技术领域

本发明涉及药物活性化合物的制备。特别涉及到用于肠胃外或口 服给药的药物活性化合物纳米悬浮液的制备。

技术背景

配制的难溶于或不溶于水性溶液的药物越来越多。这些药物对采 用注射形式如肠胃外给药进行药物输送提出了挑战。对于不溶于水的 药物，将其配成稳定的亚微米颗粒悬浮液会有许多益处。准确控制粒 度对于安全有效地利用这些制剂是极其必要的。颗粒的直径要小于7 微米才能够安全通过毛细管而不致于造成堵塞(Allen等，1987；Davis 和Taube，1978；Schroeder等，1978；Yokel等，1981)。

美国专利2,745,785公开了一种输送不溶性药物的方法。该专利 公开了青霉素G用于肠胃外给药时其晶体制备方法。该方法包括通过 加入水降低青霉素G的溶解度，从而使青霉素G从甲酰胺溶液重结晶 的步骤。此785专利还进一步指出青霉素G颗粒可涂上润湿剂如卵磷 脂，或乳化剂，表面活性剂和去泡剂，或失水山梨糖醇的部分高级脂 肪酸脂或其聚氧化烯衍生物，或者芳基烷基聚醚醇或其盐。785专利 进一步揭示了在压力存在下用空气喷射的方法对青霉素G微粉化，可 以形成约5到20微米的晶体。

美国专利No.5,118,528公开了另外一种制备纳米颗粒的工艺。该 工艺包括的步骤有：(1)制备物质在一种溶剂或几种溶剂的混合物 中的液相，溶剂中可加入一种或多种表面活性剂，(2)制备一种非 溶剂或几种非溶剂的混合物的第二液相，所述非溶剂与所述物质的溶 剂或溶剂混合物能够混溶；(3)将(1)和(2)中的溶液加到一起 并搅拌，(4)去除不需要的溶剂，形成纳米颗粒的胶体悬浮液。528 专利公开的方法无需提供能量就能够形成小于500nm的物质颗粒。528 专利特别声明不需要使用高能量装置，如超声波仪和高速搅拌器。

美国专利No.4,826,689公开了非水溶性药物或其它有机化合物制 备统一规格的颗粒物的方法。首先，将合适的固体有机化合物溶解到 一种有机溶剂中，并用非溶剂来稀释该溶液。然后向溶液中注入一种 含水沉淀液体，沉淀那些没有聚集、且具有基本均一的平均直径的颗 粒。然后使颗粒与有机溶剂分离。根据有机化合物特点和期望得到的 颗粒粒度，可根据本发明对温度、非溶剂与有机溶剂的比率、注入速 率、搅拌速率、容积等参数作相应变化。689专利公开，该方法形成 的是一种亚稳态的药物，它在热力学上是不稳定的，但最终会转化成 更为稳定的晶体。689专利公开，捕集的亚稳态的药物，其自由能位 于初始药物溶液和稳定晶体之间。689号专利揭示用结晶抑制剂(例 如聚乙烯吡咯烷酮)和表面活性物质(例如聚氧化乙烯和氧化丙烯的 共聚物)促使沉淀物稳定，以致可通过离心、膜过滤或反渗透将其分 离。

美国专利5,091,188，5,091,187和4,725,442公开(a)或者用天 然或合成的磷脂涂覆小药物颗粒，(b)或者将药物溶解到适当的亲 脂性载体中，并通过天然或半合成磷脂对其进行稳定化处理形成乳状 液。这些方法的缺点之一就是方法具体实施要根据药物原材料的性 质，而专利中没有给出改变原材料表面形态，使材料变得易粉碎加工 的方法。

美国专利No.5,145,684公开了另外一种提供不溶性药物进行肠胃 外给药的方法。684专利揭示在表面改性剂存在下对不溶性药物进行 湿磨的方法可使药物颗粒的平均有效粒径小于400nm。684专利强调 该方法在使用中无需任何溶剂的有利性。684号专利揭示，吸附到药 物颗粒表面的表面改性剂的数量要足以防止其聚集成大的颗粒物。

美国专利No.5,922,355对提供不溶性药物用以肠胃外给药进行了 另外一种尝试。专利355揭示制备不溶性药物亚微米颗粒时，采用表 面改性剂和磷脂的组合，然后采用如超声振荡、均化、研磨、微流化、 沉淀或重结晶等技术减小颗粒的尺寸。在355专利中没有提出改变操 作条件使晶体处于易粉碎的形式。

美国专利No.5,780,062公开了不溶性药物小颗粒制备方法，通 过(1)将药物溶解到可与水混溶的第一溶剂中，(2)制备聚合物和 两性分子在第二含水溶剂中的溶液，在这种溶液中，药物基本上不溶 解，从而形成聚合物/两性分子的复合体，(3)将第一、二两步得到 的溶液混合，沉淀聚集的药物和聚合物/两性分子的复合体。

美国专利No.5,858,410公开药物纳米悬浮液，其适用于肠胃外给 药法。410专利公开，将分散到溶剂中的至少一种固态治疗活性化合 物在有活塞口的均化器中高压均化，形成的颗粒通过光子相干光度计 (PCS)测定，平均直径为10nm到1000nm，所有颗粒中，颗粒直径 大于5μm的比率小于0.1％(数量分布通过库耳特颗粒计数器测定)。 该方法无需预先将其熔化，在室温下活性化合物是固体，且不溶、微 溶或中等程度溶解于水、含水介质和/或有机溶剂。410专利的实施例 中公开，在均化前采用了喷射研磨。

美国专利No.4,997,454公开了固体化合物制备均一尺寸颗粒的方 法。专利454的方法包括的步骤有：将固体化合物溶解于适当的溶剂 中，然后注入沉淀液，沉淀那些没有聚集的且具有基本均一的平均直 径的颗粒。随后将颗粒物从溶剂中分离。专利454不主张制备晶体状 态的颗粒物，因为在沉淀过程中，晶体可以溶解并重结晶，从而使得 颗粒尺寸分布范围变大。专利454主张在沉淀过程中捕集处于亚稳定 态的颗粒物。

美国专利No.5,605,785公开了一些对摄影有用的化合物纳米无定 形悬浮液的制备方法。制备纳米无定形分散液的过程包括已知的那些 可以形成无定形颗粒分散相的乳化方法。

发明概述

本发明提供了制备亚微米尺寸的有机化合物颗粒物的方法，这种 化合物在可与水混溶的第一溶剂中的溶解度大于在第二含水溶剂中的 溶解度。过程包括如下步骤：(i)将有机化合物溶解到可与水混溶的 第一溶剂中形成溶液，第一溶剂选自N-甲基-2-吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、 二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、乳酸、甲醇、乙醇、异丙醇、3-戊醇、 正丙醇、丙三醇、丁二醇、乙二醇、丙二醇、单酰化和二酰化甘油一 酸酯、二甲基异山梨醇、丙酮、二甲基甲酰胺、1，4-二氧杂环己烷、 聚乙二醇、聚乙二醇酯、聚乙二醇失水山梨糖醇、聚乙二醇单烷基醚、 聚丙二醇、聚海藻酸丙二醇酯、PPG-10丁二醇、PPG-10甲基葡萄糖 醚、PPG-20甲基葡萄糖醚、PPG-15十八烷基醚、二辛酸丙二醇酯、 二癸酸丙二醇酯、月桂酸丙二醇酯；(ii)将此溶液与第二溶剂混合 形成预悬浮液；(iii)向预悬浮液中加入能量形成平均有效粒度小于约 2μm的颗粒。

本发明提出了一种制备亚微米尺寸的有机化合物颗粒物的方法， 这种化合物在可与水混溶的第一溶剂中的溶解度大于在第二含水溶剂 中的溶解度。制备过程包括如下步骤：(i)将有机化合物溶解到可与 水混溶的第一溶剂中形成溶液，第一溶剂选自N-甲基-2-吡咯烷酮、2- 吡咯烷酮、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、乳酸、甲醇、乙醇、异丙醇、 3-戊醇、正丙醇、丙三醇、丁二醇、乙二醇、丙二醇、单酰化和二酰 化甘油一酸酯、二甲基异山梨醇、丙酮、二甲基甲酰胺、1，4-二氧杂 环己烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯、聚乙二醇、聚乙二醇酯、聚乙二醇失 水山梨糖醇、聚乙二醇单烷基醚、聚丙二醇、聚海藻酸丙二醇酯、PPG-10 丁二醇、PPG-10甲基葡萄糖醚、PPG-20甲基葡萄糖醚、PPG-15十八 烷基醚、二辛酸丙二醇酯、二癸酸丙二醇酯、月桂酸丙二醇酯；(ii) 将此溶液与第二溶剂混合形成预悬浮液，在其中有机化合物以无定 形，半晶质或由DSC测定的过冷液体形式存在，并具有平均有效粒度； (iii)对预悬浮液退火，形成预悬浮液平均有效粒度基本相同且更加 稳定的颗粒。

