养
[0064] 1.1试管种培养
[0065] 将产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111接入PDA培养基，在25℃培养7d，获得试管种。
[0066] 其中，马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基：马铃薯去皮，200g切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，加20g葡萄糖，琼脂17g，蒸馏水定容到1000mL，煮沸混匀，121℃条件下灭菌20分钟，得到PDA培养基。
[0067] 1.2产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111液体发酵培养
[0068] 将1.1的试管种接种到装有125mL PD液体培养基的500mL三角瓶中，25℃～28℃下，摇床转速以200r·min-1～220r·min-1、发酵72h，得到产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111发酵液。
[0069] 其中，马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基：马铃薯去皮，200g切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，加20g葡萄糖，蒸馏水定容到1000mL，煮沸混匀，121℃条件下灭菌20分钟，得到PD液体培养基。
[0070] 1.3固体发酵培养
[0071] 将步骤1.2的产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111发酵液接种到装有糙米培养基(糙米80g和水125mL)的500mL三角瓶中，每瓶接种5mL发酵液，25℃培养40d，得到产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111固体发酵培养物。
[0072] 其中，固体发酵培养基：糙米80g，水125mL，121℃条件下灭菌20分钟，得到固体发酵培养基。糙米是稻谷脱去外保护皮层稻壳后的颖果，内保护皮层(果皮、种皮、珠心层)完好的稻米籽粒。
[0073] 2.植物寄生线虫抑制剂的制备
[0074] 将1.3的产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111固体发酵培养物，用玻璃棒将其搅碎，每瓶加入300mL乙酸乙酯，置20℃150rpm/min摇床上动态萃取24h，萃取3次，抽滤得乙酸乙酯相，用旋转蒸发仪(温度：30℃，转数：70转)旋转蒸发除去乙酸乙酯相中乙酸乙酯，得到乙酸乙酯萃取物，该乙酸乙酯萃取物即为植物寄生线虫抑制剂的活性成分。
[0075] 将乙酸乙酯萃取物(溶质)用甲醇(溶剂)溶解，分别配制成浓度分别为1.5g/L、1.0g/L、0.5g/L、0.3g/L和0.1g/L的5种浓度的溶液，这5种浓度的溶液即为5种植物寄生线虫抑制剂，分别称为植物寄生线虫抑制剂1.5(浓度为1.5g/L)、植物寄生线虫抑制剂1.0(浓度为1.0g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.5(浓度为0.5g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.3(浓度为
0.3g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.1(浓度为0.1g/L)。
0.3g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.1(浓度为0.1g/L)。
[0076] 3、植物寄生线虫抑制剂的杀线虫活性
[0077] 3.1南方根结线虫卵、卵囊及二龄幼虫的获得
[0078] 南方根结线虫用感病番茄品种佳粉15号室内盆栽接种方式保存。接种40d后，在番茄根系有大量卵囊出现，将根系用水轻轻冲洗，小心取下卵囊，放在0.5％次氯酸钠溶液中消毒3min，再用无菌水冲洗3次，放在盛有少量无菌水的培养皿内，4℃保存备用。
