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毛华菊精油及其制备方法和应用
申请号	CN202210508704.4	申请日	2022-05-10	公开(公告)号	CN114854489B	公开(公告)日	2024-03-22
申请人	北京市农林科学院;			发明人	刘华; 陈文丹; 田宇; 黄丛林; 陈海霞;
摘要	本发明属于精油技术领域，具体涉及一种毛华菊精油及其制备方法和应用。所述毛华菊精油包括毛华菊的花和叶子的成分。所述制备方法，包括以下步骤：将毛华菊的花和叶子经水蒸气蒸馏，收集馏出液，即得毛华菊精油。研究发现，该毛华菊精油能够有效抑制和/或灭杀黄单胞菌属的菌株的活性，从而防治黑腐病。
权利要求	1.毛华菊精油在抑制和/或灭杀黄单胞菌属的菌株的活性中的应用，其特征在于，所述毛华菊精油包括毛华菊的花和叶子的成分；所述黄单胞菌属的菌株为野油菜黄单胞菌；所述毛华菊精油的制备方法，包括以下步骤：将毛华菊的花和叶子经水蒸气蒸馏，收集馏出液，即得毛华菊精油；所述蒸馏的时间为1 4 h； ~ 所述毛华菊的花和叶子的质量比为1:3 5。 ~ 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述毛华菊精油包括：樟脑、1‑甲基‑4‑（丙‑2‑基氧基）苯、龙脑、1,8‑桉树脑、立体异构体‑1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑（1‑甲基乙基）‑三环[4.4.0.02,7]癸烷、（R）‑4‑甲基‑1‑（1‑甲基乙基）‑3‑环己烯‑1‑醇、S‑肉豆蔻醛、（1S）‑2, 2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环[2.2.1]庚烷、1‑甲基‑3‑（1‑甲基乙基）‑苯、乙酸龙脑酯、（1S）‑6, 6‑二甲基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇、沙宾烯、乙酸松油酯、匹诺酮。 3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以重量份计，所述毛华菊精油包括：樟脑13 16份、1‑甲基‑4‑（丙‑2‑基氧基）苯6.5 8.5份、龙脑5 7份、1,8‑桉树脑4 6份、立体异构体‑~ ~ ~ ~ 1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑（1‑甲基乙基）‑三环[4.4.0.02,7]癸烷3 5份、（R）‑4‑甲基‑1‑（1‑甲基~ 乙基）‑3‑环己烯‑1‑醇2.5 4.5份、S‑肉豆蔻醛2 4份、（1S）‑2,2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环~ ~ [2.2.1]庚烷2 4份、1‑甲基‑3‑（1‑甲基乙基）‑苯2 4份、乙酸龙脑酯2 4份、（1S）‑6,6‑二甲~ ~ ~ 基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷2 4份、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇2 4份、沙~ ~ 宾烯1 3份、乙酸松油酯1 3份、匹诺酮1 3份。 ~ ~ ~ 4.毛华菊精油在防治黄单胞菌属的菌株引起的黑腐病中的应用，其特征在于，所述毛华菊精油包括毛华菊的花和叶子的成分；所述黄单胞菌属的菌株为野油菜黄单胞菌；所述毛华菊精油的制备方法，包括以下步骤：将毛华菊的花和叶子经水蒸气蒸馏，收集馏出液，即得毛华菊精油；所述蒸馏的时间为1 4 h； ~ 所述毛华菊的花和叶子的质量比为1:3 5。 ~ 5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述毛华菊精油包括：樟脑、1‑甲基‑4‑（丙‑2‑基氧基）苯、龙脑、1,8‑桉树脑、立体异构体‑1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑（1‑甲基乙基）‑三环[4.4.0.02,7]癸烷、（R）‑4‑甲基‑1‑（1‑甲基乙基）‑3‑环己烯‑1‑醇、S‑肉豆蔻醛、（1S）‑2, 2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环[2.2.1]庚烷、1‑甲基‑3‑（1‑甲基乙基）‑苯、乙酸龙脑酯、（1S）‑6, 6‑二甲基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇、沙宾烯、乙酸松油酯、匹诺酮。 