ＡＨＡＳ 돌연변이체{AHAS MUTANTS}

본 발명은 일반적으로 아세토히드록시산 합성효소-억제 제초제에 대한 식물의 저항성을 증가시키기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

아세토히드록시산 합성효소 (AHAS; EC 4.1.3.18, 아세토락테이트 합성효소 또는 ALS로서 또한 공지됨)는 분지쇄 아미노산 발린, 류신 및 이소류신의 생화학적 합성을 촉매하는 첫 번째 효소이다 (Singh (1999) "Biosynthesis of valine, leucine and isoleucine," in Plant Amino Acids, Singh, BK, ed., Marcel Dekker Inc. New York, New York, pp. 227-247). AHAS는 술포닐우레아 ([Tan et al. (2005) Pest Manag. Sci. 61:246-57]; [Mallory-Smith and Retzinger (2003) Weed Technology 17:620-626]; [LaRossa and Falco (1984) Trends Biotechnol. 2: 158-161]), 이미다졸리논 (Shaner et al. (1984) Plant Physiol. 76:545-546), 트리아졸로피리미딘 (Subramanian and Gerwick (1989) "Inhibition of acetolactate synthase by triazolopyrimidines," in Biocatalysis in Agricultural Biotechnology, Whitaker, JR and Sonnet, PE. eds., ACS Symposium Series, American Chemical Society, Washington, DC, pp. 277-288), 및 피리미디닐옥시벤조에이트 (Subramanian et al. (1990) Plant Physiol. 94: 239-244)를 포함한 4 개의 구조상 다양한 제초제 부류의 작용 부위이다. 이미다졸리논 및 술포닐우레아 제초제는 매우 낮은 적용률에서 그들의 유효성 및 동물에서 상대적인 비-독성으로 인해 현대 농업에서 널리 사용된다. AHAS 활성을 억제함으로써, 이들 부류의 제초제는 많은 잡초종을 포함한 감수성 식물의 추가의 성장 및 발달을 방지한다. 상업적으로 입수가능한 이미다졸리논 제초제의 몇몇 예는 PURSUIT® (이마제타피르), SCEPTER® (이마자퀸) 및 ARSENAL® (이마자피르)이다. 술포닐우레아 제초제의 예는 클로르술푸론, 메트술푸론 메틸, 술포메투론 메틸, 클로리무론 에틸, 티펜술푸론 메틸, 트리베누론 메틸, 벤술푸론 메틸, 니코술푸론, 에타메트술푸론 메틸, 림술푸론, 트리플루술푸론 메틸, 트리아술푸론, 프리미술푸론 메틸, 시노술푸론, 아미도술푸론, 플루자술푸론, 이마조술푸론, 피라조술푸론 에틸 및 할로술푸론이다.

그들의 높은 유효성 및 낮은 독성으로 인해, 이미다졸리논 제초제는 광범위한 영역의 초목의 꼭대기 위로 분무함으로써 적용하는데 선호된다. 제초제를 넓은 범위의 초목의 꼭대기 위로 분무하는 능력은 식물 확립 및 유지와 연관된 비용을 감소시키고, 그러한 화학물질의 사용 전에 대지 준비에 대한 필요를 감소시킨다. 목적하는 내성 종의 꼭대기 위로 분무하는 것은 또한 경쟁 종의 부재로 인해 요구되는 종의 최대 잠재 수량성 (yield potential)을 달성하는 능력을 생성시킨다. 그러나, 그러한 상부-분무 기술을 이용하는 능력은 상부 분무 영역 내에 목적하는 초목의 이미다졸리논-저항성 종의 존재에 따라 좌우된다.

주요 농작물 사이에서, 대두와 같은 일부 콩과의 종은 제초제 화합물을 신속하게 대사시키는 그들의 능력으로 인해 이미다졸리논 제초제에 대해 천연적으로 저 항성이다 (Shaner and Robinson (1985) Weed Sci. 33:469-471). 옥수수 (Newhouse et al. (1992) Plant Physiol. 100:882-886) 및 벼 (Barrett et al. (1989) Crop Safeners for Herbicides, Academic Press, New York, pp. 195-220)와 같은 다른 작물은 이미다졸리논 제초제에 다소 감수성이다. 이미다졸리논 제초제에 대한 차별적인 감수성은 특정 제초제의 화학적 성질 및 각각의 식물에서 독성 형태에서 비-독성 형태로의 화합물의 차별적인 대사에 의존한다 ([Shaner et al. (1984) Plant Physiol. 76:545-546]; [Brown et al. (1987) Pestic. Biochem. Physiol. 27:24-29]). 흡수 및 전위 (translocation)와 같은 다른 식물의 생리학적 차이가 또한 감수성에서 중요한 역할을 한다 (Shaner and Robinson (1985) Weed Sd. 33:469-471).

이미다졸리논, 술포닐우레아, 트리아졸로피리미딘 및 피리미디닐옥시벤조에이트에 저항성인 식물은 제아 메이즈 ( Zea mays ), 애기장대 ( Arabidopsis thaliana ), 브라시카 나푸스 ( Brassica napus , 즉, 카놀라) 글라이신 맥스 ( Glycine max ), 니코티아나 타바쿰 ( Nicotiana tabacum ), 사탕무 (베타 불가리스 ( Beta vulgaris )) 및 오리자 사티바 ( Oryza sativa ; 벼)에서 종자, 소포자, 화분 (pollen), 및 캘루스 (callus) 돌연변이 유발을 이용하여 성공적으로 생산되었다 ([Sebastian et al. (1989) Crop Sci. 29: 1403-1408]; [Swanson et al. 1989 Theor. Appl. Genet. 78:525-530]; [Newhouse et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 83:65-70]; [Sathasivan et al. (1991) Plant Physiol. 97: 1044-1050]; [Mourand et al. (1993) J. Heredity 84:91-96]; [Wright and Penner (1998) Theor. Appl. Genet. 96:612-620]; 미국 특허 5,545,822). 모든 경우에, 단일의 부분적 우성 핵 유전자가 저항성을 부여하였다. 트리티쿰 애스티붐 엘. ( Triticum aestivum L. cv. Fidel; 밀)의 종자 돌연변이 유발 후에 4개의 이미다졸리논 저항성 밀 식물이 또한 이전에 단리되었다 (Newhouse et al. (1992) Plant Physiol. 100:882-886). 유전 연구에서는 단일의 부분적 우성 유전자가 저항성을 부여하였음을 확인하였다. 대립유전자 연구에 기초하여, 저자들은 4개의 확인된 주에서 돌연변이가 동일한 유전자좌에 위치하는 것으로 결론지었다. 피델 (Fidel) 품종 저항성 유전자 중 하나를 FS-4로 지정하였다 (Newhouse et al. (1992) Plant Physiol. 100:882-886).

AHAS-억제제 복합체의 3차원 입체형태의 컴퓨터 기반 모델링에서는 제안된 억제제 결합 포켓 내의 몇몇 아미노산을, 유도된 돌연변이가 이미다졸리논에 대한 선택적 저항성을 부여할 가능성이 있는 부위로서 예측한다 (Ott et al. (1996) J. Mol. Biol. 263:359-368). AHAS 효소의 제안된 결합 부위에 상기 합리적으로 설계된 돌연변이의 일부를 갖도록 생산된 담배 식물이 실제로 단일 클래스의 제초제에 특이적 저항성을 나타냈다 (Ott et al. (1996) J. Mol. Biol. 263:359-368).

또한, 이미다졸리논 제초제에 대한 식물 저항성이 많은 특허에 보고되었다. 미국 특허 4,761,373, 5,331,107, 5,304,732, 6,211,438, 6,211,439 및 6,222,100은 식물에서 제초제 저항성을 유도하기 위해 변경된 AHAS 유전자의 사용을 일반적으로 설명하고, 구체적으로 특정 이미다졸리논 저항성 옥수수 종을 개시하고 있다. 미국 특허 5,013,659에서는 하나 이상의 보존된 구역에서 적어도 하나의 아미노산의 돌연변이로 인해 제초제 저항성을 나타내는 식물을 개시하고 있다. 여기에 기 재된 돌연변이는 이미다졸리논 및 술포닐우레아에 대한 교차-저항성 또는 술포닐우레아-특이적 저항성을 코딩하지만, 이미다졸리논-특이적 저항성은 설명되지 않는다. 미국 특허 5,731,180 및 미국 특허 5,767,361에서는 이미다졸리논-특이적 저항성을 생성시키는 야생형 외떡잎식물 AHAS 아미노산 서열에서 단일 아미노산 치환을 갖는 단리된 유전자를 논의한다. 또한, AHAS를 저해하는 제초제에 저항성인 벼 식물은 돌연변이 육종 및 조직 배양 선택에 의해 개발되었다 (미국 특허 5,545,822, 5,736,629, 5,773,703, 5,773,704, 5,952,553 및 6,274,796 참조).

검사된 다른 모든 유기체에서와 같이 식물에서, AHAS 효소는 2개의 서브유닛 (subunit)으로 이루어진다: 거대 서브유닛 (촉매 역할) 및 작은 서브유닛 (조절 역할) (Duggleby and Pang (2000) J. Biochem. Mol. Biol. 33: 1-36). AHAS 거대 서브유닛 (본원에서 AHASL로도 언급함)은 애기장대 및 사탕무의 경우에서와 같이 단일 유전자에 의해, 또는 옥수수, 카놀라 및 면에서와 같이 다수의 유전자 부류 멤버에 의해 코딩될 수 있다. 거대 서브유닛에서 특이적인 단일-뉴클레오티드 치환은 효소 상에 하나 이상의 클래스의 제초제에 대한 어느 정도의 불감성을 부여한다 (Chang and Duggleby (1998) Biochem J. 333:765-777).

예를 들어, 빵 밀인 트리티쿰 애스티붐 엘.은 3개의 부분유사성 아세토히드록시산 합성효소 거대 서브유닛 유전자를 함유한다. 각각의 유전자는 제초제 반응 및 각각의 3개의 유전자의 돌연변이체로부터의 생화학적 데이타를 기초로 할 때 유의한 발현을 나타낸다 (Ascenzi et al. (2003) International Society of Plant Molecular Biologists Congress, Barcelona, Spain, Ref. No. S10-17). 3개의 모 든 유전자의 코딩 서열은 뉴클레오티드 수준에서 광범한 상동성을 공유한다 (WO 03/014357). 몇몇 다양한 트리티쿰 애스티붐으로부터 AHASL 유전자를 서열결정하여, 대부분의 IMI-내성 (이미다졸리논-내성) 종에서 제초제 내성의 분자적인 기초는 돌연변이 S653( At )N인 것으로 밝혀졌고, 이는 애기장대의 아미노산 653에서의 세린에 동등한 위치에서 세린의 아스파라긴으로의 치환을 나타낸다 (WO 03/014357). 상기 돌연변이는 AHASL 단백질을 코딩하는 DNA 서열에서 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP)으로 인한 것이다.

다수의 AHASL 유전자가 쌍떡잎 식물 종에서 나타나는 것이 또한 공지되어 있다. 최근에, 문헌 [Kolkman et al., (2004) Theor. Appl. Genet. 109: 1147-1159]은 해바라기 (헬리안투스 안누우스 ( Helianthus annuus ) L.)의 제초제-저항성 및 야생형 유전자형으로부터 3개의 AHASL 유전자 (AHASL1, AHASL2 및 AHASL3)에 대한 확인, 클로닝 및 서열결정에 대해 보고하였다. 콜크만 (Kolkman) 등은 제초제-저항성이 AHASL1 단백질에서 Pro197Leu (애기장대 AHASL 아미노산 위치 명명법 이용) 치환 또는 Ala205Val 치환으로 인한 것이고, 각각의 이들 치환은 이미다졸리논 및 술포닐우레아 제초제 모두에 대한 저항성을 제공하였음을 보고하였다.

제초제에 내성 또는 저항성을 생성시키는 AHAS 거대 서브유닛의 많은 단일 돌연변이가 공지되어 있다 ([Duggleby et al. (2000) Journal of Biochem and Mol. Bio. 33: 1-36]; [Jander et al. (2003) Plant Physiology 131: 139-146]). 예를 들어, 애기장대 AHASL의 위치 122에서 알라닌의 발린으로의 치환 (또는 도꼬마리 (Cocklebur) AHASL의 대응하는 위치 100에서 알라닌의 트레오닌으로의 치환)은 이 미다졸리논 및 술포닐우레아에 대한 저항성을 부여한다. 애기장대 AHASL의 위치 124에서 메티오닌의 글루탐산 또는 이소류신으로의 치환은 이미다졸리논 및 술포닐우레아에 대한 저항성을 부여한다. 애기장대 AHASL의 위치 197에서 프롤린의 세린으로의 치환 (또는 효모 AHASL의 대응하는 위치 192에서 프롤린의 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판 또는 티로신으로의 치환)은 이미다졸리논, 술포닐우레아 및 트리아졸로피리미딘에 대한 저항성을 부여한다. 애기장대 AHASL의 위치 199에서 아르기닌의 알라닌 또는 글루탐산으로의 치환은 이미다졸리논 저항성을 부여한다. 애기장대 AHASL의 위치 205에서 알라닌의 발린으로의 치환 (또는 효모 AHASL의 대응하는 위치 200에서 알라닌의 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 트레오닌, 트립토판 또는 티로신으로의 치환)은 이미다졸리논 및 술포닐우레아 저항성을 부여한다. 효모 AHASL의 위치 586에 대응하는 애기장대 AHASL의 위치 574에서 트립토판에 대한 거의 임의의 아미노산의 치환은 이미다졸리논, 술포닐우레아, 트리아졸로피리미딘, 및 피리미딜 옥시벤조에이트에 대한 저항성을 부여한다. 애기장대 AHASL의 위치 653에서 세린에서 페닐알라닌, 아스파라긴 또는 트레오닌으로의 치환은 이미다졸리논 및 피리미딜 옥시벤조에이트에 대한 저항성을 부여한다.

미국 특허 5,853,973; 5,928,937; 및 6,576,455에서는 상기 설명된 위치와 다른 특이적 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 AHAS 변이체를 제조하기 위한 구조 기반 모델링 방법을 개시한다. 문헌 [Mourad et al. (1992) Planta 188;491-497]에서 술포닐우레아에 저항성인 돌연변이체 종은 트리아졸로피리미딘에 교차-저 항성이고, 이미다졸리논에 저항성인 돌연변이체 종은 피리미딜 옥시벤조에이트에 교차-저항성인 것으로 나타났다.

미국 특허 5,859,348은 아미노산 113에서 알라닌에서 트레오닌으로의 치환 및 아미노산 188에서 프롤린에서 세린으로의 치환을 갖는 이중 돌연변이체 사탕무 AHAS 거대 서브유닛을 개시하고 있다. 이중 돌연변이체 AHAS 단백질을 함유하는 사탕무 식물은 이미다졸리논 및 술포닐우레아 모두에 저항성인 것으로서 설명되고 있다.

문헌 [Mourad et al. (1994) Mol. Gen. Genet. 242: 178-184]에서는 csr1-4로 명명한 애기장대 AHAS 이중 돌연변이체를 개시하고 있다. csr1-4 돌연변이체 AHAS는 위치 589에서 C에서 T로의 뉴클레오티드 치환 (애기장대 AHASL의 아미노산 197에서 프롤린의 세린으로의 치환에 상응함) 및 위치 1958에서 G에서 A로의 뉴클레오티드 치환 (애기장대 AHASL의 아미노산 653에서 세린의 트레오닌으로의 치환에 상응함)을 함유하였다.

문헌 [Lee et al. (1988) EMBO Journal 7: 1241-1248]에서는 S4-Hra로 명명된 담배 AHAS 이중 돌연변이체를 개시하고, 이는 아미노산 196 (애기장대 AHASL의 아미노산 197에 대응함)에서 Pro-Ala 치환 및 아미노산 573 (애기장대 AHASL의 아미노산 574에 대응함)에서 Trp-Leu 치환을 포함한다. 이중 돌연변이체 유전자를 담지하는 트랜스제닉 (transgenic) 종은 술포닐우레아 제초제에 대해 저항성을 보인다.

미국 특허 7,119,256에서는 아미노산 548에서 트립토판에서 류신으로의 치환 및 아미노산 627에서 세린에서 이소류신으로의 치환을 갖는 이중 돌연변이체 벼 AHAS 거대 서브유닛을 개시한다. 상기 이중 돌연변이체 AHAS 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 발현하는 트랜스제닉 벼 식물은 피리미디닐 카르복시 제초제, 비스피리박-나트륨에 증가된 저항성을 갖는 것으로 보고되었다.

그들의 높은 유효성 및 낮은 독성이 주어지면, 이미다졸리논 제초제는 농업 용도에 선호된다. 그러나, 특정 작물 생산 시스템에서 이미다졸리논 제초제를 사용하는 능력은 관심있는 작물 식물의 이미다졸리논-저항성 변종의 이용가능성에 따라 좌우된다. 그러한 이미다졸리논-저항성 변종을 생산하기 위해, 작물 식물을 기존의 AHAS 돌연변이체와 비교할 때 이미다졸리논 및/또는 다른 AHAS-억제성 제초제에 대한 입증된 개선된 내성을 부여하는 돌연변이체 AHAS 폴리펩티드를 포함하는 작물 식물이 여전히 필요하다.

일부 AHAS 돌연변이체가 특성화되었지만, 관심있는 작물 식물 내에서 발현될 때 작물 식물에서 기존의 AHAS 돌연변이체에 비해 하나 이상의 클래스의 AHAS-억제성 제초제에 대해 입증된 개선된 제초제 내성을 부여하는 돌연변이체 AHAS 폴리펩티드가 여전히 필요하다.

<발명의 개요>

본 발명은 제초제, 특히, 이미다졸리논 제초제 또는 술포닐우레아 제초제 또는 이들의 혼합물에 대한 내성을 보이는 신규한 돌연변이체 AHAS 폴리펩티드에 관한 것이다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 돌연변이체에 의해 부여되는 제초제 내성은 공지의 AHAS 돌연변이체를 사용하여 얻은 것에 비해 개선되고/되거나 향 상된 것이다. 본 발명의 돌연변이체는 AHAS 거대 서브유닛 폴리펩티드에서 적어도 2개의 아미노산 치환을 포함한다.

하나의 실시태양에서, 본 발명은 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 139 또는 서열 2의 위치 107에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 269 또는 서열 2의 위치 237에 대응하는 위치에 히스티딘을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 메티오닌을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 426 또는 서열 2의 위치 394에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 430 또는 서열 2의 위치 398에 대응하는 위치에 발린을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 442 또는 서열 2의 위치 410에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 445 또는 서열 2의 위치 413에 대응하는 위치에 이소류신 또는 아스파르트산을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 580 또는 서열 2의 위치 548에 대응하는 위치에 글루탐산을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 375 또는 서열 2의 위치 343에 대응하는 위치에 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 205 또는 서열 2의 위치 173에 대응하는 위치에 발린, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 트레오닌, 트립토판 또는 티로신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 AHAS 거대 서브유닛 이중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.

또다른 실시태양에서, 본 발명은 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 57에 대응하는 위치에 아르기닌, 및 서열 1의 위치 398 또는 서열 2의 위치 366에 대응하는 위치에 류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92 에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 95 또는 서열 2의 위치 63에 대응하는 위치에 류신, 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 글루탐산, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 574 또는 서열 2의 위치 542에 대응하는 위치에 임의의 아미노산을 갖는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 AHAS 거대 서브유닛 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.

본 발명은 또한 상기한 이중 및 삼중 돌연변이체를 포함하는 AHASL 폴리펩티드, 상기한 AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 상기한 AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포, 상기한 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드를 포함하는 트랜스제 닉 식물, 및 상기한 AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 트랜스제닉 식물의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 2개 이상의 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 트랜스제닉 및 비-트랜스제닉 식물에 관한 것이다. 하나의 실시태양에서, 본 발명의 식물은 제1 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드, 또는 상기 제1 및 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드의 아미노산 돌연변이를 야기하는 2개의 돌연변이를 포함하는 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 상기 제1 및 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드는 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소 류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 139 또는 서열 2의 위치 107에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 269 또는 서열 2의 위치 237에 대응하는 위치에 히스티딘을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 메티오닌을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 426 또는 서열 2의 위치 394에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 430 또는 서열 2의 위치 398에 대응하는 위치에 발린을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위 치 442 또는 서열 2의 위치 410에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 445 또는 서열 2의 위치 413에 대응하는 위치에 이소류신 또는 아스파르트산을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 580 또는 서열 2의 위치 548에 대응하는 위치에 글루탐산을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 375 또는 서열 2의 위치 343에 대응하는 위치에 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신 을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 205 또는 서열 2의 위치 173에 대응하는 위치에 발린, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 트레오닌, 트립토판 또는 티로신을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택된다.

또다른 실시태양에서, 본 발명은 제1 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드, 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드; 또는 3개의 돌연변이를 포함하는 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드 (여기서, 3개의 뉴클레오티드 돌연변이는 상기 제1, 제2 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드의 돌연변이에 대응하는 아미노산 돌연변이를 야기함); 또는 단일 돌연변이를 포함하는 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드와 이중 돌연변이를 포함하는 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드 (여기서, 뉴클레오티드 돌연변이는 상기 제1, 제2 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드의 아미노산 돌연변이에 대응하는 아미노산 돌연변이를 야기함)를 포함하는 트랜스제닉 및 비-트랜스제닉 식물을 제공하고, 여기서 상기 제1, 제2 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드는 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대 응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제3 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제3 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시 스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제3 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드, 서열 1의 위치 57에 대응하는 위치에 아르기닌을 갖는 제2 폴리펩티드, 및 서열 1의 위치 398 또는 서열 2의 위치 366에 대응하는 위치에 류신을 갖는 제3 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 제1 폴리펩티드, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제3 폴리펩티드; 서열 1의 위치 95 또는 서열 2의 위치 63에 대응하는 위치에 류신을 갖는 제1 폴리펩티드, 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 글루탐산을 갖는 제2 폴리펩티드, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제3 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제1 폴리펩티드, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드, 및 서열 1의 위치 574 또는 서열 2의 위치 542에 대응하는 위치에 임의의 아미노산을 갖 는 제3 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택된다.

본 발명은 본 발명의 트랜스제닉 및 비-트랜스제닉 식물 근처의 잡초를 방제하기 위한 방법을 제공한다. 그러한 식물은 야생형 식물에 비해 증가된 제초제 저항성을 갖는다. 이 방법은 유효량의 AHAS-억제성 제초제를 잡초 및 본 발명의 식물에 적용하는 것을 포함한다.

도 1은 돌연변이의 위치를 보여주는 추정 번역을 진한 글씨로 밑줄쳐서 표시한, 애기장대 AHAS 거대 서브유닛 단백질의 전장 서열 (아미노산 서열: 서열 1; 핵산 서열: 서열 31)을 제시한다. DNA 넘버링은 좌측에, 아미노산 넘버링은 우측에 있다.

도 2는 청구된 돌연변이의 위치에서 아미노산을 진한 글씨로 밑줄쳐서 표시한, 옥수수 AHAS 거대 서브유닛 단백질의 서열 (아미노산 서열: 서열 2; 핵산 서열: 서열 32)을 기재한다. DNA 넘버링은 좌측에, 아미노산 넘버링은 우측에 있다.

도 3은 서열 1에서 치환의 위치에 대응하는 치환의 위치를 보여주는, 많은 종의 AHAS 거대 서브유닛 단백질과 애기장대 AHAS 거대 서브유닛 단백질 (AtAHASL, 서열 1)의 대응하는 위치의 정렬이고, 여기서 본 발명의 이중 및 삼중 돌연변이가 이루어질 수 있다: 아마란투스 ( Amaranthus ; 비름) 종 (AsAHASL 서열 9), 브라시카 나푸스 (BnAHASL1A 서열 3, BnAHASL1C 서열 10, BnAHASL2A 서열 11), 카멜리나 마이크로카르파 ( Camelina microcarpa ; 좀아마냉이) (CmAHASL1 서열 12, CmAHASL2 서열 13), 솔라늄 투베로섬 ( Solanum tuberosum ; 감자) (StAHASL1 서열 16, StAHASL2 서열 17), 오리자 사티바 (OsAHASL 서열 4), 롤리움 멀티플로룸 ( Lolium multiflorum ; 쥐보리) (LmAHASL 서열 20), 솔라늄 프티칸툼 ( Solanum ptychanthum ; 까마중) (SpAHASL 서열 14), 소르검 비콜라 ( Sorghum bicolor ; 수수) (SbAHASL 서열 15), 글라이신 맥스 (대두) (GmAHASL 서열 18), 헬리안투스 안누우스 (해바라기) (HaAHASL1 서열 5, HaAHASL2 서열 6, HaAHASL3 서열 7), 트리티쿰 애스티붐 (밀) (TaAHASL1A 서열 21, TaAHASL1B 서열 22, TaAHASL1D 서열 23), 잔티움 ( Xanthium ; 도꼬마리) 종 (XsAHASL 서열 19), 제아 메이즈 (옥수수) (ZmAHASL1 서열 8, ZmAHASL2 서열 2), 고시피움 히르수툼 ( Gossypium hirsutum ; 육지면) (GhAHASA5 서열 24, GhAHASA19 서열 25), 및 이. 콜라이 ( E. coli ) (ilvB 서열 26, ilvG 서열 27, ilvI 서열 28).

도 4는 이. 콜라이 내에서 애기장대 AHASL 돌연변이체 AE2-AE8의 구성에 사용되는 AE 베이스 (base) 벡터의 지도이고, 애기장대 AHASL 내의 돌연변이의 상대적인 위치를 표시한다.

도 5는 표 1에 표시한 돌연변이만 상이한, 벡터 AP2-AP5의 구성을 위해 사용되는 식물 형질전환 베이스 벡터 AP의 벡터 지도이다.

도 6은 이. 콜라이 내에서 옥수수 AHASL 돌연변이체 ZE2, ZE5, ZE6 및 ZE7을 연구하기 위해 사용되는 베이스 벡터 ZE의 지도이고, 돌연변이의 상대적인 위치를 표시한다.

도 7은 벡터 ZP2-ZP10의 구성을 위한 베이스 벡터로서 사용되는 식물 형질전환 벡터 ZP의 지도이다.

도 8은 상이한 종으로부터 유래된 AHASL 유전자의 일치하는 아미노산 위치를 보여주는 표이다.

도 9는 상이한 종으로부터 유래된 AHASL 유전자의 단백질 동일성 ％를 보여주는 표이다. 분석은 Vector NTI 소프트웨어 스위트 (suite) (갭 개방 페널티 (gap opening penalty) = 10, 갭 연장 (extension) 페널티 = 0.05, 갭 분리 (separation) 페널티 = 8, 블로섬 (blosum) 62MT2 매트릭스)에서 수행하였다.

도 10은 37.5 마이크로몰의 이마제타피르를 함유하는 배지 상에 플레이팅한 몇몇 종은 애기장대로부터의 종자의 수직판 성장 분석의 결과를 기재한다. 사용된 종자는 1) 야생형 생태형 콜럼비아 (Columbia) 2; 2) csr1-2 돌연변이체 (AHAS 거대 서브유닛 유전자의 게놈 카피 내의 AtAHASL S653N 돌연변이에 대한 동종접합성); 3) AP1로 형질전환된 콜럼비아 2; 4) AP7로 형질전환된 콜럼비아 2; 및 5) AP2로 형질전환된 콜럼비아 2이었다.

도 11은 표 3에 표시한 돌연변이만 상이한, 벡터 AUP2 및 AUP의 구성을 위해 사용되는 식물 형질전환 베이스 벡터 AUP의 벡터 지도이다.

도 12는 S653N 돌연변이를 포함하는 AtAHASL에 대한 코딩 서열을 포함하는, 식물 형질전환 벡터 BAP1의 벡터 지도이다.

본 발명은 제초제, 특히 이미다졸리논 제초제 및 임의로 술포닐우레아, 트리아졸로피리미딘 술포아닐리드 및/또는 피리미딜 옥시벤조에이트 제초제에 대한 내성을 보이는, 적어도 2개의 돌연변이를 포함하는 AHASL, 예를 들어 이중 및 삼중 돌연변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명의 AHASL 돌연변이체는, 하이브리드 교배체 (cross) 중 하나의 모체 상에만 또는 배수체 식물의 하나의 게놈 상에 존재할 때 상업 수준의 제초제 내성을 부여하기에 충분한 수준의 제초제 저항성을 나타내는 트랜스제닉 식물을 생성하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 또한 미국 특허 6,025,541에 기재된 바와 같이 다른 특질을 코딩하는 연결된 유전자의 형질전환에 대한 선택가능 마커로서 사용될 수 있다.

다양한 종의 AHASL 단백질은 몇몇 아미노산에 의해 길이가 상이하지만, 본 발명에 따라 변형되는 잔기의 상대적인 위치는 보존된다 (도 8). 따라서, 본원에 기재된 돌연변이는 달리 지시하거나 문맥으로부터 명백하지 않으면 애기장대 AHASL 폴리펩티드 (서열 1, 도 1, 도 8)의 아미노산 잔기 번호에 대응하는 위치의 측면에서 표현된다. 예를 들어, 애기장대 AHASL의 잔기 122는 옥수수 AHASL의 잔기 90, 브라시카 나푸스 AHASL 1A의 잔기 104, 비. 나푸스 AHASL 1C의 잔기 107, 벼 AHASL의 잔기 96, 비름 AHASL의 잔기 113, 에스케리치아 콜라이 ( Escherichia coli ) ilvG의 잔기 26, 사카로마이세스 세레비지애 ( Saccharomyces cerevisiae ) AHASL의 잔기 117, 사탕무의 잔기 113, 면의 잔기 111, 좀아마냉이 AHASL1의 잔기 120, 좀아마냉이 AHASL2의 잔기 117, 감자 AHASL1의 잔기 109, 감자 AHASL2의 잔기 111, 쥐보리의 잔기 92, 까마중의 잔기 27, 수수의 잔기 93, 대두의 잔기 103, 해바라기 AHASL1의 잔기 107, 해바라기 AHASL2의 잔기 101, 해바라기 AHASL3의 잔기 97, 밀의 잔기 59, 및 도꼬마리 종의 잔기 100에 대응한다. 이들 대응성은 당업자에게 잘 공지되어 있다. 그러한 대응성에 기초하여, 본원에서 구체적으로 개시하지 않은 AHAS 거대 서브유닛 서열 내의 대응하는 위치는 당업자가 쉽게 결정할 수 있다. 본 발명에 관련한 대응성의 구체적인 예시 구역을 도 3에 제시한다.

바람직한 실시태양에서, 본 발명은 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 139 또는 서열 2의 위치 107에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 269 또는 서열 2의 위치 237에 대응하는 위치에 히스티딘을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 메티오닌을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 426 또는 서열 2의 위치 394에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 430 또는 서열 2의 위치 398에 대응하는 위치에 발린을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 442 또는 서열 2의 위치 410에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 445 또는 서열 2의 위치 413에 대응하는 위치에 이소류신 또는 아스파르트산을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 580 또는 서열 2의 위치 548에 대응하는 위치에 글루탐산을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 375 또는 서열 2의 위치 343에 대응하는 위치에 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 205 또는 서열 2의 위치 173에 대응하는 위치에 발린, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 트레오닌, 트립토판 또는 티로신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 애기장대 AHAS 이중 돌연변이체를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.

다른 바람직한 실시태양에서, 본 발명은 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 57에 대응하는 위치에 아르기닌, 및 서열 1의 위치 398 또는 서열 2의 위치 366에 대응하는 위치에 류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 95 또는 서열 2의 위치 63에 대응하는 위치에 류신, 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 글루탐산, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 574 또는 서열 2의 위치 542에 대응하는 위치에 임의의 아미노산을 갖는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 애기장대 AHAS 거대 서브유닛 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.

다른 바람직한 실시태양은 다른 종으로부터의 AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체를 포함하고, 여기서 이중 및 삼중 돌연변이는 상기에 및 도 8에서 표에 기재된 특이적 애기장대 및 옥수수 돌연변이체의 것에 대응하는 위치에 발생한다. 예를 들어, 이. 콜라이, 에스. 세레비지애, 살모넬라 ( Salmonella ), 시니코시스티스 ( Synichocystis )와 같은 미생물로부터; 및 밀, 호밀, 귀리, 라이밀 (triticale), 벼, 보리, 수수, 기장, 사탕무, 사탕수수, 대두, 땅콩, 면, 유채 (rapeseed), 카놀라, 브라시카 종, 카사바 (manihot), 멜론, 서양호박 (squash), 후추, 해바라기, 매리골드 (tagetes), 가지과 식물, 감자, 고구마, 담배, 가지, 토마토, 나비나물 (Vicia) 종, 완두, 알팔파, 커피, 카카오와 같은 식물로부터의 AHASL의 대응하는 이중 및 삼중 돌연변이체도 또한 본 발명의 범위에 포함된다. 상기 이중 및 삼중 돌연변이체는 공지의 방법을 이용하여, 예를 들어, 미국 특허 5,565,350; 5,731,181; 5,756,325; 5,760,012; 5,795,972 및 5,871,984에 기재된 바와 같이 시험관 내에서 부위 지정 돌연변이 유발을 이용하여, 또는 생체 내에서 표적화된 돌연변이 유발 또는 유사한 기술을 이용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 관심있는 식물 내에서 발현을 위한 발현 카세트 (cassette) 내에 제공된다. 카세트는 본 발명의 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된 조절 서열을 포함할 것이다. 용어 "조절 요소"는 본원에서 사용될 때 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드의 전사를 조절할 수 있는 폴리뉴클레오티드를 나타낸다. 조절 요소는 프로모터, 인핸서, 인트론, 5' UTR, 및 3' UTR을 포함하나 이로 제한되지 않는다. "작동가능하게 연결된"은 프로모터와 제2 서열 사이의 기능적 연결을 의도하고, 여기서 프로모터 서열은 제2 서열에 대응하는 DNA 서열의 전사를 개시하고 매개한다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결되는 핵산 서열들이 인접하고, 2개의 단백질 코딩 구역을 연결하기 위해 필요한 경우에 인접하고 동일한 리딩 프레임 내에 존재하는 것을 의미한다. 카세트는 유기체 내로 동시형질전환시킬 적어도 하나의 추가의 유전자를 추가로 함유할 수 있다. 별법으로, 추가의 유전자(들)은 다수의 발현 카세트 상에 제공될 수 있다.

