一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液及其制备方法 |
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申请号 | CN202211660944.2 | 申请日 | 2022-12-23 | 公开(公告)号 | CN116286205B | 公开(公告)日 | 2024-04-19 |
申请人 | 浙江鑫科医疗科技有限公司; | 发明人 | 方啟龙; 胡利民; | ||||
摘要 | 本 发明 涉及体外诊断 试剂 技术领域,且公开了一种罗氏Cobase801 化学发光 免疫分析仪配套用三丙胺清洗缓冲液及其制备方法,清洗缓冲液包括如下含量的组分:三正丙胺10~20g/L、3‑二甲基 氨 基‑1‑丙醇0.5~5g/L、缓冲剂20~40g/L、 抗菌剂 0.01~1g/L、 表面活性剂 0.5~5g/L和抑泡剂0.05~0.5g/L;本发明的缓冲液具有维持检测环境的pH值,增强检测结果的 稳定性 ,进一步提高检测的灵敏度、精 密度 ,可以完全替代进口试剂,同时可以大幅度降低临床检验成本,不仅减弱了我国对进口试剂的依赖,同时对于 生物 医药产业的发展具有良好的推进作用。 | ||||||
权利要求 | 1.一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺清洗缓冲液,其特征在于,包括如下含量的组分: |
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说明书全文 | 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液及其制备方法 技术领域背景技术[0002] 化学发光免疫技术是近年来发展和推广最快、最先进的标记免疫测定技术,具有灵敏度高、特异性强、方法稳定快速、检测范围宽和检测项目多等优点,化学发光免疫分析仪已成为临床检验中应用最广泛、发展最活跃的检验设备,正逐渐替代传统的生物检测技术,其原理是利用化学反应释放的自由基能激发中间体,使其从激发态回到基态,当中间体从激发态回到基态时释放等能级的光子,在对光子进行测定而进行的定量分析技术。 [0003] 目前众多化学发光免疫分析仪品牌中,罗氏电化学发光免疫分析仪在国内市场上占有率非常高,其中Cobas e801化学发光免疫分析仪是全球最尖端的电化学发光免疫分析仪,其配套试剂,全部采用原装进口试剂,采购成本高,同时分析仪器的检测池和电极在检测过程中由于试剂和样本中蛋白质的吸附,清洗不彻底,使用寿命短,也影响检测结果精密度和准确度,而更换成本高,从而造成临床检验成本上升,另外原装三丙胺缓冲液含有表面活性剂,使用过程中容易产生大量泡沫,从而影响检测结果的精密度和准确性。 发明内容[0004] (一)解决的技术问题 [0005] 针对现有技术的不足,本发明提供了一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液及其制备方法。 [0006] (二)技术方案 [0007] 为实现上述的目的,本发明提供如下技术方案: [0008] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液,包括如下含量的组分: [0010] 作为进一步的技术方案:包括如下含量的组分: [0011] 三正丙胺10g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇0.5g/L、缓冲剂20g/L、抗菌剂0.01g/L、表面活性剂0.5g/L和抑泡剂0.05g/L。 [0012] 作为进一步的技术方案,包括如下含量的组分: [0013] 包括如下含量的组分: [0014] 三正丙胺14.5g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇1.2g/L、缓冲剂30.9g/L、抗菌剂0.06g/L、表面活性剂1.41g/L和抑泡剂0.15g/L。 [0015] 作为进一步的技术方案,包括如下含量的组分: [0016] 三正丙胺15.5g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇1g/L、缓冲剂32.2g/L、抗菌剂0.06g/L、表面活性剂1.27g/L和抑泡剂0.25g/L。 [0017] 作为进一步的技术方案:包括如下含量的组分: [0018] 三正丙胺16.5g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇1g/L、缓冲剂36.4g/L、抗菌剂0.06g/L、表面活性剂2.16g/L和抑泡剂0.35g/L。 [0019] 作为进一步的技术方案:包括如下含量的组分: [0020] 三正丙胺20g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇5g/L、缓冲剂50g/L、抗菌剂1g/L、表面活性剂5g/L和抑泡剂0.5g/L。 [0022] 作为进一步的技术方案,所述抗菌剂为生物防腐剂。 [0024] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液的制备方法,包括以下步骤: [0025] 将三正丙胺和表面活性剂进行混合搅拌,然后加入3‑二甲基氨基‑1‑丙醇混合搅拌形成均一的乳液,将该乳液与缓冲剂进行混合搅拌得到溶液一; [0026] 将表面活性剂与抑泡剂进行混合后加入溶液一进行混合搅拌,然后将入抗菌剂进行混合搅拌后得到三丙胺缓冲液。 [0027] (三)有益效果 [0028] 与现有技术相比,本发明提供了一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液及其制备方法,具备以下有益效果: [0029] 本发明加入了适量的抑泡剂,防止三丙胺缓冲液和检测试剂在使用过程中产生泡沫而导致仪器报警或检测结果不准确,操作更方便;抗菌剂采用Proclin系列、KroVin系列生物防腐剂,可以降低对人体及环境的危害;采用脂肪醇类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、季铵盐类阳离子表面活性剂与3‑二甲基氨基‑1‑丙醇一起组合提高化学发光免疫分析的发光效率,提高检测的灵敏度和精密度;采用氟表面活性剂和甜菜碱型两性表面活性剂组合,降低测定过程中试剂和样本对检测池、电极表面的残留物吸附,同时吸附物更容易被清洗,延长检测池和电极使用寿命,降低仪器更换配件的使用成本,本发明的缓冲剂具有维持检测环境的pH值,增强检测结果的稳定性,进一步提高检测的灵敏度、精密度,可以完全替代进口试剂,同时可以大幅度降低临床检验成本,不仅减弱了我国对进口试剂的依赖,同时对于生物医药产业的发展具有良好的推进作用。 具体实施方式[0030] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。 [0031] 实施例1 [0032] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液,包括以下组分:三正丙胺、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇、缓冲剂、抗菌剂、表面活性剂和抑泡剂。其中缓冲剂选用磷酸二氢钠和磷酸,所述表面活性剂选自脂肪醇类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、季铵盐类阳离子表面活性剂、甜菜碱类两性表面活性剂、氟碳表面活性剂和聚醚类非离子表面活性剂中的一种或者几种,具体为表面活性剂选用脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO‑9)、十二烷基三甲基氯化铵、月桂酰胺丙基甜菜碱、氟表面活性剂(FS‑3000)和聚醚GP系列;所述抗菌剂选用KroVin系列生物防腐剂。 [0033] 上述组分的含量如下:三正丙胺15.5g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇1.0g/L、磷酸二氢钠31.2g/L、磷酸1.0g/L、抗菌剂0.06g/L、脂肪醇聚氧乙烯醚0.8g/L、十二烷基三甲基氯化铵0.02g/L、月桂酰胺丙基甜菜碱0.32g/L、氟表面活性剂0.05g/L、聚醚GP系列0.08g/L、抑泡剂0.25g/L。 [0034] 本实施例1配比出的缓冲液在25℃±0.1℃时pH值为6.85,电导率为39.80ms/cm,在pH值6.00‑8.00缓冲范围内,1ml样品消耗NaOH的量是0.243mmol。 [0035] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液的制备方法,包括以下步骤: [0036] 将三正丙胺和表面活性剂的一半进行混合搅拌,使其充分混合,然后加入3‑二甲基氨基‑1‑丙醇混合搅拌形成均一的乳液,将该乳液与磷酸二氢钠和磷酸进行混合搅拌得到溶液一; [0037] 将表面活性剂的另一半与抑泡剂进行混合后加入溶液一进行混合搅拌,然后将入抗菌剂进行混合搅拌后得到三丙胺缓冲液。 [0038] 实施例2 [0039] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液,包括以下组分:三正丙胺、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇、缓冲剂、抗菌剂、表面活性剂和抑泡剂。其中缓冲剂选用磷酸二氢钠和磷酸,所述表面活性剂选自脂肪醇类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、季铵盐类阳离子表面活性剂、甜菜碱类两性表面活性剂、氟碳表面活性剂和聚醚类非离子表面活性剂中的一种或者几种,具体为表面活性剂选用脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO‑7)、十二烷基三甲基氯化铵、月桂酰胺丙基甜菜碱、氟表面活性剂(FS‑3000)和聚醚GP系列;所述抗菌剂选用KroVin系列生物防腐剂。 [0040] 上述组分的含量如下:三正丙胺14.5g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇1.2g/L、磷酸二氢钠30.0g/L、磷酸0.9g/L、抗菌剂0.06g/L;AEO‑71.0g/L;十二烷基三甲基氯化铵0.03g/L;月桂酰胺丙基甜菜碱0.25g/L;FS‑30000.05g/L;聚醚GP系列0.08g/L、抑泡剂0.15g/L。 [0041] 本实施例2配比出的缓冲液在25℃±0.1℃时pH值为6.78,电导率为39.24ms/cm,在pH值6.00‑8.00缓冲范围内,1ml样品消耗NaOH的量是0.240mmol。 [0042] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液的制备方法,包括以下步骤: [0043] 将三正丙胺和表面活性剂的一半进行混合搅拌,使其充分混合,然后加入3‑二甲基氨基‑1‑丙醇混合搅拌形成均一的乳液,将该乳液与磷酸二氢钠和磷酸进行混合搅拌得到溶液一; [0044] 将表面活性剂的另一半与抑泡剂进行混合后加入溶液一进行混合搅拌,然后将入抗菌剂进行混合搅拌后得到三丙胺缓冲液。 [0045] 实施例3 [0046] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液,包括以下组分:三正丙胺、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇、缓冲剂、抗菌剂、表面活性剂和抑泡剂。其中缓冲剂选用磷酸二氢钠和磷酸,所述表面活性剂选自脂肪醇类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、季铵盐类阳离子表面活性剂、甜菜碱类两性表面活性剂、氟碳表面活性剂和聚醚类非离子表面活性剂中的一种或者几种,具体为表面活性剂选用脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO‑20)、十二烷基三甲基氯化铵、月桂酰胺丙基甜菜碱、氟表面活性剂(FS‑3000)和聚醚GP系列;所述抗菌剂选用KroVin系列生物防腐剂。 [0047] 上述组分的含量如下:三正丙胺16.5g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇1.0g/L、磷酸二氢钠35.0g/L、磷酸1.4g/L、抗菌剂0.06g/L;AEO‑201.5g/L;十二烷基三甲基氯化铵0.04g/L;月桂酰胺丙基甜菜碱0.45g/L;FS‑30000.07g/L;聚醚GP系列0.1g/L、抑泡剂0.35g/L。 [0048] 本实施例3配比出的缓冲液25℃±0.1℃时pH值为6.76,电导率为40.35ms/cm,在pH值6.00‑8.00缓冲范围内,1ml样品消耗NaOH的量是0.246mmol。 [0049] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液的制备方法,包括以下步骤: [0050] 将三正丙胺和表面活性剂的一半进行混合搅拌,使其充分混合,然后加入3‑二甲基氨基‑1‑丙醇混合搅拌形成均一的乳液,将该乳液与磷酸二氢钠和磷酸进行混合搅拌得到溶液一; [0051] 将表面活性剂的另一半与抑泡剂进行混合后加入溶液一进行混合搅拌,然后将入抗菌剂进行混合搅拌后得到三丙胺缓冲液。 [0052] 实施例4 [0053] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液,包括以下组分:三正丙胺、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇、缓冲剂、抗菌剂、表面活性剂和抑泡剂。