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一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份及其制备方法与应用

申请号 CN202311737180.7 申请日 2023-12-18 公开(公告)号 CN117797183A 公开(公告)日 2024-04-02
申请人 湖南中医药大学; 发明人 谢明霞; 王雅静; 何运生; 龙红萍; 蒋林; 杜可; 王芷; 刘慧林;
摘要 本 发明 公开了一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份及其制备方法,本发明对肉豆蔻精油进行深入系统的研究,并通过分子蒸馏仪将肉豆蔻原精油分离成肉豆蔻轻油组份和肉豆蔻重油组份。经过分子蒸馏后,保留重油组份,通过抗菌筛选实验研究发现,肉豆蔻精油中的肉豆蔻重油相比肉豆蔻轻油和原精油对纹带棒状杆菌、耐甲 氧 西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌等具有更好的杀菌活性,取得了很好的预料不到的技术效果。
权利要求

1.一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份,其特征在于,它是由下列方法制备得到的:
(1)肉豆蔻精油的提取:
取肉豆蔻药材,粉碎,加,浸泡,然后采用水蒸气蒸馏提取,离心,收集精油,避光4℃保存。
(2)肉豆蔻精油精制:将步骤(1)肉豆蔻精油装入分子蒸馏仪的进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水冷却,调整刮膜转速,设置一定的蒸馏温度和蒸馏压,收集肉豆蔻重油组份和重油组份。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份,其特征在于,它是由下列方法制备得到的:
(1)肉豆蔻精油的提取:
取一定量的肉豆蔻药材,粉碎,取肉豆蔻粉末,加6~12倍量水,浸泡0.5~1h,然后水蒸气蒸馏提取1~6h,离心,收集精油,避光4℃保存;
(2)肉豆蔻精油精制:肉豆蔻精油装入分子蒸馏仪的进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水装置温度设定为5~10℃,刮膜转速200~240r/min,物料流量1~2mL/min,蒸馏温度50℃~90℃和蒸馏压力20Pa~80Pa,收集肉豆蔻轻油组份和重油组份。
3.根据权利要求2所述的一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份,其特征在于,它是由下列方法制备得到的:
(1)肉豆蔻精油的提取:取肉豆蔻药材粉末一定量,加12倍量水,浸泡1.5h,水蒸气蒸馏提取5h,离心,收集精油,避光4℃保存;
(2)肉豆蔻精油精制:肉豆蔻精油装入分子蒸馏仪的进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水装置温度设定为5℃,刮膜转速240r/min,物料流量1mL/min,蒸馏温度90℃和蒸馏压力60Pa,收集肉豆蔻重油组份。
4.权利要求1~3任一项所述的肉豆蔻重油组份在制备抗菌活性的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的细菌包括纹带棒状杆菌、耐甲西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、绿假单胞菌、炎克雷伯菌、产超广谱β‑内酰胺酶肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌。
6.根据权利要求4或5所述的应用,其特征在于,将肉豆蔻重油组份与药学上可接受的载体制备成外用制剂或内服制剂。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,将肉豆蔻重油组份与药学上可接受的载体制备成喷雾剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、合剂、口服液或注射剂。

说明书全文

一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份及其制备方法与应用

技术领域

[0001] 本发明属于中药技术领域,具体地说,本发明涉及具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份及其制备方法与应用。