상기 발현 카세트에는 조절 구역의 전사 조절하에 놓일 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열의 삽입을 위한 복수의 제한 부위가 제공된다. 발현 카세트는 추가로 선택가능 마커 유전자를 함유할 수 있다.

발현 카세트는 전사의 5'-3' 방향으로, 식물에서 기능적인 전사 및 번역 개시 구역 (즉, 프로모터), 본 발명의 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열, 및 전사 및 번역 종결 구역 (즉, 종결 구역)을 포함할 것이다. 프로모터는 식물 숙주 및/또는 본 발명의 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열에 대해 천연 또는 유사성이거나, 외래 또는 이종성일 수 있다. 추가로, 프로모터는 천연 서열이거나 별법으로 합성 서열일 수 있다. 프로모터가 식물 숙주에 "외래" 또는 "이종성"인 경우에, 프로모터는 프로모터가 도입되는 천연 식물 내에서 발견되지 않는 것으로 의도된다. 프로모터가 본 발명의 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열에 "외래" 또는 "이종성"인 경우에, 프로모터는 본 발명의 작동가능하게 연결된 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열을 위한 천연 또는 자연 발생하는 프로모터가 아닌 것으로 의도된다. 본원에서 사용될 때, 키메라 (chimera) 유전자는 코딩 서열에 이종성인 전사 개시 구역에 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 포함한다.

이종성 프로모터를 사용하여 본 발명의 AHASL 폴리뉴클레오티드를 발현시키는 것이 바람직할 수 있지만, 천연 프로모터 서열이 사용될 수 있다. 그러한 작제물은 식물 또는 식물 세포에서 AHASL 단백질의 발현 수준을 변화시킬 것이다. 따라서, 식물 또는 식물 세포의 표현형이 변경된다.

종결 구역은 전사 개시 구역과 천연일 수 있거나, 작동가능하게 연결된 관심있는 AHASL 서열과 천연일 수 있거나, 식물 숙주와 천연일 수 있거나, 다른 공급원으로부터 유래될 수 있다 (즉, 프로모터, 관심있는 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열, 식물 숙주, 또는 임의의 그의 조합에 대해 외래 또는 이종성임). 편리한 종결 구역, 예를 들어 옥토핀 합성효소 및 노팔린 합성효소 종결 구역은 아그로박테리움 투메파시엔스 ( Agrobacterium tumefaciens )의 Ti-플라스미드로부터 이용가능하다 (또한, 문헌 [Guerineau et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 262: 141-144]; [Proudfoot (1991) Cell 64:671-674]; [Sanfacon et al. (1991) Genes Dev. 5: 141-149]; [Mogen et al. (1990) Plant Cell 2: 1261-1272]; [Munroe et al. (1990) Gene 91: 151-158]; [Ballas et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903]; 및 [Joshi et al. (1987) Nucleic Acid Res. 15:9627-9639] 참조).

적절한 경우에, 유전자(들)은 형질전환된 식물 내에서 증가된 발현을 위해 최적화될 수 있다. 즉, 유전자는 개선된 발현을 위해 식물-선호 코돈을 이용하여 합성될 수 있다. 예를 들어, 숙주-선호 코돈 사용의 논의에 대해서는 문헌 [Campbell and Gowri (1990) Plant Physiol. 92: 1-11]을 참조한다. 식물-선호 유전자를 합성하기 위한 방법은 당업계에서 이용가능하다 (예를 들어, 본원에 참고로 포함된 미국 특허 5,380,831 및 5,436,391과 문헌 [Murray et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:477-498] 참조).

세포 숙주 내에서 유전자 발현을 향상시키기 위한 추가의 서열 변형이 공지되어 있다. 이들은 유전자 발현에 해로울 수 있는 의사 (spurious) 폴리아데닐화 신호, 엑손-인트론 스플라이스 부위 신호, 트랜스포존-유사 리피트 (repeat), 및 다른 그러한 특성이 잘 밝혀진 서열을 코딩하는 서열의 제거를 포함한다. 서열의 GC 함량은 숙주 세포 내에서 발현된 공지의 유전자를 참조하여 계산될 때 주어진 세포 숙주에 대한 평균 수준으로 조정될 수 있다. 가능한 경우에, 서열은 예측된 헤어핀 (hairpin) 2차 mRNA 구조를 방지하도록 변형된다.

유전자 발현을 향상시키기 위한 뉴클레오티드 서열은 또한 식물 발현 벡터 내에서 사용될 수 있다. 이들은 옥수수 AdhI의 인트론, 인트론1 유전자 (Callis et al. Genes and Development 1: 1183-1200, 1987), 및 담배 모자이크 바이러스 (TMV), 옥수수 황색 반점 바이러스 (Chlorotic Mottle Virus) 및 알팔파 모자이크 바이러스로부터의 리더 (leader) 서열 (W-서열) ([Gallie et al. Nucleic Acid Res. 15:8693-8711, 1987] 및 [Skuzeski et al. Plant Mol. Biol. 15:65-79, 1990])을 포함한다. 옥수수의 쉬렁큰 (shrunken)-1 유전자좌로부터의 제1 인트론은 키메라 유전자 작제물 내에서 유전자의 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 미국 특허 5,424,412 및 5,593,874에서는 유전자 발현 작제물에서 특이적 인트론의 사용을 개시하고, 문헌 [Gallie et al., Plant Physiol. 106:929-939, 1994)에서는 또한 인트론이 조직 특이적 기준에 비추어서 유전자 발현을 조절하기 위해 유용함을 보여주었다. AHAS 거대 서브유닛 유전자 발현을 더욱 향상시키거나 최적화하기 위해, 본 발명의 식물 발현 벡터는 또한 매트릭스 부착 구역 (MAR)을 함유하는 DNA 서열을 포함할 수 있다. 이어서, 그러한 변형된 발현 시스템으로 형질전환된 식물 세포는 본 발명의 뉴클레오티드 서열의 과다발현 또는 구성적 발현을 나타낼 수 있다.

발현 카세트는 발현 카세트 작제물 내에 5' 리더 서열을 추가로 함유할 수 있다. 그러한 리더 서열은 번역을 향상시키는 작용을 할 수 있다. 번역 리더는 당업계에 공지되어 있고, 피코르나바이러스 리더, 예를 들어, EMCV 리더 (뇌심근염 5' 비코딩 구역) (Elroy-Stein et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6126-6130); 포티바이러스 리더, 예를 들어, TEV 리더 (담배 식각 바이러스) (Gallie et al. (1995) Gene 165(2):233-238), MDMV 리더 (옥수수 위축 모자이크 바이러스) (Virology 154:9-20), 및 인간 면역글로불린 중쇄 결합 단백질 (BiP) (Macejak et al. (1991) Nature 353:90-94); 알팔파 모자이크 바이러스의 코트 (coat) 단백질 mRNA (AMV RNA 4)로부터의 비번역된 리더 (Jobling et al. (1987) Nature 325:622-625); 담배 모자이크 바이러스 리더 (TMV) (Gallie et al. (1989) in Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), pp. 237-256); 및 옥수수 황색 반점 바이러스 리더 (MCMV) (Lommel et al. (1991) Virology 81:382-385)를 포함한다 (또한 문헌 [Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968 참조). 번역을 향상시키기 위해 공지된 다른 방법, 예를 들어, 인트론 등이 또한 이용될 수 있다.

발현 카세트를 제조하는데 있어서, 다양한 DNA 단편이 적합한 배향으로 및 적절한 경우에 적합한 리딩 프레임 내에 DNA 서열을 제공하도록 조작될 수 있다. 상기 목적을 위해, 어댑터 (adapter) 또는 링커가 DNA 단편을 연결하기 위해 사용될 수 있거나, 다른 조작이 편리한 제한 부위, 과잉의 DNA의 제거, 제한 부위의 제거 등을 제공하도록 수반될 수 있다. 상기 목적을 위해, 시험관 내 돌연변이 유발, 프라이머 수복, 제한, 어닐링 (annealing), 재치환, 예를 들어, 전이 (transition) 및 염기전환 (transversion)이 수반될 수 있다.

본 발명의 실시에서 많은 프로모터가 사용될 수 있다. 프로모터는 요구되는 성과를 기초로 하여 선택될 수 있다. 핵산은 식물에서 발현을 위해 구성적, 조직-선호, 또는 다른 프로모터와 조합될 수 있다.

그러한 구성적 프로모터는 예를 들어 WO 99/43838 및 미국 특허 6,072,050에 개시된 다른 구성적 프로모터 및 Rsyn7 프로모터의 코어 (core) 프로모터; 코어 CaMV 35S 프로모터 (Odell et al. (1985) Nature 313:810-812); 벼 액틴 (McElroy et al. (1990) Plant Cell 2: 163-171); 유비퀴틴 ([Christensen et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12:619-632] 및 [Christensen et al. (1992) Plant Mol. Biol. 18:675-689]); pEMU (Last et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS (Velten et al. (1984) EMBO J. 3:2723-2730); ALS 프로모터 (미국 특허 5,659,026) 등을 포함한다. 다른 구성적 프로모터는 예를 들어 미국 특허 5,608,149; 5,608,144; 5,604,121; 5,569,597; 5,466,785; 5,399,680; 5,268,463; 5,608,142; 및 6,177,611을 포함한다.

조직-선호 프로모터가 특정 식물 조직 내에서 향상된 AHASL 발현을 표적으로 하기 위해 사용될 수 있다. 그러한 조직-선호 프로모터는 잎-선호 프로모터, 뿌리-선호 프로모터, 종자-선호 프로모터, 및 줄기-선호 프로모터를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 조직-선호 프로모터는 문헌 ([Yamamoto et al. (1997) Plant J. 12(2):255-265]; [Kawamata et al. (1997) Plant Cell Physiol. 38(7): 792-803]; [Hansen et al. (1997) Mol. Gen Genet. 254(3):337-343]; [Russell et al. (1997) Transgenic Res. 6(2):157-168]; [Rinehart et al. (1996) Plant Physiol. 112(3):1331-1341]; [Van Camp et al. (1996) Plant Physiol. 112(2): 525-535]; [Canevascini et al. (1996) Plant Physiol. 112(2):513-524]; [Yamamoto et al. (1994) Plant Cell Physiol. 35(5):773-778]; [Lam (1994) Results Probl. Cell Differ. 20:181-196]; [Orozco et al. (1993) Plant Mol Biol. 23(6):1129-1138]; [Matsuoka et al. (1993) Proc Natl. Acad. Sci. USA 90(20):9586-9590]; 및 [Guevara-Garcia et al. (1993) Plant J. 4(3):495-505]을 포함한다. 그러한 프로모터는 필요한 경우에 약한 발현을 위해 변형될 수 있다.

하나의 실시태양에서, 관심있는 핵산은 발현을 위해 엽록체에 표적화된다. 상기 방식에서, 관심있는 핵산이 엽록체 내로 직접 삽입되지 않는 경우에, 발현 카세트는 관심있는 유전자 산물을 엽록체로 향하도록 하기 위해 엽록체 통과 (transit) 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 엽록체-표적화 서열을 추가로 함유할 것이다. 그러한 통과 펩티드는 당업계에 공지되어 있다. 엽록체-표적화 서열에 관하여, "작동가능하게 연결된"은 통과 펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (즉, 엽록체-표적화 서열)이 2개의 서열이 인접하고 동일한 리딩 프레임 내에 있도록 본 발명의 AHASL 폴리뉴클레오티드에 연결되는 것을 의미한다 (예를 들어, [Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126]; [Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550]; [Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968]; [Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421]; 및 [Shah et al. (1986) Science 233:478-481] 참조). 본 발명의 AHASL 단백질은 천연 엽록체 통과 펩티드를 포함하지만, 당업계에 공지된 임의의 엽록체 통과 펩티드가 엽록체-표적화 서열을 본 발명의 성숙 AHASL 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 5'-말단에 작동가능하게 연결함으로써 본 발명의 성숙 AHASL 단백질의 아미노산 서열에 융합될 수 있다.

엽록체 표적화 서열은 당업계에 공지되어 있고, 리불로스-1,5-비스포스페이트 카르복실라제 (Rubisco)의 엽록체 작은 서브유닛 ([de Castro Silva Filho et al. (1996) Plant Mol. Biol. 30:769-780]; [Schnell et al. (1991) J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342]); 5-(에놀피루빌)쉬키메이트-3-포스페이트 합성효소 (EPSPS) (Archer et al. (1990) J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789-810); 트립토판 합성효소 (Zhao et al. (1995) J. Biol. Chem. 270(11):6081-6087); 플라스토시아닌 (Lawrence et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); 코리스메이트 합성효소 (Schmidt et al. (1993) J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457); 및 광 수확 엽록소 a/b 결합 단백질 (LHBP) (Lamppa et al. (1988) J. Biol. Chem. 263: 14996-14999)을 포함한다 (또한 문헌 ([Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126]; [Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550]; [Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968]; [Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421]; 및 [Shah et al. (1986) Science 233:478-481])을 참조한다).

엽록체의 형질전환을 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 ([Svab et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8526-8530]; [Svab and Maliga (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913-917]; [Svab and Maliga (1993) EMBO J. 12:601-606])을 참조한다). 이 방법은 선택가능 마커를 함유하는 DNA의 입자 총 (gun) 전달, 및 상동성 재조합을 통한 색소체 게놈으로의 DNA의 표적화에 의존한다. 추가로, 색소체 형질전환은 핵에서 코딩되고 색소체를 지향하는 RNA 중합효소의 조직-선호 발현에 의한 침묵 색소체-보유 트랜스젠 (transgene)의 트랜스활성화 (transactivation)에 의해 달성할 수 있다. 그러한 시스템은 문헌 [McBride et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7301-7305]에 보고되어 있다.

엽록체에 표적화시킬 관심있는 핵산은 식물 핵과 상기 소기관 사이에서 코돈 사용의 차이를 고려하도록 엽록체 내에서 발현을 위해 최적화될 수 있다. 상기 방식에서, 관심있는 핵산은 엽록체-선호 코돈을 이용하여 합성될 수 있다 (예를 들어, 본원에 참고로 포함된 미국 특허 5,380,831 참조).

특히, 본 발명은 제초제 내성인 식물을 공학처리하기 위해 적어도 2개의 돌연변이를 포함하는 AHASL 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 사용하는 것을 설명한다. 상기 전략은 본원에서 애기장대에서 애기장대 AHASL 돌연변이체 및 옥수수에서 옥수수 AHASL2 돌연변이체를 사용하여 입증되었지만, 그의 적용은 이들 유전자 또는 이들 식물로 제한되지 않는다. 바람직한 실시태양에서, 제초제는 이미다졸리논 및/또는 술포닐우레아이다. 다른 바람직한 실시태양에서, 제초제 내성은 야생형 식물 및 공지의 AHAS 돌연변이체에 비해 개선 및/또는 향상된다.

본 발명은 또한 (a) 식물 세포 내로 적어도 2개의 돌연변이를 포함하는 AHASL 돌연변이체를 코딩하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 도입하는 것, 및 (b) 식물 세포로부터 제초제 내성인 트랜스제닉 식물을 생성하는 것을 포함하는, 적어도 2개의 돌연변이를 포함하는 AHASL 돌연변이체 코딩 핵산을 함유하는 트랜스제닉 작물 식물을 생산하는 방법을 제공하고, 여기서 식물 내에서 핵산(들)의 발현은 야생형 식물 또는 공지의 AHAS 돌연변이체형 식물에 비해 제초제 내성을 야기한다. 식물 세포는 원형질체, 생식세포 생산 세포, 및 전체 식물로 재생되는 세포를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 본원에서 사용될 때, 용어 "트랜스제닉"은 전부 또는 일부의 적어도 하나의 재조합 폴리뉴클레오티드를 함유하는 임의의 식물, 식물 세포, 캘루스, 식물 조직, 또는 식물 부분을 나타낸다. 많은 경우에, 전부 또는 일부의 재조합 폴리뉴클레오티드는 염색체 또는 안정한 염색체외 요소 내로 안정하게 통합되어, 다음 세대로 전달된다.

또다른 실시태양에서, 본 발명은 본 발명의 돌연변이체 AHASL 폴리펩티드를 선택가능 마커로서 사용하는 것에 관한 것이다. 본 발명은 a) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 일부를 제공하는 것 (여기서 상기 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 일부는 상기 설명된 바와 같은 본 발명의 AHAS 거대 서브유닛 이중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산을 포함하고, 여기서 폴리펩티드는 선택 마커로서 사용되고, 상기 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 일부는 임의로 관심있는 추가의 단리된 핵산을 포함할 수 있다); b) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 일부를 적어도 하나의 AHAS 억제제 또는 AHAS 억제 화합물과 접촉시키는 것; c) 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 일부가 억제제 또는 억제 화합물에 의해 영향을 받는지를 결정하는 것; 및 d) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 일부를 확인 또는 선택하는 것을 포함하는, 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 일부를 확인 또는 선택하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 본원에 기재된 이중 및 삼중 돌연변이를 포함하는 정제된 AHASL 단백질에서 또한 실현되고, 이는 제초제 내성에 대한 추가의 개선을 설계하기 위한 분자 모델링 연구에 유용하다. 단백질 정제의 방법은 잘 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Protein Biotechnology, Walsh and Headon (Wiley, 1994)]에 기재된 바와 같이 상업적으로 입수가능한 제품 또는 특수하게 설계된 방법을 이용하여 쉽게 달성할 수 있다.

본 발명은 AHASL 이중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 1개의 폴리뉴클레오티드, 또는 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 2개의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 비-트랜스제닉 및 트랜스제닉 제초제-내성 식물을 추가로 제공한다. 이로부터 생성된 비-트랜스제닉 식물은 제1 식물을 제2 식물과 교차-수분시키고, 화분 수용체 식물 (제1 또는 제2 식물일 수 있음)이 상기 교차 수분으로부터 종자를 생산하도록 함으로써 생산할 수 있다. 그의 생성된 종자 및 자손체 식물은 1개의 단일 대립유전자 또는 2개의 대립유전자 상에 전달된 이중 돌연변이를 가질 수 있다. 화분-수용체 식물은 제1 또는 제2 식물일 수 있다. 제1 식물은 제1 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 제2 식물은 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 제1 및 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드는 야생형 AHASL 폴리펩티드에 비해 상이한 단일 아미노산 치환을 포함한다. AHASL 이중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 1개의 폴리뉴클레오티드 또는 2개의 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 2개의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 그로부터 발생하는 종자 또는 자손체 식물을 선택할 수 있다. 선택된 자손체 식물은 단일 식물 내에 2개의 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드의 조합으로부터 예측되는 것보다 AHAS-억제 제초제, 예를 들어 이미다졸리논 제초제 또는 술포닐우레아 제초제에 대한 예상외로 더 높은 수준의 내성을 나타낸다. 자손체 식물은 제초제 내성에 관하여 상승작용을 나타내어, 모체 식물로부터 제1 및 제2 돌연변이를 포함하는 자손체 식물에서 제초제 내성의 수준은 2개의 카피의 제1 폴리뉴클레오티드 또는 2개의 카피의 제2 폴리뉴클레오티드를 포함하는 식물의 제초제 내성보다 더 크다.

제1 및 제2 식물이 각각 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드에 동종접합성인 경우에, 각각의 생성되는 자손체 식물은 하나의 카피의 각각의 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 선택 단계는 생략될 수 있다. 적어도 하나의 제1 및 제2 식물이 이종접합성인 경우에, 예를 들어, 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드를 모두 포함하는 자손체 식물을 확인하기 위해 자손체 식물의 DNA를 분석함으로써 또는 증가된 제초제 내성에 대해 자손체 식물을 시험함으로써 두 폴리뉴클레오티드를 모두 포함하는 자손체 식물이 선택될 수 있다. 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드를 모두 포함하는 자손체 식물은 2개의 카피의 제1 폴리펩티드 또는 2개의 카피의 제2 폴리펩티드를 포함하는 식물의 제초제 내성보다 더 큰 수준의 제초제 내성을 나타낸다.

하나의 실시태양에서, 본 발명의 식물은 제1 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드와 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드, 또는 상기 제1 및 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드의 아미노산 돌연변이에 대응하는 아미노산 돌연변이를 야기하는 2개의 뉴클레오티드 돌연변이를 포함하는 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 상기 제1 및 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드는 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 139 또는 서열 2의 위치 107에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 269 또는 서열 2의 위치 237에 대응하는 위치에 히스티딘을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 메티오닌을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 426 또는 서열 2의 위치 394에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 430 또는 서열 2의 위치 398에 대응하는 위치에 발린을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 442 또는 서열 2의 위치 410에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 445 또는 서열 2의 위치 413에 대응하는 위치에 이소류신 또는 아스파르트산을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 580 또는 서열 2의 위치 548에 대응하는 위치에 글루탐산을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 375 또는 서열 2의 위치 343에 대응하는 위치에 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제2 폴리펩티드; 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 205 또는 서열 2의 위치 173에 대응하는 위치에 발린, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 트레오닌, 트립토판 또는 티로신을 갖는 제1 폴리펩티드와 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 제2 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택된다. AHASL 폴리뉴클레오티드의 이중 돌연변이를 포함하는 비-트랜스제닉 식물은 상기 설명된 교차 수분 이외의 방법, 예를 들어 비제한적으로 문헌 [Kochevenko et al., Plant Phys. 132: 174-184, 2003]에 설명된 바와 같은 표적화 생체 내 돌연변이 유발에 의해 생산할 수 있다. 이중 돌연변이는 식물 게놈의 단일 대립유전자, 또는 2개의 대립유전자 상에 위치할 수 있다.

본 발명의 다른 실시태양은 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 트랜스제닉 식물에 관한 것이고, 여기서 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 139 또는 서열 2의 위치 107에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 269 또는 서열 2의 위치 237에 대응하는 위치에 히스티딘을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 메티오닌을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 426 또는 서열 2의 위치 394에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 430 또는 서열 2의 위치 398에 대응하는 위치에 발린을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 442 또는 서열 2의 위치 410에 대응하는 위치에 이소류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 445 또는 서열 2의 위치 413에 대응하는 위치에 이소류신 또는 아스파르트산을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 및 서열 1의 위치 580 또는 서열 2의 위치 548에 대응하는 위치에 글루탐산을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 375 또는 서열 2의 위치 343에 대응하는 위치에 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 205 또는 서열 2의 위치 173에 대응하는 위치에 발린, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 트레오닌, 트립토판 또는 티로신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아세토히드록시산 합성효소 거대 서브유닛 (AHASL) 이중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩한다.

또한, 본 발명은 AHASL 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 하나의 폴리뉴클레오티드, 또는 3개의 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드를 포함하는 비-트랜스제닉 및 트랜스제닉 제초제-내성 식물을 제공한다. 3개의 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드가 존재하는 비-트랜스제닉 식물의 생산을 위해, 상기 설명된 상기 제1 및 제2 돌연변이를 포함하는 1 또는 2개의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 자손체 식물을 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제3 식물과 교차 수분시킨다. 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드는 제1 또는 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드보다 야생형 AHASL 폴리펩티드에 비해 상이한 단일 아미노산 치환을 포함한다. 3개의 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 종자 또는 자손체 식물은 상기한 바와 같이 선택된다. 선택된 자손체 식물은 단일 식물 내에 3개의 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 조합한 상가적 효과보다 더 큰 수준의 제초제 내성을 갖는다. AHASL 폴리뉴클레오티드의 삼중 또는 다중 돌연변이를 포함하는 비-트랜스제닉 식물은 상기 설명된 교차 수분 이외의 방법, 예를 들어 비제한적으로 상기 설명된 바와 같은 표적화 생체 내 돌연변이 유발에 의해 생산할 수 있다. 다중 돌연변이는 식물 게놈의 단일 대립유전자, 또는 다중 대립유전자 상에 위치할 수 있다.

하나의 실시태양에서, 본 발명의 식물은 제1 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드, 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 식물은 3개의 돌연변이를 포함하는 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 3개의 뉴클레오티드 돌연변이는 상기 제1, 제2 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드의 돌연변이에 대응하는 아미노산 돌연변이를 야기한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 식물은 단일 돌연변이를 포함하는 AHASL 코딩 폴리뉴클레오티드 및 이중 돌연변이를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 뉴클레오티드 돌연변이는 상기 언급된 제1, 제2 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드의 돌연변이에 대응하는 아미노산 돌연변이를 야기하고, 상기 제1, 제2 및 제3 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드는 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립 토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 57에 대응하는 위치에 아르기닌, 및 서열 1의 위치 398 또는 서열 2의 위치 366에 대응하는 위치에 류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 95 또는 서열 2의 위치 63에 대응하는 위치에 류신, 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 글루탐산, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 574 또는 서열 2의 위치 542에 대응하는 위치에 임의의 아미노산을 갖는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택된다.

별법으로, AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 식물은 식물을 2개 이상의 상기 폴리뉴클레오티드로 형질전환시키거나 제1 식물을 제1 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드로 형질전환시키고, 제1 식물을 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 식물과 교차 수분시킴으로써 생산된다. 제2 식물은 내인성이거나 형질전환을 통해 도입된 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 포함하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 제1 및 제2 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드는 야생형 AHASL 폴리펩티드에 비해 상이한 단일 아미노산 치환을 포함한다. 필요한 경우에, 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드를 모두 포함하는 종자 또는 자손체 식물이 상기한 바와 같이 선택된다.

본 발명의 또다른 실시태양은 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 트랜스제닉 식물에 관한 것이고, 여기서 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 122 또는 서열 2의 위치 90에 대응하는 위치에 발린, 트레오닌, 글루타민, 시스테인 또는 메티오닌, 서열 1의 위치 57에 대응하는 위치에 아르기닌, 및 서열 1의 위치 398 또는 서열 2의 위치 366에 대응하는 위치에 류신을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 124 또는 서열 2의 위치 92에 대응하는 위치에 글루탐산, 이소류신, 류신 또는 아스파라긴, 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 및 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴을 갖는 폴리펩티드; 서열 1의 위치 95 또는 서열 2의 위치 63에 대응하는 위치에 류신, 서열 1의 위치 416 또는 서열 2의 위치 384에 대응하는 위치에 글루탐산, 및 서열 1의 위치 653 또는 서열 2의 위치 621에 대응하는 위치에 페닐알라닌, 아스파라긴, 트레오닌, 글라이신, 발린 또는 트립토판을 갖는 폴리펩티드; 및 서열 1의 위치 197 또는 서열 2의 위치 165에 대응하는 위치에 세린, 알라닌, 글루탐산, 류신, 글루타민, 아르기닌, 발린, 트립토판, 티로신 또는 이소류신, 서열 1의 위치 199 또는 서열 2의 위치 167에 대응하는 위치에 알라닌, 글루탐산, 세린, 페닐알라닌, 트레오닌, 아스파르트산, 시스테인 또는 아스파라긴, 및 서열 1의 위치 574 또는 서열 2의 위치 542에 대응하는 위치에 임의의 아미노산을 갖는 폴리펩티드로 이루어지는 군 중에서 선택되는 아세토히드록시산 합성효소 거대 서브유닛 (AHASL) 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩한다.

본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드 및 AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 포함하고 이로 제한되지 않는 제초제-내성 또는 제초제-저항성 AHASL 단백질을 포함하는 제초제-내성 또는 제초제-저항성 식물을 제공한다. "제초제-내성" 또는 "제초제-저항성" 식물은, 정상 상태로는 정상 또는 야생형 식물을 죽이거나 또는 그 성장을 억제하는 수준의 적어도 하나의 제초제에 대해 내성 또는 저항성인 식물을 의미한다. "제초제-내성 AHASL 단백질" 또는 "제초제-저항성 AHASL 단백질"은 AHAS 활성을 방해하는 것으로 알려진 적어도 하나의 제초제의 존재 하에 및 야생형 AHASL 단백질의 AHAS 활성을 억제하는 것으로 알려진 제초제의 농도 또는 수준에서 상기 AHASL 단백질이 야생형 AHASL 단백질의 AHAS 활성에 비해 더 높은 AHAS 활성을 보임을 의미한다. 또한, 상기 제초제-내성 또는 제초제-저항성 AHASL 단백질의 AHAS 활성은 본원에서 "제초제-내성" 또는 "제초제-저항성" AHAS 활성으로도 언급될 수 있다.

본 발명에서, 용어 "제초제-내성의" 및 "제초제-저항성의"는 상호 교환가능하게 사용되고, 동등한 의미 및 동등한 범위를 갖는 것으로 의도된다. 이와 유사하게, 용어 "제초제-내성" 및 "제초제-저항성"은 상호 교환가능하게 사용되고, 동등한 의미 및 동등한 범위를 갖는 것으로 의도된다. 마찬가지로, 용어 "이미다졸리논-저항성의" 및 "이미다졸리논-저항성"은 각각 용어 "이미다졸리논-내성의" 및 "이미다졸리논-내성"과 동등한 의미 및 동등한 범위를 갖는 것으로 의도된다.

본 발명은 제초제-저항성 AHASL 폴리뉴클레오티드 및 제초제-저항성 AHASL 단백질을 포함한다. "제초제-저항성 AHASL 폴리뉴클레오티드"는 제초제-저항성 AHAS 활성을 포함하는 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. "제초제-저항성 AHASL 단백질"은 제초제-저항성 AHAS 활성을 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드를 의미한다.

또한, 식물 또는 그의 선조체를 제초제-내성 또는 제초제-저항성 AHASL 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열로 형질전환시킴으로써 제초제-내성 또는 제초제-저항성 AHASL 단백질을 식물 내로 도입할 수 있음이 이해된다. 상기 제초제-내성 또는 제초제-저항성 AHASL 단백질은 제초제-내성 또는 제초제-저항성 AHASL 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된다. 별법으로, 본원에 개시되는 제초제-내성 또는 제초제-저항성 AHASL 단백질, 예를 들어 AHASL 단일 돌연변이 폴리펩티드는 식물 또는 그의 선조체의 게놈 내의 내인성 AHASL 유전자의 자연 발생 또는 유도 돌연변이의 결과로서 식물에서 발생할 수 있다.

본 발명은 적어도 하나의 제초제, 특히 이미다졸리논 또는 술포닐우레아 제초제에 대한 저항성 또는 내성이 증가된 식물, 식물 조직, 식물 세포, 및 숙주 세포를 제공한다. 제초제의 바람직한 양 또는 농도는 "유효량" 또는 "유효 농도"이다. "유효량" 및 "유효 농도"는 각각 유사한 야생형, 식물, 식물 조직, 식물 세포, 또는 숙주 세포를 죽이거나 그 성장을 억제하기에는 충분하지만, 본 발명의 제초제-저항성 식물, 식물 조직, 식물 세포, 및 숙주 세포를 죽이거나 그 성장을 심하게 억제하지 않는 양 및 농도를 의미한다. 일반적으로, 유효량의 제초제는 관심있는 잡초를 죽이기 위해 농업 생산 시스템에서 통상적으로 사용되는 양이다. 상기 양은 당업자에게 공지되어 있다.

"유사한 야생형, 식물, 식물 조직, 식물 세포 또는 숙주 세포"는 각각 본원에 개시된 본 발명의 제초제-저항성 특성 및/또는 특정 폴리뉴클레오티드가 결여된 식물, 식물 조직, 식물 세포, 또는 숙주 세포이다. 따라서, 용어 "야생형"의 사용은 식물, 식물 조직, 식물 세포, 또는 다른 숙주 세포의 게놈에 재조합 DNA가 결여되고/되거나 이들이 본원에 개시된 것과 상이한 제초제-저항성 특성을 갖지 않음을 의미하고자 하는 것이 아니다.

본원에서 사용될 때, 다른 의미로 분명하게 나타내지 않으면, 용어 "식물"은 임의의 발달 단계의 식물, 및 전체의 온전한 식물에 부착되거나 이 식물로부터 분리될 수 있는 식물의 임의의 일부 또는 일부들을 의미하고자 의도된다. 상기 식물의 일부는 기관, 조직, 및 식물의 세포를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 특정 식물 부분의 예는 줄기, 잎, 뿌리, 꽃 집합 (inflorescence), 꽃, 작은 꽃 (floret), 열매, 작은 꽃자루, 화경, 수술, 꽃밥, 암술머리 (stigma), 암술대, 씨방, 꽃잎, 꽃받침 조각, 암술잎, 근단, 근관, 근모, 엽모, 종자모, 화분립, 소포자, 떡잎, 배축, 상배축, 목질부, 체관부, 유조직, 배젖, 반세포, 공변세포, 및 식물의 임의의 다른 공지의 기관, 조직, 및 세포를 포함한다. 또한, 종자는 식물로 이해된다.

본 발명의 식물은 비-트랜스제닉 식물 및 트랜스제닉 식물을 모두 포함한다. "비-트랜스제닉 식물"은 그의 게놈에 재조합 DNA가 결여된 식물을 의미하고자 의도한 것이다. "트랜스제닉 식물"은 그의 게놈에 재조합 DNA를 포함하는 식물을 의미하고자 의도한 것이다. 상기 트랜스제닉 식물은 재조합 DNA를 식물의 게놈 내로 도입함으로써 생성시킬 수 있다. 상기 재조합 DNA가 트랜스제닉 식물의 게놈 내로 통합될 때, 식물의 자손체도 재조합 DNA를 포함할 수 있다. 적어도 하나의 선조체 트랜스제닉 식물의 재조합 DNA의 적어도 일부를 포함하는 자손체 식물도 트랜스제닉 식물이다.

