一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶及其制备方法与应用

申请号 CN202410117355.2 申请日 2024-01-29 公开(公告)号 CN117946419A 公开(公告)日 2024-04-30
申请人 暨南大学; 发明人 李航; 莫振东; 汤顺清;
摘要 本 发明 涉及一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶及其制备方法与应用。本发明在羧甲基壳聚糖表面引入邻苯二酚官能团制得羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲 醛 ;在羧甲基壳聚糖表面引入叠氮基团制得羧甲基壳聚糖‑叠氮,在鱼精蛋白表面引入二苯并环辛炔基团制得鱼精蛋白‑二苯并环辛炔,利用无 铜 催化叠氮炔环加成反应合成羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白;利用邻苯二酚官能团的 氧 化交联作用以及羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基 苯甲醛 、羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白和氧化透明质酸的席夫 碱 反应合成凝胶材料。本发明提供的具有长效抗菌性、组织粘附性、快速 止血 性、可注射的羧甲基壳聚糖凝胶有潜 力 在 生物 医学领域得到广泛应用。
权利要求

1.一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:以羧甲基壳聚糖为原料,在其表面引入邻苯二酚官能团制得羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲;以羧甲基壳聚糖为原料,在其表面引入叠氮基团制得羧甲基壳聚糖‑叠氮;以鱼精蛋白为原料,在其表面引入二苯并环辛炔基团制得鱼精蛋白‑二苯并环辛炔;再进一步利用羧甲基壳聚糖‑叠氮和鱼精蛋白‑二苯并环辛炔的无催化叠氮炔环加成反应合成羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白;最后利用邻苯二酚官能团的化交联作用以及羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛、羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白和氧化透明质酸的席夫反应合成凝胶材料,即所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述氧化透明质酸的制备步骤如下:
在透明质酸溶液中加入高碘酸盐,透明质酸与高碘酸盐的质量比为1:0.25‑0.5,室温避光反应8‑24h,乙二醇淬灭后经去离子透析真空冻干得到氧化透明质酸。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛的制备步骤如下:在氮气保护的条件下,在羧甲基壳聚糖水溶液中加入3,4‑二羟基苯甲醛‑乙醇溶液,羧甲基壳聚糖与3,4‑二羟基苯甲醛的质量比为1:1.25‑1.75,加热至50‑60℃,反应1‑3小时,经无水乙醇沉淀和真空干燥,即可得到羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述羧甲基壳聚糖‑叠氮的制备步骤如下:将羧甲基壳聚糖溶于去离子水,加入叠氮‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应12‑24小时,叠氮‑聚乙二醇‑活性酯与羧甲基壳聚糖的质量比为1:25‑50,经去离子水透析后真空冻干得到羧甲基壳聚糖‑叠氮。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白的制备步骤如下:将鱼精蛋白溶于PBS缓冲溶液,加入二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应12‑24小时,二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯与鱼精蛋白的质量比为1:20‑40;反应12‑24小时后,加入羧甲基壳聚糖‑叠氮,室温下反应12‑24小时,羧甲基壳聚糖‑叠氮与鱼精蛋白‑二苯并环辛炔的质量比为1:0.5‑1,经去离子水透析后真空冻干得到羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,制得氧化透明质酸和羧甲基壳聚糖‑
3,4‑二羟基苯甲醛后,进一步的操作步骤如下:分别取氧化透明质酸、羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛和羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白溶于去离子水,按照氧化透明质酸、羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛与羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白质量比10:2.5:1,将三者的溶液充分混匀,在室温下交联1‑3分钟制得所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶。
7.根据权利要求1‑6任一项所述的制备方法,其特征在于,所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶的制备方法包括以下步骤:
(1)配制透明质酸溶液,加入高碘酸盐,避光反应8‑24h;乙二醇淬灭后,透析,冻干制得氧化透明质酸;
(2)配制羧甲基壳聚糖溶液,然后加入3,4‑二羟基苯甲醛‑乙醇溶液,加热至50‑60℃,在氮气保护的条件下反应1‑3小时,在无水乙醇溶液中沉淀得到羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛;
(3)配制羧甲基壳聚糖溶液,然后加入叠氮‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应12‑24小时,透析后冻干制得羧甲基壳聚糖‑叠氮;
(4)将鱼精蛋白溶于PBS溶液,然后加入二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应
12‑24h;接着加入步骤(3)中制得的羧甲基壳聚糖‑叠氮,室温下反应12‑24小时,透析后冻干制得羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋;
(5)将制得的氧化透明质酸、羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛与羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白溶解于去离子水,将三者的溶液在模具中混合均匀,室温1‑3分钟后交联形成所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述的二苯环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯为二苯并环辛炔‑四聚乙二醇‑活性酯,二苯并环辛炔‑五聚乙二醇‑活性酯或是二苯并环辛炔‑十二聚乙二醇‑活性酯的至少一种;
所述的高碘酸盐为高碘酸钠或高碘酸
所述的羧甲基壳聚糖分子量为40万‑100万,脱乙酰度为≥80%。
9.一种由权利要求1‑8任一项所述方法制备得到的长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶。
10.权利要求9所述长效抗菌粘附止血可注射羧甲基壳聚糖凝胶在制备冻干海绵或水凝胶中的应用。

