记忆包括以下的四个过程：鉴定和记录、信息储存、识别和回忆。 鉴定是将物体或者经历印记在大脑中的过程。信息储存是加强和保持所 述印记的过程。识别是在刺激和所述印记之间建立联系的过程。回忆是 激活所述印记的过程。另外，可以将记忆分成3个系统：感觉记录、短期 信息储存和长期信息储存。
脑细胞在暴露于大范围应力和毒性化合物之后会被损坏。这种损坏 又会影响记忆力。摄取被化肥、杀虫剂和化学药品污染的食物是将大脑 暴露于毒性化合物的一种途径。毒性化合物也可以被从空气中吸入。因 此需要提供一种有效减轻脑细胞损害并且提高记忆力的组合物。
发明概述
本发明基于这样的发现：某些酵母细胞可以被具有特定频率和场强 的电磁场活化，从而产生一些物质，这些物质有助于记忆力退化和脑细 胞损害的恢复并且改善功能正常的大脑的记忆力。本发明的组合物可以 以健康饮料或者药丸的形式、作为膳食补充剂摄取。
本发明包括一种含有多种酵母细胞的组合物，这些酵母细胞曾被培 养在频率范围为大约12000-12100MHz、场强范围为大约50-600mV/cm 的交流电场中。在一个实施方案中，频率范围为12020-12090MHz。在 另一个实施方案中，场强范围为大约50-480mV/cm。将这些酵母细胞在 交流电场中的培养一段时间，这段时间足以使得与未活化的酵母细胞相 比，提高了所述的多种酵母细胞改善哺乳动物记忆力的能力。在一个实 施方案中，在所述的时间段内，交流电场的频率和场强可以在上述的范 围内变化。换句话说，可以使所述的酵母细胞暴露于一系列电磁场。典 型的时间段是大约5-150小时。在一个实施方案中，时间段是50-77小 时。本发明还包括制造这些组合物的方法。
可以被包含在此组合物中的酵母细胞全都可以从中国普通微生物菌 种保藏中心(China General Microbiological Culture Collection Center) (“CGMCC”)得到，此保藏中心是布达佩斯条约认可的保藏中心(中国 微生物菌种保藏管理委员会，中国科学院微生物研究所，海淀区，2714 信箱，北京，100080，中国)。可以使用的酵母种类包括但不限于：粟 酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)，清酒酵母(Saccharmyces sake)，葡萄汁酵母(Saccharomyces urarum)，鲁酵母(Saccharomyces rouxii)，卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)，金橙红酵母(Rhodotorula aurantiaca)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。例如，所述的酵母 细胞可以是汉逊酿酒酵母AS2.502(Saccharomyces cerevisiae Hansen AS2.502)菌株。在另一个实施方案中，所述的酵母细胞选自下列菌株AS 2.501，AS2.502，AS2.503，AS2.504，AS2.535，AS2.558，AS2.560，AS2.561 和AS2.562。其它有用的酵母种类描述在表1中。
除非作出相反的限定，这里使用的所有科技术语都具有与本发明所 属领域的普通技术人员通常所理解的相同的意思。下文描述示例性的方 法和材料，在本发明的测试或者实践中也可以使用与本文所述的方法和 材料类似或等效的方法和材料。本文提及的所有出版物和其它文献在此 全部引入作为参考。在内容相互抵触的情况下，以本发明的说明书、包 括定义为准。所述的材料、方法和实施例都仅仅是说明性的，不能理解 为对本发明的限制。在本发明的说明书和权利要求全文中，措词“包含 (comprise)”或其变体如“含有(comprises)”或“包括(comprising)”， 应该被理解为表示包含所陈述的整数或者整数组，但是并不排除任何其 它整数或者整数组。
从下面的发明详述以及权利要求中，可以明白本发明的其它特点和 优势。
附图说明
图1是一幅示意图，其显示了使用电磁场来活化酵母细胞的示例性装 置。1：酵母培养物；2：容器；3：电源。
图2是一幅示意图，其显示了制作本发明酵母组合物的示例性装置。 此装置包括信号发生器和相互连接的容器1、2和3。
发明详述
本发明基于这样的发现：某些酵母细胞株可以被具有特定频率和场 强的电磁场(“EMF”)活化，从而产生有益于记忆力改善的制剂。含 有活化酵母细胞的酵母组合物可以以例如健康饮料或者药丸的形式被用 作膳食补充剂。
由于包含在这些酵母组合物中的活化酵母细胞，曾经经受过pH2.5- 4.2的酸性条件培养，所以该组合物在胃中是稳定的并且可以被继续运行 到小肠。一旦进入小肠，这些酵母细胞就被各种消化酶破裂，这样，有 益于提供改善记忆力的物质就被释放出来并且很容易被吸收。
发明者没有被任何理论或者机理所束缚，并且相信：EMF激活或者 增强酵母细胞中的一个基因或一组基因的表达，这样就使这些酵母细胞 被活化并且使这些酵母细胞更有效地执行某些代谢活性，这些代谢活性 会引起改善记忆力的物质的产生。 I.用于本发明的酵母菌株
在本发明中使用的酵母的类型包括，但不限于酵母属 (Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)和红菌属 (Rhodotorula)的酵母。
