抑制FLT3激酶的方法
阅读：551发布：2022-01-28
专利汇可以提供抑制FLT3激酶的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种降低或抑制细胞或受试者的FLT3激酶活性的方法，和使用本发明的化合物(I)或其 溶剂 化物、 水 合物、互变异构体或可药用盐 预防 或 治疗 受试者中 细胞增殖 性病症和/或FLT3相关病症的用途。本发明另外涉及治疗例如癌症和其它细胞增殖性病症的病况的方法。，下面是抑制FLT3激酶的方法专利的具体信息内容。
1.一种降低细胞中FLT3激酶活性的方法，包括使细胞接触式I的 化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、或 烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
2.一种抑制细胞中FLT3激酶活性的方法，包括使细胞接触式I的 化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
3.一种降低受试者的FLT3激酶活性的方法，包括对受试者给予式 I的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
4.一种抑制受试者的FLT3激酶活性的方法，包括对受试者给予式 I的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
5.一种预防受试者的FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予预 防有效量的药物组合物，所述药物组合物包括式I的化合物或其溶剂化 物、水合物、互变异构体或可药用盐、及可药用的载体：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
6.一种治疗受试者的FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予治 疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包括式I的化合物或其溶剂化 物、水合物、互变异构体或可药用盐、及可药用的载体：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件：
Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
7.权利要求6的方法，另外包括给予化疗剂。
8.权利要求6的方法，另外包括给予基因治疗。
9.权利要求6的方法，另外包括给予免疫治疗。
10.权利要求6的方法，另外包括给予放射治疗。
11.一种治疗受试者的细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予 治疗有效量的式I的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药 用盐，所述化合物通过从腔内医疗装置释放进行受控递送：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是，如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
12.一种治疗受试者的FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予 治疗有效量的式I的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药 用盐，所述化合物通过从腔内医疗装置释放进行受控递送：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
13.权利要求11的方法，其中所述腔内医疗装置包括支架。
14.权利要求12的方法，其中所述腔内医疗装置包括支架。
15.一种治疗受试者的细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予 治疗有效量的与靶向试剂结合的式I的化合物或其溶剂化物、水合物、 互变异构体或可药用盐：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件：
Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
16.一种治疗受试者的FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予 治疗有效量的与靶向试剂结合的式I的化合物或其溶剂化物、水合物、 互变异构体或可药用盐：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑 基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的 一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、 二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2-烷基-R4、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地包含选自 S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可 为饱和的、部分不饱和的或芳香的，其中5或6元环中的芳香氮可作为 N-氧化物存在，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基氨基、 或烷氧基取代；R3也可不存在，条件是当E为氮时，R3不能不存在；
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
17.权利要求1-16中任一项的方法，其中：
A为苯基，其可被氯、氟、或甲基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、 噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的一个 -Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N或SO2；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb 不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不 能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基 烷基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、吗啉基；R3也可不存 在，条件是当E为氮时，R3不能不存在。
18.权利要求1-16中任一项的方法，其中：
A为苯基；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、或1，2，4-三唑基，其任 一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑 基、或1，2，4-三唑基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A.
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N或SO2；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb 不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不 能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基 烷基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、吗啉基；R3也可不存 在，条件是当E为氮时，R3不能不存在。
19.权利要求1-16中任一项的方法，其中：
A为苯基；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、或1，2，4-三唑基，其任 一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑 基、或1，2，4-三唑基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟，和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A；
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存在、 和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2CH3、-NH2、或吗啉基。
20.权利要求1-16中任一项的方法，其中：
A为苯基；
W为吡咯基、或咪唑基，其中吡咯基、或咪唑基可包含连接于任何 另外的碳原子的一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A.
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存在、 和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是N；
Qa为CO
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、二 烷基氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基烷 基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、或吗啉基。
21.权利要求1-16中任一项的方法，其中化合物选自：
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩-2-基)-苯 基]-酰胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(2-甲基-噻吩基-3-基)- 苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢-吡 啶-3-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻 喃-4-基)-苯基]-酰胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰 胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-(4-甲基-哌嗪-1- 基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4- 基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，1-二氧代 -1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰 胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺、
(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 基)-乙酸、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-氨基甲酰基甲基-哌啶-4-基)-2-环己-1- 烯基-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-哌啶-4-基-苯基]- 酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-乙基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-(1-吡啶-2-基甲 基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-1-羟基甲基-乙 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氰基-乙基)-哌啶-4-基]-2-环己-1-烯 基-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-吡啶-2-基甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环戊-1-烯基-4-[1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基 甲基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环戊-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联 吡啶-4-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基-苯 基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(1-氧基-吡啶-3-羰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(1-氧基-吡啶-4-羰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(3-吗啉-4-基-丙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 甲酸酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(吡啶-3-羰基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺、
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-3H-咪唑-4-基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4- 基)-乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-3-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-2-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基-苯 基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-{2-[(2-羟基-乙基)-甲基 -氨基]-乙酰基}-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-二甲基氨基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(3-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌啶-4-基]-2- 环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐、
4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺双三 氟乙酸盐、
5-氯-4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺 三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)-(2，3-二羟基-丙 酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯 基]-酰胺三氟乙酸盐、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯 基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-哌啶-4-基]-2- 环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1′-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶-5-基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲基氨基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[1’-(2-二甲基氨基-乙酰基)-6-(4，4-二甲基- 环己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐， 和
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’-(2-甲烷磺酰 基-乙基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
22.权利要求1-16中任一项的方法，其中化合物选自：
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(4-甲基-噻吩基-3-基)- 苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-哌啶-4-基-苯基]- 酰胺三氟乙酸盐、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环戊-1-烯基-4-[1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基 甲基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺二-三氟乙酸盐、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-二甲基氨基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，和
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
23.一种降低细胞中FLT3激酶活性的方法，包括使细胞接触本发 明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
24.一种抑制细胞中FLT3激酶活性的方法，包括使细胞接触本发 明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
25.一种降低受试者的FLT3激酶活性的方法，包括对受试者给予 本发明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
26.一种抑制受试者的FLT3激酶活性的方法，包括对受试者给予 本发明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的步骤：
27.一种预防受试者的FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予 预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包括本发明化合物或其溶剂 化物、水合物、互变异构体或可药用盐、及可药用的载体：
28.一种治疗受试者的FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予 治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包括本发明化合物或其溶剂 化物、水合物、互变异构体或可药用盐、及可药用的载体：
29.权利要求28的方法，另外包括给予化疗剂。
30.权利要求28的方法，另外包括给予基因治疗。
31.权利要求28的方法，另外包括给予免疫治疗。
32.权利要求28的方法，另外包括给予放射治疗。