其中缓冲剂选用磷酸二氢钾,所述表面活性剂选自脂肪醇类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、季铵盐类阳离子表面活性剂、甜菜碱类两性表面活性剂、氟碳表面活性剂和聚醚类非离子表面活性剂中的一种或者几种,具体为表面活性剂选用聚醚GP系列;所述抗菌剂选用Proclin系列生物防腐剂。 [0054] 上述组分的含量如下:三正丙胺10g/L、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇0.5g/L、磷酸二氢钾20g/L、抗菌剂0.01g/L;聚醚GP系列0.5g/L、抑泡剂0.05g/L。 [0055] 本实施例4配比出的缓冲液25℃±0.1℃时pH值为6.81,电导率为39.21ms/cm,在pH值6.00‑8.00缓冲范围内,1ml样品消耗NaOH的量是0.242mmol。 [0056] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液的制备方法,包括以下步骤: [0057] 将三正丙胺和表面活性剂的一半进行混合搅拌,使其充分混合,然后加入3‑二甲基氨基‑1‑丙醇混合搅拌形成均一的乳液,将该乳液与磷酸二氢钠和磷酸进行混合搅拌得到溶液一; [0058] 将表面活性剂的另一半与抑泡剂进行混合后加入溶液一进行混合搅拌,然后将入抗菌剂进行混合搅拌后得到三丙胺缓冲液。 [0059] 实施例5 [0060] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液,包括以下组分:三正丙胺、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇、缓冲剂、抗菌剂、表面活性剂和抑泡剂。其中缓冲剂选用磷酸,所述表面活性剂选自脂肪醇类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、季铵盐类阳离子表面活性剂、甜菜碱类两性表面活性剂、氟碳表面活性剂和聚醚类非离子表面活性剂中的一种或者几种,具体为表面活性剂选用聚醚GP系列;所述抗菌剂选用Proclin系列生物防腐剂。 [0061] 上述组分的含量如下:三正丙胺20g/L、、3‑二甲基氨基‑1‑丙醇5g/L、磷酸50g/L、抗菌剂1g/L;聚醚GP系列5g/L、抑泡剂0.5g/L。 [0062] 本实施例5配比出的缓冲液25℃±0.1℃时pH值为4.97,电导率为40.13ms/cm,在pH值6.00‑8.00缓冲范围内,1ml样品消耗NaOH的量是0.244mmol。 [0063] 一种罗氏Cobas e801化学发光免疫分析仪配套用三丙胺缓冲液的制备方法,包括以下步骤: [0064] 将三正丙胺和表面活性剂的一半进行混合搅拌,使其充分混合,然后加入3‑二甲基氨基‑1‑丙醇混合搅拌形成均一的乳液,将该乳液与磷酸二氢钠和磷酸进行混合搅拌得到溶液一; [0065] 将表面活性剂的另一半与抑泡剂进行混合后加入溶液一进行混合搅拌,然后将入抗菌剂进行混合搅拌后得到三丙胺缓冲液。 [0066] 通过特定的配比和配制工艺,使配制后的三丙胺缓冲液在使用过程中保持低泡抑泡效果,并降低检测池、电极的表面张力,提高硬表面抗吸附能力以及三丙胺缓冲液的去污能力,延长检测池和电极的使用寿命,检测结果灵敏度更高、精密度更好。 [0067] 本发明与原装罗氏Cobase801三丙胺缓冲液性能测试试验: [0068] 1、准确性验证: [0069] 将实施例1‑3制备的三丙胺缓冲液分别置于罗氏Cobas e801全自动电化学发光免疫分析仪相应位置上进行验证试验,取40位患者血清进行试验,对比与原装配套试剂测定结果的准确性和相关性结果统计如下表: [0070] 表1:实施例1与原装配套试剂AFP、CA19‑9、C15‑3项目准确性对比结果[0071] [0072] [0073] 表2:实施例1与原装配套试剂CEA、FSH、E2项目准确性对比结果 [0074] [0075] [0076] 表3:实施例1与原装配套试剂TESTO、T3、T4项目准确性对比结果 [0077] [0078] [0079] 表4:实施例1与原装试剂检测结果相关性 [0080] 实施例1 线性相关方程 线性相关系数r甲胎蛋白AFP y=1.0195x‑0.0277 0.9984 糖类抗原CA19‑9 y=1.0267x‑0.1519 0.9953 糖类抗原C15‑3 y=0.9999x+0.0462 0.9964 癌胚抗原CEA y=1.0157x‑0.0115 0.9982 促卵泡生成激素FSH y=1.0094x‑0.1551 0.9984 雌二醇E2 y=0.9899x+0.9529 0.9945 睾酮TESTO y=0.9796x+0.4873 0.9938 三碘甲状腺原氨酸T3 y=0.9989x+0.0003 0.9916 总甲状腺素T4 y=0.9699x+2.8756 0.9944 [0081] 结果显示,自配实施例1的三丙胺缓冲液检测结果与原装试剂准确性有良好的相关性,结果准确可靠。 [0082] 表5:实施例2与原装配套试剂AFP、CA19‑9、C15‑3项目准确性对比结果[0083] [0084] [0085] 表6:实施例2与原装配套试剂CEA、FSH、E2项目准确性对比结果 [0086] [0087] [0088] 表7:实施例2与原装配套试剂TESTO、T3、T4项目准确性对比结果 [0089] [0090] [0091] 表8:实施例2与原装试剂检测结果相关性 [0092] [0093] [0094] 结果显示,自配实施例2的三丙胺缓冲液检测结果与原装试剂准确性有良好的相关性,结果准确可靠。 [0095] 表9:实施例3与原装配套试剂AFP、CA19‑9、C15‑3项目准确性对比结果[0096] [0097] [0098] 表10:实施例3与原装配套试剂CEA、FSH、E2项目准确性对比结果 [0099] [0100] [0101] 表11:实施例3与原装配套试剂TESTO、T3、T4项目准确性对比结果[0102] [0103] [0104] 表12:实施例3与原装试剂检测结果相关性 [0105] 实施例3 线性相关方程 线性相关系数R2甲胎蛋白AFP y=1.002x+0.052 0.9967 糖类抗原CA19‑9 y=1.0007x+0.2314 0.9942 糖类抗原C15‑3 y=1.0208x‑0.0798 0.9962 癌胚抗原CEA y=1.0061x+0.0113 0.9985 促卵泡生成激素FSH y=1.0296x‑0.549 0.9973 雌二醇E2 y=1.0118x+0.3065 0.9912 睾酮TESTO y=1.007x+0.1456 0.9918 总甲状腺素T4 y=1.0337x‑0.0246 0.9929 三碘甲状腺原氨酸T3 y=0.9692x+3.6912 0.9934 [0106] 结果显示,自配实施例3的三丙胺缓冲液检测结果与原装试剂准确性有良好的相关性,结果准确可靠。 [0107] 综上,实施例1‑3的三丙胺缓冲液与原装试剂检测结果准确性有良好的相关性,表明自配试剂在改变配方的基础上,仍能在罗氏e801全自动化学发光免疫分析仪上完成测定,并且结果准确、可靠。 [0108] 2、精密度验证: [0109] 取1份正常血清,分别用自配实施例1‑3和原装配套试剂重复测定11次,对比与原装配套试剂测定结果的精密度。 [0110] 表13:实施例1与原装试剂AFP、CA19‑9、C15‑3、CEA精密度对比[0111] [0112] 表14:实施例1与原装试剂FSH、E2、T3、T4精密度对比 [0113] [0114] 表15:实施例2与原装试剂AFP、CA19‑9、C15‑3、CEA精密度对比[0115] [0116] 表16:实施例2与原装试剂FSH、E2、T3、T4精密度对比 [0117] [0118] 表17:实施例3与原装试剂AFP、CA19‑9、C15‑3、CEA精密度对比[0119] [0120] [0121] 表18:实施例3与原装试剂FSH、E2、T3、T4精密度对比 [0122] [0123] 综上,实施例1‑3三丙胺缓冲液比原装试剂检测结果有更好的精密度,表明自配试剂在改变配方的基础上,不仅能保证准确性与原装试剂有良好的相关性外,并且使检测结果更稳定,有更好的精密度。 [0124] 3、防止蛋白质吸附于检测池和电极效果验证实验: [0125] 将仪器5套检测器和电极现用原装试剂和自配实施例浸泡润湿,取出备用,再取同一个混合血清,分别和原装试剂和自配实施例混合,分别浸泡检测器和电极24小时,取出检测器和电极,用纯水冲洗,去除残留的试剂,再用固定量1%的次氯酸钠浸泡1小时,浸泡3次,合并次氯酸钠溶液,用凯氏定氮法测定氮含量,每个试验组重复3次,对比氮含量的区别。结果如下: [0126] 表19:防止蛋白质吸附效果试验结果对比 [0127] [0128] 由上述试验结果可得:自配实施例1‑3残留的蛋白质含量较原装试剂低,都具有较强的防止蛋白质吸附效果,在大量的样本检测后,可以降低样本在检测池和电极表面残留,在降低交叉污染的风险,提高检测结果的准确性、精密度,延长检测池和电极的使用寿命都有一定的作用。 |