用于提取双子叶植物胚芽的方法和系统
阅读：319发布：2022-10-28
专利汇可以提供用于提取双子叶植物胚芽的方法和系统专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了允许在不损伤双子叶 植物 胚芽的情况下提取双子叶植物 种子 的双子叶植物胚芽的方法和系统。本文所公开的方法提供用于植物育种和研究程序的胚芽。，下面是用于提取双子叶植物胚芽的方法和系统专利的具体信息内容。
1.一种从具有近端和相对的远端的未成熟双子叶植物种子中手动或自动分离双子叶植物胚芽的方法，其中，在将所述未成熟双子叶植物种子从其生物载体移除之前，所述未成熟双子叶植物种子的所述近端附着于所述生物载体并且所述未成熟双子叶植物种子的所述远端与所述生物载体隔开，所述方法包括：
a.提供在所述双子叶植物种子的所述近端具有开口或孔的分离的未成熟双子叶植物种子，其中在将所述未成熟双子叶植物种子从所述生物载体移除之后提供所述分离的未成熟双子叶植物种子；以及
b.通过所述分离的未成熟双子叶植物种子的所述近端中的所述开口或孔提取所述双子叶植物胚芽，其中所述双子叶植物胚芽在提取之后未损伤。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述双子叶植物胚芽提取之后，所述双子叶植物胚芽保持以完全存活力和活力生长的能力。
3.根据权利要求1所述的方法，其中提供所述双子叶植物种子的步骤包括在不损伤所述双子叶植物胚芽的情况下移除所述双子叶植物种子的所述近端的至少一部分。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述未成熟双子叶植物种子是向日葵种子。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述未成熟双子叶植物种子包括在其近端和远端之间延伸的侧部，并且其中通过所述孔提取所述双子叶植物胚芽的步骤包括向所述双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力，以迫使所述双子叶植物胚芽穿过所述双子叶植物种子的所述近端中的所述孔。
6.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括在所述双子叶植物种子的所述近端中形成所述开口或孔。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所提取的双子叶植物胚芽通常被释放到液池中并且所述种子的所有其它内容物通常不被释放到所述液池中。
8.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括自动收集所述提取的双子叶植物胚芽。
9.根据权利要求8所述的方法，所述方法还包括将所述提取的双子叶植物胚芽定位在培养基内或所述培养基上。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述培养基为生长培养基。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述培养基为包含选择剂的培养基。
12.根据权利要求9所述的方法，其中所述培养基包含抗有丝分裂剂或染色体加倍剂。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取的双子叶植物胚芽包括未成熟子叶节段和分生节段，并且其中所述方法还包括移除所述提取的双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的样本部分。
14.根据权利要求13所述的方法，其中对所述双子叶植物胚芽的所述样本部分和所述双子叶植物胚芽的剩余的活的部分进行1对1跟踪，以用于未来识别和获取。
15.根据权利要求13所述的方法，其中，在所述提取的双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分移除之后，所述双子叶植物胚芽保持以完全存活力和活力生长的能力。
16.根据权利要求13所述的方法，所述方法还包括使用成像或测量系统表征所述提取的双子叶植物胚芽，以允许识别所述提取的双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段和所述分生节段。
17.根据权利要求13所述的方法，其中所述提取的双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分通过激光器移除。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述激光器选自冷切激光器、O开关的CO2激光器、飞秒激光器、皮秒激光器、以及纳秒激光器。
19.根据权利要求13所述的方法，所述方法还包括对所述提取的双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分进行分析。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述分析包括所述样本的遗传分析。
21.根据权利要求20所述的方法，所述方法还包括基于所述提取的双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分的所述遗传分析选择或丢弃所述提取的双子叶植物胚芽的剩余部分。
22.根据权利要求21所述的方法，所述方法还包括使所选择的双子叶植物胚芽的所述剩余的活的部分萌发。
23.根据权利要求21所述的方法，其中所述选择的双子叶植物胚芽用于双子叶植物育种程序。
24.根据权利要求1所述的方法，其中所述未成熟双子叶植物种子是在授粉后预定时间获得的向日葵种子。
25.一种由未成熟双子叶植物种子再生植物的方法，所述方法包括：
a.从双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽，所提取的双子叶植物胚芽包括分生节段和未成熟子叶节段，其中所述提取的双子叶植物胚芽在提取之后未损伤；
b.在不损伤所述提取的双子叶植物胚芽的情况下移除所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的样本部分；
c.识别并将所述样本与活的胚芽部分相关联，以用于以1对1的关系进行跟踪；
d.对所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分进行遗传分析；以及e.由所述提取的双子叶植物胚芽的剩余部分生长小植物，其中所述提取的双子叶植物胚芽的所述剩余部分包括所述提取的双子叶植物胚芽的所述分生节段。
26.根据权利要求25所述的方法，其中在所述双子叶植物胚芽提取和所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分移除之后，所述双子叶植物胚芽保持以完全存活力和活力生长的能力。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述未成熟双子叶植物种子具有近端和相对的远端，其中，在将所述未成熟双子叶植物种子从生物载体移除之前，所述未成熟双子叶植物种子的所述近端附着于所述生物载体并且所述未成熟双子叶植物种子的所述远端与所述生物载体隔开，其中在将所述双子叶植物种子从所述生物载体移除之后从所述双子叶植物种子中提取所述双子叶植物胚芽，并且其中在不损伤所述双子叶植物胚芽的情况下在所述双子叶植物种子的所述近端中形成开口或孔。
28.根据权利要求27所述的方法，其中使用切割刀片、夹住并撕裂、戳刺、刮削、化学降解，使用激光器或其它切割元件在所述双子叶植物种子的所述近端中形成所述开口或孔。
29.根据权利要求25所述的方法，其中所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分通过激光器、戳刺、刮削、或脱落移除。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述激光器经过选择并且被配置成使所述双子叶植物胚芽的热影响区最小。
31.一种提取未成熟向日葵胚芽的方法，所述方法包括：
a.获得从种子头移除的分离的未成熟向日葵种子；
b.将所述未成熟向日葵种子放置在液池中，其中在将所述未成熟向日葵种子定位在所述液池中时，所述未成熟向日葵种子实现期望取向；以及
c.移除所述未成熟向日葵种子的尖帽；
d.施加力以从所述向日葵种子中提取所述向日葵胚芽；以及
e.收集所述胚芽。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述未成熟向日葵种子具有近端和相对的远端，其中，在将所述未成熟向日葵种子从所述种子头移除之前，所述未成熟向日葵种子的所述近端附着于所述种子头并且所述未成熟向日葵种子的所述远端与所述种子头隔开，其中所述未成熟向日葵种子在其被放置在步骤(b)中的所述液池中之前在所述近端具有开口或孔，或者在将所述向日葵种子放置在步骤(b)中的所述液池中的步骤之后形成所述近端中的开口或孔。
33.根据权利要求31所述的方法，其中，在所述向日葵胚芽提取之后，所述向日葵胚芽保持以完全存活力和活力生长的能力。
34.根据权利要求31所述的方法，其中切割所述向日葵胚芽的未成熟子叶节段的一部分，以提取所述未成熟子叶节段的样本部分。
35.根据权利要求34所述的方法，其中通过激光器切割所述未成熟子叶节段。
