一种北沙参茎叶多糖、其制备方法及其在制备防治皮肤干燥症瘙痒的外用产品中的应用

申请号 CN202311846434.9 申请日 2023-12-28 公开(公告)号 CN118027226A 公开(公告)日 2024-05-14
申请人 河北医科大学; 发明人 赵丁; 徐娇; 刘杰; 冯浩然; 陈宇婷; 王嫚; 贾东升;
摘要 本 发明 关于中药多糖技术领域,尤其涉及一种北沙参茎叶多糖、其制备方法及其在制备防治 皮肤 干燥症 瘙痒 的外用产品中的应用。本发明所提供的北沙参茎叶多糖是一种包括三种多糖的混合物,其 水 解 单糖包括半乳糖 醛 酸、L‑鼠李糖、D‑ 葡萄糖 、D‑半乳糖和L‑阿拉伯糖。该北沙参茎叶多糖可以有效改善皮肤干燥症瘙痒所呈现出的皮肤干燥、剥脱和鳞屑等症状以及表皮增厚、 角 质层变薄的状况,可用于制成 预防 和/或 治疗 皮肤干燥症瘙痒的外用产品。
权利要求

6 4
1.一种北沙参茎叶多糖,其特征在于,包括分子量分别为2.258×10 Da、5.383×10Da和157Da的多糖,其解单糖包括半乳糖酸、L‑鼠李糖、D‑葡萄糖、D‑半乳糖和L‑阿拉伯糖,所述半乳糖醛酸、L‑鼠李糖、D‑葡萄糖、D‑半乳糖和L‑阿拉伯糖的摩尔比为(4.86~
5.94):(6.03~7.37):(0.18~0.22):(9.09~11.11):(5.13~6.27)。
2.根据权利要求1所述的北沙参茎叶多糖,其特征在于,所述半乳糖醛酸、L‑鼠李糖、D‑葡萄糖、D‑半乳糖和L‑阿拉伯糖的摩尔比为5.4:6.7:0.2:10.1:5.7。
3.权利要求1或2所述的北沙参茎叶多糖的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
S1、将新鲜北沙参茎叶净制后干燥、粉碎,以水回流提取,将所得提取液离心,取上清液,浓缩所述上清液,得水提浓缩液;
S2、向所述水提浓缩液中加入乙醇至含醇量为75%~85%v/v,静置至少12h后离心,取离心沉淀;
S3、将所述离心沉淀进行干燥,然后以水复溶,加入Sevage试剂,充分混合后离心,取上清液,用截留分子量为3500Da的透析袋透析至少48h,将所得截流液进行干燥,得所述北沙参茎叶多糖。
4.根据权利要求3所述的北沙参茎叶多糖的制备方法,其特征在于,S1中所述粉碎为粉碎至粒径小于等于0.25mm;和/或
S1中所述以水回流提取的提取时间为50~70min;和/或
S1中所述离心的转速为3000~4000rpm,时间为5~10min。
5.根据权利要求3所述的北沙参茎叶多糖的制备方法,其特征在于,S2中所述含醇量为
80%v/v;和/或
S2中所述离心的转速为3000~4000rpm,时间为5~10min。
6.根据权利要求3所述的北沙参茎叶多糖的制备方法,其特征在于,S3中以水复溶时的加水量为所述离心沉淀干燥后质量的4.5~5.5倍;和/或
S3中所述Sevage试剂的加入量为以水复溶时加水量的0.8~1.2倍;和/或
S3中所述离心的转速为3500~4500rpm,时间为10~15min。
7.权利要求1或2所述的北沙参茎叶多糖或按权利要求3~6任一项所述的制备方法制得的北沙参茎叶多糖在制备防治皮肤干燥症瘙痒的外用产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述外用产品为缓解皮肤干燥的产品;和/或
所述外用产品为减少皮肤脱落的产品;和/或
所述外用产品为减少皮肤鳞屑的产品;和/或
所述外用产品为缓解皮肤表皮增厚的产品;和/或
所述外用产品为缓解皮肤质层变薄的产品。
9.根据权利要求7或8所述的应用,其特征在于,所述外用产品包括药品和护肤品。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述外用产品的剂型包括凝胶剂、软膏、乳膏、糊剂、湿敷剂和喷剂。

