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高湿损伤动物模型建立方法及检测高湿损伤的方法

阅读：922发布：2023-02-02

专利汇可以提供高湿损伤动物模型建立方法及检测高湿损伤的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供了一种高湿损伤动物模型建立方法及检测高湿损伤的方法，旨在解决目前无法确定高湿环境对动物造成影响的问题。一种高湿损伤动物模型建立方法，包括对SPF级雄性SD大鼠分成对照组和高湿组。(2)对照组：大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度 RH为(50±5)％的条件下自由饮食，造模30天。高湿组：每天将大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度RH为(90±5)％的条件下，自由饮食10小时。其余时间，将大鼠在与对照组相同的环境下自由饮食。造模30天。一种检测高湿损伤的方法，包括取材和病理检测。(1)取经过上述方法建立的大鼠模型。对大鼠模型均进行器官采集。(2)对采集的器官病理检测。，下面是高湿损伤动物模型建立方法及检测高湿损伤的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种高湿损伤动物模型建立方法，其特征是：依次包括以下步骤：
(1)选取实验动物及分组：
取健康状况良好且平均体重在200～220g之间的SPF级雄性SD大鼠，适应性喂养7天，然后随机分成数量相等的对照组和高湿组；
(2)造模：
对照组：大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度RH为(50±5)％的条件下自由饮食，造模30天；
高湿组：每天将大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度RH为(90±5)％的条件下，自由饮食10小时；其余时间，将大鼠在与对照组相同的环境下自由饮食造模30天。
2.根据权利要求1所述的一种高湿损伤动物模型建立方法，其特征是：将对照组和高湿组种的大鼠均放置在恒温光照培养箱内造模，在造模之前，房间和恒温光照培养箱均经过紫外光照处理并保持相对无菌。
3.根据权利要求1所述的一种高湿损伤动物模型建立方法，其特征是：在造模过程中，对大鼠身体指标进行检测。
4.根据权利要求3所述的一种高湿损伤动物模型建立方法，其特征是：身体指标检测包括常规指标检测；
常规指标检测包括体重、平均进食量、饮水量、大便、皮毛和精神状态的检测。
5.根据权利要求4所述的一种高湿损伤动物模型建立方法，其特征是：常规指标检测还包括血常规指标检测；
血常规指标检测：对血红蛋白和白细胞进行计数和分类。
6.一种检测高湿损伤的方法，其特征是：包括取材和病理检测；
(1)取材：取经过权利要求1或2任一所述方法建立的大鼠模型；对高湿组和对照组中的大鼠模型均进行器官采集；
心脏采集：采用组织剪向左上剪开胸壁，充分暴露心脏，采用组织剪剪断升主动脉和上腔静脉，游离心脏表面结缔组织，放入0.9％生理盐水中冲洗干净；
双肺采集：采用组织剪向右上剪开胸壁，采用组织镊向两侧牵拉暴露胸腔，采用组织剪剪断气管和胸主动脉，游离肺与胸壁之间的结缔组织，放入0.9％生理盐水中冲洗干净；
肝脏采集：采用组织剪向下沿腹中线剪开腹腔，显露大鼠肝脏，游离肝脏周围的韧带并剪断腹主动脉和下腔静脉，取下肝脏并放入0.9％生理盐水中冲洗干净；
肾脏采集：采用组织镊将大鼠肠道牵引至体外，暴露双侧肾脏，剪断肾动静脉，游离双侧肾脏，取下双侧肾脏并放入0.9％生理盐水中冲洗干净；
脑采集：采用组织剪剪开大鼠颅骨表面的皮肤和肌肉组织，用咬骨钳夹住顶骨后缘向两侧掰开顶骨，暴露两侧大脑半球，然后用咬骨钳咬掉两侧颞骨，然后用咬骨钳咬掉两侧颞骨及额骨，暴露脑组织；用眼科剪剪断脑干及颅底三叉神经和视神经，最后取出脑组织，放入冰碗中；
(2)病理检测：
对采集的心脏、双肺、肝脏、肾脏和脑进行病理切片，HE染色，观察常规病理改变。

说明书全文

高湿损伤动物模型建立方法及检测高湿损伤的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种高湿损伤动物模型建立方法及一种检测高湿损伤的方法。

背景技术

[0002] 许多疾病的诱发都与外界环境及气象条件的变化密切相关，高湿环境也是影响人体健康的重要因素。多项研究表明高湿环境分布广泛且与一系列的呼吸系统疾病和过敏性疾病相关，如上呼吸道感染、哮喘、哮喘的发病及恶化、支气管炎、鼻炎、湿疹等。欧洲呼吸健康调查机构对几千个20-45岁成人的肺功能和居住环境进行了调查，还发现潮湿会增加肺功能减弱的风险。2014年美国医学研究所发表文献综述，报道室内高湿环境可能直接造成上呼吸道病症、咳嗽、气喘、哮喘病的加重等。但是目前的研究没有明确试验证据表明高湿可以直接导致疾病发生。

