[0001] 本发明总体上涉及益生菌用于控制功能性胃肠道病症的用途。更具体地，本发明涉及凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或者两种菌株的组合用于预防或治疗功能性胃肠道病症，例如功能性消化不良的用途。本发明还公开了凝结芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌或者两种菌株的组合作为胃酸抑制治疗的替代疗法或辅助疗法的用途。

[0002] 功能性胃肠(GI)病症，也称为肠‑脑相互作用的病症，包括许多独立的特发性病症，它们影响GI道的不同部分并涉及内脏超敏反应和运动障碍。功能性GI病症的实例包括功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀、反流超敏反应、肠易激综合征、功能性便秘、功能性腹泻。

[0003] 功能性消化不良是一种功能性GI病症，是指源自胃十二指肠区域的慢性或复发性上消化道(GI)症状，对患者的生活有重大影响(Talley NJ等人2015.Functional Dyspepsia.N Engl J Med 373,1853‑63)。器质性原因包括消化性溃疡、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染、胆道疾病和食道胃癌。根据罗马标准，功能性消化不良(FD)包括具有上腹痛或灼烧感的上腹疼痛综合征(EPS)和具有进餐相关饱腹感或早饱的餐后窘迫综合征(PDS)的诊断类别，其经常规检查(包括上GI内窥镜检查)无法解释(Stanghellini V等人2016.Gastroduodenal Disorders.Gastroenterology 150,1380‑92)。尽管多至15％的普通人群经常发生FD，但潜在的病理生理学仍不清楚，且一线治疗选择是抑酸(Moayyedi PM等人2017.ACG and CAG Clinical Guideline:Management of Dyspepsia.Am J Gastroenterol112,988–1013)。尽管胃食管反流病(GERD)可与FD共存，但梅奥诊所(Mayo Clinic)的一项基于人群的研究得出的结论是FD经常被误诊并被误认为是GERD。最近的Cochrane分析得出结论，与安慰剂和组胺2受体拮抗剂相比，质子泵抑制剂(PPI)在FD中更有效(Pinto‑Sanchez MI等人2017.Proton pump inhibitors for functional 
dyspepsia.Cochrane Database Syst Rev 3,CD011194)。然而，PPI也与潜在的长期不良事件有关，例如GI感染和小肠细菌过度生长的风险增加(Lo W等人，2013.Proton Pump Inhibitor Use and the Risk of Small Intestinal Bacterial Overgrowth:AMeta‑analysis.Clin Gastroenterol Hepatol 11,483‑90)。最近的研究还报告了在PPI治疗期间，胃(Tsuda A等人2015.Influence of Proton‑Pump Inhibitors on the Luminal Microbiota in the Gastrointestinal Tract.Clin Trans Gastroenterol6,e89；Paroni Sterbini F等人2016.Effects of Proton Pump Inhibitors on the Gastric Mucosa‑Associated Microbiota in Dyspeptic Patients.Appl Environ Microbiol 82,6633–
44)和粪便(Jackson MA等人2016.Proton pump inhibitors alter the composition of the gut microbiota.Gut 65,749‑56；Imhann F等人2016.Proton pump inhibitors affect the gut microbiome.Gut 65,740‑8)的微生物组变化，口腔菌群增加，最有可能是由于胃酸屏障的减少和在酸抑制的胃中细菌杀灭不足所致。PPI可能会通过增加链球菌属(Streptococcus)的相对丰度来影响胃微生物组，无论是否存在幽门螺杆菌，这可能有助于具有PPI的FD症状持续存在或导致长期不良反应(Paroni Sterbini F等人2016.Effects of Proton Pump Inhibitors on the Gastric Mucosa‑Associated Microbiota in Dyspeptic Patients.Appl Environ Microbiol 82,6633‑44)。此外，不恰当地使用PPI会给医疗保健预算带来巨大成本(Boghossian TA等人2017.Deprescribing versus 
continuation of chronic proton pump inhibitor use in adults.Cochrane Database Syst Rev 3,CD011969)。