说明书全文

一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶及其制备方法与应用

技术领域

[0001] 本发明属于医用敷料领域,具体涉及一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶及其制备方法与应用。

背景技术

[0002] 作为人体一种重要的保护器官,皮肤在阻挡外部有害物质入侵以及维持体内生理环境稳定等方面发挥着不可替代的作用。皮肤一旦受损,未经保护的组织就会出现渗血的情况,并增加了伤口感染的险。如果缺乏适当的治疗,不仅会延长伤口恢复的周期,而且还可能会因为细菌感染导致截肢,甚至死亡等严重后果。虽然传统伤口敷料具有使用便捷、价格低廉、便于生产等优势,但它们在调节伤口湿度,提供长期抗菌性能和促进伤口组织再生等方面的效果不及凝胶伤口敷料。近年来,各种多功能伤口敷料被相继开发,但现有的皮肤伤口敷料缺乏黏附性、止血性和长期抗菌性,导致潜在的细菌感染,从而使伤口愈合受阻甚至使伤口状况恶化。因此急需研制出一种合适的创伤敷料,使其同时具有长效抗菌性、快速止血性以及强组织粘附性促进创口愈合。
[0003] 羧甲基壳聚糖(CMC)是壳聚糖羧甲基化的产物,不仅具有良好的水溶性,而且表现出了优异的生物学特性,如良好的生物相容性、可生物降解性和一定的抗菌活性。作为一种水溶性壳聚糖衍生物,其应用范围更广,在创面修复、药物递送和组织工程等生物医学领域均受到了广泛的关注和深入的研究。但单一组分的羧甲基壳聚糖材料在止血性、组织粘附性和长期抗菌性等方面的不足限制了CMC在生物医学领域中的应用。科研人员通常会对CMC进行化学改性,以达到改善CMC的理化性质的目,例如,(1)王胜,杨黎明,陈捷,等.温度及pH敏感性聚乙烯醇/羧甲基壳聚糖水凝胶的制备与性能研究[J].化学世界,2006,47(3):149‑152.DOI:10.3969/j.issn.0367‑6358.2006.03.007。(2)[1]徐咏梅,周伟,殷磊,等.巯基化羧甲基壳聚糖微凝胶的制备及其生物黏附性能[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,
13(29):4.DOI:10.3969/j.issn.1673‑8225.2009.29.009.(3)CN110483662A一种羧甲基壳聚糖交联凝胶。
[0004] 但是,现有技术中改性后的羧甲基壳聚糖水凝胶的抗菌性一般,大多不具备长效抗菌性。