说明书全文

一种北沙参茎叶多糖、其制备方法及其在制备防治皮肤干燥

瘙痒的外用产品中的应用

技术领域

[0001] 本发明关于中药多糖技术领域,尤其涉及一种北沙参茎叶多糖、其制备方法及其在制备防治皮肤干燥症瘙痒的外用产品中的应用。

背景技术

[0002] 皮肤干燥症瘙痒是一种常见皮肤病,主要由皮肤免疫屏障功能的损坏、皮肤保湿能下降而引起的病变。以皮肤干燥为特点的皮肤病有老年干燥症、特异性皮炎和季节性干燥症等症状。目前,皮肤干燥症瘙痒的发病机制尚不明确,临床上主要采用组胺类药物、糖皮质激素类等外用药物进行治疗。组胺类药物治疗效果并不理想,患者长期应用激素类外用药物会导致皮肤出现色素沉着、皮肤萎缩以及毛细血管扩张等不良反应。而中药在治疗皮肤病过程中表现出了独特优势,如标本兼治、内外兼修、整体观念、毒副作用小等。因此,从天然中药中发现具有皮肤病治疗作用的有效部位/成分可为长效、低毒、不易耐药的产品开发提供可行性方案。

发明内容

[0003] 针对以上技术问题,本发明提供一种北沙参茎叶多糖、其制备方法及其在制备防治皮肤干燥症瘙痒的外用产品中的应用。经实验验证,本发明提供的北沙参茎叶多糖能够显著改善皮肤干燥症瘙痒所呈现出的皮肤干燥、剥脱和鳞屑等症状以及表皮增厚、质层变薄的状况,故可用于制成相应的外用产品。
[0004] 为达到上述发明目的,本发明采用了如下的技术方案:
[0005] 第一方面,本发明提供一种北沙参茎叶多糖,包括分子量分别为2.258×106Da、4
5.383×10 Da和157Da的多糖,其解单糖包括半乳糖酸(GalA)、L‑鼠李糖(Rha)、D‑葡萄糖(Glc)、D‑半乳糖(Gal)和L‑阿拉伯糖(Ara),所述半乳糖醛酸、L‑鼠李糖、D‑葡萄糖、D‑半乳糖和L‑阿拉伯糖的摩尔比为(4.86~5.94):(6.03~7.37):(0.18~0.22):(9.09~
11.11):(5.13~6.27)。
[0006] 北沙参茎叶为伞形科植物珊瑚菜(Glehnia littoralis Fr.Schmidtex Miq)的地上部分。在北沙参根采收后,大量的茎叶作为废弃物被还田或丢弃。本发明通过实验研究发现,具有上述结构特征的北沙参茎叶多糖对于干燥症瘙痒所呈现出的皮肤干燥、剥脱和鳞屑等症状以及表皮增厚、角质层变薄的状况具有显著的改善作用,可用于制成预防或治疗干燥症瘙痒的外用产品。并且,由于北沙参茎叶采集方便、资源丰富,因此,北沙参茎叶多糖上述作用的开发还有助于促进珊瑚菜地上部分的有效利用,在保护环境的同时亦增加了其药用价值。
[0007] 结合第一方面,所述半乳糖醛酸、L‑鼠李糖、D‑葡萄糖、D‑半乳糖和L‑阿拉伯糖的摩尔比为5.4:6.7:0.2:10.1:5.7。
[0008] 第二方面,本发明提供上述北沙参茎叶多糖的制备方法,具体包括以下步骤:
[0009] S1、将新鲜北沙参茎叶净制后干燥、粉碎,以水回流提取,将所得提取液离心,取上清液,浓缩所述上清液,得水提浓缩液;
[0010] S2、向所述水提浓缩液中加入乙醇至含醇量为75%~85%v/v,静置至少12h后离心,取离心沉淀;
