一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备和保存方法 |
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| 申请号 | CN202311698875.9 | 申请日 | 2023-12-11 | 公开(公告)号 | CN117721061A | 公开(公告)日 | 2024-03-19 |
| 申请人 | 深圳天祥质量技术服务有限公司; | 发明人 | 孙山山; 周学雯; 杨承锋; | ||||
| 摘要 | 本 申请 提供了一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备和保存方法，所述制备方法包括：将萎缩芽孢杆菌加入营养肉汤培养基内，并于第一 指定 温度 下培养第一指定时间，得到营养肉汤培养物；将所述营养肉汤培养物接种于 硫酸 锰盐琼脂培养基，并于第二指定温度下培养第二指定时间，得到预制芽孢培养物；将所述预制芽孢培养物于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成；其中，所述第三指定温度低于所述第二指定温度。本 发明 萎缩芽孢杆菌的培养选用硫酸锰盐琼脂，培养基中含有的硫酸锰，能促进芽孢产生；培养时在两次不同温度的条件下诱导芽孢形成，缩短了芽孢产生的时间，提高产芽孢率，最终芽孢产生率达到95％以上。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备方法，其特征在于，包括步骤： |
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| 说明书全文 | 一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备和保存方法技术领域[0001] 本申请涉及芽孢杆菌制备领域，特别是一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备和保存方法。 背景技术[0002] 枯草芽孢杆菌是一种分布广泛的细菌，隶属于芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，菌体呈杆状，无荚膜，周生鞭毛能运动，容易培养保存，不产生环境污染，对动植物及人体均有益无害。在营养条件不佳时，细菌体内产生芽孢休眠体，芽孢含水量低，抗性强，能经受高温，紫外线以及多种化学物质的杀灭。 [0003] 芽孢杆菌科中，萎缩芽孢杆菌ATCC9372为主要的应用菌株之一，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基上呈圆形、光滑、不透明、红棕色或褐色菌落。由于其芽孢的抗干热性能，常用于评估验证各种化学消毒剂、干热、环氧乙烷、微波和过氧化氢等灭菌效果。 [0004] 《消毒技术规范》2002年版中制备芽孢方式：萎缩芽孢杆菌用营养琼脂在(36±1)℃培养5天，然后放置室温约7天，待芽孢产生率达到95％以上时洗脱保存。目前的培养芽孢方法，芽孢生成率较低，周期较长。发明内容 [0005] 鉴于所述问题，提出了本申请以便提供克服所述问题或者至少部分的解决所述问题的一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备和保存方法，包括： [0006] 一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备方法，包括步骤： [0008] 将所述营养肉汤培养物接种于硫酸锰盐琼脂培养基，并于第二指定温度下培养第二指定时间，得到预制芽孢培养物； [0009] 将所述预制芽孢培养物于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成；其中，所述第三指定温度低于所述第二指定温度。 [0010] 进一步地，所述第一指定温度为(36±1)℃，所述第一指定时间为18～24小时。 [0011] 进一步地，所述第二指定温度为(36±1)℃，所述第一指定时间为3天。 [0012] 进一步地，所述第三指定温度为(25±1)℃，所述第三指定时间为3天。 [0015] 进一步地，所述取所述营养肉汤培养物接种于硫酸锰盐琼脂培养基表面，使菌液布满所述硫酸锰盐琼脂培养基的表面，于第二指定温度下培养第二指定时间，再于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成的步骤，包括： [0017] 当芽孢呈绿色、菌体呈红色、芽孢形成率达95％以上时，得到目标芽孢悬液。 [0018] 一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的保存方法，所述萎缩芽孢杆菌芽孢悬液依据上述的制备方法制备得到，包括步骤： [0019] 往芽孢悬液中加入无菌水进行洗菌，将洗下的菌悬液进行振摇并打碎，形成均匀的芽孢悬液； [0020] 水浴加热所述芽孢悬液，并进行过滤和离心处理，弃上清液，加无菌水吹吸使芽孢重新悬浮若干次； [0021] 将洗净的芽孢用无菌10％乙醇溶液重新悬浮，并将芽孢悬液于水浴中静置； [0022] 对制备好的芽孢悬液采用平板计数法测定芽孢浓度，培养基用胰蛋白胨大豆琼脂，于36℃±1℃培养24h～48h； [0024] 进一步地，所述将洗净的芽孢用无菌10％乙醇溶液重新悬浮，并将芽孢悬液于水浴中静置的步骤，包括： [0026] 将重悬后的芽孢悬液放置于80℃的水浴中静置10min。 [0027] 进一步地，所述对制备好的芽孢悬液采用平板计数法测定芽孢浓度，培养基用胰蛋白胨大豆琼脂，于(36℃±1)℃培养24h～48h的步骤，包括： [0028] 在无菌状态下取0.1ml芽孢悬液加入9.9mL无菌生理盐水，并逐步将芽孢悬液稀释‑7至10 ； [0029] 将稀释后的芽孢悬液加入胰蛋白胨大豆琼脂培养基内，于(36±1)℃下培养24h‑48h。 [0030] 本申请具有以下优点： [0031] 在本申请的实施例中，相对于现有技术中的培养芽孢方法的芽孢生成率较低，周期较长的问题，本申请提供了硫酸锰盐琼脂和制定培养条件下提高促进芽孢生长率的解决方案，具体为：将萎缩芽孢杆菌加入营养肉汤培养基内，并于第一指定温度下培养第一指定时间，得到营养肉汤培养物；将所述营养肉汤培养物接种于硫酸锰盐琼脂培养基，并于第二指定温度下培养第二指定时间，得到预制芽孢培养物；将所述预制芽孢培养物于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成；其中，所述第三指定温度低于所述第二指定温度。本发明萎缩芽孢杆菌的培养选用硫酸锰盐琼脂，培养基中含有的硫酸锰，能促进芽孢产生；培养时在两次不同温度的条件下诱导芽孢形成，缩短了芽孢产生的时间，提高产芽孢率，最终芽孢产生率达到95％以上。附图说明 [0032] 为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对本申请的描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。 [0033] 图1是本申请一实施例提供的一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备方法的步骤流程图； [0034] 图2是本申请一实施例提供的一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的保存方法的步骤流程图。 具体实施方式[0035] 为使本申请的所述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本申请作进一步详细的说明。显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。 [0036] 发明人通过分析现有技术发现：目前的培养芽孢方法，选用的固体培养基为营养琼脂或胰蛋白胨大豆琼脂，培养基中缺少诱导芽孢产生的物质和条件，使得芽孢生成率较低，周期较长。 [0037] 需要说明的是，本申请采用萎缩芽孢杆菌ATCC 9372。 [0038] 参照图1，示出了本申请一实施例提供的一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备方法； [0039] 所述制备方法包括： [0040] S110、将萎缩芽孢杆菌加入营养肉汤培养基内，并于第一指定温度下培养第一指定时间，得到营养肉汤培养物； [0041] S120、将所述营养肉汤培养物接种于硫酸锰盐琼脂培养基，并于第二指定温度下培养第二指定时间，得到预制芽孢培养物； [0042] S130、将所述预制芽孢培养物于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成；其中，所述第三指定温度低于所述第二指定温度。 [0043] 在本申请的实施例中，相对于现有技术中的培养芽孢方法的芽孢生成率较低，周期较长的问题，本申请提供了硫酸锰盐琼脂和制定培养条件下提高促进芽孢生长率的解决方案，具体为：将萎缩芽孢杆菌加入营养肉汤培养基内，并于第一指定温度下培养第一指定时间，得到营养肉汤培养物；将所述营养肉汤培养物接种于硫酸锰盐琼脂培养基，并于第二指定温度下培养第二指定时间，得到预制芽孢培养物；将所述预制芽孢培养物于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成；其中，所述第三指定温度低于所述第二指定温度。