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一种 生物炭基解磷解 钾菌肥及其制备方法

阅读：329发布：2020-05-16

专利汇可以提供一种生物炭基解磷解钾菌肥及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供一种生物炭基解磷解钾菌肥及其制备方法，属于微生物肥料技术领域。生物炭基解磷解钾菌肥包括生物炭以及负载于生物炭上的解磷解钾类菌。通过将解磷解钾类菌接种于培养基中获得菌液，将菌液负载于生物炭后分离得到沉淀，将沉淀物风干得到生物炭基解磷解钾菌肥。此制备方法简单，通过该方法制得的生物炭基解磷解钾菌肥能够分解土壤中的磷矿和钾矿，活性好，能够在土壤中增殖，把解磷解钾类菌加入到农作物根际和土壤中，通过微生物的活动来提高土壤肥力，抑制有害生物的活动和刺激农作物的生长。，下面是一种生物炭基解磷解钾菌肥及其制备方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种生物炭基解磷解钾菌肥，其特征在于，包括生物炭以及负载于所述生物炭上的解磷解钾类菌；
所述解磷解钾类菌选自胶冻样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的生物炭基解磷解钾菌肥，其特征在于，所述生物炭由农业有机废弃物或动物粪便在缺氧条件下烧制而成。
3.一种权利要求1或2所述的生物炭基解磷解钾菌肥的制备方法，其特征在于，将解磷解钾类菌接种于培养基中获得菌液，将所述菌液负载于所述生物炭后分离得到沉淀，将所述沉淀风干得到。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述接种包括第一次接种和第二次接种。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一次接种是将所述解磷解钾类菌接种于固体培养基，在35-39℃的情况下培养20-30h得到菌落。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述固体培养基包括1-2重量份的牛肉膏、2-3重量份的氯化钠、8-12重量份的琼脂、4-6重量份的蛋白胨和去离子水；其中，所述固体培养基的pH值为7.0-7.2。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第二次接种是将所述菌落接种于液体培养基，在35-39℃、震荡速度为180-220r/min的情况下培养18-25h得到所述菌液。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述液体培养基包括蛋白胨8-12g/L、酵母粉4-6g/L、氯化钠8-12g/L以及去离子水；其中，所述液体培养基的pH值为7.0-7.4。
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，将所述菌液负载于所述生物炭是先将所述生物炭与铝胶混匀于离心管中，加入所述菌液，在30-35℃、震荡速度为100-140r/min的情况下培养0.5-2h得到菌肥菌液。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述风干在温度为35-40℃条件下进行。

说明书全文

一种生物炭基解磷解 钾菌肥及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及微生物肥料技术领域，具体而言，涉及一种生物炭基解磷解钾菌肥及其制备方法。

背景技术

[0002] 微生物肥料含有大量有益微生物，可以改善作物营养条件、解磷、解钾、固定氮素和活化土壤中一些无效态的营养元素，创造良好的土壤微生态环境来改善土壤养分环境，促进作物的生长。微生物肥料是通过微生物的生命活动直接或间接作用，促进作物生长，改善作物品质，抗病虫害，用于拌种或蘸根，具有直接或间接改良土壤、恢复土壤肥力、维持微生物平衡和降解有毒有害物质等作用，是农业生产中使用肥料的一种简单有效地方式。

[0003] 现有技术的微生物肥料的负载量低、存活率低，不能对土壤中的磷矿和钾矿进行高效分解。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种生物炭基解磷解钾菌肥，能够分解土壤中的磷矿和钾矿，活性好，能够在土壤中增殖，把解磷解钾类菌加入到农作物根际和土壤中，通过微生物的活动来提高土壤肥力，抑制有害生物的活动和刺激农作物的生长。

[0005] 本发明的另一目的在于提供一种生物炭基解磷解钾菌肥的制备方法，该方法操作简单、制作方便；将菌液负载于生物炭上，提高了解磷解钾类菌的成活率，并且可以进行增殖。

[0006] 本发明是采用以下技术方案实现的：

[0007] 一种生物炭基解磷解钾菌肥，包括生物炭以及负载于生物炭上的解磷解钾类菌。解磷解钾类菌选自胶冻样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌中的至少一种。