36.根据权利要求34所述的方法，其中对所述未成熟子叶节段的所述样本部分进行遗传分析。
37.根据权利要求36所述的方法，所述方法还包括基于所述未成熟子叶节段的所述样本部分的分析选择或丢弃所述向日葵胚芽。
38.根据权利要求37所述的方法，所述方法还包括使所选择的双子叶植物胚芽的剩余部分萌发。
39.根据权利要求31所述的方法，其中所述液池填充有水、无菌溶液、缓冲液和液体凝胶中的至少一种。
40.根据权利要求31所述的方法，其中所述未成熟向日葵种子是在授粉后预定时间获得的。
41.一种由未成熟双子叶植物种子再生植物的方法，所述方法包括：
a.从多个双子叶植物种子中的每个相应的双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽，每个所提取的双子叶植物胚芽包括分生节段和未成熟子叶节段，其中每个相应的双子叶植物种子的所述提取的双子叶植物胚芽在提取之后未损伤；
b.在不损伤所述双子叶植物胚芽的情况下移除每个相应双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的样本部分，并且识别并将所述胚芽与所述样本相关联，以用于以1对1的关系对所述样本部分和所述双子叶植物胚芽进行跟踪；
c.对每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分进行遗传分析；以及
d.基于每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分的所述遗传分析选择或丢弃每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的剩余部分，其中选择所述多个双子叶植物种子中的至少一个双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述剩余部分；以及
e.由每个相应的所选择的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述剩余部分萌发植物。
42.根据权利要求41所述的方法，其中在每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽提取和每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分移除之后，每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽保持以完全存活力和活力生长的能力。
43.根据权利要求41所述的方法，其中每个相应的双子叶植物种子具有近端和相对的远端，其中，在将每个未成熟双子叶植物种子从生物载体移除之前，所述未成熟双子叶植物种子的所述近端附着于所述载体并且所述未成熟双子叶植物种子的所述远端与所述载体隔开，其中在将所述双子叶植物种子从所述载体移除之后从所述双子叶植物种子中提取每个相应的未成熟双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽，并且其中在不损伤所述双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的情况下在每个相应的双子叶植物种子的所述近端中形成开口或孔。
44.根据权利要求41所述的方法，其中所述方法不包括筛分从每个双子叶植物种子中提取的材料，以将每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽与其它提取材料分开。
45.根据权利要求41所述的方法，所述方法还包括：
a.给每个相应的双子叶植物种子的所提取的双子叶植物胚芽分配至少一个标识符，每个标识符表示从其获得所述双子叶植物胚芽的多种所述双子叶植物种子中的至少一种；
b.将至少一个标识符与每个相应的所提取的双子叶植物胚芽相关联；以及c.使用与所述至少一个所提取的双子叶植物胚芽相关联的所述至少一个标识符跟踪所述至少一个所提取的双子叶植物胚芽的位置。
46.根据权利要求41所述的方法，其中以下步骤中的至少一个是自动执行的：(b)移除每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的样本部分，(c)对每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分进行遗传分析，(d)基于每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述未成熟子叶节段的所述样本部分的所述遗传分析选择或丢弃每个相应的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的剩余部分，以及(e)由每个相应的所选择的双子叶植物种子的所述双子叶植物胚芽的所述剩余部分再生植物。
用于提取双子叶植物胚芽的方法和系统
技术领域
背景技术
[0002] 已经提出了用于提取双子叶植物胚芽的各种大型系统；然而，这些系统通常以在提取期间损伤双子叶植物胚芽并且提取双子叶植物种子的除双子叶植物胚芽之外的部分的方式执行。用于提取胚芽的当前自动化系统和方法通常在种子仍然在它们的载体上的同时通过种子的远端(冠部)提取胚芽。例如，通常在谷粒附着于穗轴的同时通过迫使胚芽穿过谷粒的冠部来提取玉米胚芽。玉米谷粒和其它种子的解剖通常需要施加相当大的力以通过种子的远端(冠部)提取胚芽。这些相当大的力在胚芽上产生不可取的应力。通常，当前的自动化胚芽提取方法还需要提取材料的筛分，以确保将胚芽与其它材料分开。筛分步骤需要向胚芽施加另外的力，从而在胚芽上导致另外的应力。因此，需要另选的方法来从双子叶植物种子中提取分离的未损伤的双子叶植物胚芽。
发明内容
[0003] 本文公开了从单个化的未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的方法和系统，所述种子通常已经从其生物载体移除，如本领域的技术人员所已知，所述生物载体可为豆荚、穗轴、或与种子相关联的其它植物结构。在本文，它可被称为生物载体，以将其与可能承载物体的装置的部件区分开来。本领域的技术人员可区分术语的使用。可获得未成熟的双子叶植物种子并且接着可将其放置在液池中以实现期望取向。一般来讲，方法可包括施加至双子叶植物种子以提取双子叶植物胚芽的力。任选地，可将双子叶植物胚芽释放到液池中。
[0004] 本文所公开的方法和系统可包括将双子叶植物胚芽从具有近端和相对的远端的未成熟双子叶植物种子中自动分离出来。出于取向和理解的目的，在将未成熟双子叶植物种子从生物载体移除之前，未成熟双子叶植物种子的近端附着于生物载体并且未成熟双子叶植物种子的远端与生物载体隔开。在将未成熟双子叶植物种子从生物载体移除之后，可提供在双子叶植物种子的近端具有开口的分离的未成熟双子叶植物种子。双子叶植物种子的近端的至少一部分可被移除，以在不损伤双子叶植物胚芽的情况下在双子叶植物种子的近端形成开口。可通过双子叶植物种子近端中的开口提取双子叶植物胚芽，并且在提取之后双子叶植物胚芽通常是未损伤的。提取双子叶植物胚芽之后，未损伤的双子叶植物胚芽可保持以完全存活力和活力生长的能力。
[0005] 本文所公开的方法和系统可包括由未成熟双子叶植物种子的双子叶植物胚芽再生植物。可在不损伤双子叶植物胚芽的情况下从未成熟双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽。双子叶植物胚芽可具有分生节段和子叶节段。可在不损伤所提取的双子叶植物胚芽的情况下移除双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分。样本部分和活的胚芽可以1对1的关系跟踪和识别。可对双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分进行遗传分析，并且可由双子叶植物胚芽的剩余部分(包括分生节段)再生植物。本文所公开的方法和系统可允许单独分析多个未成熟双子叶植物种子中的每一个。可自动提取多个未成熟双子叶植物种子中的每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽，并且可在不损伤双子叶植物胚芽的情况下移除每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分。可对每个相应的双子叶植物种子的胚芽诸如双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分进行分析，例如遗传分析，并且可基于每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分的遗传分析选择或丢弃每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的剩余部分。例如，样本可获自胚芽的一部分，并且可包括一个或多个细胞。预期来自胚芽的样本可以像单个细胞核一样小。可选择多个双子叶植物种子中的至少一个双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的剩余部分，并且可由每个相应的所选择的双子叶植物胚芽的剩余部分再生至少一个植物。附图说明
[0006] 图1为未成熟种子的示意图。如图所示，胚芽包括子叶组织和分生组织。
[0007] 图2为描绘如本文所公开的从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的示例性方法的流程图。
