纺织品染色的酶促方法

本发明的技术领域

本发明涉及材料的染色方法，包括将所述材料与结合了酶促氧化 系统的染色中间体进行接触。

本发明的技术背景

纺织品的染色通常被认为是纺织物和服装生产过程中最重要和最 昂贵的一步。在纺织工业中，两种主要加工类型，分批和连续的加工 类型，  目前被用于染色。在分批加工过程中，除了别的外，还使用了 喷嘴、转筒和染桶。在连续加工过程中，除了别的外，还使用了填料 系统。参见，例如I.D.Rattee，In C.M.Carr(编辑)，″纺织工 业化学″Blackie Academic and Professional，Glasgow，1995， 276页。

主要类型的染料是偶氮(单-、双-、三-，等)，碳酰(蒽琨和靛 蓝衍生物)，菁蓝，双-和三苯甲烷和酞菁染料。所有这些染料含有产 生颜色的发色基团。两种类型的染料，还原染料和硫化染料，是通过 氧化/还原机制被施用于材料的。氧化/还原步骤的目的是在不溶性和 可溶性形式之间改变还原染料和硫化染料。

主要化学类型的染料是偶氮染料。最常见的是，偶氮染料被作为 染料进行生产，然后被用来对一种材料进行染色。在一种改进的技术 中，已知作为偶氮染料，强亲电性重氮离子和一种亲核化合物使得在 材料原位上形成有色偶氮化合物。偶氮染色的机制和过程例如已被记 载在《着色剂和辅剂》，卷I-着色剂，染色师和着色师协会，西约克 郡，英国，1990和纤维素染色师和着色师协会，西约克郡，英国， 1995中。

氧化还原酶，例如氧化酶和过氧化物酶，是本技术领域已知的。 一类氧化还原酶是漆酶(苯二醇：氧氧化还原酶)，该漆酶是含有多- 铜的酶并且催化酚和相关化合物的氧化。漆酶介导的氧化反应导致由 适当的底物产生芳基中间体；由此产生的中间体的最大偶合提供了一 种二聚、寡聚和多聚反应产物的混合物。这种反应在大自然中的导致 黑色素、生物碱、毒素、木质素和腐殖酸形成的生物合成途径中是非 常重要的。

另一类氧化还原酶是过氧化物酶，其在由过氧化氢存在的条件下 氧化化合物。

漆酶被发现用于头发的染色。参见，例如PCT申请序列号威 PCT/US95/06815和PCT/US95/06816的PCT申请。欧洲专利EP 0504005公开了在pH为6.5至8.0的范围内漆酶可被用于羊毛的染 色。

Saunders等，过氧化物酶，伦敦，1964，p.10ff.公开了过氧化 物酶作用于不同的氨基酸和酚氧化物结果产生颜色。

Kunz等，美国专利US5849041公开了一种含有芳族二胺，例如 1，4-苯二胺(显色剂)，一种α-萘酚(偶联剂)，一种氧-氧化还原 酶/底物体系和一种过氧化物酶的染发组合物。Kunz进一步教导了优 选的偶联物质含有一种取代的间-苯二胺。

法国专利FR 2112549公开了采用一种含有氧化酶和芳族化合物 如芳族二胺、酚和这些物质的衍生物的水溶液进行染发的方法，所述 芳族化合物是氧化颜料的前体。公开了磺酸化和羧化的芳族二胺和 酚。公开了漆酶的用途。

Roure等，欧洲专利EP 504005记载了1-萘酚(α-萘酚)，1， 5-二羟萘，2，7-二羟萘是已知用于染发的氧化偶联剂，该偶联剂可 与芳族二胺如1，4-苯二胺和N-苯基-1，4-苯二胺和漆酶一起使用。

Peck，美国专利US 2539202记载了一种动物纤维如毛皮、动物毛 皮等的染色方法，包括步骤：对动物纤维施用一种酪氨酸或二羟苯基 丙氨酸前体色素的水溶液，然后施用一种氧化酶如酪氨酸酶或聚酚 酶。

Soloway，US 3251742记载了一种利用多羟基芳香化合物、芳族 胺和一种氧化酶染发的方法。

Yaver等，US 5667531记载了一种染发组合物，其中所述组合物 含有一种漆酶和一种染料前体和任选的偶联剂，该偶联剂是由 Soloway公开的几种偶联剂(例如苯二胺和氨基酚)。

公开号为JP 6-316874的日本专利申请记载了一种棉花染色方 法，包括采用一种含氧介质处理棉花，其中选自抗坏血酸盐氧化酶、 胆红素氧化酶、过氧化氢酶、漆酶、过氧化物酶和多元酚氧化酶的氧 化还原酶被用来产生氧。

WO 91/05839记载了氧化酶和过氧化物酶被用于抑制纺织品染料 的转移。

然而，这些引用文中没有一篇建议或公开了染色中间体与一种氧 化酶的混合物的用途，该混合物中至少一种中间体是一种芳族二胺并 且至少一种中间体是一种萘酚或一种氨基萘，特别是所述萘酚是除未 被取代的α-萘酚、卤化的1-萘酚或未被取代的二羟萘以外的任何萘酚 或一种或多种染色中间体被一种磺酸(或其盐)，一种羧酸(或其 盐)，一种氨磺酰或一种季氨盐所取代。

因此，本技术领域需要一种改进的纺织材料染色的酶促方法。

本发明的概述

本发明提供一种通过材料与染色系统的接触进行材料染色的方 法，该染色系统包括：

(a)一种染色中间体的混合物，该混合物含有(i)至少一种芳 族二胺和(ii)至少一种选自萘酚和氨基萘的化合物；和(b)一种氧 化体系，该氧化体系含有(i)一种过氧化氢源和一种具有过氧化物酶 活性的酶或(ii)一种在产生染色材料或颜色被改变的条件下对一种 或多种混合物(a)的化合物具有过氧化物酶活性的酶。在某些技术方 案中，至少一种(a)(i)或(a)(ii)的化合物被一种磺酸(或其 盐)、一种羧酸(或其盐)、一种氨磺酰或一种季铵盐所取代。在某 些技术方案中，所述萘酚是除α-萘酚(也称作1-萘酚)、卤化的1- 萘酚或未被取代的二羟萘以外的任何萘酚。在某些技术方案中，芳族 二胺被一种选自磺酸、羧酸、磺酸或羧酸的盐、氨磺酰和季氨盐的功 能基团所取代或(b)所述萘酚不是未被取代的α-萘酚、卤化的1-萘 酚或未被取代的二羟萘。优选地，所述酶是一种过氧化物酶或一种漆 酶。

上述取代基在所述染色中间体混合物的至少一种化合物上的存在 提高了染色中间体化合物的可操作性，有利于材料的染色，并改善了 颜料的性能，如降低洗涤染色。

被染色的材料包括，但不限于一种织物、纱、纤维、服装或由毛皮、 兽皮、皮革、丝、羊毛、阳离子多糖、棉花、二醋酸酯、亚麻、亚麻布、 lyocel、聚丙烯、合成聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、三醋酸酯或粘胶丝 制成的膜。

在某些技术方案中，所述芳族二胺是一种式A化合物，所述萘酚 是一种式B化合物，和羧述氨基萘是一种如下所示的式C化合物：

其中X可独立地是氢、磺酸、一种羧酸、一种磺酸盐、一种羧酸盐、 氨磺酰或一种季胺盐；R1和R2可各自独立地是氢、C1-18-烷基、C1-18- 羟烷基、苯基、芳香基、偶氮苯、氨基苯基、被一个或多个功能基团 取代的偶氮苯和被一个或多个功能取代的氨基苯基；并且A、B和C芳 环上的剩余位置任选地被一个或多个功能基团所取代，所述功能基团 包括但不限于氢原子、卤素原子、磺基、磺酸基(sulfonato)、磺 氨基、硫烷基(sulfanyl)、氨基、酰氨基、酰氨芳基、硝基、偶氮 基、偶氮芳基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、羟基、卤代羰基、氨 基甲酰基、脲基(carbamidoyl)、苯基、芳基、磷酸根、磷酰基、 C1-18-烷基、C2-18-烯基、C2-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18- 氧烷基、C1-18-烷硫基、C1-18-烷亚氨基和被一个、两个或三个C1-18-烷 基取代的氨基。在某些技术方案中，所述卤素可以是一种氟、氯、溴 或碘。

在其它技术方案中，羧述萘酚可以是一种式D化合物：

其中X可独立地是氢、磺酸、羧酸、一种磺酸盐、一种羧酸盐、氨磺 酰或一种季胺盐和D的芳环上的剩余位置是一个或多个功能基团，所述 功能基团包括但不限于氢原子、卤素原子、磺基、磺酸基 (sulfonato)、磺氨基、硫烷基(sulfanyl)、氨基、酰氨基、酰 氨芳基、硝基、偶氮基、偶氮芳基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、 羟基、碳卤基、氨基甲酰基、脲基、苯基、芳基、磷酸根、磷酰基、 C1-18-烷基、C2-18-烯基、C2-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-羧基、C1-18-氧 烷基、C1-18-烷硫基、C1-18-烷亚氨基和被一个、两个或三个C1-18-烷基 取代的氨基。在某些技术方案中，所述卤素可以是一种氟、氯、溴或 碘。

实施本发明过程中使用的芳族二胺实例包括但不限于2-甲氧基- 对-苯二胺、N，N-双-(2-羟乙基)-对-苯二胺、N-β-甲氧乙基-对- 苯二胺、2-甲基-1，3-二氨基-苯、2，4-二氨基甲苯、2，5-二氨基 甲苯、2，6-二氨基吡啶、1-N-甲磺酸基-4-氨基苯、1-甲氧基-2，4- 二氨苯、1-乙氧基-2，3-二氨基苯、1-β-羟乙基氧-2，4-二氨苯、1， 4-苯二胺、2-氯-1，4-苯二胺、1，3-苯二胺、2，3-二氨基苯甲酸、 2，4-二氨基苯甲酸、2，5-二氨基苯甲酸、3，4-二氨基苯甲酸、3， 5-二氨基苯甲酸、2，3-二氨基苯甲酸甲酯、2，3-二氨基苯甲酸乙 酯、2，3-二氨基苯甲酸异丙酯、2，4-二氨基苯甲酸甲酯、2，4-二 氨基苯甲酸乙酯、2，4-二氨基苯甲酸异丙酯、3，4-二氨基苯甲酸甲 酯、3，4-二氨基苯甲酸乙酯、3，4-二氨基苯甲酸异丙酯、3，5-二 氨基苯甲酸甲酯、3，5-二氨基苯甲酸乙酯、3，5-二氨基苯甲酸异丙 酯、N，N-二甲基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺、N，N-二乙基-3，4-二 氨基苯甲酸酰胺、N，N-二丙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺、N，N-二丁 基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺、N-苯基-对-苯二胺、分散黑9、溶剂褐 色1(CI 11285)、4，4’-二氨基二苯基胺硫酸盐、4-氨基二苯基 胺-2-磺酸、N-(4’-氨基苯基)氨基苯-4-磺酸、N，N-二甲基-1， 4-苯二胺、N，N-二乙基-1，4-苯二胺、分散黄9、N-苯基-1，2-苯 二胺、1，2-苯二胺和4’-氨基乙酰苯胺和N-苯基-2-氨基苯-4-磺 酸、和N-(4’-氨基苯基)-氨基苯-4-磺酸、2，3-二氨基苯磺酸、2， 4-二氨基苯磺酸、2，5-二氨基苯磺酸、3，5-二氨基苯磺酸和3，4- 二氨基苯磺酸。

使用的萘酚包括但不限于4-氯-1-萘酚、4-溴-1-萘酚、4-甲氧 基-1-萘酚、2-亚硝基-1-萘酚、1-萘酚-3-胺磺酰、和1-萘酚-8-胺 磺酰、4，8-二磺酸基-1-萘酚、3-磺酸基-6-氨基-1-萘酚、6，8-二 磺酸基-2-萘酚、4，5-二羟基萘-2，7-二磺酸、2-氨基-8-萘酚-6-磺 酸、5-氨基-1-萘酚-3-磺酸、2-萘酚-3，6-二磺酸、1-氨基-8-萘酚- 2，4二磺酸、1-萘酚-4-磺酸、N-苯甲酰基J酸、N-苯基J酸、酸性 媒介黑3(CI 14640)、4-氨基-5-羟基-2，6-萘二磺酸、酸性黑52 (CI 15711)、宫殿铬黑6BN(CI 15705)、酸性媒介蓝黑R、酸性媒 介黑11、酸性媒介T、萘酚蓝黑、酸性黑1(CI 20470)、酸性红 176(CI 1657)、酸性红29(CI 16570)、酸性红14(CI 14720) 和1-萘酚-3-磺酸。

使用的氨基萘包括但不限于1-氨基-8-羟基萘-4-磺酸、2-氨基- 8-萘酚-6-磺酸、5-氨基-1-萘酚-3-磺酸、1-氨基-8-萘酚-2，4-二 磺酸、8-氨基-1-萘磺酸、8-苯氨基-1-萘磺酸、8-氨基-2-萘磺酸、 5-氨基-2-萘磺酸、4-氨基-5-羟基-2，6-萘二磺酸、2，3-二氨基 萘、1，5-二氨基萘、1，8-二氨基萘、6-氨基-2-萘酚、3-氨基-2-萘 酚、5-氨基-1-萘酚、酸性黑1(CI 20470)、4-氨基-1-萘磺酸、6- (对-甲苯氨基)-2-萘磺酸、1，4-二氨基-2-萘磺酸、和5，8-二氨 基-2-萘磺酸。

在实施本发明的过程中，所述材料可以同时与染色中间体、酶和 电子受体接触。在另一个技术方案中，所述材料可以与一种或两种染 色中间体接触，然后加入第二种染色中间体(可适用的)、酶和电子 受体。在另外一个技术方案中，所述材料首先与所述酶接触，然后加 入染色中间体和电子受体。

在一个优选的技术方案中，本发明的方法提供了具有至少0. 25、优选地至少1以及最优选地至少2的活化比(AR)的染料，其中 AR被定义为：AR＝(L*对照-L*酶)/L*酶，并且染色中间体的使用 总浓度为约5％o.w.g.(物品的重量)。

另一方面，本发明体供了利用本文所述方法生产的染料。

另一方面，本发明体供了含有下列物质的染色试剂盒：

(a)至少一种芳族二胺；

(b)至少一种萘酚和一种氨基萘；和

(c)一种或多种过氧化物酶和一种漆酶。

在某些技术方案中，所述试剂盒中的芳族二胺被一种磺酸(或其 盐)、一种羧酸(或其盐)、一种氨磺酰或一种季铵盐所取代。在一 个优选的技术方案中，至少一种芳族二胺、萘酚和氨基萘被一种磺酸 (或其盐)、一种羧酸(或其盐)、一种氨磺酰或一种季铵盐所取 代。在某些技术方案中，所述试剂盒中的萘酚是除α-萘酚、卤化的1- 萘酚或未被取代的二羟萘以外的任何萘酚。在某些技术方案中，(a) 所述芳族二胺被选自一种磺酸、一种羧酸、一种磺酸或羧酸的盐、一 种氨磺酰或一种季铵盐的功能基团所取代或(b)所述萘酚不是一种未 被取代的α-萘酚、卤化的1-萘酚或一种未被取代的二羟萘。在一个优 选的技术方案中，所述芳族二胺是以下物质中的一种：1，4-苯二胺、 N-苯基-p-苯二胺、N，N-二乙基-1，4-苯二胺、4-氨基二苯胺-2-磺 酸、N-(4’-氨基苯基)氨基苯-4-磺酸和2，5-二氨基苯磺酸；所述 萘酚或氨基萘是以下物质中的一种：1-萘酚-4-磺酸、N-苯基J酸、 8-氨基-1-萘磺酸、8-苯氨基-1-萘磺酸、8-氨基-2-萘磺酸和5-氨 基-2-萘磺酸；并且所述氧化酶是一种漆酶。 本发明的详述

将氧化还原酶用于材料染色具有几点明显优势。例如，在本发明 方法中采用的染色系统利用了廉价的颜料前体和偶联剂。而且，所述 方法中采用了温和条件从而降低了对织物的损害。

本发明的方法可被用来对物料如织物、纱、纤维、服装和膜进行 染色。所述材料由但不限于以下物质制得：皮、兽皮、丝或羊毛；合 成的聚酰胺如尼龙6.6或尼龙6；一种阳离子聚合物如阳离子多糖、 二醋酸酯或三醋酸纤维；一种含有高比例的纤维素如棉花、亚麻、亚 麻布、lyocel、苎麻、人造丝或粘胶丝；或一种阴离子聚合物如聚丙烯或 聚酯。可以对所述材料进行涂料、复合挤压，或者所述材料在一种紧 密混合物中与阳离子聚合物一起来进行制备。所述材料可以是一种任 何上述物质的混合物。

在实施本发明的过程中，需要进行染色的材料是被循序处理的或 者与至少两种染色中间体化合物和至少一种氧化还原酶在有适当电子 受体存在的条件下同时被处理的。至少一种染色中间体是一种芳族二 胺并且第二种染色中间体至少是一种萘酚或一种氨基萘。在某些技术 方案中，所述二胺、萘酚和/或氨基萘可以被一种或多种磺酸、羧酸、 磺酸或羧酸的盐、氨磺酰和基铵盐所取代。在某些技术方案中，羧述 萘酚是除α-萘酚、卤化的1-萘酚或未被取代的二羟萘以外的任何萘 酚。

在一个技术方案中，所述染色中间体、酶和电子受体首先被结合 在一起，然后与所述材料进行接触。在另一个技术方案中，所述染色 中间体首先被结合在一起，然后与所述材料进行接触，接着加入所述 酶和电子受体。在另一个技术方案中，所述材料首先与一种染色中间 体接触，然后循序或同时加入第二种染色中间体、酶和电子受体。在 另外一个技术方案中，所述材料首先与所述酶接触，然后同时或循序 加入染色中间体和电子受体。 染色中间体：

实施本发明过程中使用的所述染色中间体化合物(也被称作前体 和偶联化合物)包括但不限于如下所示的式A的芳族二胺、式B的萘 酚和式C的氨基萘：

其中X可独立地是氢、磺酸、一种羧酸、一种磺酸盐、一种羧酸盐、 氨磺酰或一种季胺盐；R1和R2可各自独立地是氢、C1-18-烷基、C1-18- 羟烷基、苯基、芳香基、偶氮苯、氨基苯基、被一个或多个功能基团 取代的偶氮苯，和被一个或多个功能取代的氨基苯基中的一种；并且 A、B和C芳环上的剩余位置任选地被一个或多个功能基团所取代，所 述功能基团包括但不限于氢原子、卤素原子、磺基、磺酸基 (sulfonato)、磺氨基、硫烷基(sulfanyl)、氨基、酰氨基、酰 氨芳基、硝基、偶氮基、偶氮芳基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、 羟基、碳卤基、氨基甲酰基、脲基、苯基、芳基、磷酸根、磷酰基、 C1-18-烷基、C2-18-烯基、C2-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-羧基、C1-18-氧 烷基、C1-18-烷硫基、C1-18-烷亚氨基和被一个、两个或三个C1-18-烷基 取代的氨基。在某些技术方案中，所述卤素可以是一种氟、氯、溴或 碘。

在其它技术方案中，羧述萘酚可以是一种式D化合物：

其中X可独立地是氢、磺酸、羧酸、一种磺酸盐、一种羧酸盐、氨磺 酰或一种季胺盐和D的芳环上的剩余位置是一个或多个功能基团，所述 功能基团包括但不限于氢原子、卤素原子、磺基、磺酸基 (sulfonato)、磺氨基、硫烷基(sulfanyl)、氨基、酰氨基、酰 氨芳基、硝基、偶氮基、偶氮芳基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、 羟基、碳卤基、氨基甲酰基、脲基、苯基、芳基、磷酸根、磷酰基、 C1-18-烷基、C2-18-烯基、C2-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-羧基、C1-18-氧 烷基、C1-18-烷硫基、C1-18-烷亚氨基和被一个、两个或三个C1-18-烷基 取代的氨基。在某些技术方案中，所述卤素可以是一种氟、氯、溴或 碘。

在实施本发明的过程中使用的染色中间体化合物优选地被一种水- 增溶的功能基团所取代。水溶性化合物在染色过程中容易操作并且具 有比相应的水不溶性化合物毒性小的趋势。在一系列的技术方案中， 一种或多种染色中间体化合物的水溶性功能基团与被染色的材料之间 可以形成离子键。所述材料和所述染色中间体化合物之间的离子引力 起了增强染料对所述材料的亲和力并且提高颜色的坚固度的作用。取 决于所述材料所带的离子电荷，当染色中间体携带如磺酸和羧酸基团或 其盐赋予的负电荷或者如季铵盐化合物赋予的正电荷时，则产生了离子 间的引力。