33.一种治疗受试者的细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予 治疗有效量的本发明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用 盐，所述化合物通过从腔内医疗装置释放进行受控递送：
34.一种治疗受试者的FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予 治疗有效量的本发明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可 药用盐，所述化合物通过从腔内医疗装置释放进行受控递送：
35.权利要求33的方法，其中所述腔内医疗装置包括支架。
36.权利要求34的方法，其中所述腔内医疗装置包括支架。
37.一种治疗细胞增殖性病症的方法，包括对受试者给予治疗有效 量的与靶向试剂结合的本发明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异 构体或可药用盐：
38.一种治疗FLT3相关病症的方法，包括对受试者给予治疗有效 量的与靶向试剂结合的本发明的化合物或其溶剂化物、水合物、互变异 构体或可药用盐：
发明领域
本发明涉及降低或抑制细胞或受试者的FLT3激酶活性的方法，和 这种方法在受试者中预防或治疗细胞增殖性病症和/或FLT3相关病症的 用途。
发明背景
蛋白激酶是信号转导途径的酶组分，其催化ATP的末端磷酸酯转移 到蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸残基的羟基。因此，抑制蛋白激 酶功能的化合物是用于评价蛋白激酶激活的生理学结果的重要工具。在 哺乳动物中正常或突变的蛋白激酶的超量表达或不当表达已经成为广 泛研究的主题，并且已经证明在许多疾病的发展中起到重要作用，所述 疾病包括糖尿病、血管生成、银屑病、再狭窄、眼病、精神分裂症、类 风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心血管疾病和癌症。还已经研究了激酶 抑制的强心益处。总之，蛋白激酶的抑制剂在治疗人类和动物疾病中有 特殊的应用。
Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)配体(FLT3L)是影响多种造血谱系发育的 细胞因子之一。这些作用通过FLT3L对FLT3受体(也称为胎儿肝激酶 -2(flk-2))和STK-1(在造血干细胞和祖细胞上表达的受体酪氨酸激酶 (RTK))的结合而发生。在正常的造血作用过程中，FLT3基因编码在细 胞的增殖、分化和凋亡中起重要作用的膜结合型RTK。FLT3基因主要 由早脊髓祖细胞和淋巴祖细胞表达。参见McKenna，Hilary J.等人，Mice lacking flt3 ligand have deficient hematopoiesis affecting hematopoietic progenitor cells，dendritic cells，and natural killer cells.Blood.Jun 2000； 95：3489-3497；Drexler，H.G.和H.Quentmeier(2004).″FLT3：receptor and ligand.″Growth Factors 22(2)：71-3。
FLT3的配体由骨髓基质细胞和其它细胞表达并且与其它生长因子 协同作用以刺激干细胞、祖细胞、树状细胞、和天然杀伤细胞的增殖。
造血功能障碍是这些系统的恶化前病症，包括例如骨髓增生异常， 例如血小板增多、原发性血小板增多(ET)、特发性骨髓外化生、骨髓纤 维化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纤维化(MMM)、慢性特发性骨髓纤维化 (IMF)、真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少症、和恶化前脊髓发育不良 综合征。参见Stirewalt，D.L.和J.P.Radich(2003)，″The role of FLT3 in haematopoietic malignancies.″Nat Rev Cancer 3(9)：650-65；Scheijen，B. 和J.D.Griffin(2002).″Tyrosine kinase oncogenes in normal hematopoiesis and hematological disease.″Oncogene 21(21)：3314-33。
血液学恶性肿瘤是身体的血液形成和免疫系统、骨髓和淋巴组织的 癌症。尽管在正常的骨髓中，FLT3表达只限于早祖细胞，而在血液学 恶性肿瘤中，FLT3以高水平表达或者FLT3突变引起不受控制的FLT3 受体和下游分子通道诱导，可能的Ras活化。血液学恶性肿瘤包括白血 病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓 瘤-例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性粒细胞白血病(AML)、急性 早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血 病(CML)、慢性嗜中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化细胞白血病 (AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、 幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)、成人T细胞ALL、伴有三谱系 (trilineage)脊髓发育不良的AML(AML/TMDS)、混合型谱系白血病 (MLL)、脊髓发育不良综合征(MDSs)、骨髓增生异常(MPD)、多发性骨 髓瘤(MM)和脊髓肉瘤。参见Kottaridis，P.D.，R.E.Gale等人(2003)， ″Flt3 mutations and leukaemia.″BrJ Haematol 122(4)：523-38。脊髓肉瘤还 与FLT3突变有关。参见Ansari-Lari，Ali等人，FLT3 mutations in myeloid sarcoma.British Journal of Haematology.2004年9月126(6)：785-91。
已经在约30％的急性粒细胞白血病患者和少数的急性淋巴瘤白血 病或脊髓发育不良综合征患者中检测到FLT3突变。有FLT3突变的患 者倾向于预后较差，症状缓解时间减少并且无病存活缩短。FLT3的活 化突变有两个已知的类型。一个是受体的近膜区域的4-40氨基酸的重复 (ITD突变)(25-30％的患者)，另一个是在激酶结构域中的点突变(5-7％的 患者)。突变大多数经常涉及受体近膜结构域内的小的氨基酸串联重复并 且产生酪氨酸激酶活性。突变型FLT3受体在鼠科动物骨髓细胞中表达 引起致命的骨髓增生性综合征，并且初步的研究(Blood.2002；100： 1532-42)提示，突变型FLT3与其它白血病致癌基因协作产生更具攻击性 的表现型。
FLT3激酶的特异性抑制剂提供了治疗造血功能障碍和血液学恶性 肿瘤的有吸引力的靶。
本领域中已知的FLT3激酶抑制剂包括AG1295和AG1296；来他替 尼(又名CEP 701，原名KT-5555、Kyowa Hakko，许可给Cephalon)； CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)；CHIR-258(Chiron Corp.)；EB-10和 IMC-EB10(ImClone Systems Inc.)；GTP 14564(Merk Biosciences UK)。米 哚妥林(又名PKC 412 Novartis AG)；MLN 608(Millennium USA)； MLN-518(原名CT53518，COR Therapeutics Inc.，许可给Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(Millennium Pharmaceuticals Inc.)； SU-11248(Pfizer USA)；SU-11657(Pfizer USA)；SU-5416和SU 5614； THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528 和VX-680(Vertex Pharmaceuticals USA，许可给Novartis(Switzerland)， Merck & Co USA)；和XL 999(Exelixis USA)。以下PCT国际申请和美 国专利申请公开了另外的激酶调节剂，包括FLT3的调节剂：WO 2002032861、WO 2002092599、WO 2003035009、WO 2003024931、WO 2003037347、WO 2003057690、WO 2003099771、WO 2004005281、WO 2004016597、WO 2004018419、WO 2004039782、WO 2004043389、WO 2004046120、WO 2004058749、WO 2004058749、WO 2003024969和美 国专利申请No.20040049032。
还参见Levis，M.、K.F.Tse等人，2001″A FLT3 tyrosine kinase inhibitor is selectively cytotoxic to acute myeloid leukemia blasts harboring FLT3 internal tandem duplication mutatiohs.″Blood 98(3)：885-7；Tse KF 等人，Inhibition of FLT3-mediated transformation by use of a tyrosine kinase inhibitor.Leukemia.2001 Jul；15(7)：1001-10；Smith，B.Douglas等 人，Single-agent CEP-701，a novel FLT3 inhibitor，shows biologic and clinical activity in patients with relapsed or refractory acute myeloid leukemia Blood，May 2004；103：3669-3676；Griswold，Ian J.等人， Effects of MLN518，A Dual FLT3 and KIT Inhibitor，on Normal and Malignant Hematopoiesis.Blood，Jul 2004；[印刷前电子公布]；Yee， Kevin W.H.等人，SU5416 and SU5614 inhibit kinase activity of wild-type and mutant FLT3 receptor tyrosine kinase.Blood，Sep 2002；100： 2941-294；O′Farrell，Anne-Marie等人，SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo.Blood，May 2003； 101：3597-3605；Stone，R.M.等人，PKC 412 FLT3 inhibitor therapy in AML：results of a phase II trial.Ann Hematol.2004；83 Suppl 1：S89-90； 和Murata，K.等人，Selective cytotoxic mechanism of GTP-14564，a novel tyrosine kinase inhibitor in leukemia cells expressing a constitutively active Fms-like tyrosine kinase 3(FLT3).J Biol Chem.2003 Aug 29； 278(35)：32892-8；Levis，Mark等人，Novel FLT3 tyrosine kinase inhibitors.Expert Opin.Investing.Drugs(2003)12(12)1951-1962；Levis， Mark等人，Small Molecule FLT3 Tyrosine Kinase Inhibitors.Current Pharmaceutical Design，2004，10，1183-1193。
Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)配体(FLT3L)是影响多种造血谱系发育的 细胞因子之一。这些作用通过FLT3L对FLT3受体(也称为胎儿肝激酶 -2(flk-2))和STK-1(在造血干细胞和祖细胞上表达的受体酪氨酸激酶 (RTK))的结合而发生。在正常的造血作用过程中，FLT3基因编码在细 胞的增殖、分化和凋亡中起重要作用的膜结合型RTK。FLT3基因主要 由早脊髓祖细胞和淋巴祖细胞表达。参见McKenna，Hilary J.等人，Mice lacking flt3 ligand have deficient hematopoiesis affecting hematopoietic progenitor cells，dendritic cells，and natural killer cells.Blood.Jun 2000； 95：3489-3497；Drexler，H.G.和H.Quentmeier(2004).″FLT3：receptor and ligand.″Growth Factors 22(2)：71-3。
FLT3的配体由骨髓基质细胞和其它细胞表达并且与其它生长因子 协同作用以刺激干细胞、祖细胞、树状细胞、和天然杀伤细胞的增殖。
造血功能障碍是这些系统的恶化前病症，包括例如骨髓增生异常， 例如血小板增多、原发性血小板增多(ET)、特发性骨髓外化生、骨髓纤 维化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纤维化(MMM)、慢性特发性骨髓纤维化 (IMF)、真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少症、和恶化前脊髓发育不良 综合征。参见Stirewalt，D.L.和J.P.Radich(2003)，″The role of FLT3 in haematopoietic malignancies.″Nat Rev Cancer 3(9)：650-65；Scheijen，B. 和J.D.Griffin(2002).″Tyrosine kinase oncogenes in normal hematopoiesis and hematological disease.″Oncogene 21(21)：3314-33。
血液学恶性肿瘤是身体的血液形成和免疫系统、骨髓和淋巴组织的 癌症。尽管在正常的骨髓中，FLT3表达只限于早祖细胞，而在血液学 恶性肿瘤中，FLT3以高水平表达或者FLT3突变引起不受控制的FLT3 受体和下游分子通道诱导，可能的Ras活化。血液学恶性肿瘤包括白血 病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓 瘤-例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性粒细胞白血病(AML)、急性 早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血 病(CML)、慢性嗜中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化细胞白血病 (AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、 幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)、成人T细胞ALL、伴有三谱系 (trilineage)脊髓发育不良的AML(AML/TMDS)、混合型谱系白血病 (MLL)、脊髓发育不良综合征(MDSs)、骨髓增生异常(MPD)、多发性骨 髓瘤(MM)和脊髓肉瘤。参见Kottaridis，P.D.，R.E.Gale等人(2003)， ″Flt3 mutations and leukaemia.″BrJ Haematol 122(4)：523-38。脊髓肉瘤还 与FLT3突变有关。参见Ansari-Lari，Ali等人，FLT3 mutations in myeloid sarcoma.British Journal of Haematology.2004年9月126(6)：785-91。
已经在约30％的急性粒细胞白血病患者和少数的急性淋巴瘤白血 病或脊髓发育不良综合征患者中检测到FLT3突变。有FLT3突变的患 者倾向于预后较差，症状缓解时间减少并且无病存活缩短。FLT3的活 化突变有两个已知的类型。一个是受体的近膜区域的4-40氨基酸的重复 (ITD突变)(25-30％的患者)，另一个是在激酶结构域中的点突变(5-7％的 患者)。突变大多数经常涉及受体近膜结构域内的小的氨基酸串联重复并 且产生酪氨酸激酶活性。突变型FLT3受体在鼠科动物骨髓细胞中表达 引起致命的骨髓增生性综合征，并且初步的研究(Blood.2002；100： 1532-42)提示，突变型FLT3与其它白血病致癌基因协作产生更具攻击性 的表现型。
FLT3激酶的特异性抑制剂提供了治疗造血功能障碍和血液学恶性 肿瘤的有吸引力的靶。
本领域中已知的FLT3激酶抑制剂包括AG1295和AG1296；来他替 尼(又名CEP 701，原名KT-5555、Kyowa Hakko，许可给Cephalon)； CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)；CHIR-258(Chiron Corp.)；EB-10和 IMC-EB10(ImClone Systems Inc.)；GTP 14564(Merk Biosciences UK)。米 哚妥林(又名PKC 412 Novartis AG)；MLN 608(Millennium USA)； MLN-518(原名CT53518，COR Therapeutics Inc.，许可给Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(Millennium Pharmaceuticals Inc.)； SU-11248(Pfizer USA)；SU-11657(Pfizer USA)；SU-5416和SU 5614； THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528 和VX-680(Vertex Pharmaceuticals USA，许可给Novartis(Switzerland)， Merck & Co USA)；和XL 999(Exelixis USA)。以下PCT国际申请和美 国专利申请公开了另外的激酶调节剂，包括FLT3的调节剂：WO 2002032861、WO 2002092599、WO 2003035009、WO 2003024931、WO 2003037347、WO 2003057690、WO 2003099771、WO 2004005281、WO 2004016597、WO 2004018419、WO 2004039782、WO 2004043389、WO 2004046120、WO 2004058749、WO 2004058749、WO 2003024969和美 国专利申请No.20040049032。
