一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥及其制备方法 |
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| 申请号 | CN202410042819.8 | 申请日 | 2024-01-11 | 公开(公告)号 | CN117865748A | 公开(公告)日 | 2024-04-12 |
| 申请人 | 商丘师范学院; | 发明人 | 裴冬丽; 娄喜艳; 朱晓琴; 张玉阳; 张梦妃; 吕虹艺; | ||||
| 摘要 | 本 发明 属于 植物 病害防治技术领域，具体涉及一种防治植物病害的复合 微 生物 液体菌肥及其制备方法。所述复合微生物液体菌肥物按 质量 份数计由以下原料制成：复合微生物菌剂50～60份、 生物炭 15～25份、 水 600～700份；所述复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉1～9份、萝卜浆干粉0.2～1.8份、复合微生物菌种1～7份、麦麸0.1～0.9份、 黄腐酸 钾 0.2～1.2份、谷 氨 酸钠0.02～0.18份和水84～100份。本发明所提供的复合微生物液体菌肥可以在丹参植株生长过程中向 土壤 中缓慢释放 碳 元素，保证复合微生物菌剂中的复合微生物菌种能更加稳定地生长，进而保证丹参植株在生长过程中有充足的抵御病害的能 力 ，从而起到防治病害的作用。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥，其特征在于，所述复合微生物液体菌肥物按质量份数计由以下原料制成：复合微生物菌剂50～60份、生物炭15～25份、水600～700份； |
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| 说明书全文 | 一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥及其制备方法技术领域[0001] 本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥及其制备方法。 背景技术[0002] 丹参是一种双子叶植物唇形科鼠尾草属多年生直立草本植物，主要分布中国安徽、山西、河北、四川、江苏、河南等地。丹参是种根入药，含丹参酮，为强壮性通经剂，有祛瘀、生新、活血、调经等效用，为妇科要药，具有较好的药学活性。目前，在全国多地均有人工栽培的丹参。 [0003] 丹参喜气候温和，光照充足，空气湿润，土壤肥沃的环境。但是，在夏季高温多雨季节，丹参易发生根腐病，植株根部发黑，地上部枯萎。因此，在丹参种植的过程中不仅需要施用肥料保证其有充足的营养以抵御病害，还需要给予特殊的防治病害的药剂以防止病害对其造成危害。目前，现有的丹参防治病害使用的药剂多为化学药剂，比如多菌灵。此类药剂虽然可以在短期内起到防治病害的作用，但是不宜长期使用。由于化学药剂本身具有毒性，若长时间使用，此类药剂会在丹参植株上残留积累，影响丹参植株的生长，进而会阻碍丹参根部内丹参酮等有效成分的生成，影响其药效价值。因此，开发新的能够防治丹参且对环境友好的防治方法十分必要。 发明内容[0004] 为解决现有技术中由于化学药剂本身具有毒性，若长时间使用，此类药剂会在丹参植株上残留积累，影响丹参植株的生长，进而会阻碍丹参根部内丹参酮等有效成分的生成，影响其药效价值的问题，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： [0006] 所述复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉1～9份、萝卜浆干粉0.2～1.8份、复合微生物菌种1～7份、麦麸0.1～0.9份、黄腐酸钾0.2～1.2份、谷氨酸钠0.02～0.18份和水84～100份； [0008] 优选地，所述复合微生物液体菌肥物按质量份数计由以下原料制成：复合微生物菌剂53～62份、生物炭17～23份、水630～670份； [0009] 所述复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉3～7份、萝卜浆干粉0.5～1.5份、复合微生物菌种2～6份、麦麸0.4～.0.6份、黄腐酸钾0.6～0.8份、谷氨酸钠0.05～0.15份和水90～94份。 [0010] 优选地，所述复合微生物菌种为酵母菌、凝结芽孢杆菌、植物乳酸菌、链霉菌按照质量比0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5混合得到的混合菌种。 [0011] 优选地，所述复合微生物菌种为酵母菌、凝结芽孢杆菌、植物乳酸菌、链霉菌按照质量比1：1：1：1混合得到的混合菌种。 [0012] 优选地，所述玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，匀浆粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆干燥得到所述玉米浆干粉。 [0013] 优选地，所述鲜玉米浆于48～52℃进行干燥。 [0014] 优选地，所述萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，匀浆粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆干燥得到所述萝卜浆干粉。 [0015] 优选地，所述鲜萝卜浆于48～52℃进行干燥。 [0016] 优选地，所述复合微生物菌剂的制备方法如下： [0017] 按照质量份数分别称取以下原料：玉米浆干粉、萝卜浆干粉、复合微生物菌种、麦麸、黄腐酸钾、谷氨酸钠和水； [0018] 取水边加热边加入玉米浆干粉、萝卜浆干粉、麦麸、黄腐酸钾、谷氨酸钠，边加入边搅拌，混匀后加热至80℃，密封，灭菌； [0020] 优选地，所述复合微生物液体菌肥的制备方法包括如下步骤： [0021] 按照质量份数分别称取各原料；将生物炭加入预热25～40℃的水中，混匀，得到混合溶液； [0022] 再将复合微生物菌剂加入混合溶液中，混匀，即得所述复合微生物液体菌肥。 [0023] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： [0024] 1、本发明提供了一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥，该复合微生物液体菌肥的原料均为无毒性的原料制备而成，在长时间使用时，在丹参植株上残留积累，也不会对丹参植株产生毒性危害，不会影响丹参植株的生长，进而不会阻碍丹参根部内丹参酮等有效成分的生成。并且，该复合微生物液体菌肥将复合微生物菌剂和生物炭配合在一起使用，还可以在丹参植株生长过程中向土壤中缓慢释放碳元素，保证复合微生物菌剂中的复合微生物菌种能更加稳定地生长，进而保证丹参植株在生长过程中有充足的抵御病害的能力，从而起到防治病害的作用。 [0025] 2、本发明制备复合微生物菌剂使用的复合微生物菌种包括酵母菌、凝结芽孢杆菌、植物乳酸菌、链霉菌。这四种微生物菌种配合应用，可以实现协同抗菌的效果。 [0026] 3、本发明提供的防治植物病害的复合微生物液体菌肥，使用该复合微生物液体菌肥对丹参进行病害防治，可以解决现有技术中使用化学药剂不宜长期使用的问题。本发明所提供的复合微生物液体菌肥对丹参根腐病病原菌有显著的抑制作用，表明本发明所提供的该复合微生物液体菌肥可以用于丹参根腐病的防治。 [0027] 4、本发明提供的防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法简单，只需要将各原料、复合微生物菌剂与水按照一定比例混合便可制得。并且，该复合微生物液体菌肥中各原料均对环境友好，不会带来环境及食品安全问题。 具体实施方式[0028] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 [0029] 下面实施例所用的实验材料如下： [0030] 1.菌株 [0031] 凝结芽孢杆菌BCN019购买自山东达维药业有限公司。 [0032] 胶红酵母AS2.1034购买自上海北诺生物科技有限公司。 [0033] 植物乳酸菌购买购自为北京百欧博伟生物技术有限公司，平台编号：Bio‑53266。 [0034] 细黄链霉菌购买自上海信帆生物科技有限公司，货号：XF23626。 [0035] 病原菌为引起丹参根腐病的病原腐皮镰刀菌。 [0036] 2.培养基 [0038] PDA液体培养基的配方为：土豆200g、蔗糖20g、水1000mL；PDA固体培养基的配方为：PDA液体培养基中加入琼脂20g/L。 [0039] MRS液体培养基的配方为：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、醋酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、吐温‑80 1ml/L、硫酸镁0.6g/L、硫酸锰0.05g/L、磷酸氢二钾2g/L、琼脂20g/L、碳酸钙20g/L；MRS固体培养基的配方为：MRS液体培养基中加入琼脂20g/L。 [0040] 高氏一号液体培养基的配方为：可溶性淀粉20g、NaCl 0.5g、KNO31g、K2HPO4·3H2O 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g，去离子水1000mL。调整pH至7.5；高氏一号固体培养基的配方为：高氏一号液体培养基加琼脂1.6％。 [0041] 凝结芽孢杆菌液体菌种培养基的配方为：葡萄糖10g/L、玉米粉8g/L、豆粕粉25g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸锰0.5g/L、磷酸二氢钠0.5g/L、磷酸氢二钠2.3g/L，调节pH至7.2。 [0042] 酵母菌液体菌种培养基的配方为：葡萄糖10g/L、酵母膏3g/L、蛋白胨5g/L、硫酸铵5g/L、硫酸镁0.5g/L。 [0043] 乳酸菌液体菌种培养基的配方为：葡萄糖50g/L、蛋白胨15g/L、牛肉膏7.5g/L、氯化钠1g/L、硫酸锰0.01g/L、硫酸镁0.2g/L、醋酸钠0.5g/L、碳酸钙50g/L，调节pH至6.0。 [0044] Sabouraud’s培养基的配方为：蛋白胨10g、琼脂20g、葡萄糖糖40g、水1000Ml。 [0045] 实施例1 [0046] 一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0047] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0048] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1：1混合得到的混合菌种。 [0049] 生物炭购自郑州昊森环保科技有限公司，货号：FT2025。 [0050] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0051] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0052] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0053] 1.凝结芽孢杆菌液体菌种的制备 [0054] 将凝结芽孢杆菌BCN019接种在LB固体培养基的平板上，然后纯化4次以得到单菌落，用接种针挑取单菌落至250mL LB液体培养基中，37℃，180rpm震荡培养48h。取10mL前述培养物，室温2500rpm离心10min收集菌体。