用于纺织品染色的酶促方法

发明所属技术领域

本发明涉及染色物质的方法，该方法包括(a)在包含一种或多种单-，二- 或多环芳族化合物或杂芳族化合物的水溶液中浸泡所说的物质；和(b)在水 溶液中用(ⅰ)过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的酶或(ⅱ)对所说的一种或 多种芳族或杂芳族化合物表示出氧化酶活性的酶处理浸湿的物质；其中所 说的物质是由毛皮、兽皮、皮革、丝绸或羊毛制造的织物、纱线、纤维、 衣服或薄膜。 发明背景

纺织品的染色经常被认为是在纺织品和衣服的制造中最重要和最昂贵 的单一步骤。在纺织业中，目前有两种主要类型的工艺用于染色，即分批 染色和连续染色。在分批工艺中，使用喷嘴、滚筒，以及还原染色器等。 在连续工艺中，使用轧染系统等。参见，例如I．D．Rattee、In C. M． Carr(Ed．)，“纺织品工业化学”，Blackic学术和专业出版社，格拉斯哥， 1995，p．276。

染料的主要种类是偶氮染料(单-，二-，三-等)，羰基染料(蒽醌和靛蓝衍 生物)，花青染料，二-和三苯基甲烷和酞菁染料。所有这些染料都包含有产 生颜色的发色团。有三种类型涉及氧化／还原机制的染料，即还原染料、硫 化染料和偶氮染料。在这些染色中，氧化／还原步骤的目的在于使染料在可 溶性形式和不溶性形式之间变化。

氧化还原酶(例如，氧化酶和过氧化物酶)是本领域熟知的。

一类氧化还原酶是漆酶(苯二醇：氧氧化还原酶)，它们是包含多酮的酶， 其催化酚类和相关化合物的氧化。漆酶介导的氧化作用导致从合适底物产 生芳香基中间产物，这些中间产物的最终偶联给出二聚反应产物、寡聚反 应产物和多聚反应产物的结合体。这些反应本质上对生物合成途径重要， 它们导致黑色素、安哥斯吐那生物碱类、毒素、木质素，以及腐殖酸的形 成。

另一类氧化还原酶是在过氧化氢存在下氧化化合物的过氧化物酶。

对于染发来说，发现漆酶是有用的。参见，例如PCT申请No．PCT／US 95／06815和PCT／US95／06816。欧洲专利No．0504005公开了漆酶可以用 于在6. 5和8．0之间的pH范围对毛织物染色。

Saunders等，过氧化物酶，伦敦，1964，p．10 ff公开了过氧化物酶作 用于各种氨基化合物和酚化合物，导致颜色的产生。

日本专利申请出版物No．6-316874公开了对棉花进行染色的一种方法， 这种方法包括用包含氧的介质处理棉花，其中氧化还原酶选自由抗坏血酸 氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶、漆酶、过氧化物酶和多酚氧化酶组 成的组，这些酶用于产生氧。

WO 91／05839公开了氧化酶和过氧化物酶对抑制纺织物染料的转移是 有用的。

本发明的目的是提供一种对纺织品织物进行染色的酶促方法。 发明概要

本发明涉及一种使物质着色的方法，该方法包括(a)在包含一种或多种单 -，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物的水溶液中浸泡所说的物质，每种 这样的化合物可以是可以不是被一个或多个官能团或取代基取代的，其 中，每一个官能团或取代基选自由卤素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷 基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、羟基、 卤羰基、氨基甲酰基、脲基、膦酸根合、膦酰基、C1-18-烷基、C1-18-链烯 基、、C1-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18- 烷基硫烷基、C1-18-烷基磺酰基、由一个，二个或三个C1-18烷基基团取代 的C1-18-烷基亚氨基或氨基组成的组；和(b)在水溶液中用(ⅰ)过氧化氢源和表 现出过氧化物酶活性的酶或(ⅱ)对所说的一种或多种芳族化合物或杂芳族化 合物表现出氧化酶活性的酶处理浸湿的物质；其中所说的物质是由毛皮、 兽皮、皮革、丝绸或羊毛制造的织物、纱线、纤维、衣服或薄膜。 发明详述

对于染色物质利用氧化还原酶有几个重要的优点。例如，本发明的方法 中所使用的染色系统是利用廉价的有色前体。此外，在该方法中的温和条 件将导致更少的织物破坏。

本发明的方法可用于染色物质如织物、纱线、纤维、衣服和薄膜。优选 地，该物质是由毛皮制造的。在另一个优选的实施方案中，该物质是由兽 皮制造的。在另一个优选的实施方案中，该物质是由皮革制造的。在另一 个优选的实施方案中，该物质是由丝绸制造的。在另一个优选的实施方案 中，该物质是由羊毛制造的。

在本发明的方法中，在包含一种或多种单-，二-或多环芳族合物或杂芳 族化合物的水溶液中浸泡所说的物质，每种这样的化合物可以是可以不是 被一个或多个官能团或取代基取代的，其中，每一个官能团或取代基选自 由卤素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮 基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、羟基、卤羰基、氨基甲酰基、脲基、 膦酸根合、膦酰基、C1-18-烷基、C1-18-链烯基、、C1-18-炔基、C1-18-烷氧 基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18-烷基硫烷基、C1-18-烷基磺酰 基、由一个，二个或三个C1-18烷基基团取代的C1-18-烷基亚氨基或氨基组 成的组。所有的C1-18-烷基、C1-18-链烯基和C1-18炔基基团可以是被任何前 面的官能团或取代基单-，二-或多取代的。为了本发明目的的多环化合物具 有2，3或4个芳香环。这些单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物的 例子包括(但不限于)；吖啶、蒽、天蓝烃、苯、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并 噻唑啉、咔啉、咔唑、噌啉、苯并二氢吡喃、苯并吡喃、chrysene、富烯、 呋喃、咪唑、吲唑、茚、吲哚、二氢吲哚、中氮茚、异噻唑、异喹啉、异 噁唑、萘、亚萘、萘基吡啶、噁唑、北菲、吩嗪、酞嗪，喋啶、嘌呤、吡喃、 吡唑、芘、哒嗪、哒酮、吡啶、嘧啶、吡咯、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、磺 酰基、噻吩和三嗪，每种化合物可以是可以不是取代的。这些化合物的例 子包括(但不限于)：芳族二胺、氨基苯酚、酚类和萘酚。