在一系列技术方案中，第一种染色中间体选自一种芳族二胺、一 种被取代的芳族二胺、一种磺化的芳族二胺、一种羧化的芳族二胺、 一种卤化的芳族二胺、一种烷氧基化的芳族二胺、一种N-烷基-取代 的芳族二胺、一种N-羟烷基-取代的芳族二胺、和一种N-芳香基取代 的芳族二胺，而第二种染色中间体选自一种被取代的萘酚、一种磺基 化的萘酚、一种氨磺酰-取代的萘酚、一种羧化的萘酚、一种萘胺、一 种被取代的萘胺、一种磺化的萘胺、一种氨磺酰-取代的萘胺或一种羧 化的萘胺。

在一个技术方案中，第一种染色中间体是一种磺化的芳族二胺、 一种羧化的芳族二胺、一种卤化的芳族二胺、一种N-烷基-取代的芳 族二胺或一种N-芳香基取代的芳族二胺；而第二种染色中间体是一种 磺基化的萘酚、一种羧化的萘酚、一种磺化的萘胺或一种羧化的萘 胺；以及所述氧化还原酶是一种过氧化物酶或漆酶。

在一个优选的技术方案中，第一种染色中间体是一种磺化的芳族 二胺或一种羧化的芳族二胺而第二种染色中间体是一种或多种萘酚， 一种取代的萘酚、一种磺基化的萘酚、一种羧化的萘酚、一种卤化的 萘酚、一种萘胺、一种取代的萘胺、一种磺化的萘胺、一种羧化的萘 胺或一种卤化的萘胺。

在实施本发明的过程中使用的染色中间体化合物包括但不限于表1 至表8中记载的那些染色中间体。 表1.基于芳族胺及其衍生物的前体化合物(I). 代码              R1             R2              R3             R4 P5                                -OH P19                               -OCH2CH3         -OCH2CH3 P30                                                -SO3H P31               -COOH P32                                                -COOH P183              -OH                                              -CH3 P184              -OCH2CH3                                         -CH3 P185              -OCH2CH2CH3                                      -CH3 P186              -O(CH2)4CH3                                      -CH3 P187              -OCH2CH2OH                                       -CH3 P188              -O(CH2)3OH                                       -CH3 P189              -O(CH2)5OH                                       -CH3 P190              -OH                       -CH3                       -CH3 P191              -OCH2CH3                  -CH3 P192              -OCH2CH2CH3               -CH3 P193              -O(CH2)4CH3               -CH3 P194              -OCH2CH2OH                -CH3 P195              -O(CH2)3OH                -CH3 P196              -O(CH2)5OH                -CH3 P197              -OCH2CH3                                             -OCH3 P198              -OCH2CH2CH3                                          -OCH3 P199              -OCH2CH2OH                                           -OCH3 P200              -O(CH2)3OH                                           -OCH3 P201              -O(CH2)5OH                                           -OCH3 P205              -OCH3 P206                                                      -OCH3 P207              -OCH2CH3 P208              -OCH3                                   -OCH3 P209                                                      -OCH2CH3 P216                           -OCH2CH2CH3                -OCH2CH2CH3 P217                           -O(CH2)4CH3                -O(CH2)4CH3 P218                           -O(CH2)5OH                 -O(CH2)5OH P219              -OH                                                  -Ph P220              -OCH2CH3                                             -Ph P221              -OCH2CH2CH3                                          -Ph P222              -O(CH2)4CH3                                          -Ph P223              -OCH2CH2OH                                           -Ph P224              -O(CH2)3OH                                           -Ph P225              -O(CH2)5OH                                           -Ph P226              -OH                                                  -OCH3 P227              -O(CH2)4CH3                                          -OCH3 Ph＝苯基 表2.基于芳族二胺及其衍生物的前体化合物(II). 代码        R1            R2           R3                    R4 P1                                       -NH2 P3          Cl                           -NH2 P16         -NH2                         -COOH P17                        -NH2                                 -COOH P46                                      -N＝N-Ph-4-N(CH2CH2OH)2 P74                                      -NH-Ph-NH2 P75                                      -NH-Ph P78                                      -N(CH3)2 P79                                      -N(CH2CH3)2 P80                                      -N＝N-Ph-4-(NO2) P81                                      -NH-Ph-2，4-(NO2)2 P83         -NH-Ph P182                       -SO3H         -NH-Ph P203                       -SO3H         -NH2 P230        -NH-Ph-2-(SO3H) P231        -NH-Ph-3-(SO3H) P236                                     -NH-Ph-2-(NO2)-4-(SO3H) P247                                     -NH-Ph-4-(OCH3) P248        -OCH3                        -NH-Ph P276        -NH-Ph-4-(SO3H) P284                                     -NH-Ph-4-(SO3H) Ph＝苯基 表3.基于酚衍生物的前体化合物(III). 代码               R1             R2            R3         R4 P9                                 -OH            -Cl P10                -OH             -OH P11                                -OH P12*               -OH P13                -CH＝CHCOOH P14                                -CH＝CHCOOH P15                                               -CH＝CHCOOH P20                -OH                            -CHO 表4.基于1-萘酚及其衍生物的偶联化合物(IV). 代码        R1      R2      R3      R4      R5      R6      R7 P8 P18                  -Cl P28         -NH2              -SO3H P29         -OH                        -SO3H    -SO3H P33                                             -SO3H    -NH2 P36         -NH2              -SO3H                      -SO3H P37                 -SO3H P38                                   -NH2      -SO3H P40                                   -NHCO-Ph  -SO3H P41                                   -NH-Ph    -SO3H P62                           -OH  P286                                            -COOH P292                -Br P293                -OCH3 P294                                            -NO P295                                  -SO2NH2 P296        -SO2NH2 P297                                  -SO3H 表5.基于2-萘酚衍生物的偶联化合物(V). 代码            R1                   R2 P35             -SO3H                 -SO3H P44             -COOH P45             -CONH-Ph P47             -CONH-Ph-2-OCH3 P48             -CONH-PH-2-OC2H5 P49             -CONH-Ph-2-CH3-5-Cl P50             -CONH-Ph-3-NO2 P51             -CONH-Ph-2-CH3 P63                                   -OH P64             -OH 表6.基于1-氨基萘衍生物的偶联化合物(VI). 代码      R1     R2     R3     R4     R5     R6     R7     R8 P34                               -OH             -SO3H P39       -SO3H P42*              -SO3H P43                       -SO3H P53       -OH             -SO3H                   -SO3H P68       -NH2 P287      -SO3H                                                   -Ph P288      -SO3H                                                   -Ph-4-(CH3) P289                                     -NH2             -SO3H P290             -SO3H                   -NH2 P291                                     -SO3H Ph＝苯基 表7.基于蒽醌衍生物的偶联化合物(VII). 代码        R1      R2      R3      R4      R5 P98         -OH      -OH P100        -NH2 P101 P102                 -OH                         -OH P103       -OH                -OH P112       -OH                -OH 表8.基于吡啶衍生物的偶联化合物(VIII). 代码        R1       R2       R3       R4 P104                  -CONH2 P105                  -COOH P120        -OH                 -COOH     -OH

本发明还涉及法国专利FR2112549V中记载的芳族二胺及其衍生 物。

适用于本发明的染色中间体化合物的实例包括但不限于： 3，4-二乙氧苯胺， 2-甲氧-对-苯二胺， 1-氨基-4-b-甲氧乙基氨基苯

  (N-b-甲氧乙基对-苯二胺)， 1-氨基-4-双-(b-羟乙基)-氨基苯

  (N，N-双-(b-羟乙基)-对-苯二胺)， 2-甲基-1，3-二氨基-苯(2，6-二氨基甲苯)， 2，4-二氨基甲苯， 2，6-二氨基吡啶， 1-氨基-4-磺酸基-苯， 1-N-甲基磺酸基-4-氨基苯， 1-甲基-2-羟基-4-氨基-苯(3-氨基邻甲酚)， 1-甲基-2-羟基-4-b-羟乙基氨基-苯

  (2-羟基-4-b-羟乙基氨基-苯)， 1-羟基-4-甲氨基-苯(p-甲氨基酚)， 1-甲氧基-2，4-二氨基-苯(2，4-二氨基苯甲醚)， 1-乙氧基-2，3-二氨基-苯(2，4-二氨基苯乙醚)， 1-b-羟乙氧基-2，4-二氨基-苯  (2，4-二氨基苯氧基乙醇)， 1，3-二羟基-2-甲苯(2-甲基间苯二酚)， 1，2，4-三羟基苯， 1，2，4-三羟基-5-甲基苯(2，4，5-三羟基甲苯)， 2，3，5-三羟基甲苯， 4，8-二磺酸基-1-萘酚， 3-磺酸基-6-氨基-1-宁酚(J酸)， 6，8-二磺酸基-2-萘酚， 1，4-苯二胺， 2，5-二氨基甲苯， 2-氯-1，4-苯二胺， 2-氨基酚， 3-氨基酚， 4-氨基酚， 1，3-苯二胺， 1-萘酚， 2-萘酚， 4-氯间苯二酚， 1，2，3-苯三醇(1，2，3-三羟基苯)， 1，3-苯二醇(间苯二酚)， 1，2-苯二醇(邻苯二酚)， 2-羟基-肉硅酸， 3-羟基-肉硅酸， 4，-羟基-肉硅酸， 2，3-二氨基苯甲酸， 2，4-二氨基苯甲酸， 2，5-二氨基苯甲酸， 3，4-二氨基苯甲酸， 3，5-二氨基苯甲酸， 2，3-二氨基苯甲酸甲酯， 2，3-二氨基苯甲酸乙酯， 2，3-二氨基苯甲酸丙酯， 2，4-二氨基苯甲酸甲酯， 2，4-二氨基苯甲酸乙酯， 2，4-二氨基苯甲酸异丙酯， 3，4-二氨基苯甲酸甲酯， 3，4-二氨基苯甲酸乙酯， 3，4-二氨基苯甲酸异丙酯， 3，5-二氨基苯甲酸甲酯， 3，5-二氨基苯甲酸乙酯， 3，5-二氨基苯甲酸异丙酯， N，N-二甲基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺， N，N-二乙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺， N，N-异丙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺， N，N-二丁基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺， 4-氯-1-萘酚， N-苯基-对-苯二胺， 3，4-二羟基苯甲醛， 吡咯 吡咯-2-异咪唑， 1，2，3-三唑， 苯并三唑， 苯并咪唑， 咪唑， 吲哚， 1-氨基-8-羟基萘-4-磺酸(S酸)， 4，5-二羟基萘-2，7-磺酸(颜色酸)， 邻氨基苯甲酸4-对氨基苯甲酸(PABA)， 2-氨基-8-萘酚-6-磺酸(α酸)， 5-氨基-1-萘酚-3-磺酸(M酸)， 2-萘酚-3，6-磺酸(R酸)， 1-氨基-8-萘酚-2，4-磺酸(芝加哥酸)， 1-萘酚-4-磺酸(奈温酸)， 8-氨基-1-萘磺酸(迫位酸)， 8-苯氨基-1-萘磺酸(N-苯基迫位酸)， N-苯甲酰基J酸， N-苯基J酸， 8-氨基-2-萘磺酸(1，7-克烈氏酸)， 5-氨基-2-萘磺酸(1，6-克烈氏酸)， 3-羟基-2-萘甲酸(β-萘酚酸)， 萘酚AS，偶氮化物2(CI 37505)， 分散黑9， 萘酚AS OL，偶氮化物20(CI 37530)， 萘酚AS PH，偶氮化物14(CI 37558)， 萘酚AS KB，偶氮化物21(CI 37526)， 萘酚AS BS，偶氮化物17(CI 37515)， 萘酚AS D，偶氮化物18(CI 37520)， 萘酚AS Bl， 酸性媒介黑3 CI 14640(酸性媒介蓝黑B)， 4-氨基-5-羟基-2，6-萘磺酸(H酸)， 油溶褐色RR溶剂褐色1(Fat Brown RR Solvent褐色1)(CI 11285)， 氢醌， 苦杏仁酸， 三聚氰胺， 邻-硝基苯甲醛， 1，5-二羟基萘， 2，6-二羟基萘， 2，3-二羟基萘， 苄咪唑， 2，3-二氨基萘， 1，5-二氨基萘， 1，8-二氨基萘， 水杨酸， 3-氨基水杨酸， 4-氨基水杨酸， 5-氨基水杨酸， 3-氨基水杨酸甲酯， 1-4-氨基水杨酸甲酯， 5-氨基水杨酸甲酯， 3-氨基水杨酸乙酯， 4-氨基水杨酸乙酯， 5-氨基水杨酸乙酯， 3-氨基水杨酸丙酯， 4-氨基水杨酸丙酯， 5-氨基水杨酸丙酯， 水杨酸酰胺， 4-氨基苯硫酚， 4-羟基苯硫酚， 苯胺， 4，4’-二氨基二苯胺硫酸酯， 4-苯基偶氮苯胺， 4-硝基苯胺， N，N-二甲基-1，4-苯二胺， N，N-二乙基-1，4-苯二胺， 分散橙3， 分散黄， 分散蓝1 N-苯基-1，2-苯二胺， 6-氨基-2-萘酚， 3-氨基-2-萘酚， 5-氨基-1-萘酚， 1，2-苯二胺， 2-氨基嘧啶， 4-氨基喹哪啶， 2-硝基苯胺， 3-硝基苯胺， 2-氯苯胺， 3-氯苯胺， 4-氯苯胺， 4-(苯偶氮基)间苯二酚(苏丹橙G，CI 11920) 苏丹红B，CI 26110 苏丹红7B，CI 26050 4’-氨基乙酰苯胺 茜素， 1-蒽胺(1-氨基蒽)， 1-氨基蒽醌， 蒽醌， 2，6-二羟基蒽醌(蒽黄酸)， 1，5-二羟基蒽醌(蒽绛酚)， 3-氨基吡啶(烟酰胺)， 吡啶-3-羧酸(烟酸)， 酸性媒介黄1，茜素黄GG，CI 14025， 考马斯灰，酸性黑48，CI 65005， 宫殿坚黑WAN，酸性黑52，CI 15711， 宫殿铬黑6BN，CI 15705，酸性媒介蓝黑R， 酸性媒介黑11，羊毛铬黑T， 萘酚蓝黑，酸性黑1，CI 20470， 1，4-二羟基蒽醌(醌茜)， 4-羟基香豆素， 伞形酮，7-羟基香豆素， 七叶亭，6，7-二羟基香豆素， 香豆素， 铬变素2B酸性红176，CI 16575， 铬变素2R酸性红29，CI 16570， 铬变素FB酸性红14，CI 14720， 2，6-二羟基异烟酸，柠嗪酸 2，5-二氯苯胺， 2-氨基-4-氯甲苯 2-硝基-4-氯甲苯 2-甲氧基-4-硝基苯胺和 对-溴酚。 酶氧化体系

在本发明的方法中，所述染色中间体化合物可以被一种(a)过氧 化氢源和一种具有过氧化物酶活性的酶或(b)一种对所述混合物中的至 少一种化合物具有氧化酶活性的酶所氧化。具有过氧化物酶活性的酶 包括但不限于过氧化物酶(EC 1.11.1.7)和卤化过氧化物酶，例如 氯-(EC 1.11.1.10)、溴化-(EC 1.11.1)和碘化过氧化物酶(EC 1.11.1.8)。具有氧化酶活性的酶优选地是铜氧化酶(例如蓝铜氧 化酶)，其包括但不限于胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)、儿茶酚氧 化酶(EC 1.10.3.1)、漆酶(EC 1.1 0.3.2)、邻-氨基酚氧化酶 (EC 1.10.3.4)、多元酚氧化酶(EC 1.10.3.2)、抗坏血酸盐 氧化酶(EC 1.10.3.3)和血浆铜蓝蛋白。测定这些酶活性的分析方 法对于本技术领域的普通技术人员来说是已知的。

但本发明采用一种或多种酶是氧化酶时，必须使用一种氧源，例 如空气。在一个技术方案中，通过简单地向与酶接触的溶液中通气来 供给氧。

还可通过化学方法供给氧。例如，氧可以通过过氧化氢、无机过 氧化物和有机过氧化物的分解来供给。合适的无机和有机过氧化物已 被记载在，例如Kirk-Othmer化学技术百科全书，第18卷，第4版， John Wiley & Sons，Inc.，纽约，1995，202-310页中。产生氧的 过氧化物的分解反应可以在有以下物质存在的条件下被催化：包括亚 铁离子、铁离子、一价铜离子、二价铜离子在内的金属离子、铬酸 盐、重铬酸盐、钼酸盐、钨酸盐和钒酸盐；卤素离子；和包括铜、低 碳钢、铁、银、钯、铂和铁、铅、镍、锰和汞的氧化物在内的催化表 面(Kirk-Othmer化学技术百科全书，第13卷，第4版，John Wiley和Sons，公司，纽约，1995，964965页)。还可以通过在有 过氧化氢酶(E.C.1.11.1.6)存在的条件下处理过氧化氢来提供 氧。

当本发明采用的酶是一种过氧化物酶时，必须使用一种过氧化氢 源，诸如过氧化氢本身。所述过氧化氢源可以在过程开始或过程中， 以例如大约0.001-100mM，有选地0.01-50mM的浓度加入。

一种过氧化氢源包括过氧化氢前体，诸如一种过硼酸盐或一种过 碳酸盐。另一种过氧化氢源包括能够将分子氧和一种有机或无机底物 分别转化为过氧化氢和被氧化的底物的酶。这些酶只产生低浓度的过 氧化氢，但是它们在本发明的方法中被采用是有利的，这是因为过氧 化物酶能够确保对所产生的过氧化氢的有效利用。能够产生过氧化氢 的酶的实例包括单不限于葡萄糖氧化酶、尿酸盐氧化酶、半乳糖氧化 酶、醇氧化酶、胺氧化酶、氨基酸氧化酶和胆固醇氧化酶。

所述漆酶可以是一种植物、微生物、昆虫或哺乳动物的漆酶。

在一个技术方案中，所述漆酶是一种植物漆酶，例如，所述漆酶 可以是紫胶漆、芒果、绿豆、桃树、松树、杨树、杏梅、悬铃木或烟 草漆酶。

在另一个技术方案中，所述漆酶是一种昆虫漆酶。例如，所述漆 酶可以是一种家蚕蛾属、丽蝇属、Diploptera、果蝇属、绿蝇属、 Manduca、家蝇属、蛀犀金龟属、凤蝶属、Phorma、Rhodnius、麻 蝇属、沙漠蝗属或粉甲属漆酶。

所述漆酶优选地是一种微生物漆酶，诸如一种细菌或一种真菌漆 酶。细菌漆酶包括但不限于一种醋杆菌属、不动杆菌属、土壤杆菌 属、产碱杆菌属、节杆菌属、固氮螺菌属、固氮杆菌属、芽孢杆菌 属、Comamonas、梭状芽孢杆菌属、葡糖杆菌属、盐杆菌属、分枝杆 菌属、根瘤菌属、沙门氏菌属、沙雷氏菌属、链霉菌属、大肠杆菌、 假单胞菌属、Wolinella或甲基营养菌漆酶。

在一个技术方案中，所述漆酶是一种产脂固氮螺杆菌漆酶。

在另一个技术方案中，所述漆酶是一种真菌漆酶。真菌漆酶包括 但不限于酵母菌漆酶如假丝酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、酵 母属、裂殖酵母属或Yarrowia漆酶；或丝状真菌漆酶如支顶饱属、 蘑菇属、Antrodiella、蜜环菌属、曲霉属、短梗霉属、烟管菌属、 葡萄孢属、下皮黑孔属、毛壳菌属、金钱菌属、鬼伞属、隐球酵母 属、Cryphonectria、弯孢霉属、黑蛋巢菌属、迷孔菌属、 Filibasidium、层孔菌属、镰孢霉属、地霉属、Halosarpheia、腐 质霉属、Junghuhnia、乳菇属、香菇属、Magnaporthe、丛梗孢属、 Monocillium、毛霉属、毁丝霉属、Neocallima污迹ix、脉孢菌 属、拟青霉属、革耳属、青霉属、Phanerochaete、木层孔菌属、射 脉菌属、鳞伞属、丝核菌属、硬孔菌属、裂褶菌属、小核菌属、 Scytalidium、粪壳属、侧孢霉属、壳多孢属、Talaromyces、嗜热 子囊菌属、梭孢壳属、Tolypocladium或木霉属漆酶。