[0008] 上述生物炭基解磷解钾菌肥的制备方法，将解磷解钾类菌接种于培养基中获得菌液，将菌液负载于生物炭后分离得到沉淀，将沉淀风干得到。

[0009] 本发明提供的生物炭基解磷解钾菌肥的有益效果是：生物炭基解磷解钾菌肥包括生物炭以及负载于生物炭上的解磷解钾类菌，解磷解钾类菌能够分解土壤中的磷矿和钾矿，使土壤中更多的元素磷和元素钾转化为能够被农作物吸收有效态元素，同时，微生物细菌本身的活动，促进土壤风化，有机质矿化，释放出各种矿物微量元素和植物刺激素，能够提高土壤的肥力，使土壤更加蓬松，有利于农作物的生长发育。生物炭的加入，不仅可携带大量活性微生物菌，还给予微生物菌群繁殖空间，保证解磷解钾类菌高的成活率，使其在土壤中快速增殖见效，同时，生物炭本身也能促进土壤有机质提高，释放出多种比例合适的矿物微量元素和刺激素，促进农作物的生长。

[0010] 此外，在本发明提供的生物炭基解磷解钾菌肥的制备方法的有益效果是：将解磷解钾类菌菌液负载于生物炭上，提高解磷解钾类菌的成活率，使其在土壤中快速增殖见效，使菌肥具有解磷解钾的能力，促进农作物的生长，其制备方法简单、操作方便。附图说明

[0011] 为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图也属于本发明的保护范围。

[0012] 图1为生物炭中添加铝胶和不添加铝胶的负载情况的扫描电镜图；

[0013] 图2为生长三个月后的玉米植株的图片。

具体实施方式

[0014] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

[0015] 下面对本发明实施例的生物炭基解磷解钾菌肥及其制备方法进行具体说明。

[0016] 生物炭基解磷解钾菌肥，包括生物炭以及负载于生物炭上的解磷解钾类菌。解磷解钾类菌选自胶冻样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌中的至少一种。

[0017] 其中，胶冻样芽孢杆菌，它可在土壤中繁殖生长，并产生有机酸、荚膜多糖等代谢产物，破坏硅铝酸盐的晶格结构、难溶性磷化合物等，分解释放出可溶的磷钾元素及钙、硫、镁、铁、锌、钼、锰等中微量元素，既增进了土壤肥力，又为作物提供了可吸收利用的营养元素，降解土壤中的有毒有害物质，提高农作物的抗病虫害能力。

[0018] 胶质样芽孢杆菌又称硅酸盐细菌，其重要特性是能够分解出长石、云母等矿物中的钾、硅，也能分解出磷灰石中的磷，即能分解土壤中的磷矿和钾矿，促进土壤无效磷钾的转化，增加土壤磷钾的供给，提高作物产量，以及分泌植物生长刺激素及多种酶，以增强作物对一些病害的抵抗力。胶质芽孢杆菌能够产生碳酸酐酶，对二氧化碳的固定具有一定的作用，促进植物的光合作用。

[0019] 巨大芽孢杆菌能改善土壤微生态环境，减轻病害，降低农药残留。施入土壤后，迅速繁殖，可以控制农作物根际的营养和其他资源，致使病原菌在相当程度上丧失生存空间和条件；使植物有关组织细胞壁增厚、纤维化、木质化程度提高，并在表皮层外形成角质双硅层，形成一道阻止病菌侵袭的屏障。还可以提高肥效，通过把无效磷转化为有效磷，有效提高土壤中磷的吸收率。

[0020] 生物炭富含微孔，容易聚集营养物质和有益微生物，解磷解钾类菌更加容易负载于生物炭上，其负载量较高，同时生物炭含碳量高，不仅可促进负载的微生物增殖，还可补充土壤的有机物含量，使土壤变得肥沃，促进水分和养料的保蓄与协调，有效提高土壤肥力，并能够将碳锁定在生物群内和土壤中，不仅起到固碳减排的作用。而且利于植物生长，实现增产的同时让农业更具持续性。

[0021] 优选地，生物炭由农业有机废弃物或动物粪便在缺氧条件下烧制而成。其分别来源于植物或动物，且来源丰富，成本低。其中，农业有机废弃物包括玉米秸秆、稻杆和麦秆等。更佳地，生物炭为玉米炭或牛粪炭。

[0022] 上述生物炭基解磷解钾菌肥能够分解土壤中的磷矿和钾矿，使土壤中更多的元素磷和元素钾转化为能够被农作物吸收有效态元素，同时，微生物细菌本身的活动，促进土壤风化，有机质矿化，释放出各种矿物微量元素和植物刺激素，能够提高土壤的肥力，使土壤更加蓬松，有利于农作物的生长发育。生物炭的加入，不仅可携带大量活性微生物菌，还给予微生物菌群繁殖空间，保证解磷解钾类菌高的成活率，使其在土壤中快速增殖见效，同时，生物炭本身也能促进土壤有机质提高，释放出多种比例合适的矿物微量元素和刺激素，促进农作物的生长。