用于本发明中的芳族化合物和杂芳族化合物包括(但不限于)：

3，4-二乙氧基苯胺，

2-甲氧基-对-苯二胺，

1-氨基-4-b-甲氧基乙氨基苯(N-b-甲氧基乙基-对-苯二胺)，

1-氨基-4-二-(b-羟乙基)-氨基苯(N，N-二-(b-羟乙基)-对-苯二胺)，

2-甲基-1，3-二氨基-苯(2，6-二氨基甲苯)，

2，4-二氨基甲苯，

2，6-二氨基吡啶，

1-氨基-4-磺酸根合-苯，

1-N-甲基磺酸根合-4-氨基苯，

1-甲基-2-羟基-4-氨基-苯(3-氨基邻-甲酚)，

1-甲基-2-羟基-4-b-羟乙基氨基-苯(2-羟基-4-羟基乙氨基-甲苯)，

1-羟基-4-甲基氨基-苯(对-甲基氨基苯酚)，

1-甲氧基-2，4-二氨基-苯(2，4-二氨基苯甲醚)，

1-乙氧基-2，3-二氨基-苯(2，4-二氨基苯乙醚)，

1-b-羟乙氧基-2，4-二氨基-苯(2，4-二氨基苯氧基乙醇)，

1，3-二羟基-2-甲基苯(2-甲基间苯二酚)，

1，2，4-三羟基苯，

1，2，4-三羟基-5-甲基苯(2，4，5-三羟基甲苯)，

2，3，5-三羟基甲苯，

4，8-二磺酸根合-1-萘酚，

3-磺酸根合-6-氨基-1-萘酚(J酸)，

6，8-二磺酸根合-2-萘酚，

1，4-苯二胺，

2，5-二氨基甲苯，

2-氯代-1，4-苯二胺，

2-氨基酚，

3-氨基酚，

4-氨基酚，

1，3-苯二胺，

1-萘酚，

2-萘酚，

4-氯代间苯二酚，

1，2，3-苯三醇(1，2，3-苯三酚)，

1，3-苯二醇(间苯二酚)，

1，2-苯二醇(邻苯二酚)，

2-羟基-肉桂酸，

3-羟基-肉桂酸，

4-羟基-肉桂酸，

2，3-二氨基苯甲酸，

2，4-二氨基苯甲酸，

3，4-二氨基苯甲酸，

3，5-二氨基苯甲酸，

2，3-二氨基苯甲酸甲酯，

2，3-二氨基苯甲酸乙酯，

2，3-二氨基苯甲酸异丙酯，

2，4-二氨基苯甲酸甲酯，

2，4-二氨基苯甲酸乙酯，

2，4-二氨基苯甲酸异丙酯，

3，4-二氨基苯甲酸甲酯，

3，4-二氨基苯甲酸乙酯，

3，4-二氨基苯甲酸异丙酯，

3，5-二氨基苯甲酸甲酯，

3，5-二氨基苯甲酸乙酯，

3，5-二氨基苯甲酸异丙酯，

N，N-二甲基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，

N，N-二乙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，

N，N-二丙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，

N，N-二丁基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，

4-氯代-1-萘酚，

N-苯基-对-苯二胺，

3，4-二羟基苯甲醛，

吡咯，

吡咯-2-异咪唑，

1，2，3-三唑，

苯并三唑，

苯并咪唑，

咪唑，

吲哚，

1-氨基-8-羟基萘-4-磺酸(S酸)，

4，5-二羟基萘-2，7-二磺酸(铬变酸)，

邻氨基苯甲酸，

4-氨基苯甲酸(PABA)，

2-氨基-8-萘酚-6-磺酸(咖马酸)，

5-氨基-1-萘酚-3-磺酸(M酸)，

2-萘酚-3，6-二磺酸(R酸)，

1-氨基-8-萘酚-2，4-二磺酸(芝加哥酸)，

1-萘酚-4-磺酸(奈温酸)，

迫位酸，

N-苯甲酰基J酸，

N-苯基J酸，

1，7-克列氏酸，

1，6-克列氏酸，

Bon酸，

萘酚AS，

分散黑9，

萘酚AS OL，

萘酚AS PH，

萘酚AS KB，

萘酚AS BS，

萘酚AS D，

萘酚AS B1，

媒染剂黑3CI 14640(羊毛铬蓝绿B)，

4-氨基-5-羟基-2，6萘二磺酸(H酸)，

油性棕RR溶剂棕1(CI 11285)，

对苯二酚，

苯乙醇酸，

三聚氰胺，

邻-硝基苯甲醛，

1，5-二羟基萘，

2，6-二羟基萘，

2，3-二羟基萘，

苄基咪唑，

2，3-二氨基萘，

1，5-二氨基萘，

1，8-二氨基萘，

水杨酸，

3-氨基水杨酸，

4-氨基水杨酸，

5-氨基水杨酸，

甲基-3-氨基水杨酸酯，

甲基-4-氨基水杨酸酯，

甲基-5-氨基水杨酸酯，

乙基-3氨基水杨酸酯，

乙基-4-氨基水杨酸酯，

乙基-5-氨基水杨酸酯，

丙基-3-氨基水杨酸酯，

丙基-4-氨基水杨酸酯，

丙基-5-氨基水杨酸酯，

水杨酰胺，

4-氨基苯硫酚，

4-羟基苯硫酚，

苯胺，

4，4’-二氨基二苯胺硫酸酯，

4-苯基偶氮苯胺，

4-硝基苯胺，

N，N-二甲基-1，4-苯二胺，

N，N-二乙基-1，4-苯二胺，

分散橙3，

分散黄9，

分散蓝1，

N-苯基-1，2-苯二胺，

6-氨基-2-萘酚，

3-氨基-2-萘酚，

5-氨基-1-萘酚，

1，2-苯二胺，

2-氨基嘧啶，

4-氨基喹啶，

2-硝基苯胺，

3-硝基苯胺，

2-氯代苯胺，

3-氯代苯胺，

4-氯代苯胺，

4-(苯基偶氮)间苯二胺(苏丹橙G，CI 11920)，

苏丹红B，CI 26110，

苏丹红7B，CI 26050，

4’-氨基-N-乙酰苯胺，

1，2-二羟基蒽醌，

1-蒽胺(1-氨基蒽)，

1-氨基蒽醌，

蒽醌，

2，6-二羟基蒽醌，

1，5-二羟基葸醌(蒽降酚)，

3-酰氨基吡啶(尼克酰胺)，

吡啶-3-羧酸(烟酸)，

媒染剂黄1，茜素黄GG，CI，14025，

考马斯灰，酸性黑48，CI 65005，

宫殿坚牢黑，WAN，酸性黑52，CI 15711，

宫殿铬黑，6BN，CI 15705，羊毛铬蓝黑R，

媒染剂黑11，羊毛铬黑T，

萘酚蓝黑，酸性黑1，CI 20470，

1，4-二羟基蒽醌(醌西)，

4-羟基香豆素，

散形酮，7-羟基香豆素，

七叶亭，6，7-二羟香豆素，

香豆素，

铬变素2B酸性红176，CI 1657，

铬变素2R酸性红29，CI 16570，

铬变素FB酸性红14，CI 14720，

2，6-二羟基异尼克酸，柠嗪酸，

2，5-氯代苯胺，

2-氨基-4-氯代甲苯，

2-硝基-4-氯代甲苯，

2-甲氧基-4-硝基苯胺和，

对-溴苯酚。

在含有一种或多种单-，二-或多环芳族或杂芳族化合物的水溶液中浸 泡所说的物质后，在水溶液中用过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的酶 或对一种或多种芳族或杂芳族化合物表现出氧化酶活性的酶处理所说的物 质。在一个优选的实施方案中，用同样的水溶液浸泡和染色所说的物质。 在本发明方法中用于染色所说的物质的水溶液，即染液可以具有在约0．5∶1 到约200∶1，优选地在约5∶1到约20∶1范围的水／物质比率。