[0079] 另取部分卵囊放在盛有少量无菌水的培养皿内，25℃培养4d，每隔24h收集一次新孵化的南方根结线虫二龄幼虫，室温保存备用。
[0080] 将病根洗净，剪成0.5-1cm的小段，放入500mL三角瓶中，加1％次氯酸钠溶液200mL，剧烈震荡5min，用200目及500目网筛反复冲洗收集，通过500目网筛收集到纯净的南方根结线虫卵，4℃保存备用。
[0081] 3.2植物寄生线虫抑制剂对南方根结线虫二龄幼虫的抑制作用
[0082] 将植物寄生线虫抑制剂1.5(浓度为1.5g/L)、植物寄生线虫抑制剂1.0(浓度为1.0g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.5(浓度为0.5g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.3(浓度为0.3g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.1(浓度为0.1g/L)、无菌水、20％噻唑膦水乳剂(噻唑膦终浓度为
10mg/L)；1.8％阿维菌素乳油(阿维菌素终浓度为10mg/L)、甲醇分别加入经灭菌的40孔组织培养板，每孔100μL，每种植物寄生线虫抑制剂设4孔。其中甲醇为对照，其它是处理。通风橱中吹干，然后分别向每孔中各加入100μL线虫悬浮液(南方根结线虫二龄幼虫的含量为
20.1±2.1条/100μL)，放入25℃培养箱中，24h后记录线虫死亡率，计算校正死亡率即为杀线虫药效。每处理重复4次。该实验操作在无菌环境下进行。
10mg/L)；1.8％阿维菌素乳油(阿维菌素终浓度为10mg/L)、甲醇分别加入经灭菌的40孔组织培养板，每孔100μL，每种植物寄生线虫抑制剂设4孔。其中甲醇为对照，其它是处理。通风橱中吹干，然后分别向每孔中各加入100μL线虫悬浮液(南方根结线虫二龄幼虫的含量为
20.1±2.1条/100μL)，放入25℃培养箱中，24h后记录线虫死亡率，计算校正死亡率即为杀线虫药效。每处理重复4次。该实验操作在无菌环境下进行。
[0083]
[0084] 表1.植物寄生线虫抑制剂对南方根结线虫2龄幼虫的影响
[0085]
[0087] 结果表明，各浓度的植物寄生线虫抑制剂和无菌水之间差异显著，植物寄生线虫抑制剂1.5(浓度为1.5g/L)和植物寄生线虫抑制剂1.0(浓度为1.0g/L)与阿维菌素和噻唑膦差异显著，而植物寄生线虫抑制剂0.5(浓度为0.5g/L)和20％噻唑膦水乳剂相当，植物寄生线虫抑制剂0.3(浓度为0.3g/L)与阿维菌素相当，差异不显著。
[0088] 3.3植物寄生线虫抑制剂对南方根结线虫卵囊孵化的抑制作用
[0089] 在每个无菌的直径为6cm的塑料培养皿中放入3个表面消毒的发育较一致的卵囊，分别加入3mL植物寄生线虫抑制剂1.5(浓度为1.5g/L)、植物寄生线虫抑制剂1.0(浓度为1.0g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.5(浓度为0.5g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.3(浓度为0.3g/L)、植物寄生线虫抑制剂0.1(浓度为0.1g/L)、无菌水、20％噻唑膦水乳剂(噻唑膦终浓度为
10mg/L)；1.8％阿维菌素乳油(阿维菌素终浓度为10mg/L)、甲醇。其中甲醇为对照，其它是处理。试验在25℃下进行，将各处理塑料培养皿用封口膜封严，以减少污染以及液体蒸发。
7d后镜检各处理卵囊孵化情况。计算卵囊孵化线虫数和卵囊孵化的相对抑制率。每处理重复4次。该实验操作在无菌环境下进行。
10mg/L)；1.8％阿维菌素乳油(阿维菌素终浓度为10mg/L)、甲醇。其中甲醇为对照，其它是处理。试验在25℃下进行，将各处理塑料培养皿用封口膜封严，以减少污染以及液体蒸发。
7d后镜检各处理卵囊孵化情况。计算卵囊孵化线虫数和卵囊孵化的相对抑制率。每处理重复4次。该实验操作在无菌环境下进行。
[0090]
[0091] 表2.植物寄生线虫抑制剂对南方根结线虫卵囊孵化的影响
[0092]处理 卵囊平均孵化线虫(条) 相对抑制率(％)
植物寄生线虫抑制剂0.1 61.3bB 49.9
植物寄生线虫抑制剂0.1 61.3bB 49.9