[0008] 图3为描绘如本文所公开的从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的另一示例性方法的流程图。
[0009] 图4A为描绘在从未成熟双子叶植物种子中提取之后由双子叶植物胚芽的部分再生植物的示例性方法的流程图。图4B为描绘在从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽之后，由选自多个双子叶植物胚芽的至少一个双子叶植物胚芽的部分再生植物的示例性方法的流程图。图4C为描绘在图4B所描绘的方法期间跟踪至少一个所提取的双子叶植物胚芽的位置的示例性方法的流程图。跟踪可包括识别并将胚芽、特定胚芽的样本或种子的部分与原始种子相关联。一般来讲，种子的身份以及它与其生长或遗传源(起源)的地理位置的关系是已知的或被跟踪。
[0010] 图5A为用于执行本文所公开的双子叶植物胚芽提取方法中的一种或多种的示例性系统的透视图。图5B为描绘用于图5A的系统的示例性保持夹具的机构的示意图。
[0011] 图6A为用于执行本文所公开的双子叶植物胚芽提取方法中的一种或多种的另一示例性系统的顶部透视图。图6B为图6A的系统的侧透视图。图6C为图6A-6B的系统的示例性提取子组件的特写透视图。
[0012] 图7为如本文所公开的示例性夹持和提取设备的透视图。
[0013] 图8A-8B提供一系列描绘使用如本文所公开的提取装置提取胚芽的示例性半自动实验方法的图像。
[0014] 图9为示出使用如本文进一步描述的各种实验方法提取的玉米胚芽的状况的比较的表。
具体实施方式
[0015] 下文将结合附图更详细地描述本发明，附图中只显示了本发明的一些实施方案，而非全部实施方案。实际上，本发明可以多种不同的形式体现而不应理解为受限于本文所述的实施方案；相反，提供这些实施方案的目的是使本发明满足适用的法律要求。同样的编号在全文中是指同样的要素。应当理解，本发明不限于所述的特定方法和方案，因为这些可有所变化。还应当理解，本文所用的术语是仅出于描述特定实施方案的目的，而并非旨在限制本发明的范围。
[0016] 本发明所属领域的技术人员将想到本文阐明的本发明的许多修改形式和其它实施方案，它们具有在上述说明和相关图片中展示的教导内容的有益效果。因此，应理解，本发明不应限于所公开的具体实施方案，并且修改形式和其它实施方案旨在包括在所附权利要求书的范围内。虽然本文中采用特定术语，但这些术语仅在一般性和描述性意义上使用，而并非用于限制目的。
[0017] 除非上下文另外明确规定，如本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括多个指代物。因此，例如，提到“一个样本部分”可包括多个此类样本部分，依此类推。除非另外明确指明，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。
[0018] 范围可在本文表达为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表达这种范围时，另一个方面包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表达为近似值时，应理解，该特定值形成另一个方面。还应当理解，每个范围的端值不论是相对于另一个端值，还是独立于另一个端值都是有意义的。
[0019] 如本文所用，术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可或可不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的情形和不发生的情形。
[0020] 如本文所用的字词“或”是指特定列表的任一成员，并且还包括该列表的成员的任何组合。
[0021] I.概述
[0022] 本发明包括用于提取分离的未成熟双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的方法和系统。预期本发明所公开的方法和系统可用于在不损伤双子叶植物胚芽的情况下提取单个双子叶植物种子的双子叶植物胚芽。在示例性方面，预期本文所公开的系统和方法可利用使用传统切除方法切穿谷粒侧面来提取向日葵胚芽所需时间的约20％实现向日葵胚芽的提取。还预期，使用本文所公开的系统和方法提取的胚芽可充分地与其它材料分开，而不需要筛分和其它机械胚芽分开步骤。
[0023] 在操作中，本文所公开的系统和方法可允许逐个种子地从双子叶植物种子中提取胚芽。预期，本文所公开的逐个种子方法可有利地允许与批量方法相比改善的单个种子的清洁和灭菌，例如，允许种子整个表面的灭菌。预期，本发明所公开的方法和系统可允许在从相应的双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽之后跟踪和/或分析单个双子叶植物胚芽。预期本发明所公开的方法和系统可允许使用单个所提取的双子叶植物胚芽再生植物。
[0024] 公开了在将双子叶植物种子在液池内定向之后提取双子叶植物胚芽、自动提取双子叶植物胚芽，以及由未成熟双子叶植物种子再生植物的示例性方法。除非另行指出，预期，尽管这些示例性方法单独描述，但是所公开方法中的任一个的步骤可与其它所公开方法中的任一个的步骤结合使用，以实现从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的方法。因此，预期，本发明所公开的在将双子叶植物种子在液池内定向之后提取双子叶植物胚芽的方法的一个或多个步骤可与本发明所公开的自动提取双子叶植物胚芽和/或由未成熟双子叶植物种子再生植物的方法的一个或多个步骤结合使用。类似地，预期，本发明所公开的自动提取双子叶植物胚芽的方法的一个或多个步骤可与本发明所公开的在将双子叶植物种子在液池内定向之后提取双子叶植物胚芽和/或由未成熟双子叶植物种子再生植物的方法的一个或多个步骤结合使用。还预期，本发明所公开的再生植物的方法的一个或多个步骤可与本发明所公开的在将双子叶植物种子在液池内定向之后提取双子叶植物胚芽和/或自动分离双子叶植物胚芽的方法的一个或多个步骤结合使用。还预期，除非另行指出，本发明所公开的胚芽提取方法的任何步骤可以自动方式执行。
[0025] 图1描绘了种子的各种组分，包括胚芽。如图1所示，胚芽被果皮所包围。
[0026] 如本文所用，并且如图1所示，“胚芽”或“双子叶植物胚芽”由分生节段和子叶节段组成。
[0027] 如本文所用，双子叶植物胚芽的“分生节段”是指双子叶植物胚芽生长成植物所需的必需遗传信息和胚结构。
[0028] 如本文所用，双子叶植物胚芽的“子叶节段”是指大体围绕双子叶植物胚芽内的分生节段并在双子叶植物种子萌发期间储存流动营养物质的组织。如本文所用，“未成熟”双子叶植物种子是指在授粉后的选定天数内收获的双子叶植物种子。如本文所用，“未成熟”双子叶植物种子是指在受精之后但是在生理成熟之前收获并且在没有外部营养物质的水中不萌发(硬壳种子的情况除外)的双子叶植物种子。在示例中，预期收获发生在授粉后200和750生长度日之间。
[0029] 如本文所用，“未损伤的”胚芽或“没有损伤”的胚芽是指被提取之后不表现出明显的碰伤并保持以完全存活力和活力生长的能力的胚芽。例如，如果在提取之后，双子叶植物胚芽的存活力和活力基本上不变，那么双子叶植物胚芽是在提取之后“未损伤的”。在示例性方面，预期，如果双子叶植物胚芽的存活力和活力是使用常规人工提取方法提取的双子叶植物胚芽的存活力和活力的至少50％，那么双子叶植物胚芽是在提取之后“未损伤的”。在一个示例性方面，如果双子叶植物胚芽的存活力和活力是使用常规人工提取方法提取的双子叶植物胚芽的存活力和活力的至少60％，那么双子叶植物胚芽是在提取之后“未损伤的”。在另一个示例性方面，如果双子叶植物胚芽的存活力和活力是使用常规人工提取方法提取的双子叶植物胚芽的存活力和活力的至少70％，那么双子叶植物胚芽是在提取之后“未损伤的”。在另一个示例性方面，如果双子叶植物胚芽的存活力和活力是使用常规人工提取方法提取的双子叶植物胚芽的存活力和活力的至少80％，那么双子叶植物胚芽是在提取之后“未损伤的”。在另一个示例性方面，如果双子叶植物胚芽的存活力和活力是使用常规人工提取方法提取的双子叶植物胚芽的存活力和活力的至少90％，那么双子叶植物胚芽是在提取之后“未损伤的”。在另一个示例性方面，如果双子叶植物胚芽的存活力和活力是使用常规人工提取方法提取的双子叶植物胚芽的存活力和活力的至少95％，那么双子叶植物胚芽是在提取之后“未损伤的”。一般来讲，存活力是指胚芽在本领域的技术人员已知的组织培养或生长培养基条件下萌发并发育成小植物的能力。一般来讲，活力是指所得小植物的生长和发育，最多并包括雌雄开花、谷粒发育、达到谷粒生理成熟。
[0030] 在其它示例性方面，预期，如果双子叶植物胚芽的萌发生成活的小植物，那么双子叶植物胚芽是提取之后“未损伤的”。
[0032] II.从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的方法