在本发明的方法中，一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化 合物可以是被以下物质氧化的：(a)过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的 酶或(b)对一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物(例如酚类 和相关底物)表现出氧化酶活性的酶。表现出过氧化物酶活性的酶包括(但不 限于)过氧化物酶(EC 1．11．1．7)和卤代过氧化物酶，例如氯代-(EC 1．11．1．10)，溴代-(EC1．1 1．1)和碘代过氧化物酶(EC 1．11．1．8)。表现出氧化 酶活性的酶包括(但不限于)胆红素氧化酶(EC 1．3 3．5)，儿茶酚氧化酶(EC 1．10．3．1)，漆酶(EC 1．10．3．2)，邻-氨基苯酚氧化酶(EC 1．10．3．4)和多酚氧化 酶(EC 1．10．3．2)。用于测定这些酶活性的分析方法是本领域技术人员熟知 的。

优选地，这种酶是从选自下组的微生物获得的漆酶：曲霉属、葡萄孢属、 金钱霉属、香菇属、毁丝霉属、链孢霉属、灰侧菌属、束柄霉属、多孔菌 属、Scytalidium、栓菌属以及丝核菌属。在更优选的实施方案中，这种漆 酶是从选自下组的微生物获得的：Humicola brevis var．thermoidea， Humicola brevispora，灰腐质霉thermoidea变种，Humicola insolens和 Humicola lanuginosa(也称为Thermomyces lanuginosus)， Myceliophthora thermophila，Myceliophthora vellerea，Polyporus pinsitus，Scytalidium thermophila，Scytalidium indonesiacum和嗜热色串孢。该漆酶也可以从蛾 柱霉属的其他物种获得，例如Scytalidium acidophilum，Scytalidium album， Scytalidium aurantiacum，Scytalidium circinatum，Scytalidium flaveobrunneum，Scytalidium hyalinum，Scytalidium lignicola和 Scytalidium uredinicolum。该漆酶也可以从多孔菌属的其他物种获得，例 如环纹多孔乙菌，Polyporus alveolaris，Polyporus arcularius，Polyporus australiensis， Polyporus badius，二形多孔菌，冬生多孔菌，Polyporus ciliatus，Polyporus colensoi，Polyporus eucalyptorum，Polyporus meridionalis，黑柄多孔菌，Polyporus palustris，喜根多孔菌，Polyporus rugulosus，鳞多孔菌，茎形多孔菌和Polyporus tumulosus。该漆酶也可以 从丝核菌属的物种获得，例如茄属丝核菌。这种漆酶也可以是在I型(T1)铜 位点上被至少一个氨基酸残基修饰的修饰漆酶，其中这种修饰的氧化酶具 有相对于野生型氧化酶的改变的pH和／或比活性。例如，修饰漆酶能够在 T1铜位点的片段(a)上被修饰。

可以用于本发明的过氧化物酶可以从植物中分离出来并且可由植物产 生(例如辣根过氧化物酶)或从微生物(如真菌或细菌)中分离出来并且可由微 生物产生。一些优选的真菌包括属于半知菌亚门丝孢纲的菌株，例如镰刀 菌属、腐质霉属、木霉属、漆斑菌属、轮枝孢属、Arthromyces、卡尔黑 霉属、Ulocladium、Embellisia、枝孢属或Dreschlera，特别是尖镰孢 (DSM 2672)、 Humicola insolens、黑氏木霉、疣孢漆斑菌(IFO 6113)、棉 黄萎轮枝孢、大丽花轮枝孢、Arthromyces ramosus(FERM P-7754)，烟色 卡尔黑霉、Ulocladium chartarum、Embellisia alii或Dreschlera halodes。

其它优选的真菌包括属于担子菌亚门，担子菌纲的菌株，例如鬼伞属、展 齿革菌属、革盖菌属或栓蓖属、特别是灰盖鬼伞f． microsporus (IFO 8371)、 长根鬼伞，Phanerochaete chrysosporium(如NA-12)或杂色革盖菌(如 PR428-A)。

更优选的真菌包括属于接合菌亚门，圆孔腔菌科的菌株，例如，根霉属 或毛霉属，特别是冻土毛霉。

一些优选的细菌包括属于放线菌目的菌株，例如嗜热紫链霉菌(IFO 12382)，浑球链霉菌(ATCC 23965)或Streptoverticillum Verticillium ssp．verticillium。

其它优选的细菌包括短小芽孢杆菌(ATCC 12905)，嗜热脂肪芽孢杆菌， 球形红细菌，Rhodomonas palustri，乳链球菌，Pseudomonas purrocinia(ATCC 15958)或荧光假单胞菌(NRRL B-11)。

B．C. Saunders等，同上pp．41-43中列出了过氧化物酶其它潜在的来 源。

文献中描述了按照本发明所使用的酶的生产方法。例如，FEBS通信， 1625，173(1)，应用环境微生物学，1985年2月，pp．273-278，应用微生物生 物技术26，1987，pp．158-163，生物技术通信9(5)，1987，pp．357-360，自然 326，1987年4月2日FEBS通信4270，209(2)，p．321，EP 179 486，EP 200 565，GB 2 167 421，EP 171 074和农业生物化学50(1)，1986， p．247。

特别优选的酶是那些pH在约2．5到约12．0范围内有活性的酶，优选的 是在约4到约10范围内，最优选的是在约4．0到约7．0范围内和约7．0到约 10．0范围内。可以通过筛选嗜碱微生物产生的相关的酶来分离这种酶，例 如，使用在RE．Childs和W．G．Bardsley，生物化学杂志，145，1975， pp．93-103中描述的ABTS测定法。

其它优选的酶是那些表现出良好的热稳定性以及对通常所使用的染色 添加剂(如非离子、阳离子或阴离子表面活性剂、螯合剂、盐、聚合物等) 良好的稳定性的酶。

所说酶也可以经以下方法产生，该方法包括在使得这种酶可以表达的条 件下，在培养基中培养用重组DNA载体转化过的宿主细胞，并从培养液中 回收所说的酶，其中所说的载体携带有编码所说的酶的DNA序列以及编码 使得编码该酶的DNA序列可以表达的功能的DNA序列。

