技术领域
[0001] 本
发明涉及一种同时测定茶青中124种农药残留的方法分析的方法，属于农产品中农药残留成分检测技术领域。
背景技术
[0002] 近年来，贵州充分发挥资源优势，加大农业结构调整
力度，突出抓好茶叶等优势特色产业。2015年全省茶叶种植面积689万亩，种植面积已居于全国第一位，综合产值达近百亿元。茶叶
质量安全是保障我省茶叶产业可持续发展的重要
基础。食品药品监管总局关于进一步加强茶叶质量安全监管工作的通知[食药监食监〔2017〕29号]，指出严把原料进厂关安全关以提高茶叶的安全性，保障人民的生命安全。
[0003] 茶青是生产茶叶的原材料，特别是我省的部分茶叶企业的茶青原料主要来源于茶青交易市场，茶青也逐步成为我省总要的农产品之一，这也给农业部
门提出了一个新的研究和质量安全监管领域，目前均以速测来快速检测茶青中农药残留的检测，但在检测分析中存在检测找不到依据标准支持的尴尬处境，这就阻碍了对茶青农药残留的监管和检测，茶青的质量安全与否决定了茶叶的质量安全，从而无法保障茶叶的质量安全，应加强茶青农残检测保障茶叶质量安全。茶叶质量安全是保障茶产业可持续发展的重要基础，而茶青是生产茶叶的原材料，茶青的安全与否决定了茶叶的质量安全，以及茶产业的可持续发展性。目前中国茶叶中农药残留的检测方法主要有气相色谱-火焰光度法和气相色谱-
电子捕获法等，而关于茶叶原材料茶青中农药残留的检测方法较少，造成茶青中多农药残留的检测空白，增加了成品茶中的农药残留检出的
风险。
[0004] 茶叶生产中，在热物理化学作用下，以茶青中含有的化学成分为反应基质，以脱
水、
水解、取代、异构、
氧化、还原等反应形式，不但使原有的化学成分发生数量上、组成比例上、化学结构上的变化，并伴有大量新物质的形成，增加检测难度。由于茶青和茶叶的化学成分具有较大的差别，从而建立一个茶青中多种农药残留的检测方法具有重要意义。
发明内容
[0005] 本发明要解决的技术问题是：提供一种测定茶青农药残留的方法，不仅具有灵敏度高，准确性好，分析速度快，以及可同时分析124种农药成分等优点，而且仪器具有很高的检测选择性，可解决样品杂质对检测结果的干扰，以克服
现有技术的不足。
[0006] 本发明的技术方案是：一种用液相色谱-质谱联用仪同时测定茶青中124种农药残留的方法，包括以下步骤：
[0007] A、样品前处理：称取10g茶青鲜叶粉末于离心管中，然后加入20mL1％
醋酸乙腈溶液，高速匀浆提取后加入NaCl，充分震荡混匀后，离心分层，取上层清夜备用；
[0008] B、上机测试液处理：快速定性定量检测分析，取前述定容液1.0mL，用1.0 mL乙腈稀释后利用液相色谱-质谱联用测定。准确定性定量检测分析，在
氨基柱中加入约2cm高无水
硫酸钠，加样前先用5mL乙腈-
甲苯(3:1)溶液预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速吸取前述样品提取液4mL转移至
净化柱上，再用25mL乙腈-甲苯(3:1)溶液洗脱农药，所有滤液收集于100mL梨形瓶中，在45℃水浴中旋转浓缩至约0.5mL，于35℃下氮气吹干，2mL乙腈-水溶液溶解残渣，经0.2μm微孔滤
膜过滤后，供液相色谱-
串联质谱测定。
[0009] C、质谱测定：将步骤B中的测定液用液相色谱-质谱联用仪进行定性定量分析。
[0010] 所述的测定茶青中124种农药残留的方法分析的方法，其特征在于：液相色谱-质谱联用仪分析的条件为：色谱柱：Phenomenex Luna C18(2)100A,3μm,150 mm×2mm内径；流动相及梯度洗脱条件见附表1；柱温：40℃；进样量：2μL；电离源模式：ESI+；雾化气：氮气；雾化气压力：60psi；辅助气：50psi气帘气：25psi,离子喷雾
电压：5500V；干燥气
温度：650℃；干燥气流速：10L/min；监测离子对、碰撞气
能量和源内碎裂电压参见表1。选择性离子多反应监测模式扫描(SRM)，检测器的
数据采集为分段
时间窗口采集。
[0011] 所述的同时测定茶青中124种农药成分的方法，其特征在于：所述124种农药，其中
杀虫剂73种、
杀菌剂31种、
杀螨剂6种、
除草剂14种；有机磷类杀虫剂35种、氨基