本发明进一步提出了制备亚微米尺寸的有机化合物颗粒物的方 法，这种化合物在可与水混溶的第一溶剂中的溶解度大于在第二含水 溶剂的溶解度。过程包括如下步骤：(i)将有机化合物溶解到可与水 混溶的第一溶剂中形成溶液，第一溶剂选自N-甲基-2-吡咯烷酮，2-吡 咯烷酮，二甲基亚砜，二甲基乙酰胺，乳酸，甲醇，乙醇，异丙醇、 3-戊醇、正丙醇、丙三醇、丁二醇，乙二醇，丙二醇，单酰化和二酰 化甘油一酸酯，二甲基异山梨醇，丙酮，二甲基甲酰胺，1，4-二氧杂 环己烷，聚乙二醇，聚乙二醇酯，聚乙二醇失水山梨糖醇，聚乙二醇 单烷基醚，聚丙二醇，聚海藻酸丙二醇酯，PPG-10丁二醇，PPG-10 甲基葡萄糖醚，PPG-20甲基葡萄糖醚，PPG-15十八烷基醚，二辛酸 丙二醇酯，二癸酸丙二醇酯，月桂酸丙二醇酯；(ii)将此溶液与第 二溶剂混合形成预悬浮液，其中颗粒以脆性形式存在；(iii)向预悬浮 液中加入能量，形成平均有效粒度小于约2μm的颗粒。

本发明还提出了制备药物活性化合物悬浮液的方法，这种化合物 在可与水混溶的第一有机溶剂中的溶解度要大于在第二含水溶剂中。 该过程包括如下步骤：(i)将第一量的药物活性化合物溶解到可与水 混溶的第一有机溶剂中，形成第一溶液；(ii)将第一溶液与第二溶 剂混合，以沉淀药物活性化合物；(iii)向第一溶液或第二溶剂或预悬 浮液中加入晶种。该方法还包括形成所期望的药物活性化合物多晶型 物的步骤。本发明的一个优选方法中，加入晶种的步骤包括向第一溶 液、第二溶剂和/或预悬浮液中加入晶种化合物。

本发明还进一步提供了制备药物活性化合物悬浮液的方法，这种 化合物在可与水混溶的第一有机溶剂中的溶解性要大于第二含水溶 剂。该过程包括如下步骤：(i)将一定量的药物活性化合物溶解到第 一有机溶剂中形成过饱和溶液；(ii)老化过饱和溶液，形成可检测 到的晶体，产生晶种混合物；(iii)将晶种混合物与第二溶剂混合，以 沉淀药物活性化合物，形成预悬浮液。

附图简单描述

无。图形已经插入到正文中。

发明详述

本发明允许具有许多种不同的实施方式。对于本发明公开的优选 的实施方式，要认识到这些公开应当看作是该发明原理的范例，而无 意将本发明宽泛的方面限制在给出的实施方式中。

本发明提供了制备有机化合物颗粒的方法或工艺，所述有机化合 物具有适用于肠胃外给药的平均有效粒度。在本发明最优选的方式 中，颗粒粒径小于约2μm。本发明还适用于制备适于口服形式的有 机化合物颗粒。口服剂型的颗粒粒径可以大于2μm，一般小于约7μm。 但是，如果颗粒具有足够的生物利用度和口服剂型的其他特性，其粒 径可大于7μm。口服剂型的形式包括药片、胶囊、囊片、软和硬的凝 胶胶囊、或其它用以口服给药的送药载体。

整个工艺可以分成三大类，每一类工艺共同的步骤有：(1)将 有机化合物溶解到可与水混溶的第一有机溶剂中，形成第一溶液，(2) 将第一溶液与第二溶剂水混合，以沉淀有机化合物，形成预悬浮液， (3)向预悬浮液中以高剪切搅拌或加热的形式加入能量，使形成具 有上文限定的所需粒径范围的有机化合物稳定形式。

这三类工艺的不同在于有机化合物的物理特性，在加入能量的步 骤前后，通过X射线衍射，差示扫描量热(DSC)或其它方法对其测 定。第一类工艺，在加入能量步骤之前，有机物在预悬浮液中以无定 形、半晶质或过冷液体的形式存在，且具有平均有效粒径。在加入能 量步骤之后，有机化合物以晶体的形式存在，且其平均有效粒径与预 悬浮液中的颗粒基本相同(即小于约2μm)。

第二类工艺，在加入能量之前，有机化合物以晶体形式存在且具 有平均有效粒径。在加入能量后，有机化合物以晶体形式存在，平均 有效粒径与加入能量前的基本相同，但晶体不容易聚集。

这种有机化合物不易聚集的趋势是通过激光动态光散射和光学显 微镜的方法观察得到的。

第三类工艺，在能量加入前，有机化合物以晶体形式存在，所述 晶体形式易粉碎，且有平均有效粒径。这里“易粉碎”的是指颗粒 较脆，容易碎裂成为更小的颗粒。在加入能量步骤之后，有机化合物 以晶体形式存在，其平均有效粒径要小于预悬浮液中的晶体。通过采 取必要步骤使有机化合物以易粉碎的晶体形式存在，与有机化合物为 不易粉碎的晶体相比，后序加入能量步骤的进行可更加快速有效。

增加能量的步骤可以通过使预悬浮液受到空化、剪切或冲击力中 任何一种方式的作用来完成。本发明的一种优选的方式中，增加能量 的步骤是退火的步骤。本发明中退火的定义是通过一次或多次利用能 量(直接加热或机械应力)，使热力学不稳定的物质转化为更为稳定 的形式，然后进行热弛豫。固体从不够规整的晶格结构向规整的晶格 结构转变过程会使能量降低。另外，这种稳定化可通过固液界面表面 活性分子的重排来实现。

这三种工艺将在下面逐一进行讨论。但需要明白的是，对于工艺 操作条件，如选择表面活性剂、表面活性剂间的组合、表面活性剂的 用量、反应温度、溶液的搅拌速率、沉淀速率等，在条件选择时要考 虑到任何一种药物在下述任一类工艺中的处理。

第一类，第二类以及第三类工艺，又可进一步分为两个亚类，方 法A和方法B图解如下。

图1：方法A

图2：方法B

用于本发明工艺的有机化合物是任一有机化学实体，从一种溶剂 到另一种溶剂其溶解度会降低。这些有机化合物可以来自不同类别的 药物活性化合物，例如抗高血脂药；抗菌剂，例如抗细菌药如磺胺嘧 啶，抗真菌药如伊曲康唑；非类固醇类消炎药，例如茚甲新；抗高胆 固醇药，如丙丁酚；类固醇类化合物，如地塞米松；免疫抑制剂，如 环孢菌素A，他克罗姆，mycophenolate mofetil，但不只限于这些物质。 或其它在药物制备和化妆品中作辅药和赋形剂的物质，如防腐剂对羟 基苯甲酸丙酯，但不只限于这些物质。

根据本发明，第一溶剂是一种溶剂或几种溶剂的混合物，我们所 关注的有机化合物在其中相对溶解，该溶剂与第二溶剂能够混溶。这 种溶剂包括(但不限于)：聚乙烯吡咯烷酮，N-甲基-2-吡咯烷酮(又 叫N-甲基-2-吡咯烷酮)，2-吡咯烷酮，二甲基亚砜，二甲基乙酰胺， 乳酸，甲醇，乙醇，异丙醇，3-戊醇，正丙醇，丙三醇，丁二醇，乙 二醇，丙二醇，单或二酰化甘油一酯(如辛酸甘油酯)，二甲基异山 梨醇，丙酮，二甲基甲酰胺，1，4-二氧杂环己烷，聚乙二醇(如PEG- 4，PEG-8，PEG-9，PEG-12，PEG-14，PEG-16，PEG-120，PEG-75，PEG-150， 聚乙二醇酯(如PEG-4二月桂酸酯，PEG-20二月桂酸酯；PEG-6异 硬脂酸酯，PEG-8棕榈酸硬脂酸酯，PEG-150棕榈酸硬脂酸酯)，聚乙 二醇失水山梨糖醇(如PEG-20失水山梨糖醇异硬脂酸酯)，聚乙二 醇单烷基醚(如PEG-3二甲醚，PEG-4二甲醚)，聚丙二醇(PPG)， 聚海藻酸丙二醇酯，PPG-10丁二醇，PPG-10甲基葡萄糖醚，PPG-20 甲基葡萄糖醚，PPG-15十八烷基醚，二辛酸丙二醇酯，二癸酸丙二醇 酯，月桂酸丙二醇酯。

方法A

在方法A中(见图1)，有机化合物(“药物”)首先溶解到第 一溶剂中形成第一溶液。依据有机化合物在第一溶剂中的溶解性，加 入的有机化合物可从约0.1％(w/v)到约50％(w/v)。为确保其能 够在第一溶剂中完全溶解，可能需要对浓溶液加热从30℃到100℃。