在上面列出的类别范围内的示例性种类包括但不限于表1中列出的种 类。本发明中使用的酵母菌株可以从实验室培养中得到，或者从公众可 以获取的培养物保藏中心那里得到，例如CGMCC和美国典型培养物保藏 中心，10801 University Boulevard，马纳萨斯，VA 20110-2209。在表1中 列出了可以使用的菌株(带有CGMCC的序列号)的非限制性实例。通常， 本发明优选的酵母菌株是那些用于食品和葡萄酒工业的菌株。因此，含 有这些酵母细胞的组合物对于人消费是安全的。本发明酵母组合物的制 备并不限于从纯的酵母菌株开始，尽管这样做是优选的。可以通过培养 不同种类或菌株的酵母细胞的混合物来生产本发明的酵母组合物。
                 表1示例性的酵母菌株           汉逊酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)     ACCC2034     ACCC2035     ACCC2036     ACCC2037     ACCC2038     ACCC2039     ACCC2040     ACCC2041     ACCC2042     AS2.1     AS2.4     AS2.11     AS2.14     AS2.16     AS2.56     AS2.69     AS2.70     AS2.93     AS2.98     AS2.101     AS2.109     AS2.110     AS2.112     AS2.139     AS2.173     AS2.174     AS2.182     AS2.196     AS2.242     AS2.336     AS2.346     AS2.369     AS2.374     AS2.375     AS2.379     AS2.380     AS2.382     AS2.390     AS2.393     AS2.395     AS2.396     AS2.397     AS2.398     AS2.399     AS2.400     AS2.406     AS2.408     AS2.409     AS2.413     AS2.414     AS2.415     AS2.416     AS2.422     AS2.423     AS2.430     AS2.431     AS2.432     AS2.451     AS2.452     AS2.453     AS2.458     AS2.460     AS2.463     AS2.467     AS2.486     AS2.501     AS2.502     AS2.503     AS2.504     AS2.516     AS2.535     AS2.536     AS2.558     AS2.560     AS2.561     AS2.562     AS2.576     AS2.593     AS2.594     AS2.614     AS2.620     AS2.628     AS2.631     AS2.666     AS2.982     AS2.1190     AS2.1364     AS2.1396     IFFI1001     IFFI1002     IFFI1005     IFFI1006     IFFI1008     IFFI1009     IFFI1010     IFFI1012     IFFI1021     IFFI1027     IFFI1037     IFFI1042     IFFI1043     IFFI1045     IFFI1048     IFFI1049     IFFI1050     IFFI1052     IFFI1059     IFFI1060     IFFI1062     IFFI1063     IFFI1202     IFFI1203     IFFI1206     IFFI1209     IFFI1210     IFFI1211     IFFI1212     IFFI1213     IFFI1214     IFFI1215     IFFI1220     IFFI1221     IFFI1224     IFFI1247     IFFI1248     IFFI1251     IFFI1270     IFFI1277     IFFI1287     IFFI1289     IFFI1290     IFFI1291     IFFI1292     IFFI1293     IFFI1297     IFFI1300     IFFI1301     IFFI1302     IFFI1307     IFFI1308     IFFI1309     IFFI1310     IFFI1311     IFFI1331     IFFI1335     