还参见Levis，M.、K.F.Tse等人，2001″A FLT3 tyrosine kinase inhibitor is selectively cytotoxic to acute myeloid leukemia blasts harboring FLT3 internal tandem duplication mutatiohs.″Blood 98(3)：885-7；Tse KF 等人，Inhibition of FLT3-mediated transformation by use of a tyrosine kinase inhibitor.Leukemia.2001 Jul；15(7)：1001-10；Smith，B.Douglas等 人，Single-agent CEP-701，a novel FLT3 inhibitor，shows biologic and clinical activity in patients with relapsed or refractory acute myeloid leukemia Blood，May 2004；103：3669-3676；Griswold，Ian J.等人， Effects of MLN518，A Dual FLT3 and KIT Inhibitor，on Normal and Malignant Hematopoiesis.Blood，Jul 2004；[印刷前电子公布]；Yee， Kevin W.H.等人，SU5416 and SU5614 inhibit kinase activity of wild-type and mutant FLT3 receptor tyrosine kinase.Blood，Sep 2002；100： 2941-294；O′Farrell，Anne-Marie等人，SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo.Blood，May 2003； 101：3597-3605；Stone，R.M.等人，PKC 412 FLT3 inhibitor therapy in AML：results of a phase II trial.Ann Hematol.2004；83 Suppl 1：S89-90； 和Murata，K.等人，Selective cytotoxic mechanism of GTP-14564，a novel tyrosine kinase inhibitor in leukemia cells expressing a constitutively active Fms-like tyrosine kinase 3(FLT3).J Biol Chem.2003 Aug 29； 278(35)：32892-8；Levis，Mark等人，Novel FLT3 tyrosine kinase inhibitors.Expert Opin.Investing.Drugs(2003)12(12)1951-1962；Levis， Mark等人，Small Molecule FLT3 Tyrosine Kinase Inhibitors.Current Pharmaceutical Design，2004，10，1183-1193。
发明内容
本发明提供降低或抑制细胞或受试者的FLT3激酶活性的方法，和 这种方法在受试者中预防或治疗细胞增殖性病症和/或FLT3相关病症的 用途。
从以下本发明的详细说明和权利要求显而易见本发明的其它特征 和利益。
附图简述
图1表示本发明实施例#38的口服给予对裸鼠中MV4-11肿瘤异种 移植物生长的影响。
图2表示本发明实施例#38的口服给予对裸鼠中MV4-11肿瘤异种 移植物的最后重量的影响。
图3表示本发明实施例#38的口服给予对小鼠体重的影响。
图4表示在从用本发明实施例#38处理的小鼠得到的MV4-11肿瘤 中的FLT3磷酸化作用。
发明详述
术语“包括”、“包含”、和“含有”用在本文中表示其开放式的、非限 制性的意义。
缩写
如本文中使用的，以下缩写意在具有以下含义(另外的缩写在需要时 在说明书中提供)：
ATP 三磷酸腺苷
Boc或BOC 叔-丁氧基羰基
DCM 二氯甲烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DIEA 二异丙基乙基胺
EDCI 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
EDTA 乙二胺四乙酸
EtOAc 乙酸乙酯
FBS 胎牛血清
FP 荧光偏振
GM-CSF 粒细胞和巨噬细胞集落刺激因子
HOBT或HOBt 1-羟基苯并三唑水合物
HPβCD 羟基丙基β-环糊精
HRP 辣根过氧化物酶
LC/MS(ESI) 液相色谱/质谱(电喷射离子化)
MeOH 甲醇
NMR 核磁共振
PBS 磷酸盐缓冲盐水
RPMI Rosewell Park Memorial Institute
RT 室温
RTK 受体酪氨酸激酶
SDS-PAGE 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
定义
术语“烷基”是指具有最多12个碳原子的直链和支链的基团，优选 最多6个碳原子，除非另有陈述，并且包括但不限于甲基、乙基、丙基、 异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、异己 基、庚基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。
术语“羟基烷基”是指具有最多6个碳原子的直链和支链的基团，其 中一个氢原子已经被OH基团代替。
术语“羟基烷基氨基”是指羟基烷基基团，其中碳链的一个氢原子已 经被氨基代替，其中氮是与分子的其余部分连接的点。
术语“环烷基”是指由3到8个碳原子组成的饱和或部分不饱和的 环。在环上可以任选地存在有最多四个烷基取代基。实例包括环丙基、 1，1-二甲基环丁基、1，2，3-三甲基环戊基、环己基、环戊烯基、环己烯基、 和4，4-二甲基环己烯基。
术语“二氢磺酰代吡喃基(dihydrosulfonopyranyl)”是指以下基团：
术语“羟基烷基”是指与烷基链上的任何碳原子结合的至少一个羟 基基团。
术语“氨基烷基”是指与烷基链上的任何碳原子结合的至少一个伯 或仲氨基基团，其中烷基是与分子其余部分连接的点。
术语“烷基氨基”是指具有一个烷基取代基的氨基，其中氨基是与分 子的其余部分连接的点。
术语“二烷基氨基”是指具有两个烷基取代基的氨基，其中氨基是与 分子的其余部分连接的点。
术语“杂芳族的”或“杂芳基”是指5-7元的单环系统或8-10元的二环 芳族环系统，其任何环可以包括一到四个选自N、O或S的杂原子，其 中氮和硫原子可以以任何允许的氧化态存在。实例包括苯并咪唑基、苯 并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异 噁唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、 噻唑基和噻吩基。
术语“杂原子”是指氮原子、氧原子或硫原子，其中氮和硫原子可以 以任何允许的氧化态存在。
术语“烷氧基”是指与氧原子结合的具有最多12个碳原子的直链或 支链的基团，除非另有陈述。实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙 氧基和丁氧基。
术语“芳基”是指在环中包含6到12个碳的单环或二环芳族环系统。 在环上可以任选地存在有烷基取代基。实例包括苯、联苯和萘。
术语“芳烷基”是指包含芳基取代基的C1-6烷基。实例包括苄基、苯 乙基或2-萘甲基。
术语“磺酰基”是指基团-S(O)2Ra，其中Ra为氢、烷基、环烷基、卤 代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基。“磺酰化试剂”将-S(O)2Ra 基团添加到分子。
式I
本发明包括式I的化合物(本文中称为“本发明的化合物”)或其溶剂 化物、水合物、互变异构体或可药用盐的用法：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基(包括1H-吡咯-2-基)、咪唑基(包括1H-咪唑-2-基)、异噁 唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一个可以 通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4- 三唑基、或呋喃基可包含一个与任何另外的碳原子连接的-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、噻吩基、二氢磺酰代吡喃 基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被 以下各个基团中的一个或两个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基(包括4，4-二 甲基环己烯基、4-甲基环己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)，条件 是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为相对地顺式或反式取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，另外的条件是如果E为N并且Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、苯基、羟基烷基氨基(包括2-羟基乙基氨基)、(羟基烷基)2 氨基、羟基烷基(烷基)氨基(包括1-羟基乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包 括甲基氨基)、氨基烷基(包括2-氨基异丙基)、二羟基烷基(包括1，3-二羟 基异丙基、1，2-二羟基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、二烷基氨基(包括二 甲基氨基)、羟基烷基(包括1-羟基乙-2-基)、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2- 烷基-R4(包括-SO2CH3)、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地 包含选自S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或 6元环可为饱和的、部分不饱和的或芳香的(包括哌啶基、吗啉基、咪唑 基、和吡啶基)，其中该5或6元环中的芳香氮可作为N-氧化物存在(包 括吡啶基N-氧化物)，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基 氨基、或烷氧基取代(包括1-甲基咪唑基)；R3也可以不存在，条件是当 E为氮时，R3不能不存在；
和
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
实施方案
本发明的实施方案包括式I的化合物，其中：
a)A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
b)A为苯基；
c)W为吡咯基(包括1H-吡咯-2-基)、咪唑基、(包括1H-咪唑-2-基)、 异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一个 可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、 1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3-取代基；
d)W为呋喃-2-基、1H-吡咯-2-基、或1H-咪唑-2-基，其任一个可在 4或5位的碳上被-CN取代；
e)W为3H-2-咪唑基-4-甲腈或5-氰基-1H-吡咯-2-基；
f)W为3H-2-咪唑基-4-甲腈；
g)R2为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、噻吩基、二氢磺酰代吡 喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地 被以下各个基团中的一个或两个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基(包括4，4- 二甲基环己烯基、4-甲基环己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)，条 件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于环A；
h)R2为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、其可被一个或两个C(1-3) 烷基取代(包括4，4-二甲基环己烯基、4-甲基环己烯基)；
i)R2为环己烯基，其可被一个或两个C(1-3)烷基取代；
j)R2为环己烯基、4，4-二甲基环己烯基、或4-甲基环己烯基；
k)R2为环己烯基；
l)X为
m)X为
n)X为
o)Z为CH或N；
p)Z为CH；
q)D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
r)D1和D2各自为氢；
s)D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
t)D3和D4各自为氢；
u)D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
v)Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
w)E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
x)E为N，条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存 在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是 N；
y)Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
z)Qa为不存在、-CH2CH2-、或C(O)；
aa)Qa为不存在、或C(O)；
bb)Qa为C(O)；
cc)Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果 Qa为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E为N和Qa不存 在，则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其 中与Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
dd)Qb为不存在、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa为C(O)，则 Qb不能是C(O)；
ee)Qb为不存在、或C(O)，条件是如果Qa为C(O)，则Qb不能是C(O)；
ff)R3为氢、苯基、羟基烷基氨基(包括2-羟基乙基氨基)、(羟基烷基)2 氨基、羟基烷基(烷基)氨基(包括1-羟基乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包 括甲基氨基)、氨基烷基(包括2-氨基异丙基)、二羟基烷基(包括1，3-二羟 基异丙基、1，2-二羟基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、二烷基氨基(包括二 甲基氨基)、羟基烷基(包括1-羟基乙-2-基)、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2- 烷基-R4(包括-SO2CH3)、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地 包含选自S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或 6元环可为饱和的、部分不饱和的或芳香的(包括哌啶基、吗啉基、咪唑 基、和吡啶基)，其中该5或6元环中的芳香氮可作为N-氧化物存在(包 括吡啶基N-氧化物)，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基 氨基、或烷氧基取代(包括1-甲基咪唑基)；R3也可不存在，条件是当E 为氮时，R3不能不存在；
gg)R3为氢、苯基、2-羟基乙基氨基、1-羟基乙-2-基(甲基)氨基、甲 基氨基、2-氨基异丙基、1，3-二羟基异丙基、1，2-二羟基乙基、甲氧基、 二甲基氨基、1-羟基乙-2-基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2-、-SO2CH3)、 -NH2、哌啶基、吗啉基、咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物)、或1-甲 基咪唑基；
hh)R3为烷基氨基(包括甲基氨基)、二烷基氨基(包括二甲基氨基)、 或-SO2-烷基-R4(包括-SO2CH3)；
ii)R3为甲基氨基、二甲基氨基、或-SO2CH3；
jj)R3为二甲基氨基；
kk)R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基；
和
ll)R4为氢；
和含a)和ll)在内的所述a)到ll)的所有组合。
优选的式I的化合物为其中W被一个-CN取代的那些。
其它优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基，其可被氯、氟、和甲基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、 噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的一个 -Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式II中 所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N或SO2；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb 不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不 能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，并且另外的条件是如果E为N和Qa不存 在，则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其 中与Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基 烷基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、吗啉基；R3也可不存 在，条件是当E为氮时，R3不能不存在。
更优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、或1，2，4-三唑基，其任 一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑 基、或1，2，4-三唑基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A。
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N或SO2；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb 不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不 能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是，如果E是N和Qa不存 在，则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其 中与Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基 烷基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、吗啉基；R3也可不存 在，条件是当E为氮时，R3不能不存在。
更优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、或1，2，4-三唑基，其任 一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑 基、或1，2，4-三唑基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A.