例如编码所说的酶的DNA片段可以通过建立产生这种兴趣酶的微生物 (如前面提到的一种微生物)的cDNA或基因组文库和通过常规方法(如与以 这种酶的整个或部分氨基酸序列为基础合成的寡核苷酸探针杂交或选择表 达合适的酶活性的克隆或选择产生与天然酶的抗体反应性的蛋白质的克隆) 筛选阳性克隆来分离。

一旦被选择，就可以将DNA序列插入到包含恰当的启动子、操纵子和 终止子序列(允许酶在特定的宿主生物中表达)以及复制起点(能使载体在正 被讨论的宿主微生物中复制)的合适的可复制的表达载体中。

然后，将所形成的表达载体转化到合适的宿主细胞，例如真菌细胞中， 优选的例子是曲霉属的菌种，最优选的是米曲霉或黑曲霉。通过牵涉到原 生质体形成和转化的过程，接着是细胞壁再生用已知的方法转化真菌细 胞。曲霉属作为宿主微生物的应用在EP 238023(Novo Industri A／S的)中 已经描述过，本文一并参考。

另外，宿主生物体可以是细菌，特别是链霉菌属，芽孢杆菌属或大肠杆 菌的菌株。通过常规方法可以完成细菌细胞的转化，例如通过在T．Maniatis 等，分子克隆：实验室手册、冷泉港，1982所描述的方法。

通过标准方法(参见T．Maniatis等，同上)也可以进行合适DNA序列的 筛选和载体的构建。

用于培养转化的宿主细胞的培养基可以是适合于正被讨论的宿主细胞 生长的任何常规培养基。所表达的酶可以方便地分泌到培养基中，并且可 以用众所周知的方法从中回收，这一方法包括用离心法或过滤法从培养基 中分离出细胞，借助盐(如硫酸铵)沉淀出蛋白质组分；接着采用色谱方法(如 采用离子交换色谱法，亲合色谱法或类似的方法)回收这种酶。

当本发明所采用的酶是过氧化物酶时，必须使用过氧化氢源，如过氧化 氢本身。过氧化氢源在方法的开始或中间可以以0．001-5mM的量添加，特 别是以0．01-1mM的量添加。

一种过氧化氢源包括过氧化氢的前体，例如过硼酸盐或过碳酸盐。另一 种过氧化氢源包括能够使分子氧和有机或无机底物分别转化成过氧化氢和 氧化底物的酶。这些酶仅仅产生低水平的过氧化氢，但是由于过氧化物酶 的存在确保了产生的过氧化氢的有效利用，因而这些酶在本发明方法中发 挥了很大的作用。能够产生过氧化氢的酶的例子包括(但不限于)葡萄糖氧化 酶、尿酸氧化酶、半乳糖氧化酶、醇氧化酶、胺氧化酶、氨基酸氧化酶和 胆固醇氧化酶、

在本发明方法中，染色物质所使用的温度范围是约5到约120℃，优选 的范围是约5到约80℃，更优选的范围是约15到约70℃；pH范围是约 2．5到约12，优选的是在约4到约10之间，更优选的范围是约4．0到约7．0 或约7．0到约10．0。更优选地，使用低于6．5的pH(例如pH范围为3- 6，优选的是4-6，更优选的是4．5-5．5)或高于8．0的pH(例如pH范 围为8-10，优选的是8．5-10，最优选的是9-10)。令人惊奇的是， 用本发明的方法在pH低于6．5和高于8．0下物质被染上的颜色与用本发明 的方法在pH6．5-8．0下同样物质被染上的颜色不同。在最优选的实施方案 中，分别使用邻近酶的最适温度和最适pH的温度和pH。

在一个优选的实施方案中，本发明方法还包括将一价或二价离子，聚合 物和表面活性剂(10mg-5g／l)加入到水溶液中，这些离子包括(但不限于)钠、 钾、钙和镁离子(0-3M，优选地为25mM-1M)，这些聚合物包括(但不限于) 聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚天冬氨酸酯、聚乙烯酰胺、聚环氧乙烷(0- 50g／l，优选地为1-500mg／l)。

这些表面活性剂的例子是如羧酸盐之类的阴离子表面活性剂，例如长链 脂肪酸的金属羧酸盐；N-酰基肌氨酸盐；磷酸与脂肪族醇乙氧基化物的单 酯或二酯或这些酯的盐；如十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠或十六烷基 硫酸钠的脂肪族醇硫酸盐；乙氧基化的脂肪族醇硫酸盐；乙氧基化的烷基 酚硫酸盐；木素磺酸盐；石油磺酸盐；如烷基苯磺酸盐或低级烷基萘磺酸盐 (如丁基-萘磺酸盐)的烷基芳基磺酸盐；盐或磺酸化萘-甲醛缩合物；磺酸化 的酚-甲醛缩合物的盐；或如酰胺磺酸盐的更复杂的磺酸盐(例如油酸和N- 甲基牛磺酸的磺酸化缩合产物或二烷基磺基琥珀酸酯(例如，磺酸钠，或二 辛基琥珀酸酯))。这些表面活性剂的其他例子是如脂肪酸酯、脂肪族醇、脂 肪酸酰胺或脂族烷基-或链烯基取代酚类与环氧乙烷的缩合产物，环氧乙烷 和环氧丙烷的嵌段共聚物，炔属二醇类(如2，4，7，9-四乙基-5-癸炔-4，7-二 醇)，或乙氧基炔属二醇类的非离子表面活性剂。这样的表面活性剂的其他 例子是如脂肪族单-，双-或多胺(如乙酸酯、环烷酸酯或油酸酯)，含氧胺类(如 聚氧乙烯烷基胺的胺氧化物)，通过羧酸与二或多胺的缩合制备的连接酰胺 的胺类，或季铵盐之类的阳离子表面活性剂。

在另一优选实施方案中，本发明的方法还包括将提高表现出过氧化物酶 活性的酶的活性或表现出氧化酶活性的酶的活性的增强剂加入到水溶液 中。增强剂是本领域已知的。例如，已知在WO 95／01426中公开的有机化 合物可增强漆酶的活性。此外，已知在WO94／12619和WO94／12621中公 开的化合物可增强过氧化物酶的活性。

下列非限制性实施例进一步说明本发明。 实施例 实施例1

漆酶活性的测定

在有氧条件下氧化丁香醛连氮来测定漆酶活性。用分光光度法在530nm 处测量生成的紫罗兰色。分析条件是：19μM丁香醛连氮，23．2mM乙酸 盐缓冲液(pH5．5)，30℃，以及1分钟反应时间。一个漆酶单位(LACU)是指 在上述条件下每分钟催化1微摩尔丁香醛连氮的转化所需要的漆酶的量。