[0004] 一些出版物已经证明FD患者中十二指肠黏膜通透性增加和轻度炎症，这与膳食相关症状相关(Kindt S等人2009.Immune dysfunction in patients with functional gastrointestinal disorders.Neurogastroenterol Motil 21,389‑98；Vanheel H等人2014.Impaired duodenal mucosal integrity and low‑grade inflammation in functional dyspepsia.Gut 63,262‑71；Cirillo C等人2015.Evidence for neuronal and structural changes in submucous ganglia of patients with functional dyspepsia.Am JGastroenterol 110,1205‑15)。屏障缺陷和免疫激活的原因尚不清楚，但候选因素包括心理压力、管腔食物组分、(胆汁)酸和微生物群(Vanheel  H等人
2014.Impaired duodenal mucosal integrity and low‑grade inflammation in functional dyspepsia.Gut 63,262‑71；Vanuytsel T等人2014.Psychological stress and corticotropin‑releasing hormone increase intestinal permeability in humans by a mast cell‑dependent mechanism.Gut63,1293‑9)。一份涉及9名FD患者的初步报告显示，与健康对照相比，FD的十二指肠菌群中链球菌属(Streptococcus)和总细菌载量增加，这与膳食相关症状的严重程度和生活质量有关(Zhong L等人2017.Dyspepsia and the microbiome:time to focus on the small intestine.Gut 66,1168‑9)。

[0005] 很少有临床试验测试益生菌用于治疗功能性消化不良。最近，发现益生菌治疗对餐后消化不良症状有益(Igarashi M等人2017.Alteration in the gastric microbiota and its restoration by probiotics in patients with functional dyspepsia.BMJ open Gastroenterol 4,e000144)，可能是通过菌群的改变，尽管此研究未检验这一假设。

[0006] 芽孢杆菌属(Bacillus)是革兰氏阳性菌株，能够形成对胃酸具有高度抗性的内生孢子(Elshaghabee FMF等人2017.Bacillus As Potential Probiotics:Status,Concerns,and Future Perspectives.Front Microbiol 8,1490)。此外，与传统益生菌补充剂相比，形成孢子的益生菌或“孢子生素”(‘sporebiotics’)在室温是稳定的，并能向小肠输送更多活菌(Cutting SM.2011.Bacillus probiotics.Food Microbiol 28,214‑20)。
显示口服基于孢子的益生菌(印度芽孢杆菌(B.indicus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和克劳氏芽孢杆菌
(B.clausii))的组合减少餐后内毒素血症，这可能是由于肠道通透性增加所致(McFarlin BK等人2017.Oral spore‑based probiotic supplementation was associated with reduced incidence of post‑prandial dietary endotoxin,triglycerides,and disease risk biomarkers.World J Gastrointest Pathophysiol 8,117‑126)。

[0007] 本发明描述了凝结芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌或者两种菌株的组合用于预防和/或治疗功能性GI病症，例如功能性消化不良的用途。此外，本发明还公开了凝结芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌或者两种菌株的组合作为胃酸抑制治疗的替代疗法或辅助疗法的用途。另一方面，本发明公开了凝结芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌孢子或者两种菌株的组合用于预防或治疗选自如下的其他疾病的用途：代谢综合征，如高胆固醇水平和高血糖水平；免疫系统病症，如慢性炎症、过敏和自身免疫性疾病；精神健康病症，如抑郁和焦虑；和泌尿生殖系统病症，例如泌尿生殖道感染。

[0008] 发明概述

[0009] 本发明描述了凝结芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌或者两种菌株的组合用于预防/预防和/或治疗受试者的功能性胃肠道病症的用途。特别是，本发明涉及包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合用于预防和/或治疗受试者的功能性胃肠道(GI)病症。所述功能性GI病症选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀、反流超敏反应、肠易激综合征、功能性便秘、功能性腹泻。在进一步的实施方案中，所述功能性GI病症选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀。因此，在甚至更优选的实施方案中，本发明提供了包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合用于预防和/或治疗受试者的功能性消化不良。

[0010] 另外地，本发明涉及包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合用作受试者，特别是具有功能性胃肠道(GI)病症的受试者的胃酸抑制治疗的替代疗法或辅助疗法。所述功能性GI病症选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀、反流超敏反应、肠易激综合征、功能性便秘、功能性腹泻。在进一步的实施方案中，所述功能性GI病症选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀。因此，在甚至更优选的实施方案中，本发明提供了包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合用作受试者，特别是患有功能性胃肠道(GI)病症的患者的胃酸抑制治疗的替代疗法或辅助疗法。