发明内容

[0005] 为解决现有技术的缺点和不足之处,本发明提供一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶的制备方法。该方法通过在羧甲基壳聚糖材料上分别接枝邻苯二酚和鱼精蛋白以提高其组织粘附性、止血性和抗菌性,接着通过与化透明质酸发生席夫反应进一步提高其机械性能。
[0006] 本发明的另一目的在于提供一种由上述方法制得的羧甲基壳聚糖凝胶,其具有长期抗菌性、良好组织粘附性、促凝血性、快速止血性。
[0007] 本发明的再一目的在于提供上述羧甲基壳聚糖凝胶的应用。
[0008] 本发明目的通过以下技术方案实现:
[0009] 一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶的制备方法,包括以下步骤:以羧甲基壳聚糖为原料,在其表面引入邻苯二酚官能团制得羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲;以羧甲基壳聚糖为原料,在其表面引入叠氮基团制得羧甲基壳聚糖‑叠氮;以鱼精蛋白为原料,在其表面引入二苯并环辛炔基团制得鱼精蛋白‑二苯并环辛炔;再进一步利用羧甲基壳聚糖‑叠氮和鱼精蛋白‑二苯并环辛炔的无催化叠氮炔环加成(SPAAC)反应合成羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白;最后利用邻苯二酚官能团的氧化交联作用以及羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛、羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白和氧化透明质酸的席夫碱反应合成凝胶材料,即所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶。
[0010] 进一步的,所述氧化透明质酸的制备步骤如下:在透明质酸溶液中加入高碘酸盐,透明质酸与高碘酸盐的质量比为1:0.25‑0.5,室温避光反应8‑24h,乙二醇淬灭后经去离子水透析真空冻干得到氧化透明质酸。
[0011] 进一步的,所述羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛的制备步骤如下:在氮气保护的条件下,在羧甲基壳聚糖水溶液中加入3,4‑二羟基苯甲醛‑乙醇溶液,羧甲基壳聚糖与3,4‑二羟基苯甲醛的质量比为1:1.25‑1.75,加热至50‑60℃,反应1‑3小时,经无水乙醇沉淀、真空干燥,即可得到羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛(DCMC)。
[0012] 进一步的,所述羧甲基壳聚糖‑叠氮的制备步骤如下:将羧甲基壳聚糖溶于去离子水,加入叠氮‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应12‑24小时,叠氮‑聚乙二醇‑活性酯与羧甲基壳聚糖的质量比为1:25‑50,经去离子水透析、真空冻干得到羧甲基壳聚糖‑叠氮。
[0013] 进一步的,所述羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白的制备步骤如下:将鱼精蛋白溶于PBS缓冲溶液,加入二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应12‑24小时,二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯与鱼精蛋白的质量比为1:20‑40;反应12‑24小时后,加入羧甲基壳聚糖‑叠氮,室温下反应12‑24小时,羧甲基壳聚糖‑叠氮与鱼精蛋白‑二苯并环辛炔的质量比为1:0.5‑1,经去离子水透析、真空冻干得到羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白(PCMC)。
[0014] 进一步的,制得氧化透明质酸和羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛后,进一步的操作步骤如下:分别取氧化透明质酸、羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛和羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白溶于去离子水,按照氧化透明质酸、羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛与羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白的质量比为10:2.5:1,将三者的溶液充分混匀,在室温下1‑3分钟后形成新的高分子生物医学材料即所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶。
[0015] 进一步的,氧化透明质酸溶于去离子水后获得的溶液浓度为3‑5wt%。
[0016] 进一步的,羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛溶于去离子水后获得的溶液浓度为5‑10wt%。
[0017] 进一步的,羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白溶于去离子水获得的溶液浓度为4wt%。
[0018] 本发明主要通过以下步骤实现:
[0019] (1)配制透明质酸溶液,加入高碘酸盐,避光反应8‑24h;乙二醇淬灭后,透析,冻干制得氧化透明质酸;
[0020] (2)配制羧甲基壳聚糖溶液,然后加入3,4‑二羟基苯甲醛‑乙醇溶液,加热至50‑60℃,在氮气保护的条件下反应1‑3小时,在无水乙醇溶液中沉淀得到羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛;
[0021] (3)配制羧甲基壳聚糖溶液,然后加入叠氮‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应12‑24小时,透析、冻干制得羧甲基壳聚糖‑叠氮;
[0022] (4)将鱼精蛋白溶于PBS溶液,然后加入二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯,室温下反应12‑24h;接着加入步骤(3)中制得的羧甲基壳聚糖‑叠氮,室温下反应12‑24小时,透析、冻干制得羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白;
[0023] (5)将上述步骤制得的氧化透明质酸、羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛与羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白溶解于去离子水,将三者的溶液在模具中混合均匀,室温1‑3分钟后交联形成所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶。
[0024] 进一步的,所述的二苯环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯优选为二苯并环辛炔‑四聚乙二醇‑活性酯,二苯并环辛炔‑五聚乙二醇‑活性酯或是二苯并环辛炔‑十二聚乙二醇‑活性酯的至少一种。
[0025] 进一步的,所述的高碘酸盐为高碘酸钠或高碘酸
[0026] 进一步的,所述的羧甲基壳聚糖分子量为40万‑100万,脱乙酰度为≥80%。
[0027] 进一步的,所述3,4‑二羟基苯甲醛‑乙醇溶液浓度为450‑550mg/mL。
[0028] 上述方案制备得到的一种长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶,兼具长期抗菌性、良好的组织粘附性、促凝血性以及快速止血性,并且可注射使用。
[0029] 所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶可以制成冻干海绵、水凝胶等临床使用的敷料或器械。
[0030] 所述长效抗菌的羧甲基壳聚糖凝胶可以作为止血、水性皮肤等用来治疗和预防创伤和疾病
[0031] 本发明相对于现有技术具有以下优点:
[0032] 1)本发明把邻苯二酚结构化合物接枝到羧甲基壳聚糖上,可提高羧甲基壳聚糖材料机械性能、组织粘附性、促凝血性和快速止血性。
[0033] 2)本发明把鱼精蛋白接枝到羧甲基壳聚糖上,可实现羧甲基壳聚糖材料的长效抗菌性、促凝血性和快速止血性。
[0034] 3)本发明提供的具有长效抗菌性、组织粘附性、快速止血性、可注射的羧甲基壳聚糖凝胶有潜作为一种新型生物材料在细胞、组织工程、药物递送等生物医学领域得到广泛应用。附图说明
[0035] 图1是实施例1中的PCMC的合成图。
[0036] 图2是凝胶的长效抗菌性能图,图中E菌抗菌率是指大肠杆菌抗菌率;S菌抗菌率是指金黄色葡萄球菌抗菌率。
[0037] 图3是凝胶的压缩应力‑应变图(A)以及组织粘附性能图(B)。
[0038] 图4是凝胶的促凝血性能图。
[0039] 图5是凝胶的止血性能图。
[0040] 图2‑5中的改性羧甲基壳聚糖凝胶敷料是指实施例1中制备的DCMC‑OHA‑PCMC凝胶;普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料为对比例1制备的CMC‑OHA凝胶。