本发明萎缩芽孢杆菌的培养选用硫酸锰盐琼脂，培养基中含有的硫酸锰，能促进芽孢产生；培养时在两次不同温度的条件下诱导芽孢形成，最终芽孢产生率达到95％以上。 [0044] 下面，将对本示例性实施例中一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备方法作进一步的说明。 [0045] 如所述步骤S110所述，将萎缩芽孢杆菌加入营养肉汤培养基内，并于第一指定温度下培养第一指定时间，得到营养肉汤培养物。 [0046] 在本实施例中，所述第一指定温度为(36±1)℃，所述第一指定时间为18～24小时。 [0047] 作为一种示例，取保藏的萎缩芽孢杆菌，在生物安全柜内操作，并取一粒磁珠一并加入含10mL营养肉汤培养基试管，所述磁珠作为吸附和移动微生物的工具，磁珠加入培养基试管中，轻轻搅拌，使磁珠与培养基充分接触。随后将培养基试管置于温度控制设备中，温度设定为(36±1)℃，培养18h～24h，使磁珠周围形成一群芽孢杆菌，得到所述营养肉汤培养物。 [0048] 所述营养肉汤的成分(g/L)如下表1所示： [0049]蛋白胨 10.0 牛肉浸粉 3.0 氯化钠 5.0 pH值7.2±0.2 25℃ [0050] 表1 [0051] 所述营养肉汤的用法为：称取本品18.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶或试管，121℃高压灭菌15分钟备用。 [0052] 如所述步骤S120所述，将所述营养肉汤培养物接种于硫酸锰盐琼脂培养基，并于第二指定温度下培养第二指定时间，得到预制芽孢培养物。 [0053] 在本实施例中，所述第二指定温度为(36±1)℃，所述第一指定时间为3天。 [0054] 作为一种示例，用吸管吸取2mL～3mL的所述营养肉汤培养物，并将所述营养肉汤培养物接种于罗氏瓶中的硫酸锰盐琼脂培养基，轻轻晃动瓶子，使菌液均匀地布满硫酸锰盐琼脂培养基的表面，有助于微生物更好地附着在培养基上，促进其生长繁殖。 [0055] 然后将罗氏瓶放置在恒温培养箱内，设定温度为(36±1)℃的环境中进行培养，培养时间为3天，这个期间要保持培养箱内的环境清洁，避免外界因素对微生物生长的影响，此时得到预制芽孢培养物。 [0056] 所述硫酸锰盐琼脂培养基的成分(g/L)如下表2所示： [0058] 表2 [0059] 所述硫酸锰盐琼脂培养基用法为：称取本品32.03g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，备用。 [0060] 需要注意的是，实验过程中要保持无菌操作，避免污染和外界因素对实验结果的影响。 [0061] 如所述步骤S130所述，将所述预制芽孢培养物于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成；其中，所述第三指定温度低于所述第二指定温度。 [0062] 在本实施例中，所述第三指定温度为(25±1)℃，所述第三指定时间为3天。 [0063] 作为一种示例，将罗氏瓶从培养箱中取出，调节恒温培养箱的温度为(25±1)℃，随后将所述预制芽孢培养物放置在(25±1)℃的恒温培养箱中继续培养3天。这个阶段是为了让微生物在更适宜的温度下继续生长，观察其生长情况。同时，也可以让琼脂培养基中的营养物质得到更好的释放和利用。本申请的萎缩芽孢杆菌的培养选用硫酸锰盐琼脂，培养基中含有的硫酸锰，能促进芽孢产生；并且，培养时先将罗氏瓶放置于(36±1)℃培养3d，促进芽孢杆菌大量繁殖，然后低温(25±1)℃培养3d，诱导芽孢形成，最终芽孢产生率达到95％以上。 [0064] 在本发明一实施例中，可以结合下列描述进一步说明步骤S130所述“将所述预制芽孢培养物于第三指定温度下培养第三指定时间，诱导目标芽孢形成”的具体过程。 [0065] 如下列步骤所示，用接种环取菌样少许涂于玻片上，用芽孢染色液染色，并在显微镜下进行镜检；当芽孢呈绿色、菌体呈红色、芽孢形成率达95％以上时，得到目标芽孢悬液。 [0066] 作为一种示例，用接种环取菌样少许涂于玻片上，用芽孢染色液进行染色，并在显微镜(油镜)下进行镜检，观察玻片上的情况。当观察到芽孢呈绿色，菌体呈红色，芽孢形成率达95％以上，就可以认为已经完成了芽孢的诱导。 [0067] 所述芽孢染色液用于将芽孢和菌体染成不同的颜色，以区分它们。本发明所使用的芽孢染色液的成分包括： [0068] 溶液A：孔雀石绿水溶液。 [0069] 溶液B：番红溶液。 [0070] 芽孢染色液的使用方法为： [0071] 1.常规涂片，待干燥后，在火焰上过3次固定。 [0072] 2.滴加3‑4溶液A于已固定的涂片上。 [0073] 3.用夹子夹住载玻片在火焰上加热。 [0074] 4.待玻片冷却后，倾去染液，水洗至不再褪色为止。 [0075] 5.用溶液B复染1min，水洗至水为无色。 [0076] 6.待干燥后，至油镜观察。 [0077] 结果判定：芽孢呈绿色，菌体呈红色。 [0078] 注意事项：加热过程不能使之沸腾，并且不能蒸干。 [0079] 参照图2，示出了本申请一实施例提供的一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的保存方法； [0080] 所述保存方法包括： [0081] S210、往芽孢悬液中加入无菌水进行洗菌，将洗下的菌悬液进行振摇并打碎，形成均匀的芽孢悬液； [0082] S220、水浴加热所述芽孢悬液，并进行过滤和离心处理，弃上清液，加无菌水吹吸使芽孢重新悬浮若干次； [0083] S230、将洗净的芽孢用无菌10％乙醇溶液重新悬浮，并将芽孢悬液于水浴中静置； [0084] S240、对制备好的芽孢悬液采用平板计数法测定芽孢浓度，培养基用胰蛋白胨大豆琼脂，于36℃±1℃培养24h～48h [0085] S250、菌落表面粗糙不透明，呈微黄色，且菌落数在(1‑9)×109CFU/mL时，将制备好的芽孢悬液于2～8℃的冰箱中保存。 [0086] 下面，将对本示例性实施例中一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的保存方法作进一步的说明。 [0087] 如所述步骤S210所述，往芽孢悬液中加入无菌水进行洗菌，将洗下的菌悬液进行振摇并打碎，形成均匀的芽孢悬液。 [0088] 作为一种示例，吸取5mL无菌水，将其加入罗氏瓶中。接着使用一次性无菌L棒轻轻推刮下菌苔。这样做的目的是为了确保所有的菌苔都被适当地洗涤下来。吸出第一批洗下的菌悬液，再向瓶内吸加5mL的无菌水，重复洗菌一遍。将第一和第二批洗下的菌悬液集中在有玻璃珠的无菌蓝盖瓶中，振摇1min，使菌悬液充分混合。为了确保所有的菌块都被打碎，再用超声波处理5min，打碎菌块，超声波处理是一种有效的物理方法，能够破坏细胞壁，使菌体释放出来，最后形成均匀的芽孢悬液。 [0089] 如所述步骤S220所述，水浴加热所述芽孢悬液，并进行过滤和离心处理，弃上清液，加无菌水吹吸使芽孢重新悬浮若干次。 [0090] 作为一种示例，将装有菌悬液的蓝盖瓶置45℃水浴24h，使菌自溶断链，分散成单个芽孢。这个过程需要精确控制温度和时间，以确保细菌充分自溶，同时避免芽孢受损。 [0091] 随后用无菌纱布过滤芽孢悬液，清除其中的琼脂凝块。将过滤后的芽孢悬液转移至无菌离心管内，以3000r/min速度离心30min，将芽孢与其它杂质分离。离心后弃去上清液，加入无菌水吹吸使芽孢重新悬浮。接着再进行一次离心和重新悬浮清洗，先后共3遍清洗。 [0092] 如所述步骤S230所述，将洗净的芽孢用无菌10％乙醇溶液重新悬浮，并将芽孢悬液于水浴中静置。 [0093] 在本发明一实施例中，可以结合下列描述进一步说明步骤S230所述“将洗净的芽孢用无菌10％乙醇溶液重新悬浮，并将芽孢悬液于水浴中静置”的具体过程。 [0094] 如下列步骤所述，将洗净的芽孢用无菌10％乙醇溶液重新悬浮，用比浊管观察浊9 度，当芽孢在5麦氏浓度以上，芽孢浓度大于10CFU/mL时，重悬完成； [0095] 如下列步骤所述，将重悬后的芽孢悬液放置于80℃的水浴中静置10min。 [0096] 作为一种示例，将洗净的芽孢用无菌10％乙醇溶液进行重新悬浮，以进一步消毒。在这个过程中，我们用麦氏比浊管来观察浊度，以判断芽孢的浓度，当芽孢浓度大于 9 10CFU/mL，浊度大约在5麦氏浓度以上。为了确保芽孢液中残余的细菌繁殖体被完全杀灭，将芽孢悬液放于80℃水浴中静置10min，杀灭残余的细菌繁殖体，避免芽孢受到热损伤或产生热变异，防止细菌繁殖体的再生和保证芽孢的质量。 [0097] 需要说明的是，10％乙醇溶液的制备过程为：取75％乙醇13ml加入无菌的蓝盖瓶(250ml)中，加入87ml无菌水，制成10％乙醇溶液。 [0098] 所述麦氏比浊管的配方成分如下表3所示： [0099] [0100] [0101] 表3 [0102] 所述麦氏比浊管的使用方法为： [0103] 1、每次使用前，应将浊度标准管置于旋转混匀器上剧烈振动，目测其外观浊度应均匀一致。 [0104] 2、往空白管中加入生理盐水，灭菌后备用。 [0105] 3、无菌操作将待测定纯培养单菌落挑到制备好的生理盐水管中，混悬。 [0106] 4、以比色卡作为背景目测，直到浓度与所要求的标准管的浓度相一致。 [0107] 所述生理盐水的制备方法为：取8.5g氯化钠溶解于1000ml蒸馏水中，制成0.85％生理盐水，分装到15(mm)×150(mm)试管9ml，121℃高压灭菌15分钟备用。 [0108] 如所述步骤S240和S250所述，对制备好的芽孢悬液采用平板计数法测定芽孢浓度，培养基用胰蛋白胨大豆琼脂，于(36℃±1)℃培养24h～48h；菌落表面粗糙不透明，呈微9 黄色，且菌落数在(1‑9)×10CFU/mL时，将制备好的芽孢悬液于2～8℃的冰箱中保存。 [0109] 作为一种示例，对制备好的芽孢悬液计数，菌落特征为：表面粗糙不透明，呈微黄9 色，且菌落数在(1‑9)×10CFU/mL时，将所述芽孢液于2～8℃的冰箱中保存。 [0110] 平板计数：在无菌状态下吸取芽孢液0.1mL，加入装有9.9mL无菌生理盐水的试管‑7中，逐步稀释至10 ，取1mL倾注于TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)培养基，于36±1℃培养24h‑48h，观察菌落特征和对菌落进行计数，菌落表面粗糙不透明，呈微黄色，菌落数在(1‑9)× 9 10CFU/mL为合格。 [0111] 其中，所述胰蛋白胨大豆琼脂培养的成分(g/L)如下表4所示： [0112]胰蛋白胨 15.0 大豆胨 5.0 氯化钠 5.0 琼脂 15.0 pH值7.3±0.2 25℃ [0113] 表4 [0114] 所述胰蛋白胨大豆琼脂培养的用法为：称取本品40.0g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟备用。 [0115] 下面为本发明的实施例： [0116] 实施例1 [0117] 一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备方法，包括： [0118] 1)取保藏的萎缩芽孢杆菌，在生物安全柜内操作，取一粒磁珠加入含10mL营养肉汤培养基试管，置35℃培养18h。 [0119] 2)用吸管吸取2mL的18h营养肉汤培养物，接种于罗氏瓶中硫酸锰盐琼脂培养基表面，晃动瓶子使菌液布满琼脂培养基的表面，将罗氏瓶置于35℃恒温培养箱内，培养3d后，将罗氏瓶放置于24℃培养3d。 [0120] 3)用接种环取菌样少许涂于玻片上，用芽孢染色液染色，并在显微镜(油镜)下进行镜检，芽孢呈绿色，菌体呈红色，芽孢形成率达95％以上。 [0121] 实施例2 [0122] 1)取保藏的萎缩芽孢杆菌，在生物安全柜内操作，取一粒磁珠加入含10mL营养肉汤培养基试管，置36℃培养20h。 [0123] 2)用吸管吸取3mL的20h营养肉汤培养物，接种于罗氏瓶中硫酸锰盐琼脂培养基表面，晃动瓶子使菌液布满琼脂培养基的表面，将罗氏瓶置于36℃恒温培养箱内，培养3d后，将罗氏瓶放置于25℃培养3d。 [0124] 3)用接种环取菌样少许涂于玻片上，用芽孢染色液染色，并在显微镜(油镜)下进行镜检，芽孢呈绿色，菌体呈红色，芽孢形成率达95％以上即可。 [0125] 实施例3 [0126] 1)取保藏的萎缩芽孢杆菌，在生物安全柜内操作，取一粒磁珠加入含10mL营养肉汤培养基试管，置37℃培养24h。 [0127] 2)用吸管吸取3mL的24h营养肉汤培养物，接种于罗氏瓶中硫酸锰盐琼脂培养基表面，晃动瓶子使菌液布满琼脂培养基的表面，将罗氏瓶置于37℃恒温培养箱内，培养3d后，将罗氏瓶放置于26℃培养3d。 [0128] 3)用接种环取菌样少许涂于玻片上，用芽孢染色液染色，并在显微镜(油镜)下进行镜检，芽孢呈绿色，菌体呈红色，芽孢形成率达95％以上即可。 [0129] 对比例 [0130] 萎缩芽孢杆菌用营养琼脂在(36±1)℃培养5天。对比例的芽孢产生率在30％左右，需要放置室温7d或更久，产芽孢率约90％。 [0131] 通过上述可以看出，本发明的萎缩芽孢杆菌的产芽孢率更高，培养时间更短。 [0132] 尽管已描述了本申请实施例的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本申请实施例范围的所有变更和修改。 [0133] 最后，还需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者终端设备中还存在另外的相同要素。 [0134] 以上对本申请所提供的一种萎缩芽孢杆菌芽孢悬液的制备和保存方法，进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本申请的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本申请的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本申请的限制。 |
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