6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，以重量份计，所述毛华菊精油包括：樟脑13 16份、1‑甲基‑4‑（丙‑2‑基氧基）苯6.5 8.5份、龙脑5 7份、1,8‑桉树脑4 6份、立体异构体‑~ ~ ~ ~ 1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑（1‑甲基乙基）‑三环[4.4.0.02,7]癸烷3 5份、（R）‑4‑甲基‑1‑（1‑甲基~ 乙基）‑3‑环己烯‑1‑醇2.5 4.5份、S‑肉豆蔻醛2 4份、（1S）‑2,2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环~ ~ [2.2.1]庚烷2 4份、1‑甲基‑3‑（1‑甲基乙基）‑苯2 4份、乙酸龙脑酯2 4份、（1S）‑6,6‑二甲~ ~ ~ 基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷2 4份、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇2 4份、沙~ ~ 宾烯1 3份、乙酸松油酯1 3份、匹诺酮1 3份。 ~ ~ ~ 7.一种具有杀菌功效的复方精油在抑制和/或灭杀黄单胞菌属的菌株的活性中的应用，其特征在于，所述复方精油包括如下体积份数的组分：毛华菊精油4 6份，茶树2 4份，肉桂1 3份，百里香0.5 1.5份； ~ ~ ~ ~ 所述毛华菊精油包括毛华菊的花和叶子的成分；所述黄单胞菌属的菌株为野油菜黄单胞菌；所述毛华菊精油的制备方法，包括以下步骤：将毛华菊的花和叶子经水蒸气蒸馏，收集馏出液，即得毛华菊精油；所述蒸馏的时间为1 4 h； ~ 所述毛华菊的花和叶子的质量比为1:3 5。 ~ 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述毛华菊精油包括：樟脑、1‑甲基‑4‑（丙‑2‑基氧基）苯、龙脑、1,8‑桉树脑、立体异构体‑1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑（1‑甲基乙基）‑三环[4.4.0.02,7]癸烷、（R）‑4‑甲基‑1‑（1‑甲基乙基）‑3‑环己烯‑1‑醇、S‑肉豆蔻醛、（1S）‑2, 2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环[2.2.1]庚烷、1‑甲基‑3‑（1‑甲基乙基）‑苯、乙酸龙脑酯、（1S）‑6, 6‑二甲基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇、沙宾烯、乙酸松油酯、匹诺酮。 9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，以重量份计，所述毛华菊精油包括：樟脑13 16份、1‑甲基‑4‑（丙‑2‑基氧基）苯6.5 8.5份、龙脑5 7份、1,8‑桉树脑4 6份、立体异构体‑~ ~ ~ ~ 1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑（1‑甲基乙基）‑三环[4.4.0.02,7]癸烷3 5份、（R）‑4‑甲基‑1‑（1‑甲基~ 乙基）‑3‑环己烯‑1‑醇2.5 4.5份、S‑肉豆蔻醛2 4份、（1S）‑2,2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环~ ~ [2.2.1]庚烷2 4份、1‑甲基‑3‑（1‑甲基乙基）‑苯2 4份、乙酸龙脑酯2 4份、（1S）‑6,6‑二甲~ ~ ~ 基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷2 4份、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇2 4份、沙~ ~ 宾烯1 3份、乙酸松油酯1 3份、匹诺酮1 3份。 ~ ~ ~