背景技术

[0002] 肉豆蔻是一味常用中药,功效与作用是温中行气,涩肠止泻,用于治疗脾胃虚寒、久泻不止、脘腹胀痛、食少呕吐等症状。肉豆蔻来源于肉豆蔻科植物肉豆蔻的干燥种仁,味辛,性温,归脾、胃和大肠经,湿热泻痢及胃肠疼痛的患者不宜服用。
[0003] 现代药理学研究发现,肉豆蔻有止泻、镇静、心脏保护等药理作用。肉豆蔻在历代本草中都有收载,如唐代甄权的《药性论》中记载“肉豆蔻能主小儿吐逆不下乳,腹痛,治宿食不消,痰饮。”明代李时珍的《本草纲目》也记载“肉蔻之辛温,理脾胃而止吐逆,主心腹虫痛,脾胃虚冷,气并冷热,虚泄赤白痢,研末粥饮服之。暖脾胃,固大肠。”[0004] 中国专利201410672406.4公开了一种含肉豆蔻油微胶囊的抗菌型PVC壁纸原纸及其制备方法;201710429713.3公开了抗菌中药组合物、制备方法及其应用。
[0005] 目前,还没有关于肉豆蔻挥发油,特别是肉豆蔻挥发油中的重油的抗菌剂的研究报道,本发明对肉豆蔻挥发油进行深入研究,筛选出制备肉豆蔻重油的最佳工艺,并对其进行抗细菌实验筛选,筛选出抗菌谱广、抗菌效果好的肉豆蔻重油组份。

发明内容

[0006] 发明目的:本发明的目的是通过大量实验筛选出制备肉豆蔻重油的最佳工艺,并对其进行抗菌活性实验筛选,开发出抗菌谱广、抗菌效果好的肉豆蔻重油组份及其新应用。
[0007] 技术方案:为了实现以上目的,本发明采用的技术方案为:
[0008] 一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份,它是由下列方法制备得到的:
[0009] (1)肉豆蔻精油的提取:
[0010] 取肉豆蔻药材,粉碎,加,浸泡,然后采用水蒸气蒸馏提取,离心,收集精油,避光4℃保存。
[0011] (2)肉豆蔻精油精制:将步骤(1)肉豆蔻精油装入分子蒸馏仪的进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水冷却,调整刮膜转速,设置一定的蒸馏温度和蒸馏压,收集肉豆蔻重油组份和重油组份。
[0012] 作为优选方案,以上所述的一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份,它是由下列方法制备得到的:
[0013] (1)肉豆蔻精油的提取:
[0014] 取一定量的肉豆蔻药材,粉碎,取肉豆蔻粉末,加6~12倍量水,浸泡0.5~1h,然后水蒸气蒸馏提取1~6h,离心,收集精油,避光4℃保存;
[0015] (2)肉豆蔻精油精制:肉豆蔻精油装入分子蒸馏仪的进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水装置温度设定为5~10℃,刮膜转速200~240r/min,物料流量1~2mL/min,蒸馏温度50℃~90℃和蒸馏压力20Pa~80Pa,收集肉豆蔻轻油组份和重油组份。
[0016] 作为优选方案,以上所述的一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份,它是由下列方法制备得到的:
[0017] (1)肉豆蔻精油的提取:取肉豆蔻药材粉末一定量,加12倍量水,浸泡1.5h,水蒸气蒸馏提取5h,离心,收集精油,避光4℃保存;
[0018] (2)肉豆蔻精油精制:肉豆蔻精油装入分子蒸馏仪的进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水装置温度设定为5℃,刮膜转速240r/min,物料流量1mL/min,蒸馏温度90℃和蒸馏压力60Pa,收集肉豆蔻重油组份。
[0019] 本发明经过实验筛选,发现制备得到的肉豆蔻重油组份在制备抗菌活性的药物中的应用,特别是在制备抗细菌活性的药物中的应用。
[0020] 作为进一步优选方案,所述的细菌包括纹带棒状杆菌、耐甲西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、绿假单胞菌、炎克雷伯菌、产超广谱β‑内酰胺酶肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌。