优选地，所述酶是一种获自于以下菌属的酶：曲霉属、葡萄孢 霉、金钱菌属、层孔菌属、香菇属、毁丝菌属、脉孢菌属、侧耳属、 丙孢壳属、多孔菌属(栓霉属)、Scytalidium和丝核菌属。

在一系列的技术方案中，所述漆酶获自于以下菌种：灰盖鬼伞， Humicola brevis var.thermoidea，Humicola brevispora， Humicola grisea var.thermoidea，Humicola insolens，和 Humicola lanuginosa(也被认为是Thermomyces lanuginosus)， 嗜热毁丝霉菌，Myceliophthora vellerea，Polyporus pinsitus (也被认为是Trametes villosa)，Scytalidium thermophila， Scytalidium indonesiacum，和嗜热圆酵母。所述漆酶可以获自于 Scytalidium 的其它菌种如Scytalidium acidophilum， Scytalidium album，Scytalidium aurantiacum，Scytalidium circinatum，Scytalidium flaveobrunneum，Scytalidium hyalinum，Scytalidium lignicola，和Scytalidium uredinicolum。所述漆酶可以获自于多孔菌属的菌种如环带多孔菌， Polyporus alveolaris，Polyporus arcularius，Polyporus australiensis，Polyporus badius，二形多孔菌、冬生多孔菌， Polyporus ciliatus Polyporus colensoi，Polyporus eucalyptorum，Polyporus meridionalis，黑柄多孔菌，Polyporus palustris，喜根多孔菌，Polyporus rugulosus，鳞多孔菌，块茎形 多孔菌，和Polyporus tumulosus。所述漆酶还可获自于丝核菌属的 菌种，例如立枯丝核菌。所述漆酶还可以是一种I型(T1)铜位点的至 少一个氨基酸残基被改构的漆酶，其中所述被改构的氧化酶具有不同 于野生型氧化酶的pH和/或特异活性。例如，所述被改构的漆酶可以 在T1铜位点的片段(a)中被进行改构。

所述过氧化物酶可以是一种植物，微生物，昆虫或哺乳动物的过 氧化物酶。

可用于本发明目的的过氧化物酶可以从植物(例如辣根过氧化物 酶和大豆过氧化物酶)或微生物如真菌或细菌中分离和生产。一些优 选的真菌包括属于半知菌亚门丝孢纲，例如镰孢霉属，腐质霉属，木 霉属，漆斑霉属，轮枝孢属，Arthromyce，卡尔黑霉属，Ulocladium， Embellisia，枝孢属或Dreschlera，特别是尖镰孢(DSM 2672)， Humicola insolens，Trichoderma resii，Myrothecium verrucana(IFO 6113)，黄萎轮枝孢，大丽花轮枝孢，Arthromyces ramosus(FERM P-7754)，Caldariomyces fumago，Ulocladium chartarum，Embellisia alli或Dreschlera halodes的菌株。

其它优选的真菌包括属于Basidiomycotina亚门担孢子菌纲，例 如鬼伞属，Phanerochaete，革盖菌属或栓菌属，特别是灰盖鬼伞f. microsporus(IFO 8371)，长根鬼伞，Phanerochaete chrysosporium(e.g.，NA-12)或采绒革盖菌(例如，PR4 28-A) 的菌株。

更优选的真菌包括属于Zygomycotina亚门Myc橙黄色ceae纲， 例如根霉属或毛霉属，特别是冻土毛霉的菌株。

一些优选的细菌包括放线菌目，例如浑球链霉属(ATTC 23965)， 嗜热链霉菌属(IFO 12382)或轮丝镰轮丝菌。

其它优选的细菌包括短小芽孢杆菌(ATCC 12905)，嗜热脂肪芽孢 杆菌，类球红细菌，Rhodomonas palustri，乳链球菌，Pseudomonas purrocinia(ATCC 15958)或荧光假单孢菌(NRRL B-11)。

B.C.Saunders等， op.cit.，41-43页中列举了过氧化物酶的 其它可能性来源。

用于本发明的酶的生产方法被记载在现有技术中，例如FEBS通讯 (FEBS Letters)1625，173(1)，应用和环境微生物学(Applied and Environmental Microbiology)，1985年2月，273-278页， 应用微生物学。生物技术(Applied Microbiol.Biotechnol).26， 1987，158-163页，生物技术通讯(Biotechnology Letters)9 (5)，1987，357-360页，自然(Nature)326，1987年4月2日， FEBS通讯(FEBS Letters)4270，209(2)，321页，EP 179 486， EP 200 565，GB 2 167 421，EP 171 074，和农业生物化学 (Agric.Biol.Chem).50(1)，1986，247页。

特别优选的酶是那些在以下pH范围内具有活性的酶：约2.5至约 12.0，优选地约4至约10，更优选地约4.0至约7.0或约7.0至约 10.0。这种酶可以通过筛选由嗜碱性微生物产生的相关酶来分离得 到，例如利用R.E.Childs和W.G.Bardsley，生物化学杂志 (Biochem.J).145，1975，93-103页中记载的ABTS分析方法。

其它优选的酶是那些具有良好的嗜热稳定性以及相对通用的染色 添加剂如非离子的，阳离子的或阴离子的表面活性剂，鳌合剂，聚合 物等具有良好稳定性的酶。

所述酶可以是野生型(即天然的)酶，或者是可以天然产生的或 者是相对野生型亲本发生了取代、缺失和/或插入的重组变异体。所述 酶可以是融合蛋白或者可以是合成的、被改组的或被设计的蛋白。这 种蛋白可以由用于体内或体外诱变和基因构建的常规方法来生产。

所述酶，无论是野生型还是变异体，都可以由包括以下步骤的方 法来生产：(a)在所述酶能够表达的条件下利用一种培养基培养一种 被一种重组DNA载体转化的宿主细胞，该载体含有编码所述酶的DNA 序列以及编码使得编码所述酶的DNA序列能够表达的DNA功能序列； (b)从培养物中回收所述酶。

一种编码所述酶的DNA片段可以，例如通过下列步骤来进行分 离：建立一种产生所述目的酶的微生物如上述的一种微生物的cDNA或 基因文库，通过以下常规方法来筛选阳性克隆：如通过与在所述酶的 全长或部分氨基酸序列的基础上合成的寡聚核苷酸探针进行杂交，或 者通过筛选表达所述合适酶活性的克隆，或者通过筛选产生一种与抗 天然酶的抗体发生反应的蛋白的克隆。

在利用重组DNA技术进行序列操作前或后，一旦被筛选出来，DNA 就可以被插入到一种合适的可复制表达的载体中，该载体含有合适的 能够使所述酶在一种特定的宿主微生物中表达的启动子、操纵子和终 止子序列，以及一个使得所述载体在所述宿主微生物中进行复制的复 制起始点。

然后将得到的表达载体转入一种合适的宿主细胞如真菌细胞中， 优选的真菌实例是曲霉属的菌种，最优选的是米曲霉或黑曲霉的菌 种。真菌细胞可以通过一种包括以下步骤的方法来进行转化：原生质 体的形成和原生质体的转化，然后以一种本身已知的方法进行细胞壁 的再生。以曲霉属的菌种作为宿主微生物被记载在EP 238,023(Novo Indu污迹ri A/S的)中，所述内容被引入本文作为参考。

或者，所述宿主微生物可以是一种细菌，特别是链霉菌属、杆菌 属或大肠杆菌的菌种。细菌细胞的转化可以按照常规方法，例如 T.Maniatis等，分子克隆.实验指南(Molecular Cloning.A Laboratory Manual)，冷泉港，1982中记载的方法来进行。

合适DNA序列的筛选和载体的构建还可以通过标准的方法来进 行，参考T.Maniatis等.，op.Cit。

用于培养被转化的宿主细胞的培养基可以是任何适合于所述宿主 细胞生长的常规培养基。所表达的酶可以被适当地分泌到所述培养基 中并且可以通过已知方法从所述培养基中进行回收，然后进行色谱操 作如离子交换层析、亲和层析等，所述已知方法包括步骤：通过离心 或过滤从培养基中分离细胞，利用一种盐如硫酸铵沉淀所述培养基中 的蛋白质组分。 染色方法：

在一系列的技术方案中，将要被染色的材料首先浸泡在一种含有 染色中间体化合物的水溶液中，然后在一种含有(a)一种过氧化氢源 和一种具有过氧化物活性的酶或(b)一种对至少一种染色中间体化合 物具有氧化酶活性的酶的水溶液中处理被浸泡的材料。相同的水溶液 可以被用来浸泡和染色所述材料。在其它系列的技术方案中，将要被 染色的材料同时与一种含有染色中间体化合物、氧化酶和电子受体的 水溶液接触。在另一系列的技术方案中，将要被染色的材料与一种染 色中间体接触，然后与第二种染色中间体、酶和电子受体接触。在另 一系列的技术方案中，将要被染色的材料与所述酶接触，然后加入所 述染色中间体和电子受体。

所述染色中间体的常规使用量是：约0.05％至15％的商品重量(o. w.g.)，优选地约0.1％至10％o.w.g.，以及更优选地约0.5％至8％ o.w.g.。

在本发明方法中用于材料染色的水溶液即染料液体中的水(“液 体”或“浴液”)：材料的比率(重量比)为约0.5∶1至约200∶1，优 选地约1∶1至30∶1，和最优选地约5∶1至约20∶1。

在一个技术方案中，利用刷子、印染网板、刻度滚子或任何本技 术领域已知的应用技术将含有至少一种染色中间体化和物的粘膏涂在 要被染色的材料上以便获得一种所述材料的样品。任选地将所述材料 进行干燥。然后，采用一种含有(a)一种过氧化氢源和一种具有过氧 化物活性的酶或(b)一种对至少一种染色中间体化合物具有氧化酶活 性的酶的水溶液(如果所述粘膏中没有合适的染色中间体化和物，还 需含有至少一种合适的染色中间体化合物)处理所述材料。可以使用 本技术领域已知的聚合物增稠剂来制备所述粘膏。

在本发明的方法中，所述材料在以下温度范围和pH范围内被染 色：约5至约120℃，优选地约30至约100℃，更优选地约50至约 100℃，和最优选地约60至约95℃；pH约2.5至约12，优选地约4 至约10，更优选地约4.0至约7.0或约7.0至约10.0。在一些技术 方案中，采用了低于6.5(例如，范围是3-6的pH，优选地范围是4- 6的pH和最优选地范围是4.5-5.5的pH)或高于8.0的pH(例如， 范围是8-10的pH，优选地范围是8.5-10的pH和最优选地范围是 9-10的pH)。令人惊奇地是，在pH低于6.5和高于8.0下通过本发 明的方法进行染色的材料的颜色不同于通过pH范围是6.5-8.0的方 法进行染色的相同材料的颜色。在一个技术方案中，分别采用了接近 所述酶的最适温度和pH的温度和pH。

在一些技术方案中，本发明的方法包括向所述水溶液中加入一种 单或二价离子(0-3M，优选地25mM-1M)；一种聚合物(0-50g/l， 优选地1-500mg/l)；和一种表面活性剂(0.01-5g/l)，所述离子 包括但不限于钠、钾、钙和镁离子，所述聚合物包括但不限于聚乙烯 吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚天冬氨酸、聚乙烯酰胺、聚乙烯氧化物。

有用的表面活性剂包括但不限于阴离子表面活性剂如羧酸盐，例 如一种长链脂肪酸的金属羧酸盐；N-酰肌氨酸；磷酸与脂肪醇乙氧化 物的单或二酯或该酯的盐；脂肪醇硫酸盐如十二烷基硫酸钠、十八烷 基硫酸钠或十六烷基硫酸钠；乙氧基化脂肪醇硫酸酯；乙氧基化烷基 酚硫酸酯；木质素磺酸酯；石油磺酸酯；烷基芳基磺酸酯如烷基苯磺 酸酯或低级烷基萘磺酸酯，例如丁基-萘磺酸酯；磺化的萘-甲醛缩合 物的盐；磺化的酚-甲醛缩合物的盐；或更复杂的磺酸酯如酰胺磺酸 酯，例如油酸和N-甲基牛磺酸或磺基琥珀酸二烷基酯，例如磺酸钠或 琥珀酸二辛酯的磺化缩合产物。这种表面活性剂的其它实例是非离子 表面活性剂如脂肪酸酯、脂肪醇、脂肪酸酰胺或脂肪烷基或烯基取代 的酚与乙烯氧化物的缩合产物，乙烯氧化物和丙烯氧化物、炔乙二醇 如2，4，7，9四乙基-5-癸炔-4，7-二醇或乙氧基化的炔乙二醇的嵌 段共聚物。这种表面活性剂的其它实例是阳离子表面活性剂如脂肪族 的单、二或多元胺如乙酸酯、环烷酸酯或油酸酯；含氧胺如一种聚氧 乙烯烷基胺的胺氧化物；通过一种羧酸与二或多元胺缩合制备的连接 酰胺的胺；或季铵盐。

本发明的方法进一步包括向所述水溶液中加入一种能够增强具有 过氧化物酶活性的酶或具有氧化酶活性的酶的活性的试剂。增强剂是 本技术领域已知的。例如，WO 95/01426中记载的有机化合物已知被 用来增强漆酶的活性。而且，WO 94/12619和WO 94/12621中记载 的化合物已知被用来增强过氧化物酶的活性。

本发明的方法进一步包括同时或循序采用一种或多种预先形成的 适用于所述材料的传统染料处理所述材料。预先形成的传统染料是染 色领域的普通技术人员已知的。如“着色剂和辅剂”，第一卷，John Shore，编辑，染色师和着色师协会(Society of Dyers and Colorists)，1990，第一章和后面的章节中所记载的，传统染料的 实例是酸性的、碱性的、直接的、分散的、媒染的、色素、反应的、 溶解的和还原的。被化学分类的传统染料的实例包括非金属处理的偶 氮、金属配位偶氮、噻唑、1，2二苯乙烯、蒽醌、靛青类、喹啉并邻 羧基苯乙酮(quinophthalone)、氨基酮、酞青染料、甲、次甲 基染料、亚硝基染料、三芳甲烷、占吨染料、吖啶染料、吖嗪、恶嗪 和噻嗪。属于这些种类染料的特定实例及其建议的应用方法在染料国 际索引(Colour Index International)，第三版，染色师和着色 师协会(Society of Dyers and Colourists)，CD-ROM版本， AATCC Box 12215，Research Triangle Park，N.C.27709中 找到。例如在每年由美国纺织品化学师和着色师协会出版的AATCC购 物指南(AATCC Buyer’s Guide)，P.O.Box 12215，Research Triangle Park，N.C.27709中可以查找到特定的商品染料。除采 用本发明方法处理外还采用所述传统染料对一种材料进行处理的方法 为材料颜色的调节提供了一种手段，如可能被用于颜色深浅程度的调 配。在一个优选的技术方案中，所述传统染料适用于采用本发明方法 进行处理的相同过程中。

本发明的方法进一步包括采用一种或多种染色辅剂处理所述材 料。染色辅剂包括但不限于电解质，螯合剂，例如缩聚磷酸盐，分散 剂，例如木质素磺酸盐和甲醛-芳基磺酸缩合产物，增溶剂，均染剂， 例如聚(氧乙烯)加合物和两性内铵盐式化合物，抑止剂，增稠剂， 例如瓜尔胶和羧甲基纤维素，迁移抑制剂，水溶助剂，例如尿素，合 成鞣剂，甲醛，金属盐，例如硫酸铜(II)和重铬酸钠，阳离子表面 活性剂，例如，季铵盐化合物，甲醛-三聚氰胺缩合产物，多元胺-氰 尿酰氯缩合产物，氯烷烃-聚(乙烯亚胺)缩合产物，环氧氯丙烷，碱 性洗涤剂，例如具有橄榄油的碳酸钠，泡沫剂，例如十二烷基硫酸 钠，十二烷基硫酸铵，二辛基磺基琥珀酸钠，十二烷基醇聚(氧乙 烯)，癸基醇聚(氧乙烯)，和十三烷基醇聚(氧乙烯)，消泡剂， 例如聚(二甲基硅氧烷)，润滑剂，软化剂，抗静电剂，土壤释放 剂，土壤驱除剂和荧光增白剂。染色辅剂通常针对被染色材料的类型 来进行特殊配制。有效的染色辅剂的其它实例由“着色剂合辅剂 (Colorants and Auxiliaries)”，第二卷，John Shore，编辑， 染色师和着色师协会(Society of Dyers and Colourists)， 1990，具体地第10和12章给出。在一个优选的技术方案中，所述 染色辅剂增加了通过本发明方法处理的材料的染色深度和色牢度。

本发明提供了酶染色方法，该染色方法的效力可以通过测定活化 比(AR)来进行监控，其为对照品与酶处理样品之间颜色深度差异的 标准测量方法。AR由公式(1)表示。 AR＝(L*对照-L*酶)/L*酶             公式(1) 其中L*是CIEL*a*b*颜色协调系统中的亮度测量值。当所述染色系统 在加入酶之前一直保持基本无色时，则可获得一个高活化比。具有低 活化比的染色系统不产生或只产生有限的颜色(即使在有酶存在的条 件下)，或者在没有酶存在的条件下(通过自动氧化作用)产生与有 酶存在的条件下近乎同一水平的颜色。

在本发明中，产生暗色的高活化比染色系统是优选的，因为这些 系统比产生暗色的但活化比低的系统更稳定并且更容易处理和包装。 活化比(AR)大于1(当所述染色中间体的使用总量大约为5％o.w. G时)表明对照品相对经酶处理的织物之间颜色深度差别明显，并且 通常表明经对照处理的织物上没有颜色形成。

本发明的方法优选地提供了大于约0.25(当所述染色中间体的使 用总量大约为5％o.w.G时)，更优选地大于约1，和最优选地大于 约2的AR值。

在本发明中，最优选的染色系统是那些产生高活化比和良好的色 牢度以及容易进行化学处理的染色系统。 染色试剂盒

本发明提供了用于材料染色的试剂盒。所述试剂盒包括：

(a)至少一种芳族二胺；

(b)至少一种选自萘酚和氨基萘的化合物；和

(c)一种选自过氧化物酶和漆酶的酶。

在一些技术方案中，试剂盒中的芳族二胺被一种磺酸(或其 盐)，一种羧酸(或其盐)，一种氨磺酰或一种季铵盐所取代。在一 些技术方案中，试剂盒中的萘酚是除的α-萘酚、卤化的1-萘酚或未被 取代的二羟萘以外的任何萘酚。

在优选的技术方案中，(a)中所述芳族二胺是一种：1，4-苯二 胺，N-苯基-p-苯二胺，N，N-乙基-1，4-苯二胺，4-氨基二苯氨-2- 磺酸，N-(4’-氨基苯基)氨基苯基-4-磺酸，和2-5-二氨基苯磺酸； (b)中的所述化合物是以下化合物中的一种：1-萘酚-4-磺酸，N-苯基 J酸，8-氨基-1-萘磺酸，8-苯氨基-1-萘磺酸，8-氨基-2-萘磺酸， 和5-氨基-2-萘磺酸；以及所述酶是漆酶。

所述试剂盒还可包括稳定所述组分的合适缓冲液以及使用所述组 分进行材料染色的说明书。

通过以下实施例进一步说明本发明。 方法

用作缓冲液的化学制剂和底物都是商品。从Crompton和 Knowles颜料有限公司(Crompton & Knowles Colors Incorp橙黄 色ted)，Charlotte，NC 28233获得商用润湿剂Intravon FW 75， 染色辅剂Intratex CWR，和表面活性剂Intravon NF。从 Testfabrics，Inc.，West Pittston，PA 18643获得526型精纺 羊毛法兰绒，530型绿化羊毛和1型多纤维织物(含有纺成的醋酸纤 维素酯，漂白的棉花，纺成的尼龙6.6，纺成的蚕丝，纺成的粘胶丝 和精纺的羊毛)。522型精纺的羊毛华达呢从Textile Innovators Corporation，Windsor，NC 27983获得。 漆酶的活性测定

通过在有氧条件下氧化丁香醛连氮来测定漆酶活性。在530nm下 通过分光光度法测定产生的紫色。所述分析条件是19μM的丁香醛连 氮，23.2Mm的醋酸盐缓冲液，pH5.5或pH7.5，30℃以及1分钟 反应时间。一个漆酶单位是在给定的分析条件下每分钟催化1μmole 丁香醛连氮进行转化反应的酶量。为了在pH5.5下进行测量，所述 活性单位被标记为LACU。为了在pH7.5下进行测量，所述活性单位 被标记为LAMU。 过氧化物酶活性的测定