第二水溶液可加入一种或更多种任选的表面改性剂，如阴离子表 面活性剂，阳离子表面活性剂，非离子表面活性剂或生物表面活性分 子。适宜的阴离子表面活性剂包括但不仅限于：月桂酸钾，月桂基硫 酸钠，十二烷基硫酸钠，烷基聚氧化乙烯硫酸盐，海藻酸钠，二辛基 磺基丁二酸钠，磷脂酰胆碱，磷脂酰甘油，磷脂酰肌苷，磷脂酰丝氨 酸，磷脂酸及其盐，甘油酯，羧甲基纤维素钠，胆酸及其他胆汁酸(如 胆酸，脱氧胆酸，甘氨胆酸，牛磺胆酸，甘氨脱氧胆酸(glycodeoxycholic acid))和其盐(如脱氧胆酸钠等)。适宜的阳离子表面活性剂包括 但不仅限于：季胺类化合物，如苯扎氯铵，溴化鲸蜡基三甲基铵，氯 化十二烷基二甲基苄基铵，盐酸酰基肉碱，或烷基吡啶卤化物。磷脂 可用作阴离子表面活性剂，适宜的磷脂包括，如磷脂酰胆碱，磷脂酰 乙醇胺，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰肌醇，磷脂酰甘油，磷脂酸，溶血磷 脂，蛋或大豆磷脂或其组合。磷脂可加盐或脱盐，氢化或部分氢化， 可为天然、半合成或合成的。

适宜的非离子表面活性剂包括：聚氧化乙烯脂肪醇醚(Macrogol 和Brij)，聚氧化乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(Polysorbates)，聚氧 化乙烯脂肪酸酯(Myrj)，失水山梨糖醇酯(Span)，一硬脂酸甘油， 聚乙二醇，聚丙二醇，十六烷醇，十六醇十八醇混合物，十八烷醇， 芳基烷基聚醚醇，聚氧化乙烯和聚氧化丙烯共聚物(泊洛沙姆)，保 丽视明(polaxamine)，甲基纤维素，羟基纤维素，羟基丙基纤维素， 羟基丙基甲基纤维素，非晶质纤维素，多糖包含淀粉及其衍生物如羟 乙基淀粉(HES)，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。本发明的优选方式 中，非离子表面活性剂为聚氧化乙烯和聚氧化丙烯的共聚物，优选的 是丙二醇和乙二醇的嵌段共聚物。这些共聚物可以商品品牌 POLOXAMER购买到，有时也可称为PLURONIC_，几家供应商都有 销售，如Spectrum Chemical和Ruger。聚氧化乙烯脂肪酸酯中也包 含那些短链的化合物。这种表面活性剂的一个例子是SOLUTOL_HS 15，聚乙烯-660-羟基硬脂酸酯，由BASF股份有限公司生产。

生物表面活性分子包括白蛋白，酪蛋白，肝素，水蛭素或其它合 适的蛋白质分子。

第二溶液中还可有利地加入pH调节剂如氢氧化钠，盐酸，tris 缓冲液，柠檬酸盐，醋酸盐，乳酸盐，或葡甲胺等。第二溶液的pH 范围约为3-11。

对于口服剂型，可采用一种或多种以下赋形剂：明胶，酪蛋白， 卵磷脂(磷脂)，阿拉伯树胶，胆固醇，西黄芪胶，硬脂酸，苯扎氯 铵，硬脂酸钙，一硬脂酸甘油，十六醇十八醇混合物，聚西托醇乳化 蜡，失水山梨糖醇酯，聚氧化乙烯烷基醚，如聚乙二醇醚，如聚西托 醇1000，聚氧化乙烯蓖麻油衍生物，聚氧化乙烯失水山梨糖醇脂肪酸 酯，如可买到的商品吐温TM，聚丙二醇，聚氧化乙烯硬脂酸酯，胶 体二氧化硅，磷酸盐，十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠，羧甲基纤维 素钙，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素， 羟基丙基甲基纤维素酞酸酯，非晶质纤维素，硅酸镁铝，三乙醇胺， 聚乙烯醇(PVA)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。这些赋形剂大多数在美 国药物学会和大不列颠药物学会共同发表的药物赋形剂手册 (Handbook of Pharmaceutical Excipients)中有详细介绍，本书1986 年由药物出版社出版。表面改性剂可买到商业成品，和/或通过已知技 术工艺制备。两种或多种表面改性剂可联合使用。

在本发明的一个优选方式中，制备亚微米尺寸的有机化合物颗粒 的方法包含向第二溶液中加入第一溶液的步骤。加入速率取决于批次 规模和有机化合物的沉淀动力学。对于实验室小试规模(制备1升)， 加入速率通常约在每分钟约0.05cc到每分钟约10cc之间。在添加过 程中，溶液应恒速搅拌。用光学显微镜会观察到无定形颗粒、半晶质 固体或过冷液体的形成，得到预悬浮液。该方法还包括使预悬浮液退 火的步骤，以便让无定形颗粒、过冷液体或半晶质固体转化为更加稳 定的固体晶体。用动态光散射方法(如光相关光谱、激光衍射、小角 度激光散射(LALLS)、中角度激光散射(MALLS)、光模糊法(如库 特方法)、流变学、或显微镜(光学显微镜或电子显微镜)的方法测 定形成的这些颗粒具有上述范围内的平均有效粒度。

增加能量的步骤包括通过超声作用，均化，逆流均化，微流化， 或其它提供冲击、剪切或空化力的方法加入能量。在此过程中样品可 以冷却或加热。本发明的一个优选的方式是，退火靠的是一个带活塞 口的均化器的作用，如Avestin有限公司出售的产品EmulsiFlex-C160。 该发明的另一个优选方式是，退火可通过超声处理器进行超声处理来 完成，如Sonics and Materials有限公司生产的Vibra-Cell超声波处理 器(600W)。然而在本发明的另外一个优选方式中，退火可用美国专 利No.5,720,551中所述的乳化设备来完成，这里引入该专利并作为本 发明一部分。

根据退火速率，最好将处理样品的温度调节到大约-30℃到30℃ 之间。另外，为了使处理的固体发生理想的相变化，也可能有必要在 退火的过程中调节预悬浮液的温度在约30℃到约100℃之间。

方法B

方法B与方法A在如下方面有所不同。第一个不同在于要向第 一溶液中加入一种表面活性剂或多种表面活性剂的组合。表面活性剂 选自上述几组阴离子、非离子和阳离子表面活性剂。

方法A、方法B及美国专利5,780,062的比较例

美国专利No.5,780,062公开了制备有机化合物小颗粒的方法， 首先将有机物溶解到可与水混溶的第一溶剂中。第二溶液的制备是通 过将聚合物和两性分子溶解到水溶液中。然后将第一溶液加入到第二 溶液中，形成含有机化合物和聚合物-两性分子复合体的沉淀。062专 利并没有公开本发明在方法A和方法B中所采用的增加能量的步骤。 颗粒的快速聚集和增长是缺乏稳定性的典型表现。按照上述方法向预 悬浮液中加入能量一般会使颗粒的聚集和增长速率降低，在产品储存 时不会出现重结晶。

方法A和方法B与专利062方法的差别还在于在沉淀前没有形 成聚合物-两性分子复合体这一步。方法A中，由于没有向稀释(水) 相中加入聚合物，故没有形成复合体。在方法B中，表面活性剂(它 也可作为两性分子)或聚合物与有机化合物共同溶解到第一溶剂中， 就排除了沉淀前形成两性分子-聚合物的复合体。在062专利中，小颗 粒的成功沉淀依赖于在沉淀前形成两性分子-聚合物的复合体。062专 利揭示两性分子-聚合物的复合体在第二水溶液中形成复合体。062专 利解释了疏水性有机化合物与两性分子-聚合物复合体相互作用，从而 减少了这些聚集体的溶解性，并促使其沉淀。本发明证明若第一溶剂 中含有表面活性剂或聚合物(方法B)，当其加入到第二溶剂时，形 成的颗粒会比专利062方法产生的颗粒更均一和细微。

最后，制备了两个制剂并对其进行了分析。每个制剂有两种溶液， 浓溶液和水稀释液，对其混合并经过超声处理。每个制剂中的浓溶液 都含有有机化合物(伊曲康唑)，一可与水混溶的溶剂(N-甲基-2-吡 咯烷酮或NMP)，还可能含有聚合物(泊洛沙姆188)。水稀释液含 有水，tris缓冲液，还可能含有聚合物(泊洛沙姆188)和/或一表面 活性剂(脱氧胆酸钠)。在经过超声处理前后对有机物颗粒的平均直 径进行测定。

在第一个制剂A的浓溶液中有伊曲康唑和NMP。水稀释液中包 含水、泊洛沙姆188、tris缓冲液和脱氧胆酸钠。因此，所述水稀释液 中包含聚合物(泊洛沙姆188)和两性分子(脱氧胆酸钠)，它们可 能形成聚合物/两性分子复合体，从而与062专利所公开的信息一致(但 062专利还是没有提到增加能量这一步)。

制剂B的浓溶液中有伊曲康唑、NMP和泊洛沙姆188。水稀释 液包含水、tris缓冲液和脱氧胆酸。该制剂是按照本发明制备的。由 于水稀释液中不含有聚合物(泊洛沙姆)和两性分子(脱氧胆酸钠) 的组合，在混合前不会形成聚合物/两性分子的复合体。

