一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法 |
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| 申请号 | CN202410173328.7 | 申请日 | 2024-02-07 | 公开(公告)号 | CN118044468A | 公开(公告)日 | 2024-05-17 |
| 申请人 | 广西壮族自治区林业科学研究院; | 发明人 | 邓紫宇; 唐庆兰; 李昌荣; 郭东强; 陈升侃; 卢翠香; 刘媛; 任世奇; 朱慧; 伍琪; 颜宁复; 陈健波; 韦振道; 向旺; 甘春雁; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法，包括无菌芽获得、无菌芽继代增殖培养工序，将经常规无菌芽获得、无菌芽继代增殖培养15‑20天后获得的丛生芽分切至壮苗培养基进行壮苗培养，将壮苗培养获得的芽苗长至3‑4cm时，切取芽苗转入生根培养基Ⅰ，当芽苗根部长出的根状突起长至1.0‑1.5cm后，再将芽苗转接至生根培养基Ⅱ，实现二步生根培养，最后将生根完全、苗高4‑6cm的生根瓶苗洗净培养基并移栽至装有基质的营养杯内并喷施叶面 营养液 。本发明有效提高大花序按组培苗生根率，可达95%以上，移栽成活率提高至90%以上，减少材料损失，可促进大花序桉规模化生产。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法，包括无菌芽获得、无菌芽继代增殖培养工序，其特征在于，还包括壮苗培养、诱导生根培养和移栽步骤，主要步骤如下： |
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| 说明书全文 | 一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法技术领域背景技术[0002] 大花序桉（Eucalyptus cloeziana）属于桃金娘科（Mytaceae）桉树属（Eucalyptus）树种，原产于澳大利亚，1972年引种至我国。该树种干形通直，生长迅速，木材密度大，可用于高级家具和实木地板，是华南地区造林首选的速生锯材树种。 [0003] 国内大花序桉林分以实生苗造林为主，种子依赖进口，又因大花序桉无性繁殖存在生根困难的瓶颈，严重制约了大花序桉的规模化推广。专利号为201510976324.3的发明专利公开了一种大花序桉的组培快繁方法，该方法采用大花序桉优良家系的优良单株，伐倒后促生萌芽，利用萌芽作为外植体，以带有潜伏芽的茎段离体诱导无菌芽，无菌芽的获得，不经过愈伤组织成苗途径，而直接由外植体茎段萌生侧芽或不定芽，经过无菌芽进行继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。该方法大花序桉生根率虽在72.8%以上，但移栽成活率仅70%左右，损失近30%的生根瓶苗。因此有效提高组培生根率和移栽成活率是大花序桉规模化生产的关键。 发明内容[0004] 本发明为了克服上述不足，提供了一种组培生根率高，移栽成活率高的促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法。 [0005] 为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法，包括无菌芽获得、无菌芽继代增殖培养工序，还包括壮苗培养、诱导生根培养和移栽步骤，主要步骤如下： （1）壮苗培养：将经常规无菌芽获得、无菌芽继代增殖培养15‑20天后获得的丛生芽分切至壮苗培养基，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度2000‑2500lux条件下培养15‑ 20天； （2）生根培养：当步骤（1）壮苗培养获得的芽苗长至3‑4cm时，切取芽苗转入生根培养基Ⅰ，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度1500‑2000lux条件下培养10‑15天后，当芽苗根部长出的根状突起长至1.0‑1.5cm后，再将芽苗转接至生根培养基Ⅱ，在温度25±2℃，光照强度2000‑5000lux的自然光条件下培养10‑15天； 移栽：将生根完全、苗高4‑6cm的生根瓶苗洗净培养基，并移栽至装有基质的营养杯内，淋透基质，覆盖薄膜保湿并盖上遮荫网，5天后喷洒甲基托布津防病害，10天后打开遮荫网和薄膜，每10天喷洒叶面营养液一次。 [0006] 优选的，以上步骤（1）所述的壮苗培养基的原料组分为：1L壮苗培养基含1900mgKNO3、1650mgNH4NO3、170mgKH2PO4、440mgCaCl2、370mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、 10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、 2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg 6 FeSO4、100mg肌醇、0.1‑0.3mgN 苄基腺嘌呤(6‑BA)、0.3‑0.5mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8 6。 ~ [0007] 优选的，以上步骤（2）所述的生根培养基Ⅰ的原料组分为：1L生根培养基Ⅰ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、185mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、 10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、 2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.5‑0.8mg吲哚丁酸(IBA)、0.1‑0.2mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8 6。 ~ [0008] 优选的，以上步骤（2）所述的生根培养基Ⅱ的原料组分为：1L生根培养基Ⅱ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、185mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、 10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、 2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.1‑0.3mg吲哚丁酸(IBA)、0.1‑0.2mg萘乙酸(NAA)、0.5‑0. 8mg多效唑(PP333)、30g蔗糖、5g琼脂粉、5g活性炭、PH值5.8 6。 ~ [0009] 优选的，以上步骤（3）所述的基质为椰糠:泥炭土:黄心土按重量比为6:2:2混合均匀制成；所述的叶面营养液的原料组分为：1L叶面营养液含190mgKNO3、165mgNH4NO3、17mgKH2PO4、44mgCaCl2、37mgMgSO4、0.62mgH3BO3、2.5mgMnSO4、1mgZnSO4、0.025 mgNa2MoO4、 0.0025mgCuSO4、0.0025mgCoCl2、0.083mgKI。 [0010] 优选的，以上步骤（3）在将基质装填于营养杯之前用用体积浓度为0.5 %高猛酸钾溶液对营养杯进行消毒。 [0011] 本发明具有的优点及有益效果如下：1、本发明针对大花序桉的生理特性，在常规的无菌芽继代培养后直接生根培养的步骤之间增加壮苗培养，有利于接下来的大花序桉生根培养，有助于提高其生根率；使用低浓度6‑BA并适当提高NAA浓度有利于芽苗生长的更高更壮，有助于保证后续移栽成活率。 [0012] 2、本发明针对大花序桉直接生根效率较低，瓶内生根率仅50%左右的现状，采用二步生根培养法，两次连续的生根培养采用不同的培养基和置于不同的培养环境，利用生根培养基Ⅰ诱导根源基生成，尤其是使用高浓度的IBA配合低浓度的NAA使大花序桉根状突起，即发育不完全根的诱导率达98%以上；生根培养基Ⅱ添加PP333，降低IBA浓度，添加活性炭并在自然光条件下培养有利于大花序桉根状突起生长并发育完全，最终瓶内生根率达95%以上。 [0013] 3、本发明在移栽时选用特定的基质和叶面营养液，保证了大花序按生长、成活所需的营养全面、足量，有效提高大花序按组培苗移栽成活率，移栽成活率可达90%以上，减少材料损失，可促进大花序桉规模化生产。附图说明 [0014] 图1为经本发明壮苗培养后的芽苗实景图。 [0015] 图2为经本发明生根培养基Ⅰ培养后的芽苗实景图。 [0016] 图3为经本发明生根培养基Ⅱ培养后的芽苗实景图。 [0017] 图4为经本发明移栽后的大花序桉苗木实景图。 具体实施方式[0018] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。实施例 [0019] 一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法，首先按CN105454047A公开的一种大花序桉的组培快繁方法实施例2步骤1‑8获取继代增殖后的无菌芽，将经过继代增殖培养15‑20天后获得的丛生芽分切至壮苗培养基，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度2000‑ 2500lux条件下培养15‑20天；其中壮苗培养基的原料组分为：1L壮苗培养基含1900mgKNO3、 1650mgNH4NO3、170mgKH2PO4、440mgCaCl2、370mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、 0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、 5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、 6 100mg肌醇、0.1‑0.3mgN苄基腺嘌呤(6‑BA)、0.3‑0.5mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8 6。 ~ [0020] 当壮苗培养获得的芽苗长至3‑4cm时，切取芽苗转入生根培养基Ⅰ，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度1500‑2000lux条件下培养，其中1L生根培养基Ⅰ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、185mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.5‑0.8mg吲哚丁酸(IBA)、0.1‑0.2mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8 6。