[0011] S3、将所述离心沉淀进行干燥,然后以水复溶,加入Sevage试剂,充分混合后离心,取上清液,用截留分子量为3500Da的透析袋透析至少48h,将所得截流液进行干燥,得所述北沙参茎叶多糖。
[0012] 利用该制备方法即可得到上述北沙参茎叶多糖,且该制备方法工艺简单,便于工业化实施。
[0013] 结合第二方面,S1中所述粉碎为粉碎至粒径小于等于0.25mm。
[0014] 结合第二方面,S1中所述以水回流提取的提取时间为50~70min。进一步优选60min。
[0015] 结合第二方面,S1中所述离心的转速为3000~4000rpm,时间为5~10min。进一步优选的离心转速为3500rpm,时间为5min。
[0016] 结合第二方面,S2中所述含醇量为80%v/v。
[0017] 结合第二方面,S2中所述离心的转速为3000~4000rpm,时间为5~10min。进一步优选的离心转速为3500rpm,时间为5min。
[0018] 结合第二方面,S3中以水复溶时的加水量为所述离心沉淀干燥后质量的4.5~5.5倍。进一步优选5倍。
[0019] 结合第二方面,S3中所述Sevage试剂的加入量为以水复溶时加水量的0.8~1.2倍。进一步优选1倍。
[0020] 结合第二方面,S3中所述离心的转速为3500~4500rpm,时间为10~15min。进一步优选的离心转速为4000rpm,时间为10min。
[0021] 第三方面,本发明还提供上述北沙参茎叶多糖或按上述制备方法制得的北沙参茎叶多糖在制备防治皮肤干燥症瘙痒的外用产品中的应用。
[0022] 结合第三方面,所述外用产品为缓解皮肤干燥的产品。
[0023] 结合第三方面,所述外用产品为减少皮肤脱落的产品。
[0024] 结合第三方面,所述外用产品为减少皮肤鳞屑的产品。
[0025] 结合第三方面,所述外用产品为缓解皮肤表皮增厚的产品。
[0026] 结合第三方面,所述外用产品为缓解角皮肤质层变薄的产品。
[0027] 结合第三方面,所述外用产品包括药品和护肤品。
[0028] 优选地,所述外用产品的剂型包括凝胶剂、软膏、乳膏、糊剂、湿敷剂和喷剂等。
[0029] 本发明的有益效果在于:本发明提供了一种具有特定结构特征的北沙参茎叶多糖及制备方法,该北沙参茎叶多糖能够有效改善和缓解干燥症瘙痒所呈现出的皮肤干燥、剥脱和鳞屑等症状以及表皮增厚、角质层变薄的状况,既为皮肤干燥症瘙痒提供了新的活性物质,又为北沙参茎叶提供了新的药用价值。附图说明
[0030] 下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明,附图中:
[0031] 图1是本发明实施例1中北沙参茎叶多糖的HPGPC图;
[0032] 图2是本发明实施例1中北沙参茎叶单糖组成的HPLC图;
[0033] 图3是本发明实施例4中大鼠背部皮肤皮损情况的照片;
[0034] 图4是本发明实施例4中大鼠背部皮肤H&E染色结果(100×;400×);
[0035] 图5是本发明实施例4中大鼠背部皮肤H&E染色表皮厚度统计结果(#与空白组比##较:P<0.01;*与模型组比较:**P<0.01);

