一种黄皮叶挥发油乳剂及其制备方法与应用 |
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| 申请号 | CN202311668379.9 | 申请日 | 2023-12-06 | 公开(公告)号 | CN117838765A | 公开(公告)日 | 2024-04-09 |
| 申请人 | 佛山科学技术学院; | 发明人 | 唐陆平; 郭琰娜; 梁少姗; 何永明; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种黄皮叶挥发油乳剂及其制备方法与应用，涉及农副产品加工领域。具体的，黄皮叶挥发油乳剂包括以下组分：黄皮叶挥发油80～150重量份，乳化剂70～180体积份， 水 1200～2000体积份；其中，所述黄皮叶挥发油为黄皮叶通过水蒸气蒸馏所得到的挥发油。本发明的黄皮叶挥发油乳剂 稳定性 高，适口性良好，且对金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用，此外，黄皮叶挥发油乳剂能有效减轻金葡菌感染小鼠 肺 炎，抑制NLRP3 炎症 小体活化与炎症因子产生；因此可以对细菌性肺炎有 辅助 治疗 作用，具有很好的应用前景。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种黄皮叶挥发油乳剂，其特征在于，包括以下组分： |
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| 说明书全文 | 一种黄皮叶挥发油乳剂及其制备方法与应用技术领域[0001] 本发明涉及农副产品加工领域，尤其涉及一种黄皮叶挥发油乳剂及其制备方法与应用。 背景技术[0002] 黄皮Clausena lansium(Lour.)Skeels为芸香科黄皮属植物，是一种药食同源的植物。无核黄皮是云浮市郁南县特有的岭南珍稀水果。黄皮的各个部位均可入药，但功效不同，因不同部位化学成分不同，所以挥发性成分的种类和含量均具有明显差异。黄皮叶又称油皮、油梅，其挥发性成分含量较高。但黄皮果采摘后修剪的枝叶大多被废弃，对黄皮枝叶的资源化利用较少有研究，其中的挥发性成分也未被合理的利用，造成极大的浪费。此外，由于挥发油常具有不良气味、适口性差，刺激强等特点，极大限制了其使用。 发明内容[0003] 本发明所要解决的技术问题在于，提供一种黄皮叶挥发油乳剂，其稳定性好，适口性良好。 [0004] 本发明还要解决的技术问题在于，提供一种黄皮叶挥发油乳剂的制备方法。 [0005] 本发明还要解决的技术问题在于，提供一种黄皮叶挥发油乳剂的用途。 [0006] 为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种黄皮叶挥发油乳剂，其包括以下组分： [0007] 黄皮叶挥发油80～150重量份，乳化剂70～180体积份，水1200～2000体积份； [0008] 其中，所述黄皮叶挥发油为黄皮叶通过水蒸气蒸馏所得到的挥发油。 [0009] 示例性的，黄皮叶挥发油的用量为85重量份、90重量份、95重量份、100份、105重量份、110重量份、115重量份、120重量份、125重量份、130重量份、135重量份、140重量份或145重量份，但不限于此。优选的为90～120重量份，更优选的为90～110重量份。 [0010] 示例性的，乳化剂的用量为76体积份、82体积份、88体积份、94体积份、105体积份、114体积份、126体积份、135体积份、141体积份、153体积份、160体积份或172体积份，但不限于此。