一个过氧化物酶单位(POXU)是在下列分析条件下每分钟催化 1μmol过氧化氢进行转化反应的酶量：0.88mM过氧化氢，1.67mM 2，2’-连氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐)，0.1M磷酸盐缓冲 液(含有Triton X405(1.5g/1000ml))，pH7.0，在30℃下温 育，然后418nm(ABTS的消光系数被设置在3.6I/mmol*mm)下进 行光度测定。 色牢度的评价

通过染色，对被染色的织物的颜色和色牢度进行了评价。参数 ″L″，″a″，and″b″和K/S被用来对颜色强度进行定量并且这些参数对 于颜料科学领域的普通技术人员来说是熟知的。参见，例如 Billmeyer和Saltzman，颜料技术的原理(Principles of Color Technology)，第二版，John Wiley和Sons，纽约，1981，59，63 和183页。色牢度是一个评价被染纺织品的重要参数而且已有许多本 技术领域已知的标准方法用于评价色牢度(例如参见ATCC技术指南 (ATCC Technical Manual)，第71卷，美国纺织品化学师和着色 师协会(American Association of Textile Chemists and Colorists)，Research Triangle Park，NC，1996)。色牢度的评 价被分为以下几个方面：耐洗涤色牢度，耐光色牢度和耐磨损色牢 度。 耐洗涤色牢度的评价(W)

以下是有关洗衣试验方法61-2A(1989)的AATCC色牢度。对原始 染色的和后来被洗涤的样品，利用一种配有大视野，10°观测器，D65 光源的Macbeth ColorEye 7000分光光度计(Macbeth，New Windsor，NY)，取两个测量值的平均值，按照商家提供的说明书进行 CIEL*a*b*测定。(例如参见Billmeyer和Sa浅zman，颜料技术的 原理(Principles of Color Technology)，第二版，John Wiley & Sons，纽约，1981，63页，用于解释CIEL*a*b*颜料协调系统 (for an explanation of the CIEL*a*b* color coordinate system))。

在被染色的和被洗涤的样品之间的CIEL*a*b*总颜色差异值(ΔE* ＝(ΔL*+Δa*+Δb*)0.5)的基础上制定一种灰度等级(AATCC灰度 排列表，AATCC，Research Triangle Park，NC，也参见表9)。 Table 9.AATCC灰度排列表

              ΔE值向灰度等级的转换 Delta E (ΔE)   0    0.4   1.25  2.1   2.95  4.1   5.8   8.2   11.6  13.6 灰度 (GS)    5    4-5   4     3-4   3     2-3   2     1-2   1     ＜I 耐光色牢度的评价(W)

按照AATCC耐光色牢度试验方法16(1993)，选项(Option)E测定 耐光色固度(L)。将被染色的样品(4cm×4cm)钉在编号为SL-8A 的退色-O-计量器试验罩(Fade-O-Meter TestMask No.SL-8A)(自 动电子仪器公司(Atlas Electric Devices Co.)，芝加哥，IL， Part No.12-712301)的黑色侧面。按照厂家提供的使用说明书将所 述罩子置于Suntest CPS+(Slaughter Machinery Company， Lancaster，SC)中并在辐射度为756W/m2的氙光源下暴露20分钟。

除非只对被暴露的织物面进行单次测量，ΔE*和灰度等级是按上述 方式产生的。 耐磨损色牢度的评价(W)

按照AATCC耐磨损色牢度试验方法8-1989进行干燥磨损(DC) 和潮湿磨损(WC)色牢度的测量。

潮湿的AATCC磨损布块通过以下方法来制备：将AATCC印迹纸之 间的每块水饱和的磨损布在18g重量下挤压5秒钟以便获得约65±5％ 的湿度。

当在一个Macbeth SpectraLight II光盒中(Macbeth， Newburgh，纽约)观测所述样品时，利用AATCC彩色转移刻度尺 (AATCC Chromatic Transference Scale)(AATCC，Research Triangle Park，NC)给出目测等级(5＝最好)。 实施例1

5mg的第一种化合物(对-苯二胺(″A″)，对-甲苯二胺(″B″)或 邻-氨基酚(″C″))和5mg的第二种化合物(间-苯二胺(″D″)，α-萘 酚(″E″)或4-氯间苯二酚(″F″))(或者在实验中只有10mg的第一 种化合物而没有第二种化合物)溶解在10ml的0.1M K2HPO4、pH 7.0的缓冲液中。一种活性为71.7LACU/ml的Polyporus pinsitus漆酶(″PpL″)(被保藏在Centraal Bureau voor Schimmelcultures且保藏号为CBS 678.70)或一种活性为690 LACU/ml的嗜热毁丝霉漆酶(″MtL″)(被保存在Centraal Bureau voor Schimmelcultures且保藏号为CBS 117.65)被同样的缓冲液 稀释到活性为10LACU/ml。

将从实验织物公司(Test Fabrics Inc.)(Middlesex，New Jersey)获得的10A型号的多纤维样品(4×10cm)卷起后放入一支试管 中。所述样品含有一条羊毛制成的纤维。4.5ml的前体/偶联剂溶液 和1ml的所述漆酶溶液被加到所述试管中。将所述试管密封，混合后 置于一个试管振荡器中并在暗室中温育60分钟。温育后，用流动的热 自来水冲洗大约30分钟。

下表提供了所述实验的结果：

                           表10     织物     只A     A+D     A+C     A+F     羊毛     灰褐色     深蓝色     身紫色     褐色

                           表11     织物     只B     B+D     B+E     B+F     羊毛     褐色     深蓝色     蓝褐色     黄/褐色

                          表12     织物    只C    C+D   C+E   C+F     羊毛    桔黄/红色    深桔黄/红色   深桔黄色   深桔黄色

所述结果表明在有前体和Polyporus pinsitus漆酶存在的条件 下，在羊毛上产生颜色。采用嗜热毁丝霉漆酶获得了类似的结果。 实施例2

在自动检测洗衣-O-计量器(Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″) 中于30℃和pH为4-10的条件下将各种材料进行染色。所述被染色的 材料(全部从Test Faoraics Inc.获得)是精纺羊毛(526型号，7 cm×7cm)而且是被氯化的精纺羊毛(530型号，7cm×7cm)。

通过混合溶液A(0.1M H3PO4，0.1M CH3COOH，0.1M H3BO3)和 B(0.5M NaOH)来制备一种具有合适pH的0.1M Britton-Robinson 缓冲溶液。为了制备pH分别为4，5，6，7，8，9和10的缓冲溶 液，用溶液B分别将806ml，742ml，706ml，656ml，624ml， 596ml和562ml的溶液A稀释到1升。

向75ml的每种缓冲液中加入0.5mg/ml的选自对-苯二胺、邻 α-氨基酚和间-苯二胺的化合物。如果需要，可检测和调节所述pH。 将75ml缓冲液/化合物溶液进行混合以便形成150ml的各种缓冲液 /化合物混合溶液，然后加到一个LOM烧瓶中。

然后材料样品浸泡在各缓冲液/化合物组合溶液中。抽出体积相当 于要加入的漆酶的体积的溶液。活性为690LACU/ml的嗜热毁丝霉漆 酶(″MtL″)被所缓冲液稀释到300LACU/ml的活性。除pH7.0外， 将2LACU/ml加入到每种pH中。为了制作计量曲线，在pH7.0下加 入0，0，1，2和4LACU/ml.将所述LOM烧瓶置于LOM上。42RPM 和30℃下经过1小时后，停止LOM。将液体倒掉后用流动的去离子水 将所述烧瓶中的样品冲洗大约15分钟。干燥所述样品然后利用 ColorEye 7000仪器测定CIEL*a*b*值。所述CIEL*a*b*结果见表 13-16。

                                   表13

                       采用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色

                             (pH-曲线，2LACU/ml)

             pH4     pH5     pH6     pH7     pH8      pH9       pH10

精纺的   L* 41.57   28.21   20.25   14.73   18.94    35.06     13.52

羊毛     a* 2.71    1.24    0.43    1.63    3.56     -1.92     1.79

         b* -0.75   -2.09   -5.76   -5.84   -17.52   -14.05    -4.28

被氯化的 L* 18.46   16.05   15.04   14.19   15.47    31.44     13.84

羊毛     a* 2.32    1.01    0.88    1.83    2.78     -3.05     2.97

         b* 0.09    0.87    1.03    1.53    -11.43   -13.27    2.06

                                表14

                  采用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色

                           (计量曲线-pH7)

               0LACU/mL        1LACU/mL        4LACU/mL

精纺的    L*  54.97           14.52           14.27

羊毛      a*  1.48            1.55            1.49

          b*  1.26            -6.09           -5.6

被氯化的  L*  43.2            14.42           14.33

羊毛      a*  1.79            1.75            1.69

          b*  1.61            1.5             1.65

                                    表15

                     采用前体邻-氨基酚和间-苯二胺染色

                           (pH-曲线，2LACU/ml)

              pH4     pH5     pH6     pH7     pH8     pH9     pH10

精纺的    L* 33.68   33.05   35.96   37.42   42.55   59.24   49.65

羊毛      a* 3.77    5.35    8.56    10.07   8.75    10.53   8.63

          b* 8.26    11.03   18.83   22.33   22.82   37.2    34.81

被氯化的  L* 21.07   19.11   21.01   24.7    34.42   59.9    48.74

羊毛      a* 3.14    2.77    4.82    7.22    6.88    10.08   10.4

          b* 4.23    4.31    8.04    12.64   18.08   36.78   34.76

                              表16

                 采用前体邻-氨基酚和间-苯二胺染色

                          (计量曲线-pH7)

               0LACU/mL     1LACU/mL     4LACU/mL

精纺的    L*  80.23        38.57        36.18

羊毛      a*  1.1          9.21         10.8

          b*  20.09        21.33        22.76

被氯化的  L*  77.36        27.1         26.33

羊毛      a*  0.86         7.92         6.92

          b*  19.53        14.8         13.5

所述结果表明精纺的羊毛和被氯化的精纺羊毛在所有的pH下被染 色，如果采用对-苯二胺和间-苯二胺共同进行染色，则颜色深浅的变 化范围从低pH下的灰色到高pH下的海蓝甚至黑色，如果采用邻-氨 基苯酚和间-苯二胺共同进行染色，则颜色深浅的变化范围从低pH下 的褐色到高pH下的橙色/黄色。

在所有剂量实验中，没有发现剂量1，2或4LACU/ml之间的明 显差异。采用0LACU/ml的对照实验清楚地表明染色被所述漆酶所催 化。 实施例3

利用实施例2中描述的方法测定染色的时间曲线，其中本实验只 在pH5.0和8.0下进行，实验的时间间隔是0，5，15，35和 55分钟。在每个实验中，加入2LACU/ml的嗜热毁丝霉漆酶。结果见 表17-20。

                                表17

                   采用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色

                     时间-曲线，2LACU/ml，pH5

              0分钟    5分钟   15分钟  35分钟  55分钟

精纺的   L*  76.48    52.08   36.3    27.02   26.56

羊毛     a*  0.02     1.35    1.96    1.3     1.18

         b*  8         -0.02  -1.39   -1.68   -2.03

被氯化的 L*  63.73    19.23   16.81   16.48   16.75 

羊毛     a*  0.1      1.86    1.28    0.77    1.11

         b*  10.3     -0.68   0.49    1.04    1.03

                                  表18

                    采用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色

                       时间-曲线，2LACU/ml，pH8

                0分钟   5分钟   15分钟   35分钟  55分钟

精纺的   L*    64.43   23.66   14.57    13.11   13.06

羊毛     a*    -3.03   1.05    2.14     1.49    1.2

         b*    -3.32   -15.45  -8.72    -4.52   -3.68 

被氯化的 L*    58.96   17.36   14.09    13.89   13.66

羊毛     a*    -1.66   0.57    1.9      2.71    2.64

         b*    2.68    -3.98   0.14     2.21    1.99

                                     表19

                       采用前体邻-氨基酚和间-苯二胺染色

                           时间-曲线，2LACU/ml，pH5

              0分钟     5分钟    15分钟   35分钟    55分钟

精纺的    L* 79.4      50.67    35.94    32.4      32.89

羊毛      a* 1.54      6.47     7.11     6.08      5.98

          b* 16.02     20.88    18.43    14.28     12.52

被氯化的  L* 76.72     39.53    22.12    18.82     19.58

羊毛      a* 2.33      6.81     4.21     2.88      3.1

          b* 18.26     16.48    8.23     4.89      4.77

                                   表20

                     采用前体邻-氨基酚和间-苯二胺染色

                        时间-曲线，2LACU/ml，pH8

              0分钟    5分钟    15分钟     35分钟    55分钟

精纺的    L*  80.06    63.03    49.37      42.51     41.24

羊毛      a*  1.63     15.71    17.1       12.32     9.97

          b*  25.87    43.37    38.69      30.26     25.78

被氯化的  L*  79.6     62.87    47.88      36.72     33.62

羊毛      a*  0.57     13.17    14.46      10.26     7.88

          b*  24.63    41.64    34.34      24.47     19.7

所述结果表明颜色大都在头15分钟内形成。精纺的羊毛和氯化精 纺的羊毛在两种pH下都能被染色。 实施例4

在30℃和pH5.5的条件下将羊毛在自动测试洗衣-O-计量器 (Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″)中染色1小时。所述被染色的 材料(从试验织物公司(Test Faoraics，Inc.)获得)是精纺的羊 毛(526型，8cm×8cm)。

通过将所述化合物溶解在适量的0.1M CH3COONa，pH5.5缓 冲液中来制备0.5mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″)的溶液 和0.5mg/ml的第二种化合物(1-萘酚，″B″)的溶液。每个LOM烧 瓶的总工作体积是100ml。100ml″A″被加到一个烧瓶中并将50ml ″A″和50ml″B″混合成100ml后加到第二个烧瓶中。用去离子水将 以上列出的材料样品湿润后浸泡在所述的前体溶液中。将活性为690 LACU/ml(80LACU/mg)的嗜热毁丝霉漆酶(″MtL″)以12.5mg/l的 浓度加到每个烧瓶中。将所述LOM烧瓶密封后置于LOM中。在42RPM 和30℃下经过1小时后终止LOM。将废液倒掉后用冷却自来水将所述 样品冲洗15分钟。在室温下将所述样品干燥后利用Macbeth ColorEye 7000测定所有样品的CIELAB值。结果见表21和22。

               表21-采用前体对-苯二胺进行染色

                   (pH5.5，12.5mg/l MtL)     L*     a*     b*     羊毛     30.93     61.66     10.10

          表22-采用前体对-苯二胺和1-萘酚进行染色

                 (pH5.5，12.5mg/l MtL)     L*     a*     b*     羊毛     30.70     61.12     -4.28

所述结果表明羊毛能利用前体和嗜热毁丝霉漆酶来进行染色(利 用A是褐色，利用A/B是紫色)。 实施例5

在30℃和pH5.5的条件下将羊毛在自动检测洗衣-O-计量器 (Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″)中染色1小时。所述被染色的 材料(从试验织物公司(Test Faoraics，Inc.)获得)是精纺的羊 毛(526型，8cm×8cm)。

通过将所述化合物溶解在适量的0.1M CH3COONa，pH5.5缓 冲液中来制备0.5mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″)的溶液 和0.5mg/ml的第二种化合物(1-萘酚，″B″)的溶液。每个LOM烧 瓶的总工作体积是100ml。100ml″A″被加到一个烧瓶中并将50ml ″A″和50ml″B″混合成100ml后加到第二个烧瓶中。用去离子水将 以上列出的材料样品湿润后浸泡在所述的前体溶液中。将活性为70 LACU/ml(100LACU/mg)的Polyporus pinsitus漆酶(″PpL″)以 12.5mg/l的浓度加到每个烧瓶中。将所述LOM烧瓶密封后置于LOM 中。在42RPM和30℃下经过1小时后终止LOM。将废液倒掉后用冷 却自来水将所述样品冲洗15分钟。在室温下将所述样品干燥后利用 Macbeth ColorEye 7000测定所有样品的CIELAB值。结果见表23 和24。

          表23-采用前体对-苯二胺进行染色

              (pH5.5，12.5mg/l PpL)     L*     a*     b*     羊毛     36.06     70.46     8.49

       表24-采用前体对-苯二胺和1-萘酚进行染色

             (pH5.5，12.5mg/l PpL)     L*     a*     b*     羊毛     37.92     58.71     -2.23

所述结果表明羊毛能利用前体和Polyprus pinsitus漆酶来进 行染色(利用A是褐色，利用A/B是紫色)。 实施例6

在30℃和pH5.5的条件下将羊毛在自动检测洗衣-O-计量器 (Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″)中染色1小时。所述被染色的 材料(从试验织物公司(Te污迹Fa褐色ics，Inc.)获得)是精纺 的羊毛(526型，8cm×8cm)。

通过将所述化合物溶解在适量的0.1M CH3COONa，pH5.5缓冲 液中来制备0.5mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″)的溶液和 0.5mg/ml的第二种化合物(1-萘酚，″B″)的溶液。每个LOM烧瓶 的总工作体积是100ml。100ml″A″被加到一个烧瓶中并将50ml ″A″和50ml″B″混合成100ml后加到第二个烧瓶中。用去离子水将 以上列出的材料样品湿润后浸泡在所述的前体溶液中。将活性为0.04 LACU/ml(1mg/ml)的疣孢漆斑菌胆红素氧化酶(″BiO″)以12.5 mg/l的浓度加到每个烧瓶中。将所述LOM烧瓶密封后置于LOM中。在 42RPM和30℃下经过1小时后终止LOM。将废液倒掉后用冷却自来水 将所述样品冲洗15分钟。在室温下将所述样品干燥后利用Macbeth ColorEye 7000测定所有样品的CIELAB值。结果见表25和26。

             表25-采用前体对-苯二胺进行染色

                  (pH5.5，12.5mg/l MtL)     L*     a*     b*     羊毛     27.54     80.84     -2.13

      表26-采用前体对-苯二胺和1-萘酚进行染色

              (pH5.5，12.5mg/l MtL)     L*     a*     b*     羊毛     40.21     87.73     -13.47

所述结果表明羊毛能利用前体和胆红素氧化酶来进行染色(利用A 是褐色，利用A/B是紫色)。 实施例7

在30℃和pH5.5的条件下将羊毛在自动检测洗衣-O-计量器 (Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″)中染色1小时。所述被染色的 材料(从试验织物公司(Te污迹Fa褐色ics，Inc.)获得)是精纺 的羊毛(526型，8cm×8cm)。

通过将所述化合物溶解在适量的0.1M CH3COONa，pH5.5缓 冲液中来制备0.5mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″)的溶液 和0.5mg/ml的第二种化合物(1-萘酚，″B″)的溶液。每个LOM烧 瓶的总工作体积是100ml。100ml″A″被加到一个烧瓶中并将50ml ″A″和50ml″B″混合成100ml后加到第二个烧瓶中。用去离子水将 以上列出的材料样品湿润后浸泡在所述的前体溶液中。将活性为5.2 LACU/ml(2mg/ml)的茄属丝核漆酶(″RsL″)以12.5mg/l的浓度 加到每个烧瓶中。将所述LOM烧瓶密封后置于LOM中。在42RPM和 30℃下经过1小时后终止LOM。将废液倒掉后用冷却自来水将所述样 品冲洗15分钟。在室温下将所述样品干燥后利用Macbeth ColorEye 7000测定所有样品的CIELAB值。结果见表27和28。

          表27-采用前体对-苯二胺进行染色

             (pH5.5，12.5mg/l RsL)     L*     a*     b*     羊毛     27.89     58.97     1.59

        表28-采用前体对-苯二胺和1-萘酚进行染色

             (pH5.5，12.5mg/l RsL)     L*     a*     b*     羊毛     29.03     63.94     -3.65

所述结果表明羊毛能利用前体和茄属丝核漆酶来进行染色(利用A 是褐色，利用A/B是紫色)。 实施例8

所述被染色的材料(从试验织物公司(Test Faoraics，Inc.) 获得)是在60℃和pH5.5下的自动测试洗衣-O-计量器(Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″)中的羊毛(526型，8cm×8cm)。