[0003] 我国传统中医认为湿属于六淫之一，是导致或诱使疾病发作的重要因素，可以引起机体全身多系统功能的损害。多项实验结果表明，高湿环境下，实验动物的生理健康会受到影响，如消化系统疾病、能量代谢紊乱、免疫机能改变等。但是高湿环境影响机体正常生理功能机制尚不明确。综上所述，建立高湿环境下的动物损伤模型，可为高湿损伤机制及预防治疗方法的研究提供实验动物基础。

发明内容

[0004] 本发明提供了一种高湿损伤动物模型建立方法及检测高湿损伤的方法，旨在解决目前无法确定高湿环境对动物造成影响的问题。

[0005] 为了解决以上技术问题，本发明通过以下技术方案实现：

[0006] 一种高湿损伤动物模型建立方法，依次包括以下步骤：

[0007] (1)选取实验动物及分组：

[0008] 取健康状况良好且平均体重在200～220g之间的SPF级雄性SD大鼠，适应性喂养7天，然后随机分成数量相等的对照组和高湿组。

[0009] (2)造模：

[0010] 对照组：大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度RH为(50±5)％的条件下自由饮食，造模30天。

[0011] 高湿组：每天将大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度RH为(90±5)％的条件下，自由饮食10小时。其余时间，将大鼠在与对照组相同的环境下自由饮食造模30天。

[0012] 进一步，将对照组和高湿组种的大鼠均放置在恒温光照培养箱内造模，在造模之前，房间和恒温光照培养箱均经过紫外光照处理并保持相对无菌。

[0013] 进一步，在造模过程中，对大鼠身体指标进行检测。

[0014] 进一步，身体指标检测包括常规指标检测。常规指标检测包括体重、平均进食量、饮水量、大便、皮毛和精神状态的检测。

[0015] 进一步，常规指标检测还包括血常规指标检测，对血红蛋白和白细胞进行计数和分类。

[0016] 一种检测高湿损伤的方法，包括取材和病理检测。

[0017] (1)取材：取经过权利要求1或2任一所述方法建立的大鼠模型。对高湿组和对照组中的大鼠模型均进行器官采集。

[0018] 心脏采集：采用组织剪向左上剪开胸壁，充分暴露心脏，采用组织剪剪断升主动脉和上腔静脉，游离心脏表面结缔组织，放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0019] 双肺采集：采用组织剪向右上剪开胸壁，采用组织镊向两侧牵拉暴露胸腔，采用组织剪剪断气管和胸主动脉，游离肺与胸壁之间的结缔组织，放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0020] 肝脏采集：采用组织剪向下沿腹中线剪开腹腔，显露大鼠肝脏，游离肝脏周围的韧带并剪断腹主动脉和下腔静脉，取下肝脏并放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0021] 肾脏采集：采用组织镊将大鼠肠道牵引至体外，暴露双侧肾脏，剪断肾动静脉，游离双侧肾脏，取下双侧肾脏并放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0022] 脑采集：采用组织剪剪开大鼠颅骨表面的皮肤和肌肉组织，用咬骨钳夹住顶骨后缘向两侧掰开顶骨，暴露两侧大脑半球，然后用咬骨钳咬掉两侧颞骨，然后用咬骨钳咬掉两侧颞骨及额骨，暴露脑组织。用眼科剪剪断脑干及颅底三叉神经和视神经，最后取出脑组织，放入冰碗中。

[0023] (2)病理检测：

[0024] 对采集的心脏、双肺、肝脏、肾脏和脑进行病理切片，HE染色，观察常规病理改变。

[0025] 与现有技术相比本发明的优点是：

[0026] 本发明将大鼠分成对照组和高湿组，在建立大鼠模型(造模)过程中，主要区别点在于湿度的区别，在对模型进行后续的实验时可以起到很好的对比效果。造模过程中，高湿组的大鼠在高湿环境下每天10小时，更好的模拟了现实环境。

[0027] 本发明全面记录了对照组和高湿组大鼠的各项身体数据，全面的检测了高湿对身体的影响。

[0028] 本发明在检测高湿损伤的方法中，全方位的检测了大鼠的各个器官的变化，可以得出高湿对各个器官的影响情况。附图说明

[0029] 为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它相关的附图。

[0030] 图1为对照组肺部细胞组织图。

[0031] 图2为高湿组肺部细胞组织图。

[0032] 图3为对照组脑部细胞组织图。

[0033] 图4为高湿组脑部细胞组织图。

[0034] 图5为对照组脾脏细胞组织图。

[0035] 图6为高湿组脾脏细胞组织图。

[0036] 图7为对照组心肌细胞组织图。

[0037] 图8为高湿组心肌细胞组织图。

具体实施方式

[0038] 实施例一：

[0039] 一种高湿损伤动物模型建立方法，依次包括以下步骤：

[0040] (1)选取实验动物及分组：

[0041] 取健康状况良好且平均体重在200～220g之间的SPF级雄性SD大鼠，对大鼠适应性喂养7天，然后随机分成数量相等的对照组和高湿组。

[0042] (2)造模：

[0043] 对照组：大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度RH为(50±5)％的条件下自由饮食，造模30天。