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存在、 和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2CH3、-NH2、或吗啉基。
特别优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基；
W为吡咯基、或咪唑基，其中吡咯基、或咪唑基可包含连接于任何 另外的碳原子的一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A。
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存在、 和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是N；
Qa为CO
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、二 烷基氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基烷 基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、或吗啉基。
式I的化合物的实例包括：
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-苯 基]-酰胺、和
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(2-甲基-噻吩基-3-基)-苯 基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另外的实例包括：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢-吡 啶-3-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻 喃-4-基)-苯基]-酰胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰 胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-(4-甲基-哌嗪-1- 基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4- 基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，1-二氧代 -1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰 胺、和
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺， 及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另外的实例为：
(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 基)-乙酸、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-氨基甲酰基甲基-哌啶-4-基)-2-环己-1- 烯基-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-哌啶-4-基-苯基]- 酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-乙基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-(1-吡啶-2-基甲 基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-1-羟基甲基-乙 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氰基-乙基)-哌啶-4-基]-2-环己-1-烯 基-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-吡啶-2-基甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环戊-1-烯基-4-[1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基 甲基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环戊-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联 吡啶-4-基)-苯基]-酰胺、和
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基-苯 基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的其它实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(1-氧基-吡啶-3-羰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(1-氧基-吡啶-4-羰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(3-吗啉-4-基-丙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 甲酸酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(吡啶-3-羰基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺、
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-3H-咪唑-4-基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4- 基)-乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-3-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-2-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、和
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基-苯 基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另一个实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-{2-[(2-羟基-乙基)-甲基 -氨基]-乙酰基}-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另一个实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-二甲基氨基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另一个实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的其它实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(3-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌啶-4-基]-2- 环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐、
4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺双三 氟乙酸盐、
5-氯-4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺 三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)-(2，3-二羟基-丙 酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯 基]-酰胺三氟乙酸盐、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’- 六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-哌啶-4-基]-2- 环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐、和
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1′-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶-5-基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另外的实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲基氨基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[1’-(2-二甲基氨基-乙酰基)-6-(4，4-二甲基- 环己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐、 和
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’-(2-甲烷磺酰 基-乙基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
如本文中使用的，术语“本发明的化合物”应该还包括其溶剂化物、 水合物、互变异构体或可药用盐。
可药用盐
如所述的，本发明的化合物还可以作为可药用盐的形式存在。
对于用于药物，本发明的化合物的盐是指无毒的“可药用盐”。FDA 批准的可药用盐形式(参考International J.Pharm.1986，33，201-217；J. Pharm.Sci.，1977，Jan，66(1)，p1)包括可药用的酸式/阴离子型或碱式/阳 离子型的盐。
可药用酸式/阴离子型盐包括但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、 碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸 盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依 托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、glyceptate、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇 酰基对氨苯基砷酸盐、己基间苯二酚盐、哈胺、氢溴化物、氢氯化物、 羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、 马来酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸 盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/磷酸氢 盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、 硫酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、和 三乙基碘。有机或无机酸还包括但不限于氢碘酸、高氯酸、硫酸、磷酸、 丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、草酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、 环己烷氨基磺酸、己糖酸或三氟乙酸。
可药用碱式/阳离子型盐包括但不限于铝、2-氨基-2-羟基甲基-丙烷 -1，3-二醇(又名三(羟基甲基)氨基甲烷、氨基丁三醇(tromethane)或 “TRIS”)、氨、N，N’-二苄基乙二胺(benzathine)、叔丁胺、钙、葡萄糖 酸钙、氢氧化钙、氯普鲁卡因、胆碱、胆碱碳酸氢盐、氯化胆碱、环己 胺、二乙醇胺、乙二胺、锂、LiOMe、L-赖氨酸、镁、葡甲胺、NH3、 NH4OH、N-甲基-D-葡糖胺、哌啶、钾、叔丁醇钾、氢氧化钾(含水的)、 普鲁卡因、奎宁、钠、碳酸钠、2-乙基己酸钠(SEH)、氢氧化钠、或锌。