특정 실시태양에서, 본 발명은 돌연변이 육종에 의해 생산된 제초제-저항성 식물을 포함한다. 상기 식물은 AHAS 거대 서브유닛 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 하나 이상의 AHAS-억제 제초제에 내성이다. 상기 방법은 예를 들어 식물 또는 종자를 돌연변이원, 특히 화학적 돌연변이원, 예를 들어 에틸 메탄술포네이트 (EMS)에 노출시키고, 적어도 하나의 AHAS-억제 제초제, 특히 이미다졸리논 제초제 또는 술포닐우레아 제초제에 대한 내성이 향상된 식물을 선택하는 것을 수반할 수 있다. 그러나, 본 발명은 화학적 돌연변이원 EMS를 수반하는 돌연변이 유발 방법에 의해 생성된 제초제-내성 식물로 제한되지 않는다. 당업계에 공지된 임의의 돌연변이 유발 방법을 사용하여 본 발명의 제초제-저항성 식물을 생성시킬 수 있다. 상기 돌연변이 유발 방법은 예를 들어 임의의 하나 이상의 다음 돌연변이원의 사용을 수반할 수 있다: 방사선, 예를 들어 X-선, 감마선 (예를 들어, 코발트 60 또는 세슘 137), 중성자 (예를 들어, 원자로 내에서 우라늄 235에 의한 핵 분열 생성물), 베타 방사선 (예를 들어, 방사성 동위원소, 예를 들어 인 32 또는 탄소 14로부터 방출된), 및 자외선 방사선 (바람직하게는 2500 내지 2900 nm), 및 화학적 돌연변이원, 예를 들어 염기 유사체 (예를 들어, 5-브로모-우라실), 관련 화합물 (예를 들어, 8-에톡시 카페인), 항생제 (예를 들어, 스트렙토니그린), 알킬화제 (예를 들어, 황 머스타드, 질소 머스타드, 에폭시드, 에틸렌아민, 술페이트, 술포네이트, 술폰, 락톤), 아지드, 히드록실아민, 아질산, 또는 아크리딘. 또한, 제초제-저항성 식물은 조직 배양 방법을 사용하여 제초제-저항성 돌연변이를 포함하는 식물 세포를 선택한 후, 그로부터 제초제-저항성 식물을 재생시킴으로써 생성될 수 있다. 예를 들어, 그 전부가 본원에 참고로 포함된 미국 특허 5,773,702 및 5,859,348을 참조한다. 돌연변이 육종에 대한 추가의 상세한 내용은 그 개시 내용이 본원에 참고로 포함된 문헌 ["Principals of Cultivar Development" Fehr, 1993 Macmillan Publishing Company]에서 볼 수 있다.

본 발명은 AHAS 효소의 활성을 방해하는 적어도 하나의 제초제에 대한 식물, 식물 조직, 식물 세포, 또는 다른 숙주 세포의 내성 또는 저항성을 향상시키는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 상기 제초제는 이미다졸리논 제초제, 술포닐우레아 제초제, 트리아졸로피리미딘 제초제, 피리미디닐옥시벤조에이트 제초제, 술포닐아미노-카르보닐트리아졸리논 제초제, 또는 이들의 혼합물이다. 보다 바람직하게는, 상기 제초제는 이미다졸리논 제초제, 술포닐우레아 제초제, 또는 이들의 혼합물이다. 본 발명에서, 이미다졸리논 제초제는 PURSUIT® (이마제타피르), CADRE® (이마자픽), RAPTOR® (이마자목스), SCEPTER® (이마자퀸), ASSERT® (이마자메타벤즈), ARSENAL® (이마자피르), 임의의 상기 언급된 제초제의 유도체, 및 상기 언급된 제초제의 2개 이상의 혼합물, 예를 들어, 이마자피르/이마자목스 (ODYSSEY®)를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 보다 구체적으로, 이미다졸리논 제초제는 2-(4-이소프로필-4-메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-일)-니코틴산, [2-(4-이소프로필)-4][메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-일)-3-퀴놀린카르복실]산, [5-에틸-2-(4-이소프로필-] 4-메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-일)-니코틴산, 2-(4-이소프로필-4-메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-일)-5-(메톡시메틸)-니코틴산, [2-(4-이소프로필-4-메틸-5-옥소-2-] 이미다졸린-2-일)-5-메틸니코틴산, 및 메틸 [6-(4-이소프로필-4-] 메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-일)-m-톨루에이트와 메틸 [2-(4-이소프로필-4-메틸-5-] 옥소-2-이미다졸린-2-일)-p-톨루에이트의 혼합물로부터 선택될 수 있고, 이로 제한되지 않는다. 5-에틸-2-(4-이소프로필-4-메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-일)-니코틴산 및 [2-(4-이소프로필-4-메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-]일)-5-(메톡시메틸)-니코틴산의 사용이 바람직하다. [2-(4-이소프로필-4-] 메틸-5-옥소-2-이미다졸린-2-일)-5-(메톡시메틸)-니코틴산의 사용이 특히 바람직하다.

본 발명에서, 술포닐우레아 제초제는 클로르술푸론, 메트술푸론 메틸, 술포메투론 메틸, 클로리무론 에틸, 티펜술푸론 메틸, 트리베누론 메틸, 벤술푸론 메틸, 니코술푸론, 에타메트술푸론 메틸, 림술푸론, 트리플루술푸론 메틸, 트리아술푸론, 프리미술푸론 메틸, 시노술푸론, 아미도술푸론, 플루자술푸론, 이마조술푸론, 피라조술푸론 에틸, 할로술푸론, 아짐술푸론, 시클로술푸론, 에톡시술푸론, 플라자술푸론, 플루피르술푸론 메틸, 포람술푸론, 요오도술푸론, 옥사술푸론, 메조술푸론, 프로술푸론, 술포술푸론, 트리플록시술푸론, 트리토술푸론, 임의의 상기 언급된 제초제의 유도체, 및 상기 언급된 제초제의 2개 이상의 혼합물을 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 본 발명의 트리아졸로피리미딘 제초제는 클로란술람, 디클로술람, 플로라술람, 플루메트술람, 메토술람, 및 페녹스술람을 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 본 발명의 피리미디닐옥시벤조에이트 (또는 피리미디닐 카르복시) 제초제는 비스피리박, 피리티오박, 피리미노박, 피리벤족심 및 피리프탈리드를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 술포닐아미노-카르보닐트리아졸리논 제초제는 플루카르바존 및 프로폭시카르바존을 포함하고, 이로 제한되지 않는다.

피리미디닐옥시벤조에이트 제초제는 피리미디닐티오벤조에이트 제초제와 밀접하게 관련되고, 미국 잡초 학회 (Weed Science Society of America)에 의해 피리미디닐티오벤조에이트 제초제 명칭의 표제 아래에 개괄됨이 이해된다. 따라서, 본 발명의 제초제는 상기한 피리미디닐옥시벤조에이트 제초제 (이로 제한되지 않음)를 비롯하여 피리미디닐티오벤조에이트 제초제를 추가로 포함한다

본 발명은 본 발명의 AHASL 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 폴리뉴클레오티드 작제물로 식물을 형질전환시키는 것을 포함하는, 식물에서 AHAS 활성을 향상시키는 방법을 제공한다. 이 방법은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 작제물을 적어도 하나의 식물 세포 내로 도입하고, 그로부터 형질전환된 식물을 재생하는 것을 수반한다. 이 방법은 식물 세포에서 유전자 발현을 유도할 수 있는 프로모터의 사용을 수반한다. 바람직하게는, 상기 프로모터는 구성적 프로모터 또는 조직-선호 프로모터이다. 이 방법은 AHAS 효소의 촉매 활성을 방해하는 적어도 하나의 제초제, 특히 이미다졸리논 제초제에 대한 식물의 저항성을 향상시키거나 증가시킬 때 유용하다.

본 발명은 식물, 식물 조직, 식물 세포, 및 다른 숙주 세포에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위한 발현 카세트를 제공한다. 발현 카세트는 전장 (즉, 엽록체 통과 펩티드 포함) 또는 성숙 AHASL 단백질 (즉, 엽록체 통과 펩티드 미함유)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, 식물, 식물 조직, 식물 세포, 또는 관심있는 다른 숙주 세포에서 발현될 수 있는 프로모터를 포함한다. 식물 또는 식물 세포의 색소체 또는 엽록체에서 발현이 요구되는 경우에, 발현 카세트는 또한 엽록체 통과 펩티드를 코딩하는 작동가능하게 연결된 엽록체-표적화 서열을 포함할 수 있다.

본 발명의 발현 카세트는 식물 또는 숙주 세포에서 제초제 내성을 향상시키는 방법에 유용하다. 이 방법은 식물 또는 숙주 세포를 본 발명의 발현 카세트로 형질전환시키는 것을 수반하고, 여기서 발현 카세트는 관심있는 식물 또는 숙주 세포에서 발현될 수 있는 프로모터를 포함하고, 프로모터는 본 발명의 이미다졸리논-저항성 AHASL 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된다.

본원에서 용어 "폴리뉴클레오티드 작제물"의 사용은 본 발명을 DNA를 포함하는 폴리뉴클레오티드 작제물로 제한하고자 의도하지 않는다. 당업자는 리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드와 데옥시리보뉴클레오티드의 조합물로 이루어진 폴리뉴클레오티드 작제물, 특히 폴리뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드도 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있음을 알 것이다. 따라서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 작제물은 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 및 이들의 조합물로 이루어진 것을 비롯하여 이로 제한되지 않는, 식물을 형질전환시키기 위한 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 모든 폴리뉴클레오티드 작제물을 포함한다. 상기 데옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드는 자연 발생하는 분자 및 합성 유사체를 모두 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 작제물은 또한 단일가닥 형태, 이중가닥 형태, 헤어핀, 스템-루프 (stem-and-loop) 구조 등을 포함하고 이로 제한되지 않는 모든 형태의 폴리뉴클레오티드 작제물을 포함한다. 또한, 본원에 개시된 각각의 뉴클레오티드 서열이 예시된 뉴클레오티드 서열의 보체도 포함함을 당업자는 이해할 것이다.

또한, 관심있는 숙주 세포에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위해, 폴리뉴클레오티드는 일반적으로 관심있는 숙주 세포에서 유전자 발현을 유도할 수 있는 프로모터에 작동가능하게 연결됨이 이해된다. 숙주 세포에서 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위한 본 발명의 방법은 특정 프로모터에 의존하지 않는다. 이 방법은 관심있는 숙주 세포에서 유전자 발현을 유도할 수 있는, 당업계에 공지된 임의의 프로모터의 사용을 포함한다.

본 발명은 AHASL 폴리뉴클레오티드 분자 및 그의 단편 및 변이체를 포함한다. 이들 뉴클레오티드 서열의 단편인 폴리뉴클레오티드 분자도 본 발명에 포함된다. "단편"은 본 발명의 AHASL 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 일부이다. 바람직하게는, 본 발명의 AHASL 뉴클레오티드 서열의 단편은 AHASL 단백질의 생물학적 활성 부분을 코딩한다. AHASL 단백질의 생물학적 활성 부분은 본 발명의 AHASL 뉴클레오티드 서열 중의 하나의 일부를 단리하고, AHASL 단백질의 코딩되는 부분을 발현시키고 (예를 들어, 시험관 내에서 재조합 발현에 의해), AHASL 단백질의 코딩되는 부분의 활성을 평가함으로써 제조될 수 있다. AHASL 뉴클레오티드 서열의 단편이고 AHASL 단백질의 생물학적 활성 부분을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 분자는 의도하는 용도에 따라 적어도 약 500, 750, 1000, 1250, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 또는 2000개의 뉴클레오티드, 또는 본원에 개시되는 전장 뉴클레오티드 서열에 존재하는 뉴클레오티드의 수까지 (예를 들어, 서열 30의 경우에 2013개의 뉴클레오티드) 포함한다.

본 발명의 AHASL 단백질의 생물학적 활성 부분을 코딩하는 AHASL 뉴클레오티드 서열의 단편은 적어도 약 200, 300, 400, 500, 550, 650, 또는 650개의 인접한 아미노산, 또는 본 발명의 전장 AHASL 단백질에 존재하는 아미노산의 수까지 (예를 들어, 서열 1의 경우에 670개의 아미노산) 코딩할 것이다.

본원에 개시된 뉴클레오티드 서열의 변이체인 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 분자도 본 발명에 포함된다. 본 발명의 AHASL 뉴클레오티드 서열의 "변이체"는, 본원에 개시된 돌연변이체 AHASL 폴리펩티드를 코딩하지만 유전자 코드의 퇴화 (degeneracy) 때문에 보존적으로 상이한 서열을 포함한다. 이들 자연 발생하는 대립유전자 변이체는 공지된 분자 생물학 기술, 예를 들어 아래에서 개괄적으로 설명하는 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 및 혼성화 기술을 사용하여 확인될 수 있다. 또한, 변이체 뉴클레오티드 서열은, 예를 들어 아래에서 논의되는 바와 같이 부위 지정 돌연변이 유발을 사용하여 생성되지만 본 발명에서 개시되는 AHASL 단백질을 계속 코딩하는 합성 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열 변이체는 본원에서 개시되는 특정 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 80％, 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성을 가질 것이다. 변이체 AHASL 폴리뉴클레오티드 서열은 본원에서 개시되는 AHASL 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80％, 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 AHASL 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩할 것이다.

또한, 당업자는 돌연변이에 의해 변화가 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열 내로 도입되어, 이중 및 삼중 돌연변이체 폴리펩티드의 생물학적 활성을 변경시키지 않으면서 코딩되는 AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체 폴리펩티드의 아미노산 서열을 변경시킬 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실이 코딩되는 단백질에 도입되도록 하나 이상의 뉴클레오티드 치환, 부가, 또는 결실을 본원에 개시된 대응하는 뉴클레오티드 서열에 도입함으로써 도 1 및 2에 제시된 이중 및 삼중 돌연변이체 서열과 상이한 서열을 갖는 AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 분자가 생성될 수 있다. 돌연변이는 표준 기술, 예를 들어 부위 지정 돌연변이 유발 및 PCR-매개 돌연변이 유발에 의해 도입될 수 있다. 상기 변이체 뉴클레오티드 서열도 본 발명에 포함된다.

예를 들어, 바람직하게는, 보존적 아미노산 치환은 하나 이상의 예측된, 바람직하게는 비필수적인 아미노산 잔기에서 이루어질 수 있다. "비필수적인" 아미노산 잔기는 생물학적 활성을 변경시키지 않으면서 AHASL 단백질의 야생형 서열 (예를 들어, 서열 1의 서열)로부터 변경될 수 있는 잔기이고, "필수적인" 아미노산 잔기는 생물학적 활성에 필요한 잔기이다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 부류는 당업계에 규정되어 있다. 상기 부류는 염기성 측쇄 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향성 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 상기 치환은 보존되는 아미노산 잔기에 대해, 또는 보존되는 모티프 내에 위치하는 아미노산 잔기에 대해서는 실시되지 않을 것이다.

본 발명의 단백질은 아미노산 치환, 결실, 말단 절단, 및 삽입을 포함하는 다양한 방식으로 변경될 수 있다. 이러한 조작을 위한 방법은 일반적으로 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, AHASL 단백질의 아미노산 서열 변이체는 DNA의 돌연변이에 의해 제조할 수 있다. 돌연변이 유발 및 뉴클레오티드 서열 변경을 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492]; [Kunkel et al. (1987) Methods in Enzymol. 154:367-382]; 미국 특허 4,873,192; [Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York)] 및 상기 문헌에서 인용된 참고문헌을 참조한다. 관심있는 단백질의 생물학적 활성에 영향을 주지 않는 적절한 아미노산 치환에 대한 지침은 본원에 참고로 포함된 문헌의 모델에서 볼 수 있다 [Dayhoff et al. (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC)]. 보존적 치환, 예를 들어 한 아미노산을 유사한 특성을 갖는 다른 아미노산으로 교환하는 것이 바람직할 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드 분자 및 폴리펩티드가, 도 1 및 2에 제시된 이중 또는 3중 뉴클레오티드 서열, 또는 도 1 및 2에 제시된 아미노산 서열에 충분히 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 분자 및 폴리펩티드를 포함하는 것이 이해된다. 용어 "충분히 동일한"은 본원에서 제1 및 제2 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열이 공통의 구조 도메인 및/또는 공통의 기능적 활성을 갖도록 제2 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열에 대해 동일하거나 동등한 (예를 들어, 유사한 측쇄를 갖는) 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 충분한 또는 최소의 수를 함유하는 제1 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열을 나타내기 위해 사용된다. 예를 들어, 적어도 약 80％ 동일성, 바람직하게는 85％ 동일성, 보다 바람직하게는 90％, 95％ 또는 98％ 동일성을 갖는 공통의 구조 도메인을 함유하는 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열은 본원에서 충분히 동일한 것으로 규정된다.

2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산의 동일성 비율을 결정하기 위해서, 서열을 최적의 비교 목적을 위해 정렬한다. 2개의 서열 사이의 동일성 비율은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, 동일성 비율 = 동일한 위치의 수/위치 (예를 들어, 중복되는 위치)의 총 수 x 100). 하나의 실시태양에서, 2개의 서열은 동일한 길이이다. 2개의 서열 사이의 동일성 비율은 갭을 허용하거나 허용하지 않으면서 아래에서 설명되는 것과 유사한 기술을 사용하여 결정할 수 있다. 동일성 비율을 계산할 때, 일반적으로 정확히 일치하는 위치를 계수한다.

2개의 서열 사이의 동일성 비율의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다. 2개의 서열 비교에 이용되는 바람직한 수학적 알고리즘의 비제한적인 예는 문헌 [Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]에서와 같이 변형된 문헌 [Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264]의 알고리즘이다. 상기 알고리즘은 문헌 [Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램 내에 도입된다. BLAST 뉴클레오티드 검색은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 분자에 상동성인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 단어 길이 = 12를 사용하여 수행할 수 있다. BLAST 단백질 검색은 본 발명의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 단어 길이 = 3을 사용하여 수행할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 형성된 (gapped) 정렬을 얻기 위해, Gapped BLAST를 문헌 [Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389]에 설명된 바와 같이 사용할 수 있다. 별법으로, PSI-BLAST를 사용하여 분자 사이의 먼 관계를 검출하는 반복 탐색을 수행할 수 있다 (문헌 [Altschul et al. (1997) 상기 문헌] 참조). BLAST, Gapped BLAST, PSI-Blast 프로그램을 사용할 때, 각각의 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터를 사용할 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov를 참조한다. 서열 비교를 위해 사용되는 수학적 알고리즘의 다른 바람직한 비제한적인 예는 문헌 [Myers and Miller (1988) CABIOS 4:11-17]의 알고리즘이다. 상기 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내에 도입된다. 아미노산 서열을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 이용할 때, PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 (gap length penalty) 12, 및 갭 페널티 4를 사용할 수 있다. 정렬은 검사에 의해 수동으로 수행할 수도 있다.

달리 지시하지 않으면, 본원에서 제시되는 서열 동일성/유사성 값은 본 발명의 전장 서열을 사용하고, 디폴트 파라미터를 사용하는 소프트웨어 패키지 Vector NTI Suite Version 9 (인비트로겐 (Invitrogen, 미국 캘리포니아주 92008 칼스바드 패러데이 애비뉴 1600))에 포함된 프로그램 AlignX; 또는 그의 임의의 동등한 프로그램을 사용하여 알고리즘 Clustal W (Nucleic Acid Research, 22(22):4673-4680, 1994)에 의한 다수의 정렬을 사용하여 얻은 값을 나타낸다. "동등한 프로그램"은 소프트웨어 패키지 Vector NTI Suite Version 9의 AlignX로 생성시킨 대응하는 정렬과 비교할 때 목적하는 임의의 2개의 서열에 대해 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 일치 및 동일한 서열 동일성 비율을 갖는 정렬을 생성시키는 임의의 서열 비교 프로그램을 의미한다.

본원에 포함되는 단백질 서열의 결실, 삽입, 및 치환은 단백질의 특성의 근본적인 변화를 야기할 것으로 예상되지 않는다. 그러나, 미리 치환, 결실 또는 삽입의 정확한 효과를 예측하는 것이 어려울 때, 당업자는 그 효과가 통상적인 스크리닝 분석에 의해 평가될 것임을 이해할 것이다. 즉, 활성은 AHAS 활성 분석에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 본원에 참고로 포함된 문헌 [Singh et al. (1988) Anal. Biochem. 171: 173-179]을 참조한다.

본원에서 개시되는 바와 같이, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 제초제-내성 AHASL 단백질을 코딩하는 유전자를 그 게놈에 포함하는 식물의 제초제 내성 향상에 유용하다. 그러한 유전자는 내인성 유전자 또는 트랜스젠일 수 있다. 추가로, 특정 실시태양에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 요구되는 표현형을 갖는 식물을 생성시키기 위해서 관심있는 폴리뉴클레오티드 서열의 임의의 조합물과 조합될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 구충 및/또는 살충 활성을 갖는 폴리펩티드, 예를 들어 바실러스 터링기엔시스 ( Bacillus thuringiensis ) 독소 단백질 (미국 특허 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; 및 [Geiser et al (1986) Gene 48: 109]에 기재되어 있는)을 코딩하는 임의의 다른 폴리뉴클레오티드와 조합될 수 있다. 생성된 조합물은 또한 임의의 하나의 관심있는 폴리뉴클레오티드의 다수의 카피를 포함할 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드가 식물 형질전환을 위한 선택가능 마커 유전자로서 유용하지만, 본 발명의 발현 카세트는 형질전환된 세포의 선택을 위한 다른 선택가능 마커 유전자를 포함할 수 있다. 본 발명의 마커 유전자를 포함하는 선택가능 마커 유전자가 형질전환된 세포 또는 조직의 선택을 위해 사용된다. 마커 유전자는 항생제 저항성을 코딩하는 유전자, 예를 들어 네오마이신 포스포트랜스퍼라제 II (NEO) 및 히그로마이신 포스포트랜스퍼라제 (HPT)를 코딩하는 유전자, 및 제초 활성 화합물, 글루포시네이트 암모늄, 브로목시닐, 이미다졸리논, 및 2,4-디클로로페녹시아세테이트 (2,4-D)에 대한 저항성을 부여하는 유전자를 포함하고, 이로 제한되지 않는다 (일반적으로, [Yarranton (1992) Curr. Opin. Biotech. 3:506-511]; [Christopherson et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:6314-6318]; [Yao et al. (1992) Cell 71:63-72]; [Reznikoff (1992) Mol. Microbiol 6:2419-2422]; [Barkley et al. (1980) in The Operon, pp. 177-220]; [Hu et al. (1987) Cell 48:555-566]; [Brown et al. (1987) Cell 49:603-612]; [Figge et al. (1988) Cell 52:713-722]; [Deuschle et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Aci. USA 86:5400-5404]; [Fuerst et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2549-2553]; [Deuschle et al. ( 1990) Science 248:480-483]; [Gossen (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg]; [Reines et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:1917-1921]; [Labow et al. (1990) Mol. Cell. Biol. 10:3343-3356]; [Zambretti et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3952-3956]; [Baim et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:5072-5076]; [Wyborski et al. (1991) Nucleic Acids Res. 19:4647-4653]; [Hillenand-Wissman (1989) Topics Mol. Struc. Biol. 10:143-162]; [Degenkolb et al. (1991) Antimicrob. Agents Chemother. 35:1591-1595]; [Kleinschnidt et al. (1988) Biochemistry 27:1094-1104]; [Bonin (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg]; [Gossen et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-5551]; [Oliva et al. (1992) Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919]; [Hlavka et al. (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78 (Springer-Verlag, Berlin)]; [Gill et al. (1988) Nature 334:721-724] 참조). 상기 문헌의 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다.

선택가능 마커 유전자의 상기 목록은 그로 제한되는 것을 의미하지 않는다. 임의의 선택가능 마커 유전자를 본 발명에서 사용할 수 있다.

본 발명의 AHASL 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드 분자는 생성되는 식물이 제초제, 특히 이미다졸리논 제초제 또는 술포닐우레아 제초제에 대한 향상된 저항성을 갖도록 식물을 형질전환시키기 위해 벡터에 사용될 수 있다. 본 발명의 단리된 AHASL 폴리뉴클레오티드 분자는 식물에 제초제 저항성을 부여할 때 벡터에 단독으로 또는 AHAS 효소의 작은 서브유닛 (AHASS)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 조합되어 사용될 수 있다. 본원에 참고로 포함된 미국 특허 6,348,643을 참조한다.

본 발명은 또한 본 발명의 단리된 폴리뉴클레오티드 분자에 작동가능하게 연결된, 식물에서 발현을 유도하는 프로모터를 포함하는 식물 발현 벡터에 관한 것이다. 단리된 폴리뉴클레오티드 분자는 본 발명의 AHASL 단백질, 또는 그의 기능적 단편 및 변이체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본 발명의 식물 발현 벡터는 프로모터가 식물 세포에서 유전자 발현을 유도할 수 있다는 것을 제외하고는 특정 프로모터에 의존하지 않는다. 바람직한 프로모터는 구성적 프로모터 및 조직-선호 프로모터를 포함한다.

본 발명의 형질전환 벡터는 관심있는 유전자로 형질전환된 식물을 생성시키기 위해 사용될 수 있다. 형질전환 벡터는 본 발명의 선택가능 마커 유전자, 및 형질전환된 식물 내에 도입되고 일반적으로 발현되는 관심있는 유전자를 포함할 것이다. 상기 선택가능 마커 유전자는 AHASL 이중 또는 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포에서 발현을 유도하는 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 식물 및 식물 세포에서 사용하기 위해, 형질전환 벡터는 식물 세포에서 발현을 유도하는 프로모터에 작동가능하게 연결된, AHASL 이중 또는 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 선택가능 마커 유전자를 포함한다.

본 발명의 관심있는 유전자는 요구되는 성과에 따라 상이하다. 예를 들어, 식물 내의 지방산 조성의 변형, 식물의 아미노산 함량의 변경, 식물의 곤충 및/또는 병원체 방어 메카니즘의 변경 등을 포함하는 표현형의 다양한 변화가 중요할 수 있다. 이들 결과는 식물에서 이종성 산물의 발현 또는 내인성 산물의 증가된 발현을 제공함으로써 달성될 수 있다. 별법으로, 상기 결과는 식물에서 하나 이상의 내인성 산물, 특히 효소 또는 보조인자의 발현 감소를 제공함으로써 달성될 수 있다. 이들 변화는 형질전환된 식물의 표현형을 변경시킨다.

본 발명의 하나의 실시태양에서, 관심있는 유전자는 곤충 저항성 유전자, 예를 들어 바실러스 터링기엔시스 독소 단백질 유전자를 포함한다 (미국 특허 5,366,892; 5,747,450; 5,736,514; 5,723,756; 5,593,881; 및 [Geiser et al. (1986) Gene 48:109]).

본 발명의 AHASL 단백질 또는 폴리펩티드는 예를 들어 해바라기 식물로부터 정제될 수 있고, 조성물에 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 AHASL 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 분자는 이. 콜라이 또는 효모와 같은 미생물에서 본 발명의 AHASL 단백질을 발현시키기 위해 사용될 수 있다. 발현된 AHASL 단백질은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 이. 콜라이 또는 효모의 추출물로부터 정제될 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 제초제-내성 식물의 저항성을 향상시키는 방법에 유용하다. 본 발명의 하나의 실시태양에서, 제초제-내성 식물은 AHASL 이중 또는 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명은 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드를 코딩하는 제초제-내성 식물을 추가로 제공한다. 제초제-내성 AHASL 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 제초제-내성 AHASL 단백질을 코딩하는 내인성 유전자를 포함하는 제초제-내성 식물은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 식물 및 당업계에 공지된 것을 포함한다. 예를 들어, 그 모두가 본원에 참고로 포함된 미국 특허 5,013,659, 5,731,180, 5,767,361, 5,545,822, 5,736,629, 5,773,703, 5,773,704, 5,952,553 및 6,274,796을 참조한다. 제초제-내성 식물의 저항성을 향상시키기 위한 상기 방법은 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, 식물 세포에서 발현을 유도하는 프로모터를 포함하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 작제물로 제초제-내성 식물을 형질전환시키는 것을 포함한다.

많은 식물 형질전환 벡터 및 식물의 형질전환 방법을 이용할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [An, G. et al. (1986) Plant Physiol., 81:301-305]; [Fry, J., et al. (1987) Plant Cell Rep. 6:321-325]; [Block, M. (1988) Theor. Appl Genet. 76:767-774]; [Hinchee, et al. (1990) Stadler. Genet. Symp. 203212.203-212]; [Cousins, et al. (1991) Aust. J. Plant Physiol. 18:481-494]; [Chee, PP and Slightom, JL (1992) Gene. 118:255-260]; [Christou, et al. (1992) Trends. Biotechnol. 10:239-246]; [D'Halluin, et al. (1992) Bio/Technol. 10:309-314]; [Dhir, et al. (1992) Plant Physiol. 99:81-88]; [Casas et al. (1993) Proc. Nat. Acad Sci. USA 90:11212-11216]; [Christou, P. (1993) In Vitro Cell. Dev. Biol.-Plant; 29P: 119-124]; [Davies, et al. (1993) Plant Cell Rep. 12:180-183]; [Dong, JA and Mchughen, A. (1993) Plant Sci. 91:139-148]; [Franklin, CI and Trieu, TN (1993) Plant. Physiol. 102:167]; [Golovkin, et al. (1993) Plant Sci. 90:41-52]; [Guo Chin Sci. Bull. 38:2072-2078]; [Asano, et al. (1994) Plant Cell Rep. 13]; [Ayeres NM and Park, WD (1994) Crit. Rev. Plant. Sci. 13:219-239]; [Barcelo, et al. (1994) Plant. J. 5:583-592]; [Becker, et al. (1994) Plant. J. 5:299-307]; [Borkowska et al. (1994) Acta. Physiol Plant. 16:225-230]; [Christou, P. (1994) Agro. Food. Ind. Hi Tech. 5:17-27]; [Eapen et al. (1994) Plant Cell Rep. 13:582-586]; [Hartman, et al. (1994) Bio-Technology 12: 919923]; [Ritala, et al. (1994) Plant. Mol. Biol. 24:317-325]; 및 [Wan, YC and Lemaux, PG (1994) Plant Physiol. 104:3748]을 참조한다.

본 발명의 방법은 폴리뉴클레오티드 작제물을 식물 내로 도입하는 것을 포함한다. "도입하는"은 작제물이 식물의 세포 내부로 통과할 수 있는 방식으로 폴리뉴클레오티드 작제물을 식물에 제시하는 것을 의미한다. 본 발명의 방법은 폴리뉴클레오티드 작제물이 적어도 하나의 식물 세포 내부로 통과할 수 있다는 것을 제외하고는 폴리뉴클레오티드 작제물을 식물에 도입하기 위한 특정 방법에 의존하지 않는다. 폴리뉴클레오티드 작제물을 식물 내로 도입하기 위한 방법은 안정한 형질전환 방법, 일시적 형질전환 방법, 및 바이러스-매개 방법 (이로 제한되지 않음)을 포함하여 당업계에 공지되어 있다.

"안정한 형질전환"은 식물 내로 도입된 폴리뉴클레오티드 작제물이 식물의 게놈 내로 통합되고, 그의 자손체에 의해 유전될 수 있음을 의미한다. "일시적 형질전환"은 식물 내로 도입된 폴리뉴클레오티드 작제물이 식물의 게놈 내로 통합되지 않음을 의미한다.

식물 및 식물 세포의 형질전환을 위해, 본 발명의 뉴클레오티드 서열은 표준 기술을 사용하여 식물 또는 식물 세포에서 뉴클레오티드 서열의 발현에 적합한, 당업계에 공지된 임의의 벡터 내로 삽입된다. 벡터의 선택은 바람직한 형질전환 기술 및 형질전환되는 표적 식물 종에 따라 결정된다. 본 발명의 실시태양에서, AHASL 뉴클레오티드 서열은 식물 세포에서 고수준의 발현을 유도하는 것으로 공지된 식물 프로모터에 작동가능하게 연결된 후, 상기 작제물은 이미다졸리논 또는 술포닐우레아 제초제에 감수성인 식물 내로 도입되고, 형질전환된 식물이 재생된다. 형질전환된 식물은 형질전환되지 않은 식물을 죽이거나 유의하게 손상시킬 수준의 이미다졸리논 또는 술포닐우레아 제초제 노출에 대해 내성이다. 상기 방법은 임의의 식물 종에 대해 적용할 수 있지만; 작물 식물에 적용할 때 가장 유익하다.

식물 발현 카세트를 제조하고 외래 핵산을 식물 내로 도입하는 방법은 일반적으로 당업계에 공지되어 있고, 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 외래 DNA는 종양-유도 (Ti) 플라스미드 벡터를 사용하여 식물 내로 도입시킬 수 있다. 아그로박테리움 ( Agrobacterium ) 기반 형질전환 기술은 당업계에 공지되어 있다. 아그로박테리움 균주 (예를 들어, 아그로박테리움 투메파시엔스 또는 아그로박테리움 리조게네스 ( A. rhizogenes ))는 플라스미드 (Ti 또는 Ri 플라스미드) 및 아그로박테리움 감염 후에 식물에 전달되는 T-DNA 요소를 포함한다. T-DNA (전달되는 DNA)는 식물 세포의 게놈 내로 통합된다. T-DNA는 Ri- 또는 Ti-플라스미드 상에 위치할 수 있거나 또는 소위 2원 벡터에 별개로 포함된다. 아그로박테리움-매개 형질전환 방법은 예를 들어 문헌 [Horsch RB et al. (1985) Science 225: 1229f]에 기재되어 있다. 아그로박테리움-매개 형질전환은 쌍떡잎 식물 및 외떡잎 식물 모두에서 사용될 수 있다. 아그로박테리움에 의한 식물의 형질전환은 문헌에 기재되어 있다 ([White FF, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; Vol. 1, Engineering and Utilization, edited by SD Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38]; [Jenes B et al. (1993) Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, edited by SD Kung and R. Wu, Academic Press, pp. 128-143]; [Potrykus (1991) Annu Rev Plant Physiol Plant Molec Biol 42:205-225]). 외래 DNA 전달을 위해 사용되는 다른 방법은 PEG 매개 원형질체 형질전환, 전기천공 (electroporation), 미세주사 위스커 (whisker), 및 직접 DNA 흡수를 위한 바이올리스틱 (biolistic) 또는 미세투사 (microprojectile) 폭격의 사용을 수반한다. 상기 방법은 당업계에 공지되어 있다 (미국 특허 5,405,765 (Vasil et al); [Bilang et al. (1991) Gene 100: 247-250]; [Scheid et al. (1991) Mol. Gen. Genet., 228:104-112]; [Guerche et al. (1987) Plant Science 52:111-116]; [Neuhause et al. (1987) Theor. Appl Genet. 75:30-36]; [Klein et al. (1987) Nature 327:70-73]; [Howell et al. (1980) Science 208:1265]; [Horsch et al. (1985) Science 227:1229-1231]; [DeBlock et al. (1989) Plant Physiology 91:694-701]; [Methods for Plant Molecular Biology (Weissbach and Weissbach, eds.) Academic Press, Inc. (1988)] 및 [Methods in Plant Molecular Biology (Schuler and Zielinski, eds.) Academic Press, Inc. (1989)]. 형질전환 방법은 형질전환되는 식물 세포, 사용되는 벡터의 안정성, 유전자 산물의 발현 수준 및 다른 파라미터에 의해 결정된다.

