一种减缓血液凝固的益生菌剂及其在制备防侧漏卫生巾中的应用专利检索-··含微生物专利检索查询-专利查询网

一种减缓血液 凝固的益生菌剂及其在制备防侧漏卫生巾中的应用

专利类型	发明授权	法律事件	公开; 实质审查; 授权;
专利有效性	有效专利	当前状态	授权
申请号	CN202411366100.6	申请日	2024-09-29
公开(公告)号	CN118895231B	公开(公告)日	2024-12-27
申请人	微康益生菌(苏州)股份有限公司;	申请人类型	企业
发明人	方曙光; 王哲; 李蕴涵; 孟子惠; 盖忠辉; 朱建国;	第一发明人	方曙光
权利人	微康益生菌(苏州)股份有限公司	权利人类型	企业
当前权利人	微康益生菌(苏州)股份有限公司	当前权利人类型	企业
省份	当前专利权人所在省份：江苏省	城市	当前专利权人所在城市：江苏省苏州市
具体地址	当前专利权人所在详细地址：江苏省苏州市吴江经济技术开发区龙桥路1033号	邮编	当前专利权人邮编：215200
主IPC国际分类	C12N1/20	所有IPC国际分类	C12N1/20 ; C12N1/04 ; A61F13/84 ; A61F13/511 ; A61F13/53 ; A61L15/36 ; A61L15/46 ; A61L15/44 ; C12R1/23 ; C12R1/225
专利引用数量	4	专利被引用数量	0
专利权利要求数量	7	专利文献类型	B
专利代理机构	北京品源专利代理有限公司	专利代理人	王艳斋;
摘要	本发明涉及一种减缓血液凝固的益生菌剂及其在制备防侧漏卫生巾中的应用，所述减缓血液凝固的益生菌剂中的菌株由嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus LA88菌株和鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus LRa05菌株组成。两种菌株能够相互配合、相互促进、在减缓血液凝固的功效上协同增效，将其进一步地用于制备血液吸收产品例如卫生巾产品，能够延长卫生巾吸收层的渗透吸收时间，促进吸收效果，防止血液侧漏。同时，上述两种菌株还对常见的生殖道致病菌具有优异的抑制作用，能够维持生殖道健康的菌落环境。并且，两种菌均为益生菌，产品的安全性高，且不易产生抗性。
权利要求	1.一种益生菌剂在增强卫生巾防侧漏功效中的应用，其特征在于，所述益生菌剂中的菌株由保藏编号为CGMCC No. 24109的嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus LA88菌株和保藏编号为CGMCC No. 24377的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus LRa05菌株组成；所述LA88菌株与LRa05菌株的活菌数之比为(2‑10):1；所述益生菌剂中活菌含量不低于 11 11 1×10 CFU/g或1×10 CFU/mL。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述益生菌剂的剂型包括溶液剂、冻干粉剂、胶囊剂、片剂或颗粒剂。 3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述益生菌剂的剂型为冻干粉剂，其由如下的方法制得：将LA88菌株、LRa05菌株分别接种于培养基中依次进行活化和发酵培养，得到发酵液；发酵液分别离心，得到菌泥；将菌泥与保护剂混合重悬得到重悬液；将重悬液进行冷冻干燥，得到LA88菌粉、LRa05菌粉；将LA88菌粉、LRa05菌粉按照活菌数配比进行混合，得到所述益生菌剂。 4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述保护剂选自脱脂乳、明胶、糊精、阿拉伯胶、右旋糖酐、藻胶钠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇或木糖醇中的任意一种或至少两种的组合。 5.一种促吸收防侧漏卫生巾，其特征在于，所述促吸收防侧漏卫生巾包括表层、吸收层和底层；所述吸收层负载有益生菌剂；所述益生菌剂中的菌株由保藏编号为CGMCC No. 24109的嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus LA88菌株和保藏编号为CGMCC No. 24377的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus LRa05菌株组成；所述LA88菌株与LRa05 11 11 菌株的活菌数之比为(2‑10):1；所述益生菌剂中活菌含量不低于1×10 CFU/g或1×10CFU/mL。 6.根据权利要求5所述的促吸收防侧漏卫生巾，其特征在于，所述表层上设置有带颜色的图案，吸收层上益生菌剂的分布区域在表层的投影落入所述带颜色的图案中。 7.根据权利要求5所述的促吸收防侧漏卫生巾，其特征在于，所述益生菌剂在吸收层上 2 的负载量为1‑5 mg/cm。