前体药物
本发明在其范围内还包括本发明的化合物的前体药物。通常，这种 前体药物为该化合物的功能衍生物，其可在体内容易地转化为活性化合 物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给予”包括用本发明的化合物 或其前体药物治疗、改善或预防本文中所述综合症、病症或疾病的含义， 其明显地包括在本发明范围内，即使任一特定的化合物没有明确地披 露。选择和制备适当的前体药物衍生物的常规方法在例如“Design of Prodrugs”，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述。
立体化学异构体
本领域技术人员知道，本发明的某些化合物可在其结构中具有一个 或多个不对称碳原子。本发明在其范围内意在包括本发明的化合物的单 个对映体形式、外消旋混合物、和其中存在对映体过量的对映体混合物。
如本文中使用的术语“单个对映体”定义了本发明的化合物及其N- 氧化物、加成盐、季铵类、以及生理学功能性衍生物可能具有的所有可 能的纯手性形式。
立体化学纯的异构形式可通过应用已知技术原理得到。非对映异构 体可通过物理分离方法分离，例如分步结晶和色谱技术，并且对映体可 通过与光学活性的酸或碱形成的非对映体盐的选择结晶彼此分离，或者 通过手性色谱法彼此分离。也可从适当的立体化学纯的原料、或通过使 用立体选择性反应合成制备纯的立体异构体。
术语“异构体”是指具有相同组成和分子量但是物理和/或化学性质 不同的化合物。这种物质具有相同的原子数和原子种类，但是在结构上 不同。结构差异可以是构成方式(几何异构体)或者在使偏振光平面旋转 的能力方面(对映体)不同。
术语“立体异构体”是指具有相同构造但是它们的原子空间排列不 同的异构体。对映体和非对映体是立体异构体的实例。
术语“手性”是指分子的不能将其与其镜象重叠的结构特性。
术语“对映体”是指彼此为镜像而不能重叠的一对分子之一。
术语“非对映体”是指彼此不是镜像的立体异构体。
符号“R”和“S”表示手性碳原子上取代基的构型。
术语“外消旋物”或“外消旋混合物”是指由等摩尔量的两种对映体组 成的组合物，其中该组合物没有旋光性。
术语“纯手性的”是指对映体纯状态。
术语“旋光性”是指纯手性分子或手性分子的非外消旋混合物旋转 偏振光平面的程度。
应该理解，用于制备本发明的化合物的各种取代基立体异构体、几 何异构体、及其混合物或者是市售的、可以从市售原料合成制备的、或 者可以制备为异构混合物、然后使用本领域技术人员公知的技术拆分异 构体得到。。
异构描述符“R”和“S”在本文中用于描述相对于核心分子的原子构 型，并且意在以在文献中的定义使用(IUPAC Recommendations for Fundamental Stereochemistry(Section E)，Pure Appl.Chem.，1976， 45：13-30)。
本发明的化合物可以通过异构体特异性合成或从异构体混合物拆 分制备为单独的异构体。常规的拆分技术包括使用光学活性的盐形成异 构体对的每种异构体的游离碱(随后分步结晶和回收游离碱)、形成异构 体对的每种异构体的酯或酰胺(随后色谱分离和去除手性辅助剂)或使用 制备型TLC(薄层色谱法)或手性HPLC柱拆分原始材料或最终产物的异 构混合物。
多晶型物和溶剂化物
此外，本发明的化合物可具有一种或多种多晶型物或无定形的结晶 形式，因此意在被包括在本发明范围内。另外，所述化合物可形成溶剂 化物，例如与水形成的溶剂化物(即，水合物)或与常见的有机溶剂形成 的溶剂化物。如本文中使用的，术语“溶剂化物”是指本发明的化合物与 一种或多种溶剂分子的物理缔合。这种物理缔合包括不同程度的离子键 合和共价键合，包括氢键。在某些情况中，溶剂化物能够分离，例如当 一个或多个溶剂分子结合到结晶固体的晶格中时。术语“溶剂化物”意在 包括溶液相和可分离的溶剂化物。适当的溶剂化物的非限制性实例包括 乙醇化物、甲醇化物等。
本发明在其范围内意在包括本发明的化合物的溶剂化物。因此，在 本发明的治疗方法中，术语“给予”包括用本发明的化合物或其溶剂化物 治疗、改善或预防本文中所述综合症、病症或疾病的含义，其明显的包 括在本发明范围内，虽然没有明确地披露。
N-氧化物
本发明的化合物可根据技术上已知的用于将三价氮转化为其N-氧 化物形式的方法被转化为相应的N-氧化物形式。所述N-氧化反应通常 可以通过使起始原料与适当的有机或无机过氧化物反应进行。适合的无 机过氧化物包括例如过氧化氢、碱金属或碱土金属过氧化物，例如过氧 化钠、过氧化钾；适合的有机过氧化物可以包括过氧酸，诸如例如，过 氧苯甲酸或卤素取代的过氧苯甲酸(例如3-氯过氧苯甲酸)、过氧链烷酸 (例如过氧乙酸)、烷基过氧化氢(例如叔丁基过氧化氢)。适当的溶剂是例 如水、低级醇(例如乙醇等)、烃类(例如甲苯)、酮类(例如2-丁酮)、卤代 烃类(例如二氯甲烷)、以及这些溶剂的混合物。
互变异构形式
本发明的化合物还可以作为其互变异构形式存在。尽管在本发明中 没有明确地指出，但是意在将这种形式包括在本发明范围内。
本发明的化合物的制备
在制备本发明的化合物的任何方法中，有必要和/或期望保护任何所 关注分子上的敏感或活性基团。这可以通过常规的保护基来实现，例如 在Protecting Groups，P.Kocienski，Thieme Medical Publishers，2000；和 T.W.Greene & P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd ed.Wiley Interscience，1999中描述的那些。保护基可以使用本领域中已 知的方法在随后的适当阶段被除去。
制备方法
图解1
图解1举例说明制备式I的化合物的一般方法。式1-2的化合物可 以通过式1-1的氨基化合物的邻位卤化(优选溴化)随后通过与硼酸或硼 酸酯的金属催化的偶联反应(Suzuki反应，其中R2M为R2B(OH)2或硼酸 酯)或与锡试剂反应(Stille反应，其中R2M为R2Sn(烷基)3)得到(综述， 参见N.Miyaura，A.Suzuki，Chem.Rev.，95：2457(1995)；J.K.Stille， Angew.Chem，Int.Ed.Engl.，25：508024(1986)和A.Suzuki in Metal-Catalyzed Coupling Reactions，F.Deiderich，P.Stang，Eds.， Wiley-VCH，Weinheim(1988))。式1-1的化合物可为市售的，或者可使用 上述的钯介导的交叉偶联反应从起始原料1-0形成式1-1的化合物。
使1-1溴化的优选条件是在适当的溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺 (DMF)二氯甲烷(DCM)或乙腈中的N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)。金属催化 的偶联(优选Suzuki反应)可以根据标准方法进行，优选在钯催化剂例如 四(三苯膦)合钯(0)(Pd(PPh3)4)、碱水溶液如Na2CO3水溶液、和适合的溶 剂例如甲苯、乙醇、二甲氧基乙烷(DME)、或DMF的存在下进行。
式I的化合物可以通过使式1-2的化合物与羧酸WCOOH根据酰胺 键形成的标准方法反应制备(综述参见：M.Bodansky和A.Bodansky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，NY(1984))或通过与酰基氯 WCOCl或活化的酯WCO2Rq(其中Rq为离去基团，例如五氟苯基或N- 琥珀酰亚胺)反应制备。用于与WCOOH偶联的优选条件是：当W是呋 喃时，在DMF作为催化剂的情况下使用在DCM中的草酰氯以形成酰基 氯WCOCl，然后在三烷基胺如DIEA的存在下进行偶联；在W为吡咯 时，使用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基 苯并三唑-6-磺酰胺基甲基盐酸盐(HOBt)；和在W为咪唑时，优选的条 件是在DCM中的溴代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)和二异丙基乙 基胺(DIEA)。
应该理解，存在于式I中环A上的任选的取代可存在于起始原料1-1 或1-3中，并且在这种情况下，在图解1中所述的合成过程中自始至终 存在。或者，可以通过如下所述的许多方法引入式I的化合物上的各种 取代基，以提供对式I的任选的取代。存在于式1-0或1-3中环A上的 离去基团“L1”可以在图解1任何步骤之前或图解1过程中的任何步骤被 置换。在这种离去基团(优选为氟或氯)被式1-3的硝基适合亲核攻击活 化时，它们可以进行直接的被氨和叠氮化物阴离子亲核性芳香取代或在 适当的碱例如K2CO3、N，N-二异丙基乙基胺(DIEA)或NEt3的存在下被 胺、醇、硫醇和其它亲核试剂亲核性芳香取代。当离去基团适合于金属 催化的偶联(优选为溴或三氟甲烷磺酰氧基)时，可以进行许多交叉偶联 反应(例如如上讨论的用于引入R2的Suzuki或Stille反应)。可以采用的 其它金属催化的偶联反应包括芳香族的和杂芳族的胺化和酰胺化(综述 参见：S.L.Buchwald等人，Top.Curr.Chem.，219：131-209(2001)和J.F. Hartwig，“Organopalladium Chemistry for Organic Synthesis，”Wiley Interscience，NY(2002))。如果L1是被硝基活化的溴、碘、或氯，可以采 用使用2，4，6-三甲基-环丙硼氧烷(cyclotriboroxane)的另外的金属催化的 交叉偶联反应，以形成任选的甲基取代(参见M.Gray等人，Tetrahedron Lett.，41：6237-40(2000))。
在一些情况中，最初的取代基可以如下所述进一步衍生化，以提供 最终的式I的取代。
在环A上引入含氮杂环取代基的替代方法是从环A上的氨基形成 杂环。该氨基可以作为被保护的或未被保护的形式原来存在于起始原料 中，或者可由硝基还原产生，所述硝基也可以原来存在于起始材料中或 是通过硝化反应附加的。另外，氨基可通过叠氮基的还原形成，所述叠 氮基可以存在于起始材料中或者如上所述通过叠氮化物阴离子亲核性 芳香取代活化的卤化物产生。氨基还可以通过氨或通过被保护的氨等价 物阴离子例如氨基甲酸叔丁酯亲核性芳香取代活化的卤化物(例如，在硝 基卤代化合物中)产生。如果以被保护的形式引入，可以根据标准文献方 法将胺脱保护。(胺保护基和脱保护方法的实例参见：Theodora W.Greene 和Peter G.M.Wuts，John Wiley and Sons，Inc.，NY(1991).)成环反应涉及 用适合的任选取代的二亲电子试剂(di-electrophile)(优选二卤化物或二 羰基化合物)处理苯胺氨基，使得氨基的两个取代形成任选取代杂环。在 二卤化物的情况中，可以加入多种适宜碱的任一种，作为除酸剂，例如 碳酸钾、氢氧化钠、或三烷基胺如三乙胺。因此，用双(2-卤代乙基)胺 如双(2-氯乙基)胺或双(2-溴乙基)胺处理可得到哌嗪环(参见例如J.Med. Chem.，29：640-4(1986)和J.Med.Chem.，46：2837(2003))。该试剂的胺 氮上的任选的取代将在哌嗪的末端胺上引入任选的取代。例如，用N，N- 双(2-氯乙基)苯胺处理得到N-苯基哌嗪基。用双(2-卤代乙基)醚或双(2- 卤代乙基)硫醚处理将分别得到吗啉或硫代吗啉环。
直接取代以在环A上引入杂环取代基的另一个替代方法是从醛(即 从环A上的甲酰基)形成杂环。甲酰基可作为被保护的或未被保护的形 式原来存在于起始材料中，或者可以通过文献中已知的许多甲酰化反应 中的任一种产生，包括Vilsmeier-Haack反应(关于甲酰化化学综述，参 见：G.A.Olah等人，Chem Rev.，87：(1987))或通过硝基芳香化合物的对 位甲酰化产生(参见：A.Katritsky和L.Xie，Tetrahedron Lett.， 37：347-50(1996))。
最后，应该理解，式I的化合物可以被进一步衍生化。式I的化合 物上的保护基可以根据标准合成方法除去。(Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts，John Wiley and Sons，Inc.，NY(1991))并且然后可以进行进一 步的衍生化。化合物I的进一步衍生化的实例包括但不限于：在式I的 化合物包含伯胺或仲胺时，可以在还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠的存 在下使胺与醛或酮反应(参见Abdel-Magid J.Org.Chem.61，pp. 3849-3862，(1996))以进行还原烃化；与如上所述的酰基氯或羧酸和酰胺 键形成试剂反应以形成酰胺；与磺酰氯反应以形成磺酰胺；与异氰酸酯 反应以形成脲；在如上所述钯催化剂的存在下与芳基-或杂芳基-卤化物 反应(参见上述的Buchwald和Hartwig参考文献)以形成芳基和杂芳基 胺。另外，当式I的化合物包含芳基卤化物或杂芳基卤化物时，这些化 合物可进行金属-催化的与硼酸的反应(例如，如上所述的Suzuki或Stille 偶联)，或者与胺或醇反应(Buchwald-或Hartwig-型偶联，参见上述的 Buchwald和Hartwig参考文献)。当式I的化合物包含氰基时，这个基团 可以在酸性或碱性条件下水解为酰胺或酸。碱性的胺可以氧化为N-氧化 物，并且反之N-氧化物可以还原为碱性的胺。当式I的化合物包含非环 状或环状的硫化物时，硫化物可以进一步氧化为相应的亚砜或砜。可以 通过使用适当的氧化剂例如一当量的(间氯过氧苯甲酸)MCPBA氧化或 通过用NaIO4处理得到亚砜(参见例如，J.Regan等人，J.Med.Chem.，46： 4676-86(2003))并且可以通过使用二当量的MCPBA或通过用4-甲基吗 啉N-氧化物和催化性的四氧化锇处理得到砜(参见例如PCT申请WO 01/47919)。