表1给出了三次重复制备的悬浮液采用激光散射测定的平均颗 粒直径。先进行初始的粒径测定，然后对样品进行1分钟的超声处理。 然后重复测定粒径。方法A在超声后大尺寸粒径减少预示着颗粒的聚 集。

表1   方法     浓溶液     水稀释液 平均颗粒 直径(微   米)     经声波处理后     (1分钟)     A 伊曲康唑(18％)、 N-甲基-吡咯烷酮 (6mL) 泊洛沙姆188(2.3 ％)、脱氧胆酸钠(0.3 ％)、tris缓冲液 (5mM，pH8)、水 (适量到94mL)   18.7   10.7   12.1     2.36     2.46     1.93     B 伊曲康唑(18％)、 泊洛沙姆188 (37％)、N-甲基- 吡咯烷酮(6mL) 脱氧胆酸钠(0.3％)、 tris缓冲液(5mM，pH 8)、水(适量到94 mL)   0.194   0.178   0.181     0.198     0.179     0.177

应用本发明描速的方法得到的药物悬浮液可以以注射液的形式直 接给药，前提是制剂采用的是注射用水，且采用适当方法对溶液进行 了灭菌。在对浓溶液和稀溶液进行混合形成预悬浮液前，可对药物的 浓溶液(药物、溶剂、任选的表面活性剂)和稀释介质(水、及任选 的缓冲液和表面活性剂)分别进行灭菌。灭菌的方法包括，首先预过 滤，先通过3.0微米的滤器，再通过0.45微米的粒子滤器，然后经过 加热或蒸汽消毒，或反复通过两个0.2微米的滤膜进行过滤除菌。

作为任选步骤，沉淀后去除溶剂，可以制备不含溶剂的悬浮液。 该过程可通过离心、透析、透滤、强制分级分离、高压过滤或本领域 中熟知的其它分离技术来完成。彻底去除N-甲基-2-吡咯烷酮通常需 要一到三次连续离心操作；每次离心(18000rpm，30分钟)后倾泻 弃去上清液。向剩余固体中加入新的不含有机溶剂的悬浮液介质，对 混合物均化分散。本领域技术人员还会发现其它一些高剪切力的混合 方法也可用于此重组的过程中。

此外，任何不希望存在的赋形剂如表面活性剂可通过上面段落中 描速的分离方法，以理想的赋形剂将其取代。溶剂和第一赋形剂在离 心或过滤后可随上清液一同摒弃。然后加入新的不含溶剂和第一赋形 剂的悬浮液介质。另外一种方法是，加入新的表面活性剂。例如，由 药物、N-甲基-2-吡咯烷酮(溶剂)、泊洛沙姆188(第一赋形剂)、脱 氧胆酸钠、甘油和水组成的悬浮液，在离心和去除上清液后，其组成 可以被磷脂(新的表面活性剂)、甘油和水取代。

I第一类工艺

第一类工艺方法一般包括将有机化合物溶解到可与水混溶的第一 溶剂中，然后将该溶液与水溶液混合形成预悬浮液，其中，通过X射 线衍射、DSC、光学显微镜和其它分析手段分析测定，所述有机化合 物在预悬浮液中以无定形、半晶质或过冷液体形式存在，且平均有效 粒径在上述平均有效粒径范围内。混合步骤之后是加入能量的步骤。 在本发明的优选方式中，这一步是采用退火。

II第二类工艺

第二类工艺方法除了下述几方面有所差别外，其它与第一类工艺 基本相同。X射线衍射、DSC或其他适宜的分析技术对悬浮液的分析 表明，有机化合物以晶体形式存在且具有平均有效粒径。对悬浮液的 粒径进行比较发现，在加入能量后，有机化合物的平均有效粒径与加 入能量前基本相同，但聚集成大颗粒的趋势降低。抛开理论的约束， 颗粒稳定性之间的差异认为可能是由于固液界面表面活性分子的重排 引起。

III第三类工艺

第三类工艺方法对第一和第二类方法的前两步进行了改进，使有 机化合物在悬浮液中具有平均有效粒径，以脆性状态形式存在(如细 针和薄片)。通过选择合适的溶剂、表面活性剂和表面活性剂的组合、 每种溶液的温度、搅拌和沉淀的速率及其它，能够形成脆性的颗粒。 脆性的提高还可通过在对第一溶液与水溶液混合的过程中加入晶格缺 陷(如晶体的解理面)来达到。还可通过例如沉淀过程中快速结晶来 增加脆性。在加入能量过程中，这些脆性晶体会被转变成动力学稳定， 且平均有效粒径比预悬浮液中的粒径更小的晶体。处于动力学稳定形 式的颗粒与那些动力学不稳定的颗粒相比，聚集的趋势有所降低。在 这种情况下，加入能量会使脆性颗粒断裂。与那些没有考虑形成脆性 颗粒的有机化合物处理工艺相比，使预悬浮液中的颗粒处于脆性状 态，有机化合物会更容易、更快速地形成具有期望粒径范围的颗粒物。

多晶型的控制

本发明进一步提供了控制药物活性化合物晶体结构的附加步骤， 以便使最终形成的化合物的预悬浮液在期望的尺寸范围内，并具有所 期望的晶体结构。这里“晶格结构”是指原子在晶体晶胞中的排列。 可结晶形成不同晶体结构的药物活性化合物，称之为多晶型物。在药 物制剂过程中识别多晶型物是很重要的步骤，因为同一种药物的不同 多晶型表现出不同的溶解性、治疗活性、生物利用度和悬浮液稳定性。 因此有必要控制化合物的多晶型形式，以确保产物的纯度和每批次产 物的重复性。

控制化合物多晶型的步骤包括向第一溶液、第二溶剂或预悬浮液 中加入晶种，以确保其形成所期望的多晶型物。加入晶种包括加入晶 种化合物及加入能量。在本发明的一个优选方式中，晶种化合物是具 有期望的多晶型形式的药物活性化合物。另外，晶种化合物也可以是 惰性杂质，及与要求的多晶型具有相似结构的有机化合物，如胆汁盐。

晶种化合物可从第一溶液中沉淀得到，该方法包括向第一溶液中 加入足够量的药物活性化合物，以便使其超过它在第一溶剂中的溶解 度，从而形成过饱和溶液。对过饱和溶液进行处理，沉淀得到具有所 期望多晶型形式的药物活性化合物。对过饱和溶液的处理方法包括对 溶液进行一段时间老化，直至形成晶体或看到晶体形成晶种混合物。 也可以向过饱和溶液中加入能量，使药物活性物质以所期望的多晶型 形式从溶液中沉淀出来。能量的加入可通过多种方式，包括上述加入 能量的方法。加入能量还可通过对预悬浮液加热或使之受电磁能、粒 子束流或电子束流的作用。电磁能包括采用激光束、动态电磁能或其 它辐射源。还可进一步考虑采用超声波、静电场和静磁场来增加能量。

在本发明的一个优选方式中，从老化的过饱和溶液中生产晶种的 方法包括如下几步：(i)向第一有机溶剂中加入一定量的药物活性化 合物，形成过饱和溶液；(ii)老化过饱和溶液，以形成可检测的晶 体，产生晶种混合物；(iii)将晶种混合物与第二溶剂混合，以沉淀 药物活性化合物，产生预悬浮液。预悬浮液可按上述方法作进一步处 理，使其形成具有期望的多晶型形式和粒径范围的药物活性化合物的 水悬浮液。

还可通过向第一溶液、第二溶剂和预悬浮液中加入能量来得到引 晶目的，其前提是受到能量作用的一种或多种液体含有药物活性化合 物或晶种物质。加入能量的方式与上述过饱和溶液加入能量方式相 同。

本发明相应提供了具有所期望多晶型形式的药物活性化合物的组 合物，所述多晶型形式的药物活性化合物中基本不存在未指明的其它 多晶型形式或多晶型物。实施例16中给出了这样一个实例，在微沉 淀过程中引晶产生伊曲康唑的多晶型，其基本不含原材料多晶型物。 本发明提供的方法还可以考虑应用到使许多药物活性化合物有选择性 地形成所期望的晶型。

实施例  

第一类工艺实施例

实施例1：采用第一类工艺，带均化的方法A制备伊曲康唑的悬浮液

向3L烧瓶中加入1680mL注射用水。加热液体到60-65℃，然 后缓慢加入44克Pluronic F-68(泊洛沙姆188)和12克脱氧胆酸钠，每 次加入后搅拌使固体溶解。固体物质全部加入后，在60-65℃下再搅 拌15分钟保证完全溶解。通过将6.06克tris溶解到800mL注射水中 配成50mM的tris(氨丁三醇)缓冲液。用0.1M的盐酸溶液滴定此溶液 至pH为8.0。再用注射用水对产生的溶液进行稀释，使其体积达到1 升。向泊洛沙姆/脱氧胆酸盐溶液中加入200mL tris缓冲液。彻底搅 拌使溶液混合。

向150mL烧杯中加入20克伊曲康唑和120mL N-甲基-2-吡咯烷 酮。将混合物加热到50-60℃，搅拌使固体溶解。当明显观察到全部 溶解后，继续搅拌15分钟以确保彻底溶解。将伊曲康唑-NMP溶液冷 却到室温。