说明书全文	一种减缓血液凝固的益生菌剂及其在制备防侧漏卫生巾中的应用技术领域 [0001] 本发明属于微生物技术领域，涉及一种减缓血液凝固的益生菌剂及其在制备防侧漏卫生巾中的应用。背景技术 [0002] 卫生巾是一种女性日常卫生用品，其主要功能是吸收女性在月经期间或其他时期排出的血液和分泌物，以保持外阴部的清洁和舒适。卫生巾通常由三部分组成：表层、吸收层和底层。表层与皮肤直接接触，因此需要考虑材料的透气性和亲肤性，减少对皮肤的刺激和女性使用的不适感，通常由柔软的无纺布或棉质材料制成。吸收层作为卫生巾的核心部分，需要具备较强的吸收和锁水能力，通常由高分子吸水树脂等材料制成。底层由防漏材料制成，具备良好的防水性能，以防止液体渗漏。 [0003] 益生菌卫生巾在传统卫生巾的基础上添加了益生菌成分。益生菌是指能够改善人体微生态平衡，发挥有益作用，达到提高宿主健康水平和健康状态的活菌制剂及其代谢产物。益生菌主要定植于人体肠道和生殖系统内，通过多种途径发挥功效：益生菌能够刺激肠道免疫细胞，增强肠道黏膜免疫屏障的功能，提高人体的抵抗力；益生菌能够调节肠道菌群平衡，有效抑制有害菌的生长，增加有益菌的数量，维持肠道菌群的健康；益生菌能够分解食物中难以消化的物质，促进营养物质的吸收；一些产酸的益生菌如乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌等，可以发酵产生有机酸，降低肠道的pH，抑制致病菌的生长；益生菌能够产生细菌素、过氧化氢等抗菌物质，拮抗致病菌的生长，保护肠道健康。另外，益生菌能够调节阴道微生态，一些添加了益生菌的卫生巾产品也已经上市。 [0004] “侧漏”是指女性月经期间，短时间排出过多经血而卫生巾无法快速吸收导致的经血外漏的现象，这一现象给女性的工作和生活带来了许多不便与尴尬。因此，开发更多的减少“侧漏”现象发生的策略是非常有意义的。一些外形设计被应用在卫生巾上以防侧漏，例如，立体护围、防漏凹槽、加长加宽尾翼等。但外形设计虽然能够起到一定的防侧漏效果，但效果有限。发明内容 [0005] 针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种减缓血液凝固的益生菌剂及其在制备防侧漏卫生巾中的应用。 [0006] 为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案： [0007] 第一方面，本发明提供一种减缓血液凝固的益生菌剂，所述减缓血液凝固的益生菌剂中的菌株由保藏编号为CGMCC No. 24109的嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus LA88菌株和保藏编号为CGMCC No. 24377的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus LRa05菌株组成。 [0008] 本发明开发了一种全新的益生菌复配方式，即将嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus LA88菌株和鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus LRa05菌株进行复配使用，发现两种菌株能够相互配合、相互促进、在减缓血液凝固的功效上协同增效，将其进一步地用于制备血液吸收产品例如卫生巾产品，能够减缓血液凝固，进而延长经血的渗透时间，促进卫生巾吸收层对经血的吸收效果，防止血液侧漏。同时，上述两种菌株还对常见的生殖道致病菌具有优异的抑制作用，能够维持生殖道健康的菌落环境。并且，两种菌均为益生菌，产品的安全性高，且不易产生抗性。 [0009] 优选地，所述LA88菌株与LRa05菌株的活菌数之比为(2‑10):1，例如2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1等；该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 [0010] 优选地，所述益生菌剂中活菌含量不低于1×1011 CFU/g或1×1011 CFU/mL，例如111 11 11 11 ×10 CFU/g（CFU/mL）、3×10 CFU/g（CFU/mL）、5×10 CFU/g（CFU/mL）、8×10 CFU/g 12 12 12 （CFU/mL）、1×10 CFU/g（CFU/mL）、3×10 CFU/g（CFU/mL）、5×10 CFU/g（CFU/mL）、1× 13 10 CFU/g（CFU/mL）等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 [0011] 优选地，所述益生菌剂的剂型包括溶液剂、冻干粉剂、胶囊剂、片剂或颗粒剂。本发明所涉及的益生菌剂的剂型不受限制，包括最常用的溶液剂、冻干粉剂，或进一步制得的胶囊剂、片剂或颗粒剂。 [0012] 优选地，所述益生菌剂的剂型为冻干粉剂，其由如下的方法制得： [0013] 将LA88菌株、LRa05菌株分别接种于培养基中依次进行活化和发酵培养，得到发酵液；发酵液分别离心，得到菌泥；将菌泥与保护剂混合重悬得到重悬液；将重悬液进行冷冻干燥，得到LA88菌粉、LRa05菌粉；将LA88菌粉、LRa05菌粉按照活菌数配比进行混合，得到所述益生菌剂。 [0014] 优选地，所述保护剂选自脱脂乳、明胶、糊精、阿拉伯胶、右旋糖酐、藻胶钠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇或木糖醇中的任意一种或至少两种的组合。 [0015] 优选地，所述发酵培养的温度为35‑40℃，例如35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃等；时间为12‑30 h，例如12 h、15 h、16 h、18 h、20 h、24 h、28 h、30 h等；上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 [0016] 优选地，所述接种的接种量为1‑5%，例如1%、2%、3%、4%、5%等，数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 [0017] 优选地，所述培养基为MRS培养基。 [0018] 第二方面，本发明提供第一方面所述的益生菌剂在增强卫生巾防侧漏功效中的应用。 [0019] 第三方面，本发明提供一种促吸收防侧漏卫生巾，所述促吸收防侧漏卫生巾包括表层、吸收层和底层；所述吸收层负载有第一方面所述的益生菌剂。 [0020] 优选地，所述表层上设置有带颜色的图案，吸收层上益生菌剂的分布区域在表层的投影落入所述带颜色的图案中。 [0021] 为了能够更直观的感受到益生菌的添加，在卫生巾产品的表层可以用颜色划定一定的区域，作为指示益生菌负载的区域。 [0022] 优选地，所述益生菌剂在吸收层上的负载量为1‑5 mg/cm2。 [0023] 相对于现有技术，本发明具有以下有益效果： [0024] 本发明开发了一种全新的益生菌复配方式，即将嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus LA88菌株和鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus LRa05菌株进行复配使用，发现两种菌株能够相互配合、相互促进、在减缓血液凝固的功效上协同增效，将其进一步地用于制备血液吸收产品例如卫生巾产品，能够减缓血液凝固，进而延长经血的渗透时间，促进卫生巾吸收层对经血的吸收效果，防止血液侧漏。同时，上述两种菌株还对常见的生殖道致病菌具有优异的抑制作用，能够维持生殖道健康的菌落环境。并且，两种菌均为益生菌，产品的安全性高，且不易产生抗性。 [0025] 本发明所涉及的LA88菌株的分类命名嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2021年12月15日，保藏编号CGMCC No. 24109，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 [0026] 本发明所涉及的LRa05菌株的分类命名鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年01月24日，保藏编号CGMCC No. 24377，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。附图说明 [0027] 图1是实施例3中验证益生菌促进卫生巾对经血的吸收效果的结果图。具体实施方式 [0028] 下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。 [0029] 下述实施例所涉及的LA88菌株的分类命名嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为 2021年12月15日，保藏编号CGMCC No. 24109，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 [0030] 下述实施例所涉及的LRa05菌株的分类命名鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年01月24日，保藏编号CGMCC No. 24377，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 [0031] 下述实施例中涉及的培养基配方如下： [0032] MRS培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L、半胱氨酸盐酸盐0.5g/L。 [0033] YPD液体培养基：葡萄糖10g/L，蛋白胨10g/L，酵母抽提物5g/L，水1000mL，pH7.0；固体培养基中加1.5%的琼脂粉。 [0034] LB液体培养基：胰蛋白胨10g/L，酵母5g/L，NaCl 5g/L，水1000mL，pH7.2；固体培养基中加1.5%的琼脂粉。 [0035] 下述涉及的益生菌菌液的制备方法：将LA88菌株或LRa05菌株的种子液按照培养基总质量3%的接种量分别接种到MRS培养基中，于37℃下培养，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用PBS液重悬。 [0036] 下述涉及的益生菌粉的制备方法：将LA88菌株或LRa05菌株的种子液按照培养基总质量3%的接种量分别接种到MRS培养基中，于37℃下培养，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用冻干保护剂（浓度为100g/L的海藻糖水溶液）重悬，冻干保护剂和菌体的质量比为2:1，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，分别得到两种菌的冻干粉。实施例1 [0037] 经血模拟物的准备： [0038] GB/T 8939‑2018中记载了一种模拟人体经血物理性能的标准合成试液（蒸馏水或去离子水：860 mL；氯化钠：10.00 g，化学纯；碳酸钠：40.00 g，化学纯；丙三醇：140 mL，化学纯；苯甲酸钠：1.00 g，化学纯；颜色（食用色素）：适量，化学纯；羧甲基纤维素钠：约5 g，化学纯；标准媒剂：1%（体积比）），具有与经血相似的流动性及吸收特性。 [0039] 本实施例中，我们使用无菌玻璃珠对猪血进行脱纤维操作。在锥形瓶中加入10颗玻璃珠并高温高压灭菌。加入100 mL新鲜的猪血于该锥形瓶中，顺时针摇晃10分钟，纤维蛋白吸附到玻璃珠表面，实现对血液的脱纤维。脱纤维后的猪血使用0.22 μm的滤膜进行过滤除菌，制成无菌脱纤维猪血。在此，我们从密度、黏度和表面张力三个方面，比较了无菌脱纤维猪血与标准合成试液。 [0040] 密度：吸取1 mL猪血于万分之一天平上称重，所得重量除以体积即为猪血的密度。3 经多次测量，猪血密度为(1.05±0.35) g/cm，符合GB/T 8939‑2018中标准合成试液的密度范围。 [0041] 黏度：清洗和干燥4号黏度杯，保证其清洁干燥。将猪血样本提前置于23°C环境下，等待其温度与室温一致。调节黏度计至水平状态，用手堵住漏嘴将猪血样本倒入黏度杯中，除去气泡。迅速移开手指并计时，待样品完全流出后停止计时。经实验确定，猪血的黏度为(12.1±0.45) s，符合GB/T 8939‑2018中标准合成试液的黏度范围。 [0042] 表面张力：使用液体表面张力仪对猪血样本的表面张力进行测定。清洗仪器，加入样本，调节各项参数符合测量要求并进行测定。经测定，猪血的表面张力为(34±2) mN/m，符合GB/T 8939‑2018中标准合成试液的表面张力要求。 [0043] 综上，上述处理的猪血样本可以用作后续性能研究的经血模拟液。实施例2 [0044] 本实施例验证益生菌减缓血液凝固的效果： [0045] 设置对照组（不添加菌粉）、菌粉干预组：LA88组（添加LA88菌粉）、LRa05组（添加LRa05菌粉）、LA88+LRa05组1（添加活菌数比为2:1的LA88菌粉和LRa05菌粉）、LA88+LRa05组2（添加活菌数比为10:1的LA88菌粉和LRa05菌粉）。 [0046] 称取上述各组的单一菌粉或混合菌液均为0.2 g溶于1 mL水中配制成20%菌液，再加入1 mL牛奶配制成不同的牛奶菌悬液作为不同的菌粉干预组；对照组则将牛奶和自来水按1:1体积比例配制成牛奶稀释液。各组均吸取500 μL猪血样本2 mL无菌离心管中，分别加入500 μL上述不同的牛奶菌悬液或牛奶稀释液。观察记录不同组间血液凝固所需时间的差别。结果如表1所示。 [0047] 表1 [0048] [0049] 由表1数据结果可知，与对照组相比，本发明所涉及的益生菌剂具有优异的减缓血液凝固的效果，且LA88菌粉与LRa05菌粉在上述功效方面具有协同增效作用。实施例3 [0050] 本实施例验证益生菌促进卫生巾对经血的吸收效果： [0051] 设置对照组（不进行菌粉干预）、菌粉干预组：LA88组（用LA88菌粉进行干预）、LRa05组（用LRa05菌粉进行干预）、LA88+LRa05组（用活菌数比为5:1的LA88菌粉和LRa05菌粉共同干预）。 [0052] 按照猪血样本:自来水:牛奶=2:1:1的体积比配制6 mL普通经血模拟液，作为对照组；取各组菌粉分别配制不同的20%菌粉水溶液，再按照猪血样本:20%菌粉水溶液:牛奶=2:1:1的体积比配制6 mL含菌粉经血模拟液，作为各菌粉干预组。使用注射器以相同的速度（6mL/min）分别将普通经血模拟液和各组含菌粉经血模拟液匀速滴加到相同的市售的不含益生菌的卫生巾产品表层，模拟经血被扩散吸收的过程。 [0053] 滴加完毕5min后进行观察，结果如图1所示，由图可知，与对照组相比，本发明所涉及的益生菌剂能够使经血更快速地渗透到卫生巾的吸收层并在吸收层中扩散，卫生巾表层的扩散面积小，即具有更优异的促吸收防侧漏的效果，且LA88菌粉与LRa05菌粉在上述功效方面具有协同增效作用。实施例4 [0054] 本实施例验证益生菌对阴道常见细菌的抑制评价试验： [0055] （1）指示菌悬液的制备：将加德纳杆菌ATCC 14018、大肠杆菌ATCC 25922、白色念珠菌ATCC 10231、金黄色葡萄球菌ATCC 25923分别在平板培养基上活化，挑取菌苔至生理8 盐水制备菌悬液，调整菌液浓度至10 CFU/mL； [0056] （2）抑菌实验：将加5%脱纤维羊血的BHI培养基、伊红美蓝琼脂培养基、YPD琼脂培养基、LB琼脂培养基冷却至55℃左右，依序分别与加德纳氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色6 葡萄球菌悬液混匀，使指示菌的活菌数在10 CFU/mL，然后迅速倾注于预先放置牛津杯的平板中，待培养基冷却凝固后，取出牛津杯，于每孔注入200μL的LA88菌液或LRa05菌液（活菌 8 数为10 CFU/mL），37℃培养24 h后，测量抑菌圈直径。结果如表2所示。 [0057] 表2 [0058] [0059] 由表2数据结果可知，本发明所涉及的益生菌剂对阴道常见致病菌具有优异的抑制效果。 [0060] 申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的技术方案，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。 [0061] 以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。 [0062] 另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

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