[0033] 在各种方面，参考图2，提供了一种从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的方法。在这些方面，方法可包括获得未成熟的双子叶植物种子。任选地，在一个方面，方法还可包括将未成熟的双子叶植物种子放置在液池中。在一个方面，预期未成熟双子叶植物种子的放置可导致未成熟双子叶植物种子使其自身在期望取向上定向。例如，预期将未成熟的向日葵种子定位在液池内可导致向日葵种子自身定向，其中种子的远端和近端均面向液池的表面，就像船的船头和船尾一样。在一个方面，方法还可包括施加力，以从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽。任选地，当未成熟双子叶植物种子定位在液池中时，可施加力，使得双子叶植物胚芽释放到液池中。在一个方面，预期在向双子叶植物胚芽施加力的步骤期间，双子叶植物种子可任选地完全浸没在液池中。另选地，预期双子叶植物种子的远端可浸没在液池中，而近端的至少一部分定位在液池表面上方。任选地，预期整个双子叶植物种子可定位在液池表面上方，使得双子叶植物胚芽在提取时释放到液池中。任选地，在一个方面，预期未成熟的双子叶植物种子可为未成熟的向日葵种子。
[0034] 在另外的方面，预期在从双子叶植物种子中提取之后，双子叶植物胚芽可为未损伤的。在这些方面，预期，在从未成熟双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽之后，双子叶植物胚芽可保持以完全存活力和活力生长的能力。更一般地，预期在从双子叶植物种子中提取之后，双子叶植物胚芽可保持萌发的能力。任选地，在另外的方面，预期可提取双子叶植物种子的双子叶植物胚芽，使得双子叶植物种子的其它材料基本上不从双子叶植物种子中提取出来。还预期，双子叶植物种子的所提取的双子叶植物胚芽在提取之后可充分地与其它材料分开，使得不需要筛分所提取的双子叶植物胚芽。
[0035] 在一个方面，未成熟双子叶植物种子可具有近端和相对的远端。在一个方面，预期，在将未成熟双子叶植物种子从生物载体移除之前，未成熟双子叶植物种子的近端可附着于生物载体并且未成熟双子叶植物种子的远端可与生物载体隔开。在示例性方面，当未成熟的双子叶植物种子为未成熟的向日葵种子时，向日葵种子的近端可包括向日葵种子的尖帽并且向日葵种子的远端可包括向日葵种子的冠部。
[0036] 任选地，在一些方面，预期可在双子叶植物种子的近端形成开口或孔。在一个方面，双子叶植物种子近端中的开口或孔可任选地在向双子叶植物种子施加力之前形成。在一个方面，预期双子叶植物种子可定位在任何位置，从而允许如本文所公开的向双子叶植物种子施加力。在多个方面，预期双子叶植物种子近端中的开口或孔可任选地在获得双子叶植物种子之前形成。另选地，在其它任选的方面，预期双子叶植物种子近端中的开口或孔可在获得双子叶植物种子之后制备。任选地，在一些方面，预期该方法还可包括清洁双子叶植物种子的至少近端。在多个方面，清洁双子叶植物种子的至少近端的步骤可包括对双子叶植物种子的表面进行灭菌。在其它示例性方面，预期可在获得双子叶植物种子之前清洁双子叶植物种子。任选地，在多个方面，可在获得双子叶植物种子之前对双子叶植物种子的表面进行灭菌。
[0037] 任选地，在其它方面，预期可从双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽，而无需在双子叶植物种子中形成开口或孔。在这些方面，预期双子叶植物种子的至少一部分可放置在液池中。任选地，预期在向双子叶植物种子施加力之前，双子叶植物种子可任选地完全浸没在液池中。另选地，预期双子叶植物种子的远端可任选地浸没在液池中，而近端的至少一部分定位在液池表面上方。还预期在向双子叶植物种子施加力之前和期间，整个双子叶植物种子可定位在液池表面上方。
[0038] 在示例性方面，当在双子叶植物种子中形成开口或孔时，预期施加力以提取双子叶植物胚芽的步骤可包括向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力，以迫使双子叶植物胚芽穿过双子叶植物种子近端中的孔。在这些方面，双子叶植物种子包括从种子的近端延伸至远端的侧部。预期向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力的步骤可包括在向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力的同时在选定取向上支撑双子叶植物种子。在示例性方面，向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力的步骤可包括向至少一个侧部施加在从种子的远端向种子的近端的方向上移动的轧制力。在其它示例性方面，当不在双子叶植物种子中形成开口或孔时，预期施加力以提取双子叶植物胚芽的步骤可包括向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力，以分裂双子叶植物种子的近端的一部分并迫使双子叶植物胚芽穿过双子叶植物种子的分裂部分。在这些方面，预期向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力的步骤可包括在向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力的同时在选定取向上支撑双子叶植物种子。
[0039] 任选地，在一些方面，在向双子叶植物种子施加力时，双子叶植物种子可完全浸没在液池中。在这些方面，预期双子叶植物种子的选定取向可与指向液池表面的双子叶植物种子的近端相对应。在其它方面，预期在向双子叶植物种子施加力时，双子叶植物种子可仅仅部分浸没在液池中。在这些方面，预期双子叶植物种子的选定取向可与浸没在液池中的双子叶植物种子的远端相对应，而双子叶植物种子的近端的至少一部分定位在液池表面上方。在其它方面，整个双子叶植物种子可定位在液池上方。
[0040] 在示例性方面，预期可通过将双子叶植物种子定位在液池中并且允许双子叶植物种子在液池中取向使得双子叶植物种子的近端指向上(朝向液池的表面)来将双子叶植物种子定位在选定取向。种子的远端可涂有含胶加重颗粒，以使远端下沉。在这些方面，预期具有过量材料(例如，“蜜蜂的翅膀”或穗轴材料)、杂质或滞留空气的双子叶植物种子可能不能按需取向。为了解决滞留空气的问题，预期如本文所公开的方法可任选地包括搅拌液池以使滞留空气从双子叶植物种子中逸出。预期任选的清洁和/或灭菌双子叶植物种子的步骤诸如如本文所公开的那些可解决过量材料或其它杂质的问题。在其它示例性方面，预期可使用常规手段将双子叶植物种子定位在选定取向，包括例如但不限于利用机器人分拣和操纵的机器可视化、振动取向和进料、辊分拣和进料、以及手动取向中的至少一个。
[0041] 预期双子叶植物种子近端中的开口或孔可通过任何常规装置形成，诸如，例如常规切割装置。在示例性方面，双子叶植物种子近端中的开口或孔可通过激光器形成，诸如，例如但不限于如本领域中所公知的冷切激光器、Q开关的CO2激光器、飞秒激光器、皮秒激光器、以及纳秒激光器。在其它方面，双子叶植物种子近端中的开口或孔可通过常规剪刀或刀片形成。任选地，在另外的示例性方面，可在双子叶植物种子的尖帽(最近侧的顶端)和种子内的双子叶植物胚芽之间的位置处切割双子叶植物种子的近端，以形成孔。在这些方面，可在与尖帽隔开选定距离的位置处切割双子叶植物种子的近端以形成开口或孔。预期与尖帽的选定距离可任选地在约0.1mm至约3mm的范围内。还预期，与尖帽的选定距离可任选地在约0.25mm至约1.5mm的范围内。
[0042] 任选地，在示例性方面，预期在双子叶植物种子的近端形成孔的步骤可为迭代过程，其中制备多个切口，直到实现孔的期望位置。在这些方面，预期第一切口可靠近双子叶植物种子的尖帽制备。如果第一切口的位置不是如本文所公开的开口或孔的期望位置，那么可在被定位更接近双子叶植物胚芽的第二位置处制备第二切口。预期此过程可根据需要以后续切口重复，直到到达开口或孔的期望位置。
[0043] 在另外的方面，可切割双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的一部分，以提取未成熟子叶节段的样本部分。任选地，在一个方面，未成熟子叶组织可通过激光器切割，诸如，例如但不限于如本领域中所公知的冷切激光器、O开关的CO2激光器、飞秒激光器、皮秒激光器、以及纳秒激光器。然而，预期用于未成熟子叶移除的任何已知装置均可与本文所公开的系统和方法一起使用。
[0044] 在另外的方面，可对双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分进行分析。在这些方面，分析可包括样本部分的遗传、化学和光谱分析中的至少一个。在另外的方面，该方法还可包括基于未成熟子叶节段的样本部分的分析(例如遗传分析)选择或丢弃双子叶植物胚芽的剩余部分。当基于未成熟子叶节段的样本部分的分析(例如遗传分析)选择双子叶植物胚芽时，预期该方法还可包括使双子叶植物胚芽的剩余部分(包括双子叶植物胚芽的分生节段)萌发。
[0045] 在从双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽之后，该方法还可包括收集双子叶植物胚芽。预期双子叶植物胚芽可通过机械装置收集。在示例性方面，双子叶植物胚芽可被提取，使得所提取的双子叶植物胚芽被接收在液池内，如本文所公开。在这些方面，预期可通过被定位与液池流体连通的管收集双子叶植物胚芽。在这些方面，预期管可被配置成顺序接收单个双子叶植物胚芽并且将双子叶植物胚芽输送到至少一个选定接收器。任选地，预期每个顺序的双子叶植物胚芽可被输送并接收在其自己相应的接收器内。另选地，预期多个双子叶植物胚芽可被顺序传送到单个接收器中。在另外的示例性方面，预期管和至少一个选定接收器可以操作性地联接到正压源或负压源，诸如，例如但不限于如本领域中所公知的抽吸泵。
[0046] 在示例性方面，液池可任选地填充有水、溶液、缓冲液和液体凝胶中的至少一种。