优选的为80～120体积份，更优选的为90～110体积份。 [0011] 示例性的，水的用量为1250体积份、1300体积份、1400体积份、1500体积份、1550体积份、1600体积份、1700体积份、1850体积份或1980体积份，但不限于此。优选的为1500～2000体积份，更优选的为1500～1900体积份。 [0012] 需要说明的是，本发明中的重量份、体积份所对应的关系为mg、μL或两者等比例放大或缩小。 [0013] 其中，乳化剂为非离子型乳化剂，示例性的为Tween 80、Span 80、Triton X‑100，但不限于此。 [0014] 作为上述技术方案的改进，所述乳化剂选用Tween 80和/或Span 80。 [0015] 作为上述技术方案的改进，所述黄皮叶挥发油的重量与所述乳化剂的体积之比为1mg:(1～2)μL；示例性的为1mg:1.2μL、1mg:1.4μL、1mg:1.6μL或1mg:1.8μL，但不限于此。 [0016] 作为上述技术方案的改进，所述乳化剂选用Tween 80； [0017] 所述黄皮叶挥发油的重量与所述乳化剂的体积之比为1mg:1μL。 [0018] 作为上述技术方案的改进，所述黄皮叶挥发油的制备方法为： [0019] (1)将破碎后的黄皮叶加入水中浸泡0.5～2h；其中，黄皮叶与水的比例为1g：(10～25)mL； [0020] (2)水蒸气蒸馏提取1～4h，得到中间物； [0021] (3)将所述中间物采用乙酸乙酯萃取2～3次，取乙酸乙酯层合并后分离乙酸乙酯，即得到黄皮叶挥发油成品。 [0022] 相应的，本发明还公开了一种黄皮叶挥发油乳剂的制备方法，用于制备上述的黄皮叶挥发油乳剂，其包括： [0023] 将黄皮叶挥发油与乳化剂混合，得到油相； [0024] 将所述油相滴加到水中，并持续搅拌至分散均匀，即得； [0025] 其中，所述油相与所述水的体积比为(1～3):(9～17)，示例性的为1:10、1:14、2:12、2:16或3:16，但不限于此。 [0026] 作为上述技术方案的改进，所述油相与所述水的体积比为1:9。 [0027] 相应的，本发明还公开了上述的黄皮叶挥发油乳剂在制备兽药中的应用。具体的，该兽药可直接添加在牲畜饮水中，但不限于此。 [0028] 作为上述技术方案的改进，所述兽药用于抑制金黄色葡萄球菌。 [0030] 作为上述技术方案的改进，所述肺炎为金黄色葡萄球菌引起的肺炎； [0031] 所述药物可抑制NLRP3、ASC、IL‑1β、IL‑18和caspase‑1的表达。 [0032] 实施本发明，具有如下有益效果： [0033] 本发明的黄皮叶挥发油乳剂，采用黄皮叶挥发油、乳化剂和水制成，降低了黄皮叶挥发油的刺激性气味，提升了其稳定性，改善了适口性。本发明的黄皮叶挥发油乳剂可通过饮水给药，极大扩展了其在畜禽养殖业中的应用，拓宽了药物的应用范围。本发明采用无核黄皮的黄皮叶制成，经研究，本发明的黄皮叶挥发油乳剂对金黄色葡萄球菌有明显抑制作用，其对金葡菌的最小抑菌浓度为312.50μg/mL，能有效抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成，使细菌分裂异常、细胞出现空化，并导致细菌死亡。此外，黄皮叶挥发油乳剂能有效减轻金葡菌感染小鼠肺炎，抑制NLRP3炎症小体活化与炎症因子产生，因此可以对细菌性肺炎有辅助治疗作用，具有很好的应用前景。