培~ 养10‑15天后，当芽苗根部长出的根状突起长至1.0‑1.5cm后，再将芽苗转接至生根培养基Ⅱ，在温度25±2℃，光照强度2000‑5000lux的自然光条件下培养10‑15天；其中生根培养基Ⅱ的原料组分为：1L生根培养基Ⅱ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、 185mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、 0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、 0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.1‑0.3mg吲哚丁酸(IBA)、0.1‑0.2mg萘乙酸(NAA)、0.5‑0. 8mg多效唑(PP333)、30g蔗糖、5g琼脂粉、5g活性炭、PH值5.8 6。 ~ [0021] 将生根完全、苗高4‑6cm的生根瓶苗洗净培养基，并移栽至装有基质的营养杯内，淋透基质，覆盖薄膜保湿并盖上遮荫网，5天后喷洒甲基托布津防病害，10天后打开遮荫网和薄膜，每10天喷洒叶面营养液一次。其中，所述的基质为椰糠:泥炭土:黄心土按重量比为6:2:2混合均匀制成；所述的叶面营养液的原料组分为：1L叶面营养液含190mgKNO3、 165mgNH4NO3、17mgKH2PO4、44mgCaCl2、37mgMgSO4、0.62mgH3BO3、2.5mgMnSO4、1mgZnSO4、0.025 mgNa2MoO4、0.0025mgCuSO4、0.0025mgCoCl2、0.083mgKI。 实施例 [0022] 一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法，首先按CN105454047A公开的一种大花序桉的组培快繁方法实施例2步骤1‑8获取继代增殖后的无菌芽，将经过继代增殖培养15‑20天后获得的丛生芽分切至壮苗培养基，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度2000‑ 2500lux条件下培养15‑20天；其中壮苗培养基的原料组分为：1L壮苗培养基含1900mgKNO3、 1650mgNH4NO3、170mgKH2PO4、440mgCaCl2、370mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、 0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、 5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、 6 100mg肌醇、0.2mgN苄基腺嘌呤(6‑BA)、0.4mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8~ 6。 [0023] 当壮苗培养获得的芽苗长至3‑4cm时，切取芽苗转入生根培养基Ⅰ，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度1500‑2000lux条件下培养，其中1L生根培养基Ⅰ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、185mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.6mg吲哚丁酸(IBA)、0.2mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8 6。培养10‑15天~ 后，当芽苗根部长出的根状突起长至1.0‑1.5cm后，再将芽苗转接至生根培养基Ⅱ，在温度 25±2℃，光照强度2000‑5000lux的自然光条件下培养10‑15天；其中生根培养基Ⅱ的原料组分为：1L生根培养基Ⅱ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、185mgMgSO4、 6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、 0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.2mg吲哚丁酸(IBA)、0.2mg萘乙酸(NAA)、0.6mg多效唑(PP333)、30g蔗糖、5g琼脂粉、5g活性炭、PH值5.8 6。 ~ [0024] 将生根完全、苗高4‑6cm的生根瓶苗洗净培养基，并移栽至装有基质的营养杯内，淋透基质，覆盖薄膜保湿并盖上遮荫网，5天后喷洒甲基托布津防病害，10天后打开遮荫网和薄膜，每10天喷洒叶面营养液一次。其中，所述的基质为椰糠:泥炭土:黄心土按重量比为6:2:2混合均匀制成；所述的叶面营养液的原料组分为：1L叶面营养液含190mgKNO3、 165mgNH4NO3、17mgKH2PO4、44mgCaCl2、37mgMgSO4、0.62mgH3BO3、2.5mgMnSO4、1mgZnSO4、0.025 mgNa2MoO4、0.0025mgCuSO4、0.0025mgCoCl2、0.083mgKI。 