[0021] 作为优选方案,本发明将肉豆蔻重油组份与药学上可接受的载体制备成外用制剂或内服制剂。
[0022] 作为进一步优选方案,将肉豆蔻重油组份与药学上可接受的载体制备成喷雾剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、合剂、口服液或注射剂。
[0023] 有益效果:本发明与现有技术相比,存在以下优点:
[0024] 本发明对肉豆蔻精油进行深入系统的研究,并通过分子蒸馏仪将肉豆蔻原精油分离成肉豆蔻轻油组份和肉豆蔻重油组份。通过抗菌筛选实验研究发现,肉豆蔻精油中的肉豆蔻重油相比肉豆蔻轻油和原精油不但有更好的抗细菌的活性,而且抗菌谱更广。经过分子蒸馏后,保留重油组份,不但服用量少,且效果更好,取得了很好的预料不到的技术效果。附图说明
[0025] 图1是不同蒸馏温度和蒸馏压力对肉豆蔻精油精制的影响结果图。
[0026] 图2是肉豆蔻精油组份对产超广谱β‑内酰胺酶肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的MIC图。
[0027] 图3是肉豆蔻轻油组份对产超广谱β‑内酰胺酶肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的MIC图。
[0028] 图4是肉豆蔻重油组份对产超广谱β‑内酰胺酶肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的MIC图。
[0029] 图5肉豆蔻精油组份对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌的MIC图。
[0030] 图6肉豆蔻轻油组份对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌的MIC图。
[0031] 图7肉豆蔻重油组份对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌的MIC图。
[0032] 图8肉豆蔻精油组份对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的MIC图。
[0033] 图9肉豆蔻轻油组份对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的MIC图。
[0034] 图10肉豆蔻重油组份对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的MIC图。
[0035] 图11肉豆蔻精油组份对纹带棒状杆菌的MIC图。
[0036] 图12肉豆蔻轻油组份对纹带棒状杆菌的MIC图。
[0037] 图13肉豆蔻重油组份对纹带棒状杆菌的MIC图。
[0038] 图14是肉豆蔻原精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份对纹带棒状杆菌的MBC图。
[0039] 图15是肉豆蔻原精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的MBC图。
[0040] 图16是肉豆蔻原精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份对金黄色葡萄球菌的MBC图。
[0041] 图17是肉豆蔻原精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份对铜绿假单胞菌的MBC图。
[0042] 图18是肉豆蔻原精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份对肺炎克雷伯菌的MBC图。
[0043] 图19是肉豆蔻原精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份对产超广谱β‑内酰胺酶肺炎克雷伯菌的MBC图。
[0044] 图20是肉豆蔻原精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份对鲍曼不动杆菌的MBC图。