通过将所述化合物溶解在适量的2g/L CH3COONa，pH5.5缓冲 液中来制备0.25mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″)的溶液和 0.25mg/ml的第二种化合物(1-萘酚，″B″)的溶液。每个LOM烧瓶 的总工作体积是100ml。50ml″A″和50ml″B″被混合成100ml后 加到一个LOM烧瓶中。用去离子水将以上列出的材料样品湿润后浸泡 在所述的前体溶液中。在LOM中温育10、15或30分钟后终止LOM并 将活性为690LACU/ml(80LACU/mg)的嗜热毁丝霉漆酶(″MtL″)以1 LACU/mg的浓度加到每个烧瓶中。在42RPM和60℃下经过50、45或 30分钟后终止LOM并取出所述样本。通过将前体溶液、样品和酶加到 LOM烧瓶中来制备不需要预温育的两个对照。将所述烧瓶置于LOM 中。在42RPM和60℃下经过30分钟后，移开一个烧瓶。另一个对照 在42RPM和60℃下总共进行60分钟后再取出。将废液倒掉后用冷却 自来水将所述样本和样品冲洗15分钟。在室温下将所述样品干燥后利 用Macbeth ColorEye 7000测定所有样品的CIELAB值。结果见表 29-33。

    表29-采用前体A和B进行对照染色，0分钟/30分钟     L*     a*     b*     羊毛     36.26     2.01     7.28

   表30-采用前体A和B进行对照染色，0分钟/60分钟     L*     a*     b*     羊毛     36.49     2.28     7.42

   表31-采用前体A和B进行对照染色，10分钟/50分钟     L*     a*     b*     羊毛     32.95     2.41     10.61

    表32-采用前体A和B进行对照染色，15分钟/45分钟     L*     a*     b*     羊毛     33.20     2.65     10.80

  表33-采用前体A和B进行对照染色，30分钟/30分钟     L*     a*     b*     羊毛     33.45     2.87     11.59

利用美国纺织业化学师和着色师协会(AATCC)试验方法61- 1989，2A评价这些样品针对洗涤的色牢度(耐洗涤色牢度)。所述洗 衣-O-计量器被预热到49℃后将200ml 0.2％的AATCC标准参考洗涤 剂WOB(不含光学增白剂)和50个钢球放在每个LOM烧瓶中。将所 述烧瓶密封后置于LOM中并且42RPM下将所述烧瓶预热2分钟以便 达到试验温度。停止旋转后松开烧瓶的固定夹。将所述样品加到烧瓶 中后将LOM旋转45分钟。移开所述烧瓶后用热自来水将所述样品冲 洗5分钟，其间偶尔挤一下。在室温下将所述样品干燥后利用 Macbeth ColorEye 7000评价进行评价。利用AATCC评价规程1，用 于颜色变化的灰度，给出每一样品的灰度等级(1-5)。所述结果见表 34-38。

       表34-A和B的耐洗涤色牢度结果，0分钟/30分钟     L*     a*     b*     灰度等级   羊毛     40.10     2.06     3.53     3

       表35-A和B的耐洗涤色牢度结果，0分钟/60分钟     L*     a*     b*   灰度等级   羊毛     39.93     2.27     4.25   3

       表36-A和B的耐洗涤色牢度结果，15分钟/45分钟     L*     a*     b*     灰度等级   羊毛     36.02     2.07     4.93     3-4

        表37-A和B的耐洗涤色牢度结果，10分钟/50分钟     L*     a*     b*     灰度等级   羊毛     35.09     2.62     4.45     4

           表38-A和B的耐洗涤色牢度结果，30分钟/30分钟     L*     a*     b*     灰度等级   羊毛     35.86     2.89     5.38     4

所述结果表明利用前体和嗜热灰丝霉能使羊毛染色。L*和灰度等 级的结果证实了在加入酶之前将样品在前体溶液中进行预热可以提高 染色强度和耐洗涤色牢度。 实施例9

所述被染色的材料(从试验织物公司(Test Faoraics，Inc.) 获得)是在40℃和pH5.5下的自动检测洗衣-O-计量器(Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″)中经过了1小时的精纺羊毛(526型， 7cm×7cm)和氯化的精纺羊毛(526型，7cm×7cm)。

在该实验中评价了两种介质并且每一种介质被溶解在缓冲溶液 中。制备了三种缓冲溶液：一种2g/L CH3COONa，pH5.5，缓冲液 (″1″)，一种含有100μM 10-丙酸-吩噻唑(PPT)的2g/L CH3COONa，pH5.5，缓冲液(″2″)，和一种含有100μM丁香酸甲酯 的2g/L CH3COONa，pH5.5，缓冲液(″3″)。

通过将所述化合物溶解在适量的缓冲液(1，2或3)中来制备三 种0.25mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″)的溶液和三种0.25 mg/ml的第二种化合物(间-苯二胺，″B″)的溶液。每个LOM烧瓶的 总工作体积是120ml。将60ml″A″和60ml″B″混合成120ml(针 对每种溶液：1，2或3)。用去离子水将以上列出的材料样品湿润后 浸泡在所述的前体溶液中。将所述LOM烧瓶密封后置于LOM中。在42 RPM和40℃下经过10分钟后终止LOM。将活性为690LACU/ml(80 LACU/mg)的嗜热毁丝霉漆酶(″MtL″)以0.174LACU/ml的活性加到每 个烧瓶中。将所述LOM烧瓶密封后置于LOM中并在(42RPM)和40℃ 下经过50分钟。移开所述烧瓶后将废液倒掉并用冷却自来水将所述样 品冲洗15分钟。在室温下将所述样品干燥后利用Macbeth ColorEve 7000测定所有样品的CIELAB值。结果见表39-41。

表39-采用前体A和B进行对照染色(2g/L CH3COONa，pH5.

                  5，MtL)     L*     a*     b*   羊毛     47.93     0.45     -0.05   氯化的羊毛     27.80     2.94     -0.06

 表40-采用前体A和B进行对照染色(2g/L CH3COONa，pH5.

              5，100μM PPT，MtL)     L*     a*     b*   羊毛     42.11     1.52     -5.95   氯化的羊毛     24.48     2.76     -2.15

  表41-采用前体A和B进行对照染色(2g/L CH3COONa，pH5.

            5，100μM丁香酸甲酯，MtL)     L*     a*     b*   羊毛     47.83     0.99     -0.14   氯化的羊毛     25.77     3.37     -0.99

利用美国纺织业化学师和着色师协会(AATCC)试验方法61- 1989，2A评价这些样品对洗涤的色牢度(耐洗涤色牢度)。利用 AATCC评价规程1，颜色变化的灰度，给出每一样品的灰度等级(1- 5)。所述结果见表42-44。

       表42-A和B的耐洗涤色牢度(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                          MtL)     L*     a*     b*     灰度等级   羊毛     50.59     1.11     7.07     3-4   氯化的羊毛     31.74     2.83     7.09     3

           表43-A和B的耐洗涤色牢度(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                        100μM PPT，MtL)     L*     a*     b*     灰度等级   羊毛     48.38     -0.48     4.61     2-3   氯化的羊毛     31.56     1.06     4.86     2

     表44-A和B的耐洗涤色牢度(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                100μM丁香酸甲酯，MtL)     L*     a*     b*   灰度等级   羊毛     52.02     0.06     6.59   3   氯化的羊毛     32.17     2.02     6.08   2-3

除了使用了第三种化合物(2-氨基酚，“C”)和第四种化合物 (间-苯二胺，“D”)外，重复相同的实验。采用的温度是50℃。所 述结果见表45-50。

  表45-采用前体C和D进行染色(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                         MtL)     L*     a*     b*   羊毛     53.52     5.92     18.19   氯化的羊毛     47.79     4.73     17.08

  表46-采用前体C和D进行染色(2g/L CH3COONa，pH5.5，

               100μM PPT，MtL)     L*     a*     b*   羊毛     52.38     6.70     21.84   氯化的羊毛     46.86     5.55     17.87

 表47-采用前体C和D进行染色(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                100μM丁香酸甲酯，MtL)     L*     a*     b*   羊毛     57.09     8.10     24.44   氯化的羊毛     48.69     7.82     19.40

       表48-C和D的耐洗涤色牢度结果(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                            MtL)     L*     a*     b*     灰度等级   羊毛     57.38     7.23     10.97     3   氯化的羊毛     51.35     7.04     13.16     3

        表49-C和D的耐洗涤色牢度结果(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                        100μM PPT，MtL)     L*     a*     b*   灰度等级   羊毛   51.37     8.18     12.33   5   氯化的羊毛   46.86     5.55     17.87   2

       表50-C和D的耐洗涤色牢度结果(2g/L CH3COONa，pH5.5，

                   100μM丁香酸甲酯，MtL)     L*     a*     b*   灰度等级   羊毛     59.61     7.24     11.89   4   氯化的羊毛     50.01     7.94     14.38   4-5

这两套实验结果表明能够转移电子的化学介质可被用于染色从而 提高耐洗涤色牢度。两种实验中，精纺羊毛和氯化的精纺羊毛在pH5. 5的CH3COONa缓冲液、含有PPT的CH3COONa缓冲液和含有丁香酸甲 酯的CH3COONa缓冲液中能被染色。然而，仅在第二种实验中，一种介 质可导致耐洗涤色牢度的提高。 实施例10

在30℃和pH5.5的条件下将羊毛在自动检测洗衣-O-计量器 (Atlas Launder-O-Meter)(″LOM″)中染色1小时。所述被染色的 材料(从试验织物公司(Te污迹Fa褐色ics，Inc.)获得)是精纺 羊毛(526型，8cm×8cm)。

通过将所述化合物溶解在适量的0.1M CH3COONa，pH5.5缓 冲液中来制备0.5mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″)的溶液 和0.5mg/ml的第二种化合物(1-萘酚，″B″)的溶液。每个LOM烧 瓶的总工作体积是100ml。100ml″A″被加到一个烧瓶中并将50ml ″A″和50ml″B″混合成100ml后加到第二个烧瓶中。用去离子水将 以上列出的材料样品湿润后浸泡在所述的前体溶液中。将活性为 180,000 POXU/ml的Coprins cinereus过氧化物酶(CiP)以0.05 POXU/ml的浓度加到每个烧瓶中。将每个LOM烧瓶中加入200或 500μm的过氧化氢。将所述LOM烧瓶密封后置于LOM中。在42RPM 和30℃下经过1小时后终止LOM。将废液倒掉后用冷却自来水将所述 样品冲洗1 5分钟。在室温下将所述样品干燥后利用Macbeth ColorEye 7000测定所有样品的CIELAB值。结果见表51-54。

         表51-采用前体A，200μM H2O2进行染色     L*     a*     b*     羊毛     54.84     1.70     -2.18

     表52-采用前体A，500μM H2O2进行染色     L*     a*     b*     羊毛     43.58     2.50     -4.62

    表53-采用前体A和B，200μM H2O2进行染色     L*     a*     b*     羊毛     56.19     2.60     -9.44

     表54-采用前体A和B，500μM H2O2进行染色     L*     a*     b*     羊毛     50.48     4.14     -11.68

所述结果表明利用前体、过氧化物和Coprinus cinereus(CiP) 过氧化物酶可以将羊毛染色(采用A和A/B染成紫色)。 实施例11

将铬蓝皮革原料(Prime tanning Corp.，St.Joseph，MO)在 室温和pH5，7和9下于试管中进行16小时的染色。通过将每种化 合物溶解在适量的0.1M Britten-Robinson缓冲液(B-R缓冲液) 缓冲液中来制备三种0.5mg/ml的第一种化合物(对-苯二胺″A″) (pH5，7和9)的溶液，三种0.5mg/ml的第二种化合物(1-萘 酚，″B″)的溶液和三种0.5mg/ml的第三种化合物(4-羟基肉桂酸 ″C″)的溶液。

将所述皮革底物(1.5cm×4cm)卷起来并置于4英寸的试管 中。每支试管的总工作体积是7ml.将6ml的A(或6ml的C)加 到一支试管中，并将3ml的A和3ml的B(或3ml的A和3ml的C) 混合成6ml加到第二支试管中。将活性为690LACU/ml(80 LACU/mg)的嗜热毁丝霉漆酶(″MtL″)以2LACU/ml的浓度加到每个 烧杯中(将1ml酶溶液加到每支试管中使得每支试管的总体积为7 ml)。在暗室中将所述试管于室温下温育16小时。温育后，用冷却自 来水将所述样品冲洗1分钟并进行室温干燥所述实验结果见表55。

                        表55     织物     前体   pH5     pH7     pH9     皮革     A   紫色     褐色     褐色     皮革     A/B   暗紫色     紫色     紫色     皮革     C   浅绿色     绿色     绿色     皮革     A/C   浅褐色     浅褐色     浅褐色

所述结果表明在有嗜热毁丝霉漆酶和不同类型前体存在和一定的 pH范围条件下，在皮革上形成了着色剂。 实施例12

将丝稠(Prime Tanning Corp.，St.Joseph，MO)在室温和pH 5，7和9下于试管中进行16小时的染色。所述材料(获自于试验织 物公司(Test Fabrics，Inc.)是de chine绉丝(型号601，1.5 cm×4cm)。

通过将每种化合物溶解在适量的0.1M Britten-Robinson缓 冲液(B-R缓冲液)中来制备三种0.5mg/ml的第一种化合物(对-苯 二胺″A″)(pH5，7和9)的溶液和三种0.5mg/ml的第二种化 合物(1-萘酚，″B″)的溶液。

将所述丝底物卷起来后置于4英寸的试管中。每支试管的总工作 体积是7ml。将6ml的A(或6ml的C)加到一支试管中，并将3 ml的A和3ml的B混合成6ml加到第二支试管中。将活性为690 LACU/ml(80LACU/mg)的嗜热毁丝霉漆酶(″MtL″)以2LACU/ml的 浓度加到每个烧杯中(将1ml酶溶液加到每支试管中使得每支试管的 总体积为7ml)。在暗室中将所述试管于室温下温育16小时。温育 后，用冷却自来水将所述样品冲洗1分钟并进行室温干燥所述实验结 果见表56。

                          表56     织物     前体   pH5   pH7   pH9     丝     A   深褐色   深褐色   深紫色     丝     A/B   深褐色   深褐色   深紫色

所述结果表明在有嗜热毁丝霉漆酶和不同类型的前体存在和一定 的pH范围条件下，在皮革上形成了着色剂。 实施例13

通过将5mg/ml的对苯二胺溶解在0.1M的磷酸钠、pH5.5的缓 冲液中并添加2.5％的阿拉伯胶来制备一种印刷糊剂。利用一个印刷筛 网和一个刮刀将所述印刷糊剂转移到一种羊毛织物上。用一个罩子将 不需要印刷的织物部分掩盖住。

然后在一个蒸室中将所述织物蒸10分钟并进行干燥。

通过将所述织物浸渍在一种2LACU/ml的漆酶溶液中并温育1小 时而形成颜色。 实施例14

将一种单、双-或多环芳族或杂芳族化合物填充到所述材料中。例 如，将0.5mg/ml的对苯二胺溶解在500ml的0.1M K2PO4，pH 7，缓冲液中。以同样的缓冲液稀释一种漆酶。在60℃下利用标准的实 验室填充方法，将所述对苯二胺溶液填充到所述材料上。将所述织物 蒸10分钟。然后用所述酶溶液第二次填充被蒸过的材料。通过在40 ℃下温育所述样品来形成颜色。温育后，用流动的热自来水将所述样 品冲洗大约30分钟。 实施例15

将精纺羊毛(0.35g；526类型，试验织物公司(Test Fabrics， Inc.)，信箱26，West Pittston，PA 18643)在一种非离子聚氧化 乙烯醚润湿试剂(0.1％ Diadavin UFN，Bayer，Pittsburgh，PA 15205-9741)中浸泡5分钟。将其中一份精纺羊毛样品放入一个装有 20份、0.1M缓冲液(pH5或pH8)的烧瓶中。通过将表1-8中列 出的化合物溶解在合适的溶剂中来制备染料前体原料和偶联剂溶液。 通过添加单一一种产生10mM浓度的前体原液来获得槽中的10mM总 浓度，或者通过以1∶1的摩尔比添加一种产生10mM浓度的前体原 液和偶联剂原液来获得槽中的10mM总浓度。以3.4LAMU/mL的浓 度将嗜热毁丝霉漆酶加入每个烧瓶当中。将烧瓶在60℃下通过轻微震 荡温育60分钟。温育后，用冷却自来水将所述样品冲洗1分钟，然后 风干。通过目测颜色来评价羊毛样品。结果见表57-70。