具体实施方式

[0041] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。本发明涉及的原料均可从市场上直接购买。对于未特别注明的工艺参数,可参照常规技术进行。
[0042] 实施例中使用的羧甲基壳聚糖分子量为40‑100万,脱乙酰度为≥80%;叠氮‑聚乙二醇‑活性酯的分子量为2000;二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯的分子量为649.69。
[0043] 实施例1:
[0044] (1)氧化透明质酸(OHA)的合成
[0045] 称取1g透明质酸,加入到100mL的去离子水中,制成1wt%透明质酸溶液;向透明质酸溶液中加入0.525g高碘酸钠,常温搅拌下避光反应24小时;然后加入1mL乙二醇,常温搅拌1小时,淬灭未反应的高碘酸钠,最后将最终反应物在在去离子水中透析3天,冻干后得到OHA。
[0046] 将制备的OHA称取400mg溶于10mL去离子水中,制备成4%的OHA溶液,备用。
[0047] (2)羧甲基壳聚糖‑3,4‑二羟基苯甲醛(DCMC)的合成
[0048] 称取1g羧甲基壳聚糖,加入到20mL的去离子水中,制成5wt%羧甲基壳聚糖溶液并置于三颈烧瓶中;称取550mg 3,4‑二羟基苯甲醛加入到1mL的无水乙醇中,搅拌均匀,制得3,4‑二羟基苯甲醛‑乙醇溶液,然后将其加入羧甲基壳聚糖溶液中,在氮气保护、水浴加热至55℃的条件下,反应1小时;反应完成后将反应液加入到无水乙醇溶液中,沉淀得到产物DCMC。
[0049] 称取100mg DCMC溶于1mL去离子水中,制备成10%的DCMC溶液,备用。
[0050] (3)羧甲基壳聚糖‑鱼精蛋白(PCMC)的合成
[0051] 首先,称取500mg羧甲基壳聚糖溶于去离子水中,然后加入10mg叠氮‑聚乙二醇‑活性酯,室温反应24h,透析后冻干制得羧甲基壳聚糖‑叠氮,备用。
[0052] 然后将称好的鱼精蛋白溶于PBS缓冲液配成1wt%的溶液,然后加入二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑活性酯,室温反应24小时后,加入100mg羧甲基壳聚糖‑叠氮,再于室温条件下反应24小时,透析冻干后得到PCMC。
[0053] 制备的PCMC称取40mg溶于1mL去离子水中,制备成4%的PCMC溶液,备用。
[0054] (4)长效抗菌粘附止血可注射羧甲基壳聚糖凝胶敷料的制备
[0055] 首先取0.2mL步骤(1)制备的OHA溶液于玻璃瓶中;然后取0.1mL步骤(2)制备的DCMC溶液和0.1mL步骤(3)中制备的PCMC于反应瓶中,OHA、DCMC和PCMC质量比为10:2.5:1,充分搅拌后,获得DCMC‑OHA‑PCMC凝胶前液。最后通过医用注射器吸取并注射到模具中,室温下1‑3分钟后交联形成即得到本发明所述的具有长效抗菌、组织粘附性、快速止血性、可注射羧甲基壳聚糖水凝胶(DCMC‑OHA‑PCMC凝胶)。
[0056] 对比例1:
[0057] 制备普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料(CMC‑OHA):将200μL浓度为4%的羧甲基壳聚糖溶液与200μL浓度为4%的氧化透明质酸溶液混合均匀,约5min后形成CMC‑OHA凝胶。
[0058] 应用实验1:长期抗菌粘附止血可注射羧甲基壳聚糖凝胶的抗菌性能测试[0059] 将400μL实施例1制备的DCMC‑OHA‑PCMC凝胶样品,和400μL普通羧甲基壳聚糖凝胶TM敷料(对比例1制备)(CMC‑OHA)分别与大肠杆菌( 35320 )和金黄色葡萄球菌(ATCC 
6538P)共培养5天,并且在第1、3、5天利用琼脂平板计数法来评价DCMC‑OHA‑PCMC的长期抗菌性能,结果见图2中的A、B。
[0060] 从图中可看到,与普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料相比,接枝了荷正电的鱼精蛋白的改性羧甲基壳聚糖凝胶敷料能够更好的通过静电相互作用吸附荷负电的细菌,然后使细菌发生破裂,从而达到抗菌的效果。