实施例 [0025] 一种促进大花序桉组培生根及移栽成活的方法，首先按CN105454047A公开的一种大花序桉的组培快繁方法实施例2步骤1‑8获取继代增殖后的无菌芽，将经过继代增殖培养15‑20天后获得的丛生芽分切至壮苗培养基，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度2000‑ 2500lux条件下培养15‑20天；其中壮苗培养基的原料组分为：1L壮苗培养基含1900mgKNO3、 1650mgNH4NO3、170mgKH2PO4、440mgCaCl2、370mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、 0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、 5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、 6 100mg肌醇、0.3mgN苄基腺嘌呤(6‑BA)、0.5mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8~ 6。 [0026] 当壮苗培养获得的芽苗长至3‑4cm时，切取芽苗转入生根培养基Ⅰ，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度1500‑2000lux条件下培养，其中1L生根培养基Ⅰ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、185mgMgSO4、6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.8mg吲哚丁酸(IBA)、0.2mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、5g琼脂粉、PH值5.8 6。培养10‑15天~ 后，当芽苗根部长出的根状突起长至1.0‑1.5cm后，再将芽苗转接至生根培养基Ⅱ，在温度 25±2℃，光照强度2000‑5000lux的自然光条件下培养10‑15天；其中生根培养基Ⅱ的原料组分为：1L生根培养基Ⅱ含950mgKNO3、825mgNH4NO3、85mgKH2PO4、220mgCaCl2、185mgMgSO4、 6.2mgH3BO3、25mgMnSO4、10mgZnSO4、0.25 mgNa2MoO4、0.025mgCuSO4、0.025mgCoCl2、 0.83mgKI、0.24mg生物素(VH)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(VB3)、2mg硫胺素(VB1)、0.5mg吡哆素(VB6)、37.3mg Na2‑EDTA、27.8mg FeSO4、100mg肌醇、0.3mg吲哚丁酸(IBA)、0.2mg萘乙酸(NAA)、0. 8mg多效唑(PP333)、30g蔗糖、5g琼脂粉、5g活性炭、PH值5.8 6。 ~ [0027] 将生根完全、苗高4‑6cm的生根瓶苗洗净培养基，并移栽至装有基质的营养杯内，淋透基质，覆盖薄膜保湿并盖上遮荫网，5天后喷洒甲基托布津防病害，10天后打开遮荫网和薄膜，每10天喷洒叶面营养液一次。其中，所述的基质为椰糠:泥炭土:黄心土按重量比为6:2:2混合均匀制成；所述的叶面营养液的原料组分为：1L叶面营养液含190mgKNO3、 165mgNH4NO3、17mgKH2PO4、44mgCaCl2、37mgMgSO4、0.62mgH3BO3、2.5mgMnSO4、1mgZnSO4、0.025 mgNa2MoO4、0.0025mgCuSO4、0.0025mgCoCl2、0.083mgKI。 [0028] 对比例1：与实施例1不同之处仅在于，无壮苗培养步骤，即所述的无菌芽继代养殖培养15‑ 20天后获得的丛生芽直接进行生根培养，按实施例1依次转入生根培养基Ⅰ和生根培养基Ⅱ中生根培养，最后按实施例1的方法进行移栽。 [0029] 对比例2：与实施例1不同之处仅在于，该对比例仅采用一步生根培养；即当壮苗培养获得的芽苗长至3‑4cm时，切取芽苗转入生根培养基在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度1500‑ 2000lux条件下培养25‑30天，再进行移栽。其中该对比例中采用的生根培养基原料配方与实施例1中的生根培养基Ⅰ配方完全相同。 [0030] 对比例3：与实施例1不同之处仅在于，该对比例仅采用一步生根培养；即当壮苗培养获得的芽苗长至3‑4cm时，切取芽苗转入生根培养基在温度25±2℃，光照强度2000‑5000lux的自然光条件下培养25‑30天，再进行移栽。其中该对比例中采用的生根培养基原料配方与实施例1中的生根培养基Ⅱ配方完全相同。 [0032] 试验例：计算实施例1‑3和对比例1‑4的大花序桉组培苗瓶内生根率以及平均根长，以及移栽后三个月的移栽成活率，结果如下表： 组别 瓶内生根率 瓶苗平均根长 移栽成活率 实施例1 95.7% 2.7cm 95.3% 实施例2 97.9% 2.8cm 97.4% 实施例3 96.8% 2.5cm 94.8% 对比例1 73.0% 2.3cm 72.1% 对比例2 75.8% 1.9cm 75.6% 对比例3 71.6% 2.0cm 70.3% 对比例4 96.3% 2.6cm 85.9% 由上表可知，经过本申请的壮苗培养、二步生根培养及移栽后营养液喷施完整的步骤后能使大花序桉组培苗生根率提高至95%以上，移栽成活率提高至90%以上。 |
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