| 热词 | 裂解 细胞 核酸 石墨烯 全血 石墨 试剂 混匀 静置 振荡 | ||
| 专利类型 | 发明公开 | 法律事件 | 公开; 实质审查; 撤回; |
| 专利有效性 | 无效专利 | 当前状态 | 撤回 |
| 申请号 | CN201910607844.5 | 申请日 | 2019-07-08 |
| 公开(公告)号 | CN112195174A | 公开(公告)日 | 2021-01-08 |
| 申请人 | 浙江智扬生物科技有限公司; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | 李智洋; 翁国武; 王炜; 朱沉雷; 宋莲; 黄远福; | 第一发明人 | 李智洋 |
| 权利人 | 浙江智扬生物科技有限公司 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 浙江智扬生物科技有限公司 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份：浙江省 | 城市 | 当前专利权人所在城市：浙江省绍兴市 |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：浙江省绍兴市越城区阳明北路683号14楼1406室 | 邮编 | 当前专利权人邮编：312000 |
| 主IPC国际分类 | C12N15/10 | 所有IPC国际分类 | C12N15/10 |
| 专利引用数量 | 8 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 10 | 专利文献类型 | A |
| 专利代理机构 | 专利代理人 | ||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种含有 氧 化 石墨 烯成分的细胞裂解 试剂 ，该试剂可以利用了氧化 石墨烯 的优良性能达成对细胞温和却完全的裂解。解决了常用的机械裂解法裂解细胞的不适合大批量检测的缺点，及市场上细胞裂解液操作不便的缺点。本发明用等渗溶液配合缓冲液取代了不稳定的胍盐，并在试剂中加入了氧化石墨烯溶液，可以在对样本没有明显损害的情况下 加速 样本细胞的裂解过程，缩短了样本处理时间，更有利于实验处理并保证样本检测的可靠性。本发明所述的经过改进后的细胞裂解试剂具有条件温和、细胞裂解充分、操作简便的优点。 | ||
| 权利要求 | 1.一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂，其特征在于：该试剂主要成分有氧化石墨烯、等渗溶液、缓冲液和表面活性剂，剩余溶剂为无核酸酶水。 |
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| 说明书全文 | 一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂技术领域背景技术[0002] 自20世纪50年代以来，分子生物学就一直是生物学的前沿与生长点。而随着分子生物学技术的不断完善，它使整个生命科学的研究上升到一个全新的阶段。分子生物学主要的研究领域就是细胞中的遗传因子，即我们所说的核酸。在细胞中，核酸总是与各种蛋白质结合在一起的，分子生物学中的最一项基本操作就是将核酸从细胞中提取出来。核酸的提取主要是指运用一定方法将生物样品的细胞裂解，将核酸从细胞中释放出来。 [0003] 常用的裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂，而且机械处理需要更多地人工参与，不适合于样品量多的环境。 [0004] 市场上的细胞裂解液通常含有胍盐和表面活性剂等成分，其原理为由表面活性剂使蛋白质变性进而细胞膜破裂，释放的核酸。在实际操作中，由于胍盐具有降低溶液pH 值的作用，这些细胞裂解液中的胍盐在pH 值近中性或偏酸性的条件容易产生沉淀，不仅带来试剂需要加热溶解和吸取操作不方便的不足，而且影响样品中细胞裂解效果、降低了核酸提取的得率。筛选出一种既温和、稳定，又能全面裂解细胞的细胞裂解液就成为当前研究亟需解决的问题。 [0005] 近年来，随着纳米技术的快速发展，纳米材料已广泛的运用于生命科学领域，氧化石墨烯作为其中的明星材料，广泛运用于材料学、分子诊断学等方面，除了它本身优良的性能外，它还具有良好的抗菌能力。经过研究，这是因为氧化石墨烯表面分布着大量的亲水氧化基团，正是这些亲水氧化基团高关联的分布特点使氧化石墨烯有着类似的破坏细胞膜的能力。 发明内容[0006] 针对上述问题，本发明的目的是提供一种细胞裂解试剂，利用其中含有的氧化石墨烯的优良性能达成对细胞温和却完全的裂解。 [0007] 为达到以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂，试剂主要成分为氧化石墨烯、等渗溶液、缓冲液和表面活性剂，剩余溶剂为无核酸酶水。具体组成说明如下。 [0008] (1) 氧化石墨烯：优选的浓度为0.1%。 [0010] (3) 缓冲溶液：可以是但不限于Tirs-HCI (pH 8.0)，HEPES，叠氮钠，PMSF，Aprotinin，Leupeptin，EDTA，脱氧胆酸钠，蛋白酶K等或其中2-4 种的组合，浓度为0.1-10％，优选的缓冲溶液为Tirs-HCI (pH 8.0)和PMSF，优选的浓度各为0.6％和1％。 [0011] (4) 表面活性剂：可以是但不限于SDS，DTT，尿素，Triton X-100，NP-40，硫脲，CTAB 等或其中2-4 种的组合，浓度为0.5-25％，优选的表面活性剂为NP-40，SDS和TritonX-100，优选的浓度各为0.5％，1%和10％。 [0012] 配制的细胞裂解试剂适合置于室温保存。 [0013] 本发明还提供了细胞裂解试剂的使用方法之一如下。 [0014] 将样本细胞与上述细胞裂解试剂混匀，常温静置至少10min。 [0015] 本发明的有益效果是：它相比市面上的裂解试剂，用等渗溶液配合缓冲液取代了不稳定的胍盐，并在试剂中加入了氧化石墨烯溶液，可以在对样本没有明显损害的情况下加速样本细胞裂解过程，缩短了样本处理时间，更有利于观察结果并保证样本检测的可靠性。经过改进后的细胞裂解试剂具有反应条件温和、操作简便、细胞裂解充分、的优点。 具体实施方式[0016] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以通过技术常识对本发明作各种技术性改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。 [0017] 实施例1 。 [0018] 细胞裂解试剂A。 [0019] 0.1%氧化石墨烯，0.9% NaCl，0.6% Tirs-HCI (pH 8.0)，1% PMSF，2% 蛋白酶K，0.5% NP-40，1% SDS，剩余溶剂为无核酸酶水。 [0020] 配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。 [0021] 以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。 [0022] 实施例2 。 [0023] 细胞裂解试剂B。 [0024] 0.1%氧化石墨烯，0.9% NaCl，1% 蛋白酶K，1% PMSF，0.1% EDTA，10% TritonX-100，1% 尿素，剩余溶剂为无核酸酶水。 [0025] 配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。 [0026] 以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。 [0027] 实施例3 。 [0028] 细胞裂解试剂C。 [0029] 0.1%氧化石墨烯，5% 葡糖糖，0.6% Tirs-HCI (pH 8.0)，1% HEPES，0.2% EDTA ，0.5% TritonX-100，0.5% DTT ，1% SDS，剩余溶剂为无核酸酶水。 [0030] 配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。 [0031] 以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。 [0032] 实施例4 。 [0033] 细胞裂解试剂D。 [0034] 0.1%氧化石墨烯，5% 葡糖糖，0.6% 叠氮钠，1% Aprotinin，Leupeptin，0.5% 硫脲，1% CTAB，1% SDS，剩余溶剂为无核酸酶水。 [0035] 配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。 [0036] 以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。 [0037] 实施例5 。 [0038] 细胞裂解试剂E。 [0039] 0.1% 氧化石墨烯，2.5% 碳酸氢钠，3%脱氧胆酸钠，2% 蛋白酶K，5% Leupeptin，0.2% EDTA，0.5% NP-40，1% Triton X-100，剩余溶剂为无核酸酶水。 [0040] 配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。 [0041] 以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。 [0042] 实施例6 。 [0043] 细胞裂解试剂F。 [0044] 0.1% 氧化石墨烯，2.5% 碳酸氢钠，3% 脱氧胆酸钠，1% PMSF，0.5% NP-40，3% 硫脲，5% CTAB，剩余溶剂为无核酸酶水。 [0045] 配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。 [0046] 以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。 [0047] 最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。 |
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