[0011] 进一步，在本发明的一个方面，用于根据本发明所有实施方案的用途的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合与用于功能性胃肠道病症的标准疗法组合提供。在进一步的方面，所述标准疗法选自抑酸疗法(质子泵抑制剂和组胺2受体拮抗剂)、抗生素、止吐药、促动力药、解痉药、抗抑郁药、抗精神病药、消化酶和植物提取物。

[0012] 在本发明的另一个方面，用于根据本发明的不同实施方案的用途的组合包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子，其中所述枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子是以1:1、1:2或2:1的比例。

[0013] 在进一步的方面，用于根据本发明的用途的组合包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌，其中所述枯草芽孢杆菌孢子源自以保藏号LMG P‑31319保藏于BCCM的菌株MY02。所述菌株已于2019年3月14日以保藏号LMG P‑31319保藏于比利时微生物协调保藏中心(BCCM)(Universiteit Gent,KL Ledeganckstraat 35,9000Gent,Belgium)，并在此进一步还表示为MY02菌株。在另一方面，用于根据本发明的用途的组合包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌，其中所述凝结芽孢杆菌孢子源自以保藏号LMG P‑31318保藏于BCCM的菌株MY01。所述菌株已于2019年3月14日以保藏号LMG P‑31318保藏于比利时微生物协调保藏中心(BCCM)(Universiteit Gent,KL Ledeganckstraat 35,9000Gent,Belgium)，并在此进一步还表示为MY01菌株。

[0014] 在另外进一步的方面，用于根据本发明的用途的组合包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌，其中所述枯草芽孢杆菌孢子源自以保藏号LMG P‑31319保藏于BCCM的菌株MY02并且其中所述凝结芽孢杆菌孢子源自以保藏号LMG P‑31318保藏于BCCM的菌株MY01。

[0015] 在另一方面，本发明提供了用于预防和/或治疗受试者的功能性胃肠道病症的药物组合物。所述药物组合物包含组合，所述组合包含如上所述根据不同实施方案的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子。所述药物组合物进一步包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在另一个实施方案种，根据本发明的药物组合物用于预防和/或治疗功能性胃肠道病症，所述功能性胃肠道病症选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀、反流超敏反应、肠易激综合征、功能性便秘、功能性腹泻；优选地选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀。在甚至更优选的实施方案中，根据本发明的药物组合物用于预防和/或治疗受试者的功能性消化不良。

[0016] 在另一个实施方案中，本发明公开了包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子以及一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物，用作受试者，特别是具有功能性胃肠道(GI)病症的受试者的胃酸抑制治疗的替代疗法或辅助疗法。所述功能性GI病症选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀、反流超敏反应、肠易激综合征、功能性便秘、功能性腹泻。在进一步的实施方案中，所述功能性GI病症选自功能性消化不良、功能性胸痛、功能性胃灼热、打嗝障碍、恶心和呕吐病症、功能性腹部胀气或膨胀。因此，在甚至更优选的实施方案中，本发明提供了包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合的药物组合物，用作受试者，特别是患有功能性胃肠道(GI)病症的患者的胃酸抑制治疗的替代疗法或辅助疗法。

[0017] 进一步，在本发明的一个方面，提供了用于根据本发明所有实施方案的、包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合的药物组合物，与用于功能性胃肠道病症的标准疗法组合。在另一个方面，所述标准疗法选自质子泵抑制剂、抑酸疗法(质子泵抑制剂和组胺2受体拮抗剂)、抗生素、止吐药、促动力药、解痉药、抗抑郁药、抗精神病药、消化酶和植物提取物。

[0018] 用于根据本发明的不同实施方案的药物组合物还可包含一种或多种选自列表的成分，所述列表包括植物提取物，例如姜、朝鲜蓟、蛋白质、维生素、矿物质或消化酶，例如淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、β‑半乳糖苷酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和蛋白酶。

[0019] 在另一个实施方案中，用于根据本发明的不同实施方案的药物组合物是以片剂、胶囊、棒或任何其他可食用形式的形式，包括但不限于功能性食品、果汁、饮料或糖果。

[0020] 在另一个实施方案中，本发明的药物组合物是乳品工业、饮料工业、食品工业或制药工业的产品，或者其是天然产品。

[0021] 在本发明的另一方面，根据本发明的不同实施方案的组合或药物组合物用于预防和/或治疗受试者的功能性胃肠道病症，例如功能性腹泻。所述受试者可以是人受试者，例如成人或婴儿。在另一个实施方案中，所述受试者可以是动物，优选地宠物或生产动物。优选地，受试者是人。