图解2a
图解2a举例说明得到式I的化合物的途径。F表示-NQaQbR3-、-O-、 S、SO、或SO2，和AA表示-NH2或-NO2。D1和D2只是用于说明性的 目的表示；本领域技术人员知道，还可以存在有D5、D6、D7、D8。式 2-1的酮可以通过用非亲核性的碱例如LDA处理然后用三氟甲磺酸化试 剂例如三氟甲烷磺酸酐或优选N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺捕获得到的烯 醇化物转化为式2-2乙烯基三氟甲磺酸酯。使式2-3的硼酸或硼酸酯与 式2-2的乙烯基三氟甲磺酸酯进行Suzuki偶联可以得到其中Z为C的式 2-4的化合物(Synthesis，993(1991))。
对于式2-4的化合物，用Pd/C处理可以还原烯烃(和硝基，如果AA 是NO2)两者，得到Z为CH、AA为NH2的化合物。可以通过用MCPBA 氧化或图解1中描述的其它方法从其中AA为-NO2和F为硫化物(F为-S-) 的化合物制备其中F表示-SO2的式2-4的化合物。然后可以将硝基用 Pd/C还原，以将硝基和烯烃还原。
然后如图解1中所述将式2-4的化合物(AA为NH2)转化为式2-5的 化合物(如果不需要进一步的修饰，其还表示式I的化合物)。
式2-5的化合物可以进行进一步的修饰以提供另外的式I的化合物。 例如，在其中F为-NQaQbR3-、QaQb为键、和R3表示BOC保护基(CO2tBu) 的情况中，可以根据标准方法除去BOC基团，例如含三氟乙酸(TFA)的 DCM(Greene和Wuts，出处同上)，以提供仲胺，其可以进一步衍生化以 提供式I的化合物。进一步的衍生化包括但不限于：在还原剂例如三乙 酰氧基硼氢化钠的存在下与醛或酮反应，以提供其中F为-NCH2R3的 式II的化合物(A.F.Abdel-Magid，出处同上)；与酰基氯或与羧酸和酰 胺键形成试剂反应(如图解1中所述)以提供其中F为-NCOR3的式II的化 合物；与磺酰氯反应(如图解1中所述)以提供其中F为-NSO2Ra的式I 的化合物；与异氰酸酯反应(如图解1中所述)以提供其中F为-NCONRaRb 的式II的化合物；或如图解1中所述进行金属催化的取代反应以提供其 中F为-NR3的式I的化合物(S.L.Buchwald等人，出处同上；J.H Hartwig，出处同上)。对于上述实例，Ra和Rb独立地为氢、烷基、环烷 基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基。
图解2b
图解2b举例说明了图解2a的变型，用于合成部分不饱和的式I的 化合物。E表示-NQaQbR3-、-O-(D1和D2为H)、-S-(D1和D2为H)、-(D1 和D2为H)、或-SO2-(D1和D2为H)，和RAA表示-NH2或-NO2。式2-4 的化合物如图解2中所述制备。如果RAA为-NO2，则必须通过不会还原 烯烃的方法还原硝基，例如铁和氯化铵。如果式2-4的RAA是氨基，则 不再必需另外的步骤，并且式2-4的化合物也就是式2-7的化合物。为 了制备其中E为-SO2-或-SO-的式2-7的化合物，必须对如上所述的其中 RAA为-NO2的化合物2-4进行硫化物的氧化，随后进行硝基还原。
图解3
图解3举例说明制备用于合成式I的化合物的中间体，其中环A为 吡啶基，和R5为环A上的任选的取代或如式I中定义的杂环取代基之 一。K为NH2或其它官能团，例如NO2、COOH或COOR，其可以通过 已知的文献方法转化为氨基，例如NO2的还原(如对于图解1所讨论的) 或通过COOH的Curtius重排(综述参见Organic Reactions，3：337(1947))。 L3和L4为卤素。(K为COOH还可以通过简单的碱或酸催化的水解从K 为COOR形成)。
通常，引入R2和R5时的选择性和顺序可以通过在化合物(3-1)中选 择的卤素L3和L4的相对反应性、杂环固有的选择性和/或采用的反应条 件而实现。在选择性地引入R2和R5时利用卤素L3和L4的相对反应性 的实例包括如下情况：在其中L3为氟和L4为溴的式3-1的化合物中， 可以实现由亲核试剂选择性地取代氟，随后通过金属催化的取代化学(例 如如下进一步说明的Suzuki或Stille交叉偶联反应)取代保留的溴。同样 地，在其中L3和L4之一为碘、另一个为溴或氯的式3-1的化合物中， 可以实现对碘基团的选择性的金属催化的取代化学(例如，如下进一步讨 论的Suzuki或Stille交叉偶联反应或Buchwald/Hartwig胺化)，随后通过 另一个金属催化的取代反应置换保留的溴或氯基团。
如图解3中举例说明的，可首先将式3-1的离去基团L3置换，以得 到式3-3的化合物，或者可以首先将离去基团L4置换以得到式3-2的化 合物。然后可以使化合物3-2或3-3反应以置换L3或L4，得到式3-4的 化合物。
因此，将式3-1的化合物用仲胺、氨或被保护的胺例如氨基甲酸叔 丁酯直接亲核取代或金属催化的胺化(综述参见Modern Amination Methods：Ricci，A.，Ed.；Wiley-VCH：Weinheim，2000)可以用于将R5引入 到式3-2或3-3中，其中R5为伯胺或仲胺、氨基(NH2)、和胺等价物或 被保护的氨基。化合物3-1与硼酸或硼酸酯之间的金属催化的偶联 (Suzuki反应，M为硼酸基团或硼酸酯基团)、或如图解1中所述的与有 机锡化合物之间的金属催化的偶联(Stille反应，M为SnR3，其中R为 烷基和其它取代基(如上述定义的)可以提供式3-2或3-3的化合物。
化合物3-2可以如上所述通过金属催化的Suzuki或Stille偶联进一 步转化为化合物3-4。化合物3-3中的L4随后还可以被R5代替，以得到 式3-4的化合物，这是通过用亲核试剂直接亲核取代或金属催化的反应， 或者如上所述通过相同的金属催化的交叉偶联反应进行的。当式(3-2、 3-3或3-4)中的R5为被保护的胺并且K不是氨基时，可以将其脱保护， 以暴露氨基官能团。随后，这个氨基官能团可以进一步如图解1中所述 衍生化。当式3-4中的K基团不是氨基(例如上面描述的官能团)时，其 可以根据已知的文献方法转化为氨基(参见例如Comprehensive Organic Transformations：Larock，R.S.；Wiley and Sons Inc.，USA，1999)并且得到 的胺3-5可以被用于如图解(1)所述的酰胺键形成反应，以得到式I的化 合物。当式3-4中的K是氨基时，其可以直接用于如上所述的酰胺偶联。
图解4a
图解4b
图解4a和4b举例说明通过在第一个离去基团的置换已经完成之后 引入第二个离去基团从式4-1和4-5的单卤代取代的化合物开始制备用 于根据图解3进一步修饰的中间体。这些还可以用于合成式I的化合物， 其中环A是吡啶并且R5或者是环A上的任选的取代或者是杂环取代基 之一。如图解3中所示，吡啶环上的其余位置可以如式I中描述的被取 代。K为NH2或可以通过已知的文献方法例如图解3中所述的还原或 Curtius重排最终转化为氨基的其它官能团，例如NO2、COOH或COOR。 L3和L4为卤素。在这些化合物中，T或者是H，或者是可以通过已知的 文献方法(参见例如Nicolai，E.等人，J.Heterocyclic Chemistry， 31，(73)，(1994))转化为离去基团L3或L4例如卤素、三氟甲磺酸酯或甲磺 酸酯的官能团例如OH。将式4-1的化合物中的L3或式4-5中的L4通过 图解3中所述的方法置换，可以得到式4-2和4-6的化合物。这时，化 合物4-2或4-6的取代基T可以通过标准方法转化为离去基团L4或L3(优 选卤素)，以提供式4-3和4-5的化合物。例如，当T是OH时，实现这 种转化的优选试剂是亚硫酰氯、PCl5、POCl3、或PBr3(参见例如Kolder， den Hertog.，Recl.Trav.Chim.Pays-Bas；285，(1953)，和Iddon，B等人，J. Chem.Soc.Perkin Trans.1.，1370，(1980))。当T为H时，其可以被直接 卤化(优选溴化)，以提供式4-3或4-7的化合物(参见例如Canibano，V. 等人，Synthesis，14，2175，(2001))。优选的溴化条件是在适合的溶剂例如 DCM或乙腈中的NBS。
式4-3或4-7的化合物可以通过上面描述的方法分别地引入其余的 基团R2或R5转化为式4-4或4-8的化合物，然后通过图解3描述的用 于将式3-4和3-5的化合物转化为式I的化合物的方法到式I的化合物上。
本发明的代表性的化合物和它们的合成在以下图表和随后的实施 例中提供。以下只是用于示例性目的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
5-氰基-呋喃-2-甲酸
在Ar下向具有搅拌棒和Vigreaux柱的烧瓶加入2-甲酰基-5-呋喃甲 酸(2.8g，20mmol)、羟胺盐酸盐(2.7g，40mmol)、和无水吡啶(50mL)。 混合物加热到85℃，加入乙酸酐(40mL)并将混合物搅拌3小时。在冷 却到60℃之后，加入水(250mL)并将混合物在RT搅拌70小时。用浓盐 酸将混合物酸化到pH 2并且用3∶1二氯甲烷-异丙醇提取(8x100mL)。 合并的有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并 且真空浓缩，得到标题化合物，为黄褐色固体(1.26g，46％)。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ14.05(br s，1H)，7.74(d，1H，J＝3.8Hz)， 7.42(d，1H，J＝3.8Hz)。
实施例2
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸
标题化合物通过文献方法制备(Loader和Anderson，Canadian J. Chem.59：2673(1981))。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ12.70(br s，1H)， 7.78(s，1H)，7.13(s，1H)。
实施例3
4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
a)1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈
将装有咪唑-4-甲腈(0.5g，5.2mmol)(Synthesis，677，2003)、2-(三甲 基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(SEMCl)(0.95mL，5.3mmol)、K2CO3(1.40g， 10.4mmol)、和丙酮(5mL)的烧瓶在RT搅拌10小时。混合物用 EtOAc(20mL)稀释并且用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，有机层用 MgSO4干燥。粗产物用30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化硅)洗脱， 得到0.80g(70％)的标题化合物，为无色油状物。质谱(CI(CH4)， m/z)C10H17N3OSi，计算值224.1(M+H)，实测值224.1。
b)2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈
向1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈(0.70g，3.1 mmol)(如前述步骤制备)的CCl4(10mL)溶液中加入NBS(0.61g，3.4 mmol)和AIBN(cat)，并将混合物在60℃加热4小时。反应用EtOAc(30mL) 稀释并且用NaHCO3(2x30mL)和盐水(30mL)洗涤，有机层用Na2SO4 干燥，然后浓缩。标题化合物用30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化 硅)洗脱，得到0.73g(77％)的黄色固体。质谱(CI(CH4)， m/z)C10H16BrN3OSi，计算值302.0/304.0(M+H)，实测值302.1/304.1。