[0044] 高湿组：每天将大鼠在环境温度为(21±1)℃且相对湿度RH为(90±5)％的条件下，自由饮食10小时。其余时间，将大鼠在与对照组相同的环境下自由饮食。造模30天。

[0045] 其中，将对照组和高湿组种的大鼠均放置在恒温光照培养箱内造模，在造模之前，房间和恒温光照培养箱均经过紫外光照处理并保持相对无菌。

[0046] 其中，在造模过程中，对大鼠身体指标进行检测，其中，身体指标检测包括常规指标检测。常规指标检测包括体重、平均进食量、饮水量、大便、皮毛和精神状态的检测。高湿组在造模后次日出现进食及饮水量减少的情况，其体重增长速度较对照组减慢。高湿组大鼠大便表现不成形或稀便。造模两周后高湿组大鼠出现关节红肿。高湿处理后还表现精神萎靡、嗜卧懒动等特征。高湿组大鼠毛发粗糙、晦暗无光泽。

[0047] 常规指标检测还包括血常规指标检测。血常规指标检测：对血红蛋白和白细胞进行计数和分类等，如表1和表2所示。

[0048] 表1外周血细胞变化

[0049]

[0050] 表2白细胞分类计数

[0051]

[0052] 从表1和表2中，可以得出对照组和高湿组血常规指标均无明显差异。

[0053] 实施例二：

[0054] 一种检测高湿损伤的方法，包括取材和病理检测。

[0055] (1)取材：取经过权利要求1或2任一所述方法建立的大鼠模型。对高湿组和对照组中的大鼠模型均进行器官采集。

[0056] 心脏采集：采用组织剪向左上剪开胸壁，充分暴露心脏，采用组织剪剪断升主动脉和上腔静脉，游离心脏表面结缔组织，放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0057] 双肺采集：采用组织剪向右上剪开胸壁，采用组织镊向两侧牵拉暴露胸腔，采用组织剪剪断气管和胸主动脉，游离肺与胸壁之间的结缔组织，放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0058] 肝脏采集：采用组织剪向下沿腹中线剪开腹腔，显露大鼠肝脏，游离肝脏周围的韧带并剪断腹主动脉和下腔静脉，取下肝脏并放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0059] 肾脏采集：采用组织镊将大鼠肠道牵引至体外，暴露双侧肾脏，剪断肾动静脉，游离双侧肾脏，取下双侧肾脏并放入0.9％生理盐水中冲洗干净。

[0060] 脑采集：采用组织剪剪开大鼠颅骨表面的皮肤和肌肉组织，用咬骨钳夹住顶骨后缘向两侧掰开顶骨，暴露两侧大脑半球，然后用咬骨钳咬掉两侧颞骨，然后用咬骨钳咬掉两侧颞骨及额骨，暴露脑组织。用眼科剪剪断脑干及颅底三叉神经和视神经，最后取出脑组织，放入冰碗中。

[0061] (2)病理检测：

[0062] 对采集的心脏、双肺、肝脏、肾脏和脑进行病理切片，HE染色，观察常规病理改变。肝脏、肠、肾脏与正常对照组无明显形态学差异。

[0063] 通过图1和图2对比发现：高湿处理后，肺主要形态学改变为：肺泡间隔增宽，肺泡壁毛细血管增生、淤血，散在少量淋巴细胞、浆细胞浸润，肺泡Ⅱ型上皮细胞轻度增生。

[0064] 通过图3和图4对比发现：高湿组脑部，出现水肿、部分透明，出现液化性坏死。神经纤维束退化，胶质细胞有增生。

[0065] 通过图5和图6对比发现：脾脏组织的红髓中，出现酮体血黄素颗粒，说明皮内可能有出血。

[0066] 通过图7和图8对比发现：高湿组心脏组织中，小血管出现扩张、充血。心肌细胞出现退变。

[0067] 综上所述，高湿环境对主要对肺部产生了较大损害，对心脏、脑、脾脏也有一定影响。

[0068] 以上所述仅为本发明的具体实施例，但本发明的技术特征并不局限于此，任何本领域的技术人员在本发明的领域内，所作的变化或修饰皆涵盖在本发明的专利范围之中。

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