[0022] 本发明还提供了枯草芽孢杆菌菌株。所述枯草芽孢杆菌已于2019年3月14日以保藏号LMG P‑31319保藏于比利时微生物协调保藏中心(BCCM)(Universiteit Gent,KL Ledeganckstraat 35,9000Gent,Belgium)。

[0023] 本发明另外还提供了凝结芽孢杆菌菌株。所述凝结芽孢杆菌菌株已于2019年3月14日以保藏号LMG P‑31318保藏于比利时微生物协调保藏中心(BCCM)(Universiteit Gent,KL Ledeganckstraat 35,9000Gent,Belgium)。

[0024] 在另一方面，本发明描述了枯草芽孢杆菌或凝结芽孢杆菌或者两种菌株的组合用于增强受试者的胃肠道功能的用途。更具体地，公开了包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合用于增强受试者的胃肠道功能的用途。所述受试者是人或哺乳动物；优选地人受试者。在特定的实施方案中，所述受试者是患有功能性胃肠道病症的人；特别是具有功能性消化不良的人。在另一个实施方案中，所述受试者是健康受试者。

[0025] 在另一方面，和在所述用途中，枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子以1:1、1:2或2:1的比例存在于组合中。

[0026] 在又另一个方面中和在所述用途中，枯草芽孢杆菌孢子源自以保藏号LMG P‑31319保藏于BCCM的菌株MY02。在另一方面，和在所述用途中，凝结芽孢杆菌孢子源自以保藏号LMG P‑31318保藏于BCCM的菌株MY01。

[0027] 另一方面公开了组合物用于增强受试者的胃肠道功能的用途，所述组合物包含组合和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，所述组合包含根据任何所述实施方案的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子。所述组合物可进一步包含一种或多种选自植物提取物、蛋白质、维生素、矿物质和消化酶的成分。在另一方面，所述组合物是以片剂、胶囊、小袋、棒或任何其他可食用形式的形式，包括但不限于功能性食品、果汁、饮料或糖果。在又另一个方面，所述组合物是乳品工业、饮料工业或制药工业的产品，或者是天然产品。

[0028] 附图简要说明

[0029] 现在具体参考附图，强调所显示的细节仅作为示例并且仅用于说明性讨论本发明的不同实施方案的目的。它们的出现是为了提供被认为是对本发明的原理和概念方面的最有用和最容易描述的内容。在这方面，没有尝试比基本理解本发明所需的更详细地显示本发明的结构细节。结合附图的描述使本领域技术人员清楚本发明的几种形式可以如何在实践中实施。

[0030] 图1：研究本发明的孢子形成益生菌对消化不良症状和临床参数的影响的研究方案。

[0031] 图2群组1FD(有PPI)在基线(盲法阶段开始前1周)和第13周期间报告的平均LPDS得分。第13周对应于开放标签阶段的第5周，其中所有患者都接受了本发明的孢子生素(每天2粒胶囊)。ES：早饱；PPF：餐后饱腹感；UAB：上腹部腹胀；UAP：上腹部痛；EGB：上腹灼热；NS：恶心；BC：打嗝；HB：胃灼热；FT：疲劳；PPNS：餐后恶心；PPUAP：餐后上腹部痛。

[0032] 图3群组2FD(无PPI)在基线(盲法阶段开始前1周)和第13周期间报告的平均LPDS得分。第13周对应于开放标签阶段的第5周，其中所有患者都接受了本发明的孢子生素(每天2粒胶囊)。ES：早饱；PPF：餐后饱腹感；UAB：上腹部腹胀；UAP：上腹部痛；EGB：上腹灼热；NS：恶心；BC：打嗝；HB：胃灼热；FT：疲劳；PPNS：餐后恶心；PPUAP：餐后上腹部痛。

[0033] 图4群组1FD和2FD在基线和第13周期间的平均LPDS得分总和。第13周对应于开放标签阶段的第5周，其中所有患者都接受了本发明的孢子生素(每天2粒胶囊)。ES：早饱；PPF：餐后饱腹感；UAB：上腹部腹胀；UAP：上腹部痛；EGB：上腹灼热；NS：恶心；BC：打嗝；HB：胃灼热；FT：疲劳；PPNS：餐后恶心；PPUAP：餐后上腹部痛。