具体实施方式

[0036] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
[0037] 皮肤干燥症瘙痒是一种主要由皮肤免疫屏障功能的损坏、皮肤保湿能力下降而引起的病变,临床上主要采用组胺类药物、糖皮质激素类等外用药物进行治疗,前者治疗效果并不理想,后者则会导致多种不良反应。
[0038] 北沙参茎叶为伞形科植物珊瑚菜的地上部分,并非药典收载的药用部位。北沙参茎叶中富含多糖、香豆素、黄等化学成分,研究表明北沙参茎叶有一定的抗化、抗衰老及增强免疫的功能,但其多糖的生物活性研究鲜有报道。
[0039] 本发明实施例提供了一种具有特定结构特征的北沙参茎叶多糖,其包括三种不同分子量的多糖,其水解单糖包括特别比例的半乳糖醛酸、L‑鼠李糖、D‑葡萄糖、D‑半乳糖和L‑阿拉伯糖。该北沙参茎叶多糖能够有效改善干燥症瘙痒所呈现出的皮肤干燥、剥脱和鳞屑等症状以及表皮增厚、角质层变薄的状况,可用于皮肤干燥症瘙痒的预防与治疗。
[0040] 本发明实施例还提供了上述北沙参茎叶多糖的制备方法,具体包括以下步骤:
[0041] S1、将新鲜北沙参茎叶净制后干燥、粉碎,以水回流提取,将所得提取液离心,取上清液,浓缩所述上清液,得水提浓缩液;
[0042] S2、向所述水提浓缩液中加入乙醇至含醇量为75%~85%v/v,静置至少12h后离心,取离心沉淀;
[0043] S3、将所述离心沉淀进行干燥,然后以水复溶,加入Sevage试剂,充分混合后离心,取上清液,用截留分子量为3500Da的透析袋透析至少48h,将所得截流液进行干燥,得所述北沙参茎叶多糖。
[0044] 本发明实施例还提供了上述北沙参茎叶多糖在制备防治皮肤干燥症瘙痒的外用产品中的应用。
[0045] 下面结合具体实施例来进一步说明。
[0046] 以下实施例中所采用的试剂和样品:
[0047] 乙醇(上海泰坦科技股份有限公司),三氯甲烷、正丁醇、丙酮、乙醚(天津市北辰方正试剂厂)、使用Milli‑Q纯化水系统(美国Millipore公司)制备超纯水和纯水;醋酸铵(Ammonium acetate,AA)、1‑苯基‑3‑甲基‑5‑吡唑啉酮(1‑pheny‑3‑methyl‑5‑pyrazolone,PMP)、醋酸铵(Ammonium acetate,AA)、醋酸、三氟乙酸(Trifluoroacetic Acid,TFA)、9种单糖对照品‑甘露糖(D‑Mannose,Man)、鼠李糖(L‑Rhamnose,Rha)、葡萄糖(D‑Glucose,Glc)、半乳糖(D‑Glactose,Gal)、木糖(D‑Xylose,Xyl)、阿拉伯糖(D/L‑Arabinose,Ara)、葡萄糖醛酸(D‑Glucuronic Acid,GlcA)、半乳糖醛酸(D‑Galacturonic acid monohydrate,GalA)、岩藻糖(Fucose,Fuc)购买于上海迈瑞尔化学技术公司;普鲁兰(分子量为642,000Da、334,000Da、494,00Da、22,000Da、6,300Da,日本昭和电工株式会社)、异氟烷(瑞沃德生命科技有限公司);SPF级SD大鼠,鼠龄6~7周,体质量180‑200g;透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)购买于华熙生物科技股份有限公司。
[0048] 以下实施例中所采用的仪器设备:
[0049] N‑1100旋转蒸发仪:东京理化器械株式会社;MIX‑25P迷你混合仪:杭州米欧仪器有限公司;TG16‑WS台式高速离心机:湖南湘仪实验室仪器开发有限公司;‑80℃超低温箱、200μL/1000μL移液器:德国Eppendorf公司;ATS.B5‑2MB冷冻干燥机:北京四环起航科技有限公司;Milli‑Q纯化水系统:美国Millipore公司;3500Da透析袋:美国联合化(Viskase);高效凝胶渗透色谱‑示差折光检测器(High Performance Gel Permeation Chromatography‑Refractive Index Detector,HPGPC‑RID)配备有RID‑20A示差折光检测器、Lab Solutions GPC V5.93处理软件:日本岛津公司(Shimadzu);1260Infinity II高效液相色谱仪(配备有DAD检测器):美国Agilent公司;DHG‑9030A鼓干燥箱:上海一恒科学仪器有限公司;BT125D电子天平,德国赛多利斯公司;UV‑2450紫外‑可见分光光度计:日本岛津公司(Shimadzu);WD‑2102B自动酶标仪:北京六一生物科技有限公司。