[0023] 上述生物炭基解磷解钾菌肥的制备方法为：将解磷解钾类菌接种于培养基中获得菌液，将菌液负载于生物炭后分离得到沉淀，将沉淀风干得到。解磷解钾类菌选自胶质芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌中的至少一种。

[0024] 其中，接种包括第一次接种和第二次接种，第一次接种是将解磷解钾类菌接种于固体培养基，在35-39℃的情况下培养20-30h得到菌落，可以筛选出其中的杂菌，并且检验菌种的活性，得到的菌落为活性高的解磷解钾类菌。

[0025] 其中，固体培养基包括1-2重量份的牛肉膏、2-3重量份的氯化钠、8-12重量份的琼脂、4-6重量份的蛋白胨和去离子水；其中，固体培养基的pH值为7.0-7.2。制备固体培养基时，需要在121℃下灭菌20min，避免固体培养基中产生杂菌。

[0026] 第二次接种是将菌落接种于液体培养基，在35-39℃、震荡速度为180-220r/min的情况下培养18-25h得到菌液。使解磷解钾类菌繁殖扩增，便于后续负载于生物炭上。优选地，接种比例为5％。

[0027] 其中，液体培养基包括蛋白胨8-12g/L、酵母粉4-6g/L、氯化钠8-12g/L以及去离子水；其中，液体培养基的pH值为7.0-7.4。

[0028] 将菌液负载于生物炭是先将生物炭与铝胶混匀于离心管中，加入菌液，在30-35℃、震荡速度为100-140r/min的情况下培养0.5-2h得到菌肥菌液。优选地，取生物炭0.1g于50ml的敞口离心管中，加入15ml铝胶混合均匀，加入pH值为7.0的细菌溶液10ml。将离心管在30-35℃、震荡速度为100-140r/min的情况下震荡0.5-2h进行震荡吸附实验，得到生物炭基解磷解钾菌肥菌液。

[0029] 将生物炭基解磷解钾菌肥菌液分离得到沉淀，优选地，可采用离心的方式进行分离。将菌肥菌液在转速为4000-6000r/min的条件下进行离心分离，去掉上层清液，将离心管内的菌肥转移至滤纸上在35-40℃的条件下风干得到生物炭基解磷解钾菌肥。风干的温度较低，避免解磷解钾类菌失活。

[0030] 实施例1

[0031] 将胶质样芽孢杆菌第一次接种于固体培养基，在37℃的情况下培养25h得到菌落，再将菌落第二次接种于液体培养基，在37℃、震荡速度为200r/min的情况下培养20h得到菌液，将生物炭与铝胶混匀于离心管中，加入菌液，在33℃、震荡速度为120r/min的情况下培养1h得到菌肥菌液，后将其在转速为5000r/min的条件下离心，取下层沉淀于37℃的条件下风干得到生物炭基解磷解钾菌肥。

[0032] 其中，固体培养基包括1.5g牛肉膏、2.5g氯化钠、10g琼脂、5g蛋白胨和去离子水；其中，固体培养基的pH值为7.1。液体培养基包括蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L以及去离子水；其中，液体培养基的pH值为7.2。

[0033] 实施例2

[0034] 将胶冻样芽孢杆菌第一次接种于固体培养基，在35℃的情况下培养20h得到菌落，再将菌落第二次接种于液体培养基，在35℃、震荡速度为180r/min的情况下培养18h得到菌液，将生物炭与铝胶混匀于离心管中，加入菌液，在30℃、震荡速度为100r/min的情况下培养0.5h得到菌肥菌液，后将其在转速为4000r/min的条件下离心，取下层沉淀于35℃的条件下风干得到生物炭基解磷解钾菌肥。

[0035] 其中，固体培养基包括1g牛肉膏、2g氯化钠、8g琼脂、4g蛋白胨和去离子水；其中，固体培养基的pH值为7.0。液体培养基包括蛋白胨8g/L、酵母粉4g/L、氯化钠8g/L以及去离子水；其中，液体培养基的pH值为7.0。

[0036] 实施例3

[0037] 将巨大芽孢杆菌第一次接种于固体培养基，在39℃的情况下培养30h得到菌落，再将菌落第二次接种于液体培养基，在39℃、震荡速度为220r/min的情况下培养25h得到菌液，将生物炭与铝胶混匀于离心管中，加入菌液，在35℃、震荡速度为140r/min的情况下培养2h得到菌肥菌液，后将其在转速为6000r/min的条件下离心，取下层沉淀于40℃的条件下风干得到生物炭基解磷解钾菌肥。