[0034] 发明详述

[0035] 本发明基于以下发现：包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的组合特别地可用于治疗和/或预防人的功能性胃肠道病症，例如功能性消化不良，并增强胃肠道功能。特别地，本发明人发现包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合可用于治疗和/或预防人的功能性胃肠疾病，例如功能性消化不良。此外，包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌孢子的组合也可用于增强一般胃肠道功能，特别是刺激胃肠消化和减少吃饭后的餐后饱胀、上腹部腹胀或早饱的一般不适。

[0036] 此外，本发明人已经发现，包含凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌孢子的组合减少上腹痛和灼热、胸痛和胃灼热的症状。这些不适通常通过胃酸抑制疗法(例如质子泵抑制剂)来治疗。因此，在进一步的实施方案中，本发明提供了包含根据本发明不同实施方案的凝结芽孢杆菌孢子和枯草芽孢杆菌孢子的组合或药物组合物，其也用作受试者中；特别是患有功能性胃肠病症的受试者中胃酸抑制治疗例如质子泵抑制剂的替代疗法或辅助疗法。

[0037] 因此，本发明提供了用于治疗功能性胃肠病症的包含凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的组合或药物组合物。此外，还公开了所述组合或所述组合物用于增强健康受试者或患有功能性胃肠病症例如功能性消化不良的受试者的一般胃肠道功能的用途。

[0038] 在本发明的上下文中，在健康受试者以及患有功能性胃肠病症的受试者中观察到胃肠道功能的改善。同样在本发明的上下文中，胃肠道功能的改善是在胃肠道的活性和功能性中观察到的任何改善。特别是，进食后胃肠道功能得到改善，例如表现为吃饭后的餐后饱胀、上腹部腹胀或早饱等一般不适的减少。在一个特定方面，根据本发明的不同实施方案的组合或组合物用于刺激胃肠道消化以减少其他健康受试者的偶发消化症状，如打嗝、上腹部腹胀、上腹部痛或灼热、胃灼热和胃食管反流。

[0039] 细菌通常以细菌孢子的形式或作为营养细菌细胞，或两者的混合物。在本发明的特别优选的情况中，细菌是以可以在胃肠道中萌发的细菌孢子的形式。在另一个实施方案中，它们可能已经被处理成它们不能萌发。例如，孢子可以通过加热进行处理，并且可以例如进行高压灭菌以防止萌发。在另一个实施方案中，细菌是以营养细胞的形式。在一个实施方案中，孢子或营养细胞可以以分离的形式提供。在还另一个实施方案中，微生物材料可以是细菌细胞的提取物。在又另一个实施方案中，微生物材料可以是在培养基中细胞生长期间释放的细菌细胞的代谢物。在另一个其他实施方案中，微生物材料可以是细菌孢子、营养细菌细胞、细菌细胞的提取物或细菌细胞的代谢物的任何组合。在优选的实施方案中，本发明的不同实施方案中的细菌作为能够在胃肠道中萌发的有活力的孢子提供。

[0040] 根据本发明不同实施方案的制剂或药物制剂需要从最终生长培养基中分离细菌枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌或其相应的孢子。技术人员非常了解可用于从生长培养基中分离活细菌或孢子的技术，例如使用离心、过滤、微操作等。对于中期和长期储存，分离的细菌优选地保持在干燥状态，例如使用冷冻干燥或喷雾干燥实现。在本发明的一个实施方案中，用于制造组合物或药物组合物的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌是喷雾干燥的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌，通过使用糖类保护剂，特别是海藻糖作为保护剂来对细菌进行喷雾干燥而获得。适用于喷雾干燥本发明细菌的示例性方法例如可从Sunny‑Roberts和Knorr(Int.Diary J.,19(2009)209‑214)获得。

[0041] 一旦分离，本发明的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌可以通过用于药学配制或制造所选择的产品形式的任何已知的或其他有效的方法制备。制备根据本发明的药物组合物的方法可以在“Remington’sPharmaceutical Sciences”,Mid.Publishing Co.Easton,Pa.USA中找到。

[0042] 例如，根据本发明不同实施方案的组合物或药物组合物可以与常见赋形剂、稀释剂或载体一起配制，并形成口服片剂、胶囊、喷雾剂或口服液(例如悬浮液、溶液、乳液)、粉剂或任何其他合适的剂型。