[0050] 实施例1
[0051] 本发明实施例提供了一种北沙参茎叶多糖及其制备方法。
[0052] 1、北沙参茎叶多糖的制备
[0053] 将新鲜的北沙参茎叶进行净制(去除泥沙等杂质、洗净、稍晾),干燥后备用。取干燥样品,使用粉碎机粉碎后,过60目筛,过筛率(m过筛后/m粉碎前)>90%,备用。
[0054] 取粉末150g置于5L圆底烧瓶中,加入2L纯化水并充分混合后,置于电热套中进行提取,回流提取1h后,使用离心机对提取液以3500rpm转速离心5min,使用旋转蒸发仪于60℃浓缩,至浓缩液的体积约为750mL。取其中450mL加入无水乙醇至含醇量为80%(v/v,充分搅拌)。将醇沉液静置12h后于3500rpm转速离心5min,所得的沉淀于60℃烘箱充分干燥,干燥后的粗多糖样品加5倍量纯化水复溶,再加入1倍量Sevage试剂(氯仿∶正丁醇=4∶1(v/v)),充分涡旋混合后,以4000rpm转速离心10min,上清液使用截留分子量为3500Da的透析袋透析截留,透析48h后,截留液使用冻干机干燥,得北沙参茎叶多糖。
[0055] 2、多糖含量测定
[0056] 对照品溶液的制备:精密称取无水葡萄糖对照品10mg,加水溶解并定容至100mL容量瓶中,制得100mg/L的母液。
[0057] 绘制标准曲线:分别精密移取葡萄糖溶液母液0μL、100μL、200μL、300μL、400μL、500μL,置于10mL具塞试管中,加水至500μL,加入4%苯酚溶液500μL,迅速加入浓硫酸2mL,摇匀,冷却至室温,于482nm处测定吸光度A,绘制标准曲线和线性回归方程。
[0058] 样品测定:取北沙参茎叶多糖组分样品适量,精密称定,加水溶解并配制成50mg/L的供试品液,取溶液500μL,置于10mL具塞试管中,加水至500μL,加入4%苯酚溶液500μL,迅速加入浓硫酸2mL,摇匀,80℃水浴中放置15min,冷却至室温,于482nm处测定吸光度A。
[0059] 将样品的吸光度值代入标准曲线,计算出北沙参茎叶多糖的糖含量。
[0060] 经检测,本实验所制备的北沙参茎叶多糖的糖含量为90.18%。
[0061] 2、蛋白质含量测定
[0062] 参照检测试剂盒说明书,使用酶标仪测定多糖中蛋白质含量,使用BAS(血清2
白蛋白,BSA)作为标准品(R=0.9973)。简单地说,将20μL(2mg/mL)的稀释多糖样品溶液与
200μL BCA工作液混合,并在37℃下孵育30min。然后使用WD‑2102B微酶标仪在470nm处测量吸光度A,并计算蛋白质含量(%)。
[0063] 经检测,本实验所制备的北沙参茎叶多糖中的蛋白质含量为8.03%,证明所制备的多糖纯度较高,但仍含有少量的蛋白质。
[0064] 3、多糖分子量测定
[0065] 精密称取所制备的北沙参茎叶多糖,将多糖样品加流动相配制成10mg/mL的供试品溶液,14,000rpm离心10min即为供试品溶液。
[0066] 色谱条件:实验设备采用岛津HPGPC‑RID液相色谱仪;色谱柱:TOSOH TSKgel GMPWXL(7.8×300mm,13μm);流动相采用0.1M NaNO3+0.05%NaN3,色谱柱温度:35℃;流速:0.6mL/min;进样量:20μL;等度洗脱。采用配置RID检测器的HPGPC系统,对制备的多糖成分进行数据采集和分析,记录色谱图,如图1所示。使用Lab Solutions GPC V5.93处理软件根据实验结果计算样品的分子量分布情况(采用窄分布的Pullulan多糖标样做标准曲线并进行Mark‑Houwink参数相对校正)。
[0067] 从图1中计算得到:北沙参茎叶总多糖主要由三种多糖构成,其分子量分别为6 4
2.258×10Da(PDI=1.89)、5.383×10Da(PDI=3.61)、157Da(PDI=1.24)。
[0068] 4、基于PMP柱前衍生化法的单糖组成分析
[0069] 水解单糖的制备:精密称取北沙参茎叶多糖粉末1.0mg,溶解在500μL超纯水中,配制成2mg/mL的多糖溶液,并使用离心机以14,000rpm离心10min。取200μL离心后的溶液并加入200μL TFA(4.0M,使TFA终浓度为2.0M)并在110℃烘箱中水解2h。水解后的样品于60℃水浴条件下去除TFA(水浴过程中通过加入甲醇的方式提高蒸干速度)。