[0047] 在另外的示例性方面，未成熟双子叶植物种子可任选地为在授粉后7和13天之间获得的未成熟向日葵种子。
[0048] III.从未成熟双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽的方法
[0049] 在各种方面，提供了一种用于从未成熟双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽，使得双子叶植物胚芽在提取之后未损伤的方法。未成熟双子叶植物种子可具有近端和相对的远端。在将未成熟双子叶植物从生物载体移除之前，未成熟双子叶植物种子的近端可附着于生物载体并且未成熟双子叶植物种子的远端可与生物载体隔开。
[0050] 在一个方面，参考图3，该方法可包括提供分离的未成熟双子叶植物种子。任选地，在一个示例性方面，未成熟双子叶植物种子在双子叶植物种子的近端具有开口或孔。在该方面，可在将未成熟双子叶植物种子从生物载体移除之后提供分离的未成熟双子叶植物种子。在另一方面，当如本文所述双子叶植物种子的近端具有开口或孔时，该方法可包括通过双子叶植物种子近端中的开口或孔自动提取双子叶植物胚芽。任选地，预期可提取双子叶植物种子的双子叶植物胚芽，使得双子叶植物种子的其它材料不被提取。当如本文所述双子叶植物种子具有开口或孔时，预期双子叶植物种子的双子叶植物胚芽可被提取，使得双子叶植物种子的其它材料不通过双子叶植物种子的开口或孔被提取。还预期，双子叶植物种子的所提取的双子叶植物胚芽在提取之后可与其它材料充分分开，使得不需要筛分所提取的双子叶植物胚芽。在另外的方面，还预期提供双子叶植物种子的步骤可包括在不损伤双子叶植物胚芽的情况下自动移除双子叶植物种子的近端的至少一部分，以形成开口或孔。任选地，在一些方面，预期双子叶植物胚芽可在液池内提取，如本文进一步公开。在这些方面，还预期所提取的双子叶植物胚芽可被输送至选定接收器，如本文进一步公开。
[0051] 在示例性方面，预期未成熟的双子叶植物种子可为未成熟的向日葵种子。
[0052] 在另一方面，预期自动提取双子叶植物胚芽的步骤可包括向双子叶植物种子的至少一个侧部自动施加压力，以迫使双子叶植物胚芽穿过双子叶植物种子近端中的开口或孔。另选地，当不在双子叶植物种子中形成开口或孔时，预期自动提取双子叶植物胚芽的步骤可包括向双子叶植物种子的至少一个侧部自动施加压力，以分裂双子叶植物种子的近端的一部分并迫使双子叶植物胚芽穿过由双子叶植物种子的分裂部分限定的开口或孔。在另一方面，预期该方法还可包括在双子叶植物种子的近端形成开口或孔。在该方面，预期可任选地在双子叶植物种子的近端自动制备开口或孔。如本文进一步描述，预期在双子叶植物种子的近端内形成开口或孔的步骤可为迭代过程。任选地，在另外的示例性方面，可在双子叶植物种子的尖帽(最近侧的顶端)和种子内的双子叶植物胚芽之间的位置处切割双子叶植物种子的近端，以形成开口或孔。在这些方面，可在与尖帽隔开选定距离的位置处切割双子叶植物种子的近端以形成开口或孔。预期与尖帽的选定距离可任选地在约0.1mm至约3mm的范围内。还预期与尖帽的选定距离可任选地在约0.25mm至约1.5mm的范围内。在各种示例性方面，预期该方法还可包括使用成像系统对双子叶植物胚芽自动成像，以允许识别所提取的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段和分生节段。
[0053] 任选地，在一些方面，可在其提供之前对所分离的未成熟双子叶植物种子进行清洁和/或灭菌。另选地，在其它任选方面，预期该方法还可包括在双子叶植物种子的近端制备开口和/或向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力之前清洁双子叶植物种子的至少近端。还预期该方法可包括在双子叶植物种子的近端形成开口或孔和/或向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力之前对双子叶植物种子进行灭菌。在示例性方面，该方法可任选地包括诸如，例如在双子叶植物种子中形成开口或孔之前和/或在提取双子叶植物胚芽之前将双子叶植物种子定位在选定取向上，如本文进一步公开。在这些方面，将双子叶植物种子定位在选定取向上的步骤可任选地包括将双子叶植物种子放置在液池中，如本文进一步公开。
[0054] 任选地，在另一方面，所提取的双子叶植物胚芽可从双子叶植物种子的开口或孔释放到液池中。在此方面，液池可任选地填充有水、溶液、缓冲液和液体凝胶中的至少一种。任选地，在一些方面，预期在双子叶植物种子中形成开口或孔和/或从双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的步骤可在双子叶植物种子至少部分浸没在液池内的情况下发生，如本文进一步公开。
[0055] 在另一任选方面，该方法还可包括在不损伤所提取的双子叶植物胚芽的情况下自动移除所提取的双子叶植物胚芽的未成熟子叶组织的样本部分。任选地，还预期未成熟子叶组织的样本部分可通过激光器移除，诸如，例如但不限于如本领域中所公知的冷切激光器、Q开关的CO2激光器、飞秒激光器、皮秒激光器、以及纳秒激光器。然而，预期用于未成熟子叶移除的任何已知装置均可与本文所公开的系统和方法一起使用。
[0056] 在多个方面，可对未成熟子叶组织的样本部分进行分析。在这些方面，分析可包括样本部分的遗传、化学和光谱分析中的至少一个。在另外的方面，该方法还可包括基于未成熟子叶组织的样本部分的分析(例如遗传分析)选择或丢弃双子叶植物胚芽的分生组织。当基于未成熟子叶组织的样本部分的分子分析(例如遗传分析)选择双子叶植物胚芽的分生组织时，预期该方法还可包括使包括所选择的分生组织的双子叶植物胚芽的剩余部分萌发。
[0057] 在示例性方面，未成熟双子叶植物种子可任选地为在授粉后7和13天之间获得的未成熟的向日葵种子。未成熟种子可为在受精之后但是在生理成熟之前收获并且在没有外部营养物质的水中不萌发(硬壳种子的情况除外)的双子叶植物种子。例如，收获可发生在授粉后200和750生长度日之间。
[0058] IV.由未成熟双子叶植物种子再生植物的方法
[0059] 在各种方面，参考图4A，提供了一种由未成熟双子叶植物种子再生植物的方法。在这些方面，该方法可包括从未成熟双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽。如本文进一步公开，双子叶植物胚芽包括分生节段和未成熟子叶节段。预期双子叶植物胚芽可任选地在不损伤双子叶植物胚芽的情况下提取。还预期可自动提取双子叶植物种子的双子叶植物胚芽，使得双子叶植物种子的大部分其它材料不被提取。还预期，双子叶植物种子的所提取的双子叶植物胚芽在提取之后可与其它材料充分分开，使得不需要筛分所提取的双子叶植物胚芽。
[0060] 任选地，在一些方面，预期，方法可包括在提取双子叶植物胚芽之前在双子叶植物种子中形成开口或孔的步骤，如本文进一步公开。如本文所用，术语“开口”和“孔”互换使用并且是指将种子内部的一部分暴露于外部环境的贯穿种子果皮的任何开口、孔、孔口或撕裂处。如本文进一步描述，预期在双子叶植物种子的近端内形成开口或孔的步骤可为迭代过程。任选地，在示例性方面，可在双子叶植物种子的尖帽(最近侧的顶端)和种子内的双子叶植物胚芽之间的位置处切割双子叶植物种子的近端，以形成开口或孔。在这些方面，可在与尖帽隔开选定距离的位置处切割双子叶植物种子的近端以形成孔。预期与尖帽的选定距离可任选地在约0.1mm至约3mm的范围内。预期与尖帽的选定距离可任选地在约0.25mm至约1.5mm的范围内。在一个方面，预期未成熟双子叶植物种子可具有近端和远端，其中近端比远端更接近双子叶植物胚芽。在一个方面，预期未成熟双子叶植物种子近端中的开口或孔可在不损伤双子叶植物胚芽的情况下形成。在示例性方面并且如本文进一步公开，预期未成熟双子叶植物种子近端中的开口或孔可使用常规装置形成，诸如，例如但不限于剪刀、切割刀片、激光器等。尽管上文描述为通过切割未成熟双子叶植物种子形成，但是预期开口或孔也可通过向种子和/或在种子内施加压力形成，如本文进一步描述。例如，预期可在种子近端的弱化部分形成开口或孔。在示例性方面，种子近端的弱化部分可通过化学降解近端的一部分形成。在形成弱化部分之后，预期开口或孔可通过以下方式形成：夹住并撕裂、戳刺、刮削、和/或进一步化学降解种子近端的弱化部分。
[0061] 在示例性方面，方法可任选地包括诸如，例如在双子叶植物种子中形成孔之前和/或在提取双子叶植物胚芽之前将双子叶植物种子定位在选定取向上，如本文进一步公开。任选地，在一些方面，将双子叶植物种子定位在选定取向上的步骤可包括将双子叶植物种子放置在液池内，如本文进一步公开。在这些方面，液池可任选地填充有水、溶液、缓冲液和液体凝胶中的至少一种。在这些方面，预期从双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽的步骤可任选地在双子叶植物种子至少部分浸没在液池内的情况下发生，如本文进一步公开。
[0062] 在另外的示例性方面，预期可对双子叶植物种子的至少一部分进行清洁和/或灭菌，如本文进一步公开。
[0063] 在另外的方面，预期所提取的双子叶植物胚芽可被输送至选定接收器，如本文进一步公开。