뉴클레오티드 서열을 식물 세포 내로 도입한 후, 식물 게놈 내로 삽입하기 위한 다른 적합한 방법은 미세주사 [Crossway et al. (1986) Biotechniques 4:320-334], 전기천공 [Riggs et al. (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:5602-5606], 아그로박테리움-매개 형질전환 [Townsend et al. 미국 특허 5,563,055, Zhao et al. 미국 특허 5,981,840], 직접 유전자 전달 [Paszkowski et al. (1984) EMBO J. 3:2717-2722], 및 탄도 (ballistic) 입자 가속 [예를 들어, Sanford et al. 미국 특허 4,945,050; Tomes et al. 미국 특허 5,879,918; Tomes et al. 미국 특허 5,886,244; Bidney et al. 미국 특허 5,932,782; [Tomes et al. (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment," in Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg and Phillips (Springer-Verlag, Berlin)]; [McCabe et al. (1988) Biotechnology 6:923-926]); 및 Lec1 형질전환 (WO 00/28058)을 포함한다. 또한, 문헌 [Weissinger et al. (1088) Ann. Rev. Genet. 22:421-477]; [Sanford et al. (1987) Particulate Science and Technology 5:27-37 (양파)]; [Christou et al. (1988) Plant Physiol. 87:671-674 (대두)]; [McCabe et al. (1988) Bio/Technology 6:923-926 (대두)]; [Finer and McMullen (1991) In Vitro Cell Dev. Biol. 27P:175-182 (대두)]; [Singh et al. (1998) Theor. Appl. Genet. 96:319-324 (대두)]; [Datta et al. (1990) Biotechnology 8:736-740 (벼)]; [Klein et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4305-4309 (옥수수)]; [Klein et al. (1988) Biotechnology 6:559-563 (옥수수)]; Tomes, 미국 특허 5,240,855; Buising et al. 미국 특허 5,322,783 및 5,324,646; [Tomes et al. (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment," in Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg (Springer-Verlag, Berlin) (옥수수)]; [Klein et al. (1988) Plant Physiol. 91:440-444 (옥수수)]; [Fromm et al. (1990) Biotechnology 8:833-839 (옥수수)]; [Hooykaas-Van Slogteren et al. (1984) Nature (London) 311:763-764]; [Bowen et al. 미국 특허 5,736,369 (곡물)]; [Bytebier et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5345-5349 (백합과 (Liliaceae))]; [De Wet et al. (1985) in The Experimental Manipulation of Ovule Tissues, ed. Chapman et al. (Longman, New York), pp. 197-209 (화분)]; [Kaeppler et al. (1990) Plant Cell Reports 9:415-418] 및 [Kaeppler et al. (1992) Theor. Appl. Genet. 84:560-566 (위스커-매개 형질전환)]; [D'Halluin et al. (1992) Plant Cell 4: 1495-1505 (전기천공)]; [Li et al. (1993) Plant Cell Reports 12:250-255] 및 [Christou and Ford (1995) Annals of Botany 75:407-413 (벼)]; [Osjoda et al. (1996) Nature Biotechnology 14:745-750 (아그로박테리움 투메파시엔스를 통한 옥수수)]을 참조한다 (상기 모든 문헌은 본원에 참고로 포함됨).

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 식물을 바이러스 또는 바이러스 핵산과 접촉시킴으로써 식물 내로 도입될 수 있다. 일반적으로, 상기 방법은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 작제물을 바이러스 DNA 또는 RNA 분자에 통합시키는 것을 수반한다. 본 발명의 AHASL 단백질은 처음에 바이러스 다중단백질 (polyprotein)의 일부로서 합성된 후, 요구되는 재조합 단백질을 생산하기 위해 생체 내에서 또는 시험관 내에서 단백질 분해 (proteolysis)에 의해 처리될 수 있음이 이해된다. 또한, 본 발명의 프로모터가 바이러스 RNA 중합효소에 의한 전사에 이용되는 프로모터도 포함함이 이해된다. 폴리뉴클레오티드 작제물을 식물 내로 도입하고, 바이러스 DNA 또는 RNA 분자를 포함하여 식물 내에서 코딩된 단백질을 발현시키기 위한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참고로 포함된 미국 특허 5,889,191, 5,889,190, 5,866,785, 5,589,367 및 5,316,931을 참조한다.

형질전환된 세포는 종래의 방식에 따라 식물로 성장시킬 수 있다. 예를 들어, 문헌 [McCormick et al. (1986) Plant Cell Reports 5:81-84]을 참조한다. 이어서, 이들 식물을 성장시키고, 동일한 형질전환된 균주 또는 상이한 균주로 수분시키고, 요구되는 표현형 특성을 구성적으로 발현하는 생성되는 하이브리드를 확인할 수 있다. 요구되는 표현형 특성의 발현이 안정하게 유지되고 유전되는 것을 보장하기 위해 2 이상의 세대를 성장시킨 후, 요구되는 표현형 특성의 발현이 달성되지를 보장하기 위해 종자를 수확할 수 있다. 상기 방식에서, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 작제물, 예를 들어, 본 발명의 발현 카세트가 그의 게놈 내로 안정하게 통합된 형질전환된 종자 ("트랜스제닉 종자"로도 언급됨)를 제공한다.

본 발명은 외떡잎식물 및 쌍떡잎식물을 포함하고 이로 제한되지 않는 임의의 식물 종의 형질전환을 위해 사용될 수 있다. 관심있는 식물 종의 예는 옥수수 또는 옥수수 (제아 메이즈), 브라시카 종 (예를 들어, 비. 나푸스, 비. 라파 ( B. rapa ), 비. 준세아 ( B. juncea )), 특히 종자 오일의 공급원으로서 유용한 브라시카 종, 알팔파 (메디카고 사티바 ( Medicago sativa )), 벼 (오리자 사티바), 호밀 (세칼레 시리알레 ( Secale cereale )), 수수 (소르검 비콜라, 소르검 불가레 ( Sorghum vulgare )), 기장 (예를 들어, 진주 기장 (페니세툼 글라우쿰 ( Pennisetum glaucum )), 프로소 (proso) 기장 (파니쿰 밀리아세움 ( Panicum miliaceum )), 조 (세타리아 이탈리카 ( Setaria italica )), 손가락 기장 (엘류신 코라카나 ( Eleusine coracana )), 해바라기 (헬리안투스 안누우스), 홍화 (카르타무스 틴크토리우스 ( Carthamus tinctorius )), 밀 (트리티쿰 애스티붐, 티. 투르기둠 ( T. Turgidum ) 종 밀), 대두 (글라이신 맥스), 담배 (니코티아나 타바쿰), 감자 (솔라늄 투베로섬), 땅콩 (아라키스 히포가에아 ( Arachis hypogaea )), 면 (고시피움 바르바덴스 ( Gossypium barbadense ; 목화), 육지면), 고구마 (이포모에아 바타투스 ( Ipomoea batatus )), 카사바 (마니호트 에스쿨렌타 ( Manihot esculenta )), 커피 (코페아 ( Coffea ) 종), 코코넛 (코코스 뉴시페라 ( Cocos nucifera )), 파인애플 (아나나스 코모수스 ( Ananas comosus )), 감귤나무 (시트루스 ( Citrus ) 종), 코코아 (테오브로마 카카오 ( Theobroma cacao )), 차 (카멜리아 시넨시스 ( Camellia sinensis )), 바나나 (무사 ( Musa ) 종), 아보카도 (페르시아 아메리카나 ( Persea americana )), 무화과 (피쿠스 카시카 ( Ficus casica )), 구아바 (프시듐 구아자바 ( Psidium guajava )), 망고 (만기페라 인디카 ( Mangifera indica )), 올리브 (올레아 유로파에아 ( Olea europaea )), 파파야 (카리카 파파야 ( Carica papaya )), 캐슈 (cashew) (아나카르듐 옥시덴탈레 ( Anacardium occidentale )), 마카다미아 (macadamia) (마카다이마 인테그리폴리아 (Macadamia integrifolia)), 아몬드 (프루누스 아미그달루스 ( Prunus amygdalus )), 사탕무 (베타 불가리스), 사탕수수 (사카룸 ( Saccharum ) 종), 귀리, 보리, 야채, 관상용 식물, 및 구과 식물을 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 식물은 작물 식물 (예를 들어, 해바라기, 브라시카 종, 면, 사탕무, 대두, 땅콩, 알팔파, 홍화, 담배, 옥수수, 벼, 밀, 호밀, 보리, 라이밀, 수수, 기장 등)이다.

본 발명의 식물은 제초제-저항성 식물이고, 따라서 제초제의 적용을 포함하는, 잡초를 방제하기 위한 방법에 사용된다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 제초제-저항성 식물 근처의 잡초를 방제하기 위한 방법을 추가로 제공한다. 이 방법은 유효량의 제초제를 잡초 및 제초제-저항성 식물에 적용하는 것을 포함하고, 여기서 식물은 야생형 식물에 비해 적어도 하나의 AHAS-억제 제초제, 특히 이미다졸리논 또는 술포닐우레아 제초제에 대한 증가된 저항성을 갖는다. 상기 잡초를 방제하기 위한 방법에서, 본 발명의 제초제-저항성 식물은 바람직하게는 작물 식물, 예를 들어 해바라기, 알팔파, 브라시카 종, 대두, 면, 홍화, 땅콩, 담배, 토마토, 감자, 밀, 벼, 옥수수, 수수, 보리, 호밀, 기장, 및 사탕수수이고, 이로 제한되지 않는다.

제초제, 특히 이미다졸리논 및 술포닐우레아 제초제에 대한 저항성이 증가된 식물을 제공함으로써, 식물 성장을 향상시키고 영양분에 대한 경쟁을 감소시키기 위해 식물을 잡초로부터 보호하기 위해 매우 다양한 제제를 사용할 수 있다. 제초제는 본원에 기재된 식물 주위의 영역의 잡초 방제를 위해 발아 전 (pre-emergence), 발아 후, 식재 전 및 식재시에 단독으로 사용될 수 있거나 또는 다른 첨가제를 함유하는 이미다졸리논 제초제 제제가 사용될 수 있다. 제초제는 또한 종자 처리제로서 사용될 수 있다. 이미다졸리논 또는 술포닐우레아 제초제 제제에서 발견되는 첨가제는 다른 제초제, 세제, 어쥬번트, 전착제, 고착제, 안정화제 등을 포함한다. 제초제 제제는 습식 또는 건식 제제일 수 있고, 유동가능 분말, 유화가능 농축물 및 액체 농축물을 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 제초제 및 제초제 제제는 종래의 방법에 따라, 예를 들어 분무, 관수 (irrigation), 살포 등에 의해 적용될 수 있다.

본 발명은 적어도 하나의 제초제, 특히 AHAS-억제 제초제, 보다 특히 이미다졸리논 및 술포닐우레아 제초제, 가장 특히 이미다졸리논 제초제에 대한 내성이 증가된 비-트랜스제닉 및 트랜스제닉 식물 및 종자를 제공한다. 본 발명의 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 식물 및 종자는 단지 하나의 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드만을 포함하는 유사한 식물보다 더 높은 수준의 제초제 내성을 보인다. 본 발명의 상기 식물 및 종자는 단지 하나의 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드만을 포함하는 유사한 식물에 대해 사용될 수 있는 것보다 더 높은 제초 활성 농도 또는 비율을 포함하는 유효량으로 제초제를 잡초 및 제초제-저항성 식물에 적용할 수 있도록 하는, 잡초를 방제하기 위한 개선된 방법에서 사용된다. 따라서, 상기 개선된 방법은 단지 하나의 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드만을 포함하는 식물 및 더 낮은 제초 활성 농도 또는 비율의 적용을 수반하는 기존의 방법에 비해 우수한 잡초 방제를 제공한다.

본 발명은 AHASL 이중 또는 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제초제-저항성 식물 및 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제초제-저항성 식물을 제공한다. 본 발명의 이들 제초제-저항성 식물은 유성 생식을 수반하는 종래의 식물 육종을 통해 제초제-저항성 식물을 생산하는 방법에 사용된다. 이 방법은 본 발명의 제초제-저항성 식물인 제1 식물을 제초제에 저항성이 아닌 제2 식물과 교배시키는 것을 포함한다. 제2 식물은 제1 식물과 교배시킬 때 생육가능한 자손체 식물 (즉, 종자)을 생산할 수 있는 임의의 식물일 수 있다. 반드시는 아니지만, 일반적으로, 제1 및 제2 식물은 동일한 종이다. 이 방법은 임의로 제1 식물의 AHASL 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 자손체 식물의 선택을 수반할 수 있다. 본 발명의 방법은 제1 교배체의 자손체 식물을 제1 또는 제2 식물과 동일한 종 또는 유전자형의 식물과 1회 이상 역교배하는 것을 추가로 수반할 수 있다. 별법으로, 제1 교배체 또는 임의의 후속 교배체의 자손체는 제1 또는 제2 식물과 상이한 종 또는 유전자형인 제3 식물과 교배될 수 있다.

또한, AHASL 이중 또는 삼중 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 본 발명의 제초제-저항성 식물 및 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제초제-저항성 식물이 유성 생식을 수반하는 종래의 식물 육종을 통해 식물의 제초제-저항성을 증가시키기 위한 방법에 사용된다. 이 방법은 제1 식물과 동일한 제초제 또는 제초제들에 대해 저항성이거나 저항성이 아닐 수 있거나 또는 제1 식물과 상이한 제초제 또는 제초제들에 대해 저항성일 수 있는 제2 식물과 본 발명의 제초제-저항성 식물인 제1 식물을 교배하는 것을 포함한다. 제2 식물은 제1 식물과 교배시킬 때 생육가능한 자손체 식물 (즉, 종자)을 생산할 수 있는 임의의 식물일 수 있다. 반드시는 아니지만, 일반적으로, 제1 및 제2 식물은 동일한 종이다. 이 방법은 임의로 제1 식물의 AHASL 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 AHASL 단일 돌연변이체 폴리펩티드를 코딩하는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 및 제2 식물의 제초제 저항 특성을 포함하는 자손체 식물의 선택을 수반할 수 있다. 본 발명의 상기 방법에 의해 생산된 자손체 식물은 제1 또는 제2 식물 또는 둘 모두에 비해 제초제에 대한 증가된 저항성을 갖는다. 제1 및 제2 식물이 상이한 제초제에 대해 저항성일 때, 자손체 식물은 제1 및 제2 식물의 조합된 제초제 내성 특성을 가질 것이다. 본 발명의 방법은 제1 교배체의 자손체 식물을 제1 또는 제2 식물과 동일한 종 또는 유전자형의 식물과 1회 이상 역교배하는 것을 추가로 수반할 수 있다. 별법으로, 제1 교배체 또는 임의의 후속 교배체의 자손체는 제1 또는 제2 식물과 상이한 종 또는 유전자형인 제3 식물과 교배될 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 분자, 발현 카세트, 또는 형질전환 벡터로 형질전환된 식물, 식물 기관, 식물 조직, 식물 세포, 종자, 및 비-인간 숙주 세포를 제공한다. 상기 형질전환된 식물, 식물 기관, 식물 조직, 식물 세포, 종자, 및 비-인간 숙주 세포는 각각 형질전환되지 않은 식물, 식물 조직, 식물 세포, 또는 비-인간 숙주 세포를 죽이거나 그의 성장을 억제하는 제초제의 수준에서 적어도 하나의 제초제에 대해 향상된 내성 또는 저항성을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명의 형질전환된 식물, 식물 조직, 식물 세포, 및 종자는 애기장대 및 작물 식물이다.

본 발명은 이미다졸리논 제초제, 술포닐우레아 제초제, 트리아졸로피리미딘 제초제, 피리미디닐옥시벤조에이트 제초제, 술포닐아미노-카르보닐트리아졸리논 제초제, 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군 중에서 선택되는 적어도 하나의 AHAS-억제 제초제의 사용을 수반하는 방법을 제공한다. 이들 방법에서, AHAS-억제 제초제는 종자 처리, 토양 처리, 및 잎 처리를 포함하고 이로 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 적용될 수 있다.

적용 전에, AHAS-억제 제초제는 통상적인 제제, 예를 들어 용액, 에멀젼, 현탁액, 더스트 (dust), 분말, 페이스트 및 과립으로 전환될 수 있다. 사용 형태는 특정한 의도된 목적에 따라 결정되고; 각각의 경우에, 본 발명에 따른 화합물의 미세하고 균등한 분포를 보장하여야 한다.

제제는 예를 들어 농약 제제화에 적합한 보조제, 예를 들어 용매 및/또는 담체, 필요한 경우, 유화제, 계면활성제 및 분산제, 방부제, 소포제, 동결방지제, 종자 처리 제제의 경우 임의로 착색제 및/또는 결합제 및/또는 겔화제로 활성 화합물을 희석함으로써 공지의 방식으로 제조된다 (예를 들어, US 3,060,084, EP-A 707 445 (액체 농축물), [Browning, "Agglomeration", Chemical Engineering, Dec. 4, 1967, 147-48], [Perry's Chemical Engineer's Handbook, 4th Ed., McGraw-Hill, New York, 1963, pages 8-57] 및 WO 91/13546, US 4,172,714, US 4,144,050, US 3,920,442, US 5,180,587, US 5,232,701, US 5,208,030, GB 2,095,558, US 3,299,566, [Klingman, Weed Control as a Science, John Wiley and Sons, Inc., New York, 1961], [Hance et al. Weed Control Handbook, 8th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1989] 및 [Mollet, H., Grubemann, A., Formulation technology, Wiley VCH Verlag GmbH, Weinheim (Germa ny), 2001, 2. DA Knowles, Chemistry and Technology of Agrochemical Formulations, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, 1998 (ISBN 0-7514-0443-8) 참조).

적합한 용매의 예는 물, 방향족 용매 (예를 들어 솔베소 (Solvesso) 제품, 자일렌), 파라핀 (예를 들어 광유 분획), 알콜 (예를 들어 메탄올, 부탄올, 펜탄올, 벤질 알콜), 케톤 (예를 들어 시클로헥사논, 감마-부티로락톤), 피롤리돈 (NMP, NOP), 아세테이트 (글리콜 디아세테이트), 글리콜, 지방산 디메틸아미드, 지방산 및 지방산 에스테르이다. 원칙적으로, 용매 혼합물도 사용될 수 있다.

적합한 담체의 예는 연마된 천연 광물 (예를 들어 카올린, 점토, 탈크, 백악 (chalk)) 및 연마된 합성 광물 (예를 들어 고분산 실리카, 실리케이트)이다.

적합한 유화제는 비이온성 및 음이온성 유화제 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 지방 알콜 에테르, 알킬술포네이트 및 아릴술포네이트)이다.

분산제의 예는 리그닌-술파이트 폐액 및 메틸셀룰로스이다.

사용되는 적합한 계면활성제는 리그노술폰산, 나프탈렌술폰산, 페놀술폰산, 디부틸나프탈렌술폰산, 알킬아릴술포네이트, 알킬 술페이트, 알킬술포네이트, 지방 알콜 술페이트, 지방산 및 황산화 지방 알콜 글리콜 에테르의 알칼리 금속, 알칼리 토금속 및 암모늄 염, 또한 술폰화 나프탈렌 및 나프탈렌 유도체와 포름알데히드의 축합물, 나프탈렌 또는 나프탈렌술폰산과 페놀 및 포름알데히드의 축합물, 폴리옥시에틸렌 옥틸페놀 에테르, 에톡실화 이소옥틸페놀, 옥틸페놀, 노닐페놀, 알킬페놀 폴리글리콜 에테르, 트리부틸페닐 폴리글리콜 에테르, 트리스테아릴페닐 폴리글리콜 에테르, 알킬아릴 폴리에테르 알콜, 알콜 및 지방 알콜 에틸렌 옥사이드 축합물, 에톡실화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 에톡실화 폴리옥시프로필렌, 라우릴 알콜 � ��리글리콜 에테르 아세탈, 소르비톨 에스테르, 리그노술파이트 폐액 및 메틸셀룰로스이다.

직접 분무가능한 용액, 에멀젼, 페이스트 또는 오일 분산액의 제조에 적합한 물질은 중등 내지 고 비점의 광유 분획, 예를 들어 케로센 또는 디젤 오일, 또는 콜 타르 오일 및 야채 또는 동물 기원의 오일, 지방족, 시클릭 및 방향족 탄화수소, 예를 들어 톨루엔, 자일렌, 파라핀, 테트라히드로나프탈렌, 알킬화 나프탈렌 또는 그의 유도체, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 시클로헥산올, 시클로헥사논, 이소포론, 고극성 용매, 예를 들어 디메틸 술폭시드, N-메틸피롤리돈 또는 물이다.

또한, 동결방지제, 예를 들어 글리세린, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 및 살균제도 제제에 첨가될 수 있다.

적합한 소포제는 예를 들어 규소 또는 마그네슘 스테아레이트 기재의 소포제이다.

적합한 방부제는 예를 들어 디클로로페놀 및 벤질알콜헤미포름알데히드이다.

종자 처리 제제는 추가로 결합제 및 임의로 착색제를 포함할 수 있다.

결합제는 처리 후에 종자에 대한 활성 물질의 부착을 개선시키기 위해 첨가될 수 있다. 적합한 결합제는 블록 공중합체 EO/PO 계면활성제 및 폴리비닐알콜, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리부텐, 폴리이소부틸렌, 폴리스티렌, 폴리에틸렌아민, 폴리에틸렌아미드, 폴리에틸렌이민 (Lupasol®, Polymin®), 폴리에테르, 폴리우레탄, 폴리비닐아세테이트, 틸로스 및 이들 중합체로부터 유도된 공중합체이다.

임의로, 착색제도 제제에 포함될 수 있다. 종자 처리 제제에 적합한 착색제 또는 염료는 로다민 (Rhodamin) B, CI 안료 레드 (Red) 112, CI 용매 레드 1, 안료 블루 (blue) 15:4, 안료 블루 15:3, 안료 블루 15:2, 안료 블루 15:1, 안료 블루 80, 안료 옐로우 (yellow) 1, 안료 옐로우 13, 안료 레드 112, 안료 레드 48:2, 안료 레드 48:1, 안료 레드 57:1, 안료 레드 53:1, 안료 오렌지 (orange) 43, 안료 오렌지 34, 안료 오렌지 5, 안료 그린 (green) 36, 안료 그린 7, 안료 화이트 (white) 6, 안료 브라운 (brown) 25, 베이직 바이올렛 (basic violet) 10, 베이직 바이올렛 49, 애시드 레드 (acid red) 51, 애시드 레드 52, 애시드 레드 14, 애시드 블루 9, 애시드 옐로우 23, 베이직 레드 10, 베이직 레드 108이다.

적합한 겔화제의 예는 카라기인 (Satiagel®)이다.

분말, 산포 (spreading)를 위한 물질, 및 살포가능한 제품은 활성 물질을 고체 담체와 혼합하거나 동시에 연마함으로써 제조될 수 있다.

과립, 예를 들어 코팅된 과립, 함침된 과립 및 균질 과립은 활성 화합물을 고체 담체에 결합시킴으로써 제조할 수 있다. 고체 담체의 예는 광물토 (mineral earth), 예를 들어 실리카겔, 실리케이트, 탈크, 카올린, 아타클레이 (attaclay), 석회암, 석회, 백악, 교회 점토 (bole), 황토, 점토, 백운석, 규조토, 황산칼슘, 황산마그네슘, 산화마그네슘, 연마된 합성 물질, 비료, 예를 들어, 황산암모늄, 인산암모늄, 질산암모늄, 우레아, 및 야채 기원의 산물, 예를 들어 곡물가루, 목피분, 목분 및 견과껍질 가루, 셀룰로스 분말 및 다른 고체 담체이다.

일반적으로, 제제는 0.01 내지 95 중량％, 바람직하게는 0.1 내지 90 중량％의 AHAS-억제 제초제를 포함한다. 이 경우에, AHAS-억제 제초제는 90 내지 100 중량％, 바람직하게는 95 내지 100 중량％의 순도로 사용된다 (NMR 스펙트럼에 따라). 종자 처리 목적을 위해, 각각의 제제는 2-10배 희석되어, 즉시 사용 가능 (ready to use) 제제의 화합물 농도를 0.01 내지 60 중량％, 바람직하게는 0.1 내지 40 중량％로 만들 수 있다.

AHAS-억제 제초제는 그 자체로, 제제 또는 그로부터 제조된 사용 형태로, 예를 들어 직접 분무가능한 용액, 분말, 현탁액 또는 분산액, 에멀젼, 오일 분산액, 페이스트, 살포가능한 제품, 산포를 위한 물질, 또는 과립 형태로, 분무, 연무 (atomizing), 살포, 산포 또는 주입 (pouring)에 의해 사용될 수 있다. 사용 형태는 전적으로 의도하는 목적에 따라 결정되고; 각각의 경우에 본 발명에 따른 AHAS-억제 제초제의 가능한 가장 미세한 분포를 보장하도록 의도된다.

수성 사용 형태는 물을 첨가함으로써 에멀젼 농축물, 페이스트 또는 습윤가능 분말 (분무가능한 분말, 오일 분산액)로부터 제조될 수 있다. 에멀젼, 페이스트 또는 오일 분산액을 제조하기 위해, 물질을 그 자체로 또는 오일 또는 용매에 용해시킨 상태에서 습윤제, 점착제, 분산제 또는 유화제에 의해 물 중에 균질화시킬 수 있다. 그러나, 활성 물질, 습윤제, 점착제, 분산제 또는 유화제 및 적절한 경우에 용매 또는 오일로 이루어진 농축물을 제조하는 것도 가능하고, 상기 농축물은 물로 희석하기에 적합하다.

즉시 사용 가능 제제의 활성 화합물 농도는 비교적 넓은 범위에서 상이할 수 있다. 일반적으로, 상기 농도는 0.0001 내지 10 중량％, 바람직하게는 0.01 내지 1 중량％이다.

AHAS-억제 제초제는 또한 극미량 연무 공정 (ULV)에서 성공적으로 사용될 수 있고, 95 중량％ 이상의 활성 화합물을 포함하는 제제를 적용하거나, 또는 심지어 활성 화합물을 첨가제 없이 적용할 수 있다.

다음은 제제의 예이다:

1. 잎 적용을 위해 물로 희석하기 위한 제품. 종자 처리 목적을 위해, 이 제품은 희석되거나 희석되지 않고 종자에 적용될 수 있다.

A) 수용성 농축물 (SL, LS)

10 중량부의 AHAS-억제 제초제를 90 중량부의 물 또는 수용성 용매 내에 용해시킨다. 별법으로, 습윤제 또는 다른 보조제가 첨가된다. AHAS-억제 제초제를 물로 희석하여, 10％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다.

B) 분산가능 농축물 (DC)

20 중량부의 AHAS-억제 제초제를, 10 중량부의 분산제, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈을 첨가하면서 70 중량부의 시클로헥사논에 용해시킨다. 물로 희석하여 분산액을 생성시켜, 20％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다.

C) 유화가능 농축물 (EC)

15 중량부의 AHAS-억제 제초제를, 칼슘 도데실벤젠술포네이트 및 피마자유 에톡실레이트 (각각의 경우에 5 중량부)를 첨가하면서 7 중량부의 자일렌에 용해시킨다. 물로 희석하여 에멀젼을 생성시켜, 15％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다.

D) 에멀젼 (EW, EO, ES)

25 중량부의 AHAS-억제 제초제를, 칼슘 도데실벤젠술포네이트 및 피마자유 에톡실레이트 (각각의 경우에 5 중량부)를 첨가하면서 35 중량부의 자일렌에 용해시킨다. 상기 혼합물을 유화기 (예를 들어 Ultraturrax)에 의해 30 중량부의 물 내로 도입하고, 균질한 에멀젼으로 제조한다. 물로 희석하여 에멀젼을 생성시켜, 25％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다.

E) 현탁액 (SC, OD, FS)

교반 볼 밀 (ball mill) 내에서, 20 중량부의 AHAS-억제 제초제를 10 중량부의 분산제, 습윤제 및 70 중량부의 물 또는 유기 용매를 첨가하면서 분쇄하여 미세한 AHAS-억제 제초제 현탁액을 제공한다. 물로 희석하여 AHAS-억제 제초제의 안정한 현탁액을 생성시켜, 20％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다.

F) 수-분산가능 과립 및 수용성 과립 (WG, SG)

50 중량부의 AHAS-억제 제초제를 50 중량부의 분산제 및 습윤제를 첨가하면서 미세하게 연마하고, 기술적 기구 (예를 들어 압출, 스프레이 타워, 유동층 (fluidized bed))에 의해 수-분산가능 또는 수용성 과립으로서 제조한다. 물로 희석하여 AHAS-억제 제초제의 안정한 분산액 또는 용액을 생성시켜, 50％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다.

G) 수-분산가능 분말 및 수용성 분말 (WP, SP, SS, WS)

75 중량부의 AHAS-억제 제초제를 25 중량부의 분산제, 습윤제 및 실리카겔을 첨가하면서 고정자-회전자 (rotor-stator) 밀 내에서 연마한다. 물로 희석하여 AHAS-억제 제초제의 안정한 분산액 또는 용액을 생성시켜, 75％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다.

H) 겔-제제 (GF)

교반 볼 밀 내에서, 20 중량부의 AHAS-억제 제초제를 10 중량부의 분산제, 1 중량부의 겔화제, 습윤제 및 70 중량부의 물 또는 유기 용매를 첨가하면서 분쇄하여 미세한 AHAS-억제 제초제 현탁액을 생성시킨다. 물로 희석하여 AHAS-억제 제초제의 안정한 현탁액을 생성시켜, 20％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다. 상기 겔 제제는 종자 처리제로서 사용하기 위해 적합하다.

2. 잎 적용을 위해 희석되지 않고 적용시킬 제품. 종자 처리 목적을 위해, 이 제품은 희석되어 종자에 적용될 수 있다.

A) 살포가능한 분말 (DP, DS)

5 중량부의 AHAS-억제 제초제를 미세하게 연마하고, 95 중량부의 미분 카올린과 친밀하게 혼합한다. 이는 5％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 살포가능한 제품을 제공한다.

B) 과립 (GR, FG, GG, MG)

1/2 중량부의 AHAS-억제 제초제를 미세하게 연마하고, 95.5 중량부의 담체와 회합시켜, 0.5％ (w/w)의 AHAS-억제 제초제를 함유하는 제제를 얻는다. 현재의 방법은 압출, 분무-건조 또는 유동층이다. 이는 잎 용도를 위해 희석되지 않고 적용시킬 과립을 제공한다.

종래의 종자 처리 제제는 예를 들어 유동가능 농축물 FS, 용액 LS, 건식 처리용 분말 DS, 슬러리 처리용 수 분산가능 분말 WS, 수용성 분말 SS 및 에멀젼 ES 및 EC와 겔 제제 GF를 포함한다. 이들 제제는 희석되거나 희석되지 않고 종자에 적용될 수 있다. 종자에의 적용은 파종 전에 수행되거나, 종자에 직접 수행된다.

바람직한 실시태양에서, FS 제제가 종자 처리를 위해 사용된다. 전형적으로, FS 제제는 1-800 g/l의 활성 성분, 1-200 g/l의 계면활성제, 0 내지 200 g/l의 동결방지제, 0 내지 400 g/l의 결합제, 0 내지 200 g/l의 안료 및 총 1 리터가 되도록 하는 양의 용매, 바람직하게는 물을 포함할 수 있다.

종자 처리를 위해, 본 발명에 따른 제초제 저항성 식물의 종자는 제초제, 바람직하게는 AHAS-억제 제초제, 예를 들어 아미도술푸론, 아짐술푸론, 벤술푸론, 클로리무론, 클로르술푸론, 시노술푸론, 시클로술파무론, 에타메트술푸론, 에톡시술푸론, 플라자술푸론, 플루피르술푸론, 포람술푸론, 할로술푸론, 이마조술푸론, 요오도술푸론, 메조술푸론, 메트술푸론, 니코술푸론, 옥사술푸론, 프리미술푸론, 프로술푸론, 피라조술푸론, 림술푸론, 술포메투론, 술포술푸론, 티펜술푸론, 트리아술푸론, 트리베누론, 트리플록시술푸론, 트리플루술푸론, 트리토술푸론, 이마자메타벤즈, 이마자목스, 이마자픽, 이마자피르, 이마자퀸, 이마제타피르, 클로란술람, 디클로술람, 플로라술람, 플루메트술람, 메토술람, 페녹스술람, 비스피리박, 피리미노박, 프로폭시카르바� ��, 플루카르바존, 피리벤족심, 피리프탈리드, 피리티오박, 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군 중에서 선택되는 제초제, 또는 AHAS-억제 제초제를 포함하는 제제로 처리된다.

용어 종자 처리는 당업계에 공지된 모든 적합한 종자 처리 기술, 예를 들어 종자 드레싱 (dressing), 종자 코팅, 종자 살포, 종자 침지 (soaking) 및 종자 펠렛팅 (pelleting)을 포함한다.

본 발명의 한 변형에 따르면, 본 발명의 추가의 주제는 특히 종자 조파기 (drill) 내로의 적용에 의해 토양을 처리하는 방법이다: 조성물/제제 (예를 들어, 임의로 하나 이상의 고체 또는 액체, 농업상 허용되는 담체 및/또는 임의로 하나 이상의 농업상 허용되는 계면활성제를 함유하는 과립 제제)로서 AHAS-억제 제초제를 함유하는 과립 제제. 상기 방법은 예를 들어, 곡물, 옥수수, 면 및 해바라기의 묘상 (seedbed)에 유리하게 사용된다.