附图说明 [0034] 图1是实施例1中黄皮叶挥发油的GC‑MS分析结果图； [0035] 图2是实施例2中黄皮挥发油乳剂放置于不同条件下的变化情况的实拍图；图中，实验序号从左到右依次是为黄皮叶挥发油乳剂1‑9号试管 [0036] 图3是实施例2中黄皮挥发油乳剂的稳定性实验结果图，其中，A为黄皮叶，B为黄皮叶挥发油，C为黄皮叶挥发油乳剂，从左到右依次是1‑9号试管；D为黄皮叶挥发油乳剂最佳配比显微镜观察结果图，E为最佳配比黄皮叶挥发油乳剂在低温(4℃)放置1个月后的显微镜观察结果图，F为最佳配比黄皮叶挥发油乳剂在高温(50±2℃)放置5天后的显微镜观察结果图，G为最佳配比黄皮叶挥发油乳剂根据GB/T 1603‑2001稳定性试验之后的显微镜观察结果图； [0037] 图4是实施例2中黄皮叶挥发油乳剂对沙门菌与金黄色葡萄球菌的作用结果图；其中，A为金黄色葡萄球菌的时间‑抗菌曲线，B为鼠伤寒沙门氏菌的时间‑抗菌曲线，C为金黄色葡萄球菌的OD600的差异图，D为鼠伤寒沙门氏菌OD600的差异图，E为黄皮叶挥发油乳剂处理24h后鼠伤寒沙门氏菌的形态图；F为黄皮叶挥发油乳剂处理24h后金黄色葡萄球菌的形态图； [0038] 图5是实施例2中流式细胞术检测黄皮叶挥发油乳剂对鼠伤寒沙门氏菌与金黄色葡萄球菌死亡的影响结果图；A为正常对照组感染金黄色葡萄球菌；B‑D分别为1/2×MIC，MIC和4×MIC黄皮叶挥发油乳剂作用后的金黄色葡萄球菌，E为正常对照组感染鼠伤寒沙门氏菌，F‑H为1/2×MIC，MIC和4×MIC黄皮叶挥发油乳剂作用后的鼠伤寒沙门氏菌；I为金黄色葡萄球菌与鼠伤寒葡萄球菌的生存曲线； [0039] 图6是实施例2中透射电镜观察黄皮叶挥发油乳剂对金黄色葡萄球菌微结构的影响图；A为正常对照组，B为MIC组，C为MBC组。红色箭头表示细菌细胞壁模糊；蓝色箭头表示细菌空腔；黄色箭头表示细菌分裂受到抑制。 [0040] 图7是实施例2中黄皮叶挥发油乳剂对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响图； [0041] 图8是实施例3中黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌感染小鼠肺脏指数和湿干重比图； [0042] 图9是实施例3中黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌感染小鼠肺脏载菌量影响图； [0043] 图10是实施例3中黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌感染小鼠肺脏病理学变化影响(HE染色100×和400×)；其中，A～H分别为空白对照组、模型组、吐温组、阳性药物组、黄皮叶挥发油高剂量组、黄皮叶挥发油中剂量组、黄皮叶挥发油低剂量组和黄皮叶挥发油药物对照组； [0044] 图11是实施例3中黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌感染小鼠肺脏NLRP3炎症小体活化影响图。 具体实施方式[0045] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明作进一步地详细描述。 [0046] 实施例1挥发油提取及化合物检测方法 [0047] 新鲜黄皮叶(产自广东省云浮市郁南县，经鉴定为无核黄皮树树叶)室内晾干后磨成粉，过100目筛。称取黄皮叶粉末10g，置于500mL圆底烧瓶中，加入200mL的超纯水，浸泡1h后，水蒸气蒸馏提取挥发油；提取4h后，用乙酸乙酯进行萃取，取上层乙酸乙酯层，萃取三次，向萃取液中加入无水硫酸钠，静置10h后过滤，水浴锅内蒸发乙酸乙酯，得挥发油，称重。采用GC‑MS对提取得到的挥发油样品进行分析。