[0064] 在另一方面，该方法可包括在不损伤双子叶植物胚芽的情况下自动移除双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分。在其它示例性方面，还预期未成熟子叶组织的样本部分可通过激光器移除，诸如，例如但不限于如本领域中所公知的冷切激光器、Q开关的CO2激光器、飞秒激光器、皮秒激光器、以及纳秒激光器。然而，预期用于未成熟子叶移除的任何已知装置均可与本文所公开的系统和方法一起使用。例如，在一些方面，预期未成熟子叶组织的样本部分可通过戳刺、刮削、和/或脱落移除，如本领域中所公知的。在各种示例性方面，预期该方法还可包括使用成像系统对双子叶植物胚芽自动成像，以允许识别所提取的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段和分生节段。
[0065] 在另一方面，该方法可包括分析(例如，遗传分析)双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分。在此方面，预期样本部分的分析可包括遗传、化学和光谱分析中的至少一个。在另一方面，该方法可包括由双子叶植物胚芽的剩余部分(包括双子叶植物胚芽的分生节段)再生植物。在此方面，预期在提取之后，双子叶植物胚芽可为未损伤的。
[0066] 在另外的方面，预期自动提取双子叶植物胚芽的步骤可包括自动施加力以提取双子叶植物胚芽。在这些方面，还预期施加力以提取双子叶植物胚芽的步骤可包括向双子叶植物种子的至少一个侧部施加压力，以迫使双子叶植物胚芽穿过双子叶植物种子近端中的孔。
[0067] 在多个方面，未成熟双子叶植物种子包括但不限于未成熟的向日葵种子。
[0068] 在多个方面，未成熟双子叶植物种子可任选地为在授粉后7和13天之间获得的未成熟的向日葵种子。
[0069] 预期，由所选择的未成熟双子叶植物种子分生组织再生植物的方法可经过修改，以允许分析多个未成熟双子叶植物种子。在示例性方面，如图4B所示，这种方法可包括从多个未成熟双子叶植物种子中的每个相应的双子叶植物种子中自动提取双子叶植物胚芽。在这些方面，该方法还可包括在不损伤双子叶植物胚芽的情况下自动移除每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分。任选地，可提取每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽，使得不通过双子叶植物种子近端的孔提取双子叶植物种子的其它材料。该方法还可包括自动分析(例如，遗传、化学、和/或光谱分析)每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分。该方法还可包括基于每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分的分析自动选择或丢弃每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的剩余部分。在示例性方面，可选择多个双子叶植物种子中的至少一个双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的分生组织。在另外的方面，该方法可包括由每个相应的双子叶植物胚芽的剩余部分(包括分生节段)再生植物。
[0070] 任选地，在示例性方面，预期可以自动方式执行以下步骤中的至少一个：移除每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分；对每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分进行遗传分析；基于每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分的遗传分析选择或丢弃每个相应的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的剩余部分；以及由每个相应的所选择的双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的剩余部分再生植物。
[0071] V.所提取的双子叶植物胚芽的示例性使用
[0072] 在各种方面，参考图4C，预期本文所公开的双子叶植物胚芽提取方法和系统可允许通过该大型跟踪系统对各个双子叶植物胚芽进行一对一跟踪。在这些方面，预期包含每个相应的双子叶植物胚芽(或来自所选择的批次的双子叶植物胚芽的组)的接收器可被分配至少一个唯一标识符(例如，带有条形码的批次标识编号)，使用常规自动化和/或计算机法将唯一标识符输入数据库中并对其进行跟踪。还预期每个唯一接收器标识符可与关于接收器内包含的一个或多个双子叶植物胚芽的信息链接，诸如，例如但不限于双子叶植物种子的品种、从其获得双子叶植物胚芽的植物的具体位置(田内)、双子叶植物种子在其生物载体上的位置(例如，向日葵种子在种子头上的位置)等。因此，预期每个接收器可被分配至少一个被读取并输入跟踪系统的数据库中的唯一标识符。类似地，预期给定批次的双子叶植物胚芽可被分配唯一批次标识符，可在提取过程开始之前通过跟踪系统扫描该唯一批次标识符。当来自给定批次的一个或多个双子叶植物胚芽被接收在接收器内时，与接收器相关联的数据库条目可自动更新以将接收器与批次标识符相关联。跟踪还可包括创建和使用相同或不同的唯一标识符将种子的胚芽与胚芽或种子的其它部分相关联，诸如将胚芽与该胚芽的样本或从其提取胚芽的种子的样本相关联。
[0073] 下文公开所提取的双子叶植物胚芽的一些示例性应用。
[0074] a.植物育种
[0075] 在示例性方面，预期如本文所公开提取的双子叶植物胚芽可用于植物育种，如本领域中所公知的。一般来讲，在多个方面，预期可由如本文所公开提取的未损伤的双子叶植物胚芽再生植物。还预期，使用所提取的双子叶植物胚芽再生植物可使用常规植物育种方法实现。
[0076] 在多个方面，预期如本文所公开提取的双子叶植物胚芽可用于植物育种目的，如本领域中所公知的，例如对于包含特定性状或基因的胚芽，无论是野生型还是转基因的。在多个方面，可将一个或多个所提取的双子叶植物胚芽放置在具有一种或多种选择剂的生长培养基中，以评估双子叶植物胚芽对一种或多种选择剂的抗性。预期对一种或多种选择剂具有抗性的双子叶植物胚芽将生长，而对一种或多种选择剂抗性不足的双子叶植物胚芽将死亡。
[0077] 在多个方面，预期可在将双子叶植物胚芽放置在选择或生长培养基中之前获得所提取的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本。在多个方面，预期可使用多种技术移除双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本部分。在示例性方面，预期移除未成熟子叶节段的样本部分的过程可包括通过自动检测装置识别所提取的双子叶植物胚芽的取向和位置，所述手段诸如，例如但不限于如本领域中所公知的机器视觉、成像系统、以及感测装置。移除样本的过程还可包括使用自动装置(例如机器人装置)拾取双子叶植物胚芽。然后可将双子叶植物胚芽与切割装置对齐，诸如，例如但不限于组织切割激光器。可将切割装置应用于双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段，以便以如本文所述保留双子叶植物胚芽的存活力和活力的方式获取样本。然后样本可被接收在选定接收器内，诸如，例如但不限于子弹管、场板等。在移除样本之后，该过程还可包括将双子叶植物胚芽定位到生长培养基上，诸如，例如但不限于，组织培养器皿或如本领域中所公知的其它容器。将双子叶植物胚芽定位到选择或生长培养基中或所述培养基上之后，预期所得的培养组织可用于植物育种应用，如本领域中所公知的。
[0078] 在示例性方面，预期如本文所公开提取的双子叶植物胚芽可用于双单倍体过程，如本领域中所公知的。在这些方面，预期双单倍体过程可任选地与植物育种过程一起使用，如本领域中所公知的。在一些方面，可将一个或多个所提取的双子叶植物胚芽放置在包含如本领域中所公知的抗有丝分裂染色体加倍剂(例如，秋水仙碱、氨磺乐灵、甲基胺草磷或氟乐灵)的培养基中。在这些方面，预期将所提取的双子叶植物胚芽放置在加倍培养基中可导致每个双子叶植物胚芽的染色体的加倍。还预期，所提取的双子叶植物胚芽可基于特征(例如通过化学和/或光谱分析揭示的特征)进行选择。在另外的方面，在双单倍体的鉴定之后，可将双单倍体放置到生长培养基上，并且可开始萌发。任选地，预期可在将双子叶植物胚芽放置在生长培养基中之前获得所提取的双子叶植物胚芽的未成熟子叶节段的样本。
[0079] VI.用于提取和/或分离双子叶植物胚芽的示例性系统
[0080] 设想了多种用于执行一个或多个本文所公开的方法步骤的系统。
[0081] a.单个化组件
[0082] 在一个示例性方面，预期可通过首先将双子叶植物种子定位在液池中来将双子叶植物种子从其它双子叶植物种子中单个化出来。在此方面，液池可定位在容器内，并且该容器可限定被配置成在给定时间接收单个双子叶植物种子的出口开口或通道。容器可被配置成促进液体流动通过出口开口或通道，使得单个双子叶植物种子通过开口或通道，从而确保将每个相应的双子叶植物种子从容器内的其它双子叶植物种子中单个化出来。任选地，可提供机械装置，以用于实现双子叶植物种子朝向出口开口或通道的移动。出口开口或通道可被定位与切割和/或提取组件流体连通，如本文进一步公开。
[0083] 在其它示例性方面，预期可采用任何常规的用于将双子叶植物种子从其它双子叶植物种子中单个化出来的装置。例如，预期用于将双子叶植物种子单个化的装置可包括被配置成一次仅允许一个双子叶植物种子离开的料斗。
[0084] b.自动提取系统