向注射泵(两个60mL的玻璃注射器)中充填预先制备好的伊曲 康唑溶液120mL。同时将所有表面活性剂溶液倒入均化器的加料斗， 所述加料斗已经被冷却到0-5℃(通过采用加套的加料斗并使冷却剂 在套层循环，或通过将加料斗用冰包裹来达到)。在表面活性剂溶液 中安置机械搅拌装置，要使搅拌桨完全浸没。采用注射泵，向经过搅 拌和冷却的表面活性剂溶液中缓慢加入(1-3mL/min)所有的伊曲康 唑溶液。推荐使用至少700rpm的搅拌速率。对产生的悬浮液的试样 (悬浮液A)采用光学显微镜(Hoffman Modulation Contrast)和激光 衍射(Horiba)进行了分析。光学显微镜观测发现悬浮液A由大体为 球形的无定形颗粒(1微米以下)组成，所述无定形颗粒或者彼此粘 附聚集，或者自由进行布朗运动(见图3)。动态光散射测定通常显 示出双峰分布的模式，表明存在聚集体(10-100微米尺寸)，及存在 颗粒直径中值为200-700nm的单一无定形颗粒。

悬浮液立即均化(10000到30000psi)10-30分钟。均化结束时， 加料斗中悬浮液的温度不超过75℃。均化后的悬浮液用500mL的瓶 子收集，立即在冰箱(2-8℃)中冷却。对这种悬浮液(悬浮液B) 用光学显微镜观察发现其由细长的小薄片组成，所述薄片长度在0.5 到2微米之间，宽度在0.2到1微米范围。参见图4。动态光散射测 定通常显示出其直径中值为200-700nm。

图3均化前的无定形颗粒(实施例1)

图4均化退火后的颗粒

悬浮液A的稳定性(“预悬浮液”)(实施例1)

对悬浮液A试样进行显微镜观察，会直接观察到无定形固体的结 晶。悬浮液A在2-8℃下存储12小时后，对其用光学显微镜进行观察。 用眼睛对样品粗略观察发现了严重的絮凝现象，一些内含物沉淀到容 器的底部。显微镜观察表明存在长度超过10微米，又大又长的薄片 状晶体。

悬浮液B的稳定性

与悬浮液A的不稳定相反，在初步的稳定性研究中(1个月)， 悬浮液B在2-8℃时稳定。对这些老化的样品进行显微镜观察，清楚 地显示出颗粒的外形和尺寸没有发生明显的改变。光散射测定结果也 证实了这一点。

实施例2：用第一类工艺，带超声的方法A制备伊曲康唑的悬浮液

向500mL不锈钢容器内加252mL注射用水。加热液体到60-65 ℃，然后缓慢加入6.6克Pluronic F-68(泊洛沙姆188)和0.9克脱氧胆 酸钠，每次加入后搅拌使固体溶解。固体物质全部加入后，在60-65 ℃下再搅拌15分钟保证完全溶解。通过将6.06克tris溶解到800mL 注射水中配成50mM的tris(氨丁三醇)缓冲液。用0.1M的盐酸溶液滴 定此溶液使其pH为8.0。用注射用水稀释得到的溶液，使其体积达 到1升。向泊洛沙姆/脱氧胆酸溶液中加入30mL tris缓冲液。彻底搅 拌使溶液混合。

向30mL容器中加入3克伊曲康唑和18mL N-甲基-2-吡咯烷酮。 将混合物加热到50-60℃，搅拌使固体溶解。当明显观察到全部溶解 后，继续搅拌15分钟以确保其彻底溶解。将伊曲康唑-NMP溶液冷却 到室温。

向注射泵中充填前面步骤制备好的伊曲康唑溶液18mL。将机械 搅拌装置安装到表面活性剂溶液中，搅拌桨要完全浸没。通过将容器 浸没到冰浴中，使其冷却到0-5℃。采用注射泵将所有的伊曲康唑溶 液缓慢地(1-3mL/min)加入到搅拌和冷却后的表面活性剂溶液中。 推荐搅拌速率至少为700rpm。将超声波处理器的角柄浸没到悬浮液 中，以便使探头位置位于不锈钢容器底部上方约1厘米。以每5分钟 间隔超声(10000-25000Hz，至少400W)15到20分钟。当第一个5 分钟超声处理结束时，将冰浴移走，再继续超声。在超声结束时，容 器内悬浮液的温度不超过75℃。

在500mL I型玻璃瓶中收集悬浮液，立即使其在冰箱(2-8℃) 中冷却。在超声前后悬浮液的颗粒形态特征与方法A均化前后观察到 的非常相似(见实施例1)。

实施例3：采用第一类工艺，带均化的方法B制备伊曲康唑悬浮液

通过将6.06克tris溶解到800mL注射用水中配成50mM的tris(氨 丁三醇)缓冲液。用0.1M的盐酸溶液滴定此溶液，使其pH为8.0。 另外用注射用水来稀释所得到的溶液，使其体积达到1升。向3L烧 瓶中加入1680mL注射用水。加200mL tris缓冲液到1680mL水中。 彻底搅拌使溶液混合。

在150mL烧杯中，向120mL N-甲基-2-吡咯烷酮内加入44克 Pluronic F-68(泊洛沙姆188)和12克脱氧胆酸钠。加热混合物到50-60 ℃，搅拌使固体溶解。当明显观察到完全溶解后，继续搅拌15分钟， 以确保其彻底溶解。向此溶液中加入20克伊曲康唑，搅拌直至完全 溶解。将伊曲康唑-表面活性剂-NMP溶液冷却到室温。

向注射泵(两个60mL的玻璃注射器)中充填预先制备好的伊曲 康唑浓溶液120mL。同时将稀释的tris缓冲溶液倒入均化器的加料斗 中，所述加料斗已经被冷却到0-5℃(通过采用加套的加料斗并使冷 却剂在套层循环，或通过将加料斗用冰包裹来达到)。在缓冲溶液中 安置机械搅拌装置，搅拌桨要完全浸没。采用注射泵，向搅拌和冷却 的缓冲溶液中缓慢加入(1-3mL/min)所有的伊曲康唑-表面活性剂浓 溶液。推荐搅拌速率至少为700rpm。产生的悬浮液立即均化(10,000 到30,000psi)10-30分钟。均化结束时，加料斗中悬浮液的温度不 超过75℃。

均化后的悬浮液用500mL的瓶子收集，立即在冰箱中冷却(2-8 ℃)。在均化前后悬浮液中颗粒的形态特征与实施例1中非常相似， 除了在第一类工艺方法B中，预先经过均化的物质形成更少更小的聚 集体，从而使用激光衍射方法测得的颗粒的整体粒度小了很多。均化 后，动态光散射测定结果通常与实施例1中的一致。

实施例4：采用第一类工艺，带超声的方法B制备伊曲康唑的悬浮液

向500mL烧瓶中加入252mL注射用水。通过将6.06克tris溶 解到800mL注射用水中配成50mM的tris(氨丁三醇)缓冲液。用0.1M 的盐酸滴定此溶液，使其pH为8.0。另外加入注射用水来稀释所得到 的溶液，使其体积达到1升。向水中加入30mL tris缓冲液。彻底搅 拌使溶液混合。

在30mL烧杯中，向18mL N-甲基-2-吡咯烷酮内加入6.6克 Pluronic F-68(泊洛沙姆188)和0.9克脱氧胆酸钠。加热混合物到50-60 ℃，搅拌使固体溶解。当明显观察到全部溶解后，继续搅拌15分钟 以确保彻底溶解。向此溶液中加入3.0克伊曲康唑，搅拌至完全溶解。 将伊曲康唑-表面活性剂-NMP溶液冷却到室温。

向注射泵(一只30mL的玻璃注射器)中充填前面步骤制备好的 伊曲康唑浓溶液18mL。将机械搅拌装置安装到缓冲溶液中，使搅拌 桨完全浸没。通过将容器浸没到冰浴中，使其冷却到0-5℃。采用注 射泵将所有的伊曲康唑-表面活性剂浓缩溶液缓慢地(1-3mL/min)加 入到搅拌和冷却的缓冲溶液中。推荐搅拌速率至少为700rpm。对所 得冷却的悬浮液立即超声(10000-25000Hz，至少400W)15到20分 钟，每5分钟为间隔。在第一个5分钟的超声处理后，除去冰浴，再 进行超声处理。在超声结束时，加料斗内悬浮液的温度不超过75℃。

所得悬浮液用500mL的瓶子收集，立即在冰箱(2-8℃)中冷却。 在超声前后悬浮液中颗粒的形态特征与实施例1中非常相似，除了在 第一类工艺方法B中，经预先超声的物质趋向于形成更少更小的聚集 体，从而使激光衍射方法测得的颗粒的整体粒度小了很多。超声后， 动态光散射测定结果通常与实施例1中的一致。