IFFI1336     IFFI1337     IFFI1338     IFFI1339     IFFI1340     IFFI1345     IFFI1348     IFFI1396     IFFI1397     IFFI1399     IFFI1411     IFFI1413     IFFI1441     IFFI1443     汉逊酿酒酵母卵形变种(Hansen)Dekker     (Saccharomyces cerevisiae Hansen Var.Ellipsoideus     (Hansen)Deklker))     ACCC2043     AS2.2     AS2.3     AS2.8    AS2.53     AS2.163     AS2.168     AS2.483     AS2.541    AS2.559     AS2.606     AS2.607     AS2.611     AS2.612     薛瓦季酵母     (Saccharomyces chevalieri Guilliermond)     AS2.131     AS2.213     德氏酵母菌     (Saccharomyces delbrueckii)     AS2.285     德尔布酵母Lindner ver.mongolicus(Saito)Lodder et van Rij     (Saccharomyces delbrueckii Lindner ver.mongolicus(Saito)     Lodder et van Rij)     AS2.209     AS2.1157     少孢汉逊酵母     (Saccharomyces exiguous Hansen)     AS2.349     AS2.1158 发酵性酵母(Saito)Lodder et van Rij (Saccharomyces fermentati(Saito)Lodder et van Rij) AS2.286 AS2.343 洛格酵母van laer et Denamur ex Jorgensen (Saccharomyces logos van laer et Denamur ex Jorgensen) AS2.156 AS2.327  AS2.335 蜂蜜酵母(Fabian et Quinet)Lodder et kreger van Rij (Saccharomyces mellis(Fabian et Quinet)Lodder et kreger van Rij) AS2.195 小椭圆蜂蜜酵母Osterwalder (Saccharomyces mellis Microellipsoides Osterwalder) AS2.699 卵形酵母Osteralder (Saccharomyces oviformis Osteralder) AS2.100 罗斯酵母(Guilliermond)Lodder et Kreger van Rij (Saccharomyces rosei(Guilliermond)Lodder et Kreger van Rij) AS2.287 鲁酵母Boutroux (Saccharomyces rouxii Boutroux) AS2.178 AS2.180  AS2.370  AS2.371 清酒酵母Yabe (Saccharomyces sake Yabe) ACCC2045 木生念珠菌 (Candida arborea) AS2.566 朗比可念珠菌(Lindner et Genoud)van.Uden et Buckley (Gandida lambica(Lindner et Genoud)van.Uden et Buckley)  AS2.1182 克鲁斯念珠菌(Castellani)Berkhout (Candida krusei(Castellani)Berkhout)  AS2.1045 解脂念珠菌(Harrison)Diddens et Lodder (Candida lipolytica(Harrison)Diddens et Lodder)  AS2.1207 AS2.1216 AS2.1220 AS2.1379 AS2.1398  AS2.1399 AS2.1400 近平滑念珠菌(Ashford)Langeron et Talice Var.intermedia Van Rij et Verona (Candida parapsilosis(Ashford)Langeron et Talice Var intemedia Van Rij et Verona)  AS2.491 近平滑念珠菌(Ashford)Langeron et Talice (Candida parapsilosis(Ashford)Langeron et Talice)  AS2.590 铁红念珠菌(Lindner)Windisch (Candida pulcherrima(Lindner)Windisch)  AS2.492 皱落念珠菌(Anderson)Diddens et Lodder (Candida