            表57在pH5下被漆酶处理的前体混合物对羊毛的染色

       P3          P5          P19         P75        P79        P83

P3     深褐色      绿色/褐色   灰紫色      灰褐色     褐色       褐紫红色

P5                 褐灰色      褐紫红色    灰色       深灰色     铁锈褐色

P16    褐色        褐色        铁锈红色    褐色       黄色/褐色  铁锈褐色

P17    褐色        褐色        灰色        粉色       褐紫红色   深褐色

P19                            褐色        灰色       灰色       深红色

P30    浅紫色      浅黄褐色    粉灰色      灰色       灰色       铁锈红色

P31    灰粉色      浅黄褐色    粉灰色      灰色       绿色       粉褐色

P32    褐色        浅褐色/黄色 褐紫红色    褐色/绿色  橄榄色     红色

P46    褐色        深褐色      褐色        深褐色     褐色       深褐色

P74    紫色/红色   深紫色      深紫色      深褐紫红色 褐紫红色   深褐色

P75                                        深褐色     灰色       褐色

P78    褐色        深绿色      绿色        深灰色     灰色       深褐色

P79                                                   深褐色     紫色

P80    浅褐色      橙黄色      褐色        褐色/绿色  绿色/褐色  绣红色

P81    浅褐色      咖喱黄色    褐色        褐色/绿色  绿色/褐色  红色

P83                                                              深红色/褐色

                表58在pH8下被漆酶处理的前体混合物对羊毛的染色

        P3         P5          P19          P75          P79        P83

P3      深褐色     褐色        紫灰色       紫灰色       褐色       褐紫红色

P5                 褐灰色      粉色         紫色         蓝色       铁锈褐色

P16     褐色       褐黄色      粉黄色       褐色         褐色       褐色

P17     橄榄色     污迹        粉灰色       黄色/褐色    红色       深褐色

P19                            褐色         深褐色       深灰色     褐紫红色

P30     浅紫色     浅黄褐色    粉灰色       褐色         粉褐色     铁锈褐色

P31     灰粉色     浅褐紫色    粉灰色       褐色         兰灰色     粉褐色

P32     褐色       浅褐色/黄色 红色/褐色    褐色         褐色       锈红色

P46     褐色       褐色        褐色         褐色         灰色       褐色

P74     深褐色     深紫色      深紫色/褐色  深褐紫红色   深灰色     深褐色

P75                                         深褐色       深灰色     褐色

P78     深褐色     深蓝色      深蓝色       深褐色/黑色  深灰色     深褐色

P79                                                      深褐色     灰色

P80     浅褐色     橙黄色      褐色    褐色              褐色       绣褐色

P81     浅褐色     咖喱黄色    褐色    褐色              绿色/褐色  绣褐色

P83                                                                 深红色/褐色

               表59在pH5下被漆酶处理的前体混合物对羊毛的染色

       P3         P5        P19         P75       P79*       P83

P9     褐色       黄褐色    褐色        粉污迹    粉灰色     红色

P10    褐色/黄色  黄褐色    橄榄色      褐黄色    褐黄色     褐色

P11    浅褐色     黄褐色    褐色        灰污迹    深灰色     红色

P12    灰色       褐色      褐色污迹    灰色      灰色       铁锈红色

P13    粉灰色     黄褐色    浅褐紫红色  绿色      绿色       酒红色

P14    深灰色     黄褐色    浅褐紫红色  绿色      紫色       红色

P15    铁锈褐色   黄褐色    浅褐紫红色  绿色      浅灰色     红色

P20    浅褐色     铁锈褐色  褐色污迹    灰色      橄榄色     铁锈红色

          表60在pH8下被漆酶处理的前体混合物对羊毛的染色

       P3        P5          P19       P75       P79*      P83

P9     橄榄色    浅黄褐色    橄榄色    粉污迹    粉污迹    粉灰色

P10    黄褐色    浅橄榄色    灰色      褐黄色    黄褐色    粉灰色

P11    褐色      浅黄褐色    黄褐色    粉污迹    粉污迹    粉褐色

P12    褐色      黄色/褐色   黄褐色    灰色污迹  灰色      橄榄色

P13    深灰色    浅黄褐色    粉色      蓝色      野鸭色    深粉色

P14    蓝色      黄褐色      粉色      褐色污迹  灰色      深粉色

P15    褐黄色    浅黄褐色    浅粉色    褐色污迹  浅橙黄色  深褐色

P20    浅褐色    灰粉色      褐黄色    褐色      浅褐色    浅褐色

        表61在pH5下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

      P3         P5          P19           P75       P79*       P83

P8    紫色       灰色污迹    浅紫色        蓝色      蓝色       红色

P18   紫色       污迹        浅紫色        蓝色      蓝色       铁锈红色

P28   紫色       污迹        浅灰色        蓝色      紫色       粉色

P29   浅褐色     污迹        浅紫色        灰色      浅灰色     粉红色

P33   灰色       褐色/灰色   灰色/褐紫红色 灰色      灰色污迹   铁锈褐色

P36   褐色       浅褐/灰色   黄褐色/粉色   褐色      灰色       玫瑰粉色

P37   紫色       粉黄色      褐紫红色      蓝色      Turqs.     酒红色

P38   橄榄色     橄榄色      橄榄色        绿色      橄榄色     褐色

P40   绿色/褐色  浅褐色      紫色/灰色     绿色      浅绿色     玫瑰粉色

P41   绿色/褐色  浅褐色/绿色 绿色/褐色     深绿/褐色 褐色/绿色  玫瑰粉色

P62   浅紫色     咖喱色污迹  红色/褐色     灰色污迹  绿色       红色

           表62在pH8下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

         P3         P5          P19        P75       P79*      P83

P8       紫色       灰色污迹    浅紫色     蓝色      蓝色      灰色

P18      紫色       灰色污迹    浅紫色     灰色蓝色  蓝色      浅粉色

P28      浅紫色     污迹        浅灰色     灰色      蓝色      粉色褐色

P29      褐色       浅黄褐色    粉色灰色   褐色污迹  灰色      深粉色

P33      浅褐色     黄褐色      黄褐色     灰色      灰色      铁锈褐色

P36      浅褐色     灰色        浅褐色     褐色      深灰色    浅褐色

P37      紫色       浅粉黄色    玫瑰粉色   紫色      蓝色      橙黄色

P38      橄榄色     浅绿色      黄褐色     橄榄色    橄榄色    褐色

P40      褐色       浅绿色      玫瑰粉色   灰色      浅绿色    玫瑰粉色

P41      绿色/褐色  浅绿色      橄榄色     褐色      褐色/绿色 绿色

P62      深褐色     褐色/绿色   玫瑰粉色   深褐色    绿色污迹  褐色

         表63在pH5下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

         P3        P5            P19         P75       P79*        P83

P35      褐色      浅褐黄色      褐紫红色    灰色      玫瑰粉色    红色

P44      褐色      浅褐色污迹    褐紫红色    深灰色    深紫色      玫瑰粉色

P45      浅褐色    浅褐污迹      褐紫红色    深灰色    灰色        红色

P47      浅褐色    浅褐色污迹    褐紫红色    深灰色    灰色        红色

P48      浅褐色    浅褐色        褐色        深灰色    灰色/绿色   红色

P49      浅褐色    浅褐色        褐色        深灰色    灰色        红色

P50      浅褐色    浅褐色        褐色        深灰色    灰色        红色

P51      浅褐色    浅褐色        褐色        深灰色    灰色        红色

P63      褐色      紫色/灰色     玫瑰粉色    褐色污迹  灰色        红色

P64      浅褐色    浅褐色        褐色        灰色      绿色        酒红色

       表64在pH8下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

     P3        P5            P19         P75        P79*        P83

P35  黄褐色    黄褐色        玫瑰粉色    蓝色/灰色  浅褐色      褐色

P44  浅褐色    浅褐色        玫瑰粉色    褐色       灰色        褐色

P45  浅褐色    浅褐色        玫瑰粉色    褐色       褐色        褐色污迹

P47  浅褐色    浅褐色/黄色   玫瑰粉色    褐色       灰色        褐色污迹

P48  浅褐色    浅褐黄色      玫瑰粉色    褐色       褐色        褐色

P49  浅褐色    浅褐色        玫瑰粉色    褐色       褐色        黄褐色污迹

P50  浅褐色    浅褐色        玫瑰粉色    褐色       褐色        褐色

P51  浅褐色    浅褐色        玫瑰粉色    褐色       褐色        褐色

P63  褐色      绿色          玫瑰粉色    褐色       褐色污迹    褐色

P64  橄榄色    黄褐色        浅褐色      褐色       绿色污迹    褐色

       表65在pH5下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

      P3         P5         P19         P75          P79*      P83

P34   深紫色    浅褐色      褐紫红色    深蓝色       深蓝色    红色

P39   浅紫色    玫瑰粉色    浅紫色      蓝色         蓝色      红色

P42*  紫色      玫瑰粉色    浅紫色      蓝色         蓝色      酒红色

P43   紫色      玫瑰粉色    浅紫色      蓝色         蓝色      红色

P53   黄褐色    玫瑰粉色    玫瑰粉色    褐色/灰色    浅玫瑰色  玫瑰粉色

P68   褐色      灰色污迹    褐色        深蓝色       深灰色    红色/褐色

      表66在pH8下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

      P3         P5       P19            P75       P79*       P83

P34   深灰色    灰色      玫瑰粉色       褐色      蓝色       红色

P39   紫色      浅褐黄色  紫色/玫瑰色    蓝色      蓝色       酒红色

P42*  紫色      黄褐色    褐紫红色       紫色      蓝色       酒红色

P43   紫色      黄褐色    褐紫红色       紫色      蓝色       红色/褐色

P53   黄褐色    黄褐色    浅玫瑰色       浅褐色    浅玫瑰色   褐色

P68   深褐色    褐色污迹  玫瑰粉色       深紫色    深蓝色     褐色

      表67在pH5下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

      P3        P5        P19        P75          P79*       P83

P98   浅褐色    黄褐色    褐色       褐色/绿色    灰色       红色

P100  浅褐色    黄褐色    玫瑰粉色   褐色/绿色    灰色       红色

P101  浅褐色    浅褐色    玫瑰粉色   褐色/灰色    灰色       红色

P102  褐色污迹  黄褐色    褐色       绿色         绿色/灰色  红色

P103  褐色      浅咖喱色  褐色       褐色/绿色    绿色/灰色  红色

P112  褐色      浅褐色    褐色       褐色/绿色    绿色/灰色  红色

      表68在pH8下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

      P3      P5        P19          P75    P79*       P83

P98   褐色    褐色      褐色        褐色    褐色       褐色

P100  褐色    浅褐色    玫瑰粉色    褐色    褐色       铁锈褐色

P101  褐色    浅褐色    玫瑰粉色    褐色    褐色       铁锈褐色

P102  褐色    橙黄色    褐色        褐色    褐色污迹   褐色

P103  褐色    浅褐色    玫瑰粉色    褐色    灰色       褐色

P112  褐色    浅褐色    玫瑰粉色    褐色    灰色       玫瑰粉色

      表69在pH5下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

      P3      P5        P19        P75        P79*       P83

P104  褐色    浅褐色    褐色       深灰色     绿色/灰色  红色

P105  褐色    浅褐色    褐色       深灰色     灰色       红色

P120  浅紫色  浅褐色    咖喱黄色   绿色       绿色       褐色

      表70在pH8下被漆酶处理的前体/偶联剂混合物对羊毛的染色

      P3          P5        P19         P75     P79*     P83

P104  褐色        浅褐色    玫瑰粉色    褐色    灰色     褐色

P105  褐色        浅褐色    玫瑰粉色    褐色    灰色     褐色

P120  咖喱黄色    浅黄色    浅玫瑰色    浅灰色  绿色     黄色/褐色 实施例16

将氯化的羊毛织物样品(5g；530型，试验织物公司，Box 26，West Pittston，PA 18643)在1％o.w.f.的商用湿润剂 (Intravon FW 75，Cropton & Knowles Colors Inc.，Box 33188 Charlotte，NC28233)中浸泡10分钟。将浸泡过的羊毛样品 放入盛有20份0.1M Britton-Robinson缓冲液(pH5)的不铁锈钢容 器中，向该容器中添加一种2％o.w.f.的染色辅剂(Intratex CWR，Crompton & Knowles Colors Inc.，Box 33188 Charlotte， NC 28233)。通过将选自表1-8中所列化合物溶解在合适的溶剂中来 制备染料前体原料褐和染料偶联剂原料的溶液。通过只加入前体原液 或通过以1∶1的摩尔比加入一种前体原液和一种偶联剂原液来获得 10mM的总浓度。将嗜热毁丝霉漆酶以3.4LAMU/mL浓度加到每个试 验容器中。通过以等量的缓冲液取代所述酶加到试验容器中来进行对 照处理。将容器密封并在一个自动洗衣-O-计量器(自动电子仪器公司 (Atlas Electronic Devices Company)，芝加哥，IL 60613)中 于60℃下旋转60分钟。处理后，用冷却自来水冲洗所述样品，然后 进行空气干燥。通过目测和仪器测定来评价样品颜色。通过上述标准 方法评价干燥样品的染色色牢度即耐洗涤色牢度、耐光色牢度和耐磨 损色牢度。利用Macbeth ColorEye 2000(Macbeth，New Windsor， NY 12553-6148)测定对照样品和经酶处理的样品的CIEL*a*b*颜色 值，结果见表71和72。

                                  表71.对照样品和酶染色的氯化羊毛的CIE L*a*b*

                   P75                     P78                     P79                     P1

  处理    L*      a*     b*    L*     a*     b*    L*     a*     b*    L*     a*    b* Prec. 对照    55.14    1.05    18.87   58.95   0.34    11.23   71.92   -0.87   9.85    68.79   0.35   15.00

  酶.     17.08    0.44    0.88    15.54   1.78    1.32    16.24   0.81    1.03    15.74   1.38   2.85 P5    对照    63.6     0.73    16.4    61.9    -0.31   9.49    72.3    -1.29   7.81    67.8    0.41   11.4

  酶.     17.1     5.21    -0.43   15.9    1.47    -1.43   17.1    -0.53   -3.12   18.7    3.75   4.77 P7    对照    43.4     3.95    13.3    58.8    1.267   12.1    57.5    3.70    14.9    62.9    1.68   13.6

  酶.     15.3     0.90    0.41    16.6    2.20    1.15    16.1    1.75    -1.96   18.0    4.94   5.22 P8    对照    63.3     -0.65   16.4    63.1    1.12    10.8    73.5    -1.11   8.67    70.0    -0.16  13.5

  酶.     25.0     -0.57   0.04    19.5    1.17    -6.03   23.8    -0.18   -11.1   19.2    5.53   4.44 P11   对照    59.8     -1.01   13.5    50.7    -8.19   -1.24   66.5    -5.94   3.85    53.7    1.76   1.62

  酶.     22.3     -0.92   -9.02   20.1    -2.89   -6.29   28.3    -7.56   -4.92   16.1    3.552  -2.72 P17   对照    61.6     0.42    16.0    52.6    6.90    6.74    56.0    5.17    8.23    65.6    2.98   13.9

  酶.     18.9     7.01    3.145   17.1    9.60    -340    15.0    8.80    -2.90   16.7    5.619  4.87 P18   对照    61.3     0.29    15.4    56.9    -5.32   4.10    67.2    -5.26   5.34    52.8    2.17   -0.09

  酶.     24.4     -1.94   -10.7   20.1    -2.13   -9.96   24.4    -6.32   -5.90   15.8    4.389  -5.18 P29   对照    59.13    0.12    17.73   58.64   0.98    11.50   68.10   0.40    9.47    61.78   1.95   12.74

  酶.     28.28    1.40    6.20    37.37   2.76    12.22   43.00   2.25    17.70   29.53   8.53   7.71 P33   对照    54.82    0.01    14.64   36.64   2.00    4.27    49.15   2.33    6.50    40.29   2.44   8.10

  酶.     23.94    5.00    4.41    30.89   4.69    6.28    25.40   3.79    5.56    26.82   7.27   9.97 P37   对照    58.93    0.29    17.16   56.93   -3.31   3.64    71.74   -1.62   6.28    51.69   2.81   0.43

  酶.     22.22    -1.96   -4.57   17.80   -1.16   -4.44   22.22   -5.60   -1.31   15.34   3.88   -3.30 P38   对照    50.56    1.51    15.57   27.81   -4.41   5.78    38.33   0.53    4.17    30.88   -3.49  9.37

  酶.     22.84    4.09    8.55    27.39   -4.30   9.49    25.98   -0.94   10.18   21.58   0.93   8.18 P39   对照    48.82    -0.54   9.38    23.72   -2.40   -11.6   68.64   -3.27   7.99    23.04   6.83   -0.16

  酶.     17.23    0.71    -3.15   19.36   -0.26   -0.31   23.59   -3.05   -1.63   16 47   3.26   -1.86 P40   对照    62.75    0.42    18.79   59.64   -0.01   9.95    69.67   0.04    8.70    65.17   0.82   13.57 

  酶.     23.63    2.27    6.08    27.09   0.92    6.62    26.97   0.09    5.63    25.74   8.55   8.48 P41   对照    52.36    0.40    14.83   35.89   -0.76   2.60    50.82   -1.66   4.65    42.61   1.00   9.73

  酶.     14.92    1.77    2.00    19.78   1.52    8.31    17.63   -0.87   5.58    18.58   2.54   6.91 P42   对照    57.14    -0.03   16.59   35.70   -5.09   -6.03   66.76   -0.71   8.18    51.73   2.49   5.97

  酶.     16.39    -1.05   -5.22   19.36   -3.87   -6.29   24.90   -9.23   -3.95   20.72   4.89   -1.88 P43   对照    59.12    0.43    17.55   27.92   -4.14   -6.64   58.86   -1.95   5.78    41.46   3.53   2.72

  酶.     16.41    -0.32   -6.25   20.75   -4.28   -6.27   26.01   -9.49   -3.75   21.99   4.47   -2.16 P70   对照    63.6     -0.34   17.5    66.1    0.07    13.2    73.7    -1.18   8.52    71.0    -0.56  13.8

  酶.     17.7     6.39    3.11    19.9    2.79    3.12    19.7    2.79    3.243   19.4    5.65   5.49 P127  对照    61.9     -0.55   17.6    58.3    -3.44   7.90    71.4    -352    9.04    65.0    -1.07  8.99

  酶.     14 9     -0.55   -1.76   17.8    -4.90   -0.68   18.2    -9.67   -5.06   15.6    1.16   -0.15 P202  对照    63.3     -0.22   17.5    64.9    0.50    13.5    73.7    -0.98   8.68    70.7    -0.28  13.6

  酶.     16.0     5.62    2.08    15.9    7.98    -0.20   14.53   7.2     -1.60   19.4    14.4   9.22

                          表72.对照样品和酶染色的氯化羊毛的CIE L*a*b*

                    P203                     P236                    P182

   处理    L*       a*       b*      L*      a*      b*      L*      a*      b* Prec.  对照    66.77    2.24     9.65    34 52   22.72   30.24   57.85   0.92    9.54

   酶.     28.41    15.15    16.09   27.16   17.84   21.41   16.30   7.40    4.79 P5     对照    69.1     -0.90    9.93    41.5    21.4    33.6    63.5    0.48    8.46

   酶.     24.3     6.29     8.94    23.3    13.9    15.0    18.9    0.43    3.51 P7     对照    56.8     3.36     13.6    39.5    21.6    32.8    55.9    2.28    12.5

   酶.     31.6     15.6     12.6    26.6    11.9    17.8    17.9    3.52    -0.51 P8     对照    67.4     1.58     5.92    42.1    21.2    33.5    65.6    0.28    8.30

   酶.     17.3     5.92     -4.73   22.9    16.7    12.8    14.4    3.26    -8.41 P11    对照    69.9     0.12     10.9    40.5    22.3    33.7    64.8    -0.39   9.16

   酶.     31.3     9.77     15.2    35.2    17.4    30.8    22.4    12.6    9.05 P17    对照    59.4     14.9     8.07    39.8    21.0    30.9    60.1    2.46    7.46

   酶.     11.7     14.8     3.46    32.5    15.0    23.5    16.2    10.1    -0.54 P18    对照    64.6     2.36     4.36    40.9    21.4    33.1    64.6    0.06    10.3

   酶.     16.4     5.14     -4.28   22.1    16.1    12.1    14.4    2.62    -6.48 P29    对照    69.56    0.70     10.37   43.00   21.50   33.86   63.23   0.35    11.43

   酶.     31.16    8.71     -0.56   35 39   18.84   28.37   27.98   5.93    4.51 P33    对照    54.42    0.39     5.91    41.45   19.16   30.59   53.35   -0.99   6.48

   酶.     35.38    8.11     18.00   37.83   19.48   31.77   28.55   9.77    8.62 P37    对照    67.35    1.35     6.52    41.62   22.21   34.34   63.05   -0.52   9.46

   酶.     19.01    6.40     -4.68   25.50   18.39   16.48   15.28   3.73    -5.09 P38    对照    58.42    3.24     8.75    38.38   18.81   29.23   52.52   3.05    4.89

   酶.     34.35    11.79    24.26   32.69   17.66   27.43   25.40   11.39   14.39 P39    对照    67.87    0.14     8.94    40.29   21.57   33.21   60.33   1.01    7.38

   酶.     21.54    7.28     -1.65   24.51   18.72   15.29   16.23   2.74    -5.47 P40    对照    70.98    0.23     10.62   42.39   21.13   33.85   63.35   0.07    10.90

   酶.     35.01    12.54    13.67   34.92   20.80   29.35   23.51   9.96    9.28 P41    对照    54.47    3.72     5.51    39.92   19.47   31.13   50.76   1.83    4.89

   酶.     25.11    11.31    16.41   22.08   12.57   14.18   17.62   6.34    6.19 P42    对照    69.57    0.76     9.31    39.67   22.17   33.48   65.73   0.84    9.03

   酶.     20.53    4.65     -8.78   24.52   18.91   14.32   16.82   1.92    -12.0 P43    对照    69.23    1.01     9.50    40.52   22.22   33.64   64.67   0.02    8.98

   酶.     20.90    4.51     -9.18   24.91   17.83   14.23   16.44   2.17    11.7 P70    对照    69.3     -0.62    11.0    40.9    21.5    33.2    65.2    -0.51   9.70

   酶.     26.2     10.6     11.5    31.4    17.8    26.4    17.8    -1.47   -2.35 P127   对照    69.3     -0.91    9.60    42.0    21.8    34.2    64.2    -0.43   9.73

   酶.     16.7     -0.52    -1.94   21.3    6.67    10.4    19.4    -1.87   2.15 P202   对照    71.4     0.61     11.4    40.9    22.3    34.0    65.2    -0.45   10.0

   酶.     30.1     25.5     18.6    47.4    17.8    34.8    15.4    7.79    0.15

L*是一种颜色亮度的测量值。因此，高的L*值对应较亮的颜色， 而低的L*值对应较暗的颜色。在本发明中，比对照样品暗的颜色(较 低的L*值)是优选的。在每种情况下，所述结果表明对照处理产生的 颜色(较高的L*值)比相应酶处理的颜色亮。这表明酶在催化颜色- 形成反应中的重要性。当对照的L*值与酶处理的L*值之间差异较大 时，这变得尤其重要。未经处理的氯化羊毛的CIEL*a*b*是L*88.5， a*-0.86，b*15.7，其对应一种暗淡的-白色。

表73显示了经酶处理的样品的目测颜色和色牢度结果。耐洗涤色 牢度(W)，耐光色牢度(L)，和干燥以及湿润耐磨损色牢度(C)通 过上述方法来测定，并且报导了从1(最坏)到5(最好)的数值范 围。两种仪器，Suntest CPS+和自动风化-O-计量器(Atlas Weather-O-Meter)被用于对耐光色牢度样品进行光暴露。两种结果 都被进行了报导。干燥和湿润耐磨损色牢度通过单独一个观察者来目 测评价。

对照样品与被酶处理的样品之间的颜色深浅差异的标准测量值被 定义为活化比值(AR)，由公式(1)计算。

AR＝(L*对照-L*酶)/L*酶     公式(1)

当染色系统在加入酶之前一直基本保持无色时，则得到一个高活 化比值。活化比低的染色系统不产生或只产生有限的颜色(即使在有 酶存在的条件下)，或者在没有酶存在条件下仅产生与有酶存在的条 件下(自动氧化反应)几乎相同的颜色水平。

在本发明中，产生深色且具有高活化比值的染色系统是优选的， 这是由于当实验条件给定时这些系统比产生深色而具有低活化比值的 染色系统更稳而且更容易操作和包装。大于1的活化比值(AR)表示 对照与被酶处理的织物的颜色深度存在明显的差异，即明显地表示对 照处理的织物没有被染上颜色。

在本发明中，最优选的染色系统是那些产生高活化比值和具有良 好色牢度以及容易进行化学处理的染色系统。

通过采用增溶功能基团取代前体或偶联剂来改善化学处理，所述 增溶功能基团使得所述化合物容易被溶解在含水染色槽中以及能够增 强染料产物与需要被染色的材料之间亲合力。阴离子增溶基团的实例 是磺酸或磺酸盐以及羧酸或羧酸盐。阳离子增溶基团的实例是季铵基 团。阴离子增溶基团的存在起着增强所述染料产物对带有正电荷的材 料的亲合力的作用，所述材料如尼龙、羊毛、丝绸、皮革和阳离子多 糖。阳离子增溶基团的存在起着增强所述染料产物对带有正电荷的材 料的亲合力的作用，所述材料如聚丙烯。