c)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸乙酯
在-40℃向2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈 (0.55g，1.8mmol)(如前述步骤制备)的THF(6mL)溶液中滴加2M i-PrMgCl的THF溶液(1mL)。将反应在-40℃搅拌10分钟，然后冷却到 -78℃，并且加入氰基甲酸乙酯(0.3g，3.0mmol)。使反应达到RT并且搅 拌1小时。反应用NH4Cl饱和水溶液猝灭，用EtOAc(20mL)稀释并用 盐水洗涤(2x 20mL)，有机层用Na2SO4干燥，然后浓缩。标题化合物用 30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化硅)洗脱，得到0.4g(74％)无色固 体。质谱(ESI，m/z)：C13H21N3O3Si，计算值296.1(M+H)，实测值296.1。
d)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸乙酯 (0.4g，1.3mmol)(如前述步骤制备)的乙醇(3mL)溶液中加入6M KOH溶 液(0.2mL)并将反应搅拌10分钟，然后浓缩，得到0.40g(100％)的标题 化合物，为黄色固体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)7.98(s，1H)，5.92(s，2H)， 3.62(m，2H)，0.94(m，2H)，0.00(s，9H)。质谱(ESI-neg，m/z)C11H17N3O3Si， 计算值266.1(M-H)，实测值266.0。
实施例4
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (3-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-酰胺
a)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪
在0℃将2-溴-4-氟硝基苯(949mg，4.31mmol)分为两个部分加入到 纯的N-甲基哌嗪(8mL)并且允许其回温到室温。将反应加热到60℃，1 小时，然后将其用50mL的EtOAc稀释并且倾倒在H2O(50mL)中。分 液并将有机层用NaHCO3饱和水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩， 得到580mg(45％)的标题化合物，为黄色固体。质谱(ESI，m/z)： C11H14BrN3O2，计算值300.0(M+H)，实测值300.1。
b)4，4，5，5-四甲基-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷
在-40℃向搅拌的2-溴-3-甲基噻吩(337mg，1.9mmol)在8mL THF 中的溶液加入n-BuLi(0.8mL，2.5M/己烷)，并将反应搅拌30分钟。这时， 加入2-异丙氧基-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(775μL，3.8 mmol)，并将反应回温到环境温度，并且继续搅拌1小时。然后将反应 冷却到0℃并且用NaHCO3饱和水溶液(10mL)猝灭。将混合物倾倒在 EtOAc(100mL)中，用H2O洗涤(2x 50mL)，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。 残余物通过硅胶制备薄层色谱法纯化(20％EtOAc-己烷)，得到224 mg(53％)标题化合物，为油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ1.36(s， 12H)，2.5(s，3H)，6.99(d，1H，J＝4.8Hz)，7.50(d，1H，J＝4.8Hz)。
c)1-甲基-4-[3-(3-甲基-噻吩基-2-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪
向包含1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(68mg，0.2mmol，如实施 例4步骤(a)制备)、4，4，5，5-四甲基-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-[1，3，2]二氧杂 硼杂环戊烷(61mg，0.27mmol，如前述步骤制备)和Pd(PPh3)4(14mg，6 mol％)的烧瓶加入甲苯(3mL)、乙醇(3mL)和2M Na2CO3(4mL)。将得 到的混合物在80℃加热2小时，然后倾倒在EtOAc(25mL)中。将有机 层分离，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。通过硅胶制备薄层色谱法纯化 (EtOAc)，得到40mg(63％)的标题化合物，为浅黄色固体。质谱(ESI， m/z)：C16H19N3O2S，计算值318.1(M+H)，实测值318.2。
d)5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2- 基)-苯基]-酰胺
在H2(1atm)下将1-甲基-4-[3-(3-甲基-噻吩基-2-基)-4-硝基-苯基]-哌 嗪(60mg，0.18mmol，如前述步骤制备)与含40mg 5％Pd-C的MeOH(5 mL)搅拌2小时。将反应过滤通过硅藻土(Celite)并且真空浓缩，得到40 mg(72％)的4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-苯胺，为棕色 固体，其不经进一步纯化立即使用。使用与实施例9步骤(c)相似的方法， 使4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-苯胺(40mg，0.13mmol) 与5-氰基-呋喃-2-甲酰氯(30mg，0.19mmol，如实施例9步骤(c)中制备) 在DIEA(61μL，0.34mmol)的存在下反应，得到18.9mg(36％)标题化合 物，为黄色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ2.13(s，3H)，2.38(s，3H)， 2.59-2.62(m，4H)，3.24-3.27(m，4H)，6.92(d，1H，J＝2.8Hz)，7.06(d，1H，J ＝5.1Hz)，7.15(d，1H，J＝3.7Hz)，7.19(d，1H，J＝3.7Hz)，7.02(dd，1H， J＝2.8，9.0Hz)，7.42(d，1H，J＝5.1Hz)，8.11(s，1H)，8.34(d，1H，J＝9.0Hz)； 质谱(ESI，m/z)：C22H22N4O2S，计算值407.1(M+H)，实测值407.1。
实施例5
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (4-甲基-噻吩基-3-基)-苯基]-酰胺
a)4，4，5，5-四甲基-2-(2-甲基-噻吩基-3-基)-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷
使用与实施例4步骤(b)相似的方法，将3-溴-4-甲基噻吩(571mg，3.2 mmol)用n-BuLi(1.41mL，2.5M/己烷)处理，然后使其与2-异丙氧基 -4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(775μL，3.8mmol)反应，得到 189mg(26％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： δ1.32(s，12H)，2.42(s，3H)，6.90-6.91(m，1H)，7.84(d，1H，J＝2.9Hz)。
b)1-甲基-4-[3-(4-甲基-噻吩基-3-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪
使用与实施例4步骤(c)相似的方法，使1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基 -哌嗪(162mg，0.54mmol)、4，4，5，5-四甲基-2-(2-甲基-噻吩基-3-基)-[1，3，2] 二氧杂硼杂环戊烷(145mg，0.64mmol)和Pd(PPh3)4(37mg，6mol％)反 应，得到108mg(71％)的标题化合物，为黄色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ2.02(s，3H)，2.37(s，3H)，2.55-2.57(m，4H)，3.42-3.45(m，4H)， 6.66(d，1H，J＝2.8Hz)，6.87(s，1H)，6.99-7.00(m，1H)，7.09(d，1H，J＝3.2 Hz)，8.13(d，1H，J＝9.2Hz)。
c)4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(4-甲基-噻吩基-3-基)-苯胺
使用与实施例4步骤(d)相似的方法，将1-甲基-4-[3-(4-甲基-噻吩基 -3-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪(100mg，0.32mmol)与80mg 5％Pd-C在H2下 搅拌，得到82mg(89％)的标题化合物，为黑色油状物，其不经进一步 纯化立即使用。质谱(ESI，m/z)：C16H21N3S，计算值288.15(M+H)，实测 值288.1。
d)5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(4-甲基-噻吩基-3- 基)-苯基]-酰胺
使用与实施例9步骤(c)相似的方法，使5-氰基-呋喃-2-甲酰氯(64mg， 0.41mmol，如实施例9步骤(c)中制备)与4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(4-甲基 -噻吩基-3-基)-苯胺(80mg，0.27mmol，如前述步骤制备)在DIEA(0.10mL， 0.59mmol)的存在下反应，得到25.8mg(24％)的标题化合物，为黄色固 体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ2.09(s，3H)，2.37(s，3H)，2.59-2.60(m， 4H)，3.24-3.26(m，4H)，6.83(d，1H，J＝2.9Hz)，6.98-7.06(m，2H)， 7.14-7.21(m，3H)，7.96(s，1H)，8.32(d，1H，J＝9.0Hz)。质谱(ESI，m/z)： C22H22N4O2S，407.1计算值(M+H)，实测值407.1。
实施例6
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-1-羟基甲基-乙基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
a)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2，2-二甲基-[1，3]二 氧杂环己烷-5-基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(81mg，0.16mmol，如实施例14步骤(b)中制备)在CH2Cl2(3mL) 中的浆状物中加入NEt3(33μL，0.24mmol)。然后将溶液用2，2-二甲基 -[1，3]二氧杂环己烷-5-酮(31mg，0.24mmol)处理并将反应搅拌3小时。 这时，一次性加入NaBH(OAc)3(51mg，0.24mmol)，并将反应搅拌另外 的4小时。反应用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc提取(2x 25mL)。将有 机提取物干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。通过硅胶制备薄层色谱法纯化(10 ％MeOH-CHCl3)，得到22mg(28％)的标题化合物，为灰白色半固体。 质谱(ESI，m/z)：C28H35N5O3，计算值490.2(M+H)，实测值490.6。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-1-羟基甲基- 乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2，2-二甲基-[1，3]二 氧杂环己烷-5-基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(22mg，0.04mmol，如前述步骤 制备)的THF-H2O(1mL，4∶1v/v)溶液中加入TFA(0.4mL)并将反应搅拌1 小时。真空除去溶剂，得到14mg(60％)的标题化合物，为琥珀色泡沫 状物。1H-NMR(CD3OD，400MHz)：δ1.78-1.90(m，4H)，2.03-2.16(m，3H)， 2.29(br s，4H)，2.88-2.96(m，1H)，3.37-3.40(m，1H)，3.46-3.53(m，2H)， 3.74-3.78(m，3H)，5.83(s，1H)，7.13(d，1H，J＝2.0Hz)，7.22(dd，1H，J＝2.0， 8.4Hz)，8.03(s，1H)，8.17(d，1H，J＝8.4Hz)；质谱(ESI，m/z)：C25H31N5O3， 计算值450.2(M+H)，实测值450.2。