过氧化物酶活性的测定

一个过氧化物酶单位(POXU)指在下列分析条件下每分钟催化1微摩尔 过氧化氢的转化所需要的酶量：0．88mM过氧化氢，1．67mM 2．2’-连氮基 双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸酯)，0．1M磷酸盐缓冲液(包含Triton X 405(1．5g／1000ml))，pH7．0，30℃下温育，在418nm处测定光度值(ABTS 的消光系数设定在3．6l／mmol＊mm)。

织物的染色

将5mg第一种化合物(对-苯二胺(“A”)，对-甲苯二胺(“B”)，或邻-氨基 苯酚(“C”))和5mg第二种化合物(间-苯二胺(“D”)，α-萘酚(“E”)或4-氯代间 苯二酚(“F”)(或10mg实验中的第一种化合物而没有第二种化合物)溶解在 10ml 0．1M K2HPO4缓冲溶液(pH 7．0)中。将具有71．7 LACU／ml活性的 Polyporus pinsitus漆酶(“PpL)(保藏在真菌菌种保藏中心，保藏号为CBS 678．70)或具有690 LACU／ml活性的Myceliophthora thermophila漆酶 (“MtL”)(保藏在真菌菌种保藏中心，保藏号为CBS 117．65)用同样的缓冲液 稀释成10 LACU／ml活性。

将从Test Fabrics Inc．(Middlesex，新泽西)得到的多纤维布样样式 10A(4×10cm)卷起放到试管中。这种布样包含由棉花，双乙酸酯、聚丙烯酸、 聚酰胺和聚酯制造的不同纤维的条。将4．5ml前体／成色剂溶液和1ml漆酶 溶液添加到所说的试管中。将试管封住、混合并且安装在试管摇动器上， 在黑暗的柜橱中温育60分钟。在温育之后，将布样在连续的热自来水中冲 洗约30秒。

下列表中提供了本实验的结果：

表1 织物 只有A A+D A+E A+F 羊毛 灰褐色 深蓝色 深紫色 褐色

表2 织物 只有A B+D B+E B+F 羊毛 褐色 深蓝色 蓝褐色 黄／褐色

表3 织物 只有C C+D C+E C+F 羊毛 橙／红 深橙／红 深橙 深橙

本实验结果表明在前体和Polyporus pinsitus漆酶存在下羊毛被染上颜 色。以Myceliophthora thermophila漆酶获得类似的结果。 实施例2

在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH 4-10范围内30℃下对 各种物质染色1小时。所染的物质(都是从Test Fabrics Inc．获得的)是精纺 羊毛(样式526，7cm×7cm)和氯化精纺羊毛(样式530，7cm×7cm)。

通过混合溶液A(0．1M H3PO4，0．1M CH3COOH，0．1M H3BO3)和溶液 B(0．5M NaOH)在合适的pH下制备0．1M的Britten-Robinson缓冲溶液。 为了制得pH分别为4，5，6，7，8，9和10的缓冲溶液，将806ml，742ml， 706ml，656ml，624ml，596ml和562ml的溶液A用溶液B稀释到1升。

以0．5mg／ml的量将选自对-苯二胺，邻-氨基苯酚和间-苯二胺的化合物 添加到75ml每种缓冲溶液中。如果必要的话，检测和调整pH。将75ml 缓冲液／化合物溶液混合成各150ml的缓冲液／化合物混合溶液，并将这种混 合溶液添加到LOM烧杯中。

然后，将所说物质的布样浸泡在每种缓冲液／化合物混合溶液中。接下来 抽取相应于将要添加的漆酶的体积的体积。将具有690LACU／ml活性的 Myceliophthora thermophila漆酶(“MtL”)用缓冲溶液稀释成300LACU／ml 活性。在每种pH(除pH7．0以外)的溶液中添加2 LACU／ml的酶。供定量 给料分布之用，在pH7．0下，向溶液中添加0，1，2和4 LACU／ml的酶。然 后将LOM烧杯安装在LOM中。在30℃，42 RPM下1小时后，停止 LOM。倒掉液体，同时在烧杯中用连续去离子水冲洗布样约15分钟。干 燥布样，利用ColorEye 7000仪器测量CIELAB值。在表4-7中给出了 CIELAR结果。

表4 用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色 (pH-分布，2LACU／ml)               pH 4   pH 5   pH 6   pH 7    pH 8    pH 9   pH 10 精纺羊毛  L*  41．57 28．21 20．25 14．73  18．94  35．06 13．52           a*   2．71  1．24  0．43  1．63   3．56  -1．92  1．79           b*  -0．75 -2．09 -5. 76 -5．84 -17．52 -14．05 -4．28 氯化羊毛  L*  18．46 16．05 15．04 14．19  15．47  31．44 13．84           a*   2．32  1．01  0．88  1．83   2．78  -3．05  2．97           b*   0．09  0．87  1．03  1．53 -11．43 -13．27  2．06

表5   用前体对-苯二胺和间苯二胺染色 (剂量分布-pH7)               0 LACU    1 LACU    4 LACU 精纺羊毛  L*    54．97    14. 52    14．27           a*     1．48     1．55     1．49           b*     1．26    -6．09    -5. 6 氯化羊毛  L*    43．2     14．42    14．33           a*     1．79     1．75     1．69           b*     1．61     1．5      1．65

表6 用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色(pH-分布，2LACU／ml)               pH 4  pH 5    pH 6   pH 7    pH 8   pH 9  pH 10 精纺羊毛  L*  33．68 33．05  35. 96 37．42 42．55 59．24 49．65           a*   3．77  5. 35   8．56 10．07  8．75 10．53  8．63           b*   8．26 11. 03  18．83 22．33 22．82 37．2  34．81 氯化羊毛  L*  21．07 19．11  21．01 24．7  34．42 59．9  48．74           a*   3．14  2. 77   4．82  7．22  6．88 10．08 10．4           b*   4. 23  4. 31   8. 04 12. 64 18. 08 36．78 34．76

表7 用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色(剂量分布-pH7)               0 LACU    1LACU      4LACU     精纺羊毛  L*    80．23    38．57    36. 18           a*     1. 1      9. 21    10．8           b*    20. 09    21．33    22．76 氯化羊毛  L*    77. 36    27. 1     26. 33           a*     0．86     7. 92     6. 92           b*    19．53    14．8     13. 5

这些表中所用的参数“L”、“a”和“b”用来量化颜色，并且为颜色科学领 域中的普通技术人员所熟知。参见例如，Billmeyer和Saltzman，颜色技术 原理，第二版，John Wiley和Sons，纽约，1981，p．59。

结果表明，精纺羊毛和氯化精纺羊毛在所有pH下均被染色，由对-苯二 胺和间-苯二胺的混合液染色，得到的深颜色范围从低pH下的灰色到高pH 下的海蓝色和黑色，而由邻-氨基苯酚和间-苯二胺的混合液染色，得到的颜 色范围从低pH下的褐色到高pH下的橙／黄色。