[0070] PMP衍生化:干燥后的样品加入200μL超纯水,充分涡旋使其完全溶解,在溶液中加入50μL 0.6M氢氧化钠溶液和100μL 0.5M的PMP甲醇溶液。将反应溶液混合,于70℃烘箱中反应30min。反应结束后通过加入100μL HCl(0.3M)溶液对反应液进行中和。进而使用400μL三氯甲烷萃取未反应完全的PMP。充分混合10s后,小心去除底部的三氯甲烷层,重复上述操作3次,取上层水相即为供试品,用于单糖组成分析。单糖对照品不需要进行完全酸水解,其余操作同样品保持一致。
[0071] 色谱条件:实验设备采用Agilent 1260高效液相色谱仪;色谱柱:ZORBAX SB‑C18(4.6×250mm,3.5μm);流动相采用50mM AA‑水(A)/ACN(B),色谱柱温度:30℃;流速:0.6mL/min;进样量:5μL;20%(B)等度洗脱。
[0072] 所得色谱图如图2所示。
[0073] 各单糖摩尔比的计算:由于单糖的相对分子质量存在差异,因此,简单的峰面积比并不能直接转化为摩尔比,需要进行校正,根据以下公式对HPLC测定的北沙参茎叶多糖中所含单糖的摩尔比(n)进行计算。
[0074]
[0075] 其中:n1~nx分别代表供试品(北沙参茎叶多糖)溶液中各单糖的物质的量;
[0076] A1'~Ax'分别为供试品(北沙参茎叶多糖)溶液中各单糖衍生物的峰面积;
[0077] A1~Ax分别为混合对照品溶液中各单糖衍生物的峰面积;
[0078] m1~mx分别为混合对照品溶液中各单糖对照品的质量;
[0079] M1~Mx分别为混合对照品溶液中各单糖对照品的相对分子质量。
[0080] 通过对峰面积积分,确定北沙参茎叶多糖主要由GalA/Rha/Glc/Gal/Ara等五种单糖组成,且其摩尔比为5.4:6.7:0.2:10.1:5.7。
[0081] 实施例2
[0082] 本发明实施例提供了一种北沙参茎叶多糖及其制备方法。
[0083] 将新鲜的北沙参茎叶进行净制(去除泥沙等杂质、洗净、稍晾),干燥后备用。取干燥样品,使用粉碎机粉碎后,过60目筛,过筛率(m过筛后/m粉碎前)>90%,备用。
[0084] 取粉末150g置于5L圆底烧瓶中,加入2L纯化水并充分混合后,置于电热套中进行提取,回流提取50min后,使用离心机对提取液以3000rpm转速离心10min,使用旋转蒸发仪于60℃浓缩,至浓缩液的体积约为750mL。取其中450mL加入无水乙醇至含醇量为75%(v/v,充分搅拌)。将醇沉液静置15h后于3000rpm转速离心10min,所得的沉淀于60℃烘箱充分干燥,干燥后的粗多糖样品加5.5倍量纯化水复溶,再加入1.2倍量Sevage试剂(氯仿∶正丁醇=4∶1(v/v)),充分涡旋混合后,以3500rpm转速离心15min,上清液使用截留分子量为3500Da的透析袋透析截留,透析48h后,截留液使用冻干机干燥,得北沙参茎叶多糖。
[0085] 实施例3
[0086] 本发明实施例提供了一种北沙参茎叶多糖及其制备方法。
[0087] 将新鲜的北沙参茎叶进行净制(去除泥沙等杂质、洗净、稍晾),干燥后备用。取干燥样品,使用粉碎机粉碎后,过60目筛,过筛率(m过筛后/m粉碎前)>90%,备用。
[0088] 取粉末150g置于5L圆底烧瓶中,加入2L纯化水并充分混合后,置于电热套中进行提取,回流提取70min后,使用离心机对提取液以4000rpm转速离心5min,使用旋转蒸发仪于60℃浓缩,至浓缩液的体积约为750mL。取其中450mL加入无水乙醇至含醇量为85%(v/v,充分搅拌)。将醇沉液静置18h后于4000rpm转速离心5min,所得的沉淀于60℃烘箱充分干燥,干燥后的粗多糖样品加4.5倍量纯化水复溶,再加入0.8倍量Sevage试剂(氯仿∶正丁醇=4∶
1(v/v)),充分涡旋混合后,以4500rpm转速离心10min,上清液使用截留分子量为3500Da的透析袋透析截留,透析48h后,截留液使用冻干机干燥,得北沙参茎叶多糖。
[0089] 实施例4
[0090] 本发明实施例考察了北沙参茎叶多糖对AEW诱导的大鼠皮肤干燥症瘙痒的治疗作用。
[0091] 1)动物饲养