rugousa(Anderson)Diddens et Lodder)  AS2.511 AS2.1367 AS2.1369 AS2.1372 AS2.1373  AS2.1377 AS2.1378 AS2.1384 热带念珠菌(Castellani)Berhout (Candida tropicalis(Castellani)Berkhout)  ACCC2004 ACCC2005 ACCC2006 AS2.164 AS2.402  AS2.564 AS2.565 AS2.567 AS2.568 AS2.617 AS2.637 AS2.1387 AS2.1397 产朊念珠菌Henneberg Lodder et Kreger Van Rij (Candida utilis Henneberg Lodder et Kreger Van Rij) AS2.120 AS2.281 AS2.1180 Crebrothecium ashbyii(Guillermond) Routein(阿氏假囊酵母菌) (Crebrothecium ashbyii(Guillermond) Routein(Eremothecium ashbyii Guilliermond)  ) AS2.482 AS2.482 AS2.1197 白地霉 (Geotrichum candidum Link) ACCC2016 AS2.361 AS2.498 AS2.616 AS2.1035 AS2.1062 AS2.1080 AS2.1132 AS2.1175 AS2.1183 异常汉逊酵母(Hansen)H et P sydow (Hansenula anomala(Hansen)H et P sydow) ACCC2018 AS2.294 AS2.295 AS2.296 AS2.297 AS2.298 AS2.299 AS2.300 AS2.302 AS2.338 AS2.339 AS2.340 AS2.341 AS2.470 AS2.592 AS2.641 AS2.642 AS2.782 AS2.635 AS2.794 产阿拉伯糖醇汉逊酵母Fang (Hansenula arabitolgens Fang) AS2.887 杰丁汉逊酵母(A.et R Sartory Weill et Meyer)Wickerhan (Hansenulajadinii(A.et R Sartory Weill et Meyer) Wickerhan) ACCC2019 土星汉逊酵母(Klocker)H et P sydow (Hansenula saturnus(Klocker)H et P sydow) ACCC2020  Schneggii汉逊酵母(Weber)Dekker  (Hansenula schneggii(Weber)Dekker)  AS2.304  亚膜汉逊酵母Bedford  (Hansenula subpelliculosa Bedford)  AS2.740  AS2.760  AS2.761  AS2.770  AS2.783  AS2.790  AS2.798  AS2.866  柠檬形克勒克酵母(Reess emend.Klocker)Janke  (Kloeckera apiculata(Reess emend.Klocker)Janke)  ACCC2022  ACCC2023  AS2.197  AS2.496  AS2.714  ACCC2021  AS2.711  油脂酵母Lodder et van Rij  (Lipomycess starkeyi Lodder et van Rij)  AS2.1390  ACCC2024  粉状毕赤酵母(Lindner)Hansen  (Pichia farinosa(Lindner)Hansen)  ACCC2025  ACCC2026  AS2.86  AS2.87  AS2.705  AS2.803  膜醭毕赤酵母Hansen  (Pichia membranaefaciens Hansen)  ACCC2027  AS2.89  AS2.661  AS2.1039  红冬孢酵母Banno  (Rhodosporidium toruloides Banno)  ACCC2028  红酵母(Fresenius)Harrison  (Rhodosporidium glutinis(Fresenius)Harrison)  AS2.2029  AS2.280  ACCC2030  AS2.102  AS2.107  AS2.278  AS2.499  AS2.694  AS2.703  AS2.704  AS2.1146  小红酵母(Saito)Harrison  (Rhodotorula minuta(Saito)Harrison) AS2.277  深红酵母(Demme)Lodder  (Rhodotorula rubar(Demme)Lodder) AS2.21  AS2.22  AS2.103  AS2.105  AS2.108 AS2.140  AS2.166  AS2.167  AS2.272  AS2.279 AS2.282  ACCC2031  橙黄红酵母(Saito)Lodder  (Rhodotorula aurantiaca(Saito)Lodder) AS2.102  AS2.107  AS2.278  AS2.499  AS2.694 AS2.703  AS2.704  AS2.1146  汉逊卡尔酵母  (Saccharomyces carlsbergensis Hansen) AS2.113  ACCC2032  ACCC2033  AS2.312  AS2.116 AS2.118  AS2.121  AS2.132  AS2.162  AS2.189 AS2.200  AS2.216  AS2.265  AS2.377  AS2.417 AS2.420  AS2.440  AS2.441  AS2.443  AS2.444 AS2.459  AS2.595  AS2.605  AS2.638  AS2.742 AS2.745  AS2.748  AS2.1042  葡萄汁酵母Beijer  (Saccharomyces uvarum Beijer) IFFI1023  IFFI1032  IFFI1036  IFFI1044  IFFI1072 IFFI1205  IFFI1207  威尔酵母Saccardo  (Saccharormyces willianus Saccardo) AS2.5  AS2.7  AS2.119  AS2.152  AS2.293 AS2.381  AS2.392  AS2.434  AS2.614  AS2.1189  黄酒酵母  (Saccharomyces sp.) AS2.311  路德类酵母Hansen  (Saccharomyces ludwigii Hansen) ACCC2044  AS2.243  AS2.508  墨类酵母Yue  (Saccharomyces sinenses Yue) AS2.1395  八孢裂殖酵母Beijerinck  (Schizosaccharomyces octosporus Beijerinck) ACCC2046  AS2.1148  粟酒裂殖酵母Lindner  (Schizosaccharomyces pombe Lindner) ACCC2047  ACCC2048  AS2.214  AS2.248  AS2.249 AS2.255  AS2.257  AS2.259  AS2.260  AS2.274 AS2.994  AS2.1043  AS2.1149  AS2.1178  IFFI1056  掷孢酵母Kluyver et van Niel  (Sporobolomyces roseus Kluyver et van Niel) ACCC2049  ACCC2050  AS2.19  AS2.962  AS2.1036 ACCC2051  AS2.261  AS2.262  白球拟酵母(Saito)Lodder  (Torulopsis candidi(Saito)Lodder) AS2.270  ACCC2052  famta拟酵母(Harrison)Lodder et vanij  (Torulopsis famta(Harrison)Lodder et van Rij) ACCC2053  AS2.685  圆球拟酵母(Olson et Hammer)Lodder et van Rij (Torulopsis globosa(Olson et Hammer)Lodder et van Rij) ACCC2054  AS2.202  平常球拟酵母Lodder et Kreger van Rij  (Torulopsis inconspicua Lodder et Kreger van Rij) AS2.75 贝雷丝孢酵母Lodder et Kreger van Rij (Trichosporon behrendii Lodder et Kreger van Rij) ACCC2056 AS2.1193 头状丝孢酵母Diddens et Lodder (Trichosporon capitatum Diddens et Lodder) ACCC2056 AS2.1385 丝孢酵母(de Beurm et al.)Ota (Trichosporon cutaneum(de Beurm et al.)Ota) ACCC2057 AS2.25 AS2.570 AS2.571 AS2.1374 威克酵母(Soneda)Soneda (Wickerhamia fluorescens(Soneda)Soneda) ACCC2058 AS2.1388 II.电场的施加
可以通过各种本领域已知的方法来产生和施加用于本发明的电磁 场。例如可以通过施加交流电场或者振荡磁场来产生EMF。
可以通过电极与培养基的直接接触、或者通过电磁感应，将交流电 场施加给细胞培养物。见例如图1。使用电极与培养基相接触的方法，可 以在培养基中产生相对高的电场。必须注意防止在电极处的电解将非目 的离子引入培养基，并且注意防止接触电阻、气泡或者电解的其它特性 使电场水平下降到目的电场水平以下。电极应该与其环境相匹配，例如 在氯离子富集的溶液中使用Ag-AgCl电极，而且电极应该在尽可能低的电 压下运转。关于综述，见Goodman等的Effects of EMF on Molecules and Cells，Intemational Review of Cytology，A Survey of Cell Biology，Vol.158， Academic Press，1995。