分析结果如图1所示。 [0048] 图1是黄皮叶挥发油的GC‑MS分析结果图，采用峰面积归一化法计算各组分的相对含量。共鉴定出37种化合物，以芳香烃、萜类化合物及其含氧衍生物等为主，占挥发油总量的96.49％。黄皮叶挥发油主要成分为5，5‑二甲基‑1‑乙烯基双环己烷(13.050 9％)、棕榈酸(13.838 5％)、β‑罗勒烯(6.580 5％)、植物醇(5.772 5％)、α‑红没药醇(2.844 1％)、石竹烯氧化物(3.077 7％)、桉油烯醇(1.775 1％)等。其中5，5‑二甲基‑1‑乙烯基双环己烷和棕榈酸含量较高。 [0049] 实施例2黄皮叶挥发油乳剂制备及评价 [0050] 1)黄皮叶挥发油乳剂制备 [0051] 将不同比例的挥发油和乳化剂(吐温80)配成油相。在80℃下将油相滴加到水中，并使用磁力搅拌器搅拌(500r/min)中至乳化。(试验设计见表1)。 [0052] 表1黄皮叶挥发油乳剂成分设计 [0053] [0054] 2)黄皮叶挥发油乳剂稳定性实验 [0055] 将乳剂放入4℃冰箱中保存1个月，观察在低温环境下乳剂外观变化；将乳剂放入‑20℃3天，观察乳剂是否有沉淀和分层的现象；将乳剂放入50±2℃恒温箱中5天，观察乳剂在高温环境下是否有沉淀和分层的现象。根据上述实验结果选择最佳的乳剂配比。根据选择的最佳配比进行GB/T 1603‑2001稳定性实验(200倍稀释)。标准硬水配置称取无水氯化钙0.304g和带结晶水的氯化镁0.139g于1000mL的容量瓶中，用蒸馏水溶解稀释至刻度线。 在250mL烧杯中，加入100mL标准硬水，用移液管吸取适量乳剂试样，在不断搅拌的情况下慢慢加入硬水中，使其配成100mL乳状液。加完乳剂后，继续搅拌30s，立即将乳状液移至清洁、干燥的100mL量筒中，并将量筒置于30℃恒温水浴内，静置1h，观察乳液情况。 [0056] 3)黄皮叶挥发油乳剂抑菌试验： [0057] 3.1乳剂的配置：将100mg的黄皮叶挥发油和100μL乳化剂(吐温80)配成油相(共200μL)。在80℃下将油相滴加到1800μL水中，并使用磁力搅拌器搅拌(500r/min)中至乳化，即得黄皮叶挥发油乳剂。 [0058] 3.2MIC和MBC的测定：采用二倍稀释法：将药物用LB液体培养基二倍稀释成不同浓度(2500.00μg/mL、1250.00μg/mL、625.00μg/mL、312.50μg/mL、156.25μg/mL、78.12μg/mL)，并设置空白对照组、吐温组(2500μL/mL，Tween80)和阳性对照组。每个试管10mL LB液体培6 养基，随后加入0.1mL 10CFU/mL处于对数生长期的菌液，37℃培养12h后观察细菌生长情况，并对其细菌增长前后的OD600进行检测，肉眼见无细菌生长并OD600数值明显低于阳性组的为最小浓度为MIC。将肉眼见无菌生长的试管取100μL涂板，37℃培养12h，菌落生长小于5个的最小浓度为MBC。 [0059] 3.3时间‑抑菌曲线的测定：取100μL 105CFU/mL的金葡菌分别加入含有1/4×MIC、1/2×MIC、MIC、2×MIC和4×MIC药物浓度的培养基中，在37℃培养0h、2h、4h、8h、12h、24h、 36h、48h，并分别在上述时间取100μL菌液进行稀释，并计算细菌数量。 [0060] 3.4扫描电镜观察黄皮叶挥发油乳剂对沙门菌与金葡菌的形态变化：将沙门菌与金葡菌置于MBC黄皮叶挥发油乳剂的培养基中培养24h，用戊二醛固定液进行固定，扫描电镜观察。 [0061] 3.5透射电镜观察黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌的形态变化：将沙门菌与金葡菌置于MIC黄皮叶挥发油乳剂的培养基中分别培养6h和12h，置于MBC黄皮叶挥发油乳剂的培养基中分别培养6h和12h，透射电镜观察黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌菌体的影响。 [0062] 3.6黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌生物膜形成的影响：实验设有6组：空白对照组、吐温组(乳化剂组)、1/8×MIC、1/4×MIC、1/2×MIC和MIC组。分别向96孔板中加入含有8 10CFU/mL的200μL 1/8×MIC、1/4×MIC、1/2×MIC和MIC的黄皮叶挥发油乳剂的LB肉汤，每个浓度重复6次，在37℃恒温培养箱中培养24h，24h后使用PBS清洗3次，加入200μL甲醇固定 20min，去除甲醇，干燥后加入1％的结晶紫溶液染色20min，PBS清洗3次后干燥，加入200μL 95％的乙醇反应5min，测OD570。 [0063] 4)实验结果 [0064] 4.1黄皮叶挥发油乳剂稳定性结果 [0065] 稳定性实验的结果如图2和图3所示。从图中可以看出，黄皮叶挥发油呈金黄色(图3B)，且有浓郁的香气。将不同比例的挥发油、乳化剂、水制成的黄皮叶挥发油乳剂进行稳定性试验，发现4℃冰箱中保存1个月后乳剂外观无变化，50℃恒温箱放置5天后无沉淀和分层的现象(图2)。根据挥发油稳定性实验结果，最终确定黄皮叶挥发油乳剂中最优的油相：水相(体积比)为1：9，油相中最优的黄皮叶挥发油(重量)：乳化剂(吐温80，体积)为1:1(图 3C)。黄皮叶挥发油乳剂为乳白色，乳滴大小在10μm以下(图3D‑G)。 [0066] 4.2黄皮叶挥发油乳剂对沙门菌与金黄色葡萄球菌的作用 [0067] 如图4所示，黄皮叶挥发油乳剂对沙门菌无明显抑菌作用(图4B，D)。金葡菌的OD600差值显示(图4C)，乳剂中的乳化剂(吐温80)对金葡菌的增值没有影响，当药物浓度在312.50μg/mL时，会显著影响金葡菌的增殖。结合眼观结果和OD600差值结果判定黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌的最小抑菌浓度为312.50μg/mL；根据细菌涂板生长结果显示，MBC为 2500.00μg/mL。从黄皮叶挥发油对金黄色葡萄球菌的时间‑抑菌曲线(图4A)中可看出，黄皮叶挥发油乳剂对金葡菌有明显的抑制作用，其中0.25×MIC、0.5×MIC和MIC的黄皮叶挥发油乳剂在12h时金葡菌达到平台期，而2×MIC和4×MIC的黄皮叶挥发油乳剂在作用24h后抑菌作用逐渐消失细菌增长逐渐达到平台期。透射电镜结果显示，与空白对照组相比，MBC挥发油乳剂处理24h后对鼠伤寒沙门氏菌的抑菌效果较弱，细菌表面皱纹较少，但无死亡迹象(图4E)；但24h后金葡菌菌体破裂，细菌死亡，它对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用(图 4F)。 [0068] 4.3流式细胞术检测黄皮叶挥发油乳剂对鼠伤寒沙门氏菌与金黄色葡萄球菌死亡的影响 [0069] 如图5(A‑D)所示，与对照组相比，1/2×MIC组、2×MIC组和4×MIC组金黄色葡萄球菌的存活率分别为84.6％、14.5％和12.8％，均显著低于对照组的97.2％；挥发油乳剂作用24小时后金黄色葡萄球菌已裂解死亡，故4×MIC组细菌数量和可染色细菌数量明显减少。 