一种节能环保依诺肝素钠的制备方法 |
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| 申请号 | CN202311505389.0 | 申请日 | 2023-11-13 | 公开(公告)号 | CN117946294A | 公开(公告)日 | 2024-04-30 |
| 申请人 | 河北常山凯库得生物技术有限公司; | 发明人 | 杜曦; 兰舫; 田志鹏; 王焕宇; 赵晓晓; 郄正刚; 白文举; 王志华; 高飞; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及医药 生物 技术领域，提出了一种节能环保依诺肝素钠的制备方法，包括以下步骤：S1、糖胺聚糖盐化物的制备；S2、糖胺聚糖酯化物的制备；S3、依诺肝素溶液制备；S4、冻干。肝素经过盐化物，酯化物制备后，首次实现在降解过程中完成β消除和脱色，溶液直接通过 超滤 纯化得到依诺肝素钠溶液，降解工序结束直接入冻干，得到依诺肝素钠原料。该方法制备的依诺肝素钠产品，工艺路线短，产品收率高，省去了大量 氯化钠 ， 乙醇 和甲醇的使用，产品几乎无甲醇或乙醇等 溶剂 残留，环境友好度高。通过上述技术方案，解决了相关技术中依诺肝素钠的制备工艺工序多、有机 试剂 使用量大，溶剂残留高、依诺肝素钠收率较低的问题。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种节能环保依诺肝素钠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： |
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| 说明书全文 | 一种节能环保依诺肝素钠的制备方法技术领域背景技术[0002] 肝素是由糖醛酸和氨基已糖及其衍生物组成的糖胺聚糖，平均分子量在16000Da。低分子肝素通常由肝素通过化学降解法制备获得，平均分子量在4000‑6500Da。依诺肝素钠是重均3800 5000的低分子肝素，主要用于预防静脉血栓栓塞性疾病和血液透析体外循环~ 的血栓形成，特别是与骨科或普外手术有关的血栓形成。 [0003] 专利CN103554305B公开了一种亲和沉淀介质制备依诺肝素的方法，将肝素苄基酯在高温水浴下经氢氧化钠降解后，调pH过滤，加入2 4倍乙醇沉淀分级，得到依诺肝素钠粗~品。烘干后再次溶解，加入双氧水，控温25 30℃，pH8.5 10.5进行氧化，氧化结束，补加氯化~ ~ 钠，加入2 3倍乙醇沉淀。专利CN100582123C公开了依诺肝素及其制备方法，将肝素苄基酯~ 于氢氧化钠高温水溶液中降解后冷却至室温，稀盐酸调pH至中性，加入15%氯化钠，使用2倍量甲醇分级沉淀。将沉淀物烘干得到依诺粗品后再次溶解，控温30 55℃，pH8.0 11.0进行~ ~ 氧化，氧化结束，溶液调至中性，加入10%氯化钠，2倍量甲醇沉淀。专利CN102603925B公开了一种由粗品肝素钠直接生产依诺肝素钠的方法，将肝素苄基酯经氢氧化钠于高温降解后调pH至中性，加入2 3倍乙醇沉淀分级，分离沉淀得到依诺肝素钠粗品。将依诺肝素钠粗品加~ 入水溶解后，树脂吸附溶液中游离硫酸根，再加入过氧化氢氧化，加入2倍乙醇再次分级沉淀。 [0004] 上述依诺肝素钠的制备工艺中，在降解步骤结束和氧化步骤结束，需要补加大量的氯化钠进行助沉，引入了大量的外来杂质，影响了肝素本身的电离平衡，然后加入溶液体积至少2倍量以上的有机试剂进行分级沉淀，大量的有机试剂的使用增加了生产成本及后续废液后处理工艺。其中降解工序和氧化工序分步进行，然后对中间体依诺肝素钠粗品还需要进行烘干处理，且氧化工序工艺条件苛刻，最终导致依诺肝素钠收率较低，且不利于工业化生产。因此，制备出一种高收率的依诺肝素钠的方法是至关重要的。 发明内容[0005] 本发明提出一种节能环保依诺肝素钠的制备方法，解决了相关技术中依诺肝素钠的制备工艺工序多、有机试剂使用量大、依诺肝素钠收率较低的问题。 [0006] 本发明的技术方案如下：本发明提出一种节能环保依诺肝素钠的制备方法，包括以下步骤： S1、将肝素钠原料加水溶解，加入苄索氯铵溶液，制备得到糖胺聚糖盐化物； S2、将所述糖胺聚糖盐化物加入N，N‑二甲基甲酰胺中溶解，加入氯化苄，反应，加入乙酸钠乙醇溶液进行沉淀，沉淀物洗涤干燥得到糖胺聚糖酯化物； S3、将所述糖胺聚糖酯化物加水溶解，在50 60℃下，加入降解剂进行降解反应，加~ 入氧化剂，进行脱色纯化，调pH至6.5 7.0，过滤，超滤得到依诺肝素钠溶液； ~ S4、将依诺肝素钠溶液除菌，冻干，得到依诺肝素钠。 [0008] 作为进一步的技术方案，所述肝素钠原料包括猪源粘膜肝素或羊源粘膜肝素。 [0009] 作为进一步的技术方案，所述糖胺聚糖盐化物与N，N‑二甲基甲酰胺的质量体积比为1:5 10g/mL。~ [0010] 作为进一步的技术方案，所述糖胺聚糖盐化物与氯化苄的质量体积比为1:0.2~2g/mL。 [0012] 作为进一步的技术方案，所述乙酸钠乙醇溶液的质量浓度为8% 10%。~ [0013] 作为进一步的技术方案，所述步骤S3中，降解反应的时间为1 3h；脱色纯化的时间~为3 6h。 ~ [0014] 作为进一步的技术方案，所述糖胺聚糖酯化物与降解剂的质量比为1:0.05 0.1。~ [0015] 作为进一步的技术方案，所述氧化剂的加入体积为所述降解反应得到的降解液体积的0.3% 1.0%。~ [0016] 作为进一步的技术方案，所述步骤S3中，超滤为使用1KD超滤膜进行超滤，超滤过程补水量为溶液体积的1 2倍，所述依诺肝素钠溶液的体积为所述超滤前药液体积的1/3~ ~1/2。 [0017] 本发明的工作原理及有益效果为：1、本发明中，肝素钠原料依次经过盐化、酯化后进入降解工序，在降解工序和脱色纯化工序中不需要补加氯化钠和有机试剂进行分级沉淀，首次实现在降解过程中完成β消除和脱色，脱色纯化后的溶液直接通过超滤纯化、冻干得到依诺肝素钠，省去了大量氯化钠，乙醇和甲醇的使用，产品几乎无甲醇或乙醇等溶剂残留，环境友好度高，无后续有机废液废甲醇和废乙醇处理负担，生产过程无防爆要求，操作工人无特殊防护需求。 [0018] 2、本发明中，在脱色纯化过程中不需要控制温度和pH，设备要求低，适用范围广，适合工业化应用。 [0019] 3、本发明中，生产依诺肝素钠的工艺路线短，中间体控制精确，不需要反复操作调整控制指标，制得的依诺肝素钠产品质量远优于当前依诺肝素钠CP/EP/USP药典标准，且收率高达72%以上。 [0021] 下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。 具体实施方式[0023] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。 [0024] 实施例1S1、糖胺聚糖盐化物的制备 取猪源肝素钠100g加入1000mL纯化水搅拌溶解，另取250g的苄索氯铵加入1500mL纯化水溶解，将其混合，搅拌反应2h，抽滤，干燥，得到 305g糖胺聚糖盐化物。 [0025] S2、糖胺聚糖酯化物的制备将上述得到的糖胺聚糖盐化物加入2.4L的N，N‑二甲基甲酰胺中搅拌溶解，加入 180mL的氯化苄，在39 41℃条件下，搅拌反应8h后停止，加入7.7L的8wt%乙酸钠乙醇溶液进~ 行沉淀，得到的沉淀物用乙醇洗涤并脱水，干燥，制备得到 103g糖胺聚糖酯化物。 [0026] S3、依诺肝素溶液的制备将上述得到的糖胺聚糖酯化物加入2L纯化水搅拌溶解，升温至50 60℃，加入7.8g~ 氢氧化钠进行降解，控制温度57 59℃，反应1.5h后停止控温，加入12mL过氧化氢，继续搅拌~ 4.5h，调pH至6.8，过滤，将滤液使用1KD超滤膜进行超滤，期间补水3L，将滤液超滤至800mL停止，得到依诺肝素钠溶液。 [0027] S4、冻干将上述依诺肝素钠溶液过0.2μm滤芯后，冻干，得到羊源依诺肝素钠精品72.5g，依诺肝素钠精品重量收率为72.5%。 [0028] 实施例2S1、糖胺聚糖盐化物的制备 取羊源肝素钠2kg加入20L纯化水搅拌溶解，另取5.6kg的苄索氯铵加入30L纯化水溶解，将其混合，搅拌反应2h，抽滤，干燥，得到6.081kg糖胺聚糖盐化物。 [0029] S2、糖胺聚糖酯化物的制备将上述得到的糖胺聚糖盐化物加入30L的N，N‑二甲基甲酰胺中搅拌溶解，加入6L的氯化苄，在34 36℃条件下，搅拌反应20h后停止，加入90L的8wt%乙酸钠乙醇溶液进行沉~ 淀，得到的沉淀物用乙醇洗涤并脱水，干燥，制备得到2.012kg糖胺聚糖酯化物。 [0030] S3、依诺肝素溶液的制备将上述得到的糖胺聚糖酯化物加入40L纯化水搅拌溶解，升温至50 60℃，加入~ 144g氢氧化钠进行降解，控制温度55 57℃，反应2h后停止控温，加入160mL过氧化氢，继续~ 搅拌4h，调pH至6.8，过滤，将滤液使用1KD超滤膜进行超滤，期间补水50L，将滤液超滤至15L停止，得到依诺肝素钠溶液。 [0031] S4、冻干将上述依诺肝素钠溶液过0.2μm滤芯后，冻干，得到依诺肝素钠精品1.460kg，依诺肝素钠精品重量收率为73%。 [0032] 实施例3S1、糖胺聚糖盐化物的制备 取羊源肝素钠2kg加入20L纯化水搅拌溶解，另取5.6kg的苄索氯铵加入30L纯化水溶解，将其混合，搅拌反应2h，抽滤，干燥，得到6.108kg糖胺聚糖盐化物。 [0033] S2、糖胺聚糖酯化物的制备将上述得到的糖胺聚糖盐化物加入60L的N，N‑二甲基甲酰胺中搅拌溶解，加入 1.3L的氯化苄，在43 45℃条件下，搅拌反应5h后停止，加入90L的8wt%乙酸钠乙醇溶液进行~ 沉淀，得到的沉淀物用乙醇洗涤并脱水，干燥，制备得到2.095kg糖胺聚糖酯化物。 [0034] S3、依诺肝素溶液的制备将上述得到的糖胺聚糖酯化物加入40L纯化水搅拌溶解，升温至50 60℃，加入~ 200g碳酸钠进行降解，控制温度51 53℃，反应3h后停止控温，加入400mL过氧乙酸，继续搅~ 拌3h10min，调pH至6.8，过滤，将滤液使用1KD超滤膜进行超滤，期间补水80L，将滤液超滤至 20L停止，得到依诺肝素钠溶液。 [0035] S4、冻干将上述依诺肝素钠溶液过0.2μm滤芯后，冻干，得到依诺肝素钠精品1.456kg，依诺肝素钠精品重量收率为72.8%。 [0036] 实施例4S1、糖胺聚糖盐化物的制备 取羊源肝素钠2kg加入20L纯化水搅拌溶解，另取5.6kg的苄索氯铵加入30L纯化水溶解，将其混合，搅拌反应2h，抽滤，干燥，得到6.019kg糖胺聚糖盐化物。 [0037] S2、糖胺聚糖酯化物的制备将上述得到的糖胺聚糖盐化物加入48L的N，N‑二甲基甲酰胺中搅拌溶解，加入12L的氯化苄，在30 32℃条件下，搅拌反应24h后停止，加入90L的8wt%乙酸钠乙醇溶液进行沉~ 淀，得到的沉淀物用乙醇洗涤并脱水，干燥，制备得到2.069kg糖胺聚糖酯化物。 [0038] S3、依诺肝素溶液的制备将上述得到的糖胺聚糖酯化物加入40L纯化水搅拌溶解，升温至50 60℃，加入 ~ 105g氢氧化钠进行降解，控制温度54 56℃，反应1h后停止控温，加入120 mL过氧化氢，继续~ 搅拌5h50min，调pH至6.8，过滤，将滤液使用1KD超滤膜进行超滤，期间补水40L，将滤液超滤至14 L停止，得到依诺肝素钠溶液。 [0039] S4、冻干将上述依诺肝素钠溶液过0.2μm滤芯后，冻干，得到依诺肝素钠精品1.511 kg，依诺肝素钠精品重量收率为75.6%。 [0040] 将实施例1 4制备得到的依诺肝素钠精品按照欧洲药典EP10.5进行1.6‑脱水衍生~物、分子量及分布、效价、乙醇、甲醇检测，检测结果如表1所示： 表1实施例1 4制备得到的依诺肝素钠精品检测结果 ~ [0041] 由表1中实施例1 4的数据可以得知，本发明制备的依诺肝素钠精品符合依诺肝素~钠CP/EP/USP药典标准且质量远高于当前药典标准，收率高达72%以上，乙醇、甲醇含量远低于当前CP/EP/USP药典标准。 |
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