[0043] 合适的和药学上可接受的赋形剂、稀释剂和载体的非限制性实例可以在“Handbook  of Pharmaceutical Excipients”,Second  Edition,American 
Pharmaceutical Association,1994中找到，并且可以包括：填料和填充剂例如淀粉、糖、甘露醇和硅衍生物；粘合剂例如羧甲基纤维素和其他纤维素衍生物、海藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；保湿剂例如甘油；崩解剂例如碳酸钙和碳酸氢钠；延迟溶解剂例如石蜡；再吸收促进剂例如季铵化合物；表面活性剂例如乙酰醇、单硬脂酸甘油酯，吸附载体例如高岭土和膨润土；载体如丙二醇和乙醇，以及润滑剂如滑石、硬脂酸钙和硬脂酸镁以及固体聚乙二醇。

[0044] 根据本发明的组合、组合物和药物组合物主要适用于成人和婴儿。不过，它们也适用于动物，尤其是宠物和生产动物。这些的例子包括狗、猫、兔、马、牛、猪、山羊、绵羊和家禽。因此，本文使用的术语“受试者”包括人和动物。

[0045] 根据本发明使用的组合物可以以是片剂、胶囊、小袋、棒或任何其他可食用形式的形式，包括但不限于功能性食品、果汁、饮料或糖果。本文使用的术语“可食用形式”旨在涵盖所有消费产品，尤其是食物产品，并且它可以是固体、胶冻或液体。该术语涵盖现成产品和使用益生菌组合物作为单独的起始剂或与常规起始剂或其他益生菌组合生产的产品。食物产品可以例如是乳品工业或饮料工业的产品。可替代地，它可以是天然产品。

[0046] 在本发明中，“乳品”是指具有不同脂肪含量的任何液体或半固体乳或基于乳清的产品。乳品含量可以是例如牛奶、山羊奶、绵羊奶、脱脂奶、全脂奶、由奶粉和乳清组合而未经任何加工的乳品，或加工的产品，如酸奶、凝乳奶、凝乳、酸乳、全脂酸奶、酪乳，其他酸奶产品，如villi、零食棒的填料等。另一重要类包括乳饮料，如乳清饮料、发酵奶、炼乳、婴儿奶、冰淇淋；含奶的食物，如糖果。

[0047] 根据本发明不同实施方案的产品也可以被浓缩并用作成分。此外，产品也可以被干燥并以粉末或冻干物的形式使用。产品也以胶囊、丸剂或片剂应用。产品还可用于制备功能性食品、促进健康和保健的可食用产品或其他相应产品。它也可以在动物饲料中。可能的形式是胶囊、丸剂或片剂，例如，以用于制备此类产品的常规方法制造，例如在制药工业中。对此，食品、食物材料和/或药物产品和动物饲料中的每一种的形式没有特别限制。
实施例

[0048] 下面的实施例示例说明了本发明。实施例不应被解释为以任何方式限制权利要求。

[0049] 实施例1

[0050] I.研究设置

[0051] 试验目的

[0052] 我们的目标是研究与安慰剂相比，孢子形成益生菌对有和没有通过质子泵抑制剂(PPI)的酸抑制的FD患者的消化不良症状和血液、唾液和粪便参数的影响。

[0053] 试验注册

[0054] 该研究得到了伦理委员会研究KU  Leuven(比利时)的批准，并在ClinicalTrial.gov数据库中注册，登录号为NCT04030780。

[0055] 主要终点

[0056] 使用LPDS问卷评估孢子生素(凝结芽孢杆菌MY01和枯草芽孢杆菌MY02孢子的组合)相比安慰剂对临床症状的影响。

[0057] 次要终点

[0058] 孢子生素(凝结芽孢杆菌MY01和枯草芽孢杆菌MY02孢子的组合)相比安慰剂对血液、唾液和粪便参数的影响。探索性终点是所述孢子生素相比安慰剂对胆汁酸呼气试验的影响以评估细菌过度生长(群组1FD)。

[0059] 试验设计和流程图

[0060] 在2个具有开放标签扩展阶段的FD群组中进行了前瞻性随机安慰剂对照研究(图1)：

[0061] ·群组1FD(有PPI)：纳入时(第0周或第‑1周)(1)和有PPI+孢子生素或安慰剂8周后(2)然后有PPI+孢子生素8周(开放标签)的研究程序；

