一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的制备方法及其应用
| 专利类型 | 发明授权 | 法律事件 | 公开; 实质审查; 授权; |
| 专利有效性 | 有效专利 | 当前状态 | 授权 |
| 申请号 | CN202410388038.4 | 申请日 | 2024-04-01 |
| 公开(公告)号 | CN118666682B | 公开(公告)日 | 2025-02-11 |
| 申请人 | 东莞市秘妍生物科技有限公司; 云南秘之蜜生物科技有限公司; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | 车国娟; 车磊; | 第一发明人 | 车国娟 |
| 权利人 | 东莞市秘妍生物科技有限公司,云南秘之蜜生物科技有限公司 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 东莞市秘妍生物科技有限公司,云南秘之蜜生物科技有限公司 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份：广东省 | 城市 | 当前专利权人所在城市：广东省东莞市 |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：广东省东莞市南城街道宏图路232号2栋508室 | 邮编 | 当前专利权人邮编：523000 |
| 主IPC国际分类 | C07C67/48 | 所有IPC国际分类 | C07C67/48 ; C07C67/56 ; A61P9/12 ; A61P31/02 ; A61P31/04 ; A61P31/10 ; C07C69/21 ; A61K31/22 ; A01N37/02 ; A01P1/00 ; A01P3/00 ; A61K47/02 ; A61K47/12 ; A61K47/36 |
| 专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 2 | 专利文献类型 | B |
| 专利代理机构 | 北京国审领航知识产权代理事务所 | 专利代理人 | 高辉; |
| 摘要 | 本 发明 属于化合物的提取技术领域，具体而言，涉及一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的制备方法及其应用。本发明的方法包括：将干燥荷花玉兰叶样品 粉碎 后过筛，之后用丙 酮 水 回流提取，合并提取液，减压浓缩除去丙酮后得浸提膏；将浸提膏充分分散于无水 乙醇 中并将体系加热，然后边搅拌边加入二甲基甲酰胺的水溶液，加入完毕后保持转速不变继续搅拌，最后冷却至室温后过滤膜，得到澄清料液；然后以所得澄清料液为样品依次进行大孔 树脂 吸附 和HSCCC纯化。所得荷花玉兰醇B纯度可高达99.9％。另外，在研究中发现，荷花玉兰醇具有优异的抑菌作用及降血压作用，为荷花玉兰醇B在消毒制品和降血压制品领域提供新的研究方向。 | ||
| 权利要求 | 1.一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： |
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| 说明书全文 | 一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的制备方法及其应用技术领域[0001] 本发明属于化合物的提取技术领域，具体而言，涉及一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的制备方法及其应用。 背景技术[0002] 荷花玉兰 （Magnolia grandiflora.）为木兰科 （Magnoliaceace）木兰属植物，原产北美洲东南部现作为观赏植物在我国各地大量栽培。已有研究证明荷花玉兰叶的丙酮水 提物中含有多种活性物质，例如12,13‑二乙酰氧基‑桉烷‑4α,6α,11‑三醇、11,13‑去氢台湾 含笑内酯、1β‑羟基‑11βH‑桉烷‑3‑烯‑12,6α‑内酯、荷花玉兰醇 A 和 B等。 [0003] 活性研究结果显示荷花玉兰醇A 和B具有多种活性，尤其是治疗膝骨关节炎。传统分离纯化荷花玉兰醇A 和B的方法需要多次柱色谱层析，步骤繁琐。目前已公开的制备荷花 玉兰醇A 和B的方法包括对样品的回流提取，然后依次采用大孔树脂吸附和HSCCC纯化。由 于仅经乙醇提取后的浸提膏中含有的物质成分复杂，可能会影响后续的树脂吸附和纯化结 果，同时也会在一定程度上造成树脂和纯化仪器中杂质的残留。 发明内容[0005] 本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。 [0006] 本发明的一个方面提供了一种从荷花玉兰叶中提取兰醇B的方法，所述方法包括以下步骤： [0008] S2：将浸提膏充分分散于无水乙醇中并将体系温度加热至30 50℃，然后以100~ ~ 150rpm的转速边搅拌边加入体积分数10 20%二甲基甲酰胺的水溶液，加入完毕后保持转速 ~ 不变继续搅拌20 30min，最后冷却至室温后在0.1 0.5Mpa下过60 100 nm滤膜，得到澄清料 ~ ~ ~ 液； [0009] S3：将上述得到的澄清料液调节pH为中性，然后上样于HDP300大孔吸附树脂柱，依次用1 3wt%的食盐水、去离子水洗脱大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为 ~ 50％、70%的乙醇溶液洗脱，收集3.5～4.5BV洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉； [0010] S4：最后采用HSCCC纯化：HSCCC溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇‑水‑正己烷‑乙酸乙酯体系，上相作为固定相，下相作为流动相，进样，收集流份，浓缩干燥后得到兰醇B。 [0011] 优选地，步骤S2中所述浸提膏与无水乙醇的加入量体积比为1:5 10。~ [0012] 优选地，步骤S2中所述二甲基甲酰胺的水溶液的按照与浸提膏的体积比为1 3:1~ 的量加入。 [0013] 优选地，步骤S3中所述上样速率为3～5BV/h，所述食盐水洗脱速率为1 3 BV/h，用~ 量为1 2BV；所述水洗速率为1 4 BV/h；所述乙醇洗脱速率均为0.5 4.5 BV/h，用量均为3 5 ~ ~ ~ ~ BV。 [0014] 优选地，步骤S4中所述HSCCC溶剂体系制备过程为：将乙醇、水、正己烷和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80KHz的频率下超声15min，超声结束后将所得混合溶剂体 系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡4 6h后，将上相和下相分开，取上相作为固 ~ 定相，下相作为流动相。 [0015] 优选地，步骤S4中所述进样操作为： [0016] 将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为10 15mg/mL的进样溶液；~ [0017] 量取20mL进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇B色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇B。 [0018] 优选地，所述上样前还包括平衡分离体系的步骤，具体操作为：将固定相以20~ 30mL/min的流速泵入主机中，待出口流出20 30mL液体后，启动主机正转，调整转速为800 ~ ~ 900r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速3 5mL/min泵入流 ~ 动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡。 [0019] 本发明的另一个方面还提供了一种根据前述的方法得到的荷花玉兰醇B在制备治疗高血压药物中的应用。 [0020] 优选地，所述药物中所述荷花玉兰醇B以组合物形式存在，所述按照重量百分比计，所述组合物的组成及含量为：荷花玉兰醇B 40 60%，可溶性钙盐10 30%，碳酸氢钠10 ~ ~ ~ 15%，脂肪酸5 10%，以及淀粉10 30%。 ~ ~ [0022] 借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点： [0023] 1、本发明以花玉兰叶为原料经过干燥、粉碎胡采用丙酮水回流提取，相比于无水乙醇提取，使用丙酮能够提高对活性物质的提取效率。 [0024] 2、本发明在进行大孔树脂富集前还对浸提膏进行了预处理的过程，包括无水乙醇和二甲基甲酰胺的进一步溶解作用，可将待提取物进行进一步纯化，通过滤膜截留掉颗粒 物及高分子物质，提高溶解物的纯度。 [0025] 3、本发明通过大孔树脂富集和HSCCC纯化，可得到高纯度的荷花玉兰醇B。 [0026] 4、本发明在研究过程中还发现所提取的荷花玉兰醇B具有优异的抗菌作用，较普通醇类抗菌效果好。另外，根据本发明的研究还发现荷花玉兰醇B在一定程度上还具有降低 血压的效果。因此，本发明为开发荷花玉兰醇B在消毒液或者降血压药物中的应用提供了一 种新的研究方向。 具体实施方式[0028] 为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的 实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域 普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护 的范围。 [0029] 如无特殊说明，本发明的大孔吸附树脂柱为HDP300大孔吸附树脂柱，购自于天津允开树脂科技有限公司，按说明书活化、保存；TBE‑300C高速逆流色谱仪(HSCCC)，购自上海 同田生物技术股份有限公司；其他有机试剂如未特殊说明均购自国药集团化学试剂有限公 司。 [0030] 实施例1： [0031] 将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过80目筛，之后按照料液比1:35（kg：L）的量在荷花玉兰叶粉中加入 体积分数为70%丙酮水回流提取3次，每次3h，合并3次提取液，减压浓缩除 去丙酮后得水分含量在15wt%的浸提膏，备用； [0032] 按照体积比1:7.5的量将所得浸提膏充分分散于无水乙醇中并将体系温度加热至40℃，然后以125rpm的转速边搅拌边加入体积分数为15%二甲基甲酰胺的水溶液（按照与浸 提膏的体积比为2:1的量加入），加入完毕后保持转速不变继续搅拌25min，最后冷却至室温 后在0.3Mpa下过80 nm滤膜，得到澄清料液； [0033] 将上述得到的澄清料液调节pH为中性，然后以4BV/h的速率上样于HDP300大孔吸附树脂柱，依次用2wt%的食盐水（脱速率为2 BV/h，用量为1.5BV）、去离子水洗脱（洗脱速率 为2.5 BV/h）大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为50％、70%的乙醇溶液洗脱 （脱速率均为2.5 BV/h，用量均为4 BV），收集4.0BV洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉； [0034] 最后采用HSCCC纯化： [0035] HSCCC溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇‑水‑正己烷‑乙酸乙酯体系，具体制备过程为：将乙醇、水、正己烷和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80KHz的频率下超 声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡5h 后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相； [0036] 将固定相以25mL/min的流速泵入主机中，待出口流出25mL液体后，启动主机正转，调整转速为850r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速4mL/ min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡； [0037] 将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为10mg/mL的进样溶液，量取20mL进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇B色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇 B。所得荷花玉兰醇B纯度为99.9%。 [0038] 实施例2： [0039] 将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过80目筛，之后按照料液比1:40（kg：L）的量在荷花玉兰叶粉中加入体积分数为 70%丙酮水回流提取3次，每次2h，合并3次提取液，减压浓缩除 去丙酮后得水分含量在20wt%的浸提膏，备用； [0040] 按照体积比1:10的量将所得浸提膏充分分散于无水乙醇中并将体系温度加热至50℃，然后以100rpm的转速边搅拌边加入体积分数为20%二甲基甲酰胺的水溶液（按照与浸 提膏的体积比为1:1的量加入），加入完毕后保持转速不变继续搅拌30min，最后冷却至室温 后在0.1Mpa下过100 nm滤膜，得到澄清料液； [0041] 将上述得到的澄清料液调节pH为中性，然后以5BV/h的速率上样于HDP300大孔吸附树脂柱，依次用1wt%的食盐水（脱速率为1 BV/h，用量为2BV）、去离子水洗脱（洗脱速率为 4 BV/h）大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为50％、70%的乙醇溶液洗脱（脱速 率均为0.5 BV/h，用量均为4.5 BV），收集4.5BV洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉； [0042] 最后采用HSCCC纯化： [0043] HSCCC溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇‑水‑正己烷‑乙酸乙酯体系，具体制备过程为：将乙醇、水、正己烷和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80KHz的频率下超 声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡6h 后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相； [0044] 将固定相以30mL/min的流速泵入主机中，待出口流出20mL液体后，启动主机正转，调整转速为900r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速3mL/ min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡； [0045] 将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为15mg/mL的进样溶液，量取20mL进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇B色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇 B。所得荷花玉兰醇B纯度为99.8%。 [0046] 实施例3： [0047] 将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过80目筛，之后按照料液比1:30（kg：L）的量在荷花玉兰叶粉中加入体积分数为 70%丙酮水回流提取3次，每次4h，合并3次提取液，减压浓缩除 去丙酮后得水分含量在10wt%的浸提膏，备用； [0048] 按照体积比1:5的量将所得浸提膏充分分散于无水乙醇中并将体系温度加热至30℃，然后以150rpm的转速边搅拌边加入体积分数为10%二甲基甲酰胺的水溶液（按照与浸提 膏的体积比为3:1的量加入），加入完毕后保持转速不变继续搅拌20min，最后冷却至室温后 在0.5Mpa下过60 nm滤膜，得到澄清料液； [0049] 将上述得到的澄清料液调节pH为中性，然后以3BV/h的速率上样于HDP300大孔吸附树脂柱，依次用3wt%的食盐水（脱速率为3 BV/h，用量为1BV）、去离子水洗脱（洗脱速率为 1 BV/h）大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为50％、70%的乙醇溶液洗脱（脱速 率均为4.5 BV/h，用量均为4.5 BV），收集4.5BV洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉； [0050] 最后采用HSCCC纯化： [0051] HSCCC溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇‑水‑正己烷‑乙酸乙酯体系，具体制备过程为：将乙醇、水、正己烷和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80KHz的频率下超 声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡4h 后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相； [0052] 将固定相以20mL/min的流速泵入主机中，待出口流出30mL液体后，启动主机正转，调整转速为800r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速5mL/ min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡； [0053] 将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为10mg/mL的进样溶液，量取20mL进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇B色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇 B。所得荷花玉兰醇B纯度为99.8%。 [0054] 对比例1： [0055] 将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过80目筛，之后按照料液比1:35（kg：L）的量在荷花玉兰叶粉中加入体积分数为 70%丙酮水回流提取3次，每次3h，合并3次提取液，减压浓缩除 去丙酮后得水分含量在15wt%的浸提膏，备用； [0056] 按照体积比1:7.5的量将所得浸提膏充分分散于无水乙醇中，得到澄清料液； [0057] 将上述得到的澄清料液调节pH为中性，然后以4BV/h的速率上样于HDP300大孔吸附树脂柱，依次用2wt%的食盐水（脱速率为2 BV/h，用量为1.5BV）、去离子水洗脱（洗脱速率 为2.5 BV/h）大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为50％、70%的乙醇溶液洗脱 （脱速率均为2.5 BV/h，用量均为4 BV），收集4.0BV洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉； [0058] 最后采用HSCCC纯化： [0059] HSCCC溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇‑水‑正己烷‑乙酸乙酯体系，具体制备过程为：将乙醇、水、正己烷和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80KHz的频率下超 声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡5h 后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相； [0060] 将固定相以25mL/min的流速泵入主机中，待出口流出25mL液体后，启动主机正转，调整转速为850r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速4mL/ min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡； [0061] 将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为10mg/mL的进样溶液，量取20mL进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇B色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇 B。