说明书全文	毛华菊精油及其制备方法和应用技术领域 [0001] 本发明属于精油技术领域，具体涉及一种毛华菊精油及其制备方法和应用。背景技术 [0002] 毛华菊(Chrysanthemum vestitum)是菊科菊属的野生草本植物，多年生草本，高约80厘米。茎坚硬，基部木质，密被灰白色绒毛，有被密绒毛的腋芽或腋芽发育成短缩的营养枝。叶质厚，叶形变化大。毛华菊生长在海拔340‑1500米山坡、岩石上、河谷、河岸、荒地及黄土丘陵地，产河南西部、湖北西部及安徽西部。其花入药，具有清热解毒，清肝明目等功效。至今未见有关于毛华菊的花和叶片作为精油的报道。 [0003] 黑腐病，一种真菌，即鞭毛菌亚门棕榈疫霉菌和恶疫霉菌。黑腐病叶片发病，叶缘多处产生黄色斑，后变”V”字形向内发展，叶脉变黑呈网状，逐渐整叶变黄干枯。症状多表现为腐烂，黑斑，叶片发黄等，严重影响主要蔬菜作物、油料作物及景观植物的产量和品质，带来严重的损失。这类致病菌中部分菌株应用生产中常用的杀菌剂效果十分有限，难以抑制其对园艺作物的侵染。 [0004] 野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)是一种能在全球范围内引起所有十字花科植物(如大白菜、甘蓝、花椰菜等)黑腐病的重要病原细菌，是研究植物与病原微生物之间相互关系的模式菌，其代表是野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,简称Xcc)。发明内容 [0005] 为了解决上述技术问题，本发明的发明人基于对本领域的研究，并经过大量的实验摸索，提供了一种毛华菊精油及其制备方法和应用。 [0006] 具体而言，本发明首先提供了一种毛华菊精油，包括毛华菊的花和叶子的成分。 [0007] 本发明研究发现，将毛华菊的花和叶子进行复合蒸馏，所提取到的精油成分，能够有效抑制和/或灭杀黄单胞菌属的菌株的活性，从而防治黑腐病。 [0008] 作为优选，所述毛华菊精油包括：樟脑、1‑甲基‑4‑(丙‑2‑基氧基)苯、龙脑、1,8‑桉树脑、立体异构体‑1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑(1‑甲基乙基)‑三环[4.4.0.02,7]癸烷、(R)‑4‑甲基‑1‑(1‑甲基乙基)‑3‑环己烯‑1‑醇、S‑肉豆蔻醛、(1S)‑2,2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环[2.2.1]庚烷、1‑甲基‑3‑(1‑甲基乙基)‑苯、乙酸龙脑酯、(1S)‑6,6‑二甲基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇、沙宾烯、乙酸松油酯、匹诺酮。 [0009] 作为优选，以重量份计，所述毛华菊精油包括：樟脑13～16份、1‑甲基‑4‑(丙‑2‑基氧基)苯6.5～8.5份、龙脑5～7份、1,8‑桉树脑4～6份、立体异构体‑1‑甲基‑3‑亚甲基‑8‑(1‑甲基乙基)‑三环[4.4.0.02,7]癸烷3～5份、(R)‑4‑甲基‑1‑(1‑甲基乙基)‑3‑环己烯‑1‑醇2.5～4.5份、S‑肉豆蔻醛2～4份、(1S)‑2,2‑二甲基‑3‑亚甲基‑双环[2.2.1]庚烷2～4份、1‑甲基‑3‑(1‑甲基乙基)‑苯2～4份、乙酸龙脑酯2～4份、(1S)‑6,6‑二甲基‑2‑亚甲基‑双环[3.1.1]庚烷2～4份、1,7,7‑三甲基双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑2‑醇2～4份、沙宾烯1～3份、乙酸松油酯1～3份、匹诺酮1～3份。 [0010] 本发明提供的毛华菊精油含有大量的特定萜类、适量的特定芳烃和少量的特定醛、酯，这些物质复配，共同赋予了毛华菊精油对黄单胞菌属的菌株的优异杀菌活性。 [0011] 本发明还提供一种上述毛华菊精油的制备方法，包括以下步骤： [0012] 将毛华菊的花和叶子经水蒸气蒸馏，收集馏出液，即得毛华菊精油。本发明通过水蒸气蒸馏法对毛华菊的花和叶子进行复合提取，工艺简单，无污染。 [0013] 作为优选，所述蒸馏的时间为1～4h。在上述蒸馏时间下，可以保证目标产物被基本上完全蒸馏出来。 [0014] 作为优选，所述毛华菊的花和叶子的质量比为1:3～5。在上述质量比条件下所得毛华菊精油，对黄单胞菌属的菌株的抑菌杀菌效果进一步提升。 [0015] 本发明还提供上述的毛华菊精油在抑制和/或灭杀黄单胞菌属的菌株的活性中的应用。 [0016] 本发明还提供上述的毛华菊精油在防治黄单胞菌属的菌株引起的黑腐病中的应用。 [0017] 作为优选，所述黄单胞菌属的菌株为野油菜黄单胞菌。 [0018] 本发明还提供一种具有杀菌功效的复方精油，包括如下体积份数的组分： [0019] 上述的毛华菊精油4～6份，茶树2～4份，肉桂1～3份，百里香0.5～1.5份。 [0020] 本发明还提供上述的复方精油在抑制和/或灭杀黄单胞菌属的菌株的活性中的应用，述黄单胞菌属的菌株优选为野油菜黄单胞菌。 [0021] 本发明的发明人将上述毛华菊精油与茶树、肉桂、百里香进行合理的伍配，起到了协同增效的作用，相比使用单一毛华菊精油，所得复方精油针对黄单胞菌属的菌株，尤其是野油菜黄单胞菌具有更高效的抑菌/杀菌功效。