[0062] ·群组2FD(无PPI)：纳入时(第0周或第‑1周)(1)和孢子生素或安慰剂8周后(2)然后孢子生素8周(开放标签)的研究程序。

[0063] 使用了如表1所示的试验流程图。

[0064] 表1.研究的试验流程图

[0065]

[0066] 试验药物

[0067] a)研究药物产品和给药方案

[0068] FD患者(有PPI或无PPI)随机接受孢子形成益生菌或安慰剂的治疗。本研究中的孢子形成益生菌是凝结芽孢杆菌MY01和枯草芽孢杆菌MY02的组合，并且孢子形成益生菌在89
周期间以每天两次1粒胶囊(每粒胶囊2.5x10CFU；比例为50:50)进行施用。安慰剂治疗在类似的胶囊中施用，也每天施用两次。在开放标签扩展阶段，孢子生素再给予8周。

[0069] b)药物管理责任

[0070] 每8周计数剩余的胶囊。

[0071] c)受试者依从性(compliance)

[0072] 每个月通过电子邮件与患者联系以验证依从性。

[0073] d)伴随药物(非IMP)

[0074] 要求患者避免同时服用违禁药物。

[0075] 受试者的选择和退出

[0076] a)纳入标准

[0077] 如果满足以下所有标准，患者就有资格参加研究：

[0078] ‑诊断为FD的>18岁的患者(罗马IV标准)：

[0079] ‑每周1天或多天上腹痛或灼热(EPS)

[0080] ‑餐后饱胀或早饱严重到足以影响每周3天或更多天的正常活动(PDS)

[0081] ‑FD群组1：过去4周期间的每日PPI治疗(任何类型和剂量)

[0082] ‑FD群组2：过去8周期间无PPI治疗

[0083] ‑男性或女性(未怀孕或哺乳并使用避孕措施或绝经后)

[0084] ‑正常排便习惯(每3天排便一次，多至每天3次)

[0085] ‑见证书面知情同意

[0086] ‑使用家用冰箱(‑18至‑20℃)

[0087] ‑能够理解并遵守研究要求

[0088] b)排除标准

[0089] 如果满足以下任何标准，患者被排除在研究之外：

[0090] ‑任何可以解释消化不良症状的活动性躯体或精神病况(允许用于精神病适应症的稳定剂量的单一抗抑郁药，对其他适应症没有限制)

[0091] ‑胃食管反流病(GERD)或肠易激综合征(IBS)的主要症状

[0092] ‑使用免疫抑制剂或抗生素<3个月

[0093] ‑腹部大手术史(阑尾切除术、胆囊切除术或脾切除术除外)

[0094] ‑1型糖尿病、乳糜泻或炎症性肠病的个人病史

[0095] ‑2型糖尿病(包括疗法)

[0096] ‑活动性恶性肿瘤(包括疗法)

[0097] ‑已知的HIV、HBV或HCV感染(包括疗法)

[0098] ‑可磁化物体(例如人工耳蜗、神经刺激器、起搏器、金属碎片或植入物)或幽闭恐惧症(MRI安全标准，仅在群组2FD中附加同意书，其他程序仍可进行)

[0099] ‑大量饮酒(>10单位/周)

[0100] c)参与者的选择

[0101] FD患者在一般和功能性GI病症的门诊或内窥镜检查室招募。广告通过杂志“Metro”发布，并作为海报挂在医院和大学中，也上传到UZ Leuven内联网网站的“oproep Studies”下。邀请回复此广告的患者进行研究访问。如果满足所有纳入标准和非排除标准，也可以从转诊医院(referring hospital)招募患者。

[0102] d)随机化程序

[0103] 孢子生素和安慰剂之间的随机化列表由申办者使用在线随机化工具(http://www.randomization.com/)完成，块大小为5。由申办者保留组群1FD和2FD的随机化列表。研究治疗根据随机化列表编号，并由申办者提供给对随机化代码不知情的研究人员。