也可以通过施加振荡磁场来产生本发明使用的EMF。可以用通过赫 姆霍兹线圈的振荡电流来产生振荡磁场。此振荡磁场又会诱导出电场。
本发明使用的EMF的频率范围为大约12000MHz-12100MHz。典型 的频率包括12034，12041，12052，12064和12069MHz。本发明使用的场 强范围为50-600mV/cm(例如：50-100，120-200，260-400或者450-490 mV/cm)。示例性的场强包括65，122，142，160，168，188，280，300， 335，387，367和475mV/cm。
当将一系列EMF施加到酵母培养物的时候，可以将酵母培养物保持 在相同的容器中，使用一套相同的EMF发生器和发射器来改变频率和/或 场强。系列中的每个EMF都可以具有不同的频率或者不同的场强；或者 不同的频率和不同的场强。这些频率和场强优选处于上述的范围内。尽 管可以在系列中使用任何有效数目的EMF，但是优选将酵母培养物暴露 于总数为2，3，4，5，6，7，8，9或者10个EMF的系列中。
尽管在EMF存在的情况下，酵母细胞甚至可以在培养几个小时后被 激活，但是优选的情况是，应该允许含有活化酵母细胞的组合物在EMF 存在的情况下复制和生长总计50-77个小时。
图1描述了产生交流电场的示例性装置。可以通过AC源(3)产生所 需频率和强度的电场，AC源(3)能够产生优选为正弦波形的、频率范 围为5-20,000MHz的交流电场。也可以使用能够用较窄的频率范围产生 信号的信号发生器。如果需要，可以使用信号放大器来增加输出。培养 容器(2)可以由非导电性材料如玻璃、塑料或者陶瓷制成。连接培养容 器(2)和信号发生器(3)的缆线，优选为高频率同轴电缆，其传输频 率为至少20Ghz。在一个实施方案中，传输频率为30Ghz。
可以通过多种方法将交流电场施加于所述的培养基，这些方法包括 将酵母培养物(1)放置到与信号发射器(例如能够传送EMF的金属线或 者管)非常接近的地方。所述的金属线或者管可以由红铜制造，而且可 以被放置到容器(2)内直至3-30cm的深度。例如，如果容器(2)中的 流体深度为15-20cm，20-30cm，30-50cm，50-70cm，70-100cm，100- 150cm或者150-200cm，那么金属线距容器(2)底部的长度可以分别是3-5 cm，5-7cm，7-10cm，10-15cm，15-20cm，20-30cm和25-30cm。所用 金属线/管的数目可以是1-10个(例如：2-3)。尽管并不要求，但是建 议对于10L体积的培养物，应该使用直径为0.5-2mm的金属线/管。对于 体积为10-100L的培养物，可以使用直径为3-5mm的金属线/管。对于 体积为100-1000L的培养物，可以使用直径为6-15mm的金属线/管。对 于体积大于1000L的培养物，可以使用直径为20-25mm的金属线/管。
在一个实施方案中，通过没入培养物(1)的电极来施加电场。在这 个实施方案中，一个电极可以是放置在容器(2)底部的金属板，另一个 电极可以含有均匀分布在培养物(1)中的许多电极线，这样可以实现电 场能量的均匀分布。所用电极线的数量取决于培养物的体积以及金属线 的直径。 III.培养基
本发明使用的培养基含有能够被酵母细胞吸收的营养源。可以将复 合含碳物质以适当的形式(例如，糖类如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、麦芽 糖、淀粉、木糖；甘露糖醇)作为酵母细胞的碳源。可以根据培养基的 其它组分调节碳源的确切量。通常，含碳物质的量的范围为大约培养基 重量的0.5％-10％，优选为大约1％-5％，最优选为大约1.3％-2.2％。 这些碳源可以单独或者组合使用。可以被加入到培养基中的无机盐是能 够产生钠、钾、钙、硫酸盐、硫酸盐、碳酸盐和类似离子的常规盐。营 养无机盐的非限制性实例是(NH4)2HPO4，CaCO3，KH2PO4，K2HPO4， MgSO4，NaCl，和CaSO4。 IV.酵母细胞的电磁激活
为了激活或者增强酵母细胞改善记忆力的固有能力，将这些细胞在 适当的介质中、在无菌条件下、在20℃-35℃(例如23-32℃)、在上 述的交流电场或者一系列交流电场中培养足够长的时间例如5-150小时 (例如50-77小时)。
在图1(见上)中描述了进行培养的示例性装置。示例性的培养基在 每1000ml的无菌水中含有下列物质：15g的可溶淀粉，10g的甘露糖醇， 0.25g的K2HPO4，0.2g的KH2PO4，0.2g的MgSO4·7H2O，0.3g的NaCl，0.1 g的CaSO4·2H2O，3.0g的CaCO3·5H2O，0.4g的酵母糊。随后将所需菌 株的酵母细胞添加到培养基中以形成含有1×108个酵母细胞/1000ml培养 基的混合物。酵母细胞可以是表1中列出的任何菌株。在一个实施方案中， 所述的菌株是酿酒酵母Hansen A2.502。随后将混合物加入到图1的装置 中。