[0061] 应用实验2:长期抗菌粘附止血可注射羧甲基壳聚糖凝胶的力学性能测试[0062] 将实施例1制备的DCMC‑OHA‑PCMC凝胶样品 (n=3)置于万能试验机上(型号为ELF3220),以2mm/min的压缩速度进行压缩试验,水凝胶压缩量为80%。保存数据做应力‑应变图。备普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料(对比例1制备)按相同的方法进行测试比对。结果见图3中的A图。从图中可看到,与普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料相比,改性羧甲基壳聚糖凝胶敷料具有更加密集的交联网络,因此表现出更优异的结构稳定性
[0063] 应用实验3:长期抗菌粘附止血可注射羧甲基壳聚糖凝胶的组织粘附性能测试[0064] (1)凝胶的组织粘合强度使用搭接剪切测试,以猪皮为基材进行测试。
[0065] (2)将新鲜的猪皮切成长方形(50mm×20mm),并将实施例1中的DCMC‑OHA‑PCMC凝2
胶前溶液转移到皮下脂肪,然后将另一片猪皮放在上面,粘合面积为4cm。
[0066] (3)用500g的砝码压约24小时后,然后用万能试验机在20mm/min的拉伸速率下测量粘合强度。
[0067] 备普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料(对比例1制备)按相同的方法进行测试比对。结果见图3中的B图。
[0068] 从图中可看到,与普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料相比,接枝了邻苯二酚结构的改性羧甲基壳聚糖凝胶敷料与被接触的组织之间存在更丰富的相互作用力,因此表现出更优异的组织粘附效果。
[0069] 应用实验4:长期抗菌粘附止血可注射羧甲基壳聚糖凝胶的促凝血性测试[0070] (1)将200μL实施例1制备的DCMC‑OHA‑PCMC凝胶置于离心管中并在37℃水浴中孵育5分钟。
[0071] (2)加入0.5mL抗凝兔血(上海迈瑞尔化学技术有限公司)和0.1mLCaCl2溶液(0.2mol/L)。每20秒倒置一次,直至血液完全停止流动,记录时间。
[0072] 备普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料(对比例1制备)按相同的方法进行测试比对。结果见图4。从图中可看到,与普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料相比,接枝了荷正电的鱼精蛋白的改性羧甲基壳聚糖凝胶敷料能够更好的通过静电相互作用加速血液中的红细胞聚集,因此表现出更优异的促凝血性能。
[0073] 应用实验5:长效抗菌粘附止血可注射羧甲基壳聚糖凝胶的止血性能测试[0074] (1)使用大鼠(南方医科大学实验动物中心)肝脏出血模型测试凝胶止血性能。
[0075] (2)将大鼠麻醉后,用称量过重量的滤纸放在肝脏下方,并用4mm的活检打孔器打孔,产生出血。
[0076] (3)立即在出血处,注射400μL实施例1中的DCMC‑OHA‑PCMC凝胶,2分钟后称取滤纸的重量,计算出血量。
[0077] 备普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料(对比例1制备)按相同的方法进行测试比对。结果见图5。从图中可看到,与普通羧甲基壳聚糖凝胶敷料相比,接枝了荷正电的鱼精蛋白的改性羧甲基壳聚糖凝胶敷料能够更好的通过静电相互作用使伤口处的红细胞聚集,因此表现出更优异的止血性能。
[0078] 上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
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