[0038] 其中，固体培养基包括2g牛肉膏、3g氯化钠、12g琼脂、6g蛋白胨和去离子水；其中，固体培养基的pH值为7.2。液体培养基包括蛋白胨12g/L、酵母粉6g/L、氯化钠12g/L以及去离子水；其中，液体培养基的pH值为7.4。

[0039] 实施例4

[0040] 将胶冻样芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌第一次接种于固体培养基，在39℃的情况下培养30h得到菌落，再将菌落第二次接种于液体培养基，在39℃、震荡速度为220r/min的情况下培养25h得到菌液，将生物炭与铝胶混匀于离心管中，加入菌液，在35℃、震荡速度为140r/min的情况下培养2h得到菌肥菌液，后将其在转速为6000r/min的条件下离心，取下层沉淀于40℃的条件下风干得到生物炭基解磷解钾菌肥。

[0041] 其中，固体培养基包括2g牛肉膏、3g氯化钠、12g琼脂、6g蛋白胨和去离子水；其中，固体培养基的pH值为7.2。液体培养基包括蛋白胨12g/L、酵母粉6g/L、氯化钠12g/L以及去离子水；其中，液体培养基的pH值为7.4。

[0042] 实验例1

[0043] 本实验例中，选取9种玉米炭进行负载实验，分别为300℃的条件下制备的粒径大于40目、40目至100目之间和小于100目；500℃的条件下制备的粒径大于40目、40目至100目之间和小于100目以及700℃的条件下制备的粒径大于40目、40目至100目之间和小于100目的玉米炭，并测定解磷解钾类菌的负载量得到表1。

[0044] 表1玉米炭颗粒大小、制备温度对微生物负载量的影响(×104)

[0045]

[0046]

[0047] 通过表1可以看出，500℃下制备的生物炭在粒径小于100目的情况下，其对解磷解钾类菌的负载量最大。

[0048] 本实验例中，选取9种牛粪炭进行负载实验，分别为300℃的条件下制备的粒径大于40目、40目至100目之间和小于100目；500℃的条件下制备的粒径大于40目、40目至100目之间和小于100目以及700℃的条件下制备的粒径大于40目、40目至100目之间和小于100目的牛粪炭，并测定解磷解钾类菌的负载量得到表2。

[0049] 表2牛粪炭颗粒大小、制备温度对微生物负载量的影响(×104)

[0050] ＞40目 40-100目＜100目
牛粪炭(300℃) 210 203 263
牛粪炭(500℃) 1130 1118 2740
牛粪炭(700℃) 1320 1360 2760

[0051] 通过表2可以看出，500℃-700℃下制备的牛粪炭在粒径小于100目的情况下，其对解磷解钾类菌的负载量最大。

[0052] 通过对表1和表2可以看出，玉米炭和牛粪炭均在小于100目的条件下其负载量最大，主要是由于粒径越小，其比表面积越大，则相同质量的生物炭对解磷解钾类菌的吸附能力越强，进而其负载量增大。且对于牛粪炭来说，在粒径小于100目的情况下，其负载量有明显的增加，是由于牛粪中大量易分解的物质被消化，残留下耐分解的纤维，炭化后的生物炭经粉碎后颗粒间的差异较小，当达到100目筛时才有纤维颗粒断裂，形成较多表面积进而增加了功能微生物的负载量。玉米炭孔隙结构优于牛粪炭的孔隙结构，因此玉米炭对功能微生物的吸附能力强于牛粪炭对功能微生物的吸附能力，所以，玉米炭对解磷解钾类菌的负载量更大。

[0053] 实验例2

[0054] 本实验例中，分别选取500℃的条件下制备的玉米炭在培养温度为20℃、25℃、30℃、35℃、40℃下制备生物炭基解磷解钾菌肥，并测定解磷解钾类菌的负载量得到表3。

[0055] 表3培养温度对微生物负载量的影响(×104)

[0056]培养温度(℃) 20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃
负载量 113 136 280 940 490

[0057] 通过表3可以看出，随着培养温度的升高，功能微生物的负载量先是逐渐增加后逐渐减小，这主要由于随着温度的升高，蛋白质的活性降低甚至失活，进而抑制功能微生物的生长甚至不生长。培养温度为35℃时，玉米炭对解磷解钾类菌的负载量最大。