甲酸酯类杀虫剂20种、烟
碱类杀虫剂6种；包含我国国标GB2763-2016《食品中农药最大残留量限量》中对茶叶农药残留有限量要求的农药中除草铵膦和草甘膦其他46个农药。
[0012] 本发明的有益效果是：本发明利用质谱检测器具有高灵敏度和高选择性的原理，一次性同时快速定性、准确定量分析茶青中124种农药成分，解决了茶青中的124种农药残留检测液相色谱-质谱法的空白。
[0013] 该发明有利于茶青农药残留检测的合法性、准确性，可为茶青中农药最大残留量制定提供大量的基础数据，逐步完善我国对茶叶质量安全风险监测依据，填补国内茶青的快速定性定量、准确定性定量检测液质方法的空白，适用于茶叶原材料质量安全性保障检测。
[0014] 本发明以国家明令禁止使用农药、国家明令茶树上禁止使用农药、国标 2763-2016等依据，选择124种农药种类为研究对象，分别有杀虫剂73种、杀菌剂31种、杀螨剂6种、除草剂14种；有机磷类杀虫剂35种、基甲酸酯类杀虫剂20种、烟碱类杀虫剂6种；包含我国国标GB2763-2016《食品中农药最大残留量限量》中对茶叶农药残留有限量要求的农药中除草铵膦和草甘膦其他46个农药。有利于完善茶叶农药残留危害的检测依据，加强对从茶园源头到茶杯消费的监管、检测，提高茶叶质量安全、保障我省茶叶产业可持续发展。
附图说明
[0015] 图1为124种浓度为0.1ug/mL农药标准样品SRM色谱图；
[0016] 图2为茶青样品样品添加(0.1mg/kg)SRM色谱图。
具体实施方式
[0019] LC-20AD XR-AB 4000 QTRAP(ABI-4000Q MS，美国ABI公司)(液相色谱- 质谱联用)；乙腈、甲醇(色谱，进口试剂)；甲酸、乙酸铵、乙酸(色谱纯，进口试剂)124种农药标样：三羟基克百威、乙酰甲胺磷、吡虫啉、乙草胺、涕灭威、涕灭威风、涕灭威亚凤、莠灭净、莠去津、阿维菌素、谷硫磷、密菌酯、苯霜灵、卞氨基嘌呤、苄嘧磺隆、联苯菊酯、联苯三唑醇、噻嗪
酮、甲柰威、多菌灵、克百威、丁硫克百威、氯虫苯甲酰胺、灭幼脲、氟啶脲、氯苯胺灵、毒死蜱、甲基毒死蜱、绿黄隆、噻虫胺、蝇毒磷、嘧菌环胺、灭蝇胺、内吸磷、丁醚脲、二嗪磷、敌敌畏、苯醚甲环唑、除虫脲、乐果、烯酰玛琳、烯唑醇、二苯胺、甲氨基阿维菌素苯
甲酸盐、氟环唑、氰戊菊酯、灭线磷、乙螨唑、苯线磷、氯苯嘧啶醇、喹螨醚、腈苯唑、杀暝硫磷、仲丁威、唑螨酯、倍硫磷、氟虫脲、氟
硅唑、己唑醇、噻螨酮、啶虫脒、蝇虫威、氯唑磷、水胺硫磷、异丙威、稻温灵、伊维菌素、丁草胺、
马拉硫磷、甲硫威、甲霜磷、甲胺磷、杀朴磷、灭多威、速灭威、甲黄隆、腈菌唑、烯啶虫胺、氧乐果、多效唑、对硫磷、戊菌唑、稻丰散、甲拌磷、亚胺硫磷、硫环磷、甲基环磷、伏杀硫磷、辛硫磷、甲拌磷风、甲拌磷亚风、抗蚜威、丙草胺、咪鲜胺、丙溴磷、扑草净、霜霉威、克螨特、丙环唑、乙丙草胺、残杀威、吡呀酮、吡唑密菌酯、哒螨灵、嘧霉铵、喹硫磷、砜嘧磺隆、西玛津、治螟磷、氟胺氰聚酯、戊唑醇、特丁硫磷、噻菌灵、噻虫啉、噻虫嗪、甲基硫菌灵、唑虫酰胺、三唑酮、三唑醇、野麦畏、三唑磷、敌百虫、三环唑、苯酰菌胺农业部环境监督检验测试中心(天津)；
[0020] 二、检测方法
[0021] A、样品前处理：称取10g茶青鲜叶粉末于离心管中，然后加入20mL1％醋酸乙腈溶液，高速匀浆提取后加入NaCl，充分震荡混匀后，离心分层，取上层清夜备用；
[0022] B、上机测试液处理：快速定性定量检测分析，取前述定容液1.0mL，用1.0 mL乙腈稀释后利用液相色谱-质谱联用测定。准确定性定量检测分析，在氨基柱中加入约2cm高无水硫酸钠，加样前先用5mL乙腈-甲苯(3:1)溶液预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速吸取前述样品提取液4mL转移至净化柱上，再用25mL乙腈-甲苯(3:1)溶液洗脱农药，所有滤液收集于100mL梨形瓶中，在45℃水浴中旋转浓缩至约0.5mL，于35℃下氮气吹干，2mL乙腈-水溶液溶解残渣，经0.2μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。
[0023] C、质谱测定：将步骤B中的测定液用液相色谱-质谱联用仪进行定性定量分析。