[0093]植物寄生线虫抑制剂0.3 53.3cC 56.4
植物寄生线虫抑制剂0.5 20.0dD 83.7
植物寄生线虫抑制剂1.0 4.0eE 96.7
植物寄生线虫抑制剂1.5 1.3fE 98.9
CK1 122.3aA ——
CK2 2.3efE 98.1
CK3 2.7efE 97.8
植物寄生线虫抑制剂0.5 20.0dD 83.7
植物寄生线虫抑制剂1.0 4.0eE 96.7
植物寄生线虫抑制剂1.5 1.3fE 98.9
CK1 122.3aA ——
CK2 2.3efE 98.1
CK3 2.7efE 97.8
[0094] 注：CK1：无菌水处理；CK2：20％噻唑膦水乳剂；CK3：1.8％阿维菌素乳油处理。第2列字母不同的处理间具有显著差异。
[0095] 结果表明，各浓度的植物寄生线虫抑制剂和无菌水处理的卵囊之间，对线虫孵化影响差异显著，特别是植物寄生线虫抑制剂1.5(浓度为1.5g/L)几乎不能孵化，植物寄生线虫抑制剂1.0(浓度为1.0g/L)和植物寄生线虫抑制剂1.5(浓度为1.5g/L)与阿维菌素和噻唑膦差异不显著。
[0096] 通过以上两种对南方根结线虫活力和卵囊孵化的抑制作用试验结果表明，产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111是一株极具有应用价值的真菌，特别是对南方根结线虫的杀线虫作用和对其卵囊孵化的抑制作用，显示出其良好的应用开发前景。
[0097] 3.4温室盆栽防治番茄南方根结线虫(Meloidogyne incognita)，效果如下：
[0098] 供试材料和方法：
[0099] 番茄：品种为L402
[0100] 线虫：南方根结线虫Meloidogyne incognita
[0101] 番茄育苗于直径13cm、高10cm的营养钵中，育苗土为经处理过的无线虫园土和沙土按1:4比例混合。将1.3的产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111固体发酵培养物，用玻璃棒将其搅碎，得到植物寄生线虫抑制剂。等番茄苗长出4-5片真叶后接种根结线虫：将培养好的线虫配制成100条/mL的线虫悬浮液，在植株根周围均匀的插3个小孔，将线虫悬浮液滴入小孔中，每盆接种1500条线虫。当天进行药剂处理，植物寄生线虫抑制剂100kg/hm2，10％噻唑膦颗粒剂50kg/hm2(CK2)，1.8％阿维菌素乳油500倍(CK3)，设置接种线虫但不用药剂处理的番茄幼苗作为空白对照(CK1)，只浇等量的清水，每个处理3次重复。药剂处理方法为：植物寄生线虫抑制剂和颗粒剂拌土后均匀撒施，施药后每盆浇等量的水，以不渗水为准；乳油配成药液浇湿200mL，然后放置在温室中进行培养。正常田间管理，分别在施药后45d和80d调查根结数。根据根结数确定防治效果。
[0102]
[0103] 结果见表3，田间效果见图1、2。
[0104] 表3产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111固体发酵培养物温室盆栽试验结果
[0105]处理 45d根结数 45d防治效果(％) 80d根结数 80d防治效果(％)
植物寄生线虫抑制剂 13cB 87.3 42dD 86.0
CK1 102aA -- 301aA --
CK2 15bcB 85.2 51cC 83.1
CK3 19bB 81.3 57bB 81.1
植物寄生线虫抑制剂 13cB 87.3 42dD 86.0
CK1 102aA -- 301aA --
CK2 15bcB 85.2 51cC 83.1
CK3 19bB 81.3 57bB 81.1
[0106] 注：CK1：清水处理；CK2：10％噻唑膦颗粒剂；CK3：1.8％阿维菌素乳油处理。第2列和第4列字母不同的处理间具有显著差异。
[0107] 结果表明，产紫青霉(Penicillium purpurogenum)MHZ111固体发酵培养物在没有任何助剂填加的条件下，对番茄根结线虫病防效达80％以上。经MHZ111处理后的番茄苗根系发达，根结少，植株生长正常，未发现明显的药害，对番茄安全，具有良好的应用价值，该浓度已经达到产业化开发利用的浓度要求。
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