所得荷花玉兰醇B纯度为97.2% [0062] 对比例2： [0063] 将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过80目筛，之后按照料液比1:35（kg：L）的量在荷花玉兰叶粉中加入 体积分数为70%丙酮水回流提取3次，每次3h，合并3次提取液，减压浓缩除 去丙酮后得水分含量在15wt%的浸提膏，备用； [0064] 按照体积比1:7.5的量将所得浸提膏充分分散于无水乙醇中而后在0.3Mpa下过80 nm滤膜，得到澄清料液； [0065] 将上述得到的澄清料液调节pH为中性，然后以4BV/h的速率上样于HDP300大孔吸附树脂柱，依次用2wt%的食盐水（脱速率为2 BV/h，用量为1.5BV）、去离子水洗脱（洗脱速率 为2.5 BV/h）大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为50％、70%的乙醇溶液洗脱 （脱速率均为2.5 BV/h，用量均为4 BV），收集4.0BV洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉； [0066] 最后采用HSCCC纯化： [0067] HSCCC溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇‑水‑正己烷‑乙酸乙酯体系，具体制备过程为：将乙醇、水、正己烷和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80KHz的频率下超 声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡5h 后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相； [0068] 将固定相以25mL/min的流速泵入主机中，待出口流出25mL液体后，启动主机正转，调整转速为850r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速4mL/ min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡； [0069] 将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为10mg/mL的进样溶液，量取20mL进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇B色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇 B。所得荷花玉兰醇B纯度为98.0%。 [0070] 对比例3： [0071] 将干燥荷花玉兰叶样品粉碎后过80目筛，之后按照料液比1:35（kg：L）的量在荷花玉兰叶粉中加入 体积分数为70%丙酮水回流提取3次，每次3h，合并3次提取液，减压浓缩除 去丙酮后得水分含量在15wt%的浸提膏，备用； [0072] 按照体积比1:7.5的量将所得浸提膏充分分散于无水乙醇中并将体系温度加热至40℃，然后以125rpm的转速边搅拌边加入体积分数为15%二甲基甲酰胺的水溶液（按照与浸 提膏的体积比为2:1的量加入），加入完毕后保持转速不变继续搅拌25min得到澄清料液； [0073] 将上述得到的澄清料液调节pH为中性，然后以4BV/h的速率上样于HDP300大孔吸附树脂柱，依次用2wt%的食盐水（脱速率为2 BV/h，用量为1.5BV）、去离子水洗脱（洗脱速率 为2.5 BV/h）大孔吸附树脂柱至中性，再依次用体积分数分别为50％、70%的乙醇溶液洗脱 （脱速率均为2.5 BV/h，用量均为4 BV），收集4.0BV洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到冻干粉； [0074] 最后采用HSCCC纯化： [0075] HSCCC溶剂体系是体积比为1:4:2:14的乙醇‑水‑正己烷‑乙酸乙酯体系，具体制备过程为：将乙醇、水、正己烷和乙酸乙酯按照1:4:2:14的体积比混合后在80KHz的频率下超 声15min，超声结束后将所得混合溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡5h 后，将上相和下相分开，取上相作为固定相，下相作为流动相； [0076] 将固定相以25mL/min的流速泵入主机中，待出口流出25mL液体后，启动主机正转，调整转速为850r/min，将检测器波长设置为210nm，柱温设置为25℃，同时开始以流速4mL/ min泵入流动相，待流动相流出主机且检测基线稳定后，分离体系达到平衡； [0077] 将所得冻干粉用流动相溶解并配置成浓度为10mg/mL的进样溶液，量取20mL进样溶液注入主机，采集数据，收集荷花玉兰醇B色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到荷花玉兰醇 B。所得荷花玉兰醇B纯度为98.5%。 [0078] 应用例1：荷花玉兰醇B的抑菌效果检测 [0079] 1、样品准备 [0080] 细菌：金黄色葡萄球菌ATCC 33591菌种液，浓度为1×108 cfu/mL；铜绿假单胞菌8 ATCC 27853菌种液，浓度为1×10 cfu/mL；大肠埃希氏菌CGMCC 1.3373菌种液，浓度为1× 8 8 10 cfu/mL；粪肠球菌粪链球菌ATCC 29212菌种液，浓度为1×10 cfu/mL。 [0081] 消毒液： [0082] A D组样品：将实施例1、对比例1 3得到的荷花玉兰醇B用去离子水水稀释至体积~ ~ 百分数为75%溶液；E组样品：体积百分数为75%乙醇溶液；作为对照的F组：去离子水。 [0083] 2、实验方法： [0085] （2）将培养基注皿放凉备用，分别取0.1mL上述四种菌种液接种在平皿表面并涂抹均匀放置备用；总共设置6组（编号为1 6），每组4个培养皿，每个培养皿中涂覆一种菌； ~ [0086] （3）将A组样品浸泡后的滤纸片分别取一片放入1组培养皿贴平，将B组样品浸泡后的滤纸片分别分别取一片放入2组培养皿贴平，将C组样品浸泡后的滤纸片分别分别取一片 放入3组培养皿贴平，将D组样品浸泡后的滤纸片分别取一片放入4组培养皿贴平，将E组样 品浸泡后的滤纸片分别分别取一片放入5组培养皿贴平，将F组样品浸泡后的滤纸片分别分 别取一片放入6组培养皿贴平； [0088] （5）结果判定按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁布的《抗微生物药物敏感性试验执行标准》为标准：直径>20 mm为极敏，15～20 mm为高敏，10～15 mm为中敏，<10 mm 为低敏。 [0089] 3、结果与分析 [0090] 结果见表1。 [0091] 表1 不同样品抑菌圈直径比较（单位mm） [0092] 直径培养皿编号 金黄色葡萄球菌ATCC 33591 铜绿假单胞菌ATCC 27853 大肠埃希氏菌CGMCC 1.3373 粪肠球菌粪链球菌ATCC 292121 26.8 21.6 28.1 17.5 2 20.4 16.8 22.7 14.1 3 21.7 17.4 22.9 15.9 4 23.8 19.9 25.2 16.8 5 22.4 18.7 24.5 15.3 6 ‑‑ ‑‑ ‑‑ ‑‑ [0093] 注： “‑‑”表示未观察到抑菌圈。 [0094] 由表1的结果可以看出，与常规消毒剂乙醇相比，本发明所提取的荷花玉兰醇B对上述四种菌的抑菌效果更明显，这说明本发明的荷花玉兰醇B具有优异的消毒抑菌效果。 [0095] 应用例2：荷花玉兰醇B在降血压领域的应用 [0096] 1、实验样品的准备： [0097] （1）制备组合物I IV：各组合物的原料组成及质量百分含量（%）见表2。~ [0098] 表2 不同组合物的组成及质量百分含量 [0099]原料 组合物I 组合物II 组合物III 组合物IV 荷花玉兰醇B 50% 40% 60% ‑‑ 葡萄糖酸钙 20% 20% 20% 20% 碳酸氢钠 10% 10% 10% 10% 亚油酸 2% 2% 2% 2% 肉豆蔻酸 1% 1% 1% 1% 亚麻油酸 2% 2% 2% 2% 玉米淀粉 余量 余量 余量 余量 [0100] 注： “‑‑”表示未添加；荷花玉兰醇B为根据实施例1的方法制得。 [0101] （2）上述表2的组合物其制备过程为： [0102] 将亚油酸、亚麻油酸和肉豆蔻酸混合并搅拌均匀，然后加热至50℃，依次加入玉米淀粉、碳酸氢钠和葡萄糖酸钙搅拌均匀后，降温至40℃，最后加入荷花玉兰醇B搅拌均匀后 冷却至室温，即得。 [0103] 将得到的组合物I、II、III、IV分别用花生油稀释成0.5wt%的液体制剂。 [0104] 2、实验方法 [0105] 取Nos3小鼠（高血压小鼠）15只（购自上海南方模式生物科技股份有限公司），分为5组，每组3只，分别对应于1 5组，其中，将5组Nos3小鼠于相同条件下喂养7天后测其初始血 ~ 压（收缩压/舒张压）并记录于表3中，然后将第1组Nos3小鼠口服组合物I的液体制剂 （0.5wt%）5mL，第2组Nos3小鼠口服组合物II的液体制剂（0.5wt%） 5 mL，第3组Nos3小鼠口 服组合物III的液体制剂（0.5wt%）5mL，第4组Nos3小鼠口服组合物IV的液体制剂（0.5wt%） 5mL，第五组小鼠口服花生油5mL，继续在相同条件下喂养1、3、7天后测其血压（收缩压/舒张 压），取3个平行值的平均值。 [0106] 3、结果与分析 [0107] 结果见表3。 [0108] 表3 小鼠血压变化 [0109] 编号 初始平均血压（mmHg） 给药1天后平均血压（mmHg） 给药3天后平均血压（mmHg） 给药7天后平均血压（mmHg）1 160/100 155/97 142/90 128/84 2 165/95 161/92 146/86 133/82 3 160/95 152/91 142/86 123/80 4 165/100 164/97 163/96 158/96 5 165/95 164/95 165/94 163/95 [0110] 由表3的结果可以看出，与4组和5组中未添加荷花玉兰醇B的实验相比，添加本发明的组合物能够明显降低小鼠血压。同时，在一定范围内，随着荷花玉兰醇B的含量升高，对 小鼠血压降低效果呈上升趋势。 [0111] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人 员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更 动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的 技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案 的范围内。 |
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