                        表73酶染色氯化羊毛的颜色特性

      P75       P78          P79        P1         P203       P236       P182 只有前体  黑色      深褐色       黑色       深褐色     褐色       褐色       深褐色 化合物    AR 2.23   AR 2.79      AR 3.43    AR 3.37    AR 1.35    AR 0.27    AR 2.55

      W3        W3           W2-3       W2         W1         W2         W1-2

      L4-5/4-4  L4-5/4-5     L2-3/3     L4/4       L2-3/3     L3-4/3     L4-5/4-5

      C4/1      C4/1         C4/1       C2/1       C4/1       C4-5/3     C4-5/1-2 P5        紫色      黑色         深灰色     褐色       黄褐色     褐色       深橄榄色

      AR 2.71   AR 2.90      AR 3.23    AR 2.63    AR 1.82    AR 0.78    AR 2.35

      W2-3      W2           W3         W2         W1-2       W1-2       W1-2

      L2-3/2-3  L4/4         L3/3-4     L2/2-4     L2/2-3     L2/3-4     L2-3/2-3

      C4/1      C4/1         C3-4/1     C4/1       C5/4       C5/3       C5/2-3 P7        深褐色    深褐色       深紫色     褐色       桃色       黄褐色     粉灰色

      AR1.83    AR 2.54      AR 2.56    AR 2.48    AR 0.80    AR 0.48    AR 2.12

      W2-3      W2           W2         W2         W1         W1-2       W1-2

      L4-5/4    L3-4/3-4     L2-3/3     L4/4       L2/3       L1-2/2     L2/3

      C2-3/1    C3-4/1       C4/1       C4-5/1     C5/4       C5/4       C5/2 P8        灰色      灰蓝色       浅蓝色     褐色       紫色       铁锈色     深蓝色

      AR1.54    AR 2.23      AR 2.09    AR 2.65    AR 2.89    AR 0.84    AR 3.55

      W2        W2-3         W2         W1-2       W2         W2         W3

      L3/4      L4/3         L2/2-3     L2-3/4-5   L4/4-5     L3-4/3-4   L4-5/4-5

      C4-5/1    C4-5/1-2     C4/1       C5/1       C5/4-5     C5/4-5     C5/3 P11       浅蓝色    野鸭色       浅野鸭色   紫色       黄褐色     黄褐色     褐色

      AR 1.68   AR 1.53      AR 1.35    AR 2.33    AR 1.23    AR 0.15    AR 1.89

      W2        W2-3         W2-3       W2-3       W1-2       W3         W1-2

      L3/3      L3/3         L3-4/3     L4-5/3     L2/3       L2-3/3-4   L2-3/2-3

      C3-4/1-2  C4/2         C3-4/2     C4-5/2-3   C5/4       C5/4-5     C5/3-4 P17       浅铁锈色  洋红色       深洋红色   褐色       勃艮第葡   黄褐色     洋红色

                                                   萄酒色

      AR 2.27   AR 2.08      AR 2.74    AR 2.93    AR 2.35    AR 0.22    AR 2.72

      W1-2      W1           W1         W1         W1         W1-2       W1

      L2/2      L2-3/2-3     L2-3/3     L4/4-5     L3/3-4     L3-4/3-4   L2-3/2-3

      C4-5/1    C4-5/1-2     C4-5/1-2   C3-4/1     C5/3-4     C4-5/2-3   C5/1-2 P18    浅蓝色     蓝色       浅野鸭色    紫色       紫色       褐色       深蓝

   AR 1.51    AR 1.83    AR 1.76     AR2.34     AR 2.94    AR 0.85    AR 3.48

   W2-3       W3-4       W2-3        W3-4       W2         W1-2       W2-3

   L3/3-4     L4/4       L3/3-4      L3-4/4-5   L4/4-5     L3-4/4     L4-5/4-5

   C4/2       C4/2       C4/1-2      C4-5/1-2   C5/4       C5/4       C5/3 P29    灰色       橄榄色     黄褐色      浅紫色     浅紫色     橙色       灰色

   AR 1.09    AR 0.57    AR 0.58     AR 1.09    AR 1.23    AR 0.21    AR 1.26

   W2         W2-3       W2-3        W2         W1         W2         W2

   L4/4       L3/5       L3-4/3      L3-4/4     L3-4/3-4   L4-5/4-5   L3/3-4

   C5/4       C5/4       C5/4        C4-5/4     C5/4-5     C5/4       C5/4 P33    褐色       粉灰色     褐色        褐色       黄褐色     橙色       浅灰色

   AR 1.29    AR 0.19    AR 0.93     AR 0.50    AR 2.54    AR 0.10    AR 0.87

   W1-2       W2         W1-2        W2-3       W2         W1-2       W1-2

   L2-3/3     L2/3       L3-4/3      L3/3-4     L4/4       L4-5/4-5   L2-3/2-3

   C5/1-2     C5/2-3     C4-5/1-2    C5/2       C5/4       C5/4       C5/3-4 P37    蓝灰色     深蓝色     蓝绿色      深紫色     紫色       铁锈色     深紫色

   AR 1.65    AR 2.20    AR 2.23     AR 2.37    AR 2.54    AR 0.63    AR 3.13

   W2-3       W3-4       W2-3        W2-3       W2         W2         W2

   L3/3-4     L4/4       L3-4/3-4    L4-5/4-5   L3-4/4-5   L4/4       L3-4/4

   C4-5/3     C4-5/3     C5/2        C5/2       C5/4       C5/4       C5/3-4 P38    褐色       绿色       深橄榄色    绿灰色     褐色       橙色       褐色

   AR 1.21    AR 0.02    AR 0.48     AR 0.43    AR0.70     AR 0.17    AR 1.07

   W2         W1         W1-2        W1         W1-2       W1         W1-2

   L3/4       L1-2/2-3   L3/3-4      L2/3       L2-3/3     L4/3       L2-3/3-4

   C5/3       C5/3       C5/1-2      C4-5/2     C5/4       C5/4       C5/3-4 P39    深蓝色     深灰色     蓝灰色      紫色       紫色       铁锈色     深紫色

   AR 1.83    AR 0.23    AR 1.91     AR 0.40    AR 2.15    AR 0.64    AR 2.72

   W2         W2-3       W2-3        W2-3       W2-3       W1-2       W2

   L4/4       L3/3-4     L2-3/4      L4-5/4 5   L4/4       L4-5/5     L4-5/5

   C5/1-2     C5/1-2     C5/2-3      C4-5/1-2   C5/4       C5/4       C5/4 P40    褐色       褐色       灰褐色      褐色       褐色       橙色       褐色

   AR 1.66    AR 1.20    AR1.58      AR 1.53    AR 1.03    AR 0.21    AR 1.70

   W1-2       W1         W1          W1-2       W2         W1-2       W1

   L4/4-5     L1-2/2-3   L1 2/2-3    L4/4-5     L3/3-4     L3-4/4     L2-3/2-3

   C5/3-4     C5/3       C4-5/3      C5/2       C5/4       C5/4       C5/4-5 P41    深褐色     褐色       深橄榄色    深橄榄色   褐色       褐色       褐色

   AR 2.51    AR 0.81    AR 1.88     AR 1.29    AR 1.17    AR 0.81    AR 1.88

   W2         W1         W1          W1         W2         W1         W1

   L4/4       L2/3       L2/2        L2-3/4     L3-4/4     L3-4/3     L4/4

   C5/2       C4/2-3     C5/2-3      C5/1-2     C5/4       C5/3-4     C5/3-4 P42    深蓝色     深蓝色     野鸭蓝色    紫色       紫色       铁锈色       深蓝色

   AR 2.49    AR 0.84    AR 1.68     AR 1.50    AR 2.39    AR 0.62      AR 2.91

   W3         W3         W2-3        W2-3       W2-3       W2           W2-3

   L4-5/4     L4-5/3-4   L3-4/3      L3-4/4     L4-5/4-5   L3-4/4-5     L4/4

   C5/1-2     C5/3       C5/3-4      C5/2       C5/4       C5/4         C4-5/4 P43    深蓝色     深蓝色     野鸭蓝色    紫色       紫色       铁锈色       深蓝色

   AR 2.60    AR 0.35    AR 1.26     AR 0.89    AR 2.31    AR 0.63      AR 2.93

   W2-3       W3         W3-4        W2-3       W2-3       W2           W2-3

   L4/4-5     L4/4       L3-4/3-4    L4-5/4-5   L4-5/4-5   L4-5/4-5     L4-5/4-5

   C5/1-2     C5/3-4     C5/3-4      C5/2       C5/4       C5/4         C5/4 P70    褐色       褐色       褐色        黄褐色     黄褐色     铁锈色       深蓝色

   AR 2.59    AR 2.33    AR2.74      AR 2.66    AR 1.64    AR 0.30      AR 2.66

   W2-3       W2         W1-2        W1-2       W1         W2           W1-2

   L3-4/3-4   L3-4/3     L2-3/2-3    L3/3       L1-2/2-3   L3-4/4-5     L3-4/4

   C4/1       C4-5/1-2   C4-5/1      C4-5/1     C5/4-5     C5/4-5       C4-5/3-4 P127   黑色       绿色       野鸭色      黑色       深野鸭色   深褐色       野鸭蓝色

   AR 3.15    AR 2.27    AR 2.91     AR 3.16    AR 3.16    AR 0.97      AR 2.30

   W2-3       W2-3       W2          W2-3       W1-2       W1-2         W2

   L4-5/4     L3-4/3     L2-3/2-3    L4/4       L3/3-4     L3-4/3-4     L3-4/3-4

   C3-4/1     C4-5/1-2   C4-5/1-2    C5/1       C5/3       C4-5/3-4     C4-5/3-4 P202   褐色       洋红色     紫色        铁锈色     橙色       黄色         深褐色

   AR 2.97    AR 3.07    AR 4.07     AR 2.65    AR 1.37    AR-0.14      AR 3.23

   W1-2       W1-2       W1          W1         W1         W2           W1

   L2-3/3-4   L1-2/2     L2/1-2      L3/3       L1-2/1-2   L3-4/3       L3/3-4

   C4 5/1-2   C3-4/2-3   C5/2-3      C5/2       C5/4-5     C5/5         C5/3-4 实施例17

在pH5和60℃下检测被取代的芳族二胺前体与一种磺化萘胺结 合后对单纤维尼龙编织物(#322型试验织物)和氯化羊毛(#530型试验 织物)的染色效果。所使用的酶是从Novo Nordisk A/S获得的的嗜 热毁丝霉漆酶(2880 Bagsvaerd，丹麦)。所使用的前体是N-苯基-1， 4-苯二胺(P75)以及所使用偶联剂是5-氨基-萘磺酸(P43)，它们 都获自于Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，WI 53201。

在含有1％o.w.f.的Intravon FW 75的水溶液中将尼龙和氯化 的羊毛样品(15g)预湿润10分钟。将Britton-Robinson缓冲液 (0.1M，pH5)and Intratex CWR(2％o.w.f.)加到每个烧杯 中以便产生15∶1的染色液体比例。按顺序加入下列物质：偶联剂 (P43)，然后前体(P75)，然后被预湿润的样品，最后是酶。所述 酶的使用量为2.2LAMU/Ml。前体与偶联剂的比例是50/50摩尔％。 将所述烧杯盖好后在自动洗衣-O-计量器(LOM)中于60℃下运转75 分钟。从染色槽中拿出样品，挤去多余的染料，然后用冷却自来水在 桶中流动冲洗15分钟，拧干并平放风干。样品的颜色和耐洗涤色牢度 按照上述方法进行测定，测定结果见表74。所述结果表明氯化的羊毛 被染成蓝灰色，而尼龙被染成亮蓝色。酶处理的样品与非酶处理的对 照样品间的CIEL*a*b*差异表明所述漆酶在颜色形成过程中的重要 性。

表74有或无漆酶存在的条件下，尼龙与氯化羊毛在用P75/P43 染色后进行耐洗涤色牢度试验所得到的CIEL*a*b*颜色值

样品                   L*       a*           b*

对照尼龙               58.4     2.32         -5.63

经酶处理的尼龙         28.6     5.60         -26.1

经洗涤的尼龙           30.9     5.96         -28.0

对照氯化-羊毛          72.2     0.80         22.8

经酶处理的氯化羊毛     27.8     -2.54        -7.19

经洗涤的氯化羊毛       33.3     -3.22        -7.48 实施例18

测试了从染色中间体的酶催化反应中预先形成的产物对一种材料 进行染色的能力并与一种采用同样的染色中间体和酶进行原位染色的 材料进行了比较。将下列物质在一个不锈钢容器中进行混合：缓冲液 (100mL，pH5，0.1M Britton-Robinson)，商用染色辅剂(0.1％ o.w.b.Intratex CWR，Crompton & Knowles Colors， Inc.，Box 33188，Charlotte，NC 28233)，前体(获自于Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，WI 53201的5mM 4-氨基二苯 胺-2-磺酸)，偶联剂(获自于Aldrich Chemical Co.，Inc.， Milwaukee，WI 53201的5mM 5-氨基-2-萘磺酸)和酶(获自于Novo Nordisk A/S(2880 Bagsvaerd，丹麦)的3.4LAMU/mL嗜热毁丝 霉漆酶)。将所述烧杯密封后在一个自动洗衣-O-计量器(LOM)中于 60℃下转动60分钟。将暗蓝色染色槽冻干以便得到一种含有所述染料 产物、缓冲盐和残余染料辅剂的粉末。在一个不锈钢容器中用 Britton-Robinson缓冲液(0.1M，pH5)将所述冻干粉末稀释到其 初始体积。加入一个5g的氯化羊毛样品，该样品预先用1％o.w.f. 的商用湿润剂(Intravon FW 75，Crompton & Knowles Colors， Inc.，Box 33188，Charlotte，NC 28233)进行了润湿。将所述烧 杯密封后在一个LOM中于60℃下转动60分钟。处理后，用冷却自来 水冲洗所述样品，然后进行空气干燥。按照上述方法对被染色的样品 进行颜色和耐洗涤色牢度进行评价。用预先形成的染料产物进行染色 的氯化羊毛的CIEL*a*b*颜色值和耐洗涤色牢度见表75。为了进行对 比，还显示了被原位染色的氯化羊毛的颜色数据。结果表明利用通过 酶介导的反应预先形成的染料产物可以对一种材料进行染色。在该实 例中，原位染色在织物上产生一种比预先形成的染料更深的(低L* 值)、更蓝的(更负的b*)颜色。测得的被原位染色的羊毛的耐洗涤 色牢度(ΔE 5.77，GS 2-3)比用预先形成的染料产物进行染色的羊 毛的色牢度(ΔE 6.28，GS 2)略微好一些。期望通过优化利用预先形 成的染料产物的工艺，如所述染料产物的分离和配制，和温度、时 间、pH的调节，以及用于染色的染色辅剂能够改进利用所述预先形成 的产物进行染色的结果。 表75被原位染色或被由漆酶介导P182与P43反应而预先形成的染 料产物染色的氯化羊毛的颜色值

样品处理              L*         a*            b*

预先形成的染料产物    20.5       1.26          -10.7

洗涤的预先形成的染    26.7       1.06          -10.2

料产物

原位染色的            16.4       2.17          -11.7

洗涤的原位染色的      21.9       1.30          -13.2 实施例19

在pH5和80℃下检测缓冲液强度和液体比例对羊毛的影响。所 使用的酶是从Novo Nordisk A/S(2880 Bagsvaerd，丹麦)获得的 嗜热毁丝霉漆酶。所使用的前体是4-氨基二苯胺-2-磺酸(P182)以及 所使用的偶联剂是5-氨基-2-萘磺酸(P43)，其全部从Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，WI 53201获得。

在一种含有1％o.w.f.的Intravon FW 75的水溶液中将羊毛样 品(10g)预润湿10分钟。将缓冲强度不同的醋酸钠缓冲液(pH5) 和Intratex CWR(2％o.w.f.)加到每只烧杯中从而得到一种比例为 10∶1，15∶1，和20∶1的染色液体。顺序加入下列物质：偶联 剂(P43)，然后前体(P182)，然后是预湿润的羊毛样品，最后是 酶。前体与偶联剂的比例是50/50摩尔％。将所述烧杯盖好后在自动 洗衣-O-计量器(LOM)中于80℃运行60分钟。加入磺酸将pH值降到 2，再将所述烧杯于80℃下运行30分钟。从染色槽中取出羊毛样品， 挤去多余的染料后转移到LOM烧杯中，该烧杯中预先以20∶1的液体 比例注入了0.1％w/v的Intravon NF，然后在LOM中于40℃下运 行15分钟以便迅速洗涤所述织物从而去掉表面的染料。接着在桶中用 冷却的自来水将样品流动冲洗15分钟，拧干后进行空气干燥。按照上 述方法测定羊毛的颜色，所述结果见表76。所述结果表明不同范围的 液体比例和缓冲液强度获得了相近的颜色和深浅度。

表76在pH5和不同的液体比例和缓冲强度下，用3％o.w.f.的P182/P43和

     1LAMU/Ml的漆酶处理羊毛后的CIEL*a*b*颜色

液体比例  缓冲液强度(M)    L*      a*      b*

10∶1     0.1              16.3    1.49    -7.28

15∶1     0.1              16.2    1.98    -7.48

20∶1     0.1              16.4    2.34    -7.78

10∶1     0.01             16.8    2.26    -7.76

10∶1     0.05             16.4    1.54    -6.96

10∶1     0.1              16.4    1.46    -7.40 实施例20

在pH5和80℃下检测增加前体和偶联剂结合的总浓度对三种羊 毛的影响。所使用的酶是从Novo Nordisk A/S(2880 Bagsvaerd， 丹麦)获得的嗜热毁丝霉漆酶。所使用的前体是4-氨基二苯胺-2-磺酸 (P182)以及所使用的偶联剂是5-氨基-2-萘磺酸(P43)，其全部从 Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，WI 53201获得。

在一种含有1％o.w.f.的Intravon FW 75的水溶液中将羊毛样 品(5g)预先润湿10分钟。将Britton-Robinson缓冲液(0.1 M，pH5)和Intratex CWR(2％o.w.f.)加到每只烧杯中从而得到 一种比例为20∶1的染色液体。顺序加入下列物质：偶联剂 (P43)，然后前体(P182)，然后预湿润的羊毛样品，最后是酶。 前体与偶联剂的比例55/45摩尔％。将所述烧杯盖好后在自动洗衣-O- 计量器(LOM)中于相关温度下运行60分钟。从染色槽中取出羊毛样 品，挤去多余的染料后转移到LOM烧杯中，该烧杯中预先以40∶1的 液体比例注入了0.1％w/v的Intravon NF，然后在LOM中于40℃ 下运行15分钟以便迅速洗涤所述织物从而去掉表面的染料。接着在桶 中用冷却的自来水将样品流动冲洗15分钟，拧干后进行空气干燥。按 照上述方法测定羊毛的色牢度。在580nm下测得所产生的蓝色深度为 K/S，其中K/S随颜色的增强而增大。颜色和色牢度见表77和78。所 述结果表明随着前体/偶联剂总浓度的增加，织物的颜色深度增强。

表77用2LAMU/mL漆酶和不同总浓度的P182/P43在pH5和80℃下处理的三

                      种羊毛的K/S颜色强度

总P182/P43      羊毛华达呢     羊毛法兰绒      氯化羊毛

(mM)

6               22.6           22.97           26.12

4               19.03          19.17           20.71

2               11.63          11.80           9.78

    表78用2LAMU/mL漆酶和不同总浓度的P182/P43在pH5和80℃下处理的三

              种羊毛的灰度耐光(L)和耐洗涤(W)色牢度

总P182/P43    羊毛华达呢    羊毛法兰绒    氯化羊毛

(mM)           L      W      L      W      L    W

6              4.5    4      4.5    4.5    4    2.5

4              4.5    4.5    4.5    2.5    3.5  2.5

2              3.5    4.5    4      4.5    3.5  2 实施例21

在pH5下检测温度的增加对用总浓度为1％o.w.f.的前体/偶联 剂处理的三种羊毛的影响。所使用的酶是从Novo Nordisk A/S (2880 Bagsvaerd，丹麦)获得的嗜热毁丝霉漆酶。所使用的前体是 4-氨基二苯胺-2-磺酸(P182)以及所使用的偶联剂是5-氨基-2-萘磺 酸(P43)，其全部从Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，WI 53201获得。所采用的染色方法和检测方法如实施例20中所述。颜色 和色牢度如表79和80所示。所述结果表明随着温度的增加织物的颜 色深度增强。