[0085] 预期可采用任何常规切割装置如本文所述在双子叶植物种子的近端形成开口或孔。在示例性方面，这种切割装置可为激光器，诸如，例如但不限于如本领域中所公知的冷切激光器、Q开关的CO2激光器、飞秒激光器、皮秒激光器、以及纳秒激光器。在其它示例性方面，预期切割装置可为如本领域中所公知的刀或刀片组件。在各种方面，预期可将切割装置结合到如本文所公开的用于在至少一个双子叶植物种子中形成开口或孔的自动系统中。在多个方面，自动系统可进一步被配置成向双子叶植物种子施加力，以在不损伤双子叶植物胚芽的情况下提取双子叶植物种子的双子叶植物胚芽。
[0086] i.具有“转盘”组件的自动提取系统
[0087] 在一个示例性方面，参考图6A-6C，预期双子叶植物胚芽提取系统可包括被配置用于围绕旋转轴线旋转的转盘子组件。在此方面，转盘子组件可包括多个抽吸头，所述抽吸头围绕转盘子组件周向隔开并且其尺寸被设定成分别接合多个双子叶植物种子的远端(冠部)。预期抽吸头可被定位与负压源操作性地连通，从而允许双子叶植物种子和抽吸头之间的固定接合。在双子叶植物种子和抽吸头之间接合时，预期双子叶植物种子可与旋转轴线隔开选定的径向距离。任选地，抽吸头可从转盘子组件向外突出。
[0088] 在一个方面，双子叶植物胚芽提取系统可包括具有切割装置的切割子组件。在此方面，切割装置可相对于旋转轴线径向定位，使得切割装置被配置成在靠近双子叶植物种子近端的选定位置处，诸如，例如但不限于距离双子叶植物种子的近侧尖端(尖帽)约0.5mm和约5mm之间，向每个相应的双子叶植物种子施加切割力。因此，当转盘子组件相对于旋转轴线旋转时，可在与转盘子组件接合的每个双子叶植物种子的近端形成开口。在示例性方面，切割装置可包括被定位在基本上平行于旋转轴线的平面内并且被配置用于选择性旋转的圆形刀片。在这些方面，预期固定的支撑元件可在刀片的平面内定位在圆形刀片下方，从而在刀片向双子叶植物种子施加切割力时使双子叶植物种子稳定。任选地，在一些方面，切割子组件可包括被定位与切割装置操作性地通信且被配置成光学感测和/或测量双子叶植物种子的位置的成像系统。在这些方面，还预期成像系统可被配置成响应于双子叶植物种子的感测和/或测量而实现切割装置的位置的调节。
[0089] 预期，双子叶植物胚芽提取系统可包括被配置成在由切割装置在双子叶植物种子的近端形成开口或孔之后向每个相应的双子叶植物种子的至少一个侧部施加力的提取子组件。在此方面，提取子组件可包括被配置用于在基本上平行于旋转轴线的平面内移动的力施加元件。预期，力施加元件可相对于旋转轴线径向定位，使得力施加元件的移动平面在转盘子组件的旋转期间可与每个相应的双子叶植物种子的远端的一部分相交，从而允许将力施加至每个双子叶植物种子，使得在不损伤双子叶植物胚芽的情况下提取双子叶植物种子的双子叶植物胚芽。在示例性方面，提取子组件可包括被定位在力施加元件的移动平面内的固定的支撑元件，从而在力施加元件向双子叶植物种子的远端施加力时使双子叶植物种子稳定。任选地，力施加元件可为如本领域中所公知的杠杆作用工具。
[0090] 在另外的示例性方面，双子叶植物胚芽提取系统还可包括被定位与提取子组件操作性地连通的双子叶植物胚芽收集子组件。任选地，预期收集子组件可包括被配置用于相对于基本上平行于转盘子组件的旋转轴线的轴线旋转的纹理化辊。还预期，辊可被配置成接收从双子叶植物中提取的双子叶植物胚芽并旋转，使得双子叶植物胚芽被输送至水浴，如本文进一步描述。
[0091] ii.具有“垂直转轮”组件的自动提取系统
[0092] 在一个示例性方面，如图5A-5B所示，双子叶植物胚芽提取系统可包括被配置成围绕旋转轴线旋转的转轮组件(诸如，例如但不限于竖直取向的转轮组件)。在此方面，预期旋转轴线可被取向成基本上平行于支撑双子叶植物胚芽提取系统的平坦表面。还预期，转轮组件可限定围绕转轮组件的内径周向定位的多个接收器，其中每个接收器包括双子叶植物种子保持夹具。每个双子叶植物种子保持夹具可被配置成当转轮组件围绕旋转轴线旋转时接收并牢固地接合相应的双子叶植物种子。在示例性方面，每个保持夹具可以是在打开位置和接合位置之间可移动的，其中，在打开位置，保持夹具可被配置成接收双子叶植物种子，并且在接合位置，保持夹具牢固地接合双子叶植物种子。如图所示，每个保持夹具可包括一对隔开的夹持元件，夹持元件在打开位置隔开第一距离并且在接合位置隔开第二距离(较小)。预期保持夹具(和保持夹具的夹持元件)可为弹簧加载的，从而维持保持夹具的取向和夹持力。
[0093] 在另一方面，双子叶植物胚芽提取系统可包括如本文所公开的任选地填充有液池的双子叶植物种子容器。在此方面，双子叶植物胚芽提取系统可允许双子叶植物种子的取向和/或单个化，如本文所公开的。双子叶植物种子容器可限定被配置成顺序接收定位在双子叶植物种子容器内的各个双子叶植物种子的开口或通道。预期可选择性地控制双子叶植物种子容器内的流体流动，以调节通过开口或通道对双子叶植物种子的输送。预期开口或通道可被定位与转轮组件操作性地连通，如本文进一步公开。
[0094] 在示例性方面，双子叶植物种子容器的开口或通道可被定位与转轮组件的底部部分操作性连通，使得当每个相应的保持夹具被定位靠近转轮组件的底部部分时，保持夹具可被配置成接收来自双子叶植物种子容器的相应的双子叶植物种子。在这些方面，预期当保持夹具到达转轮组件的底部部分时，每个保持夹具可被定位在打开位置。还预期，双子叶植物种子容器可提供水流，水流将每个相应的双子叶植物种子推动到对应的保持夹具中。在示例性方面，底部部分可与转轮组件上的六点钟位置基本上相对应。
[0095] 在另外的示例性方面，预期转轮组件可被配置用于在选定方向上移动(例如，当从转轮组件的前部观察时为顺时针或逆时针)。因此，将双子叶植物种子加载到保持夹具中之后，在转轮组件以选定方向旋转，使得保持夹具经过转轮组件的底部部分时，保持夹具可被配置成移动至接合位置。在一个示例性方面，当转轮组件被配置用于以逆时针方向移动时，预期当保持夹具经过转轮组件上的5∶30位置时，保持夹具可被配置成移动至接合位置。
[0096] 在另外的方面，预期该系统可设有定位在转轮组件上的第一选定位置，用于如本文所公开在双子叶植物种子的近端形成开口的切割装置。在一个方面，预期切割装置可任选地为可基于由如本领域中所公知的成像系统获得的双子叶植物种子的位置和/或尺寸的测量而选择性地调节的自动切割元件。在其它任选方面，预期切割装置可为机械偏置切割器，诸如，例如但不限于马铃薯削皮机型切割器、曼陀林刨片机型切割器、或奶酪锉型切割器。在保持夹具定位在接合位置的情况下，当保持夹具到达转轮组件上的第一选定位置时，预期切割装置可被激活，以在定位于保持夹具内的双子叶植物种子的近端形成开口。在一个示例性方面，当转轮组件被配置用于以逆时针方向移动时，预期第一选定位置可与转轮组件上的三点钟位置基本上相对应。
[0097] 在另外的方面，预期转轮组件可设有用于如本文所公开向双子叶植物种子的至少一个侧部施加另外的外部正向力的装置。在这些方面，用于向双子叶植物种子的远端施加另外的外部正向力的装置可被定位在转轮组件上的第二选定位置。在示例性方面，预期用于向双子叶植物种子的远端施加另外的外部正向力的装置可被配置用于操作性地联接至每个相应保持夹具的夹持构件，以进一步压缩接收在夹持构件内的双子叶植物种子的远端。在另外的方面，在向双子叶植物种子施加另外的力时，预期可如本文所公开通过双子叶植物种子近端中的孔提取双子叶植物种子的双子叶植物胚芽。还预期，该系统可包括辊、带、槽、或用于接收所提取的双子叶植物胚芽并将双子叶植物胚芽输送至一个或多个选定接收器而不对双子叶植物胚芽造成损伤的其它装置。因此，在操作中，在相应的双子叶植物种子中形成孔之后，当包含双子叶植物种子的保持夹具到达转轮组件上的第二选定位置时，可向双子叶植物种子的至少一个侧部施加另外的外部正向力，以提取双子叶植物胚芽，如本文所公开的。预期所提取的胚芽可被接收并自动输送至选定接收器，而不对双子叶植物胚芽造成损伤。在一个示例性方面，当转轮组件被配置用于以逆时针方向移动时，预期第二选定位置可与转轮组件上的十二点钟位置基本上相对应。
[0098] 在另外的方面，预期该系统可包括用于将每个相应的保持夹具机械移动至打开位置的装置。在这些方面，预期用于将每个相应的保持夹具机械移动至打开位置的装置可定位在转轮组件的第二选定位置和底部部分(相对于转轮组件的圆周)之间。在一个示例性方面，当转轮组件被配置用于以逆时针方向移动时，预期用于将每个相应的保持夹具机械移动至打开位置的装置可定位在转轮组件上的十二点钟位置和六点钟位置之间。
[0099] 在另外的方面，预期该系统可包括用于移除每个相应的保持夹具内的双子叶植物种子的残余物的装置。在这些方面，预期用于移除双子叶植物种子的残余物的装置可定位在用于将每个相应的保持夹具机械移动至打开位置的装置和转轮组件的底部部分(相对于转轮组件的圆周)之间。用于移除双子叶植物种子的残余物的示例性装置可包括负压源和流体分配器。预期，当每个相应的保持夹具返回到转轮组件的底部部分时，可对于另一个双子叶植物种子重复以上过程。
[0100] 如图所示，预期转轮组件可包括被配置成接合保持夹具的部分并实现保持夹具在打开位置和接合位置之间的移动的多个内部通道和/或突出部，如本文所公开。
[0101] iii.自动提取装置