B.第二类工艺实施例

实施例5：用第二类工艺，方法B制备含0.75％Solutol_HR(PEG-660 12-羟基硬脂酸酯)的伊曲康唑(1％)悬浮液

称取Solutol(2.25g)和伊曲康唑(3.0g)放入烧杯中，加入过滤后 的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)。将混合物在较低温度(最高40℃) 下搅拌约15分钟，直至溶液成份完全溶解。将溶液冷却到室温，并 在真空下使其通过0.2微米的滤器进行过滤。使两个60mL的注射器 充满过滤后的药物浓溶液，并将注射器放在注射泵中。该泵设置为以 1mL/min的速率将浓溶液输送到快速搅拌(400rpm)的缓冲水溶液中。 缓冲溶液由22g/L的甘油和5mM的tris缓冲液组成。在浓溶液加入 的整个过程中，在冰浴中使缓冲溶液的温度保持在2-3℃。沉淀结束 时，浓溶液完全加入到缓冲溶液中后，取约100mL悬浮液离心1小 时，弃去上清液。沉淀物重新悬浮到20％NMP水溶液中，再次离心1 小时。将得到的物质在25℃真空干燥箱中干燥过夜。干燥后的物质转 移到小瓶中，并以铬作辐射源进行X射线衍射分析(见图5)。

另外取100mL经微沉淀后的悬浮液试样进行30分钟的超声，超 声频率20,000Hz，80％的满量程(满量程＝600W)。超声后的样品 分三等份进行均化，各45分钟(Avestin C5，2-5℃，15,000-20,000 psi)。各部分合并后离心约3小时，弃去上清液，将沉淀物重悬于20 ％NMP中。重悬后的混合物进行再次离心(15,000rpm，5℃)。弃去 上清液，将沉淀物在25℃真空干燥过夜。对沉淀物作X-射线衍射分 析(见图5)。从图5可以看出，所处理样品的X射线衍射图谱在均 化前和均化后基本一致，但与起始原材料的图谱相比则有明显不同。 未均化的悬浮液在室温下不稳定，且室温下存储时发生凝聚。由均化 而产生的稳定化作用认为是由于表面活性剂在颗粒表面的重排引起。 重排的结果使颗粒聚集的趋势减弱。

图5：含有聚乙二醇-660 12-羟基硬脂酸酯的经微沉淀后的伊曲康 唑在均化前后的X射线衍射图(实施例5)。

C.工艺实施例

实施例6：用第三类工艺，带均化的方法A制备卡马西平。

将2.08g卡马西平溶解到10mL的NMP中。取1.0mL这种浓溶 液以0.1mL/min的速率滴加到搅拌的20mL含1.2％卵磷脂和2.25％ 甘油的混合溶液中。在整个加入过程中，卵磷脂系统温度保持在2-5 ℃。然后，预分散体在15,000psi下低温(5-15℃)均化35分钟。压 力增加到23,000psi，继续均化20分钟。此工艺产生的颗粒平均直径 为0.881μm，其中99％的颗粒直径小于2.44μm。

实施例7：采用第三类工艺，带均化的方法B用0.125％Solutol_制备 1％的卡马西平悬浮液

以N-甲基-2-吡咯烷酮为溶剂制备20％卡马西平和5％甘氨脱氧 胆酸(Sigma化学品公司)的药物浓溶液。微沉淀的步骤包括将药物 浓溶液以0.1mL/min速率加入到受纳溶液(蒸馏水)中。在沉淀过程 中对受纳溶液进行搅拌，并使温度维持在约5℃。沉淀后各组份的最 终浓度为1％卡马西平和0.125％Solutol_。采用光学显微镜在正相衬(相 位差)下对药物晶体进行观察(400X)。沉淀物由直径约2微米、长 度在50-150微米的细小的针状物构成。

在约20,000psi下均化(Avestin C-50具活塞口的均化器)约15 分钟，产生直径小于1微米的小颗粒，大部分没有聚集。对均化后的 物质进行激光衍射(Horiba)分析表明颗粒平均粒径为0.4微米，其 中99％粒径小于0.8微米。低能量下超声适合于使凝聚的颗粒分离， 但其能量不足以使单个颗粒破碎，在Horiba分析之前对样品进行低能 量下超声作用对结果没有影响(数量在超声前后相同)。该结果与不 存在颗粒聚集的情况是一致的。

对按上述工艺制备的样品进行离心，并用0.125％Solutol_取代 溶液来取代上清液。离心和上清液被取代后，悬浮液成份为1％卡马 西平和0.125％Solutol_。用有活塞口的均化器对样品进行再次均化， 5℃下保存。存储4周后，悬浮液中颗粒平均粒径为0.751，其中99％ 小于1.729。报导的数值来自Horiba分析未超声的样品的结果。

实施例8：采用第三类工艺，带均化的方法B，用0.06％甘氨脱氧胆 酸钠和0.06％泊洛沙姆188制备1％卡马西平悬浮液

以N-甲基-2-吡咯烷酮为溶剂制备20％卡马西平和5％甘氨脱氧 胆酸盐(Sigma化学品公司)的药物浓溶液。微沉淀的步骤包括将药 物浓溶液以0.1mL/min的速率加入到受纳溶液(蒸馏水)中。因此， 这个及后面的实施例子表明，在上述方法A和方法B的沉淀水溶液中 加入表面活性剂或其它赋形剂是可任选的。在沉淀过程中对受纳溶液 进行搅拌并使温度维持在约5℃。沉淀后各组分的最终浓度为1％卡 马西平和0.125％Solutol_。采用光学显微镜在正相位差下对药物晶体 进行观察(400X)。沉淀物由直径约2微米、长度在50-150微米的 细小针状物构成。对沉淀物与沉淀前的原材料进行比较，发现在表面 改性剂存在下(甘氨脱氧胆酸)，沉淀过程会产生细长的晶体，其比 初始原材料细得多。

在约20000psi下均化(Avestin C-50具活塞口的均化器)约15 分钟，会产生不到1微米的小颗粒，大部分没有聚集(见图7)。对均化 后的物质进行激光衍射分析(Horiba)表明颗粒平均粒径为0.4微米， 其中99％的颗粒粒径小于0.8微米。进行Horiba分析前对样品振荡 对测定结果无影响(数量在超声前后相同)。该结果与不存在颗粒凝 聚的情况一致。

对按上述流程制备的样品离心，用含0.06％甘氨脱氧胆酸(Sigma 化学品公司)和0.06％泊洛沙姆188的取代溶液来取代上清液。用具 活塞口的均化器对样品进行再次均化，5℃下保存。存储2周后，悬 浮液中颗粒平均粒度为0.531微米，其中99％小于1.14微米。报导的 数值来自对未超声样品的Horiba分析。

图6：均化前后卡马西平晶体(实施例6)

图7：均化(Avestin C-50)后的卡马西平微颗粒(实施例6)

对沉淀得到颗粒物破碎所需的力与初始原材料(卡马西平)中颗 粒物破碎所需的力进行数学分析比较：

卡马西平原材料中最大晶体的宽度(图6中左图)大约是微沉淀 物质中晶体宽度的10倍(图6中右图)。假设晶体厚度比(1∶10) 与晶体宽度比(1∶10)成正比，那么原材料中较大的晶体破裂所需 的力矩应当比微沉淀物质破裂所需的力矩大大约1000倍，因为

eL＝6PL/(Ewx2)                           等式1

其中

eL＝使晶体破裂的纵向应变(“屈服值”)

P＝梁上载荷

L＝载荷到支点的距离

E＝弹性模量

w＝晶体宽度

x＝晶体厚度

假设原材料和沉淀物质的L和E相等，另外假设w/w0＝x/x0＝10， 那么

(eL)0＝6P0L/(Ew0x0 2)，这里下标‘0’指原材料

eL＝6PL/(Ewx2)，针对微沉淀物

使(eL)0＝eL，

6PL/(Ewx2)＝6P0L/(Ew0x0 2)

简化后，

P＝P0(w/w0)(x/x0)2＝P0(0.1)(0.1)2＝0.001P0

这样，用于使微沉淀固体断裂的屈服力P是用于断裂初始晶体固 体所需力的千分之一。如果由于快速沉淀引入晶格缺陷或无定形特 性，那么模量E应降低，甚至会使微沉淀物更容易断裂。

实施例9：采用第三类工艺，方法B，用0.05％脱氧胆酸钠和3％N- 甲基-2-吡咯烷酮制备1.6％(w/v)泼尼松龙悬浮液

工艺的整个生产流程见图8。制备泼尼松龙和脱氧胆酸钠的浓溶 液。将泼尼松龙(32g)和脱氧胆酸钠(1g)加入到足量体积的1-甲 基2-吡咯烷酮(NMP)中，使最终溶液体积为60mL。产生的泼尼松 龙溶液浓度约为533.3mg/mL，脱氧胆酸钠的浓度约为16.67mg/mL。 将60mL NMP浓溶液以2.5mL/min的速率加入到冷却到5℃的2L水 中，同时以约400rpm转速进行搅拌。产生的悬浮液中含有宽度小于2μm 的细针状晶体(图9)。沉淀的悬浮液中物质浓度为：泼尼松龙1.6％ (w/v)，脱氧胆酸钠0.05％，NMP3％。