[0058] 实验例3

[0059] 本实验例中，分别选取是玉米炭或牛粪炭在pH值分别为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的条件下制备生物炭基解磷解钾菌肥，并测定解磷解钾类菌的负载量得到表4。

[0060] 表4pH值对微生物负载量的影响(×104)

[0061]

[0062] 通过表4可以看出，在pH值为6.0、6.5时,玉米炭对功能微生物的吸附能力强于牛粪炭对功能微生物的吸附能力。在pH值为8.0时，功能微生物在玉米炭和牛粪炭中长势均不好，可以反映出功能微生物不适宜在碱性条件下生长。在pH值为7.0时，功能微生物在玉米炭和牛粪炭中长势均良好，可以得出解磷解钾类菌比较适宜在中性(PH＝7.0)条件下生长。

[0063] 实验例4

[0064] 本实验例中，在玉米炭中分别加入铝胶和不加铝胶的条件下制备生物炭基解磷解钾菌肥，并测定解磷解钾类菌的负载量得到表5。

[0065] 表5铝胶对微生物负载量的影响(×104)

[0066] 有铝胶无铝胶
负载量 210 132

[0067] 通过表5可以看出，添加铝胶的生物炭负载功能微生物的能力强于没有添加铝胶的生物炭。图1为生物炭中添加铝胶和不添加铝胶的负载情况的扫描电镜图。其中，左边为无铝胶，右边为有铝胶。从图中可以看出，无铝胶的生物炭表面负载功能微生物数量少，且出现了功能微生物破裂、失水的情况，导致功能微生物存活率降低。有铝胶的生物炭的表面，被铝胶覆盖，有一层利于功能微生物负载的薄膜，使功能微生物负载量大幅增加，且没有或极少数出现破裂情况。

[0068] 实验例5

[0069] 进行盆栽实验，分别培养五个盆栽，其中，四个盆栽分别施加实施例1-4制备的生物炭基解磷解钾菌肥，最后一个盆栽对照例1不施加生物炭基解磷解钾菌肥，并翻耕每个盆栽的土壤使生物炭基解磷解钾菌肥与土壤混合均匀，并对其进行浇水，使盆栽土壤的含水量为60％，并在每个盆栽中均匀播种颗粒大小大致相同的玉米种子10粒。

[0070] 三个月后测定盆栽土壤各项指标和玉米植株的各项指标，得到表6。

[0071] 表6盆栽土壤各项指标和玉米植株的各项指标的测定结果

[0072] 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 对照例1
玉米植株重量/g 196 203 199 204 154
土壤的含磷量(mg/kg) 1.59 1.48 1.61 1.65 0.21
土壤的含钾量(mg/kg) 1.89 1.95 1.91 2.03 0.11

[0073] 通过表6可以看出，与对照例1相比，施加实施例1-4制备的生物炭基解磷解钾菌肥，玉米植株长势更好，而且土壤中的磷含量和钾含量都有显著的提高。图2为生长三个月后的玉米植株的图片。最左边的玉米植株施加生物炭基解磷解钾菌肥；中间的玉米植株施加生物炭，最右边的玉米植株不施加任何肥料。从图2中可以看出，施加生物炭基解磷解钾菌肥的玉米植株生长更高，叶茂盛，同时，根系也更加发达。说明生物炭基解磷解钾菌肥能够分解土壤中的磷矿和钾矿，使土壤中更多的元素磷和元素钾能够被农作物吸收，促进农作物的生长。

[0074] 实验例6

[0075] 进行盆栽实验，分别培养五个盆栽，其中，四个盆栽分别施加实施例1-4制备的生物炭基解磷解钾菌肥，最后一个盆栽对照例1单独施加解磷解钾类菌，并翻耕每个盆栽的土壤使生物炭基解磷解钾菌肥与土壤混合均匀，并对其进行浇水，使盆栽土壤的含水量为60％，一个月后测定每个盆栽中的解磷解钾类菌的成活率得到表7。

[0076] 表7盆栽土壤中功能微生物成活率的测定结果

[0077] 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 对照例1
成活率/％ 115 126 124 135 34

[0078] 通过表7可以看出，与对照例1相比，施加实施例1-4制备的生物炭基解磷解钾菌肥的成活率高于100％，而解磷解钾类菌的成活率较低，说明生物炭基解磷解钾菌肥在土壤中成活率较高，且有一定的繁殖能力，而只有解磷解钾类菌则在土壤中容易失活。

[0079] 以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

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一种生物炭基解磷解钾菌肥及其制备方法

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