在所有的定量给料实验中，没有从定量给料1，2或4 LACU／ml中看 到显著的区别。0LACU／ml的对照实验清楚地表明了这种漆酶催化染色过 程。 实施例3

除了本实验仅仅在pH 5．0和8．0下时间间隔为0，5，15，35和55 分钟外，使用实施例2所描述的方法测定供染色的时间分布。在每个实验 中，添加2LACU／ml Myceliophthora thermophila漆酶。表8-11显示了实 验结果。    

表8 用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色 时间分布，2LACU／ml．pH5                 0 min    5 min   15 min    35 min    55 min 精纺羊毛  L*    76. 48   52. 08   36. 3    27. 02    26. 56           a*     0. 02    1. 35    1. 96    1. 3      1. 18           b*     8       -0. 02   -1. 39   -1. 68    -2. 03 氯化羊毛  L*    63. 73   19. 23   16. 81   16. 48    16. 75           a*     0. 1     1. 86    1. 28    0. 77     1. 11           b*    10. 3    -0．68    0. 49    1. 04     1. 03

表9 用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色 时间分布，2LACU／ml，pH8              0 min    5 min    15 min    35 min    55 min 精纺羊毛  L*  64．43   23．66    14．57    13．11    13．06           a*  -3．03    1．05     2．14     1．49     1．2           b*  -3．32  -15. 45    -8．72    -4．52    -3．68 氯化羊毛  L*  58．96   17. 36    14．09    13．89    13．66           a*  -1．66    0．57     1．9      2．71     2．64           b*   2．68   -3．98     0．14     2．21     1．99

表10 用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色 时间分布，2LACU／ml，pH5             0 min    5 min    15 min    35 min    55 min 精纺羊毛  L*  79．4    50．67    35. 94   32．4     32．89           a*   1．54    6．47     7．11    6．08     5．98           b*  16．02   20．88    18．43   14．28    12．52 氯化羊毛  L*  76．72   39. 53    22. 12   18．82    19. 58           a*   2. 33    6．81     4. 21    2．88     3．1           b*  18．26   16．48     8．23    4．89     4．77

表11 用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色 时间分布，2LACU／ml，pH8              0 min    5 min    15 min   35 min    55 min 精纺羊毛  L*  80．06    63．03   49．37   42．51    41．24           a*   1．63    15. 71   17．1    12．32     9．97           b*  25．87    43. 37   38. 69   30．26    25．78 氯化羊毛  L*  79．6     62．87   47. 88   36．72    33．62           a*   0．57    13．17   14．46   10．26     7．88           b*  24．63    41. 64   34. 34   24. 47    19. 7

结果显示大多数颜色在头15分钟内形成。精纺羊毛和氯化精纺羊毛在两种 pH下被染色。 实施例4

在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中pH5．5下于30℃染色1小时， 所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是精纺羊毛(样式526， 8cm×8cm)。

以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备 0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合 物(L-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml总体积。一个烧杯添加 100ml“A”，另一个烧杯添加50ml“A”和50ml“B”混合形成100ml。将上 文列出的物质的布样用DI水浸湿并在前体溶液中浸透。具有 690LACU／mg(80LACU／mg)活性的Myceliophthora thermophila漆酶 (“MtL”)以12．5mg／l的浓度添加到每个烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在 LOM中。在30℃，42RPM下1小时后，停止LOM。倒掉废液并且将 布样在冷自来水下冲洗约15分钟。在室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表12和表13给出：

表12-用前体对-苯二胺染色(pH5．5，12．5mg／l MtL) L* a* b* 羊毛 30．93 61．66 10．10

表13-用前体p-苯胺和1-萘酚染色(pH5．5，12．5mg／l MtL) L* a* b* 羊皮 30．70 61．12 -4．28

结果显示使用前体和Myceliophthora thermophila漆酶可以对羊毛进行 染色(用A表示褐色，而用A／B表示紫色)。 实施例5

在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下于30℃染色1小 时。所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是精纺羊毛(样式526， 8cm×8cm)。

以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备 0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合 物(1-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中 添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成 100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿并在前体溶液中浸透。将 具有70 LACU／ml(100LACU／mg)活性的Polyporus pinstus漆酶(“PpL”)以 12．5mg／l的浓度添加到每个烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。 在30℃，42RPM下1小时后停止LOM。倒掉废液，并且将布样在冷自 来水下冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测 定所有布样的CIELAB值。其结果在表14和表15中给出。

表14-用前体对-苯二胺染色(pH5．5，12．5mg／l PpL) L* a* b* 羊毛 36．06 70．46 8．49

表15-用前体对-苯二胺和1-萘酚染色(pH 5．5，12．5mg／l PpL) L* a* b* 羊皮 37．92 58．71 2．23

结果显示使用前体和Polyporus Pinsitus漆酶可以对羊毛进行染色(用A 表示褐色，而用A／B表示紫色)。 实施例6

在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5. 5下于30℃对物质染 色1小时，所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是精纺羊毛(样式 526，8cm×8cm)。

以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5. 5)溶解所说的化合物来制备 0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合 物(1-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中 添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成 100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿再在前体溶液中浸透。将 具有0．04LACU／mg(1 mg／ml)活性的Myrothecium verrucaria胆红素氧化酶 (“BiO”)以12．5mg／l的浓度添加到每只烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在 LOM中。在30℃，42RPM下经过1小时后停止LOM。倒掉废液，并 且将布样在冷自来水下冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表16和表17中给出。

表16-用前体对-苯二胺染色 L* a* b* 羊毛 27．54 80．84 -2．13

表17-用前体对-苯于胺和1-萘酚染色 L* a* b* 羊毛 40．21 87．73 13．47

结果表明使用前体和胆红素氧化酶可以对羊毛进行染色(用A表示褐 色，而用A／B表示紫色)。 实施例7

在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下于30℃对物质染 色1小时，所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是精纺羊毛(样式 526，8cm×8cm)。

以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备 0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合 物(1-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中 添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成 100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿再在前体溶液中浸透。将 具有5．2 LACU／mg(2mg／ml)活性的立枯丝核菌漆酶(“RsL”)以12．5mg／l的 浓度添加到每只烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在30℃， 42RPM下经过1小时后停止LOM。倒掉废液，并且将布样在冷自来水下 冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测定所有 布样的CIELAB值。结果在表18和表19中给出。

表18-用前体对-苯二胺染色(pH5．5，12．5mg／l RsL) L* a* b* 羊毛 27．89 58．97 1．59

表19-用前体对-苯二胺和1-萘酚染色(pH5．5，12．5mg／l RsL) L* a* b* 羊毛 29．03 63．94 -3．65

结果显示使用前体和立枯丝核菌漆酶可以对羊毛进行染色(用A表示褐 色，而用A／B表示紫色)。 实施例8

在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下于60℃进行染 色，所染的物质(从Test Fabric Inc．得到)是精纺羊毛(样式526，8cm × 8cm)。