沉淀的悬浮液用氢氧化钠和盐酸调节pH在7.5-8.5之间，然后 在10,000psi下经过10次均化(Avestin C-50具活塞口的均化器)。 通过连续两次离心，并以每次离心后以新鲜的表面活性剂溶液取代离 心后的上清液，该表面活性剂溶液的浓度为稳定悬浮液所需浓度，最 终使NMP得以去除(见表2)。悬浮液在10,000psi下再次经过10 次均化作用。最终悬浮液所含的颗粒平均粒径小于1μm，其中99％的 颗粒小于2μm。图10是均化后最终泼尼松龙悬浮液的显微镜照片。

在离心/表面活性剂取代这一步，采用了不同浓度的多种不同的 表面活性剂(见表2)。表2列出了一些表面活性剂组合，这些组合 就粒度(平均＜1μm，99％＜2μm)、pH(6-8)、药物浓度(损失小于2 ％)和重悬浮性(在60秒或更短时间内重悬)而言是稳定的。

图8：泼尼松龙微沉淀过程图(实施例9-12)

注意本流程中也可以将活性化合物加入到不存在表面活性剂或其 它添加剂的水稀释液中。这是对图2中方法B过程的改变。

图9泼尼松龙悬浮液在均化前的显微照片(Hoffman Modulation Contrast，放大1250倍)

图10泼尼松龙悬浮液在均化后的显微照片(Hoffman Modulation Contrast，放大1250倍)

表2：通过图8微沉淀方法制备的稳定的泼尼松龙悬浮液列表(实 施例9)     2周                        2月        初始        40℃        5℃        25℃        40℃     制剂   平均  ＞99％   平均  ＞99％   平均  ＞99％   平均  ＞99％   平均  ＞99％ ％损 失* 1.6％泼尼松龙， 0.6％磷脂，0.5％ 脱氧胆酸钠， 5mM TRIS，2.2％     甘油**   0.79   1.65   0.84   1.79   0.83   1.86   0.82   1.78   0.82   1.93 ＜2％ 1.6％泼尼松龙， 0.6％Solutol_， 0.5％脱氧胆酸 钠，2.2％甘油   0.77   1.52   0.79   1.67   0.805   1.763   0.796   1.693   0.81   1.633 ＜2％ 1.6％泼尼松龙， 0.1％泊洛沙姆 188，0.5％脱氧 胆酸钠，2.2％甘     油   0.64   1.16   0.82   1.78  0.696  1.385   0.758   1.698   0.719   1.473 ＜2％ 1.6％泼尼松龙， 5％磷脂，5mM  TRIS，2.2％甘油   0.824   1.77   0.87   1.93  0.88  1.95   0.869   1.778  0.909   1.993 ＜2％

*在5和25℃下存储2个月后样品中伊曲康唑的浓度差别。

**稳定期至少为6个月

粒度(通过激光光散射分析)，单位微米：

5℃：0.80(平均)；1.7(99％)

25℃：0.90(平均)；2.51(99％)

40℃：0.99(平均)；2.03(99％)

在5和25℃条件下存储样品中伊曲康唑浓度差：＜2％

实施例10：采用第三类工艺方法，带均化的方法A制备泼尼松龙悬 浮液

将32g泼尼松龙溶解到40mL NMP中。需要在40-50℃缓慢加热 使之溶解。随后将药物NMP浓溶液以2.5mL/min的速率滴加到2升 含0.1.2％卵磷脂和2.2％甘油的混合溶液中。不加其它表面改性剂。 用5mM tris缓冲液维持表面活性剂系统pH＝8.0，在整个沉淀过程中 温度保持在0℃到5℃。然后，经沉淀的分散体在10,000psi下，低温 (5-15℃)均化20次。均化后，通过对悬浮液离心，弃去上清液， 用新鲜表面活性剂溶液取代上清液，从而去除NMP。离心后的悬浮液 再次在10,000psi低温(5-15℃)均化20次。通过此流程产生的颗粒 具有平均直径0.927μm，其中99％颗粒物直径小于2.36μm。

实施例11：采用第三类工艺，带均化的方法B制备萘丁美酮悬浮液

将表面活性剂(2.2g泊洛沙姆188)溶解到6mL N-甲基-2-吡咯 烷酮中。将溶液于45℃下搅拌15分钟，然后加入1.0g萘丁美酮。 药物迅速溶解。制备由5mM Tris缓冲液和2.2％甘油构成的稀释液， 调pH到8。取100mL稀释液在冰浴中冷却。将药物浓溶液缓慢(约 0.8mL/min)加入到稀释液中同时进行激烈搅拌。将得到的粗制悬浮 液在15,000psi下均化30分钟，然后在20,000psi下继续均化30分钟 (温度＝5℃)。最后得到的纳米悬浮液具有平均有效直径为930nm (通过激光衍射分析)。且99％的颗粒物约小于2.6微米。

实施例12：采用第三类工艺，带均化的方法B，以Solutol_HS 15作 表面活性剂，制备萘丁美酮的悬浮液。用磷脂介质取代上清液

将萘丁美酮(0.987克)溶解到8mL的N-甲基-2-吡咯烷酮中。 向此溶液加入2.2克Solutol_HS 15。对混合物搅拌直至表面活性剂完 全溶解到药物浓溶液中。制备由5mM Tris缓冲液和2.2％甘油构成 的稀释液，调pH到8。稀释液在冰浴中冷却，将药物浓溶液缓慢(约 0.5mL/min)加入到稀释液中，同时进行激烈搅拌。将得到的粗制悬 浮液在15,000psi下均化20分钟，然后在20,000psi下继续均化30分 钟。

将悬浮液在15,000rpm下离心15分钟然后弃去上清液。剩余的 固体颗粒重悬于由1.2％磷脂构成的稀释液中。所述介质的体积与前 面步骤弃去的上清液的体积相同。将得到的悬浮液在21,000psi下均 化30分钟。通过激光衍射分析发现，最终的悬浮液含有平均有效直 径为542nm且99％累积分布粒度小于1微米的颗粒。

实施例13：用泊洛沙姆制备平均直径约为220nm的1％伊曲康唑悬 浮液

通过将10.02克伊曲康唑浓溶液加入到60mL N-甲基-2-吡咯烷酮 中制备伊曲康唑浓溶液。需要加热到70℃使药物溶解。然后将溶液冷 却到室温。制备一定量的50mM三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液(tris缓 冲液)，用5M盐酸调节pH到8.0。通过将22g/L泊洛沙姆407，3.0g/L 蛋磷脂类分子，22g/L甘油和3.0g/L胆酸钠二水合物合并，制备表面 活性剂水溶液。900mL的表面活性剂溶液与100mL的tris缓冲液混合， 制成1000mL的水稀释液。

将水稀释液加入到均化器的加料斗中(APV Gaulin型，15MR- 8TA)，加料斗已经用带冰夹套冷却。迅速搅拌溶液(4700rpm)，并 监测温度变化。用注射泵以约2mL/min的速率缓慢加入伊曲康唑浓 溶液。约30分钟将其加完。得到的悬浮液再次搅拌30分钟，同时加 料斗要用冰夹套冷却，取部分试样进行光学显微镜和动态光散射的分 析。剩余的悬浮液接着在10,000psi下均化15分钟。均化完成时温度 上升到74℃。均化后的悬浮液收集到1-LI型玻璃瓶中，并用橡胶密 封圈密封。装悬浮液的瓶子保持在5℃的冰箱中。

均化前的悬浮液样品显示既含有自由颗粒、颗粒团，也含多层状 脂质体。自由颗粒因布朗运动而不能清楚地目测出；可是许多聚集体 发现由无定形、非晶质物质组成。

均化过的样品含有自由的亚微米颗粒，所述颗粒具有优异的尺寸 均一性，没有可见的脂质囊泡。动态光散射表明单分散的对数粒度分 布，其中值粒径约为220nm，99％累积粒度截止值约为500nm。图11 显示了所制纳米悬浮液与典型的用于肠胃外给药的脂肪乳化产品(10 ％Intralipid_，Pharmacia)悬浮的粒度分布比较。

图11纳米悬浮液(本发明)与商品脂肪乳液的粒度分布比较(实 施例13)

实施例14：用羟乙基淀粉制备1％伊曲康唑纳米悬浮液

溶液A的制备：羟乙基淀粉(1g，Ajinomoto)溶解到3mL N-甲 基-2-吡咯烷酮(NMP)中。用水浴将溶液加热到70-80℃，保持1小 时。向另外一容器内加入1g伊曲康唑(Wyckoff)。加入3mL NMP， 混合物加热到70-80℃以便溶解(约30分钟)。向此热溶液中加入磷 脂(Lipoid S-100)。继续在70-90℃下加热30分钟直至所有的磷脂都 溶解。将羟乙基淀粉溶液与伊曲康唑/磷脂溶液合并。将混合物在80-95 ℃下继续加热30分钟使混合物溶解。

将溶液A加入到Tris缓冲液中：94mL 50mM三(羟甲基)氨基甲 烷缓冲液在冰浴中冷却。对tris溶液的快速搅拌过程中，缓慢逐滴加 入(小于2cc/分钟)热溶液A(见上)。