    表79用2LAMU/mL漆酶和不同总浓度的P182/P43在pH5和不同温度下处理

                       的三种羊毛的K/S颜色强度

温度(℃)       羊毛华达呢    羊毛法兰绒    氯化羊毛

60             1.61           9.65          7.17

70             12.89          13.19         10.57

80             13.66          11.92         11.89

    表80用2LAMU/mL漆酶和不同总浓度的P182/P43在pH5和不同温度下处理

              的三种羊毛的灰度耐光(L)和耐洗涤(W)色牢度

温度(℃)      羊毛华达呢       羊毛法兰绒        氯化羊毛

               L      W         L       W         L     W

60             3      3.5       3.5     4.5       -     2.5

70             4.5    4.5       4       4         -     2

80             4      4.5       4       4         -     2.5 实施例22

在pH5下检测作为酶染色催化剂的过氧化物酶对经过总浓度为 30％o.w.f.的前体/偶联剂处理的羊毛的影响。所使用的酶是从Novo Nordisk A/S(2880 Bagsvaerd，丹麦)获得的灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)过氧化物酶。所使用的前体是4-氨基二苯胺-2-磺酸 (P182)以及所使用的偶联剂是5-氨基-2-萘磺酸(P43)，其全部从 Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，WI 53201获得。

在一种含有1％o.w.f.的Intravon FW 75的水溶液中将羊毛样 品(10g)预先润湿10分钟。将Britton-Robinson缓冲液(0.1 M，pH5)和Intratex CWR(2％o.w.f.)加到每只烧杯中从而得到 一种比例为15∶1的染色液体。顺序加入下列物质：偶联剂 (P43)，然后前体(P182)，然后预湿润的羊毛样品，最后是酶。 前体与偶联剂的比例50/50摩尔％。将所述烧杯盖好后在自动洗衣-O- 计量器(LOM)中于80℃下运行60分钟。加入磺酸(0.3％o.w.b.)来 降低pH值并抽空染色槽。再将所述烧杯在LOM中于80℃下运行30分 钟。从染色槽中取出羊毛样品，挤去多余的染料后转移到LOM烧杯 中，该烧杯中预先以40∶1的液体比例注入了0.1％w/v的 Intravon NF，然后在LOM中于40℃下运行15分钟以便迅速洗涤所 述织物从而去掉表面的染料。接着在桶中用冷却的自来水将样品流动 冲洗15分钟，拧干后进行空气干燥。测定织物颜色的CIEL*a*b*。表 81所示的结果表明在羊毛上产生了微红-蓝色。颜色的深度随过氧化 物酶的用量增加而加强。

      表81在pH5下用总浓度为3％o.w.f.的P182/P43和1.2POXU/Ml过氧

          化物酶以及不同浓度的过氧化氢处理的羊毛的CIEL*a*b*

H2O2(mM)              L*               a*                  b*

0.5                     27.6             2.81                -9.08

1                       21.4             3.07                -9.77

2                       18.5             3.40                -9.08

3                       19.1             3.48                -8.77 实施例23

在有两种不同的氧化还原酶存在的条件下测定通过一种磺化芳族 二胺前体与两种不同的磺化氨基萘的混合在羊毛上产生的颜色。所使 用的酶是从Novo Nordisk A/S(2880 Bagsvaerd，丹麦)获得的灰 盖鬼伞过氧化物酶和嗜热毁丝霉漆酶。所使用的前体是4-氨基二苯 胺-2-磺酸(P182)以及所使用的偶联剂是5-氨基-2-萘磺酸(P43)和 8-苯氨基-1-萘磺酸(P287)，其全部从Aldrich Chemical Co.， Inc.，Milwaukee，WI 53201获得。前体和偶联剂的比例为1∶1摩 尔比并且用量为3％o.w.f.。

所采用的染色方法和检测方法如实施例22中所述。测定织物颜色 的CIEL*a*b*。表82所列出的结果表明同样的前体与不同的偶联剂可 以产生不同的颜色。所述结果表明针对同样的前体/偶联剂系统，采用 过氧化物酶和漆酶处理可以在CIEL*a*b*颜色空间的相同象限内产生 颜色。

 表82在pH5下用总浓度为3％o.w.f.的前体/偶联剂和1.2POXU/Ml过氧

化物酶加上1mM H2O2或2LAMU/Ml漆酶处理的羊毛的CIEL*a*b*颜色

前体/偶联剂          酶            L*          a*        b*

P182/P43             过氧化物酶    21.4        3.07      -9.77

P182/P43             漆酶          18.5        1.30      -4.68

P182/P287            过氧化物酶    27.6        1.79      5.54

P182/P287            漆酶          16.9        1.75      0.27 实施例24

将包括精纺二醋酸酯、漂白的棉花、精纺聚酰胺(尼龙6.6)、 绢丝、精纺粘胶丝和精纺羊毛在内的多纤维织物样品(0.85g；1型， 试验织物公司，Box 26，West Pittsboro，PA 18643)在非离子聚氧 化乙烯醚湿润剂(0.1％Diadavin UFN，Bayer，Pittsburgh，PA 152059741)中浸泡5分钟。将一个多纤维织物样品放入一个装有20 份0.1M缓冲液(pH5或pH8)的烧瓶中。通过将表1-8中列出的化 合物溶解在合适的溶剂中来制备染色前体和偶联剂的原液。通过向槽 中只加入一种前体或偶联剂原液，或者通过以1∶1的摩尔比加入一种 前体原液和一种偶联剂原液来获得10mM的总浓度。以3.4LAMU/mL 的浓度将嗜热毁丝酶漆酶加到每只烧瓶中。所述烧瓶通过轻微震荡在 60℃下温育60分钟。温育后，用冷却自来水将样品冲洗1分钟，然 后干燥。通过目测评价多纤维样品的颜色。通过单一的前体或偶联剂 产生颜色的结果被列在表83中，通过前体-偶联剂混合物产生的颜色 的结果被列在表84中。所述结果表明单独使用前体或偶联剂与两者的 结合使用相比所产生的颜色不同。所述结果还表明一系列在不同类型 的纤维上能够产生颜色。

              表83通过用漆酶处理的单种化合物在不同类型纤维上产生的颜色

单种化合物    pH    羊毛        粘胶丝      丝          尼龙6.6    棉花      二醋酸酯

P3            5     褐色        褐色污迹    黑色        褐色       褐色      褐色

P3            8     褐色        褐色污迹    黑色        褐色       褐色      褐色

P5            5     浅褐色      褐色污迹    浅褐色      浅褐色     褐色      浅褐色

              8     浅褐色      褐色污迹    浅褐色      浅褐色     褐色      浅褐色

P16           5     褐色        褐色        褐色        褐色       浅褐色    浅色污迹

              8     浅色污迹    褐色        浅色污迹    污色       黄褐色    无色

P17           5     灰色        灰色        灰色        灰色       深灰色    灰色

              8     无色        无色        无色        无色       浅粉色    无色

P19           8     褐色        粉色污迹    深褐紫红色  淡紫色     淡紫色    浅褐色

P28*          8     浅色污迹    橄榄色      浅色污迹    无色       橄榄色    无色

P36*          5     粉色        橄榄色      橄榄色      粉色       橄榄色    无色

              8     浅色污迹    深橄榄色    浅灰色      无色       橄榄色    无色

P37           5     浅色污迹    无色        浅色污迹    浅色污迹   无色      无色

              8     浅色污迹    无色        浅色污迹    浅色污迹

P39           5     浅灰色      浅紫色      紫色        淡棕色     浅色污迹  无色

              8     淡棕色      浅橄榄色    淡棕色      浅色污迹   浅色污迹  无色

P42           5     粉色        粉色污迹    深粉色      粉色       粉色污迹  无色

              8     浅粉色      粉色污迹    浅粉色      浅色污迹   无色      无色

P43           5     粉色        粉色污迹    深粉色      粉色       粉色污迹  无色

              8     浅桃色      粉色污迹    无色        无色       无色      无色

P75           5     黑色        紫色        黑色        深紫色     紫色      黑色

              8     黑色        紫色        黑色        黑色       淡紫色    黑色

P78           5     灰色        浅紫色      深紫色      浅褐色     紫色      浅褐色

P79           5     褐色        浅色污迹    深褐色      浅色污迹   浅褐色    浅色污迹

              8     褐色        深色污迹    深褐色      褐色       褐色      褐色

P83           5     褐色        浅色污迹    深褐色      浅色污迹   浅褐色    浅色污迹

              8     褐色        深色污迹    深褐色      褐色       褐色      褐色

P120          8     无色        无色        无色        无色       无色      无色

P157          5     浅色污迹    无色        浅色污迹    无色       无色      浅色污迹 缩写关键词：It＝浅；dk＝深；st＝污迹；n.c.＝无色；*＝在没有酶存在 的条件下也获得了与本表所列颜色相近的颜色(如果没有星号，在没 有酶存在的条件下不产生或只产生一点颜色)。

               表84通过被漆酶处理的化合物混合物在不同类型纤维上产生的颜色

前体/偶联剂    pH    羊毛         粘胶丝       丝        尼龙6.6    棉花        二醋酸酯

P5/P16         5     褐色         褐色污迹     褐色      褐色       淡紫色      浅色污迹

               8     深金黄色     铁锈褐色     金黄色    前橙色     深紫色      无色

P3/P17         8     金黄色       浅褐色       褐色      淡紫色     褐色        浅色污迹

P79/P17        5     褐紫红色     紫色污迹     褐紫红色  深粉色     紫色        粉色

               8     褐色         粉色污迹     褐紫红色  粉色       蓝色        浅桃色

P83/P17        5     褐色         紫色         深褐色    灰色污迹   紫色        浅色污迹

P5/P28         8     浅色污迹     橄榄色       浅色污迹  无色       橄榄色      无色

P19/P28        8     浅灰色       橄榄色       浅灰色    无色       橄榄色      浅色无迹

P75/P28        8     深灰色       绿色         深蓝色    深蓝色     灰色        褐色

P79/P28        8     深灰色       浅蓝色       深蓝色    蓝灰色     灰色        灰色污迹

P3/P36         5     深灰色       浅色污迹     深紫色    褐色       浅色污迹    金黄色

               8     灰色         浅色污迹     深紫色    浅褐色     无色        黄色

P75/P36        8     深灰色       浅灰色       黑色      深灰色     浅灰色      褐色

P3/P37         5     深紫色       紫色污迹     深紫色    深紫色     紫色污迹    紫色

               8     深紫色       紫色污迹     深紫色    深紫色     紫色污迹    紫色

P75/P37        5     深蓝色       浅色污迹     深蓝色    紫色       浅色污迹    紫色

               8     紫色         浅色污迹     紫色      紫色       浅色污迹    紫色

P79/P37        5     绿色         浅色污迹     深蓝色    蓝色       浅色污迹    蓝色

               8     蓝色         浅色污迹     深蓝色    蓝色       浅色污迹    蓝色

P83/P39        5     红色         粉色         深红色    红色       粉色        粉色

               8     深红色       浅紫色       褐紫红色  深粉色     浅紫色      粉色

P79/P43        5     蓝色         无色         深蓝色    蓝色       无色        无色

               8     蓝色         无色         深蓝色    蓝色       无色        无色

P3/P120        8     金黄色       无色         金黄色    橙色       无色        黄色

P79/P157       5     深蓝色       紫色污迹     深蓝色    浅紫色     紫色污迹    浅紫色 实施例25

通过将染色系统施用于一种脱乙酰壳多糖薄膜来检测酶介导的染 色系统对一种阳离子多糖进行染色的能力。脱乙酰壳多糖是一种由大 部分的b-(1，4-)-2-去氧-2-氨基-D-吡喃葡萄糖单元和部分的b- (1，4-)-2-去氧-2-乙酰氨基-D-吡喃葡萄糖组成的杂多糖。在酸性 条件下，通过聚合物主链上的取代氨基的作用，脱乙酰壳多糖获得一 种阳离子的特性。

用1∶1摩尔比的P79/P43以总浓度为6％o.w.f.的前体/偶联剂 对透明的、无色的脱乙酰壳多糖薄膜进行染色。染色条件是：pH5； LR20：1；90℃，45分钟；利用4LAMU/mL的嗜热毁丝酶漆酶来的得到 一种具有以下颜色坐标：L*26.8，a*-1.52，b*-14.9的蓝色薄膜。 实施例26

在有或没有3.4LAMU/mL嗜热毁丝酶漆酶存在的条件下，按照实 施例26所述的方法用10mM 4-(4’-N，N-双-(2-羟乙基))-苯基 偶氮苯胺(P46)处理包括精纺二醋酯、漂白的棉花、精纺聚酰胺(尼 龙6.6)、绢丝、精纺粘胶丝和精纺羊毛在内的多纤维织物样品(1型， 试验织物公司，Box 26，West Pittsboro，PA 18643)。通过目测对 所述样品的颜色进行评价。所述结果被列于表85。所述结果表明通过 延伸连接的芳香体系已经具有颜色的芳族二胺型前体能够在有漆酶存 在的条件下发生反应从而产生一种不同的颜色。

       表85在有或没有漆酶存在的条件下通过4-(4’-N，N-双-(2-羟乙基))-苯

                     基偶氮苯胺在不同类型纤维上产生的颜色

漆酶    pH     羊毛      胶粘丝    丝        尼龙    棉花      二醋酸

                                                     6.6       酯

没有    5      橙色      黄色      金黄色    橙色    浅黄色    橙色

有      5      深褐色    褐色      黑色      褐色    深褐色    深灰色

没有    8      橙色      黄色      金黄色    橙色    浅黄色    橙色

有      8      深褐色    褐色      黑色      褐色    深褐色    黑色 实施例27

在有或没有3.4LAMU/mL嗜热毁丝酶漆酶存在的条件下，按照实 施例26所述的方法用10mM 4，4’-二氨基二苯胺硫酸酯(P74)处 理包括精纺二醋酯、漂白的棉花、精纺聚酰胺(尼龙6.6)、绢丝、 精纺粘胶丝和精纺羊毛在内的多纤维织物样品(1型，试验织物公司， Box 26，West Pittsboro，PA 18643)。通过目测对所述样品的颜色 进行评价。所述结果被列于表86。所述结果表明所述漆酶能够增强在 染色条件下自动进行氧化的化合物的颜色形成反应。在该实施例种， 尤其可以看到对胶粘丝和棉花的效果。

       表86在有或没有漆酶存在的条件下通过4，4’-二氨基二苯胺硫酸酯(P74)在

                              不同类型纤维上产生的颜色

漆酶    pH    羊毛     胶粘丝       丝        尼龙6.6    棉花      二醋酸酯

没有    5     紫色     紫色污迹     紫色      浅紫色     紫色污迹  紫色

有      5     紫色     紫色         黑色      紫色       深紫色    紫色

没有    8     深紫色   紫色污迹     深紫色    深紫色     紫色污迹  黑色

有      8     深紫色   紫色         黑色      黑色       深紫色    黑色 实施例28

在pH5和80℃下利用磺化的芳族二胺和磺化的氨基奈染色中间 体混合物检测漆酶对未加工的兽皮皮革的染色能力，并且与没有漆酶 存在的情况进行比较。所使用的酶是从Novo Nordisk A/S(2880 Bagsvaerd，丹麦)获得的嗜热毁丝霉漆酶。所使用的前体是4-氨基 二苯胺-2-磺酸(P182)以及所使用的偶联剂是5-氨基-2-萘磺酸(P43)， 其全部从Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，WI 53201获 得。

用一种含有1％o.w.g.(“以物质的重量”)的商用湿润剂， Intravon FW 75的沸水中将未加工的兽皮皮革样品(10g)冲洗三 次。将醋酸钠缓冲液(0.1M，pH5)，Intravon FW 75(1％o.w.g.) 和Intratex CWR(2％o.w.f.)加到150mL的LOM烧杯中从而得到 一种比例为15∶1的染色液体。顺序加入下列物质：偶联剂 (P43)，然后前体(P182)，然后预湿润的皮革样品。前体与偶联 剂的比例50/50摩尔％。将所述烧杯盖好后在自动洗衣-O-计量器 (LOM)中于80℃下旋转10分钟。加入漆酶(0.8LAMU/mL)。再将 所述烧杯于80℃下旋转50分钟。将浓甲酸(5％o.w.g.)加到每只 烧杯中，将所述烧杯于80℃下旋转30分钟。从染色槽中取出样品， 用大量的温水进行冲洗后进行空气干燥。按照上述方法进行颜色的测 定，并将四次读数的平均值列于表87。未加工的兽皮皮革的原始的、 未处理的颜色是L*83.7，a*-1.11，和b*20.4。所述结果表明与没 有酶的对照相比，用漆酶处理皮革样品产生的颜色(较低的终L*值) 较深。

    表87漆酶处理的和对照皮革样品的CIEL*a*b*颜色值

处理           L*               a*              b*

漆酶           24.2             1.04            -5.10

对照           33.8             1.34            -7.48 实施例29

利用一种磺化的芳族二胺和磺化的氨基萘染色中间体的混合物， 在pH5和80℃下检测单独的过氧化物以及与过氧化物酶结合的过氧 化物对羊毛进行染色的能力，并且与使用漆酶的情况进行比较。所使 用的酶是从Novo Nordisk A/S(2880 Bagsvaerd，丹麦)获得的嗜 热毁丝霉漆酶和灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)过氧化物酶。所使 用的前体是4-氨基二苯胺-2-磺酸(P182)以及所使用的偶联剂是5-氨 基-2-萘磺酸(P43)，其全部从Aldrich Chemical Co.，Inc.， Milwaukee，WI 53201获得。试剂级的过氧化氢水溶液获自于 Fisher Scientific，Fair Lawn，NJ 07410。

在一种含有1％o.w.f.的Intravon FW 75的水溶液中将羊毛样 品(10g)预润湿10分钟。将醋酸钠缓冲液(0.1M，pH5)和 Intratex CWR(2％o.w.f.)加到150mL的LOM烧杯中从而得到一种 比例为15∶1的染色液体。顺序加入下列物质：偶联剂(P43)，然 后前体(P182)，然后预湿润的羊毛样品。最后加入漆酶(2 LAMU/mL)，过氧化氢(15-300mM)或一种过氧化物酶(3POXU/mL) 和过氧化物(15mM)的混合物。前体与偶联剂的比例50/50摩尔％。 将所述烧杯盖好后在自动洗衣-O-计量器(LOM)中于80℃下运行60 分钟。加入磺酸将pH降到2，再将所述烧杯于80℃下运行30分钟。 从染色槽中取出羊毛样品，挤去多余的染料后转移到LOM烧杯中，该 烧杯中预先以20∶1的液体比例注入了0.1％w/v的Intravon NF，然后在LOM中于40℃下运行15分钟以便迅速洗涤所述织物从而 去掉表面的染料。接着在桶中用冷却的自来水将样品流动冲洗15分 钟，拧干后进行空气干燥。在580nm下测得的羊毛的颜色深度为 K/S，见表88。所述结果表明利用漆酶或过氧化物酶/过氧化物系统使 羊毛获得了最深的颜色(最高的K/S)。单独使用过氧化物在一定范 围内的过氧化物浓度下产生了较浅的类似颜色。耐洗涤色牢度试验给 出了各种各样的结果，然而漆酶处理的样品与只用过氧化物或过氧化 物/过氧化物酶处理的样品相比具有好得多的耐光色牢度(较低的dE 光)。

    表88用P182/P43和过氧化物，过氧化物/过氧化物酶或漆酶处理的羊毛的

                 K/S颜色深浅程度和耐洗涤和耐光色牢度

酶         过氧化物      528nm下的        dE洗涤       dE光照(40

           (mM)          K/S                           小时)

           15            16.3             --           --

           45            20.9             0.75         3.81

           75            20.2             --           --

           100           21.2             1.78         3.61

           300           11.4             --           -- 过氧化物酶     15            22.4             1.95         3.20 漆酶           0             23.8             1.68         1.97

本文记载和要求保护的发明范围不受本文中公开的具体技术方案 的限制，因为这些技术方案旨在对本发明的几个方面进行说明。任何 等同的技术方案都将包括在本发明的范围内。实际上，除了本文公开 和记载的发明外，根据上述说明书的内容对本发明进行改变的各种技 术方案对于本技术领域的技术人员来说都是显而易见的。这种改变也 将落入所述权利要求书的保护范围内。在冲突的情况下，以本申请包 括定义在内的记载内容为准。

本文引用了多种参考文献，所述参考文献记载的全部内容被引入 本文作为参考。