[0102] 在一个示例性方面，如图7所示，提供了一种用于从双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽的自动提取装置。在此方面，提取装置可具有操作性地联接到装置的底部部分的支撑基座。支撑基座可被配置成在期望取向上支撑双子叶植物种子，如本文所公开的。提取装置还可包括与支撑基座配合以限定用于双子叶植物种子的中心接收空间的多个周向隔开的指状物。多个周向隔开的指状物可被取向朝向装置的中心轴线，所述中心轴线与双子叶植物种子的中心点基本上对齐。多个周向隔开的指状物可被配置在打开位置和夹持位置之间选择性径向移动。多个周向隔开的指状物可被配置成向双子叶植物种子选择性地施加径向力。在示例性方面，多个指状物可被配置成在双子叶植物种子中形成开口或孔期间施加足以支撑双子叶植物种子的第一量值的力，如本文所公开的。在这些方面，多个指状物还可被配置成施加足以迫使双子叶植物种子的双子叶植物胚芽穿过双子叶植物种子的孔而不损伤双子叶植物胚芽的第二量值的第二力。预期多个指状物可任选地使用气动装置激活，诸如，例如但不限于气动软管。在示例性方面，多个指状物可包括三个指状物。一般来讲，预期奇数个夹持表面可提供有利的集中。还预期，如图所示的指状物的倾斜可产生有利的内和下挤压分布(in-and-down squeezing profile)。在示例性方面，多个指状物可被配置成以脉冲方式施加径向提取力。还预期，指状物的夹持表面可具有通常匹配双子叶植物种子曲率的曲率。在另外的示例性方面，预期自动提取装置可包括3爪机器人操纵器，其中每个爪联接到相应的指状物并且支撑基座安装至机器人操纵器的顶表面。在另外的示例性方面，预期自动提取装置可被配置用于水下使用。
[0103] c.双子叶植物胚芽输送组件
[0104] 在如本文所公开从双子叶植物种子中提取双子叶植物胚芽之后，可从容器中收集双子叶植物胚芽，容器诸如，例如但不限于如本文所述的包含液池的容器。预期双子叶植物胚芽可通过避免对双子叶植物胚芽造成损伤的任何机械装置收集。在示例性方面，预期可通过被定位与容器流体连通的管收集双子叶植物胚芽。在这些方面，预期管可被配置成顺序接收单个双子叶植物胚芽并且将双子叶植物胚芽输送到至少一个选定接收器。任选地，在另外的示例性方面，预期管和至少一个选定接收器可以操作性地联接到正压源或负压源，诸如，例如但不限于如本领域中所公知的抽吸泵。
[0105] d.分析系统
[0106] 在示例性方面，预期本发明所公开的方法的分析步骤可使用以下各项执行：常规遗传分析设备、常规化学分析设备、和/或常规光谱分析设备、和/或结合任何数目的这些步骤(包括例如但不限于提取、稀释等)的自动化系统。
[0107] e.双子叶植物种子移除设备
[0108] 当未成熟双子叶植物种子为未成熟的向日葵种子时，预期在将双子叶植物种子从其种子头移除之后，可提供双子叶植物种子用于本发明所公开的方法。在多个方面，预期未成熟的向日葵种子可手动移除，而无需使双子叶植物种子破裂。在其它示例性方面，预期未成熟的向日葵种子可通过被配置成充分接近种子头进行切割以避免损伤双子叶植物种子的双子叶植物胚芽的设备移除。
[0109] 以下实施例是以说明性而非限制性方式提供的。
[0110] 实验
[0111] 实施例1：使用五种不同方法提取的未成熟胚芽的状况和质量的比较
[0112] 使用五种不同的方法提取未成熟胚芽：手动提取；高压水；抽吸；人工挤压；以及半自动挤压。针对每种相应的方法，对所提取胚芽的状况和质量进行评价。
[0113] 一穗未成熟的玉米用于每个提取方法。胚芽长2.0-3.5mm并且在授粉后12-18天(对应于340-380生长度单位(GDU))提取。胚芽的大小与典型的双单倍体生产方法中所用的那些基本上相同。
[0114] i.灭菌和清洁
[0115] 初始，从四穗未成熟玉米上移除壳和穗丝。在移除壳和穗丝之后，将每穗固定至穗保持器。接着将穗定位在空瓶内。然后用包含20％-50％CLOROX漂白剂、一滴 20以及自来水的溶液填充瓶。将穗浸泡在无菌溶液中，其中使用穗保持器使穗偶尔旋转。浸泡15-20分钟之后，将穗从溶液中移除，然后用自来水漂洗三次。
[0116] ii.种子制备
[0117] 对于人工、高压水和抽吸提取法，使用穗保持器保持穗，并且使用外科手术刀切下穗上每颗玉米种子的谷粒冠。
[0118] 对于人工挤压提取法，使用穗保持器保持穗，并且使用指尖将整个种子从穗轴移除。然后使用外壳手术刀切下种子的各个谷粒尖端。
[0119] 对于半自动挤压提取法，使用穗保持器保持穗，并且使用指尖将整个种子从穗轴移除。
[0120] iii.胚芽提取
[0121] 对于人工提取法，使用刮刀从穗中(种冠已移除)移除30个胚芽。
[0122] 对于高压水提取法，选择性地定位穗(种冠已移除)，并且使用人工压力喷嘴将胚芽从种子中冲洗出来并进入捕获盘(皿)。使用自来水将胚芽碎片冲洗通过尺寸减小的网筛，直到可清楚地识别胚芽。使用刮刀从筛子中移除30个胚芽。
[0123] 对于真空提取法，使用真空泵通过管材从穗中(种冠已移除)移除胚芽。管材被定位与锥形烧瓶流体连通，由此使得所提取的胚芽被传送到烧瓶中。用自来水将烧瓶内的胚芽冲洗通过尺寸减小的网筛以将胚芽与胚芽碎片分开，直到可清楚地识别胚芽。使用刮刀从筛子中移除30个胚芽。
[0124] 对于人工挤压提取法，将每颗种子(已移除其尖端)定位在操作员的拇指和食指之间，并且轻柔地施加压力，直到胚芽被弹出种子进入干净的容器中。使用刮刀从容器中移除30个胚芽。
[0125] 对于半自动挤压提取法，将如本文所公开且在图7中描绘的自动提取装置设置成其指状物处于打开位置。各个谷粒被定位在限定于打开的指状物和提取装置的支撑基座之间的中心接收空间内。谷粒被定位成其尖端面向上，并且提取装置的指状物被推进至夹持位置以将谷粒保持在期望取向。在第一试验中，在由提取装置的指状物夹持谷粒的同时使用外科手术刀移除一些谷粒的尖端的一部分(在不损伤胚芽的情况下)，而在将谷粒定位在提取装置内之前移除其它谷粒的尖端。在第二试验中，在将谷粒定位在提取装置内之前移除所有谷粒的尖端。在每个谷粒由提取装置的指状物夹持的情况下，指状物被径向推进以向谷粒侧面施加提取力。提取力根据需要脉动，直到胚芽离开形成于谷粒尖端的孔。指状物接着返回到打开位置，并且所提取的胚芽被收集。重复此过程，直到提取并收集30个胚芽。描绘第一试验的执行的图像提供于图8A中，并且描绘第二试验的执行的图像提供于图8B中。
[0126] iv.胚芽接种
[0127] 五个培养皿填充有605J恢复培养基，并且一个培养皿填充有272X恢复培养基。将每个培养皿的封盖移除，使用刮刀将每个相应的提取方法的30个所提取的胚芽均匀地分布在对应培养皿中的恢复培养基上(以确保胚芽之间足够分开)。将使用人工提取、高压水、抽吸和人工挤压法提取的胚芽定位在605J恢复培养基内，并且将使用半自动挤压法提取的胚芽定位在272X恢复培养基内。将封盖重新放置在每个培养皿上，并且使用标志物根据用于提取培养皿内的胚芽的方法和培养皿相对于其它培养皿的位置对每个培养皿做标记。
[0128] v.胚芽分析
[0129] 在显微镜下对每个胚芽进行分析，并且由两个不同的分析员独立记录每个胚芽的状况和质量的分数。分析员寻找损伤、缺陷或可能对胚芽的生长和/或活力具有不利影响的其它应力问题。按1-3的总体状况等级对每个胚芽进行评级，其中1＝优异状况，2＝小缺陷或损伤(仍然能够正常生长)，并且3＝大缺陷或损伤(不太可能生长或正常生长)。记录关于每个胚芽的状况或质量的任何解释或评论。制备每个培养皿的数字记录及其内容。
[0130] vi.结果
[0131] 胚芽状况和质量分数示于如图9所提供的表中。如表中所指示，通过人工手动挤压和人工方法提取的胚芽的状况和质量非常好并且基本上相同。通过半自动提取法提取的胚芽的状况和质量略低于通过手动人工挤压和人工提取法提取的胚芽的状况和质量。通过抽吸或高压冲洗法提取的胚芽的状况和质量与人工挤压、人工和半自动提取法相比较差。
[0133] 如本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一个”、“一种”、“该”包括复数指代，除非上下文清楚地表明并非如此。
[0134] 范围可在本文表达为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表达这种范围时，另一个方面包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表达为近似值时，应理解，该特定值形成另一个方面。还应当理解，每个范围的端值不论是相对于另一个端值，还是独立于另一个端值都是有意义的。还应理解，本文公开了多个值，并且每个值在本文也公开为除该值自身之外的“约”该特定值。例如，如果公开了“10”，那么也公开了“约10”。还应理解，还公开了两个特定单位之间的每个单位。例如，如果公开了10和15，那么也公开了11、12、13和14。
[0135] 在说明书和最后的权利要求书中提到组合物中的特定元素或组分的重量份时，表示组合物或制品中该元素或组分和任何其它元素或组分之间的重量关系，用重量份表示。因此，在包含2重量份组分X和5重量份组分Y的化合物中，X和Y以2∶5的重量比存在，并且无论化合物中是否包含另外的组分，均以这一比率存在。
[0136] 如本文所用，术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可或可不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的情形和不发生的情形。例如，在一个方面，包含靶标部分和寡核苷酸的复合物可任选包含可检测标签。在一个方面，本发明所公开的方法可任选包括重复施用本发明所公开的组合物和/或复合物。
[0137] 虽然为了清楚理解的目的已通过例证和实施例的方式详细地描述的前述发明，但一些变化和修改可在所附权利要求的范围内实施。
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