附图说明 [0022] 图1为本发明实施例中毛华菊花精油针对野油菜黄单胞菌的抑菌效果验证图，其中，A为毛华菊花精油处理组，B为CK对照组。 [0023] 图2为本发明实施例中毛华菊花精油针对野油菜黄单胞菌的杀菌效果验证图，其中，A1～A3为毛华菊花精油处理组，A4为CK对照组。具体实施方式 [0024] 以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但不用来限制本发明的范围。 [0025] 以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。以下实施例中所用的实验原料和相关设备等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 [0026] 实施例1 [0027] 实施例1提供一种毛华菊精油，其制备方法如下： [0028] 将3663g毛华菊的花和叶子部分(花和叶子的质量比为1:4)与7326ml水加入至精油纯露提取装置，采用电磁炉加热。先用2000瓦加热至沸腾，然后调至1200瓦，打开冷凝管中的冷凝水，加热蒸馏，直至没有精油析出，收集馏出液，获得毛华菊精油，其精油提取率为2.87‰。 [0029] 所得毛华菊精油的成分分析： [0030] 1.1色谱质谱采集条件 [0031] HS‑SPME萃取条件：60℃恒温条件下震荡5min，120μmDVB/CWR/PDMS萃取头插入样品顶空瓶，顶空萃取15min，于250℃解析5min，然后进行GC‑MS分离鉴定。采样前萃取头在Fiber Conditioning Station中250℃下老化5min。 [0032] 色谱条件：色谱柱为DB‑5MS毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，载气：He(99.999％)； [0033] 恒流流速1.2mL/min，进样口的为温度250℃，不分流进样，溶剂延迟3.5min。升温程序：柱初始温度为40℃，保持3.5min，以10℃/min升温至100℃，再以7℃/min升温至180℃，最后以25℃/min升温至280℃，保持5min。 [0034] 质谱条件：电子轰击离子源(EI源)，离子源的温度为230℃，四级杆的温度为150℃，质谱接口温度280℃，电子能量70eV，扫描方式为选择离子检测模式(SIM)，定性定量例子精准扫描(GB23200.8‑2016) [0035] 1.2成分分析结果 [0036] 所得毛华菊精油的主要成分及其相对含量见表1。 [0037] 表1 [0038] [0039] [0040] 一共检测出562种物质。其中，含量占比大于0.5％的共有36个，占精油总量的80.64％。 [0041] 毛华菊精油功能验证实验：黄单胞野油菜致病变种 [0042] 选用黄单胞野油菜致病变种(XCC)，取浓度为3×108CFU/ml的菌液100μL均匀涂布于无抗生素的LB平板上，再加入灭菌后的6mm 滤纸片放置于平板的中央，最后取10μL实施例1的毛华菊精油原液加至滤纸片，以不添加精油的滤纸片培养皿作为对照，28℃培养24h。毛华菊精油处理组和对照组各设置三组。 [0043] 1、精油抑菌效果 [0044] 在28℃下培养24h后，菌落生长状况如下图1。毛华菊精油处理组出现明显抑菌带，而CK对照组无抑菌带，说明毛华菊精油对野油菜黄单胞菌野油菜致病变种的生长有一定的抑制作用。 [0045] 毛华菊精油处理组的抑菌带宽度分别为：21.61mm、25.51mm、21.45mm，平均22.86±1.88mm。 [0046] 2、精油杀菌效果 [0047] 分别划取毛华菊精油处理组抑菌带区域和非抑菌带区域的培养基(CK)，在新培养基上进行划线，然后在28℃的恒温培养箱进行培养24h。 [0048] 结果见图2，从抑菌带区域选取的培养基在新培养基培养后，没有菌落长出(参见图2中A1～A3)；而从非抑菌带区域选取的培养基，在新培养基上划线培养后，细菌能正常生长并形成菌落(参见图2中A4)。说明在实施例1的毛华菊精油发挥作用的区域中，细菌被杀死或生长活性受到影响。 [0049] 虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对其作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

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