1/2×MIC组、2×MIC组和4×MIC组鼠伤寒沙门氏菌存活率分别为96％、95.3％和75.5％，与对照组(99.6％)相近(图5E‑H)。以上结果说明黄皮叶挥发油乳剂对金黄色葡萄球具有较好的抑菌效果，且抑菌效果呈剂量依赖性，对鼠伤寒沙门氏菌无抑菌作用。 [0070] 4.4透射电镜观察黄皮叶挥发油乳剂对金黄色葡萄球菌的损伤作用 [0071] 对照组金黄色葡萄球菌的细胞膜与细胞壁有明显的分界线。一些细菌正在进行二元裂变，隔膜两侧的细胞是对称的(图6A)。MIC黄皮叶挥发油乳剂作用6h后，观察到细菌形成空腔和异常的二元裂变，包括不完全分裂和不对称分裂；12h后，空腔尺寸逐渐增大(图6B)。MBC黄皮叶挥发油乳剂处理6h后，细菌的二元裂变明显受到抑制，没有膜状结构，并伴有空腔的形成；12h后，细菌内部细胞膜和细胞壁间距消失，细胞空化死亡(图6C)。以上结果表明，黄皮叶挥发油乳剂可破坏金黄色葡萄球菌细胞膜结构。 [0072] 4.5黄皮叶挥发油乳剂对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响 [0073] 如图7所示，黄皮叶挥发油乳剂浓度在2×MIC、MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC、1/32MIC时，对金葡菌的生物膜形成有显著抑制作用。 [0074] 实施例3黄皮叶挥发油乳剂对小鼠肺炎的作用 [0075] 1)试验方案 [0076] 1.1乳剂的配置：将100mg的黄皮叶挥发油和100μL乳化剂(吐温80)配成油相。在80℃下将油相滴加到1800μL水中，并使用磁力搅拌器搅拌(500r/min)中至乳化，即得黄皮叶挥发油乳剂。 [0077] 1.2实验分组 [0078] 将150只6‑8周龄的雌性BALB/c小鼠随机分为8组：空白对照组(滴鼻PBS+灌胃等体积PBS液)，吐温组(滴鼻金葡菌+灌胃5.00mg/kg吐温80)，模型组(滴鼻金葡菌+灌胃等体积PBS液)，阳性药物组(滴鼻金葡菌+灌胃万古霉素10.00mg/kg)，黄皮叶挥发油高剂量组(滴鼻金葡菌+灌胃黄皮叶挥发油乳剂5.00mg/kg)，黄皮叶挥发油中剂量组(滴鼻金葡菌+灌胃黄皮叶挥发油乳剂2.50mg/kg)，黄皮叶挥发油低剂量组(滴鼻金葡菌+灌胃黄皮叶挥发油乳剂1.25mg/kg)，黄皮叶挥发油药物对照组(灌胃黄皮叶挥发油乳剂2.50mg/kg)；每组20只9 (黄皮叶挥发油组10只)。预防性给药5d后，造模组每只小鼠一次性滴鼻30μL 4×10CFU/mL金葡菌悬浊液，不造模组小鼠用30μL PBS滴鼻，继续给药2d(合计给药时间7d)结束用药。 [0079] 1.3小鼠肺脏脏器指数和湿/干比重 [0080] 小心摘取小鼠完整的肺脏，拍照、称重，计算肺脏湿/干比重。 [0081] 公式：脏器指数＝肺脏重量(g)/小鼠体重(g) [0082] 肺脏湿/干比重＝肺脏重量(g)/烘干肺脏重量(g) [0083] 1.4肺脏病理组织检查 [0084] 剖检取各组小鼠肺脏相同部分，将其放入4％多聚甲醛中固定24h，酒精梯度脱水、二甲苯处理、石蜡包埋，进行切片、展片和脱蜡，再进行HE染色、酒精梯度脱水、树脂封片，最后在显微镜下观察小鼠肺脏组织病理学特征及变化。 [0085] 1.5金黄色葡萄球菌负荷测量 [0086] 称取0.05g肺脏组织于1mL预冷的PBS中，放入组织破碎仪破碎，破碎后进行10倍稀释，吸取各浓度组织匀浆100μL至甘露醇氯化钠琼脂无菌培养板中，每个浓度三个重复，37℃培养24h，记录培养基中的菌落数量，计算肺脏载菌量。 [0087] 1.6蛋白免疫印迹法分析小鼠肺脏蛋白表达量 [0088] 将苯甲基磺酰氟蛋白酶抑制剂(PMSF)与细胞组织快速裂解液(RIPA Lysis Buffer)1:100混合，用于提取小鼠肺脏的总蛋白；经蛋白电泳分离，低温下湿法转膜至0.22μm PVDF膜上，采用5％脱脂奶粉室温封闭1h；TBST清洗3次；将PVDF膜分别与IL‑Iβ、NLRP3、IL‑18、ASC、Caspasea‑l、P‑NF‑κB p65、NF‑κB p65、Claudine‑3、occludin、ZO‑1和β‑actin一抗常温下孵育3h，3h后使用TBST清洗2次，每次15min；用HRP标记的羊抗兔或羊抗鼠二抗室温孵育1h，再用TBST清洗2次，每次15min；ECL发光液显色，通过Image J软件分析蛋白质含量。 [0089] 2)试验结果 [0090] 2.1黄皮叶挥发油乳剂对金黄色葡萄球菌感染小鼠肺脏有保护作用 [0091] 参图8，与空白组相比，模型组和吐温组的小鼠肺脏指数明显增加，且模型组和吐温组的肺脏的湿重/干重值显著上升(P＜0.05)，且黄皮叶挥发油乳剂对照组的肺脏指数与空白组无显著差异。与模型组相比，阳性药物组和挥发油乳剂组的小鼠肺脏指数和肺脏的湿重/干重值比值有所下降(P＜0.05)。说明黄皮叶挥发油乳剂可以缓解肺脏因金葡菌感染引起的充血和水肿。 [0092] 由图9可知，与空白组相比，模型组和吐温组的肺脏载菌量显著上升(P＜0.05)。与模型组和吐温组相比，阳性药物组和黄皮叶挥发油乳剂组肺脏中金葡菌的负荷量显著降低(P＜0.05)。 [0093] 由图10可见，空白对照组小鼠的肺脏呈现粉红色，结构立体饱满，有光泽，质地柔软有弹性；低倍镜下小鼠肺脏整体染色均匀；高倍镜下可见细胞核被染成蓝色，细胞质染成红色丝状或块状，细胞膜染为红色。模型组与吐温组小鼠肺脏与空白组相比，颜色呈白色，体积肿大，无光泽，质地较硬；在低倍镜下观察可见明显的颜色较深的病变区域，肺泡腔呈现不规则排列，支气管内充满大量红细胞和炎性细胞，外周肺泡腔内也存在红细胞和炎性细胞浸润；高倍镜下可见肺泡上皮细胞细胞核肿大，肺泡上皮细胞增生，细胞间隔不明显。阳性药物组小鼠肺脏颜色呈粉红色，与空白组相比体积略大，肺脏边缘较厚；低倍镜下观察部分肺泡腔内充满红细胞；高倍镜下观察细支气管内含有少量红细胞和炎性细胞。黄皮叶挥发油高剂量组肺脏颜色呈粉红色，与模型组相比，体积略小，有光泽；低倍镜下可见少部分肺泡出血；高倍镜下未见明显异常。黄皮叶挥发油中剂量组肺脏呈粉红色，和模型组相比，肺脏体积略小，有光泽；低倍镜和高倍镜下观察都未见明显异常。黄皮叶挥发油低剂量组肺脏呈粉红色，与模型组相比，肺脏体积略小；低倍镜下可见部分肺泡腔内含有红细胞； 高倍镜下可见细支气管内存在炎症细胞。黄皮叶挥发油对照组小鼠肺脏颜色正常，低倍镜和高倍镜下都未见明显异常。 [0094] 2.2黄皮叶挥发油乳剂抑制金黄色葡萄球菌感染小鼠肺脏NLRP3炎症小体活化缓解肺脏炎症 [0095] 由图11可知，与空白组相比，模型组和吐温组的NLRP3、ASC、IL‑1β、IL‑18和caspase‑1的蛋白表达量显著上升(P＜0.05)。与模型组相比，阳性药物组小鼠肺脏的ASC、IL‑1β的含量显著降低(P＜0.05)；黄皮叶挥发油高、中、低剂量组的NLRP3、ASC、IL‑1β、IL‑18和caspase‑1的蛋白表达量显著下降(P＜0.05)。 [0096] 以上所述是发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。 |
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