본 발명은 또한 아미도술푸론, 아짐술푸론, 벤술푸론, 클로리무론, 클로르술푸론, 시노술푸론, 시클로술파무론, 에타메트술푸론, 에톡시술푸론, 플라자술푸론, 플루피르술푸론, 포람술푸론, 할로술푸론, 이마조술푸론, 요오도술푸론, 메조술푸론, 메트술푸론, 니코술푸론, 옥사술푸론, 프리미술푸론, 프로술푸론, 피라조술푸론, 림술푸론, 술포메투론, 술포술푸론, 티펜술푸론, 트리아술푸론, 트리베누론, 트리플록시술푸론, 트리플루술푸론, 트리토술푸론, 이마자메타벤즈, 이마자목스, 이마자픽, 이마자피르, 이마자퀸, 이마제타피르, 클로란술람, 디클로술람, 플로라술람, 플루메트술람, 메토술람, 페녹스술람, 비스피리박, 피리미노박, 프로폭시카르바존, 플루카르바존, 피리벤족심, 피리프탈리드 및 피리티오박으로 이루어진 군 중에서 선택되는 적어 도 하나의 AHAS-억제 제초제를 포함하는 종자 처리 제제로 코팅되거나 이를 함유하는 종자를 포함한다.

용어 종자는 진정한 종자, 종자 조각, 흡근 (sucker), 알줄기, 비늘줄기, 열매, 덩이줄기, 낟알 (grain), 삽수 (cutting), 새싹 절단체 (cut shoot) 등을 포함하지만 이로 제한되지 않는 모든 종류의 종자 및 식물 번식체 (propagule)를 포함하고, 바람직한 실시태양에서는 진정한 종자를 의미한다.

용어 "~로 코팅되고/되거나 이를 함유하는"은 일반적으로 적용 방법에 따라 성분의 보다 많거나 보다 적은 일부가 증식 생성물 내로 침투할 수 있지만 적용 시간에 활성 성분이 증식 생성물의 표면의 대부분에 적용되는 것을 의미한다. 상기 증식 생성물은 (재)식재될 때 활성 성분을 흡수할 수 있다.

AHAS-억제 제초제 또는 AHAS-억제 제초제를 포함하는 제제를 사용한 종자 처리제 적용은 식물의 파종 전에 및 식물의 발아 전에 종자에 분무 또는 살포함으로써 수행한다.

종자의 처리에서, 대응하는 제제는 종자를 유효량의 AHAS-억제 제초제 또는 AHAS-억제 제초제를 포함하는 제제로 처리함으로써 적용된다. 본원에서, 적용률은 일반적으로 100 kg의 종자 당 0.1 g 내지 10 kg의 ai (또는 ai의 혼합물 또는 제제), 바람직하게는 100 kg의 종자 당 1 g 내지 5 kg, 특히 100 kg의 종자 당 1 g 내지 2.5 kg이다. 상추와 같은 특수한 작물에 대해 적용률은 더 높을 수 있다.

본 발명은 본 발명에 따른 저항성 식물의 종자를 파종 전에 및/또는 최아처리 (pregermination) 후에 AHAS-억제 제초제와 접촉시키는 것을 포함하는, 목적하지 않은 초목을 제거하거나 잡초를 방제하기 위한 방법을 제공한다. 방법은 종자를 예를 들어, 밭에서 토양에 또는 온실에서 화분식재 매질에 파종하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 종자의 바로 근처에서 목적하지 않은 초목을 제거하거나 잡초를 방제하는데 특히 사용된다.

목적하지 않은 초목의 방제는 잡초가 죽고/죽거나 잡초의 정상적인 성장을 지체시키거나 억제하는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 잡초는 가장 넓은 의미에서 목적하지 않은 장소에서 성장하는 모든 식물을 의미하는 것으로 이해된다.

본 발명의 잡초는 예를 들어, 쌍떡잎 및 외떡잎 잡초를 포함한다. 쌍떡잎 잡초는 다음 속의 잡초를 포함하고 이로 제한되지 않는다: 개자 (Sinapis), 다닥냉이 (Lepidium), 갈퀴덩굴 (Galium), 별꽃 (Stellaria), 족제비쑥 (Matricaria), 길뚝개꽃속 (Anthemis), 별꽃아재비 (Galinsoga), 명아주 (Chenopodium), 쐐기풀 (Urtica), 천리광 (Senecio), 비름 (Amaranthus), 쇠비름 (Portulaca), 도꼬마리, 서양메꽃 (Convolvulus), 나팔꽃 (Ipomoea), 마디풀 (Polygonum), 세스바니아 (Sesbania), 돼지풀 (Ambrosia), 엉겅퀴 (Cirsium), 지느러미엉겅퀴 (Carduus), 방가지똥 (Sonchus), 가지 (Solanum), 개갓냉이 (Rorippa), 마디꽃 (Rotala), 밭둑외풀 (Lindernia), 광대수염 (Lamium), 꼬리풀 (Veronica), 어저귀 (Abutilon), 에멕스 (Emex), 독말풀 (Datura), 제비꽃 (Viola), 털향유 (Galeopsis), 양귀비 (Papaver), 수레국화 (Centaurea), 토끼풀 (Trifolium), 미나리아재비 (Ranunculus) 및 민들레 (Taraxacum). 외떡잎 잡초는 다음 속의 잡초를 포함하고 이로 제한되지 않는다: 돌피 (Echinochloa), 강아지풀 (Setaria), 기장 (Panicum), 바랭이 (Digitaria), 산조아재비 (Phleum), 포아풀 (Poa), 김의털 (Festuca), 왕바랭이 (엘류신), 논잡초 (Brachiaria), 호밀풀 (Lolium), 꼬리새 (Bromus), 귀리 (Avena), 방동사니 (Cyperus), 수수 (Sorghum), 개밀 (Agropyron), 우산잔디 (Cynodon), 물옥잠 (Monochoria), 하늘직이 (Fimbristyslis), 벗풀 (Sagittaria), 바늘골 (Eleocharis), 매자기 (Scirpus), 참새피 (Paspalum), 쇠보리 (Ischaemum), 스페노클레아 (Sphenoclea), 지네발새 (Dactyloctenium), 겨이삭 (Agrostis), 뚝새풀 (Alopecurus) 및 아페라 (Apera).

또한, 본 발명의 잡초는 예를 들어, 목적하지 않은 장소에서 성장하는 작물 식물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 주로 대두 식물을 포함하는 밭에 존재하는 자생 옥수수 식물은 옥수수 식물이 대두 식물의 밭에서 바람직하지 않은 경우에 잡초로 간주될 수 있다.

부정관사 ("a" 및 "an")는 본원에서 하나 이상 (즉, 적어도 하나)의 문법적인 대상을 나타내기 위해 사용된다. 예를 들어, "요소"는 하나 이상의 요소를 의미한다.

본원에서 사용될 때 단어 "포함하는", 또는 "포함하다" 또는 "포괄하는"과 같은 어미 변화는 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 일군의 요소, 정수 또는 단계들을 포함하고, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 일군의 요소, 정수 또는 단계들을 배제하지 않음을 의미하는 것으로 이해될 것이다.

다음 실시예는 예시를 위해 제시되는 것으로서, 본 발명을 제한하는 것이 아니다. 당업자가 실시할 수 있는 예시된 방법의 어떠한 변형도 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 의도된다.

실시예 1

애기장대 AHASL 돌연변이체 유전자를 함유하는 벡터

5' 및 3' 말단에 XbaI 부위를 포함하는, 몇몇 추가의 DNA와 함께 전체 AHAS 거대 서브유닛 유전자를 함유하는 애기장대 게놈 DNA의 전체 XbaI 단편을 서열 34에 제시한다 (AtAHASL). 서열 34의 염기 2484 내지 4496은 서열 30에 제시된 중지 코돈을 포함한, 애기장대 AHAS 거대 서브유닛 유전자 세린 653에서 트레오닌 돌연변이체 대립유전자의 코딩 서열을 포함한다. 서열 34의 염기 2484 내지 5717 내에 포함되는, 서열 33에 제시된 애기장대 AHAS 거대 서브유닛 유전자 세린 653에서 트레오닌 돌연변이체 대립유전자의 보다 작은 게놈 단편은 코딩 서열 및 3' 말단 XbaI 부위까지 및 그를 포함하는 3' 말단을 포함하고, 여기서 NcoI 부위의 처음 2개의 염기는 명료함을 위해 생략한 AtAHASL의 출발 코돈에서 발견된다.

전장 애기장대 AHASL 단일 돌연변이 S653N 및 3' 비번역 구역을 코딩하는 서열 33의 DNA 단편을 pKK233-2 내로 클로닝하여, 이. 콜라이 내에서 발현 및 시험을 위한 AE1로 지정된 벡터를 얻었다 (pKK233-2, 세균 발현 벡터, 파마시아 (Pharmacia), GenBank 기탁 번호 X70478). 벡터 AE2 내지 AE9는 AE1로부터 돌연변이 유발 및 표준 클로닝 절차에 의해 생성하였다. 도 4는 AE1 베이스 벡터의 지도를 도시한 것이고, 돌연변이의 위치를 표시한다.

벡터 AP1 (도 5)은 단일 S653N 돌연변이를 갖는 AtAHASL 유전자를 포함하는 애기장대 DNA의 게놈 단편을 포함하는 식물 형질전환 벡터이다 (서열 34). 서열 34에 제시된 DNA 단편을 AP1 내로 역-상보적 배향으로 클로닝하였다. 벡터 AP2-AP7은 AP1 및 AE 플라스미드로부터 표준 클로닝 절차를 이용하여 생성하였고, 표 1에 표시된 돌연변이에 의해서만 상이하다. 편리한 클로닝을 위해, AP2-AP5에 비해 상이한 단편을 사용하여 AP6 및 AP7을 생성하였다. 따라서, AP6 및 AP7은 AP1-AP5보다 47개 염기쌍이 더 짧다. 상기 차이는 플라스미드 백본에 존재하고, 애기장대 게놈 단편에는 존재하지 않는다.

벡터 AE10 내지 AE24는 다음과 같이 제조하였다. 야생형 애기장대 AHAS 거대 서브유닛 유전자를 돌연변이원성 조건 하에 Genemorph II 무작위 돌연변이 유발 키트 (스트라타젠 (Stratagene, 미국 캘리포니아주 라 홀라))를 이용하여 증폭하여, 상기 유전자의 무작위로 돌연변이 유발된 증폭된 DNA 단편을 생성하였다. 이어서, 상기 돌연변이체 DNA를 AE7 내로 역클로닝하여, 야생형 애기장대 거대 서브유닛 유전자 (AE7 상의 특유한 SacII 및 AgeI 부위 사이)를 돌연변이 유발된 형태로 교체하였다. 상기 DNA를 이. 콜라이 균주 TOP10 내로 형질전환시키고, LB 아가 배지 상에서 다수의 특유한 형질전환체를 갖도록 하는 방식으로 선택하였고, 여기서 각각은 독립적인 돌연변이 유발된 AHAS 유전자를 갖는다. 이들 콜로니를 함께 스크래핑하고, 플라스미드 DNA를 상기 전체 주요 라이브러리로부터 제조하였다. 상기 DNA를 AHAS - 이. 콜라이 내로 형질전환시키고, 카르베니실린을 사용하여 다시 LB 아가 배지 상에서 선택하였다. 상기 단계로부터 플라스미드 + 콜로니를 벨 벳천 (velveteen)을 이용하여 분지쇄 아미노산을 갖지 않고 30-마이크로몰의 이마제타피르를 함유하는 최소 아가 배지 상으로 복제 (replica) 플레이팅하였다. 상기 선택 배지 상에서 성장한 콜로니는 또한 이미다졸리논 내성인 기능적 애기장대 AHAS 돌연변이체 유전자를 가졌다.

애기장대 AHAS 거대 서브유닛 유전자의 DNA 서열을 각각의 성장 양성 콜로니에 대해 결정하였다. 선택 배지 상에서 성장을 부여하지 않은 애기장대 AHAS 거대 서브유닛 유전자의 서열을 결정하는 데 노력을 기울이지 않았다. AHAS 기능 및 이미다졸리논 내성 스크리닝은 2차 라이브러리 상에 대한 것이기 때문에, DNA 서열 분석에 의해 결정할 때 동일한 돌연변이의 복제물이 발견된다. 각각의 하나의 클론만을 증가하는 이미다졸리논 농도 상의 시험을 위해 진행시키고 표 1에 포함시켰다.

^* 이. 콜라이 내에서 AtAHASL2의 발현 (AE 플라스미드) 및 식물 형질전환 플라스미드 (AP 플라스미드)를 위한 벡터의 목록. 각각의 벡터 내의 돌연변이는 서열 1에 관하여 표시한다.

^** 단순한 단일, 이중 또는 삼중 플러스 시스템 (각각 증가하는 콜로니 크기에 대해 +, ++ 또는 +++)을 사용하여 AHAS 억제제 이마제타피르의 존재 하에 AE 플라스미드를 함유하는 AHAS - 이. 콜라이 내에서 애기장대 AHAS 기능의 내성을 시각적으로 스코어링하였다. "-"는 성장이 없거나 (돌연변이 조합이 불활성 단백질을 야기하였음을 의미함), 선택된 비율에서 이마제타피르에 대한 내성이 없음을 나타낸다. IN은 불활성 단백질을 의미하는 한편, NT는 이미다졸리논 내성이 아님을 의미한다. NA는 이용가능한 데이타가 없음을 의미한다 (시험되지 않음).

^† 스크리닝 프로토콜에 의해 결정된 내성으로 인해, S653N에 비교해 시험되지 않음.

^@ AP1 벡터를 포함하는 트랜스제닉 식물에 대해, 18.75 μM 이마제타피르가 미세적정 포맷 플레이트에서 식물의 우수한 성장을 허용하는 최고 농도였다. 상기 농도를 AP1에 비한 X배 개선을 결정하기 위한 기초로서 사용하였다.

실시예 2

옥수수 AHASL 돌연변이체 유전자를 함유하는 벡터

옥수수 AHASL2 유전자 (서열 29)를 서열 29의 염기 160로 시작하여, 벡터 태그 (tag) 및 번역 출발 부위에 융합된 세균 발현 벡터 pTrcHis A (인비트로겐 코퍼레이션 (Invitrogen Corporation, 미국 캘리포니아주 칼스바드)) 내로 클로닝하였다. 돌연변이 유발 및 서브클로닝 절차를 이용하여, 베이스 벡터로서 ZE1를 사용하여 벡터 ZE2, ZE5, ZE6 및 ZE7을 생성하였다. 서브클로닝 절차를 이용하여 ZE1로부터 ZE3을 제조하였고, 이는 서열 29의 염기 121로 시작하여 pTrcHis A의 벡터 태그 및 번역 출발 부위에 융합된 옥수수 AHASL2 유전자이다. 이. 콜라이 내에서 ZE1 또는 ZE3 사이에 기능적 차이가 알려지지 않았으므로, 표준 돌연변이 유발 및 서브클로닝 절차를 이용하여, 베이스 벡터로서 ZE3을 사용하여 벡터 ZE4 및 ZE8 내지 ZE22를 생성하였다.

옥수수 유비퀴틴 프로모터를 옥수수 AHASL2 S653N 돌연변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 조합으로 포함하는 발현 카세트를 갖는 식물 형질전환 벡터를 표준 방법을 이용하여 제조하고, ZP1로 지정하였다 (도 7). 다른 AHASL 돌연변이체의 발현을 위한 식물 형질전환 벡터를 생산하기 위해, 표준 클로닝 기술을 이용하여 ZP1의 폴리뉴클레오티드 세그먼트를 돌연변이를 코딩하는 ZE 벡터의 폴리뉴클레오티드 단편으로 교체하였다.

벡터 ZE23 내지 ZE38은 다음과 같이 제조하였다. 벡터 ZE3은 QuikChange® 다중 부위 지정 돌연변이 유발 키트 (스트라타젠)를 사용하여 "General Guidelines for Creating Engineered Mutant Clone™ Collections" 부록 프로토콜에 따라 부위 지정 돌연변이 유발을 포화시켰다. 옥수수 AHAS 거대 서브유닛의 중대한 부위에서 모든 가능한 코돈을 생성시킬 돌연변이원성 올리고뉴클레오티드를 다양한 조합으로 사용하여, 잔기 A90, M92, P165, R167, S621 및 G622에서 치환을 갖는 돌연변이체의 컬렉션 (collection)을 생성하였다. 돌연변이체 컬렉션 플라스미드를 AHAS 결핍 이. 콜라이 내로 형질전환시키고, 100 ㎍/l의 카르베니실린을 보충한 LB 아가 배지 상에 플레이팅하였다. 그로부터 콜로니를 M9 염 내로 1x 농도 (등장성 버퍼에 대해)로 미세적정 플레이트에 넣은 다음, 분지쇄 아미노산을 갖지 않고 150 마이크로몰의 이마제타피르를 함유하는 최소 아가 배지 상에 복제 플레이팅하였다. 상기 선택 배지 상에서 성장한 콜로니는 또한 이미다졸리논 내성인 기능적 옥수수 AHAS 돌연변이체 유전자를 가졌다.

옥수수 AHAS 거대 서브유닛 유전자의 DNA 서열을 각각의 성장 양성 콜로니에 대해 결정하였다. 선택 배지 상에서 성장을 부여하지 않은 옥수수 AHAS 거대 서브유닛 유전자의 서열을 결정하기 위해 노력을 기울이지 않았다.

^* 이. 콜라이 내에서 ZmAHASL2의 발현 (ZE 플라스미드) 및 식물 형질전환 플라스미드 (ZP 플라스미드)를 위한 벡터의 목록. 각각의 벡터 내의 돌연변이는 서열 2에 관하여 표시한다.

^** 단순한 단일, 이중 또는 삼중 플러스 시스템 (각각 증가하는 콜로니 크기에 대해 +, ++ 또는 +++)을 사용하여 AHAS 억제제 이마제타피르의 존재 하에 ZE 플라스미드를 함유하는 AHAS - 이. 콜라이 내에서 옥수수 AHAS 기능의 내성을 시각적으로 스코어링하였다. "-"는 성장이 없거나 (돌연변이 조합이 불활성 단백질을 야기하였음을 의미함), 선택된 비율에서 이마제타피르에 대한 내성이 없음을 나타낸다. IN은 불활성 단백질을 의미하는 한편, NT는 이미다졸리논 내성이 아님을 의미한다. NA는 이용가능한 데이타가 없음을 의미한다 (시험되지 않음).

^@ 옥수수 전체 식물 내성 스코어는 몇몇 생장기에 걸쳐 온실 및 다수의 밭 대지에서 수행된 시험으로부터 조합한 결과에 기초한 것이다. 옥수수 전체 식물 내성에 대한 스코어링 시스템은 이. 콜라이 이미다졸리논 내성에 대해 상기 설명한 바와 동일하였다. +++ 스코어를 갖는 모든 ZP 작제물은 최고 시험된 분무율을 나타내는 3000 g 이마자목스/헥타르 초과에 대해 내성임에 주목한다.

실시예 3

이. 콜라이 보완 분석

이. 콜라이 균주 JMC1 (유전자형 [ilvB1201 ilvHI2202 rbs-221 ara thi delta(pro-lac) recA56 srlC300::Tn10], DE(hsdR)::Cat)은 천연 이. 콜라이 AHASL 유전자의 모든 카피의 ilvG에 대한 낙아웃 (knockout) 균주이다. 상기 균주는 AHASL이 외인성 AHASL 유전자에 의해 보완되면 류신, 이소류신 및 발린이 결핍되는 최소 성장 배지 상에서만 성장할 수 있다 (문헌 ([Singh, et al. (1992) Plant Physiol. 99, 812-816]; [Smith, et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 4179-4183]) 참조). 상기 이. 콜라이 보완 분석을 사용하여, 이미다졸리논 제초제 Pursuit® (이마제타피르, 바스프 코퍼레이션 (BASF Corporation, 미국 뉴저지주 플로햄 파크))의 부재 및 존재 하에 AE 및 ZE 벡터에 의해 코딩된 AHASL 효소 활성 및 제초제 내성에 대해 스크리닝하였다.

실시예 4

생화학적 특성 분석

보완 시험 또는 단순한 활성 시험 동안의 성장을 기초로 하여, ZE 시리즈의 벡터 중 몇몇을 조질 이. 콜라이 용해물 내에서 AHAS 생화학적 분석 억제 시험을 위해 사용하였다. 50 ㎍/ml 카르베니실린을 함유하는 LB (LB-carb)의 2-4 ml 배양액에 시험할 ZE 벡터로 형질전환된 JMC1의 단일 콜로니를 접종하고, 진탕하면서 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음날 아침에, 0.5-1 ml의 철야 배양액을 사용하여 20 ml의 LB-carb에 접종하고, 이를 600 nm에서 배양액 광학 밀도 (OD)가 약 0.6 내지 0.8 OD 단위가 될 때까지 진탕하면서 37℃에서 인큐베이션하였다. 이소프로필-1-티오-베타 D-갈락토피라노시드 (IPTG)를 0.1 mM의 농도로 첨가하고, 배양액을 1-1.5시간 동안 진탕하면서 인큐베이션하였다. 배양액을 원심분리하여 세포를 펠렛화하고, 상등액을 폐기하였다. 세포 펠렛을 10 mg/ml 리소자임을 보충한 AHAS 분석 버퍼 (문헌 [Singh et al. (1988) Anal. Biochem. 171: 173-179]에서와 같이)로 용해시키고, 잠깐 동안 초음파 분해하였다. 불용성 분획을 원심분리에 의해 펠렛화하고, 상등액을 AHAS 활성에 대한 분석에서 사용하였다. 사용된 이마제타피르 억제제의 각각의 농도에서, 활성을 동일한 ZE 돌연변이체의 억제되지 않은 대조군에 비교하였다. 이는 "대조군의 ％" 측정치를 생성한다.

실시예 5

식물 형질전환

AP 벡터를 애기장대 생태형 Col-2 내로 형질전환시켰다. T1 종자를 선택제로서 100 nM Pursuit®을 함유하는 플레이트 상에서 형질전환을 위해 선택하였다. 약 20개의 독립적 형질전환 사건 (event) (주)으로부터의 T2 종자를 AP1와 비교한 내성의 증가를 스코어링하기 위해, 증가하는 Pursuit® 농도를 함유하는 MS 아가 상에 플레이팅하였다. 시각 검사에 의해 묘목의 성장을 억제시키지 않은 최고 농도의 Pursuit®을 비교함으로써 벡터를 스코어링하였다. 애기장대 형질전환 실험의 결과를 표 1에 제시한다.

애기장대의 몇몇 계통으로부터의 종자를 수직판 성장 분석에 의해 시험하였다. 37.5 마이크로몰의 Pursuit (이마제타피르)를 함유하는 표준 MS (Murashige and Skoog) 반고체 배지를 갖는 플레이트에 0.1％ 아가로스 내에 몇몇 종자로 점을 찍었다. 뿌리가 아가 표면을 따라 성장하도록 판을 수직으로 유지하였다. 사용된 종자는 1) 야생형 생태형 콜럼비아 2; 2) csr1-2 돌연변이체 (AHAS 거대 서브유닛 유전자의 게놈 카피 내의 AtAHASL S653N 돌연변이에 대한 동종접합성); 3) AP1로 형질전환된 콜럼비아 2; 4) AP7로 형질전환된 콜럼비아 2; 및 5) AP2로 형질전환된 콜럼비아 2이었다. AP1 식물은 csr1-2(서열 34)의 게놈 XbaI 단편의 클론으로 형질전환되므로, 숫자 2 및 3은 가능한 내성의 측면에서 대략 동등하다는 것에 주목한다. 이마제타피르의 상기 농도에서, 야생형 묘목은 발아하지 못하고, 단일 돌연변이체 식물 (csr1-2 및 AP1 형질전환체)는 거의 발아하지 않았다. AP7 및 AP2는 우수한 내성 성장을 한 반면, AP7 식물은 뿌리 성장이 약간 더 적은 것으로 보인다. 모든 종이 이마제타피르가 없는 배지 상에서 발아하고 잘 성장하였음에 주목한다. 수직판 성장 분석의 결과를 도 10에 도시한다.

ZP 작제물을 아그로박테리움-매개 형질전환을 통해 옥수수 미성숙 배아 내로 도입하였다. 형질전환된 세포를 0.75 μM Pursuit®을 보충한 선택 배지 상에서 3-4주 동안 선택하였다. 트랜스제닉 묘목을 0.75 μM Pursuit®을 보충한 식물 재생 배지 상에서 재생시켰다. 트랜스제닉 묘목은 0.5 μM Pursuit®의 존재 하에 뿌리내렸다. 트랜스제닉 식물을 트랜스젠의 존재에 대해 TaqMan 분석한 후, 화분식재 혼합물에 이식하고 온실에서 성숙기까지 성장시켰다. 옥수수 형질전환 실험의 결과를 표 2에 제시한다. ZP 작제물로 형질전환된 옥수수 식물에 몇몇 밭 장소 및 온실에서 다양한 비율의 이마자목스를 분무하였다. ZP 작제물의 전체 식물 시험 데이타의 상대적인 등급을 표 2에 요약한다.

실시예 6

대두에서 AtAHASL 돌연변이체 유전자의 발현

형질전환된 대두 식물 내에서 AtAHASL 유전자를 발현시키기 위해 벡터를 제조하였다. 표준 클로닝 기술에 의해 파슬리 유비퀴틴 프로모터의 중합효소 연쇄 반응 생산물을 클로닝함으로써 벡터 AUP2 및 AUP3을 제조하고, Asp718 및 NcoI 제한 효소에 대한 부위를 통합하도록 증폭시키고, 소화시키고 AP2 및 AP3의 동일한 부위 내로 라이게이팅하였다 (도 11 및 12 참조). AUP2는 A122T 및 S653N 돌연변이를 갖는 AtAHASL 단백질을 코딩하고, AUP3은 A122T 및 S653N 돌연변이를 갖는 AtAHASL 단백질을 코딩한다. AP1의 전체 프로모터, 코딩 서열 및 3'-비번역 구역 서열을 표준 블런트-말단 (blunt-ended) 클로닝 기술에 의해 BAR 선택가능 마커 발현 카세트를 함유하는 표준 쌍떡잎식물 형질전환 백본 내로 클로닝함으로써 벡터 BAP1을 제조하였다.

작제물 AP2, AUP2 및 AUP3을 아그로박테리움-매개 형질전환을 통해 대두의 액생 (axillary) 분열조직 세포 내로 묘목 절편체 (explant)의 일차 마디에서 도입하였다. 접종 및 아그로박테리움과 공동-재배 후, 절편체를 선택제를 함유하지 않는 새싹 유도 배지에 1주 동안 옮겼다. 형질전환된 세포에 대해 선택하기 위해 절편체를 후속적으로 5 μM 이마자피르 (Arsenal)를 함유하는 새싹 유도 매질에 3주 동안 옮겼다. 이어서, 일차 마디에 건강한 캘루스/새싹 패드 (pad)를 갖는 절편체를 새싹이 연장되거나 절편체가 죽을 때까지 3 μM 이마자피르를 함유하는 새싹 연장 매질에 옮겼다. 트랜스제닉 묘목을 뿌리내리고, 화분식재 혼합물에 이식하고, 트랜스젠의 존재에 대해 TaqMan 분석을 수행한 후, 온실에서 성숙기까지 성장시켰다. 작제물 BAP1을 사용하여 선택제가 BASTA인 것을 제외하고는 유사한 방식으로 형질전환된 대두 식물을 생산하였다.

형질전환된 대두 식물을 제초제 내성에 대해 온실 및 밭 연구 모두에서 시험하였다. 밭 연구를 위해, 이마자피르를 V3 단계에서 300 g ai/ha의 비율로 적용하였다. 온실 연구를 위해, 이마자피르를 대략 V2 단계에서 적용하였다. 이들 연구의 결과를 표 3에 요약한다.

실시예 7

형질전환체 선택

본 발명에 의해 생성된 폴리뉴클레오티드는 식물 형질전환을 위한 선택가능 마커로서 사용될 수 있다. 본 발명에 의해 생성된 폴리뉴클레오티드는 관심있는 추가의 유전자를 포함할 수 있는 형질전환된 식물을 확인하고/하거나 선택하기 위해 선택가능 마커로서 사용될 수 있다. AHAS 거대 서브유닛 유전자의 다중 돌연변이체 형태를 함유하는 벡터로 형질전환된 식물 또는 식물 세포는 AHAS 억제제 또는 AHAS 억제 제초제, 예를 들어 이미다졸리논을 포함하는 최소 배지, 예를 들어 MS 배지 상에 플레이팅함으로써 비-형질전환된 식물 또는 식물 세포로부터 선택될 수 있다. 형질전환된 식물 또는 조직은 이들 억제제의 존재 하에 계속 성장할 수 있을 것이지만, 형질전환되지 않은 식물 또는 조직은 죽을 것이다. 형질전환된 조직의 경우에, 비-형질전환된 조직은 형질전환된 조직으로부터 분지쇄 아미노산을 받을 수 있으므로, 활발하게 성장하는 조직을 보다 느리게 성장하거나 죽어가는 조직으로부터 제거하고, 선택 배지 상에 재플레이팅하였다.

종자를 식재하고 발아 및 묘목 성장을 기다린 후, 묘목에 AHAS 억제제 또는 AHAS 억제 제초제, 예를 들어 이미다졸리논을 분무함으로써 전체 식물을 또한 선택할 수 있다. 형질전환된 식물을 생존할 것이지만, 형질전환되지 않은 식물은 죽을 것이다.

실시예 8

형질전환된 옥수수를 사용하는 밭 시험

AHASL 이중 및 삼중 돌연변이체를 포함하는 벡터 중 하나로 형질전환된 옥수수 식물이 이마자목스를 적용하거나 적용하지 않을 때 임의의 전반적인 생리학적 또는 생식적 영향을 나타내는지 여부를 평가하기 위해 밭 시험을 수행하였다.

물질 및 방법

시험 물질의 공급원

유전자 변형된 유기체는 옥수수 순계 (inbred) J553을 형질전환시킴으로써 생산하였다. 순계 웅성 시험체로서 TR5753을 사용하여 8개의 벡터 작제물로부터 F1 하이브리드 종자를 생산하였다. 벡터 작제물을 표 4에 기재한다. 시험을 위한 종자는 2006-2007 비계절기 동안 미국 하와이주 카우아이섬의 격리된 교배 블록 내에서 생산하였다. 생산된 각각의 F1 하이브리드의 하위샘플을 정확한 벡터 작제물의 존재 및 다른 AHASL 작제물의 우발적인 존재의 부재에 대해 분석하였다.

비-형질전환된 시판 하이브리드를 미국 중서부 옥수수 종자 회사로부터 구입하고, 다른 AHASL 작제물의 임의의 우발적인 존재의 부재를 확인하기 위해 분석하였다.

시험 방법

시험 설계는 난괴법에서 분할 구획 설계 (Split Plot in a Randomized Complete Block Design)이고, 여기서 주요 구획은 제초제 처리이고, 하위 구획은 F1 하이브리드 엔트리 (entry)이다. 제초제 처리는 1) 비처리, 및 2) 150 gai/ha로 적용된 이마자목스를 포함하였다. F1 하이브리드 엔트리는 8개의 벡터 작제물 및 4개의 비-형질전환된 시판 하이브리드 (3395IR (파이오니어 하이-브레드 인터내셔널, 인크. (Pioneer Hi-Bred International, Inc, 미국 아이오와주 존스턴)); 및 8342GLS/IT, 8546IT 및 8590IT (가르스트 시드 코., 인크. (Garst Seed Co., Inc., 미국 아이오와주 슬레이터))로부터 29개의 사건이었다. 구획 크기는 2개의 열; 열 폭 2.5 피트; 열 길이 20 피트이었다. 각각의 처리 조합은 4회 시행되었다. 시험물을 3개의 장소에 식재하였다. 이들 장소는 미국 아이오와주 에임스; 미국 아이오와주 에스테르빌; 및 미국 네브라스카주 요크였다. 모든 시험물을 2007년 5월 중에 식재하였다.

장소 조건

미국 아이오와주 에임스 장소는 옥수수-후-옥수수 윤작 중이고, 이는 유의한 양의 옥수수 잔류물이 식재 시에 존재하므로 발아 및 초기 성장의 균일도에 일부 영향을 줄 수 있다. 기후, 질병 또는 곤충으로 인한 작물에 대한 주요 영향을 주목되지 않았다. 아이오와주 에스테르빌 대지에는 7월 16일에 70 mph 돌풍을 동반한 폭우가 내렸고, 약 40 mph의 바람이 지속되었다. 뿌리 도복 (lodging)이 본질적으로 모든 구획에서 관찰되었다. 질병 또는 곤충으로 인한 작물에 대한 주요 영향은 주목되지 않았다. 네브라스카주 요크 대지에는 5월, 7월 및 8월에 평년 수준을 넘는 강수량이 내렸고, 주요 곤충 또는 질병 문제는 주목되지 않았다.

결과 및 논의

3개의 장소에 걸쳐서 조합한 데이타 분석에서는 이마자목스 제초제를 적용하거나 적용하지 않은 수확량을 비교할 때 유의한 수확량 감소 (p≤0.05)를 갖는 하나의 벡터 작제물을 얻었다 (표 5). 하나의 벡터 작제물은 이마자목스를 적용하여 처리할 때 유의한 수확량 증가를 보였다. 다른 농경학적 특성을 3개의 시험 장소로부터 또한 수집하였고, 식물 키, 이삭 (ear) 키, 줄기 도복 및 뿌리 도복과 같은 특질에 대해 이마자목스로 처리하거나 처리하지 않을 때 작제물 내에서 유의한 차이가 검출되지 않았다 (데이타 미제시).

시험의 목적은 이마자목스에 대해 개선된 제초제 내성을 제공하도록 최적화된 벡터 작제물에 적용된 이마자목스의 제초제 적용이 주로 수확량에서 전반적인 또는 명백한 생리학적 또는 생식적 영향을 미칠지 확인하기 위한 것이었다. 하나의 벡터 작제물 (작제물 1, 단일 돌연변이체, P197L)만이 이마자목스로 처리할 때 낟알 수확량에 대해 유의한 (p≤0.05) 음성 반응을 가졌다. 나머지 7개의 벡터 작제물은 제초제 이마자목스의 존재 또는 부재 하에 유해한 생리학적 또는 생식적 영향을 보이지 않았다. 이들 밭 시험의 결과는 AHASL 이중 또는 삼중 돌연변이체를 포함하는 벡터로 형질전환된 옥수수 식물의 뛰어난 농경 가능성을 입증한다.

