GrB重组单链抗体的构建及功能验证的方法
专利汇可以提供GrB重组单链抗体的构建及功能验证的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了GrB重组单链 抗体 的构建及功能验证的方法：(1)构建pcDNA3.3c‑GrB‑Gala重组质粒；(2)构建pcDNA3.3c‑GrB‑Gala减毒鼠伤寒沙 门 氏菌VNP20009重组菌株；(3)GrB重组质粒通过减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009胞内侵袭的特性,侵入细胞后实现蛋白GrB的真核表达，验证这种蛋白对细胞的杀伤作用。本发明中采用减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009的胞内侵袭的特性实现人源毒素蛋白的表达，同时大量研究表明减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009能够特异性聚集在实体 肿瘤 中，可以实现特异性杀伤肿瘤细胞的目的，为肿瘤 治疗 研究提供实验依据。，下面是GrB重组单链抗体的构建及功能验证的方法专利的具体信息内容。
1.GrB重组单链抗体的构建及功能验证的方法，其特征是，所述构建方法包括如下步骤：
(1)获取GrB-Gala片段：以pET302-GrB-Gala为模板，以SEQ ID No.3和SEQ ID No.4序列为引物，PCR扩增获得SEQ ID No.1所示的GrB-Gala片段；
(2)构建pcDNA3.3c-GrB-Gala重组质粒：将步骤(1)中获得的GrB-Gala片段，通过酶切酶连的方法连接到pcDNA3.3c其序列为：SEQ ID No.2的质粒中，重组质粒命名为pcDNA3.3c-GrB-Gala；
(3)构建pcDNA3.3c-GrB-Gala重组菌株：将步骤(1)中pcDNA3.3c-GrB-Gala重组质粒转入E.coli Top10中，获得重组菌株；
(4)构建pcDNA3.3c-GrB-Gala重组减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009：从步骤(3)中获得的重组菌株中获得重组质粒后，通过电转化的方法置于鼠伤寒沙门氏菌VNP20009中，电转条件：1800V、25uF、200Ω、4.7ms，将重组后的鼠伤寒沙门氏菌命名为pcDNA3.3c-GrB-Gala-Gala-VNP20009。
2.权利要求1所述的方法构建的一株重组减毒鼠伤寒沙门氏菌pcDNA3.3c-GrB-Gala-VNP20009。
3.GrB重组单链抗体的构建及功能验证的方法，其特征是所构建抗体功能验证方法包括如下步骤：
(1)将步骤1获得的这种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009，按照细胞与细菌100:1的比例，与B16F10细胞混合培养2小时后，换取含有青链霉素的新鲜培养基继续培养24h；
(2)将步骤(1)中培养的细胞，分别做拍照观察及采用MTT比色法计算该蛋白对细胞的特异性的杀伤作用。
4.根据权利要求1中所述GrB重组单链抗体的构建及功能验证的方法，其特征是：采用的是真核质粒转染、表达的技术。
GrB重组单链抗体的构建及功能验证的方法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
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