以合适量的2g／L CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备 0．25mg／ml的第一种化合物(对-苯胺，“A”)溶液和0．25mg／ml的第二种化合 物(2-氨基苯酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个LOM 烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。将上文列出的物质的 布样在DI中浸湿，再在前体溶液中浸透。将LOM烧杯密封并安装在LOM 中。在LOM(42RPM)中温育10分钟后，停止LOM并且将具有690 LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthora thermophila漆酶 (“MtL”)以1LACU／ml的浓度添加到这只烧杯中。在60℃，42 RPM下 50，45或30分钟后，停止LOM并撤除样品。将前体溶液，布样和酶添 加到LOM烧杯中，制得两个没有经过预温育的对照。将这两只烧杯安装 在LOM中。在60℃，42RPM下30分钟后，撤除一个烧杯。另一个对照 在60℃，42RPM下经过总计60分钟后撤除。倒掉废液，并将样品和布样 在冷自来水下冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表20-24中给出。

表20-用前体A和B对照染色，0分钟／30分钟 L* a* b* 羊毛 36．26 2．01 7．28

表21-用前体A和B对照染色，0分钟／60分钟 L* a* b* 羊毛 36．49 2．28 7．42

表22-用前体A和B染色，10分钟／50分钟 L* a* b* 羊毛 32．95 2．41 10．16

表23-用前体A和B染色，15分钟／45分钟 L* a* b* 羊毛 33．20 2．65 10．80

表24-用前体A和B染色，30分钟／30分钟 L* a* b* 羊毛 33．45 2．87 11．59

利用美国纺织化学家和着色师协会(AATCC)测试方法61-1989，2A估 计这些布样对清洗的耐色牢度(耐洗牢度)。将洗涤槽-O-计量器预热到49 ℃，同时将200ml 0．2％AATCC标准参考去污剂WOB(不含光学增白剂) 和50个钢球放置到每个LOM烧杯中。将这些烧杯密封并安装在LOM中， 在42RPM下运行2分钟预热这些烧杯至试验温度。停止旋转并松开烧杯。 将布样添加到烧杯中，LOM运行45分钟。撤走烧杯，并且将布样在热自来 水中在偶然挤榨下冲洗5分钟。然后在室温下干燥并用Macbeth ColorEye 7000评估这些布样。利用AATCC评估法1(色变的灰度)指定每种布样的灰 度等级(1-5)。结果在表25-29中给出。

表25-对A和B的耐洗牢度结果，0分钟／30分钟 L* a* b* 灰度等级 羊毛 40．10 2．06 3．53 3

表26-对A和B的耐洗牢度结果，0分钟／60分钟 L* a* b* 灰度等级 羊毛 39．93 2．27 4．25 3

表27-对A和B的耐洗牢度结果，15分钟／45分钟 L* a* b* 灰度等级 羊毛 36．02 2．70 4．93 3-4

表28-对A和B的耐洗牢度结果，10分钟／50分钟 L* a* b* 灰度等级 羊毛 35．09 2．62 4．45 4

表29-对A和B的耐洗牢度结果，30分钟／30分钟 L* a* b* 灰度等级 羊毛 35．86 2．89 5．38 4

结果显示，利用前体和Myceliophthora thermophiila(MtL)漆酶，羊毛能 够染上色。从L＊和灰度分级二者都可以明显地看出，添加酶前在前体溶液 中温育这些布样可以提高颜色强度和耐洗牢度。 实施例9

将羊毛在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下，于40℃ 染色1小时。所染的物质(都是从Test Fabrics Inc．获得的)是精纺羊毛(样式 526，7cm×7cm)和氯化精纺羊毛(样式530，7cm×7cm)。

在这个实验中评估两个介体，将每个溶解在缓冲液中。三种缓冲溶液 是：2g／L CH3COONa，pH5．5缓冲液(“1”)，2g／L CH3COONa，pH5．5，包 含100μM 10-丙酸-吩噻嗪(PPT)(“2”)的缓冲液(“2”)，2g／L CH3COONa， pH5．5，包含100μM丁香酸甲酯的缓冲液(“3”)。

将所说的化合物溶解在合适量的缓冲液(1，2或3)中来制备三种 0．25mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和三种0．25mg／ml的 第二种化合物(间-苯二胺，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用120ml 的总体积。将60ml A和60ml B混合成120ml(对于每种缓冲液：1，2 或3)。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿，再在前体溶液中浸透。 将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在40℃，于42RPM下经过10分钟 后停止LOM。将具有690 LACU／ml(80 LACU／mg)活性的Myceliophthora thermophila漆酶(“MtL”)以0．174LACU／ml活性添加到每只烧杯中。再次 将烧杯密封并安装在LOM中。在40℃，42RPM下运行50分钟。撤走烧 杯，倒掉废液并且将这些布样在冷自来水中冲洗约15分钟。室温下干燥布 样，使用Macobeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在 表30，31和32中给出。

表30-用前体A和B染色

(2g／L CH3COONa，pH5．5，MtL) L* a* b* 羊毛 47．93 0．45 -0．05 氯化羊毛 27．80 2．94 -0．06

表31-用前体A和B染色 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL) L* a* b* 羊毛 42．11 1．52 -5．95 氯化羊毛 24．48 2．76 -2．15

表32-用前体A和B染色 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL) L* a* b* 羊毛 47．83 0．99 -0．14 氯化羊毛 25．77 3．37 -0．99

利用美国纺织化学家和着色师协会(AATCC)测试方法61-1989，2A估 计这些布样对清洗的耐色牢度(耐洗牢度)。将洗涤槽-O-计量器预热到49 ℃，将200ml 0．2％AATCC标准参考去污剂WOB(不含光学增白剂)和50 个钢球放置到每个LOM烧杯中。将这些烧杯密封并安装在LOM中，在 42RPM下运行2分钟预热这些烧杯至试验温度。停止旋转并松开烧杯。将 布样添加到烧杯中使LOM运行45分钟。撤走烧杯并且将布样在热自来水 中在偶然挤榨下冲洗5分钟。然后在室温下干燥，并用Macbeth ColorEye 7000评估这些布样。利用AATCC评估方法1(色变的灰度)指定每种布样的 灰度等级(1-5)。结果在表33-35中给出。

表33-对前体A和B的耐洗牢度结果(2g／L CH3COONa，pH5．5，MtL) L* a* b* 灰度等级 羊毛 50．59 1．11 7．07 3-4 氯化羊毛 31．74 2．83 7．09 3

表34-对前体A和B的耐洗牢度结果 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL) L* a* b* 灰度等级 羊毛 48．38 -0．48 4．61 2-3 氯化羊毛 31．56 1．06 4．86 2

表35-对前体A和B的耐洗牢度结果 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL) L* a* b* 灰度等级 羊毛 52．02 0．06 6．59 3 氯化羊毛 32．17 2．02 6．08 2-3