[0024] 所述液相色谱-质谱定性定量分析的条件为：液相色谱-质谱联用仪分析的条件为：色谱柱：Phenomenex Luna C18(2)100A,3μm,150mm×2mm内径；流动相及梯度洗脱条件见附表1；柱温：40℃；进样量：2μL；电离源模式：ESI+；雾化气：氮气；雾化气压力：60psi；辅助气：50psi气帘气：25psi,离子喷雾电压：5500V；干燥气温度：650℃；干燥气流速：10L/min；监测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压参见表1。选择性离子多反应监测模式扫描(SRM)，检测器的数据采集为分段时间窗口采集。124种农药的质谱条件及保留时间见表1，标样色谱图如图1所示。
[0025] 表1 124种农药保留时间、Q1、Q3、碰撞能量等条件
[0026]
[0027]
[0028]
[0029]
[0030]
[0031]
[0032] 三、方法验证
[0033] 1、方法的实用性
[0034] 利用上述方法对茶园茶青、市场茶青进行了农药残留检测分析，检测效果可达到检测需求，具有较好的实用性和推广性。
[0035] 2、方法线性的测定
[0036] 先配置浓度为100.0μg/mL农药混合标准溶液，再逐级稀释配制成梯度浓度标准溶液。标准溶液质量浓度为0.020μg/mL、0.050μg/mL、0.20μg/mL、0.50 μg/mL，混匀后上机检测。以农药峰面积为纵坐标，农药质量浓度为横坐标，计算得到各个农药的相关系数R2(见表2)。结果表明各农药的相关系数R2不小于0.983，质量浓度在0.02～0.50μg/mL范围内具有很好的线性关系。
[0037] 结果表明，相关系数R2均在0.983以上，124种农药残留在质量浓度在 0.02～0.50μg/mL含量范围内，质谱检测器响应与相应124种农药残留的浓度呈良好的线性关系。同时还表现出了质谱具有较好的灵敏度。
[0038] 3、重复性及回收率测定
[0039] 通过在茶青样品中添加农药进行添加实验对方法进行评价，分别加低浓度 (0.10mg/kg)和高浓度(0.50mg/kg)两浓度梯度的添加回收实验。
[0040] 先准确称取10.0g的样品，添加每种农药含量为0.10mg/kg和0.50mg/kg农药标样溶液，按上述方法进行检测分析，结果见表2。从表2中可以看出，方法达到了严格的定量准确性，精
密度和重复性。
[0041] 表2方法相关系数(R2)、定量限、精密度和回收率
[0042]
[0043]
[0044]
[0045]
[0046] 注：上述平均回收率为6次测量平均值，相对标准偏差(RSD＝6)，浓度单位为：ug/kg
[0047] 5、质谱定性定量
[0048] 在相同的条件下进行样品测定，如果检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选的离子丰度比与标准品的离子丰度比满足：相对丰度＞50％，允许±20％偏差；相对丰度＞20％～50％，允许±25％偏差；相对丰度＞10％～20％，允许±30％偏差；相对丰度≤10％，允许±50％偏差，则可判断样品中存在这种农药。采用峰面积质量浓度标准曲线外标法定量分析。
[0049] 6、实际样品的测定
[0050] 利用本发明对采集的5个茶青样本进行农药残留检测，每份样品平行重复检测3次，对检出值计算相对标准偏差(RSD,n＝3)，结果见表3。结果说明实际样品检测相对标准偏差(RSD,n＝3)为3.2-5.2％，方法适用茶青样品中124种农药残留分析检测。
[0051] 表3农药样品测定结果
[0052]农药成分 sample1 sample2 sample3 sample4 sample5
联苯菊酯 1.2 1.3 - -
氰戊菊酯 0.21 - - -
啶虫脒 - - 0.86 0.16 -
吡虫啉 - - - - 0.052
[0053] 注：上述检测结果为三次测量平均值，浓度单位为：mg/kg
[0054] 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
[0055] 附表1流动相及梯度洗脱
[0056]