酿酒酵母的活化过程涉及下列步骤：1)将活化装置的温度保持在 20-35℃(例如28-32℃)，将酵母细胞培养24-36小时；2)施加频率为 大约12034MHz、场强为大约170-200mV/cm(例如大约188mV/cm)的电 场大约10-15小时(例如12小时)；3)将活化装置的温度保持在28-32 ℃，将酵母细胞培养24-36小时；4)随后施加频率为大约12041MHz、 场强为大约120-200mV/cm(例如大约168mV/cm)的电场大约24-30小时 (例如28小时)；5)而后施加频率为大约12052MHz、场强为大约320-400 mV/cm(例如大约367mV/cm)的电场大约18-20小时(例如19小时)；6) 随后施加频率为大约12064MHz、场强为大约450-490mV/cm(例如大约 475mV/cm)的电场大约7-10小时(例如8小时)；7)而后施加频率为大 约12069MHz、场强为大约290-320mV/cm(例如大约300mV/cm)的电场 大约9-12小时(例如10小时)；和8)最后将含有活化酵母细胞的组合 物冻干以形成粉末，并将粉末存储在4℃。优选地，冻干酵母细胞的浓度 大于1010细胞/g。 V.酵母细胞对胃环境的适应
由于本发明的酵母组合物在到达小肠以前必须通过胃，而有效组分 是在小肠中从这些酵母细胞中释放出来，因此优选将这些酵母细胞在酸 性条件下培养以使这些细胞适应胃液。这种适应过程能够使酵母在酸性 胃环境中有更好的生存能力。
为了达到这一目的，可以将含有活化酵母细胞的酵母粉以10g(每克 含有超过1010个活化的细胞)/1000m1与高酸性适应的培养基混和。而后 对酵母混合物进行培养，首先在频率为大约12064MHz、场强为350-400 mV/cm(例如大约387mV/cm)的交流电场存在的情况下、在大约28-32℃ 培养45小时。将所得到的酵母细胞进一步在频率为大约12069MHz、场强 为260-300mV/cm(例如大约280mV/cm)的交流电场存在的情况下、在大 约28-32℃培养22小时。随后干燥所得到的适应化酵母细胞并将其以粉 末形式(≥1010细胞/g)室温储存或者在0-4℃真空储存。
典型的适应化培养基是通过将700ml新鲜猪胃液和300ml野生中国山 楂提取物混和制成的。用0.1M的盐酸和0.2M的苯二酸氢钠将适应化培养 基的pH调节到2.5。猪胃液的制备如下。将大约4月龄的新生荷兰白猪处 死，回收它们胃中的全部内含物并将其与2000ml的水在无菌条件下混和。 随后使该混合物在无菌条件下，在4℃静置6小时以沉淀食物残渣。关于 野生中国山楂提取物的制备，在无菌条件下干燥500g新鲜的野生中国山 楂，以减少水份含量(≤8％)。随后研磨(≥20目)此干果并将其加入1500ml 的无菌水。将化合物在无菌条件下、在4℃静置6小时。收集上清液以在 适应化培养基中使用。 VI.酵母混合物的制造
为了制备本发明的酵母混合物，可以使用图2中描述的装置或其等效 装置。此装置包括第一容器(1)、第二容器(2)、和第三容器(3)， 每个容器装备有一对电极(4)。所述电极中的一个是放置于容器底部上 的金属板，另一个电极包含多个均匀分布在容器空间内的电极线，以实 现电场能量的均匀分布。所有三对电极都被连接到一个普通的信号发生 器。
用于此目的的培养基是一种混合的水果提取物溶液，每1000L该溶液 含有下述组分：300L的野生中国山楂提取物、300L枣提取物、300L来自 五味子(Schisandra chinensis Bail)(wu wei zi)的水果提取物、和100L 的大豆提取物。关于山楂、枣、五味子提取物的制备，清洗新鲜的水果 并在无菌条件下干燥以将水含量减少到不超过8％。而后研磨(≥20目)100 千克的干果并将其加入到400L的无菌水中。将混合物在无菌条件下、在 室温搅动12小时，随后以1000rpm离心以去除不溶的残余物。关于大豆提 取物的制备，清洗新鲜的大豆并将其在无菌条件下干燥以将含水量减少 到不超过8％。随后将30千克的大豆研磨成不小于20目的颗粒，加入130L 无菌水。将混合物在无菌条件下、在室温搅动12小时，随后以1000rpm离 心以去除不溶的残余物。一旦制备成了混合的水果提取物溶液，就将溶 液在121℃下灭菌30分钟，并在使用前冷却到4℃。
将如上(上面的V部分)制备的1000g活化的酵母粉加入到1000L混 合的水果提取物溶液中，将酵母溶液转移到图2中所示的第一容器(I)中。 随后，在频率为大约12064MHz、场强为300-350mV/cm (例如大约335 mV/cm)的交流电场存在的情况下、在大约28-32℃培养12小时。将酵母 细胞进一步在频率为大约12069MHz、场强为280-350mV/cm(例如大约 300mV/cm)的交流电场存在的情况下培养。将培养继续进行另10个小时。
随后将酵母培养物从第一容器(1)转移到第二容器(2)(如果需 要，可以在现在可以使用的第一容器(1)中开始新的一批酵母培养物培 养)，随后将其处于频率为大约12064MHz、场强为120-150mV/cm(例 如大约142mV/cm)的交流电场中6小时。然后将电场的频率和场强分别改 变为大约12069MHz和140-180mV/cm(例如大约160mV/cm)。将培养继 续进行另8个小时。