用无菌生理盐水重悬菌体并调整OD600至7.0，然后按照接种量的5％吸取菌悬液加入凝结芽孢杆菌液体菌种培养基中，37℃，180rpm震荡培养24h，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿/mL，即得作为。 [0055] 2.胶红酵母菌液体菌种的制备 [0056] 将胶红酵母菌AS2.1034接种在PDA固体培养基的平板上，然后纯化4次以得到单菌落，用接种针挑取单菌落至250mL LB液体培养基中，37℃，180rpm震荡培养48h。取10mL前述培养物，室温2500rpm离心10min收集菌体。用无菌生理盐水重悬菌体并调整OD600至7.0，然后按照接种量的5％吸取菌悬液加入酵母菌液体菌种培养基中，37℃，180rpm震荡培养24h，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿/mL，即得作为酵母菌液体菌种。 [0057] 3、植物乳酸菌液体菌种的制备 [0058] 将植物乳酸菌接种在PDA固体培养基的平板上，然后纯化4次以得到单菌落，用接种针挑取单菌落至250mL LB液体培养基中，37℃，180rpm震荡培养48h。取10mL前述培养物，室温2500rpm离心10min收集菌体。用无菌生理盐水重悬菌体并调整OD600至7.0，然后按照接种量的5％吸取菌悬液加入植物乳酸菌液体菌种培养基中，37℃，180rpm震荡培养24h，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿/mL，即得作为植物乳酸菌液体菌种。 [0059] 4、链霉菌液体菌种的制备 [0060] 将细黄链霉菌接种在高氏一号固体培养基的平板上，然后纯化4次以得到单菌落，用接种针挑取单菌落至250mL LB液体培养基中，37℃，180rpm震荡培养48h。取10mL前述培养物，室温2500rpm离心10min收集菌体。用无菌生理盐水重悬菌体并调整OD600至7.0，然后按照接种量的5％吸取菌悬液加入高氏一号液体培养基中，37℃，180rpm震荡培养24h，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿/mL，即得作为链霉素液体菌种。 [0061] 5、复合微生物菌剂的制备 [0062] (1)分别称取以下质量分数的原料：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0063] 其中，复合微生物菌种包括1份凝结芽孢杆菌液体菌种、1份酵母菌液体菌种、1份植物乳酸菌液体菌种和1份链霉素液体菌种。 [0064] (2)向搅拌罐中加入水，边加热边加入玉米浆干粉、萝卜浆干粉、麦麸、黄腐酸钾、谷氨酸钠，边加入边搅拌，待温度加热至80℃停止加热，密封，置于120℃灭菌。 [0065] (3)灭菌后待温度降至35℃后，加入复合微生物菌种，密封搅拌10min，置于室温发酵20天；发酵后得到复合微生物菌剂。 [0066] 6、复合微生物液体菌肥的制备 [0067] 分别称取以下质量分数的原料；复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0068] 将生物炭加入预热30℃的水中，混匀，得到混合溶液。 [0069] 再将复合微生物菌剂加入混合溶液中，混匀，即得所述复合微生物液体菌肥。 [0070] 其中，复合微生物菌剂与混合溶液的质量体积比为1:20。 [0071] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0072] 将上述步骤中制备好的复合微生物液体菌肥与水按照体积比1:1稀释后，直接在丹参植株定植之后，施于植株周围的土壤中。第二次施肥是在丹参长到20cm，每年4月，施用相同制备方法和浓度的复合微生物液体菌肥。第三次施肥是在丹参开花期间，夏季6月，施用相同制备方法和浓度的复合微生物液体菌肥。 [0073] 实施例2 [0074] 一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂50份、生物炭15份、水600份。 [0075] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉1份、萝卜浆干粉0.2份、复合微生物菌种1份、麦麸0.1份、黄腐酸钾0.2份、谷氨酸钠0.02份和水84份。 [0076] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1：1混合得到的混合菌种。 [0077] 生物炭购自郑州昊森环保科技有限公司，货号：FT2025。 [0078] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0079] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0080] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0081] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0082] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同，区别在于： [0083] 在丹参长到20cm，每年4月，第二次施用复合微生物液体菌肥。在丹参开花期间，夏季7月，第三次施用复合微生物液体菌肥。 [0084] 实施例3 [0085] 一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂60份、生物炭25份、水700份。 [0086] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉9份、萝卜浆干粉1.8份、复合微生物菌种7份、麦麸0.9份、黄腐酸钾1.2份、谷氨酸钠0.18份和水100份。 [0087] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1：1混合得到的混合菌种。生物炭购自郑州昊森环保科技有限公司，货号：FT2025。 [0088] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0089] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0090] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0091] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0092] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同，区别在于： [0093] 在丹参长到20cm，每年5月，第二次施用复合微生物液体菌肥。在丹参开花期间，夏季7月，第三次施用复合微生物液体菌肥。 [0094] 实施例4 [0095] 一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂53份、生物炭17份、水630份。 [0096] 所述复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉3份、萝卜浆干粉0.5份、复合微生物菌种2份、麦麸0.4份、黄腐酸钾0.6份、谷氨酸钠0.05份和水90份。 [0097] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1：1混合得到的混合菌种。 [0098] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0099] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0100] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0101] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0102] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1相同。 [0103] 实施例5 [0104] 一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂62份、生物炭23份、水670份。 [0105] 所述复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉7份、萝卜浆干粉1.5份、复合微生物菌种6份、麦麸.0.6份、黄腐酸钾0.8份、谷氨酸钠0.15份和水94份。 [0106] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1：1混合得到的混合菌种。 [0107] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0108] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0109] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0110] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0111] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0112] 实施例6 [0113] 一种防治植物病害的复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂54份、生物炭19份、水645份。 [0114] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉4份、萝卜浆干粉0.9份、复合微生物菌种4份、麦麸0.4份、黄腐酸钾0.6份、谷氨酸钠0.05份和水92份。 [0115] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1：1混合得到的混合菌种。 [0116] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0117] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0118] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0119] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0120] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0121] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0122] 对比例1 [0123] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0124] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0125] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比0.4：0.4：0.4：0.4混合得到的混合菌种。 [0126] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0127] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0128] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0129] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0130] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0131] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0132] 对比例2 [0133] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0134] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0135] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1.1：1.1：1.1：1.1混合得到的混合菌种。 [0136] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0137] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0138] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0139] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0140] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0141] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0142] 对比例3 [0143] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0144] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0145] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、凝结芽孢杆菌BCN019、按照质量比1：1混合得到的混合菌种。 [0146] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0147] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0148] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0149] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0150] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0151] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0152] 对比例4 [0153] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0154] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0155] 其中，所述复合微生物菌种为植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1混合得到的混合菌种。 [0156] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0157] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0158] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0159] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0160] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0161] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0162] 对比例5 [0163] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0164] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0165] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、植物乳酸菌按照质量比1：1混合得到的混合菌种。 [0166] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0167] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0168] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0169] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0170] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0171] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0172] 对比例6 [0173] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0174] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0175] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、细黄链霉菌按照质量比1:1混合得到的混合菌种。 [0176] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0177] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0178] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0179] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0180] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0181] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0182] 对比例7 [0183] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0184] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0185] 其中，所述复合微生物菌种为胶红酵母菌AS2.1034、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1混合得到的混合菌种。 [0186] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0187] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0188] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0189] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0190] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0191] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0192] 对比例8 [0193] 一种复合微生物液体菌肥按质量份数计由以下原料组成：复合微生物菌剂55份、生物炭20份、水650份。 [0194] 复合微生物菌剂按质量份数计由以下原料制成：玉米浆干粉5份、萝卜浆干粉1份、复合微生物菌种4份、麦麸0.5份、黄腐酸钾0.7份、谷氨酸钠0.1份和水92份。 [0195] 其中，所述复合微生物菌种为凝结芽孢杆菌BCN019、植物乳酸菌、细黄链霉菌按照质量比1：1：1混合得到的混合菌种。 [0196] 玉米浆干粉的制备方法为：取新鲜玉米颗粒，用匀浆机粉碎，得到鲜玉米浆；鲜玉米浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到玉米浆干粉。低温喷雾干燥机购自广东中冷制冷科技有限公司。 [0197] 萝卜浆干粉的制备方法为：取新鲜萝卜，用匀浆机粉碎，得到鲜萝卜浆；将鲜萝卜浆经低温喷雾干燥机在50℃下干燥得到萝卜浆干粉。 [0198] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法，包括如下步骤： [0199] 上述防治植物病害的复合微生物液体菌肥的制备方法与实施例1基本相同。 [0200] 该复合微生物液体菌肥用于防治丹参根腐病的实施方法，包括如下步骤： [0201] 本实施例中制备得到的复合微生物液体菌肥的实施方法与实施例1基本相同。 [0202] 下面结合试验说明本发明防治植物病害的复合微生物液体菌肥的效果(下面简称菌肥)。 [0203] 1、抑菌试验(不同倍数复合微生物液体菌肥稀释液对腐皮镰刀菌的抑制作用)[0204] 挑取纯化的腐皮镰刀菌菌饼，将其接种至上述Sabouraud’s培养基的平板中心，在平板上距离中心2.5cm的上下左右四个点放置牛津杯，向牛津杯内加入100μL上述实施例1所制备的复合微生物液体菌肥，平板于25℃培养10d，同时设置在四个点上加入100μL LB液体培养基的牛津杯作为空白对照。利用十字交叉法测量腐皮镰刀菌菌落的直径，计算复合微生物液体菌肥对腐皮镰刀菌的生长抑制率，实验设置三个生物学重复。生长抑制率计算公式如下： [0205] 生长抑制率＝(对照菌落直径‑处理菌落直径)/对照菌落直径×100％； [0206] 此处，对照菌指的是未经任何处理的腐皮镰刀菌，处理菌指的是复合微生物液体菌肥处理条件下生长的拟轮枝镰孢菌。 [0207] 将复合微生物液体菌肥按照10倍、25倍、50倍、75倍、100倍分别进行稀释，共进行六组试验，分别标记为Ⅰ组(复合微生物液体菌肥原液)、Ⅱ组(复合微生物液体菌肥的10倍稀释液)、Ⅲ组(复合微生物液体菌肥的25倍稀释液)、Ⅳ组(复合微生物液体菌肥的50倍稀释液)、Ⅴ组(复合微生物液体菌肥的75倍稀释液)、Ⅵ组(复合微生物液体菌肥的100倍稀释液)。 [0208] 通过上述平板对峙试验，测量菌落直径并计算平均值，结果如表1所示。 [0209] 表1不同处理组对腐皮镰刀菌的抑菌情况 [0210] [0211] [0212] 由表1可知，本发明制备的复合微生物液体菌肥对拟轮枝镰孢菌具有显著的抑制作用，复合微生物液体菌肥原液、复合微生物液体菌肥的10倍稀释液、复合微生物液体菌肥的25倍稀释液均对腐皮镰刀菌有较高的抑制作用，说明本发明制备的生防菌剂能够有效的抑制腐皮镰刀菌，复合微生物液体菌肥原液的抑菌效果最好。 [0213] 2、田间试验 [0214] 实验地：试验地选择在商丘市某丹参栽培基地，试验田面积3亩，试验施肥时丹参根腐病情况比较严重。 [0215] 试验方法：以本发明实施例1～6、对比1～8以及市售的黑老虎复合微生物生态肥料(对照组1)和阿姆斯复合微生物肥料(对照组2)、纯水(对照组3)为施用对象，分别进行试验。下面仅以实施例1为例，对具体的步骤进行说明。下面简称为：菌肥。 [0216] 其中，黑老虎复合微生物生态肥料购自江西瑞博特生物科技有限公司。阿姆斯复合微生物肥料购自北京世纪阿姆斯生物技术有限公司。 [0217] 待丹参植株定植之后，首次施肥；在丹参长到20cm，每年4月时，进行第二次施肥；在丹参开花期间，夏季6月时，进行第三次施肥。首次施肥是将菌肥兑水稀释250倍，喷洒丹参植株全株。第二次以及后期施肥是将将药菌肥稀释250倍，滴灌于丹参根部或者间隔喷洒一次和滴灌一次。根据丹参的生长情况进行施肥，至少保证每年施肥三次，至多不超过四次。每次的施肥量为每颗50～60mL/次。 [0218] 防治效果计算分别在施用菌剂前和施用菌剂10d后统计丹参的发病植株个数，随机调查30株丹参植株，并计算防治效果，结果如下表所示。 [0219] 防治效果的计算公式为：(施用菌剂前发病植株个数‑施用菌剂后发病植株个数)/施用菌剂前发病植株个数*100％。 [0220] 表2防治效果 [0221] 处理组 防治效果实施例1 90％ 实施例2 90％ 实施例3 90％ 实施例4 90％ 实施例5 90％ 实施例6 90％ 对比例1 70％ 对比例2 69％ 对比例3 72％ 对比例4 55％ 对比例5 40％ 对比例6 45％ 对比例7 60％ 对比例8 68％ 对照组1 50％ 对照组2 60％ 对照组3 0 [0222] 由表2可知，本发明的实施例1～6制备的复合微生物液体菌肥施用10d后，对丹参根腐病的防治效果高达90％以上，效果较为显著。并且，实施例1～6制备的复合微生物液体菌肥防治效果优于对比例1～8制备的复合微生物液体菌肥与对照组1～3的复合微生物肥料的防治效果。本发明利用不同功能的微生物菌混合使用，能够实现功能互补，兼防多种病虫害，作用持久的协同防治效果。采用本发明的复合微生物液体菌肥进行喷施或/和灌根达到对丹参根腐病全生育期各阶段都有防治的效果。 [0223] 同时，本发明对上述各菌肥使用后，对整个试验田栽植的丹参植株幼苗存活率、植株存活率及最终的产量进行了统计，幼苗存活率为整个试验田中单位体积内，定植后存活的幼苗与移栽的幼苗数的比值；植株存活率为整个试验田单位体积内存活的植株与幼苗正常长大成为的总植株数的比值；产量为整个试验田单位体积内收获得到的丹参与存活的丹参总植株数的比值。结果见表3： [0224] 表3存活率和产量 [0225] [0226] [0227] 实施例1～6的幼苗存活率远高于对比例1～8与对照组1～2；实施例1～6的植株存活率远高于对比例1～8与对照组1～2；实施例1～6的产量远高于对比例1～8与对照组1～2。该结果表明，本发明实施例1～6提供的复合微生物液体菌肥对定植后的丹参幼苗、植株的生长具有促进生长的作用，且效果比对比例1～8与对照例1～2的效果要好。与对比例1～ 8制备的复合微生物液体菌肥相比，实施例1～6提供的复合微生物液体菌肥中使用的复合微生物菌种为酵母菌、凝结芽孢杆菌、植物乳酸菌、链霉菌按照质量比0.5～1.5：0.5～1.5： 0.5～1.5：0.5～1.5混合得到的混合菌种。该结果表明，本发明所提供的复合微生物液体菌肥中使用的复合微生物菌种具有好的促进丹参植株生长的作用。 [0228] 由上述结果可知，本发明提供的复合微生物液体菌肥对丹参植株全生长周期都有较好的促生作用，可以在保证丹参植株在生长过程中有充足的营养以抵御病害，进而起到防治病害的作用。 [0229] 同时，本发明还对上述各菌肥使用后，在丹参的采摘期、采摘期前1个月、采摘期前2个月、采摘期前3个月、采摘期前6个月时，对丹参根部中丹参酮的含量进行了检测，检测方法参见杨世高、王维云等“丹参中丹参酮类物质高效液相色谱检测方法研究”中的检测方法。结果见表4。 [0230] 表4丹参酮的含量检测结果 [0231] [0232] [0233] 由表4可知，实施例1～6制备的各菌肥使用后的丹参在采摘期、采摘期前1个月、采摘期前2个月、采摘期前3个月、采摘期前6个月时的丹参根部中丹参酮的含量远高于对比例1～8制备的各菌肥使用后、以及对照组1与对照组2提供的复合微生物肥料使用后的丹参在采摘期、采摘期前1个月、采摘期前2个月、采摘期前3个月、采摘期前6个月时的丹参根部中丹参酮的含量。 [0234] 上述实验结果表明，实施例1～6制备的各菌肥对丹参在采摘期以及采摘期前6个月内体内丹参酮类物质总含量的累积影响不大，对比例1～8提供的菌肥对丹参在采摘期以及采摘期前6个月内体内丹参酮类物质总含量的累积影响较大，尤其是在丹参采摘前2～6个月。对照组1与对照组2提供的菌肥对丹参在采摘期以及采摘期前6个月内体内丹参酮类物质总含量的累积影响较大，尤其是在丹参采摘前2～6个月。在丹参生长期间长时间施用对照组1与对照组2提供的菌肥，施用的菌肥会在丹参植株上残留积累，会影响丹参植株的生长，进而不会阻碍丹参根部内丹参酮有效成分的生成。 [0235] 由上述结果可知，本发明提供的复合微生物液体菌肥在长时间使用时，在丹参植株上残留积累，也不会对丹参植株产生毒性危害，不会影响丹参植株的生长，进而不会阻碍丹参根部内丹参酮有效成分的生成。 [0236] 本发明提供的复合微生物液体菌肥的制备是将药、菌、液肥三合一，操作简便，低劳动成本防治丹参根腐病。 [0238] 尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。 [0239] 显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。 |
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