加完后，将得到的悬浮液超声处理(Cole-Parmer超声波处理器， 20,000Hz，80％量程设定)，同时在冰浴中冷却。采用一英寸长的固 体探头。超声持续5分钟。撤掉冰浴，取出探头并作重新调整，然后 将探头继续浸没到悬浮液中。在无冰浴下对悬浮液继续超声5分钟。 取出探头并作重新调整，然后将探头继续浸没到悬浮液中，再超声5 分钟。在此时，悬浮液温度上升到82℃。在冰浴中对悬浮液迅速冷却， 当发现其已经低于室温时，将其倒入I型玻璃瓶中封存。对颗粒的显 微镜观察表明单个颗粒粒度在1微米或更小的级别。

在室温下存储一年后，对悬浮液的粒度再次进行测定，发现平均 直径约为300nm。

实施例15：采用HES的方法A设想示例

本发明考虑采用方法A根据实施例14中的步骤用羟乙基淀粉制 备1％伊曲康唑纳米悬浮液，但不同之处在于向tris缓冲液中加入HES 而不是NMP溶液。水溶液需要加热来溶解HES。

实施例16：在均化过程中引入晶种使多晶型物的混合物转化为更为稳 定的多晶型物

样品制备：通过如下微沉淀-均化的方法制备伊曲康唑纳米悬浮 液。将伊曲康唑(3g)和Solutol HR(2.25g)溶解到36mL N-甲基-2-吡 咯烷酮(NMP)中，低温加热搅拌形成药物浓溶液。将溶液冷却到室 温，在真空下用0.2μm尼龙滤器过滤，去除未溶解的药物和颗粒物质。 用偏振光对溶液观察以确保过滤后不存在晶体物质。然后将药物浓溶 液以1.0mL/分钟的速率加入到约264mL缓冲水溶液中(含22g/L甘油 的5mM tris缓冲液)。在加入药物浓溶液的过程中，水溶液保持在2-3 ℃，并以约400rpm的速率连续搅拌。对得到的约100mL悬浮液离心， 将固体物质重悬于预先经过过滤的20％NMP水溶液中。对悬浮液再 次离心，固体物质转移到真空干燥烘箱中在25℃下干燥过夜。得到的 固体样品贴上SMP 2 PRE标签。

样品表征：对样品SMP 2 PRE和伊曲康唑的原材料样品用粉末 X射线衍射法进行分析。测定仪器为Rigaku MiniFlex+，用铜作光源， 步长0.02°2θ，扫描速率0.25°2θ/分钟。得到的粉末衍射图见图12。结 果显示SMP-2-PRE与原材料明显不同，表明存在不同的多晶型物或 伪多晶型物。

对样品进行差示扫描量热(DSC)曲线见图13a和图13b。两个 样品都是在密封的铝盘内以2℃/min的速率加热到180℃。

原材料伊曲康唑的DSC曲线(图13a)表明在约165℃时有强吸 热。

SMP 2 PRE的DSC曲线(图13b)在约159℃和153℃处出现两 次吸热。该结果与粉末X射线衍射结果相结合，表明SMP 2 PRE由 多晶型物混合物构成，其中占主要形式的多晶型物比原材料中存在的 多晶型物稳定性差。

图14中的DSC曲线为该结论提供了进一步的证据。该图表明， 当加热SMP 2 PRE，经过第一次转化，冷却后再次加热，稳定性较差 的多晶型物溶解，重结晶形成更为稳定的多晶型物。

引入晶种：将0.2g固体SMP 2 PRE和0.2g原材料伊曲康唑用蒸 馏水混合得到悬浮液，最终体积为20mL(接种样品)。对悬浮液搅 拌直至固体全部润湿。用同样的方法制备第二悬浮液，但不加入原材 料伊曲康唑(未接种的样品)。两种悬浮液均在18,000psi下均化30 分钟。悬浮液均化后的最终温度约为30℃。对悬浮液离心，固体物质 在30℃下干燥约16小时。

图15为接种和未接种样品的DSC曲线图。在密封的铝盘中，对 两样品均以2℃/min加热速率加热到180℃。未接种的样品具有2个 吸热点，说明在均化后还存在多晶型物的混合物。接种样品的曲线表 明加入晶种和均化使固体物质转化为稳定的多晶型物。因此，加入晶 种看起来会影响从不稳定的多晶型向稳定多晶型转变的动力学过程。

实施例17：沉淀过程加入晶种，以优先形成稳定多晶型

样品制备 将1.67g伊曲康唑通过搅拌和轻微加热溶解到10mL NMP中，制备伊曲康唑-NMP药物浓溶液。用0.2μm的注射过滤器对 溶液进行两次过滤。将1.2mL药物浓溶液加入到20mL约3℃的受纳 水溶液中，以约500rpm的速率搅拌，形成伊曲康唑纳米悬浮液。加 入晶种的纳米悬浮液的是以约0.02g原材料伊曲康唑与蒸馏水的混合 物作为受纳溶液制备而成。而未加入晶种的纳米悬浮液是仅以蒸馏水 为受纳溶液制备。对两种悬浮液离心，弃去上清液，固体物质在30℃ 的真空烘箱内干燥约16小时。

样品表征  图16显示加入和未加入晶种的悬浮液中的固体物质的 DSC曲线比较。样品是在密封的铝盘中，以2°/min加热速率加热到180 ℃。虚线表示未加晶种的样品，它有两个吸热峰，表明存在多晶型混 合物。

实线表示加入晶种的样品，仅在预期的原材料熔点位置附近有一 个吸热峰，说明加入晶种物质促使独特地形成更为稳定的多晶型物。

实施例18：通过接种药物浓溶液控制多晶型物

样品制备  在室温(约22℃)下，伊曲康唑在NMP中的溶解度 经实验测定为0.16g/mL。通过搅拌和加热使2.0g伊曲康唑和0.2泊洛 沙姆188溶解到10mL NMP中，制成0.20g/mL药物浓溶液。将此溶 液冷却到室温，产生过饱和溶液。马上进行微沉淀实验，将1.5mL的 药物浓溶液加入到30mL含0.1％脱氧胆酸盐和2.2％甘油的水溶液中。 在溶液加入过程中，水溶液保持在～2℃，搅拌速率350rpm。产生的预 悬浮液在50℃下，～13,000psi下均化约10分钟。然后对悬浮液进行 离心，弃去上清液，在真空烘箱30℃下对固体晶体干燥135小时。

然后在室温下保存过饱和药物浓溶液进行老化，以便使其形成晶 体。12天后，药物浓溶液模糊混浊，表明晶体已经产生。按照第一个 实验同样的方法从药物浓溶液制备伊曲康唑悬浮液，即将1.5mL的药 物浓溶液加入到30mL含0.1％脱氧胆酸盐和2.2％甘油的水溶液中。 加入过程中，水溶液保持在～5℃，搅拌速率350rpm。产生的预悬浮液 在50℃下，～13,000psi下均化约10分钟。然后对悬浮液进行离心， 弃去上清液，在真空烘箱30℃下对固体晶体干燥135小时。

样品表征 干燥后的晶体形态用X射线粉末衍射进行了分析。产 生的谱图见图17。第一个实验(使用新鲜的药物浓溶液)得到的晶体 经测定具有更加稳定的多晶型。相反，第二个实验(老化的药物浓溶 液)主要由稳定性差的多晶体物组成，也存在少量的较稳定的多晶型。 因此，可以认为老化可促使在药物浓溶液中形成稳定性较差的多晶型 晶体，这些物质在微沉淀和均化过程中可作为晶种物质，致使优先形 成稳定性差的多晶型。

图12：原材料伊曲康唑(上)和SMP-2-PRE(下)的X射线粉末 衍射图。为了清晰起见，原材料的图向上作了移动。(实施例16)

图13a：原材料伊曲康唑的DSC图(实施例16)

图13b：SMP-2-PRE的DSC图(实施例16)

图14：SMP-2-PRE的DSC图，表明稳定性较差的多晶型物加热 到160℃后熔融，冷却后出现重结晶，再次加热到180℃后更稳定多 晶型物熔融(实施例16)

图15：均化后SMP-2-PRE样品比较。实线＝加入原材料伊曲 康唑作晶种的样品。虚线＝未加入晶种的样品。为清楚起见，实线被 上移了1W/g(实施例16)。

图16：沉淀过程加入晶种的效果。虚线＝未加入晶种的样品， 实线＝加入原材料伊曲康唑作晶种的样品。为清楚起见，未加入晶种 的曲线(虚线)上移了1.5W/g(实施例17)。

图17：在药物浓溶液老化过程中加入晶种的效果。上面的X射 线衍射谱图为从新鲜药物浓溶液中制备的晶体，此图与稳定的多晶型 物相同(见图12，上)。下面的谱图是从老化(接入晶种)的药物浓 溶液中制备的晶体，此图与亚稳态的多晶型物相同(见图12，下)。 为清楚起见，上面的谱图向上作了移动。(实施例18)

尽管对具体的实施方式已经作了阐述和说明，但还想到许多改进 的方法，这些并没有脱离本发明的核心，权利保护范围仅由所附权利 要求的范围限定。

相关申请的交叉引用 无 联合资助的研究或开发

无

发明背景