重复同样的实验，只是使用第三种化合物(2-氨基苯酚，“C”)和第四种化 合物(间-苯二胺，“D”)。使用的温度为50℃。结果在表36-41中给出。

表36-用前体C和D染色

(2g／L CH3COONa，pH5. 5，MtL) L* a* b* 羊毛 53．52 5．92 18．19 氯化羊毛 47．79 4．73 17．08

表37-用前体C和D染色 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL) L* a* b* 羊毛 52．38 6．70 21．84 氯化羊毛 46．86 5．55 17．87

表38-用前体C和D染色 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL) L* a* b* 羊毛 57．09 8．10 24．44 氯化羊毛 48．69 7．82 19．40

表39-对前体C和D的耐洗牢度结果 (2g／L CH3COONa，pH5．5，MtL) L* a* b* 灰度等级 羊毛 57．38 7．23 10．97 3 氯化羊毛 51．35 7．04 13．16 3

表40-对前体C和D的耐洗牢度结果 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL) L* a* b* 灰度等级 羊毛 51．37 8．18 12．33 5 氯化羊毛 46．86 5．55 17．87 2

表41-对前体C的耐洗牢度结果 (2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL) L* a* b* 灰度等级 羊毛 59．61 7．24 11．89 4 氯化羊毛 50．01 7．94 14．38 4-5

这两组实验结果表明，介体可以被用于染色和获得提高的耐洗牢度。在 两组实验中，精纺羊毛和氯化精纺羊毛在CH3COONa缓冲液，包含有PPT 的CH3COONa缓冲液以及包含有丁香酸甲酯的CH3COONa缓冲液中 pH5．5下都被染上色。可是，介体仅仅在第二组实验中导致提高耐洗牢度。 实施例10

在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5，30℃下对羊毛染色 1小时。所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是精纺羊毛(样式 526，8cm×8cm)。

以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备 0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合 物(1-萘酚，“B”)溶液。每只LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中 添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成 100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿再在前体溶液中浸透。将 具有180，000POXU／ml活性的灰盖鬼伞过氧化物酶(“CiP”)以0．05 POXU／ml的浓度添加到每只烧杯中。将200或500μM过氧化氢加入到每 只LOM烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在30℃，42RPM 下经过1小时后停止LOM。倒掉废液，并且将布样在冷自来水中冲洗约 15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye7000测定所有布样的 CIELAB值。结果在表42-45中给出。

表42-用前体A染色，200μM H2O2 L* a* b* 羊毛 54．84 1．70 -2．18

表43-用前体A染色，500μM H2O2 L* a* b* 羊毛 43．58 2．50 -4．62

表44-用前体A和B染色，200μM H2O2 L* a* b* 羊毛 56．19 2．60 -9．44

表45-用前体A和B染色，500 μM H2O2 L* a* b* 羊毛 50．48 4．14 -11．68

结果显示使用前体，过氧化物和灰盖鬼伞过氧化物酶(CiP)可以对羊毛进 行染色(用A和A／B表示紫色)。 实施例11

在试管中，在pH5，7和9下于室温将铬蓝处理的原料皮革(Prime Tanning Corp．，St．Joseph，MO)染色16小时。

以合适量的0．1M Britten-Robinson缓冲液(B-R缓冲液)溶解每种 化合物来制备三种0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液 (pH5，7和9)，三种0. 5mg／ml的第二种化合物(1-萘酚，“B”)溶 液，和三种0．5mg／ml的第三种化合物(4-羟基肉桂酸，“C”)溶液。

将皮革被染物(1．5cm×4cm)卷起来，放入4英寸的试管中，每支试 管中使用7ml的总体积。一支试管中添加6ml A(或6mlC)，另一支试 管中添加3mlA和3mlB(或3mlA和3mlC)，混合形成6ml。将具有 690LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthora thermophila漆酶 (“MtL”)以2LACU／ml的浓度添加到每支试管中(1ml酶溶液添加 到每支试管中使得每支试管总共7ml)。将试管密封，混合并安装在试管 旋转器上。于室温在暗橱中将试管温育16小时。温育后，将布样在流动的 冷自来水中冲洗1分钟并在室温下干燥。

实验结果在表46中给出。

表46 织物 前体 pH5 pH7 pH9 皮革 A 紫色 褐色 褐色 皮革 A／B 深紫色 紫色 紫色 皮革 C 浅绿色 绿色 绿色 皮革 A／C 浅褐色 浅褐色 浅褐色

这些结果表明在Myceliophthora thermophila漆酶和不同类型前体存在 下在一系列pH条件下在皮革上形成颜色。 实施例12

在试管中，在pH5，7和9下于室温将丝绸染色。所染的物质(从Test Fabric Inc．得到)是真丝双绉(样式601，1．5cm×4cm)。

以合适量的0．1M Britten-Robinson缓冲液(B-R缓冲液)溶解每种 化合物来制备三种0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液 (pH5，7和9)和三种0．5mg／ml的第二种化合物(1-萘酚，“B”)溶 液。

将丝绸被染物卷起来，放入4英寸的试管中，每支试管中使用7ml的总 体积。一支试管中添加6mlA，另一支试管中添加3mlA和3mlB，混合 形成6ml。将具有690LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthora thermophila漆酶(“MtL”)以2LACU／ml的浓度添加到每支试管中(1ml 酶溶液添加到每支试管中使得每支试管总共7ml)。将试管密封，混合并 安装在试管旋转器上。于室温在暗橱中将试管温育16小时。温育后，将布 样在流动的冷自来水中冲洗1分钟并在室温下干燥。

实验结果在表47中给出。

表47 织物 前体 pH5 pH7 pH9 丝绸 A 深褐色 深褐色 深紫色 丝绸 A／B 深褐色 深褐色 深褐色 实施例13

在0．1M磷酸钠缓冲液(pH5．5)中溶解5mg／ml对苯二胺和添加2．5％阿拉 伯树胶制得印花糊状物。这种印花糊状物利用印花筛框和刮板人工转移到 尼龙织物上。将被印花的织物部分用遮盖物覆盖起来。

然后，将织物在蒸汽室中汽蒸10分钟并且使其干燥。

将织物浸入2 LACU／ml漆酶溶液中，温育1小时后颜色显现出来。 实施例14

单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物可以通过浸轧施用于物质 上。例如，将0．5 mg／ml对-苯二胺溶解在500ml 0．1M K2PO4缓冲液(pH7) 中。漆酶也在同样的缓冲液中稀释。在60℃下利用标准实验室衬垫将对- 苯二胺浸轧在所说的物质上。将这种织物汽蒸10分钟。然后，用酶溶液可 以将汽蒸的物质进行第二次浸轧。在40℃时通过温育这些布样使染料显 色。温育后，将布样用连续的热自来水冲洗约30秒钟。