[0092] 取SPF级SD大鼠,雌雄各半,鼠龄6~7周,体质量180~200g。大鼠标准环境饲养,维持室温在24±2℃,湿度55±10%,保持昼夜12h节律,自由饮水、摄食,适应性饲养1周后进行实验。
[0093] 2)实验动物分组及造模给药
[0094] 适应性饲养7天后,将大鼠随机分为空白组、模型组、北沙参茎叶多糖组、阳性对照组(HA组),每组6只,雌雄各半。剃除大鼠背部毛发(面积约为2cm×2cm)。空白组涂抹蒸馏水15s,其他组用浸润了丙酮/乙醚溶液的片均匀涂抹15s,然后四组都用浸泡蒸馏水的棉片于同一部位涂抹30s;待其干燥后,北沙参茎叶多糖组、阳性对照组(HA)分别涂抹北沙参茎叶多糖(20mg/mL)和透明质酸(20mg/mL)水溶液30s;模型组和空白组涂抹蒸馏水。一天2次(9:00和16:00),持续10天。
[0095] 本实验中使用的北沙参茎叶多糖为实施例1制得的北沙参茎叶多糖。
[0096] 3)大鼠皮肤的表观特征观察
[0097] 于1、3、5、7天对大鼠背部实验部位进行拍照,观察各组大鼠背部皮肤的色泽、皮屑脱落程度、粗糙度等外观形态。
[0098] 如图3所示,空白组大鼠背部皮肤光滑,未见皮肤干燥、剥脱和鳞屑,毛发生长正常。与空白组相比较,模型组大鼠背部皮肤干燥,表皮粗糙,可见皮肤剥脱和鳞屑,毛发生长减慢;与模型组比较,茎叶多糖组和阳性对照HA组大鼠皮肤干燥、剥脱和鳞屑等症状明显好转。
[0099] 4)H&E染色
[0100] 于给药后第十天,腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠,并小心剪取各组大鼠背部皮肤置于4%多聚甲醛固定,24h后常规脱水、透明、石蜡包埋。石蜡切片机切成4μm厚的切片,40℃温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃烘箱内烤片。常规H&E染色后,于显微镜下观察进行拍照并用CAM‑MS软件测量其表皮厚度。
[0101] 如图4、图5所示:与空白组比较,模型组皮肤复层鳞状上皮、细胞层数增多、表皮增厚、但角质层变薄;与模型组比较,北沙参茎叶多糖组和HA组皮肤表皮增厚与角质层变薄的状况得到明显改善,且趋于空白组;北沙参茎叶多糖组和阳性对照HA组的作用相差不大。
[0102] 实施例5
[0103] 本发明实施例提供了一种防治皮肤干燥症瘙痒的凝胶剂,活性成分为北沙参茎叶多糖,辅料为皮肤用产品中可接受的凝胶剂辅料。其中北沙参茎叶多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。
[0104] 实施例6
[0105] 本发明实施例提供了一种防治皮肤干燥症瘙痒的软膏,活性成分为北沙参茎叶多糖,辅料为皮肤用产品中可接受的软膏辅料。其中北沙参茎叶多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。
[0106] 实施例7
[0107] 本发明实施例提供了一种防治皮肤干燥症瘙痒的乳膏,活性成分为北沙参茎叶多糖,辅料为皮肤用产品中可接受的乳膏辅料。其中北沙参茎叶多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。
[0108] 实施例8
[0109] 本发明实施例提供了一种防治皮肤干燥症瘙痒的糊剂,活性成分为北沙参茎叶多糖,辅料为皮肤用产品中可接受的糊剂辅料。其中北沙参茎叶多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。
[0110] 实施例9
[0111] 本发明实施例提供了一种防治皮肤干燥症瘙痒的湿敷剂,活性成分为北沙参茎叶多糖,辅料为皮肤用产品中可接受的湿敷剂辅料。其中北沙参茎叶多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。
[0112] 实施例10
[0113] 本发明实施例提供了一种防治皮肤干燥症瘙痒的喷剂,活性成分为北沙参茎叶多糖,辅料为皮肤用产品中可接受的喷剂辅料。其中北沙参茎叶多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。
[0114] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
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