具体实施方式

[0045] 下面结合具体实施对本发明作进一步阐述,但这些实施例不应解释为限制本发明。
[0046] 实施例1肉豆蔻精油精制工艺条件的筛选
[0047] 1、仪器设备:短程薄膜蒸馏仪(德国UIC GmbH,KDL2)
[0048] 2、实验方法
[0049] 2.1肉豆蔻精油的提取
[0050] 取肉豆蔻药材,粉碎,取粉末一定量,加12倍量水,先浸泡1.5h,再用水蒸气蒸馏提取5h,离心,收集精油,避光4℃保存。
[0051] 2.2肉豆蔻精油精制
[0052] 将制备得到的肉豆蔻精油装入分子蒸馏进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水装置温度设定为5℃,刮膜转速240r/min,物料流量1mL/min,改变蒸馏温度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)和蒸馏压力(0Pa、20Pa、40Pa、60Pa、80Pa)对蒸发强度进行调节,筛选分子蒸馏条件。
[0053] 调节蒸发温度和蒸馏压力可以改变各组分分子自由程,实现组分分离。分别收集轻油组份和重油组份,通过计算回收率,确定工艺条件。如图1所示,当进料流速1mL/min、刮膜转速240rpm、冷凝温度5℃、蒸馏压力60Pa时,肉豆蔻重油组分回收率随温度的变化而变化,当温度为90℃时重油回收率最高,故蒸馏温度选择为90℃;当进料流速1mL/min、刮膜转速240rpm、冷凝温度5℃、蒸馏温度为90℃时,随着蒸馏压力的升高,肉豆蔻重油组分呈现先升高后下降的趋势,当蒸馏压力为60Pa时,重油组分回收率相对较高,因此蒸馏压力选择60Pa。基于以上结果,最终确定花椒精油的精制工艺条件为:进料流速1mL/min、刮膜转速
240rpm、冷凝温度5℃、蒸馏温度为90℃、蒸馏压力60Pa。
[0054] 实施例2
[0055] 一种具有抗菌活性的肉豆蔻重油组份,它是由下列方法制备得到的:
[0056] (1)肉豆蔻精油的提取
[0057] 取肉豆蔻药材,粉碎,取粉末一定量,加12倍量水,先浸泡1.5h,再用水蒸气蒸馏提取5h,离心,收集精油,避光4℃保存。
[0058] (2)肉豆蔻精油精制:肉豆蔻精油装入分子蒸馏仪的进料瓶中,冷阱中装入液氮,打开制冷装置,回流水装置温度设定为5℃,刮膜转速240r/min,物料流量1mL/min,蒸馏温度90℃和蒸馏压力60Pa,分别收集肉豆蔻重油组份和轻油组份。
[0059] 实施例3肉豆蔻精油最小抑菌浓度(MIC)测定
[0060] 1、菌种活化:采用划线法将菌种接种到已灭菌的培养基上,置于35℃下培养24h,得已活化的供试菌种,备用。
[0061] 2、供试药液预处理:按实施例2方法分别制备得到的肉豆蔻精油、肉豆蔻轻油组份和肉豆蔻重油组份经0.22μM滤膜过滤除菌,用1%Tween‑80蒸馏水溶液将肉豆蔻精油、肉豆蔻轻油组份和肉豆蔻重油组份稀释为256μL/mL,备用。
[0062] 3、供试菌悬浮液制备:取单个菌落,用灭菌的0.45%生理盐水稀释为0.5麦氏单位8
的菌悬液,即菌液浓度约为10cfu/mL。将上述菌液用无菌生理盐水再稀释1000倍,即得备
5
用菌悬浮液,浓度约为1×10cfu/mL。
[0063] 4、MIC测定:采用微量肉汤稀释法(96孔板法)测定MIC。96孔板中每孔各加入50μL灭菌后的MH肉汤培养基;第一列为阳性对照,加入MH肉汤培养基和测试菌液各50μL;第二列为阴性对照,加入MH肉汤培养基和吐温80 各50μL;第3‑12列每孔各加入待测菌液50μL,再依次加入逐倍稀释的精油50μL,其中测试肉豆蔻精油的浓度依次为64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μL/mL;待药物和菌液上样完毕后,盖好板盖,细菌放置于35℃培养箱培养
24h;以肉眼观察培养基清亮且未见细菌生长的最低浓度判定为该药物的最小抑菌浓度。
(重油组份待培养24h后,加入10μL 2%TTC作为指示剂,35℃培养30min,以是否显色判断最小依据浓度)。
[0064] 5、最小杀菌浓度(MBC)测定
[0065] 用无菌蘸取96孔板中高于MIC(包括MIC浓度)的孔内混合液,于相应培养基分区涂布,细菌置于35℃下培养24h,肉眼观察结果,菌落数小于5个或无菌落生长的最低样品浓度确定为MBC值。
[0066] 6、实验结果
[0067] 6.1本发明测试的肉豆蔻精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份最小抑菌浓度(MIC)如下表1和图2~图13所示。
[0068] 表1肉豆蔻精油、轻油组份和重油组份的MIC(μL/mL)
[0069] 。
[0070] 6.2肉豆蔻精油、肉豆蔻轻油组份、肉豆蔻重油组份最小杀抑菌浓度(MBC)如下表2和图14~图20所示。
[0071] 表2肉豆蔻精油、轻油组份和重油组份的MBC(μL/mL)
[0072]
[0073]
[0074] 由以上实验结果表明,本发明研究发现,通过再次蒸馏精制得到的肉豆蔻重油组份相比肉豆蔻原精油和肉豆蔻轻油,对纹带棒状杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌等具有更好的杀菌活性。
[0075] 以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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