[0104] e)受试者退出

[0105] 患者有权随时退出研究，不影响未来的管理和治疗。如果出现以下情况，可能会使患者退出研究：

[0106] ‑患者经历研究者认为对患者健康有害的任何不利事件

[0107] ‑患者违反了研究方案的资格标准

[0108] ‑患者开始使用禁用的伴随药物治疗

[0109] ‑患者不遵守所需的研究程序，例如填写进入或后续(每月)问卷

[0110] 根据执行的程序和填写的问卷，退出研究的患者的数据仍然可以使用。

[0111] f)预计的试验时间

[0112] 研究持续时间为16周。从第一位患者的首次访问到最后一位患者的最后一次访问，整个试验的持续时间预计为24个月。

[0113] LPDS日记

[0114] 在整个研究过程中，受试者每天填写鲁汶餐后窘迫量表(LPDS)。LPDS日记已经过消化不良和胃灼热症状评估的验证(Carbone et al,2016；Aliment Pharmacol Ther 44:989‑1001)。LPDS量表是一种日记工具，由10个上腹部症状(早饱、餐后饱胀、上腹部胀气、上腹部痛、上腹灼热、恶心、打嗝、胃灼热、餐后恶心、餐后上腹痛)和疲劳作为附加生活质量参数。项目的评级表示为语言描述(每个项目五个级别，从不存在到非常严重)伴随着“笑脸”有关LPDS日记的示例，请参见表2。为便于分析，语言描述词被转换为数值如
下：不存在＝0；温和＝1；中等＝2；严重＝3；非常严重＝4。

[0115] 表2.LPDS日记问题的示例。每日问卷由针对上腹部症状的10个问题和针对一般疲劳作为生活质量参数的1个问题组成。

[0116]

[0117] II.结果

[0118] 在此阶段，研究结果仅可用于开放标签阶段，并且可用于有限数量的患者。该研究目前仍在进行中，并且将招募更多患者并进一步分析数据。尽管如此，目前可用的数据已经显示了包含枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的组合对预防和/或治疗功能性胃肠道病症的积极作用。

[0119] 在试验的安慰剂对照、随机盲法阶段开始(第0周)前7天(第‑1周)，患者开始每天在LPDS日记中记录他们的胃肠道症状。LPDS日记在整个临床试验(盲阶段，然后是开放标签阶段)中完成。将第‑1周期间每日记录的平均结果视为每个症状的基线值。在将8周安慰剂或8周孢子生素(凝结芽孢杆菌MY01和枯草芽孢杆菌MY02孢子的组合)作为试验药物施用的盲法阶段完成后，患者纳入开放标签阶段，其中所有患者每天补充孢子生素(凝结芽孢杆菌MY01和枯草芽孢杆菌MY02孢子的组合)。

[0120] 图2显示了第‑1周的基线症状值，与试验第13周(对应于开放标签阶段的第5周)期间由群组1FD(有PPI)的18名患者报告的最近可用的平均LPDS评分相比较。在试验的第13周期间，除餐后恶心(PPNS)外，所有消化不良症状的严重程度在群组1FD(有PPI)中均明显降低。

[0121] 出乎意料的是，胃酸相关症状上腹灼热(EGB)和胃灼热(HB)减少了近50％。由于在群组1FD中，胃酸抑制疗法(质子泵抑制剂PPI)与本发明的孢子生素的施用相组合，由于PPI疗法，预期上腹灼热和胃灼热在该群体中是罕见的症状。然而，即使接受PPI疗法，消化不良患者似乎仍会遭受这些令人烦恼的症状。值得注意的是，本发明的孢子生素的施用进一步减轻了上腹灼热和胃灼热的症状。因此，这些数据表明，当所述孢子生素与PPI组合施用时，凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌孢子生素的组合改善了功能性胃肠道症状。因此，目前的数据提供了足够的证据，表明凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌孢子生素的组合可用于治疗功能性胃肠道病症，以及作为辅助疗法与PPI组合用于消化不良症状。

[0122] 图3显示了第‑1周的基线症状值，与试验第13周(对应于开放标签阶段的第5周)期间群组2FD(非PPI)的16名患者报告的最近可用的平均LPDS评分相比较。在试验的第13周，与研究的起始点(第‑1周)相比，群组2FD(无PPI)中所有消化不良症状的严重程度显著降低。因此，这些数据表明，凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌孢子的组合是对功能性胃肠道病症的有效治疗(无其他类型的疗法)。

[0123] 图4显示了群组1FD和2FD的平均基线症状得分的总和(起始时的第‑1周)，与试验第13周期间报告的平均LPDS评分的总和相比较。所展现的数据表明，凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌孢子的组合明显减少了所有消化不良症状(LPDS日记中的问题)和接受另外抑酸疗法(有PPI)的患者以及没有接受额外治疗(无PPI)的患者中的疲劳症状。