명세서에서 언급된 모든 간행물 및 특허 출원은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자의 수준을 나타낸다. 모든 간행물 및 특허 출원은 마치 그 각각의 개별적인 간행물 또는 특허 출원이 참고로 포함된다고 구체적으로 및 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 본원에 참고로 포함된다. 상기 발명을 명료한 이해를 위해 예시 및 실시예를 통해 상세하게 설명하였지만, 본 발명에 대한 특정 변화 및 변형이 첨부된 청구의 범위 내에서 실시될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> McElver, John Singh, Bijay <120> AHAS MUTANTS <130> 038867/341792 <160> 34 <150> US 60/910,028 <151> 2007-04-04 <170> PatentIn version 3.4 <210> 1 <211> 670 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> MISC_FEATURE <223> Arabidopsis thaliana acetohydroxyacid synthase large subunit (AtAHASL) <400> 1 Met Ala Ala Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ile Ser Phe 1 5 10 15 Ser Thr Lys Pro Ser Pro Ser Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser 20 25 30 Arg Phe Ser Leu Pro Phe Ser Leu Asn Pro Asn Lys Ser Ser Ser Ser 35 40 45 Ser Arg Arg Arg Gly Ile Lys Ser Ser Ser Pro Ser Ser Ile Ser Ala 50 55 60 Val Leu Asn Thr Thr Thr Asn Val Thr Thr Thr Pro Ser Pro Thr Lys 65 70 75 80 Pro Thr Lys Pro Glu Thr Phe Ile Ser Arg Phe Ala Pro Asp Gln Pro 85 90 95 Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val 100 105 110 Glu Thr Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln 115 120 125 Ala Leu Thr Arg Ser Ser Ser Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu 130 135 140 Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Lys 145 150 155 160 Pro Gly Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val 165 170 175 Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile 180 185 190 Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu 195 200 205 Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu 210 215 220 Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Ile Glu Glu Ala Phe Phe 225 230 235 240 Leu Ala Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys 245 250 255 Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Glu Gln Ala Met Arg 260 265 270 Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Met Pro Lys Pro Pro Glu Asp Ser His 275 280 285 Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu 290 295 300 Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Asp Glu Leu Gly Arg Phe 305 310 315 320 Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly 325 330 335 Ser Tyr Pro Cys Asp Asp Glu Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His 340 345 350 Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu 355 360 365 Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala 370 375 380 Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu 385 390 395 400 Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys 405 410 415 Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu 420 425 430 Leu Lys Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Asn Glu Leu Asn Val Gln Lys 435 440 445 Gln Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro 450 455 460 Gln Tyr Ala Ile Lys Val Leu Asp Glu Leu Thr Asp Gly Lys Ala Ile 465 470 475 480 Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr 485 490 495 Asn Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Gly Gly Leu Gly Ala 500 505 510 Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro 515 520 525 Asp Ala Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn 530 535 540 Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Val 545 550 555 560 Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp 565 570 575 Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Phe Leu Gly Asp Pro Ala 580 585 590 Gln Glu Asp Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Leu Phe Ala Ala Ala Cys 595 600 605 Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Ala Asp Leu Arg Glu Ala 610 615 620 Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile 625 630 635 640 Cys Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr 645 650 655 Phe Asn Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Ile Lys Tyr 660 665 670 <210> 2 <211> 638 <212> PRT <213> Zea mays <220> <221> MISC_FEATURE <223> Zea mays acetohydroxyacid synthase large subunit number two (ZmAHASL2) <400> 2 Met Ala Thr Ala Ala Ala Ala Ser Thr Ala Leu Thr Gly Ala Thr Thr 1 5 10 15 Ala Ala Pro Lys Ala Arg Arg Arg Ala His Leu Leu Ala Thr Arg Arg 20 25 30 Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Ala Ser Pro Ala Met Pro 35 40 45 Met Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro Thr Asp Pro 50 55 60 Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu V al Glu Ser Leu Glu Arg Cys Gly Val 65 70 75 80 Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln 85 90 95 Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu 100 105 110 Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg 115 120 125 Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val 130 135 140 Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile 145 150 155 160 Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu 165 170 175 Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu 180 185 190 Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe 195 200 205 Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys 210 215 220 Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Lys Pro Met Ser 225 230 235 240 Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Leu 245 250 255 Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu 260 265 270 Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe 275 280 285 Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly 290 295 300 Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His 305 310 315 320 Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu 325 330 335 Ala Leu Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala 340 345 350 Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Val Asp Ile Asp Pro Ala Glu 355 360 365 Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys 370 375 380 Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Ala Leu Leu Glu Gly Ser Thr Ser Lys 385 390 395 400 Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp Asn Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys 405 410 415 Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Ser Asn Glu Glu Ile Gln Pro 420 425 430 Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile 435 440 445 Ile Gly Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr 450 455 460 Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala 465 470 475 480 Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro 485 490 495 Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn 500 505 510 Val Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val 515 520 525 Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp 530 535 540 Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu 545 550 555 560 Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe 565 570 575 Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Asn Glu Val Arg Ala Ala 580 585 590 Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile 595 600 605 Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala 610 615 620 Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr 625 630 635 <210> 3 <211> 652 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> MISC_FEATURE <223> Brassica napus A genome acetohydroxyacid synthase large subunit number one (BnAHASL1A) <400> 3 Met Ala Ala Ala Thr Ser Ser Ser Pro Ile Ser Leu Thr Ala Lys Pro 1 5 10 15 Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Ser Leu Pro Phe Ser 20 25 30 Leu Thr Pro Gln Lys Pro Ser Ser Arg Leu His Arg Pro Leu Ala Ile 35 40 45 Ser Ala Val Leu Asn Ser Pro Val Asn Val Ala Pro Glu Lys Thr Asp 50 55 60 Lys Ile Lys Thr Phe Ile Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Glu Pro Arg Lys 65 70 75 80 Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Glu Thr 85 90 95 Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu 100 105 110 Thr Arg Ser Ser Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly 115 120 125 Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Lys Pro Gly 130 135 140 Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly 145 150 155 160 Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly 165 170 175 Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro 180 185 190 Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met 195 200 205 Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala 210 215 220 Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys Asp Ile 225 230 235 240 Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Asp Gln Pro Met Arg Leu Pro 245 250 255 Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Gln Pro Pro Glu Val Ser Gln Leu Gly 260 265 270 Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val 275 280 285 Gly Gly Gly Ser Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu 290 295 300 Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ser Tyr 305 310 315 320 Pro Cys Asn Asp Glu Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr 325 330 335 Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe 340 345 350 Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala 355 360 365 Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly 370 375 380 Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys Leu Ala 385 390 395 400 Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu Leu Lys 405 410 415 Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Ser Glu Gln Lys Gln Lys 420 425 430 Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr 435 440 445 Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Gln Gly Lys Ala Ile Ile Ser 450 455 460 Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr 465 470 475 480 Arg Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly 485 490 495 Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Asp Ala 500 505 510 Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln 515 520 525 Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu 530 535 540 Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp Arg Phe 545 550 555 560 Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro Ala Arg Glu 565 570 575 Asn Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Gly Ala Cys Gly Ile 580 585 590 Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu Glu Leu Arg Glu Ala Ile Gln 595 600 605 Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Cys Pro 610 615 620 His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Lys 625 630 635 640 Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 645 650 <210> 4 <211> 644 <212> PRT <213> Oryza sativa <220> <221> MISC_FEATURE <223> Rice acetohydroxyacid synthase large subunit (OsAHASL) <400> 4 Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ser Ala Ala Ala 1 5 10 15 Thr Ala Lys Thr Gly Arg Lys Asn His Gln Arg His His Val Leu Pro 20 25 30 Ala Arg Gly Arg Val Gly Ala Ala Ala Val Arg Cys Ser Ala Val Ser 35 40 45 Pro Val Thr Pro Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro 50 55 60 Trp Gly Pro Ala Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala 65 70 75 80 Leu Glu Arg Cys Gly Val Ser Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala 85 90 95 Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn 100 105 110 His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr 115 120 125 Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro 130 135 140 Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser 145 150 155 160 Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly 165 170 175 Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile 180 185 190 Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val 195 200 205 Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val 210 215 220 Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val 225 230 235 240 Trp Asp Thr Ser Met Asn Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys 245 250 255 Pro Pro Ala Thr Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu 260 265 270 Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Ala Ser Gly 275 280 285 Asp Glu Leu Arg Trp Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr 290 295 300 Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu 305 310 315 320 Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp 325 330 335 Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val 340 345 350 Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile 355 360 365 Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser 370 375 380 Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu 385 390 395 400 Gln Gln Ser Thr Thr Lys Thr Ser Ser Asp Phe Ser Ala Trp His Asn 405 410 415 Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe 420 425 430 Gly Glu Glu Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu 435 440 445 Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met 450 455 460 Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser 465 470 475 480 Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly 485 490 495 Ala Ser Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp 500 505 510 Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu 515 520 525 Asn Leu Pro Val Lys Val Met Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met 530 535 540 Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr 545 550 555 560 Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Cys Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val 565 570 575 Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys 580 585 590 Ser Glu Val Arg Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro 595 600 605 Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met 610 615 620 Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly 625 630 635 640 Arg Thr Val Tyr <210> 5 <211> 655 <212> PRT <213> Helianthus annuus <220> <221> MISC_FEATURE <223> Sunflower acetohydroxyacid synthase large subunit number 1(HaAHASL1) <400> 5 Met Ala Ala Pro Pro Asn Pro Ser Ile Ser Phe Lys Pro Pro Ser Pro 1 5 10 15 Ala Ala Ala Leu Pro Pro Arg Ser Ala Phe Leu Pro Arg Phe Ala Leu 20 25 30 Pro Ile Thr Ser Thr Thr Gln Lys Arg His Arg Leu His Ile Ser Asn 35 40 45 Val Leu Ser Asp Ser Lys Ser Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Gln 50 55 60 Arg Pro Leu Pro Val Gln Pro Phe Val Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Gln 65 70 75 80 Pro Arg Lys Gly Ala Asp Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly 85 90 95 Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His 100 105 110 Gln Ala Leu Thr Arg Ser Ser Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His 115 120 125 Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Al a Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly 130 135 140 Leu Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu 145 150 155 160 Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala 165 170 175 Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln 180 185 190 Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr 195 200 205 Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe 210 215 220 Tyr Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro 225 230 235 240 Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Val Pro Lys Trp Asp Glu Pro Met 245 250 255 Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser Arg Met Pro Lys Pro Gln Tyr Asp Gly 260 265 270 His Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Val Gly Glu Ala Lys Arg Pro Val 275 280 285 Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Asp Asp Glu Leu Arg Arg 290 295 300 Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu 305 310 315 320 Gly Ala Tyr Pro Ala Ser Ser Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met 325 330 335 His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Ty r Ala Val Asp Lys Ser Asp Leu Leu 340 345 350 Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu 355 360 365 Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala 370 375 380 Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Gly Asp Ile 385 390 395 400 Lys Val Ala Leu Gln Gly Leu Asn Lys Ile Leu Glu Glu Lys Asn Ser 405 410 415 Val Thr Asn Leu Asp Phe Ser Thr Trp Arg Lys Glu Leu Asp Glu Gln 420 425 430 Lys Met Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro 435 440 445 Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Gly Gly Asn Ala 450 455 460 Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe 465 470 475 480 Tyr Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly 485 490 495 Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg 500 505 510 Pro Asp Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Met Met 515 520 525 Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys 530 535 540 Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Le u Gly Met Val Val Gln Trp Glu 545 550 555 560 Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro 565 570 575 Ser Lys Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn Met Val Lys Phe Ala Glu Ala 580 585 590 Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Gln Lys Ala Asp Leu Arg Ala 595 600 605 Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val 610 615 620 Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly 625 630 635 640 Gly Phe Ser Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 645 650 655 <210> 6 <211> 646 <212> PRT <213> Helianthus annuus <220> <221> MISC_FEATURE <223> Sunflower acetohydroxyacid synthase large subunit number 2(HaAHASL2) <400> 6 Met Ala Ala Ile His Pro Pro His Pro Ser Ile Thr Ala Lys Pro Pro 1 5 10 15 Pro Ser Ser Ala Ala Ala Val Ala Leu Pro Pro His Phe Ala Phe Ser 20 25 30 Ile Thr Ser Thr Ser His Lys Arg His Arg Leu His Ile Ser Asn Val 35 40 45 Leu Ser Asp Ser Thr Thr Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ile His Pro Pro 50 55 60 Pro Phe Val Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Gln Pro A rg Lys Gly Ala Asp 65 70 75 80 Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala 85 90 95 Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser 100 105 110 Asn Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe 115 120 125 Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Val Pro Gly Val Cys Ile 130 135 140 Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp 145 150 155 160 Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro 165 170 175 Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu 180 185 190 Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu 195 200 205 Asp Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe Tyr Leu Ala Ser Ser Gly 210 215 220 Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln 225 230 235 240 Leu Val Val Pro Lys Trp Asp Glu Pro Met Arg Leu Pro Gly Tyr Leu 245 250 255 Ser Arg Met Pro Lys Pro Gln Tyr Asp Gly His Leu Glu Gln Ile Val 260 265 270 Arg Leu Val Gly Glu Ala Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly 275 280 285 Cys Leu Asn Ser Asp Asp Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly 290 295 300 Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr Pro Ala Ser 305 310 315 320 Ser Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala 325 330 335 Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg 340 345 350 Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala 355 360 365 Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys 370 375 380 Gln Pro His Val Ser Ile Cys Gly Asp Ile Lys Val Ala Leu Gln Gly 385 390 395 400 Leu Asn Lys Ile Leu Glu Glu Lys Asn Ser Leu Asp Phe Ser Asn Trp 405 410 415 Arg Lys Glu Leu Asp Glu Gln Lys Val Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys 420 425 430 Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile His Val Leu Asp 435 440 445 Glu Leu Thr Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His 450 455 460 Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Gln Trp 465 470 475 480 Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala 485 490 495 Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val Asp Ile Asp 500 505 510 Gly Asp Gly Ser Phe Met Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg 515 520 525 Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu 530 535 540 Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala 545 550 555 560 His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Lys Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn 565 570 575 Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr 580 585 590 Arg Lys Gly Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro 595 600 605 Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu 610 615 620 Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly Gly Phe Ser Asp Val Ile Thr Glu Gly 625 630 635 640 Asp Gly Arg Met Lys Tyr 645 <210> 7 <211> 646 <212> PRT <213> Helianthus annuus <220> <221> misc_feature <223> Sunflower acetohydroxyacid synthase large subunit number 3(HaAHASL3) <400> 7 Met Ala Val Pro Leu Thr Phe Ile Ser Gly Lys Pro Pro Phe Ser Ala 1 5 10 15 Thr Pro Ser Gln Leu Th r Thr Asn Leu Ser Leu Pro Leu Thr Leu Leu 20 25 30 Pro Ile Ile Pro Ser Lys Thr His Val Ser Lys His Leu Ile Ile Thr 35 40 45 Asn Ala Ile Ala Lys His Ser His Ser His Lys Ala Phe Val Val Ser 50 55 60 Arg Phe Gly Pro Asp Glu Pro Arg Lys Gly Ser Asp Val Leu Val Glu 65 70 75 80 Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asn Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly 85 90 95 Ala Thr Leu Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Thr Ile Ile Arg 100 105 110 Asn Ile Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly 115 120 125 Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Leu Thr Gly Val Cys Ile Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp 145 150 155 160 Ser Val Pro Ile Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Asn Met Ile 165 170 175 Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Ser Arg Ser 180 185 190 Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asn Val Gln Asp Ile Pro Arg 195 200 205 Ile Val His Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro 210 215 220 Val Leu Ile Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gl n Gln Leu Val Val Pro 225 230 235 240 Asn Trp Asp Glu Gln Gln Gln Pro Met Arg Leu Asp Gly Tyr Ile Ser 245 250 255 Arg Leu Pro Lys Pro Pro Asn Glu Thr His Leu Arg Gln Ile Val Arg 260 265 270 Phe Ile Lys Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys 275 280 285 Met Asn Ser Ser Asp Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile 290 295 300 Pro Val Ala Asn Thr Leu Met Gly Leu Gly Thr Tyr Pro Gly Ser His 305 310 315 320 Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn 325 330 335 Tyr Ala Ile Asp Lys Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe 340 345 350 Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys 355 360 365 Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln 370 375 380 Pro His Phe Ser Ile Cys Gly Asp Ile Lys Ala Ala Leu Gln Gly Leu 385 390 395 400 Asn Lys Ile Leu Glu Arg Gly Glu Asp Leu Asp Phe Asp Phe Ser Pro 405 410 415 Trp Lys Glu Glu Val Met Asn Gln Lys Ala Ser Asn Pro Leu Ser Tyr 420 425 430 Lys Thr Phe Gly Asp Ala Ile Pro Pro Gln Ty r Ala Ile Gln Val Leu 435 440 445 Asn Glu Val Thr Gly Gly Asn Ala Ile Ile Thr Thr Gly Val Gly Gln 450 455 460 His Gln Met Trp Ser Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Asn Arg Pro Arg Gln 465 470 475 480 Trp Leu Thr Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala 485 490 495 Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val Asp Ile 500 505 510 Asp Gly Asp Gly Ser Phe Met Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile 515 520 525 Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Met Met Val Leu Asn Asn Gln His 530 535 540 Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg 545 550 555 560 Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Thr Asn Glu Ser Gly Ile Phe Pro 565 570 575 Asn Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg Val 580 585 590 Thr Lys Lys Gly Asp Val Arg Thr Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr 595 600 605 Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val 610 615 620 Leu Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly Gly Phe Asn Asp Ile Ile Thr Asp 625 630 635 640 Gly Asp Gly Arg Thr Gln 645 <210> 8 <211> 638 <212> PRT <213> Zea mays <220> <221> MISC_FEATURE <223> Zea mays acetohydroxyacid synthase large subunit number 1(ZmAHASL1) <400> 8 Met Ala Thr Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ala Leu Thr Gly Ala Thr Thr 1 5 10 15 Ala Thr Pro Lys Ser Arg Arg Arg Ala His His Leu Ala Thr Arg Arg 20 25 30 Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Leu Ser Arg Ala Thr Pro 35 40 45 Thr Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro Asn Glu Pro 50 55 60 Arg Lys Gly Ser Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Val 65 70 75 80 Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln 85 90 95 Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu 100 105 110 Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Ala Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg 115 120 125 Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val 130 135 140 Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile 145 150 155 160 Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu 165 170 175 Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Il e Thr Lys His Asn Tyr Leu 180 185 190 Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe 195 200 205 Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys 210 215 220 Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Ala Trp Asp Thr Pro Met Ser 225 230 235 240 Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Phe 245 250 255 Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu 260 265 270 Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Cys Arg Phe 275 280 285 Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly 290 295 300 Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His 305 310 315 320 Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu 325 330 335 Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala 340 345 350 Phe Ala Gly Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu 355 360 365 Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys 370 375 380 Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Thr Leu Leu Gl u Gly Ser Thr Ser Lys 385 390 395 400 Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp His Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys 405 410 415 Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Ile Phe Asn Glu Glu Ile Gln Pro 420 425 430 Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile 435 440 445 Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr 450 455 460 Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala 465 470 475 480 Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro 485 490 495 Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn 500 505 510 Ile Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val 515 520 525 Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp 530 535 540 Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Phe Leu Gly Asn Pro Glu 545 550 555 560 Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Ala Ile Ala Lys Gly Phe 565 570 575 Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val His Ala Ala 580 585 590 Ile Lys Lys Met Leu Glu Ala Pro Gly Pro Ty r Leu Leu Asp Ile Ile 595 600 605 Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala 610 615 620 Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr 625 630 635 <210> 9 <211> 665 <212> PRT <213> Amaranthus sp. <220> <221> MISC_FEATURE <223> Amaranthus acetohydroxyacid synthase large subunit (AsAHASL) <400> 9 Met Val Thr Leu Asn His Ile Ser Ser Phe Thr Lys Pro Asn Lys Thr 1 5 10 15 Tyr Leu Gln Ser Ser Ile Tyr Ala Ile Pro Phe Ser Asn Ser Leu Lys 20 25 30 Pro Thr Ser Ser Ser Ser Ile Leu Ala Ala Leu Phe Lys Ser His His 35 40 45 Leu Leu Leu Gln Ser Pro Lys Pro Lys Pro Pro Ser Ala Thr Ile Thr 50 55 60 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Asp Asp Lys Pro Ser Ser Phe Val Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Pro Glu Glu Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu 85 90 95 Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly 100 105 110 Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg 115 120 125 Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Gln Gly 130 135 140 Tyr Ala Arg Ala Thr Gly Arg Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly 145 150 155 160 Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Phe Ala Asp Ala Leu Leu Asp 165 170 175 Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile 180 185 19 0 Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser 195 200 205 Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg 210 215 220 Ile Val Lys Glu Ala Phe Phe Leu Ala Asn Ser Gly Arg Pro Gly Pro 225 230 235 240 Val Leu Ile Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Val Pro 245 250 255 Asn Trp Glu Gln Pro Ile Lys Leu Gly Gly Tyr Leu Ser Arg Leu Pro 260 265 270 Lys Pro Thr Phe Ser Ala Asn Glu Glu Gly Leu Leu Asp Gln Ile Val 275 280 285 Arg Leu Val Gly Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Thr Gly Gly Gly 290 295 300 Cys Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Arg Lys Phe Val Glu Leu Thr Gly 305 310 315 320 Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Cys Thr 325 330 335 Asp Asp Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala 340 345 350 Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg 355 360 365 Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala 370 375 380 Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys 385 390 395 40 0 Gln Pro His Val Ser Ile Cys Gly Glu Ile Lys Val Ala Leu Gln Gly 405 410 415 Leu Asn Lys Ile Leu Glu Ser Arg Lys Gly Lys Leu Lys Leu Asp Phe 420 425 430 Ser Asn Trp Arg Glu Glu Leu Asn Glu Gln Lys Lys Lys Phe Pro Leu 435 440 445 Ser Phe Lys Ser Phe Gly Asp Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln 450 455 460 Val Leu Asp Glu Leu Thr Leu Gly Asp Ala Ile Val Ser Thr Gly Val 465 470 475 480 Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Arg Asn Pro 485 490 495 Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu 500 505 510 Pro Ala Cys Tyr Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val 515 520 525 Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala 530 535 540 Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Met Leu Leu Asn Asn 545 550 555 560 Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala 565 570 575 Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Asn Ser Ser Glu Ile 580 585 590 Phe Pro Asp Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala 595 600 605 Ar g Val Thr Lys Val Ser Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Thr Met Leu 610 615 620 Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu 625 630 635 640 His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Ala Ala Phe Lys Asp Thr Ile 645 650 655 Thr Glu Gly Asp Gly Arg Arg Ala Tyr 660 665 <210> 10 <211> 655 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> MISC_FEATURE <223> Brassica napus acetohydroxyacid synthase C genome large subunit number 1 (BnAHASL1C) <400> 10 Met Ala Ala Ala Thr Ser Ser Ser Pro Ile Ser Leu Thr Ala Lys Pro 1 5 10 15 Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Ser Leu Pro Phe Ser 20 25 30 Leu Thr Pro Gln Lys Asp Ser Ser Arg Leu His Arg Pro Leu Ala Ile 35 40 45 Ser Ala Val Leu Asn Ser Pro Val Asn Val Ala Pro Pro Ser Pro Glu 50 55 60 Lys Thr Asp Lys Asn Lys Thr Phe Val Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Glu 65 70 75 80 Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly 85 90 95 Val Glu Thr Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His 100 105 110 Gln Ala Leu Thr Arg Ser Ser Thr I le Arg Asn Val Leu Pro Arg His 115 120 125 Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly 130 135 140 Lys Pro Gly Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu 145 150 155 160 Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala 165 170 175 Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln 180 185 190 Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr 195 200 205 Leu Val Met Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val Gln Glu Ala Phe 210 215 220 Phe Leu Ala Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro 225 230 235 240 Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Asp Gln Pro Met 245 250 255 Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Gln Pro Pro Glu Val Ser 260 265 270 Gln Leu Gly Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Arg Pro Val 275 280 285 Leu Tyr Val Gly Gly Gly Ser Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg 290 295 300 Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu 305 310 315 320 Gly Ser Tyr Pro Cys Asn Asp Glu L eu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met 325 330 335 His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu 340 345 350 Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu 355 360 365 Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala 370 375 380 Glu Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val 385 390 395 400 Lys Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu 405 410 415 Glu Leu Lys Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Ser Glu Gln 420 425 430 Lys Gln Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro 435 440 445 Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Gly Lys Ala 450 455 460 Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe 465 470 475 480 Tyr Lys Tyr Arg Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly 485 490 495 Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn 500 505 510 Pro Asp Ala Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met 515 520 525 Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg V al Glu Asn Leu Pro Val Lys 530 535 540 Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu 545 550 555 560 Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro 565 570 575 Ala Arg Glu Asn Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Gly Ala 580 585 590 Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu Glu Leu Arg Glu 595 600 605 Ala Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val 610 615 620 Ile Cys Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly 625 630 635 640 Thr Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 645 650 655 <210> 11 <211> 637 <212> PRT <213> Brassica napus <220> <221> MISC_FEATURE <223> Brassica napus acetohydroxyacid synthase A genome large subunit number 2 (BnAHASL2A) <400> 11 Met Ala Ser Phe Ser Phe Phe Gly Thr Ile Pro Ser Ser Pro Thr Lys 1 5 10 15 Ala Ser Val Phe Ser Leu Pro Val Ser Val Thr Thr Leu Pro Ser Phe 20 25 30 Pro Arg Arg Arg Ala Thr Arg Val Ser Val Ser Ala Asn Ser Lys Lys 35 40 45 Asp Gln Asp Arg Thr Ala Ser Ar g Arg Glu Asn Pro Ser Thr Phe Ser 50 55 60 Ser Lys Tyr Ala Pro Asn Val Pro Arg Ser Gly Ala Asp Ile Leu Val 65 70 75 80 Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Asp Val Val Phe Ala Tyr Pro Gly 85 90 95 Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Thr Ile 100 105 110 Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Ile Phe Ala Ala Glu 115 120 125 Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Lys Pro Gly Ile Cys Ile Ala Thr Ser 130 135 140 Gly Pro Gly Ala Met Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Phe 145 150 155 160 Asp Ser Val Pro Leu Ile Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met 165 170 175 Ile Gly Thr Met Ala Phe Gln Glu Thr Pro Val Val Glu Val Thr Arg 180 185 190 Thr Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met Glu Val Asp Asp Ile Pro 195 200 205 Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe Phe Leu Ala Thr Ser Val Arg Pro Gly 210 215 220 Pro Val Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Val Gln Gln Gln Phe Ala Ile 225 230 235 240 Pro Asn Trp Glu Gln Pro Met Arg Leu Pro Leu Tyr Met Ser Thr Met 245 250 255 Pro Lys Pro Pro Lys Val Ser His Leu Glu Gln Ile Leu Arg Leu Val 260 265 270 Ser Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn 275 280 285 Ser Ser Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val 290 295 300 Ala Ser Thr Phe Met Gly Leu Gly Ser Tyr Pro Cys Asp Asp Glu Glu 305 310 315 320 Phe Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr 325 330 335 Ala Val Glu Tyr Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp 340 345 350 Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile 355 360 365 Val His Ile Asp Ile Asp Ser Thr Glu Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro 370 375 380 His Val Ser Val Cys Cys Asp Val Gln Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn 385 390 395 400 Glu Val Leu Glu Asn Arg Arg Asp Val Leu Asp Phe Gly Glu Trp Arg 405 410 415 Cys Glu Leu Asn Glu Gln Arg Leu Lys Phe Pro Leu Arg Tyr Lys Thr 420 425 430 Phe Gly Glu Glu Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Leu Leu Asp Glu 435 440 445 Leu Thr Asp Gly Lys Ala Ile Ile Thr Thr Gly Val Gly Gln His Gln 450 455 460 Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Arg Phe Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu 465 470 475 480 Ser Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Met 485 490 495 Gly Ala Ala Ile Ala Asn Pro Gly Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly 500 505 510 Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val 515 520 525 Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Leu Leu Ile Asn Asn Gln His Leu Gly 530 535 540 Met Val Leu Gln Trp Glu Asp His Phe Tyr Ala Ala Asn Arg Ala Asp 545 550 555 560 Ser Phe Leu Gly Asp Pro Ala Asn Pro Glu Ala Val Phe Pro Asp Met 565 570 575 Leu Leu Phe Ala Ala Ser Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Arg 580 585 590 Arg Glu Asp Leu Arg Glu Ala Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly 595 600 605 Pro Phe Leu Leu Asp Val Val Cys Pro His Gln Asp