而后将酵母培养物从第二容器(2)转移到第三容器(3)，并将其 处于频率为大约12064MHz、场强为50-80mV/cm(例如大约65mV/cm)的 交流电场中6小时。然后将电场的频率和场强分别改变为大约12069MHz 和110-140mV/cm(例如大约122mV/cm)。将培养继续进行另10个小时。
将来自第三容器(3)的酵母培养物包装到真空密封的瓶中以用作膳 食补充剂。该膳食补充剂可以每次30-60ml、每天3-4次地摄取3个月(餐 前和就寝前10-30分钟)。如果需要，还可以将成品酵母培养物在24小 时内干燥并以粉末形式储存。
在一个实施方案中，还可以以无菌可注射制剂的形式通过静脉或者 腹膜给予本发明的组合物。这样的无菌制剂制备如下。将灭菌的健康饮 料组合物首先在超声波(1000Hz)下处理10分钟，随后在4355rpm离心另10 分钟。使用1M NaOH将所得到上清液的pH调节到7.2-7.4，并随后在无菌 条件下通过膜(对于静脉注射0.22μm，对于腹膜内注射0.45μm)进行过 滤。在使用前，将所得到的无菌制剂浸入35-38℃的水浴中30分钟。
实施例
以下实施例的目的是为了描述本发明的材料和方法。对于本领域的 技术人员来说显而易见的所述条件与参数的合适变体和适应性变化，都 处于本发明的精神和范围内。
在交流电场存在的情况下，使用汉逊酿酒酵母AS2.502，按照如上所 述的方法制备以下实验中所使用的活化酵母组合物，所述的交流电场具 有在建议使用范围之后的括号中所例举的电场频率和场强。除了在没有 EMF的情况下进行培养，以相同的方法制备对照酵母组合物。除非作出 相反的限定，所有的酵母组合物和相应的对照组合物均通过胃内给食给 予所述的动物。 实施例1：小鼠平台跳跃实验
在此实验中，首先通过条件反射训练小鼠执行一项任务。在它们能 够执行此任务后的一段时间，再次对小鼠进行测试。
在此实验中使用的装置包括一个长方形的盒子，盒子的底部覆盖有 平行的铜栏杆。每个相邻铜栏杆之间的间隔为0.5cm。将铜栏杆连接到电 源，通过变压器调节电压。将一个高度和直径为4.5cm的圆形平台放置在 每个铜栏杆的左后端。将食物如油炸大豆粉放置在铜栏杆上。
首先将小鼠在盒子里放置3分钟使其适应。在小鼠开始争抢食物后， 立即向铜栏杆施加36V的交流电流。小鼠的正常反应是跳回平台以避免电 击。由于食物的诱惑，多数小鼠重新跳回铜栏杆，当它们受到电击后又 重新返回平台。在5分钟的训练过程中，记录每只小鼠被电击的次数。此 数字也被称为错误数。24小时后，恢复训练3分钟。在此阶段中，记录被 电击小鼠的数目、每只小鼠首次跳跃到铜栏杆之前的时间段(延迟期)、 以及每只小鼠的错误数。
将36只NIH等级的小鼠分为3组，每组12只小鼠。A，B和C组中的每 只小鼠每天被分别给予2ml活化的酵母组合物、对照酵母组合物和盐水。 小鼠在进行首次平台跳跃实验之前被处理6周(表2)。在表3中描述了在 首次跳跃实验的24小时后进行的平台跳跃实验的结果。
                      表2 组  动物数  延迟期  (秒)(x±SD)  错误数  (x±SD) A  12  92.23±81.23  4.13±2.22  B  12  36.54±23.45  12.44±4.64  C  12  35.56±18.25  12.65±5.82
                     表3 组  动物数  延迟期  (秒)(x±SD)  错误数  (x±SD) A  12  87.57±79.54  5.22±3.15 B  12  31.33±43.34  15.64±6.56 C  12  32.22±39.47  14.89±6.55 实施例2：小鼠Y形迷宫实验
存在多种用于测试动物记忆力的方法。其中一种方法涉及使用Y形迷 宫。见R.C.Miller等的 Nature，228，1107-1108页(1970)，该文献在此引入 作为参考。Y的主干为起始点，此处是测试动物被最初放置的地方。迷宫 的一条臂与电源相连，这样，进入此臂的动物将会受到电击。迷宫的另 一条臂是有食物的安全地带。
在此实验中，将36只NIH小鼠分成3个相等的组A，B和C。在Y形迷 宫中训练所有的小鼠。将小鼠首先放置在起始点，对其进行训练以使其 在带电地带受到电击后具有逃向安全地带的正常反应。训练小鼠，直到 它们学会在90％的情况下从带电地带逃向安全地带。
训练24小时后，每天分别给予A，B和C组的小鼠3ml活化的酵母组合 物、对照酵母组合物和盐水，共给予6周。6周以后，将小鼠再次放置在Y 形迷宫中以进行行为学观察。结果显示在下面的表4中。
                  表4     组     动物数     正常反应的百分比(％)     (x±SD)     A     12     97.65±11.2     B     12     69.28±28.66     C     12     67.68±25.34
此实验证实，与对照酵母组合物和盐水相比，活化的酵母组合物增 强了被测试动物的记忆力。
虽然已经对本发明的大量实施方案进行了阐述，但是很明显，可以 对这些基本结构进行改变，以提供利用本发明组合物和方法的其它实施 方案。