His Val Leu Pro 610 615 620 Leu Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Lys Asp Ile Ile Val 625 630 635 <210> 12 <211> 668 <212> PRT <213> Camelina microcarpa <220> <221> MISC_FEATURE <223> Camelina microcarpa acetohydroxyacid synthase large subunit number 1 (CmAHASL1) <400> 12 Met Ala Ala Ala Thr Thr Thr Ser Ser S er Ser Ile Pro Phe Ser Thr 1 5 10 15 Lys His Ser Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Thr Leu 20 25 30 Pro Phe Ser Leu Asn Pro Asn Lys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Arg Arg 35 40 45 Arg Gly Ile Lys Ser Thr Ala Leu Ser Ile Ser Ala Val Leu Asn Thr 50 55 60 Thr Thr Asn Val Ser Thr Thr Thr Pro Gln Ser Lys Pro Thr Lys Pro 65 70 75 80 Glu Lys Lys Lys Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro Asp Gln Pro Arg Lys 85 90 95 Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Glu Thr 100 105 110 Ala Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu 115 120 125 Thr Arg Ser Ser Ser Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly 130 135 140 Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Thr Gly Lys Pro Gly 145 150 155 160 Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly 165 170 175 Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly 180 185 190 Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro 195 200 205 Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met 210 215 220 Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Val Glu Glu Ala Phe Phe Leu Ala 225 230 235 240 Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys Asp Ile 245 250 255 Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Glu Gln Ser Met Arg Leu Pro 260 265 270 Gly Tyr Met Ser Arg Met Pro Lys Pro Pro Glu Asp Ser His Leu Glu 275 280 285 Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val 290 295 300 Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu 305 310 315 320 Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr 325 330 335 Pro Cys Asp Asp Glu Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr 340 345 350 Val Tyr Ala Asn Tyr Ser Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe 355 360 365 Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala 370 375 380 Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly 385 390 395 400 Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys Leu Ala 405 410 415 Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu Leu Lys 420 425 430 Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Asn Glu Gln Lys Gln Lys 435 440 445 Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr 450 455 460 Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Asp Gly Arg Ala Ile Ile Ser 465 470 475 480 Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr 485 490 495 Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly 500 505 510 Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Asp Ser 515 520 525 Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln 530 535 540 Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Ile 545 550 555 560 Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp Arg Phe 565 570 575 Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ala Glu Glu 580 585 590 Asp Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Ser Ala Cys Gly Ile 595 600 605 Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Ile Ala Glu Leu Arg Glu Ala Ile Gln 610 615 620 Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Cys Pro 625 630 635 640 His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Asn 645 650 655 Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 660 665 <210> 13 <211> 665 <212> PRT <213> Camelina microcarpa <220> <221> MISC_FEATURE <223> Camelina microcarpa acetohydroxyacid synthase large subunit number 2 (CmAHASL2) <400> 13 Met Ala Ala Ala Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ser Ile Pro Phe Ser Thr 1 5 10 15 Lys Pro Ser Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Thr Leu 20 25 30 Pro Phe Ser Leu Asn Pro Asn Lys Ser Ser Ser Arg Arg Arg Gly Ile 35 40 45 Lys Ser Thr Ser Leu Ser Ile Ser Ala Val Leu Asn Thr Thr Thr Asn 50 55 60 Val Ser Thr Thr Thr Pro Pro Ser Lys Pro Thr Lys Pro Glu Lys Lys 65 70 75 80 Lys Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro Asp Gln Pro Arg Lys Gly Ala Asp 85 90 95 Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Glu Thr Val Phe Ala 100 105 110 Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser 115 120 125 Ser Ser Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe 130 135 140 Ala Al a Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Thr Gly Lys Pro Gly Ile Cys Ile 145 150 155 160 Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp 165 170 175 Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro 180 185 190 Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu 195 200 205 Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met Asp Val Glu 210 215 220 Asp Ile Pro Arg Ile Val Glu Glu Ala Phe Phe Leu Ala Thr Ser Gly 225 230 235 240 Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln 245 250 255 Leu Ala Ile Pro Asn Trp Glu Gln Ser Met Arg Leu Pro Gly Tyr Met 260 265 270 Ser Arg Met Pro Lys Pro Pro Glu Asp Ser His Leu Glu Gln Ile Val 275 280 285 Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly 290 295 300 Cys Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly 305 310 315 320 Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr Pro Cys Asp 325 330 335 Asp Glu Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala 340 345 350 Asn Ty r Ser Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg 355 360 365 Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala 370 375 380 Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys 385 390 395 400 Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly 405 410 415 Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Gly Glu Glu Leu Lys Leu Asp Phe 420 425 430 Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Asn Glu Gln Lys Gln Lys Phe Pro Leu 435 440 445 Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln 450 455 460 Val Leu Asp Glu Leu Thr Asp Gly Lys Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val 465 470 475 480 Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro 485 490 495 Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu 500 505 510 Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Asp Ala Val Val Val 515 520 525 Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala 530 535 540 Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Ile Leu Asn Asn 545 550 555 560 Gln Hi s Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala 565 570 575 Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ala Thr Glu Asp Glu Ile 580 585 590 Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Ser Ala Cys Gly Ile Pro Ser Ala 595 600 605 Arg Val Thr Lys Lys Ala Glu Leu Arg Glu Ala Ile Gln Lys Met Leu 610 615 620 Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Cys Pro His Gln Glu 625 630 635 640 His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asp Val Ile 645 650 655 Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 660 665 <210> 14 <211> 567 <212> PRT <213> Solanum ptychanthum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Partial Solanum ptychanthum acetohydroxyacid synthase large subunit (SpAHASL) <400> 14 Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly 1 5 10 15 Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Thr Ser Met Glu Ile His 20 25 30 Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His 35 40 45 Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Thr Gly 50 55 60 Phe Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu 65 70 75 80 Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Ile Val Ala 85 90 95 Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln 100 105 110 Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr 115 120 125 Leu Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe 130 135 140 Phe Leu Ala Lys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro 145 150 155 160 Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Ile Pro Asn Trp Asp Gln Pro Met 165 170 175 Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Lys Leu Pro Asn Glu Met 180 185 190 Leu Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val 195 200 205 Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Gln Ser Ser Glu Glu Leu Arg Arg 210 215 220 Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu 225 230 235 240 Gly Ala Phe Pro Thr Gly Asp Glu Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met 245 250 255 His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Ser Ser Asp Leu Leu 260 265 270 Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu 275 280 285 Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala 290 295 300 Glu Ile Gly Lys Asn Lys Leu Pro His Ala Ser Ile Cys Ala Asp Ile 305 310 315 320 Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ser Ile Leu Glu Gly Lys Glu Gly 325 330 335 Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ser Ala Trp Arg Gln Glu Leu Asn Glu Gln 340 345 350 Lys Val Lys Tyr Pro Leu Asn Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro 355 360 365 Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Asn Gly Asn Ala 370 375 380 Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe 385 390 395 400 Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly 405 410 415 Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Met Gly Ala Ala Val Gly Arg 420 425 430 Pro Gly Glu Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Met Met 435 440 445 Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Lys Val Glu Asn Leu Pro Val Lys 450 455 460 Ile Met Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu 465 470 475 480 Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro 485 490 495 Ala Asn Glu Glu Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala 500 505 510 Cys Gly Val Pro Ala Ala Arg Val Thr His Arg Asp Glu Leu Arg Ala 515 520 525 Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val 530 535 540 Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly 545 550 555 560 Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr 565 <210> 15 <211> 641 <212> PRT <213> Sorghum bicolor <220> <221> MISC_FEATURE <223> Sorghum bicolor acetohydroxyacid synthase large subunit (SbAHASL) <400> 15 Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ala Gly Ala Thr 1 5 10 15 Thr Ala Ala Pro Lys Ala Arg Arg Arg Ala His Leu Leu Ala Ala Arg 20 25 30 Arg Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr 35 40 45 Leu Thr Val Thr Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro 50 55 60 Thr Asp Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg 65 70 75 80 Cys Gly Val Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu 85 90 95 Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe 100 105 110 Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Phe Ala Arg Ser 115 120 125 Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr 130 135 140 Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met 145 150 155 160 Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala 165 170 175 Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His 180 185 190 Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu 195 200 205 Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp 210 215 220 Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Thr 225 230 235 240 Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala 245 250 255 Thr Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg 260 265 270 Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu 275 280 285 Arg Arg Phe Val Glu Met Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met 290 295 300 Gly Leu Gly Asn Phe Pro Gly Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu 305 310 315 320 Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp 325 330 335 Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys 340 345 350 Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp 355 360 365 Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala 370 375 380 Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Ala Leu Leu Glu Gly Ser 385 390 395 400 Thr Ser Lys Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp Gln Ala Glu Leu Asp 405 410 415 Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Asp Asp Glu 420 425 430 Ile Gln Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly 435 440 445 Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala 450 455 460 Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly 465 470 475 480 Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val 485 490 495 Ala Asn Pro Gly Ile Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe 500 505 510 Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro 515 520 525 Val Lys Val Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln 530 535 540 Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly 545 550 555 560 Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala 565 570 575 Lys Gly Phe Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val 580 585 590 His Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu 595 600 605 Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser 610 615 620 Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val 625 630 635 640 Tyr <210> 16 <211> 657 <212> PRT <213> Solanum tuberosum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Potato acetohydroxyacid synthase large subunit number 1 (StAHASL1) <400> 16 Met Ala Ala Ala Ser Pro Ser Pro Cys Phe Ser Lys Asn Leu Pro Pro 1 5 10 15 Ser Ser Ser Lys Ser Ser Ile Leu Leu Pro Lys Ser Thr Phe Thr Phe 20 25 30 His Asn His Pro Lys Lys Thr Ser Pro Leu His Leu Thr His Thr Gln 35 40 45 His His Ser Arg Phe Thr Val Ser Asn Val Ile Leu Ser Thr Thr Thr 50 55 60 His Asn Asp Val Ser Glu Pro Glu Ile Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro 65 70 75 80 Asp Glu Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg 85 90 95 Glu Gly Val Lys Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu 100 105 110 Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg Asn Val Leu Pro 115 120 125 Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala 130 135 140 Thr Gly Phe Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr 145 150 155 160 Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Ile 165 170 175 Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala 180 185 190 Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His 195 200 205 Asn Tyr Leu Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Val Arg Glu 210 215 220 Ala Phe Phe Leu Ala Lys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp 225 230 235 240 Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Pro Leu Val Ile Pro Asn Trp Asp Gln 245 250 255 Pro Met Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Le u Pro Lys Leu Pro Asn 260 265 270 Glu Met Leu Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys 275 280 285 Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Thr Gln Ser Ser Glu Glu Leu 290 295 300 Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met 305 310 315 320 Gly Leu Gly Ala Phe Pro Val Gly Asp Glu Leu Ser Leu Gln Met Leu 325 330 335 Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Ser Ser Asp 340 345 350 Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys 355 360 365 Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp 370 375 380 Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala 385 390 395 400 Asp Ile Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ser Ile Leu Glu Gly Lys 405 410 415 Glu Gly Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ser Ala Trp Arg Gln Glu Leu Thr 420 425 430 Glu Gln Lys Val Lys Tyr Pro Leu Asn Tyr Lys Thr Phe Gly Glu Ala 435 440 445 Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Asn Gly 450 455 460 Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gl n Met Trp Ala Ala 465 470 475 480 Gln Tyr Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly 485 490 495 Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val 500 505 510 Gly Arg Pro Gly Glu Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe 515 520 525 Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Lys Val Glu Asn Leu Pro 530 535 540 Val Lys Ile Met Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln 545 550 555 560 Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly 565 570 575 Asp Pro Ala Asn Glu Glu Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala 580 585 590 Glu Ala Cys Gly Val Pro Ala Ala Arg Val Ser His Arg Asp Asp Leu 595 600 605 Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu 610 615 620 Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser 625 630 635 640 Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Arg Ser 645 650 655 Tyr <210> 17 <211> 659 <212> PRT <213> Solanum tuberosum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Potato acetohydroxyacid synthase l arge subunit number 2 (StAHASL2) <220> <221> misc_feature <222> (406)..(406) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 17 Met Ala Ala Ala Ala Ser Pro Ser Pro Cys Phe Ser Lys Thr Leu Pro 1 5 10 15 Pro Ser Ser Ser Lys Ser Ser Thr Ile Leu Pro Arg Ser Thr Phe Pro 20 25 30 Phe His Asn His Pro Gln Lys Ala Ser Pro Leu His Leu Thr His Thr 35 40 45 His His His Arg Arg Gly Phe Ala Val Ser Asn Val Val Ile Ser Thr 50 55 60 Thr Thr His Asn Asp Val Ser Glu Pro Glu Thr Phe Val Ser Arg Phe 65 70 75 80 Ala Pro Asp Glu Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu Ala Leu 85 90 95 Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser 100 105 110 Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg Asn Val 115 120 125 Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala 130 135 140 Arg Ala Thr Gly Phe Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly 145 150 155 160 Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile 165 170 175 Pro Ile Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr 180 185 190 Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr 195 200 205 Lys His Asn Tyr Leu Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Val 210 215 220 Arg Glu Ala Phe Phe Leu Ala Lys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu 225 230 235 240 Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Ile Pro Asn Trp 245 250 255 Asp Gln Pro Met Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Lys Leu 260 265 270 Pro Asn Glu Met Leu Leu Glu Gln Ile Ile Arg Leu Ile Ser Glu Ser 275 280 285 Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Gln Ser Ser Glu 290 295 300 Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Ser Val Ala Ser Thr 305 310 315 320 Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Thr Gly Asp Glu Leu Ser Leu Gln 325 330 335 Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Gly 340 345 350 Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr 355 360 365 Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp 370 375 380 Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile 385 390 395 400 Cys Ala Asp Ile Lys Xaa Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ser Ile Leu Glu 405 410 415 Gly Lys Glu Gly Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ser Ala Trp Arg Gln Glu 420 425 430 Leu Thr Glu Gln Lys Val Lys Tyr Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly 435 440 445 Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr 450 455 460 Asn Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp 465 470 475 480 Ala Ala Gln Tyr Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser 485 490 495 Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala 500 505 510 Ala Val Gly Arg Pro Gly Glu Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly 515 520 525 Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Lys Val Glu Asn 530 535 540 Leu Pro Val Lys Ile Met Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val 545 550 555 560 Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr 565 570 575 Leu Gly Asp Pro Ala Asn Glu Glu Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys 580 585 590 Phe Ala Glu Ala Cys Gly Val Pro Ala Ala Arg Val Ser His Arg Asp 595 600 605 Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr 610 615 620 Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile 625 630 635 640 Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg 645 650 655 Arg Ser Tyr <210> 18 <211> 651 <212> PRT <213> Glycine max <220> <221> MISC_FEATURE <223> Soybean acetohydroxyacid synthase large subunit (GmAHASL) <400> 18 Met Ala Ala Thr Ala Ser Arg Thr Thr Arg Phe Ser Ser Ser Ser Ser 1 5 10 15 His Pro Thr Phe Pro Lys Arg Ile Thr Arg Ser Thr Leu Pro Leu Ser 20 25 30 His Gln Thr Leu Thr Lys Pro Asn His Ala Leu Lys Ile Lys Cys Ser 35 40 45 Ile Ser Lys Pro Pro Thr Ala Ala Pro Phe Thr Lys Glu Ala Pro Thr 50 55 60 Thr Glu Pro Phe Val Ser Arg Phe Ala Ser Gly Glu Pro Arg Lys Gly 65 70 75 80 Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Thr Thr Val 85 90 95 Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr 100 105 110 Arg Ser Ala Ala Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln G ly Gly 115 120 125 Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Leu Pro Gly Val 130 135 140 Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu 145 150 155 160 Ala Asp Ala Leu Met Asp Ser Val Pro Val Val Ala Ile Thr Gly Gln 165 170 175 Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile 180 185 190 Val Glu Val Ser Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Ile Leu Asp 195 200 205 Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Ala Glu Ala Phe Phe Val Ala Thr 210 215 220 Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Ile Pro Lys Asp Val Gln 225 230 235 240 Gln Gln Leu Ala Val Pro Asn Trp Asp Glu Pro Val Asn Leu Pro Gly 245 250 255 Tyr Leu Ala Arg Leu Pro Arg Pro Pro Ala Glu Ala Gln Leu Glu His 260 265 270 Ile Val Arg Leu Ile Met Glu Ala Gln Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly 275 280 285 Gly Gly Ser Leu Asn Ser Ser Ala Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu 290 295 300 Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Thr Phe Pro 305 310 315 320 Ile Gly Asp Glu Tyr Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly T hr Val 325 330 335 Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Asn Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly 340 345 350 Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser 355 360 365 Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys 370 375 380 Asn Lys Gln Ala His Val Ser Val Cys Ala Asp Leu Lys Leu Ala Leu 385 390 395 400 Lys Gly Ile Asn Met Ile Leu Glu Glu Lys Gly Val Glu Gly Lys Phe 405 410 415 Asp Leu Gly Gly Trp Arg Glu Glu Ile Asn Val Gln Lys His Lys Phe 420 425 430 Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Gln Asp Ala Ile Ser Pro Gln His Ala 435 440 445 Ile Glu Val Leu Asp Glu Leu Thr Asn Gly Asp Ala Ile Val Ser Thr 450 455 460 Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys 465 470 475 480 Arg Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe 485 490 495 Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Ala Val 500 505 510 Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu 515 520 525 Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu L eu 530 535 540 Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr 545 550 555 560 Lys Ser Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro Ser Ser Glu Ser 565 570 575 Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala Asp Ala Cys Gly Ile Pro 580 585 590 Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu Glu Leu Arg Ala Ala Ile Gln Arg 595 600 605 Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His 610 615 620 Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Asn Gly Ser Phe Lys Asp 625 630 635 640 Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Arg Tyr 645 650 <210> 19 <211> 648 <212> PRT <213> Xanthium sp. <220> <221> MISC_FEATURE <223> Cocklebur acetohydroxyacid synthase large subunit (XsAHASL) <400> 19 Met Ala Ala Ile Pro His Thr Asn Pro Ser Ile Thr Thr Lys Pro Pro 1 5 10 15 Ser Ser Pro Pro Arg Pro Thr Phe Leu Ala Arg Phe Thr Phe Pro Ile 20 25 30 Thr Ser Thr Ser His Lys Arg His Arg Leu His Ile Ser Asn Val Leu 35 40 45 Ser Asp Ser Lys Pro Thr Ile Thr His Ser Pro Leu Pro Thr Glu Ser 50 55 60 Phe Ile Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Gln Pro Arg Lys Gly Ala Asp Val 65 70 75 80 Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr 85 90 95 Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Thr 100 105 110 Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala 115 120 125 Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Leu Pro Gly Val Cys Ile Ala 130 135 140 Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala 145 150 155 160 Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg 165 170 175 Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val 180 185 19 0 Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp 195 200 205 Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe Tyr Leu Ala Ser Ser Gly Arg 210 215 220 Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu 225 230 235 240 Val Val Pro Lys Trp Asp Glu Pro Ile Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser 245 250 255 Arg Leu Pro Lys Thr Glu Asn Asn Gly Gln Leu Glu His Ile Val Arg 260 265 270 Leu Val Ser Glu Ala Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys 275 280 285 Leu Asn Ser Gly Asp Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile 290 295 300 Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr Pro Ala Ser Ser 305 310 315 320 Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn 325 330 335 Tyr Ala Val Asp Lys Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe 340 345 350 Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys 355 360 365 Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln 370 375 380 Pro His Val Ser Ile Cys Gly Asp Ile Lys Val Ala Leu Gln Gly Leu 385 390 395 40 0 Asn Lys Ile Leu Glu Val Lys Asn Ser Val Thr Asn Leu Asp Phe Ser 405 410 415 Asn Trp Arg Lys Glu Leu Asp Glu Gln Lys Val Lys Tyr Pro Leu Ser 420 425 430 Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val 435 440 445 Leu Asp Glu Leu Thr Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly 450 455 460 Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Asn Lys Pro Arg 465 470 475 480 Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro 485 490 495 Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val Asp 500 505 510 Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Ser Val Gln Glu Leu Ala Thr 515 520 525 Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln 530 535 540 His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn 545 550 555 560 Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Lys Glu Ser Glu Ile Phe 565 570 575 Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg 580 585 590 Val Thr Arg Lys Ala Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp 595 600 605 Th r Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His 610 615 620 Val Leu Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly Gly Phe Met Asp Val Ile Thr 625 630 635 640 Glu Gly Asp Gly Arg Met Lys Tyr 645 <210> 20 <211> 640 <212> PRT <213> Lolium multiflorum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Ryegrass acetohydroxyacid synthase large subunit (LmAHASL) <400> 20 Met Ala Thr Ala Thr Ser Thr Ala Val Ala Phe Ser Gly Ala Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Pro Lys Pro Arg Thr Leu Pro Arg His Leu Leu Pro Ser Ser 20 25 30 Arg Arg Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Val Ser Pro Ser 35 40 45 Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser 50 55 60 Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys 65 70 75 80 Gly Ile Ser Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile 85 90 95 His Gln Ala Leu Thr Ser Ser Pro Leu Ile Thr Asn His Leu Phe Arg 100 105 110 His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser 115 120 125 Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn 130 135 140 Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val 145 150 155 160 Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe 165 170 175 Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn 180 185 190 Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala 195 200 205 Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile 210 215 220 Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Ala Pro 225 230 235 240 Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr 245 250 255 Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Glu Arg Arg Pro 260 265 270 Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Ala Ser Gly Glu Asp Val Arg 275 280 285 Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly 290 295 300 Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly 305 310 315 320 Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu 325 330 335 Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile 340 345 350 Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro 355 360 365 Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp 370 375 380 Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Val Leu Thr Gly Ser Lys 385 390 395 400 Cys Asp Lys Ser Phe Asp Phe Ala Ser Trp His Asp Glu Leu Glu Gln 405 410 415 Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile 420 425 430 Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu 435 440 445 Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln 450 455 460 Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Val Leu Ser Ser Ala Gly Leu 465 470 475 480 Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Thr Ala Val Ala 485 490 495 Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu 500 505 510 Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val 515 520 525 Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp 530 535 540 Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn 545 550 555 560 Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys 565 570 575 Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Arg Ser Glu Val Arg 580 585 590 Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp 595 600 605 Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly 610 615 620 Gly Ala Phe Lys Asp Ile Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Ile Ser Tyr 625 630 635 640 <210> 21 <211> 607 <212> PRT <213> Triticum aestivum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Wheat A genome acetohydroxyacid synthase large subunit (TaAHASL1A), partial <400> 21 Leu Pro Ala Arg Val Val Arg Cys Cys Ala Ala Ser Pro Ala Ala Thr 1 5 10 15 Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu 20 25 30 Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly 35 40 45 Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His 50 55 60 Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His 65 70 75 80 Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly 8 5 90 95 Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu 100 105 110 Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala 115 120 125 Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln 130 135 140 Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr 145 150 155 160 Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe 165 170 175 Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro 180 185 190 Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Ile Trp Asp Thr Pro Met 195 200 205 Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu 210 215 220 Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile 225 230 235 240 Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg 245 250 255 Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu 260 265 270 Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met 275 280 285 His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu 290 295 300 Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu 305 310 315 320 Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala 325 330 335 Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val 340 345 350 Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala 355 360 365 Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln 370 375 380 Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro 385 390 395 400 Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala 405 410 415 Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr 420 425 430 Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly 435 440 445 Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn 450 455 460 Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met 465 470 475 480 Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys 485 490 495 Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu 500 505 510 Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro 515 520 525 Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly 530 535 540 Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala 545 550 555 560 Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile 565 570 575 Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly 580 585 590 Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Thr Ser Tyr 595 600 605 <210> 22 <211> 607 <212> PRT <213> Triticum aestivum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Wheat B genome acetohydroxyacid synthase large subunit (TaAHASL1B), partial <400> 22 Leu Pro Ala Arg Ile Val Arg Cys Cys Ala Ala Ser Pro Ala Ala Thr 1 5 10 15 Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu 20 25 30 Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly 35 40 45 Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His 50 55 60 Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His 65 70 75 80 Gl u Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly 85 90 95 Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu 100 105 110 Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala 115 120 125 Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln 130 135 140 Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr 145 150 155 160 Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe 165 170 175 Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro 180 185 190 Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Thr Pro Met 195 200 205 Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu 210 215 220 Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile 225 230 235 240 Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg 245 250 255 Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu 260 265 270 Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met 275 280 285 His Gly T hr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu 290 295 300 Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu 305 310 315 320 Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala 325 330 335 Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val 340 345 350 Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala 355 360 365 Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln 370 375 380 Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro 385 390 395 400 Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala 405 410 415 Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr 420 425 430 Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly 435 440 445 Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn 450 455 460 Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met 465 470 475 480 Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys 485 490 495 Val Met I le Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu 500 505 510 Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro 515 520 525 Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly 530 535 540 Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala 545 550 555 560 Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile 565 570 575 Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly 580 585 590 Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Thr Ser Tyr 595 600 605 <210> 23 <211> 607 <212> PRT <213> Triticum aestivum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Wheat D genome acetohydroxyacid synthase large subunit (TaAHASL1D), partial <400> 23 Leu Pro Ala Arg Ile Val Arg Cys Cys Ala Ala Ser Pro Ala Ala Thr 1 5 10 15 Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu 20 25 30 Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly 35 40 45 Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His 50 55 60 Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His 65 70 75 80 Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly 85 90 95 Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu 100 105 110 Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala 115 120 125 Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln 130 135 140 Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr 145 150 155 160 Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe 165 170 175 Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro 180 185 190 Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Thr Pro Met 195 200 205 Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu 210 215 220 Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile 225 230 235 240 Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg 245 250 255 Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu 260 265 270 Gly Asn Phe Pro Ser As p Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met 275 280 285 His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu 290 295 300 Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu 305 310 315 320 Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala 325 330 335 Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val 340 345 350 Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Asp Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala 355 360 365 Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln 370 375 380 Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro 385 390 395 400 Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala 405 410 415 Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr 420 425 430 Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly 435 440 445 Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn 450 455 460 Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met 465 470 475 480 Asn Ile Gln Glu Leu Al a Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys 485 490 495 Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu 500 505 510 Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro 515 520 525 Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly 530 535 540 Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala 545 550 555 560 Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile 565 570 575 Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly 580 585 590 Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Thr Ser Tyr 595 600 605 <210> 24 <211> 659 <212> PRT <213> Gossypium hirsutum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Cotton acetohydroxyacid synthase large subunit (GHAHASA5) <400> 24 Met Ala Ala Ala Thr Ala Asn Ser Ala Leu Pro Lys Leu Ser Thr Leu 1 5 10 15 Thr Ser Ser Phe Lys Ser Ser Ile Pro Ile Ser Lys Ser Ser Leu Pro 20 25 30 Phe Ser Thr Thr Pro Gln Lys Pro Thr Pro Tyr Arg Ser Phe Asp Val 35 40 45 Ser Cys Ser Leu Ser His Ala Ser Ser Asn Pr o Arg Ser Ala Ala Thr 50 55 60 Ser Val Thr Pro Lys Asn Ala Pro Pro His Asp Phe Ile Ser Arg Tyr 65 70 75 80 Ala Asp Asp Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu 85 90 95 Val Arg Glu Gly Val Lys Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser 100 105 110 Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Lys Ile Ile Arg Asn Val 115 120 125 Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala 130 135 140 Arg Ser Ser Gly Ile Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly 145 150 155 160 Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Ile 165 170 175 Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr 180 185 190 Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr 195 200 205 Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val 210 215 220 Ser Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu 225 230 235 240 Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Val Pro Lys Trp 245 250 255 Asn His Ser Leu Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser Arg Leu Pro Lys Ala 260 265 270 Pro Gly Glu Ala His Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Val Ser Glu Ser 275 280 285 Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Glu 290 295 300 Glu Leu Lys Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr 305 310 315 320 Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Ile Ser Asp Asp Leu Ser Leu Gln 325 330 335 Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys 340 345 350 Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr 355 360 365 Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp 370 375 380 Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Val 385 390 395 400 Cys Ser Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Ile Asn Lys Ile Leu Glu 405 410 415 Thr Lys Val Ala Lys Leu Asn Leu Asp Tyr Ser Glu Trp Arg Gln Glu 420 425 430 Leu Asn Glu Gln Lys Leu Lys Phe Pro Leu Ser Tyr Lys Thr Phe Gly 435 440 445 Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr 450 455 460 Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp 465 470 475 480 Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser 485 490 495 Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala 500 505 510 Ala Val Ala Asn Pro Glu Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly 515 520 525 Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn 530 535 540 Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val 545 550 555 560 Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr 565 570 575 Leu Gly Asp Pro Ser Asn Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys 580 585 590 Phe Ala Glu Ala Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu 595 600 605 Asp Leu Lys Ala Ala Met Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr 610 615 620 Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile 625 630 635 640 Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg 645 650 655 Thr Gln Tyr <210> 25 <211> 659 <212> PRT <213> Gossypium hirsutum <220> <221> MISC_FEATURE <223> Cotton acetohydroxyacid synthase la rge subunit (GHAHASA19) <400> 25 Met Ala Ala Ala Thr Ser Asn Ser Ala Leu Pro Lys Leu Ser Thr Leu 1 5 10 15 Thr Ser Ser Phe Lys Ser Ser Ile Pro Ile Ser Lys Ser Ser Leu Pro 20 25 30 Phe Ser Thr Thr Pro Gln Lys Pro Thr Pro Tyr Arg Ser Phe Asp Val 35 40 45 Ser Cys Ser Leu Ser His Ala Ser Ser Asn Pro Arg Asn Pro Ala Ala 50 55 60 Ser Val Thr Gln Lys Thr Ala Pro Pro His Tyr Phe Ile Ser Arg Tyr 65 70 75 80 Ala Asp Asp Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu 85 90 95 Glu Arg Glu Gly Val Lys Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser 100 105 110 Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Lys Ile Ile Arg Asn Val 115 120 125 Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala 130 135 140 Arg Ser Ser Gly Ile Ser Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly 145 150 155 160 Arg Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Ile 165 170 175 Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr 180 185 190 Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr 1 95 200 205 Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val 210 215 220 Ser Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu 225 230 235 240 Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Val Pro Lys Trp 245 250 255 Asn His Ser Leu Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser Arg Leu Pro Lys Ala 260 265 270 Pro Ala Glu Ala His Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Val Ser Glu Ser 275 280 285 Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Glu 290 295 300 Glu Leu Lys Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr 305 310 315 320 Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Ile Ser Asp Glu Leu Ser Leu Gln 325 330 335 Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys 340 345 350 Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr 355 360 365 Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp 370 375 380 Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Met Ser Val 385 390 395 400 Cys Ser Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Ile Asn Lys Ile Leu Glu 4 05 410 415 Thr Thr Gly Ala Lys Leu Asn Leu Asp Tyr Ser Glu Trp Arg Gln Glu 420 425 430 Leu Asn Glu Gln Lys Leu Lys Phe Pro Leu Ser Tyr Lys Thr Phe Gly 435 440 445 Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr 450 455 460 Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp 465 470 475 480 Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser 485 490 495 Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala 500 505 510 Ala Val Ala Asn Pro Glu Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly 515 520 525 Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn 530 535 540 Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val 545 550 555 560 Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr 565 570 575 Leu Gly Asp Pro Ser Asn Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys 580 585 590 Phe Ala Glu Ala Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu 595 600 605 Asp Leu Lys Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr 610 6 15 620 Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile 625 630 635 640 Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg 645 650 655 Thr Gln Tyr <210> 26 <211> 562 <212> PRT <213> Escherichia coli <220> <221> MISC_FEATURE <223> E. coli acetohydroxyacid synthase large subunit I (IlvB) <400> 26 Met Ala Ser Ser Gly Thr Thr Ser Thr Arg Lys Arg Phe Thr Gly Ala 1 5 10 15 Glu Phe Ile Val His Phe Leu Glu Gln Gln Gly Ile Lys Ile Val Thr 20 25 30 Gly Ile Pro Gly Gly Ser Ile Leu Pro Val Tyr Asp Ala Leu Ser Gln 35 40 45 Ser Thr Gln Ile Arg His Ile Leu Ala Arg His Glu Gln Gly Ala Gly 50 55 60 Phe Ile Ala Gln Gly Met Ala Arg Thr Asp Gly Lys Pro Ala Val Cys 65 70 75 80 Met Ala Cys Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Thr Ala Ile Ala 85 90 95 Asp Ala Arg Leu Asp Ser Ile Pro Leu Ile Cys Ile Thr Gly Gln Val 100 105 110 Pro Ala Ser Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Val Asp Thr Tyr 115 120 125 Gly Ile Ser Ile Pro Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Arg His Ile 130 135 140 Glu Gl u Leu Pro Gln Val Met Ser Asp Ala Phe Arg Ile Ala Gln Ser 145 150 155 160 Gly Arg Pro Gly Pro Val Trp Ile Asp Ile Pro Lys Asp Val Gln Thr 165 170 175 Ala Val Phe Glu Ile Glu Thr Gln Pro Ala Met Ala Glu Lys Ala Ala 180 185 190 Ala Pro Ala Phe Ser Glu Glu Ser Ile Arg Asp Ala Ala Ala Met Ile 195 200 205 Asn Ala Ala Lys Arg Pro Val Leu Tyr Leu Gly Gly Gly Val Ile Asn 210 215 220 Ala Pro Ala Arg Val Arg Glu Leu Ala Glu Lys Ala Gln Leu Pro Thr 225 230 235 240 Thr Met Thr Leu Met Ala Leu Gly Met Leu Pro Lys Ala His Pro Leu 245 250 255 Ser Leu Gly Met Leu Gly Met His Gly Val Arg Ser Thr Asn Tyr Ile 260 265 270 Leu Gln Glu Ala Asp Leu Leu Ile Val Leu Gly Ala Arg Phe Asp Asp 275 280 285 Arg Ala Ile Gly Lys Thr Glu Gln Phe Cys Pro Asn Ala Lys Ile Ile 290 295 300 His Val Asp Ile Asp Arg Ala Glu Leu Gly Lys Ile Lys Gln Pro His 305 310 315 320 Val Ala Ile Gln Ala Asp Val Asp Asp Val Leu Ala Gln Leu Ile Pro 325 330 335 Leu Val Glu Ala Gln Pro Arg Ala Glu Trp His Gln Leu Val Ala Asp 340 345 350 Leu Gl n Arg Glu Phe Pro Cys Pro Ile Pro Lys Ala Cys Asp Pro Leu 355 360 365 Ser His Tyr Gly Leu Ile Asn Ala Val Ala Ala Cys Val Asp Asp Asn 370 375 380 Ala Ile Ile Thr Thr Asp Val Gly Gln His Gln Met Trp Thr Ala Gln 385 390 395 400 Ala Tyr Pro Leu Asn Arg Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu 405 410 415 Gly Thr Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Leu Ala 420 425 430 Asn Pro Asp Arg Lys Val Leu Cys Phe Ser Gly Asp Gly Ser Leu Met 435 440 445 Met Asn Ile Gln Glu Met Ala Thr Ala Ser Glu Asn Gln Leu Asp Val 450 455 460 Lys Ile Ile Leu Met Asn Asn Glu Ala Leu Gly Leu Val His Gln Gln 465 470 475 480 Gln Ser Leu Phe Tyr Glu Gln Gly Val Phe Ala Ala Thr Tyr Pro Gly 485 490 495 Lys Ile Asn Phe Met Gln Ile Ala Ala Gly Phe Gly Leu Glu Thr Cys 500 505 510 Asp Leu Asn Asn Glu Ala Asp Pro Gln Ala Ser Leu Gln Glu Ile Ile 515 520 525 Asn Arg Pro Gly Pro Ala Leu Ile His Val Arg Ile Asp Ala Glu Glu 530 535 540 Lys Val Tyr Pro Met Val Pro Pro Gly Ala Ala Asn Thr Glu Met Val 545 550 555 560 Gly Gl u <210> 27 <211> 548 <212> PRT <213> Escherichia coli <220> <221> MISC_FEATURE <223> E. coli acetohydroxyacid synthase large subunit II (IlvG) <400> 27 Met Asn Gly Ala Gln Trp Val Val His Ala Leu Arg Ala Gln Gly Val 1 5 10 15 Asn Thr Val Phe Gly Tyr Pro Gly Gly Ala Ile Met Pro Val Tyr Asp 20 25 30 Ala Leu Tyr Asp Gly Gly Val Glu His Leu Leu Cys Arg His Glu Gln 35 40 45 Gly Ala Ala Met Ala Ala Ile Gly Tyr Ala Arg Ala Thr Gly Lys Thr 50 55 60 Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Ile Thr 65 70 75 80 Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Val Val Ala Ile Thr 85 90 95 Gly Gln Val Ser Ala Pro Phe Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Val 100 105 110 Asp Val Leu Gly Leu Ser Leu Ala Cys Thr Lys His Ser Phe Leu Val 115 120 125 Gln Ser Leu Glu Glu Leu Pro Arg Ile Met Ala Glu Ala Phe Asp Val 130 135 140 Ala Cys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp 145 150 155 160 Ile Gln Leu Ala Ser Gly Asp Leu Glu Pro Trp Phe Thr Thr Val Glu 165 170 175 Asn Glu Val Thr Phe Pr o His Ala Glu Val Glu Gln Ala Arg Gln Met 180 185 190 Leu Ala Lys Ala Gln Lys Pro Met Leu Tyr Val Gly Gly Gly Val Gly 195 200 205 Met Ala Gln Ala Val Pro Ala Leu Arg Glu Phe Leu Ala Ala Thr Lys 210 215 220 Met Pro Ala Thr Cys Thr Leu Lys Gly Leu Gly Ala Val Glu Ala Asp 225 230 235 240 Tyr Pro Tyr Tyr Leu Gly Met Leu Gly Met His Gly Thr Lys Ala Ala 245 250 255 Asn Phe Ala Val Gln Glu Cys Asp Leu Leu Ile Ala Val Gly Ala Arg 260 265 270 Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Asn Thr Phe Ala Pro His Ala 275 280 285 Ser Val Ile His Met Asp Ile Asp Pro Ala Glu Met Asn Lys Leu Arg 290 295 300 Gln Ala His Val Ala Leu Gln Gly Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala 305 310 315 320 Leu Gln Gln Pro Leu Asn Gln Tyr Asp Trp Gln Gln His Cys Ala Gln 325 330 335 Leu Arg Asp Glu His Ser Trp Arg Tyr Asp His Pro Gly Asp Ala Ile 340 345 350 Tyr Ala Pro Leu Leu Leu Lys Gln Leu Ser Asp Arg Lys Pro Ala Asp 355 360 365 Cys Val Val Thr Thr Asp Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln 370 375 380 His Ile Ala His Thr Arg Pr o Glu Asn Phe Ile Thr Ser Ser Gly Leu 385 390 395 400 Gly Thr Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Val Gly Ala Gln Val Ala 405 410 415 Arg Pro Asn Asp Thr Val Val Cys Ile Ser Gly Asp Gly Ser Phe Met 420 425 430 Met Asn Val Gln Glu Leu Gly Thr Val Lys Arg Lys Gln Leu Pro Leu 435 440 445 Lys Ile Val Leu Leu Asp Asn Gln Arg Leu Gly Met Val Arg Gln Trp 450 455 460 Gln Gln Leu Phe Phe Gln Glu Arg Tyr Ser Glu Thr Thr Leu Thr Asp 465 470 475 480 Asn Pro Asp Phe Leu Met Leu Ala Ser Ala Phe Gly Ile His Gly Gln 485 490 495 His Ile Thr Arg Lys Asp Gln Val Glu Ala Ala Leu Asp Thr Met Leu 500 505 510 Asn Ser Asp Gly Pro Tyr Leu Leu His Val Ser Ile Asp Glu Leu Glu 515 520 525 Asn Val Trp Pro Leu Val Pro Pro Gly Ala Ser Asn Ser Glu Met Leu 530 535 540 Glu Lys Leu Ser 545 <210> 28 <211> 574 <212> PRT <213> Escherichia coli <220> <221> MISC_FEATURE <223> E. coli acetohydroxyacid synthase large subunit III (IlvI) <400> 28 Met Glu Met Leu Ser Gly Ala Glu Met Val Val Arg Ser Leu Ile Asp 1 5 10 15 Gln Gly Val L ys Gln Val Phe Gly Tyr Pro Gly Gly Ala Val Leu Asp 20 25 30 Ile Tyr Asp Ala Leu His Thr Val Gly Gly Ile Asp His Val Leu Val 35 40 45 Arg His Glu Gln Ala Ala Val His Met Ala Asp Gly Leu Ala Arg Ala 50 55 60 Thr Gly Glu Val Gly Val Val Leu Val Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr 65 70 75 80 Asn Ala Ile Thr Gly Ile Ala Thr Ala Tyr Met Asp Ser Ile Pro Leu 85 90 95 Val Val Leu Ser Gly Gln Val Ala Thr Ser Leu Ile Gly Tyr Asp Ala 100 105 110 Phe Gln Glu Cys Asp Met Val Gly Ile Ser Arg Pro Val Val Lys His 115 120 125 Ser Phe Leu Val Lys Gln Thr Glu Asp Ile Pro Gln Val Leu Lys Lys 130 135 140 Ala Phe Trp Leu Ala Ala Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Val Val Asp 145 150 155 160 Leu Pro Lys Asp Ile Leu Asn Pro Ala Asn Lys Leu Pro Tyr Val Trp 165 170 175 Pro Glu Ser Val Ser Met Arg Ser Tyr Asn Pro Thr Thr Thr Gly His 180 185 190 Lys Gly Gln Ile Lys Arg Ala Leu Gln Thr Leu Val Ala Ala Lys Lys 195 200 205 Pro Val Val Tyr Val Gly Gly Gly Ala Ile Thr Ala Gly Cys His Gln 210 215 220 Gln Leu Lys Glu Thr Val Glu Ala L eu Asn Leu Pro Val Val Cys Ser 225 230 235 240 Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Ala Thr His Arg Gln Ala Leu Gly 245 250 255 Met Leu Gly Met His Gly Thr Tyr Glu Ala Asn Met Thr Met His Asn 260 265 270 Ala Asp Val Ile Phe Ala Val Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Thr Thr 275 280 285 Asn Asn Leu Ala Lys Tyr Cys Pro Asn Ala Thr Val Leu His Ile Asp 290 295 300 Ile Asp Pro Thr Ser Ile Ser Lys Thr Val Thr Ala Asp Ile Pro Ile 305 310 315 320 Val Gly Asp Ala Arg Gln Val Leu Glu Gln Met Leu Glu Leu Leu Ser 325 330 335 Gln Glu Ser Ala His Gln Pro Leu Asp Glu Ile Arg Asp Trp Trp Gln 340 345 350 Gln Ile Glu Gln Trp Arg Ala Arg Gln Cys Leu Lys Tyr Asp Thr His 355 360 365 Ser Glu Lys Ile Lys Pro Gln Ala Val Ile Glu Thr Leu Trp Arg Leu 370 375 380 Thr Lys Gly Asp Ala Tyr Val Thr Ser Asp Val Gly Gln His Gln Met 385 390 395 400 Phe Ala Ala Leu Tyr Tyr Pro Phe Asp Lys Pro Arg Arg Trp Ile Asn 405 410 415 Ser Gly Gly Leu Gly Thr Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Leu Gly 420 425 430 Val Lys Met Ala Leu Pro Glu Glu T hr Val Val Cys Val Thr Gly Asp 435 440 445 Gly Ser Ile Gln Met Asn Ile Gln Glu Leu Ser Thr Ala Leu Gln Tyr 450 455 460 Glu Leu Pro Val Leu Val Val Asn Leu Asn Asn Arg Tyr Leu Gly Met 465 470 475 480 Val Lys Gln Trp Gln Asp Met Ile Tyr Ser Gly Arg His Ser Gln Ser 485 490 495 Tyr Met Gln Ser Leu Pro Asp Phe Val Arg Leu Ala Glu Ala Tyr Gly 500 505 510 His Val Gly Ile Gln Ile Ser His Pro His Glu Leu Glu Ser Lys Leu 515 520 525 Ser Glu Ala Leu Glu Gln Val Arg Asn Asn Arg Leu Val Phe Val Asp 530 535 540 Val Thr Val Asp Gly Ser Glu His Val Tyr Pro Met Gln Ile Arg Gly 545 550 555 560 Gly Gly Met Asp Glu Met Trp Leu Ser Lys Thr Glu Arg Thr 565 570 <210> 29 <211> 1917 <212> DNA <213> Zea mays <220> <221> misc_feature <223> Maize acetohydroxyacid synthase large subunit 2 (ZmAHASL2) coding sequence, S621N allele. <400> 29 atggccaccg ccgccgccgc gtctaccgcg ctcactggcg ccactaccgc tgcgcccaag 60 gcgaggcgcc gggcgcacct cctggccacc cgccgcgccc tcgccgcgcc catcaggtgc 120 tcagcggcgt cacccgccat gccgatggct cccccggcca ccccgctccg gccgtggggc 180 cccaccgatc cccgcaaggg cgccgacatc ctcgtcgagt ccctcgagcg ctgcggcgtc 240 cgcgacgtct tcgcctaccc cggcggcgcg tccatggaga tccaccaggc actcacccgc 300 tcccccgtca tcgccaacca cctcttccgc cacgagcaag gggaggcctt tgcggcctcc 360 ggctacgcgc gctcctcggg ccgcgtcggc gtctgcatcg ccacctccgg ccccggcgcc 420 accaaccttg tctccgcgct cgccgacgcg ctgctcgatt ccgtccccat ggtcgccatc 480 acgggacagg tgccgcgacg catgattggc accgacgcct tccaggagac gcccatcgtc 540 gaggtcaccc gctccatcac caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc 600 cgcgtcgtgc aggaggcttt cttcctcgcc tcctctggtc gaccggggcc ggtgcttgtc 660 gacatcccca aggacatcca gcagcagatg gcggtgcctg tctgggacaa gcccatgagt 720 ctgcctgggt acattgcgcg ccttcccaag ccccctgcga ctgagttgct tgagcaggtg 780 ctgcgtcttg ttggtgaatc ccggcgccct gttctttatg ttggcggtgg ctgcgcagca 840 tctggtgagg a gttgcgacg ctttgtggag ctgactggaa tcccggtcac aactactctt 900 atgggcctcg gcaacttccc cagcgacgac ccactgtctc tgcgcatgct aggtatgcat 960 ggcacggtgt atgcaaatta tgcagtggat aaggccgatc tgttgcttgc acttggtgtg 1020 cggtttgatg atcgtgtgac agggaagatt gaggcttttg caagcagggc taagattgtg 1080 cacgttgata ttgatccggc tgagattggc aagaacaagc agccacatgt gtccatctgt 1140 gcagatgtta agcttgcttt gcagggcatg aatgctcttc ttgaaggaag cacatcaaag 1200 aagagctttg actttggctc atggaacgat gagttggatc agcagaagag ggaattcccc 1260 cttgggtata aaacatctaa tgaggagatc cagccacaat atgctattca ggttcttgat 1320 gagctgacga aaggcgaggc catcatcggc acaggtgttg ggcagcacca gatgtgggcg 1380 gcacagtact acacttacaa gcggccaagg cagtggttgt cttcagctgg tcttggggct 1440 atgggatttg gtttgccggc tgctgctggt gcttctgtgg ccaacccagg tgttactgtt 1500 gttgacatcg atggagatgg tagctttctc atgaacgttc aggagctagc tatgatccga 1560 attgagaacc tcccggtgaa ggtctttgtg ctaaacaacc agcacctggg gatggtggtg 1620 cagtgggagg acaggttcta taaggccaac agagcgcaca catacttggg aaacccagag 1680 aatgaaagtg agatatatc c agatttcgtg acgatcgcca aagggttcaa cattccagcg 1740 gtccgtgtga caaagaagaa cgaagtccgc gcagcgataa agaagatgct cgagactcca 1800 gggccgtacc tcttggatat aatcgtccca caccaggagc atgtgttgcc tatgatccct 1860 aatggtgggg ctttcaagga tatgatcctg gatggtgatg gcaggactgt gtactga 1917 <210> 30 <211> 2013 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <223> Arabidopsis acetohydroxyacid synthase large subunit (AtAHASL) coding sequence, S653N mutant allele. <400> 30 atggcggcgg caacaacaac aacaacaaca tcttcttcga tctccttctc caccaaacca 60 tctccttcct cctccaaatc accattacca atctccagat tctccctccc attctcccta 120 aaccccaaca aatcatcctc ctcctcccgc cgccgcggta tcaaatccag ctctccctcc 180 tccatctccg ccgtgctcaa cacaaccacc aatgtcacaa ccactccctc tccaaccaaa 240 cctaccaaac ccgaaacatt catctcccga ttcgctccag atcaaccccg caaaggcgct 300 gatatcctcg tcgaagcttt agaacgtcaa ggcgtagaaa ccgtattcgc ttaccctgga 360 ggtgcatcaa tggagattca ccaagcctta acccgctctt cctcaatccg taacgtcctt 420 cctcgtcacg aacaaggagg tgtattcgca gcagaaggat acgctcgatc ctcaggtaaa 480 ccaggtatct gtatagccac ttcaggtccc ggagctacaa atctcgttag cggattagcc 540 gatgcgttgt tagatagtgt tcctcttgta gcaatcacag gacaagtccc tcgtcgtatg 600 attggtacag atgcgtttca agagactccg attgttgagg taacgcgttc gattacgaag 660 cataactatc ttgtgatgga tgttgaagat atccctagga ttattgagga agctttcttt 720 ttagctactt ctggtagacc tggacctgtt ttggttgatg ttcctaaaga tattcaacaa 780 cagcttgcga ttcctaattg ggaacaggct atgagattac ctggttatat gtctaggatg 840 cctaaacctc c ggaagattc tcatttggag cagattgtta ggttgatttc tgagtctaag 900 aagcctgtgt tgtatgttgg tggtggttgt ttgaattcta gcgatgaatt gggtaggttt 960 gttgagctta cggggatccc tgttgcgagt acgttgatgg ggctgggatc ttatccttgt 1020 gatgatgagt tgtcgttaca tatgcttgga atgcatggga ctgtgtatgc aaattacgct 1080 gtggagcata gtgatttgtt gttggcgttt ggggtaaggt ttgatgatcg tgtcacgggt 1140 aagcttgagg cttttgctag tagggctaag attgttcata ttgatattga ctcggctgag 1200 attgggaaga ataagactcc tcatgtgtct gtgtgtggtg atgttaagct ggctttgcaa 1260 gggatgaata aggttcttga gaaccgagcg gaggagctta agcttgattt tggagtttgg 1320 aggaatgagt tgaacgtaca gaaacagaag tttccgttga gctttaagac gtttggggaa 1380 gctattcctc cacagtatgc gattaaggtc cttgatgagt tgactgatgg aaaagccata 1440 ataagtactg gtgtcgggca acatcaaatg tgggcggcgc agttctacaa ttacaagaaa 1500 ccaaggcagt ggctatcatc aggaggcctt ggagctatgg gatttggact tcctgctgcg 1560 attggagcgt ctgttgctaa ccctgatgcg atagttgtgg atattgacgg agatggaagc 1620 tttataatga atgtgcaaga gctagccact attcgtgtag agaatcttcc agtgaaggta 1680 cttttattaa acaaccagc a tcttggcatg gttatgcaat gggaagatcg gttctacaaa 1740 gctaaccgag ctcacacatt tctcggggat ccggctcagg aggacgagat attcccgaac 1800 atgttgctgt ttgcagcagc ttgcgggatt ccagcggcga gggtgacaaa gaaagcagat 1860 ctccgagaag ctattcagac aatgctggat acaccaggac cttacctgtt ggatgtgatt 1920 tgtccgcacc aagaacatgt gttgccgatg atcccgaatg gtggcacttt caacgatgtc 1980 ataacggaag gagatggccg gattaaatac tga 2013 <210> 31 <211> 2013 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <223> Arabidopsis acetohydroxyacid synthase large subunit (AtAHASL) coding sequence, wild type allele. <400> 31 atggcggcgg caacaacaac aacaacaaca tcttcttcga tctccttctc caccaaacca 60 tctccttcct cctccaaatc accattacca atctccagat tctccctccc attctcccta 120 aaccccaaca aatcatcctc ctcctcccgc cgccgcggta tcaaatccag ctctccctcc 180 tccatctccg ccgtgctcaa cacaaccacc aatgtcacaa ccactccctc tccaaccaaa 240 cctaccaaac ccgaaacatt catctcccga ttcgctccag atcaaccccg caaaggcgct 300 gatatcctcg tcgaagcttt agaacgtcaa ggcgtagaaa ccgtattcgc ttaccctgga 360 ggtgcatcaa tggagattca ccaagcctta acccgctctt cctcaatccg taacgtcctt 420 cctcgtcacg aacaaggagg tgtattcgca gcagaaggat acgctcgatc ctcaggtaaa 480 ccaggtatct gtatagccac ttcaggtccc ggagctacaa atctcgttag cggattagcc 540 gatgcgttgt tagatagtgt tcctcttgta gcaatcacag gacaagtccc tcgtcgtatg 600 attggtacag atgcgtttca agagactccg attgttgagg taacgcgttc gattacgaag 660 cataactatc ttgtgatgga tgttgaagat atccctagga ttattgagga agctttcttt 720 ttagctactt ctggtagacc tggacctgtt ttggttgatg ttcctaaaga tattcaacaa 780 cagcttgcga ttcctaattg ggaacaggct atgagattac ctggttatat gtctaggatg 840 cctaaacctc c ggaagattc tcatttggag cagattgtta ggttgatttc tgagtctaag 900 aagcctgtgt tgtatgttgg tggtggttgt ttgaattcta gcgatgaatt gggtaggttt 960 gttgagctta cggggatccc tgttgcgagt acgttgatgg ggctgggatc ttatccttgt 1020 gatgatgagt tgtcgttaca tatgcttgga atgcatggga ctgtgtatgc aaattacgct 1080 gtggagcata gtgatttgtt gttggcgttt ggggtaaggt ttgatgatcg tgtcacgggt 1140 aagcttgagg cttttgctag tagggctaag attgttcata ttgatattga ctcggctgag 1200 attgggaaga ataagactcc tcatgtgtct gtgtgtggtg atgttaagct ggctttgcaa 1260 gggatgaata aggttcttga gaaccgagcg gaggagctta agcttgattt tggagtttgg 1320 aggaatgagt tgaacgtaca gaaacagaag tttccgttga gctttaagac gtttggggaa 1380 gctattcctc cacagtatgc gattaaggtc cttgatgagt tgactgatgg aaaagccata 1440 ataagtactg gtgtcgggca acatcaaatg tgggcggcgc agttctacaa ttacaagaaa 1500 ccaaggcagt ggctatcatc aggaggcctt ggagctatgg gatttggact tcctgctgcg 1560 attggagcgt ctgttgctaa ccctgatgcg atagttgtgg atattgacgg agatggaagc 1620 tttataatga atgtgcaaga gctagccact attcgtgtag agaatcttcc agtgaaggta 1680 cttttattaa acaaccagc a tcttggcatg gttatgcaat gggaagatcg gttctacaaa 1740 gctaaccgag ctcacacatt tctcggggat ccggctcagg aggacgagat attcccgaac 1800 atgttgctgt ttgcagcagc ttgcgggatt ccagcggcga gggtgacaaa gaaagcagat 1860 ctccgagaag ctattcagac aatgctggat acaccaggac cttacctgtt ggatgtgatt 1920 tgtccgcacc aagaacatgt gttgccgatg atcccgagtg gtggcacttt caacgatgtc 1980 ataacggaag gagatggccg gattaaatac tga 2013 <210> 32 <211> 1917 <212> DNA <213> Zea mays <220> <221> misc_feature <223> Maize acetohydroxyacid synthase large subunit 2 (ZmAHASL2) coding sequence, wild type allele. <400> 32 atggccaccg ccgccgccgc gtctaccgcg ctcactggcg ccactaccgc tgcgcccaag 60 gcgaggcgcc gggcgcacct cctggccacc cgccgcgccc tcgccgcgcc catcaggtgc 120 tcagcggcgt cacccgccat gccgatggct cccccggcca ccccgctccg gccgtggggc 180 cccaccgatc cccgcaaggg cgccgacatc ctcgtcgagt ccctcgagcg ctgcggcgtc 240 cgcgacgtct tcgcctaccc cggcggcgcg tccatggaga tccaccaggc actcacccgc 300 tcccccgtca tcgccaacca cctcttccgc cacgagcaag gggaggcctt tgcggcctcc 360 ggctacgcgc gctcctcggg ccgcgtcggc gtctgcatcg ccacctccgg ccccggcgcc 420 accaaccttg tctccgcgct cgccgacgcg ctgctcgatt ccgtccccat ggtcgccatc 480 acgggacagg tgccgcgacg catgattggc accgacgcct tccaggagac gcccatcgtc 540 gaggtcaccc gctccatcac caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc 600 cgcgtcgtgc aggaggcttt cttcctcgcc tcctctggtc gaccggggcc ggtgcttgtc 660 gacatcccca aggacatcca gcagcagatg gcggtgcctg tctgggacaa gcccatgagt 720 ctgcctgggt acattgcgcg ccttcccaag ccccctgcga ctgagttgct tgagcaggtg 780 ctgcgtcttg ttggtgaatc ccggcgccct gttctttatg ttggcggtgg ctgcgcagca 840 tctggtgagg a gttgcgacg ctttgtggag ctgactggaa tcccggtcac aactactctt 900 atgggcctcg gcaacttccc cagcgacgac ccactgtctc tgcgcatgct aggtatgcat 960 ggcacggtgt atgcaaatta tgcagtggat aaggccgatc tgttgcttgc acttggtgtg 1020 cggtttgatg atcgtgtgac agggaagatt gaggcttttg caagcagggc taagattgtg 1080 cacgttgata ttgatccggc tgagattggc aagaacaagc agccacatgt gtccatctgt 1140 gcagatgtta agcttgcttt gcagggcatg aatgctcttc ttgaaggaag cacatcaaag 1200 aagagctttg actttggctc atggaacgat gagttggatc agcagaagag ggaattcccc 1260 cttgggtata aaacatctaa tgaggagatc cagccacaat atgctattca ggttcttgat 1320 gagctgacga aaggcgaggc catcatcggc acaggtgttg ggcagcacca gatgtgggcg 1380 gcacagtact acacttacaa gcggccaagg cagtggttgt cttcagctgg tcttggggct 1440 atgggatttg gtttgccggc tgctgctggt gcttctgtgg ccaacccagg tgttactgtt 1500 gttgacatcg atggagatgg tagctttctc atgaacgttc aggagctagc tatgatccga 1560 attgagaacc tcccggtgaa ggtctttgtg ctaaacaacc agcacctggg gatggtggtg 1620 cagtgggagg acaggttcta taaggccaac agagcgcaca catacttggg aaacccagag 1680 aatgaaagtg agatatatc c agatttcgtg acgatcgcca aagggttcaa cattccagcg 1740 gtccgtgtga caaagaagaa cgaagtccgc gcagcgataa agaagatgct cgagactcca 1800 gggccgtacc tcttggatat aatcgtccca caccaggagc atgtgttgcc tatgatccct 1860 agtggtgggg ctttcaagga tatgatcctg gatggtgatg gcaggactgt gtactga 1917 <210> 33 <211> 3234 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <223> Arabidopsis acetohydroxyacid synthase large subunit (AtAHASL) genomic fragment, S653N allele. <400> 33 atggcggcgg caacaacaac aacaacaaca tcttcttcga tctccttctc caccaaacca 60 tctccttcct cctccaaatc accattacca atctccagat tctccctccc attctcccta 120 aaccccaaca aatcatcctc ctcctcccgc cgccgcggta tcaaatccag ctctccctcc 180 tccatctccg ccgtgctcaa cacaaccacc aatgtcacaa ccactccctc tccaaccaaa 240 cctaccaaac ccgaaacatt catctcccga ttcgctccag atcaaccccg caaaggcgct 300 gatatcctcg tcgaagcttt agaacgtcaa ggcgtagaaa ccgtattcgc ttaccctgga 360 ggtgcatcaa tggagattca ccaagcctta acccgctctt cctcaatccg taacgtcctt 420 cctcgtcacg aacaaggagg tgtattcgca gcagaaggat acgctcgatc ctcaggtaaa 480 ccaggtatct gtatagccac ttcaggtccc ggagctacaa atctcgttag cggattagcc 540 gatgcgttgt tagatagtgt tcctcttgta gcaatcacag gacaagtccc tcgtcgtatg 600 attggtacag atgcgtttca agagactccg attgttgagg taacgcgttc gattacgaag 660 cataactatc ttgtgatgga tgttgaagat atccctagga ttattgagga agctttcttt 720 ttagctactt ctggtagacc tggacctgtt ttggttgatg ttcctaaaga tattcaacaa 780 cagcttgcga ttcctaattg ggaacaggct atgagattac ctggttatat gtctaggatg 840 cctaaacctc c ggaagattc tcatttggag cagattgtta ggttgatttc tgagtctaag 900 aagcctgtgt tgtatgttgg tggtggttgt ttgaattcta gcgatgaatt gggtaggttt 960 gttgagctta cggggatccc tgttgcgagt acgttgatgg ggctgggatc ttatccttgt 1020 gatgatgagt tgtcgttaca tatgcttgga atgcatggga ctgtgtatgc aaattacgct 1080 gtggagcata gtgatttgtt gttggcgttt ggggtaaggt ttgatgatcg tgtcacgggt 1140 aagcttgagg cttttgctag tagggctaag attgttcata ttgatattga ctcggctgag 1200 attgggaaga ataagactcc tcatgtgtct gtgtgtggtg atgttaagct ggctttgcaa 1260 gggatgaata aggttcttga gaaccgagcg gaggagctta agcttgattt tggagtttgg 1320 aggaatgagt tgaacgtaca gaaacagaag tttccgttga gctttaagac gtttggggaa 1380 gctattcctc cacagtatgc gattaaggtc cttgatgagt tgactgatgg aaaagccata 1440 ataagtactg gtgtcgggca acatcaaatg tgggcggcgc agttctacaa ttacaagaaa 1500 ccaaggcagt ggctatcatc aggaggcctt ggagctatgg gatttggact tcctgctgcg 1560 attggagcgt ctgttgctaa ccctgatgcg atagttgtgg atattgacgg agatggaagc 1620 tttataatga atgtgcaaga gctagccact attcgtgtag agaatcttcc agtgaaggta 1680 cttttattaa acaaccagc a tcttggcatg gttatgcaat gggaagatcg gttctacaaa 1740 gctaaccgag ctcacacatt tctcggggat ccggctcagg aggacgagat attcccgaac 1800 atgttgctgt ttgcagcagc ttgcgggatt ccagcggcga gggtgacaaa gaaagcagat 1860 ctccgagaag ctattcagac aatgctggat acaccaggac cttacctgtt ggatgtgatt 1920 tgtccgcacc aagaacatgt gttgccgatg atcccgaatg gtggcacttt caacgatgtc 1980 ataacggaag gagatggccg gattaaatac tgagagatga aaccggtgat tatcagaacc 2040 ttttatggtc tttgtatgca tatggtaaaa aaacttagtt tgcaatttcc tgtttgtttt 2100 ggtaatttga gtttctttta gttgttgatc tgcctgcttt ttggtttacg tcagactact 2160 actgctgttg ttgtttggtt tcctttcttt cattttataa ataaataatc cggttcggtt 2220 tactccttgt gactggctca gtttggttat tgcgaaatgc gaatggtaaa ttgagtaatt 2280 gaaattcgtt attagggttc taagctgttt taacagtcac tgggttaata tctctcgaat 2340 cttgcatgga aaatgctctt accattggtt tttaattgaa atgtgctcat atgggccgtg 2400 gtttccaaat taaataaaac tacgatgtca tcgagaagta aaatcaactg tgtccacatt 2460 atcagttttg tgtatacgat gaaatagggt aattcaaaat ctagcttgat atgccttttg 2520 gttcatttta accttctgta aaca tttttt cagattttga acaagtaaat ccaaaaaaaa 2580 aaaaaaaaaa tctcaactca acactaaatt attttaatgt ataaaagatg cttaaaacat 2640 ttggcttaaa agaaagaagc taaaaacata gagaactctt gtaaattgaa gtatgaaaat 2700 atactgaatt gggtattata tgaatttttc tgatttagga ttcacatgat ccaaaaagga 2760 aatccagaag cactaatcag acattggaag taggaatatt tcaaaaagtt tttttttttt 2820 aagtaagtga caaaagcttt taaaaaatag aaaagaaact agtattaaag ttgtaaattt 2880 aataaacaaa agaaattttt tatatttttt catttctttt tccagcatga ggttatgatg 2940 gcaggatgtg gatttcattt ttttcctttt gatagccttt taattgatct attataattg 3000 acgaaaaaat attagttaat tatagatata ttttaggtag tattagcaat ttacacttcc 3060 aaaagactat gtaagttgta aatatgatgc gttgatctct tcatcattca atggttagtc 3120 aaaaaaataa aagcttaact agtaaactaa agtagtcaaa aattgtactt tagtttaaaa 3180 tattacatga ataatccaaa acgacattta tgtgaaacaa aaacaatatc taga 3234 <210> 34 <211> 5717 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <223> Arabidopsis acetohydroxyacid synthase large subunit (AtAHASL) genomic fragment, S653N allele . <400> 34 tctagattat gtatttccaa ctttcattaa caatataatc gcatataaat gaaaaatcgt 60 ttccaggata atattttgat gaaatctcat attattgttc gtactcggat tgatgttgaa 120 ggcttgaagc gcttcaaatt atagaccaga ttatttaagt ttttcttttg tttactccat 180 atcaatttga tccattatac tacctaagaa aatttaggta acatagaatt atttattgtt 240 atagtaaaaa aaaggaaaac cacaaaaata atctactttt acgtatatac tattttcatg 300 acataagtaa ttaagttgta caactttttt ttaatgaaaa gagagagtaa atttatcatg 360 ttcatgtgta gttacctcgt gaataaccga cggttatata gacgcctaac atgaattgtt 420 cagttgaaga cagttcaaaa catgtgtttc actctaaaat cctcaacaaa aaaaaagtgt 480 taaaatttgt aaacctcttt caagcaaaaa aagaaaaagt gttagaatcc caagattctt 540 tcataatccg gaatcttggc tgaaaacgta taaaagagat tgacgtagta acaaggagtc 600 ttggtatgct tccatgcttt ttatcctttt ttgtcatgga accatgattt ggttaccatt 660 tattatgtaa ccgaaatttt cattgtaata atgaatattt aaatttttag caaaaaaaaa 720 caaaaaaaaa caaggagtct tgtcttcgtt ctcaaatttc agagctcttg cacttttcaa 780 gagttttact ttgatgagtg agacatttgt ctttttagtg tttattttct aaacttaaaa 840 tagtagcatc a acatcactc aattataatt cttaagatgt tgtagaaaaa tattttatag 900 atggaaagta atcgatatta agacaaataa gaaaccaaac cggactttgt gttcagaccg 960 aatcaaatct gaattggaga aattatggtg gaggcgaaag tcaacggaac taaagtataa 1020 aaccaaatgt caaaaataaa acccaatttt catccttaaa cgaacctgct gaaaccctaa 1080 tttcgattac caattccgat ctaaaaagaa gtcatggaag ccattgattc cgcaatcgat 1140 cctctcagag atttcgctaa gagcagtgtt cgtctcgtcc agcgctgtca caaacccgat 1200 cgcaagggta acgccttttc tcaaaaaaat ctcatttccg atttttgatc tgtagattag 1260 ggttttctga aattttgata tcatttgtaa ttgaattggt tatcagaatt cacgaaagta 1320 gctgtgcgta cggcgattgg atttgtggtg atgggattcg ttggattctt cgtgaagctc 1380 gttttcatcc caatcaacaa catcatcgtt ggatcttctt agtgtagtac tttctttacg 1440 aggtaattga tctcgcatta tatatctaca ttttggttat gttacttgac atatagtcat 1500 tgattcaata gttctgttaa ttcctttaaa gatcattttg actagaccac attcttggtt 1560 cattcctcaa taatttgtaa tcatattggt ggatatagaa gtagattggt tatagatcag 1620 atagtggaag actttaggat gaatttcagc tagttttttt ttttggctta ttgtctcaaa 1680 agattagtgc tttgctgtc t ccattgcttc tgctatcgac acgcttctgt ctccttgtat 1740 ctttattata tctattcgtc ccatgagttt tgtttgttct gtattcgttc gctctggtgt 1800 catggatgga gtctctgttc catgtttctg taatgcatgt tgggttgttt catgcaagaa 1860 atgctgagat aaacactcat ttgtgaaagt ttctaaactc tgaatcgcgc tacaggcaat 1920 gctccgagga gtaggaggag aagaacgaac caaacgacat tatcagccct ttgaggaagc 1980 tcttagtttt gttattgttt ttgtagccaa attctccatt cttattccat tttcacttat 2040 ctcttgttcc ttatagacct tataagtttt ttattcatgt atacaaatta tattgtcatc 2100 aagaagtatc tttaaaatct aaatctcaaa tcaccaggac tatgtttttg tccaattcgt 2160 ggaaccaact tgcagcttgt atccattctc ttaaccaata aaaaaagaaa gaaagatcaa 2220 tttgataaat ttctcagcca caaattctac atttaggttt tagcatatcg aaggctcaat 2280 cacaaataca atagatagac tagagattcc agcgtcacgt gagttttatc tataaataaa 2340 ggaccaaaaa tcaaatcccg agggcatttt cgtaatccaa cataaaaccc ttaaacttca 2400 agtctcattt ttaaacaaat catgttcaca agtctcttct tcttctctgt ttctctatct 2460 cttgctcatc tttctcctga accatggcgg cggcaacaac aacaacaaca acatcttctt 2520 cgatctcctt ctccaccaaa ccat ctcctt cctcctccaa atcaccatta ccaatctcca 2580 gattctccct cccattctcc ctaaacccca acaaatcatc ctcctcctcc cgccgccgcg 2640 gtatcaaatc cagctctccc tcctccatct ccgccgtgct caacacaacc accaatgtca 2700 caaccactcc ctctccaacc aaacctacca aacccgaaac attcatctcc cgattcgctc 2760 cagatcaacc ccgcaaaggc gctgatatcc tcgtcgaagc tttagaacgt caaggcgtag 2820 aaaccgtatt cgcttaccct ggaggtgcat caatggagat tcaccaagcc ttaacccgct 2880 cttcctcaat ccgtaacgtc cttcctcgtc acgaacaagg aggtgtattc gcagcagaag 2940 gatacgctcg atcctcaggt aaaccaggta tctgtatagc cacttcaggt cccggagcta 3000 caaatctcgt tagcggatta gccgatgcgt tgttagatag tgttcctctt gtagcaatca 3060 caggacaagt ccctcgtcgt atgattggta cagatgcgtt tcaagagact ccgattgttg 3120 aggtaacgcg ttcgattacg aagcataact atcttgtgat ggatgttgaa gatatcccta 3180 ggattattga ggaagctttc tttttagcta cttctggtag acctggacct gttttggttg 3240 atgttcctaa agatattcaa caacagcttg cgattcctaa ttgggaacag gctatgagat 3300 tacctggtta tatgtctagg atgcctaaac ctccggaaga ttctcatttg gagcagattg 3360 ttaggttgat ttctgagtct aagaagcctg tgttgtatgt tggtggtggt tgtttgaatt 3420 ctagcgatga attgggtagg tttgttgagc ttacggggat ccctgttgcg agtacgttga 3480 tggggctggg atcttatcct tgtgatgatg agttgtcgtt acatatgctt ggaatgcatg 3540 ggactgtgta tgcaaattac gctgtggagc atagtgattt gttgttggcg tttggggtaa 3600 ggtttgatga tcgtgtcacg ggtaagcttg aggcttttgc tagtagggct aagattgttc 3660 atattgatat tgactcggct gagattggga agaataagac tcctcatgtg tctgtgtgtg 3720 gtgatgttaa gctggctttg caagggatga ataaggttct tgagaaccga gcggaggagc 3780 ttaagcttga ttttggagtt tggaggaatg agttgaacgt acagaaacag aagtttccgt 3840 tgagctttaa gacgtttggg gaagctattc ctccacagta tgcgattaag gtccttgatg 3900 agttgactga tggaaaagcc ataataagta ctggtgtcgg gcaacatcaa atgtgggcgg 3960 cgcagttcta caattacaag aaaccaaggc agtggctatc atcaggaggc cttggagcta 4020 tgggatttgg acttcctgct gcgattggag cgtctgttgc taaccctgat gcgatagttg 4080 tggatattga cggagatgga agctttataa tgaatgtgca agagctagcc actattcgtg 4140 tagagaatct tccagtgaag gtacttttat taaacaacca gcatcttggc atggttatgc 4200 aatgggaaga tcggttctac aaagctaacc gagct cacac atttctcggg gatccggctc 4260 aggaggacga gatattcccg aacatgttgc tgtttgcagc agcttgcggg attccagcgg 4320 cgagggtgac aaagaaagca gatctccgag aagctattca gacaatgctg gatacaccag 4380 gaccttacct gttggatgtg atttgtccgc accaagaaca tgtgttgccg atgatcccga 4440 atggtggcac tttcaacgat gtcataacgg aaggagatgg ccggattaaa tactgagaga 4500 tgaaaccggt gattatcaga accttttatg gtctttgtat gcatatggta aaaaaactta 4560 gtttgcaatt tcctgtttgt tttggtaatt tgagtttctt ttagttgttg atctgcctgc 4620 tttttggttt acgtcagact actactgctg ttgttgtttg gtttcctttc tttcatttta 4680 taaataaata atccggttcg gtttactcct tgtgactggc tcagtttggt tattgcgaaa 4740 tgcgaatggt aaattgagta attgaaattc gttattaggg ttctaagctg ttttaacagt 4800 cactgggtta atatctctcg aatcttgcat ggaaaatgct cttaccattg gtttttaatt 4860 gaaatgtgct catatgggcc gtggtttcca aattaaataa aactacgatg tcatcgagaa 4920 gtaaaatcaa ctgtgtccac attatcagtt ttgtgtatac gatgaaatag ggtaattcaa 4980 aatctagctt gatatgcctt ttggttcatt ttaaccttct gtaaacattt tttcagattt 5040 tgaacaagta aatccaaaaa aaaaaaaaaa aaatctcaac tcaacactaa attattttaa 5100 tgtataaaag atgcttaaaa catttggctt aaaagaaaga agctaaaaac atagagaact 5160 cttgtaaatt gaagtatgaa aatatactga attgggtatt atatgaattt ttctgattta 5220 ggattcacat gatccaaaaa ggaaatccag aagcactaat cagacattgg aagtaggaat 5280 atttcaaaaa gttttttttt tttaagtaag tgacaaaagc ttttaaaaaa tagaaaagaa 5340 actagtatta aagttgtaaa tttaataaac aaaagaaatt ttttatattt tttcatttct 5400 ttttccagca tgaggttatg atggcaggat gtggatttca tttttttcct tttgatagcc 5460 ttttaattga tctattataa ttgacgaaaa aatattagtt aattatagat atattttagg 5520 tagtattagc aatttacact tccaaaagac tatgtaagtt gtaaatatga tgcgttgatc 5580 tcttcatcat tcaatggtta gtcaaaaaaa taaaagctta actagtaaac taaagtagtc 5640 aaaaattgta ctttagttta aaatattaca tgaataatcc aaaacgacat ttatgtgaaa 5700 caaaaacaat atctaga 5717 1 100