实施例7
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙酰基) -哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
通过注射器向吗啉-4-基-乙酸乙酯(117mg，0.67mmol)的乙醇(4mL) 溶液中加入6N KOH(110μL，0.67mmol)并且继续搅拌3小时。真空浓 缩，得到122mg(100％)的吗啉-4-基-乙酸钾盐。向吗啉-4-基-乙酸钾盐(29 mg，0.15mmol)、4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺三氟乙酸盐(65.1mg，0.13mmol，如实施例14步骤(b)中制备) 和PyBroP(93mg，0.19mmol)在CH2Cl2(4mL)中的混合物加入DIEA(51 μL，0.29mmol)并将反应搅拌过夜。反应用CH2Cl2(50mL)稀释，用H2O 洗涤(2x 25mL)，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。粗产物通过硅胶制备TLC 纯化，得到8.1mg(12％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ1.68-2.04(m，5H)，2.20-2.29(m，4H)，2.53-2.78(m，5H)， 3.09-3.23(m，6H)，3.35-3.40(m，1H)，3.72(br s，4H)，4.16-4.22(m，1H)， 4.73-4.77(m，1H)，5.82(s，1H)，7.00(s，1H)，7.12(dd，1H，J＝0.6，8.0Hz)， 7.73(s，1H)，8.27(d，1H，J＝8.1Hz)，9.48(s，1H)；质谱(ESI，m/z)： C28H34N6O3，计算值503.27(M+H)，实测值503.1。
实施例8
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(3-吗啉-4-基-丙酰基) -哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向包含3-吗啉-4-基-丙酸钾盐(94mg，0.47mmol，完全如实施例7 中所述从3-吗啉-4-基-丙酸乙酯制备)、4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己 -1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(179mg，0.36mmol，如实施 例14(b)中制备)、EDCI(83mg，0.43mmol)、和HOBT(68mg，0.5mmol) 的烧瓶加入DMF(4mL)。向搅拌的浆状物加入DIEA(157μL，0.9mmol) 并将反应搅拌过夜。反应用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc提取(2x25 mL)。将合并的有机提取物干燥(Na2SO4)，真空浓缩并将粗产物通过硅 胶制备TLC纯化，得到10.4mg(6％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ1.49-1.93(m，5H)，2.22-2.31(m，3H)，2.52(br s，4H)，2.58-2.63(m，3H)，2.74-2.76(m，4H)，3.10-3.17(m，2H)，3.72(br s， 4H)，3.97-4.02(m，2H)，4.76-4.81(m，2H)，5.81-5.82(m，1H)，6.81-6.82(m， 1H)，6.99-7.00(m，1H)，7.09-7.13(m，1H)，7.70(s，1H)，8.26(d，1H，J＝8.2 Hz)，9.51(s，1H)；质谱(ESI，m/z)：C29H36N6O3，计算值517.28M+H)，实 测值517.3。
实施例9
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺
a)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪
向冷却(0℃)的1.00g(4.55mmol)的2-溴-4-氟硝基苯(Oakwood)在12 mL EtOH中的溶液加入1.52mL(13.7mmol)哌啶。将溶液在0℃搅拌0.5 小时，然后在60℃搅拌4小时。将混合物真空浓缩，溶解于EtOAc(60mL) 中，用水(3x 100mL)和盐水(100mL)洗涤，并且干燥(Na2SO4)。真空浓 缩并且在50-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，用1-3％MeOH-二氯甲烷 洗脱，得到1.06g(77％)的标题化合物，为棕黄色固体。质谱(ESI，m/z)： C11H14BrN3O2，计算值300.0(M+H，79Br)，实测值300.1。
b)1-甲基-4-(2′-甲基-6-硝基-联苯-3-基)-哌嗪
在Ar下将200mg(0.666mmol)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如 前述步骤制备)、136mg(0.999mmol)和77.0mg(0.0666mmol)四(三苯膦) 合钯(0)的混合物加入4.0mL脱气的二甲氧基乙烷(DME)和400μL(0.799 mmol)的2.0M Na2CO3水溶液。将混合物在搅拌下在Ar下在80℃加热 14小时。将冷却(RT)的混合物浓缩并且在10-g二氧化硅SPE柱上色谱 纯化，使用含1-5％MeOH的二氯甲烷-己烷(1∶1)。产物级分用80mg脱 色炭处理，过滤，浓缩，然后在类似的柱上再次色谱纯化，使用1-3％ EtOH-二氯甲烷，得到265mg的标题化合物，为黄色树脂状物(通过 1H-NMR测定为75％纯度，为与三苯膦的混合物)，其不经进一步纯化 用于随后的反应。质谱(ESI，m/z)：C11H21N3O3，计算值312.2(M+H)，实 测值312.2。
c)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰 胺
将140mg(0.337mmol，基于75％纯度)1-甲基-4-(2′-甲基-6-硝基-联 苯-3-基)-哌嗪(如前述步骤制备)和70mg的10％炭载钯(Degussa型 E101-NE/W，Aldrich，50重量％的水)在5mL THF中的混合物在氢气气 球下剧烈搅拌1小时。将混合物过滤(Celite)，用二氯甲烷洗涤(2x2mL) 并将得到苯胺溶液置于Ar下并且立即用于随后的反应。
与上述反应同时地，将在2.5mL无水二氯甲烷中的55.4mg(0.404 mmol)5-氰基呋喃-2-甲酸(如实施例1中制备)在CaSO4干燥管下用52.9 μL(0.606mmol)草酰氯处理随后用10μL的无水DMF处理。将溶液搅 拌25分钟并且迅速地在20-25℃真空浓缩。将得到的5-氰基-呋喃-2-甲 酰氯置于高真空下2-3分钟，然后立即置于Ar下，在冰浴中冷却到0℃， 并且用上述得到的苯胺溶液处理随后用141μL(0.808mmol)的N，N-二异 丙基乙胺(DIEA)处理。在RT搅拌30分钟之后，混合物真空浓缩，并将 得到的残余物在20-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使用2-10％EtOH- 二氯甲烷，得到黄色树脂状物(其从EtOAc-己烷结晶)，得到17.2mg(13％) 为黄色固体的纯标题化合物，以及70.3mg不纯的标题化合物。将不纯 的级分溶解于50mL EtOAc，用饱和NaHCO3水溶液-1M K2CO3(1∶1，2x 20mL)和盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且浓缩，得到43.4mg(32％) 另外的标题化合物，为结晶状黄色固体(总收率45％)。1H-NMR(CDCl3； 400MHz)：δ8.32(d，1H，J＝9.0Hz)，7.73(br s，1H)，7.34-7.54(m，3H)， 7.25(d，1H，J＝7.7Hz)，7.12，7.14(AB q，2H，J＝3.7Hz)，7.01(dd，1H，J＝ 9.0，2.8Hz)，3.25-3.27(m，4H)，2.59-2.62(m，4H)，2.38(s，3H)，和2.15(s， 3H)。质谱(ESI，m/z)：C21H24N4O3，计算值401.2(M+H)，实测值401.1。
实施例10
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺
a)1-(2′-氟-6-硝基-联苯-3-基)-4-甲基-哌嗪
根据实施例9步骤(b)的方法，使用含75.0mg(0.250mmol)1-(3-溴-4- 硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如实施例9步骤(a)中制备)、136mg(0.999 mmol)2-氟苯基硼酸、26.8mg(0.0232mmol)四(三苯膦)合钯(0)和400 μL(0.799mmol)的2.0M Na2CO3水溶液的DME，不同之处在于将混合物 加热22小时。在5-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使用含1-5％MeOH 的二氯甲烷-己烷(1∶1)，得到95.0mg的标题化合物(通过1H-NMR测定 纯度为76％，为与三苯膦的混合物)，为黄色树脂状物，其不经进一步 纯化用于随后的反应。质谱(ESI，m/z)：C17H18FN3O3，计算值 316.1(M+H)，实测值316.2。
b)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺
根据实施例9步骤(c)的方法，使用93.2mg(0.225mmol，基于76％ 纯度)1-(2′-氟-6-硝基-联苯-3-基)-4-甲基-哌嗪(如前述步骤制备)、46mg 的10％炭载钯、37.0mg(0.270mmol)的5-氰基呋喃-2-甲酸(如实施例1 中制备)、35.3μL(0.405mmol)草酰氯、5.0μL的无水DMF，和94.1 μL(0.540mmol)的DIEA制备。在5-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使 用1-4％MeOH-二氯甲烷，得到69.8mg(77％)的标题化合物，为黄色树 脂状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.04(d，1H，J＝9.0Hz)，7.93(br s， 1H)，7.434-7.48(m，1H)，7.37(td，1H，J＝7.5，1.8Hz)，7.22-7.31(m，2H)， 7.13，7.18(AB q，2H，J＝3.7Hz)，7.02(dd，1H，J＝9.0，2.9Hz)，6.88(d，1H， J＝2.9Hz)，3.24-3.27(m，4H)，2.57-2.60(m，4H)，和2.36(s，3H)。质谱(ESI， m/z)：C23H21FN4O2，计算值405.2(M+H)，实测值405.2。
实施例11
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰胺
a)1-(3-环己-1-烯基-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪
将102mg(0.340mmol)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如实施例 9步骤(a)中制备)、59.7mg(0.474mmol)环己烯-1-基硼酸、43.8mg(0.0379 mmol)的四(三苯膦)合钯(0)的混合物在Ar下用206μL(0.412mmol)的2.0 M脱气的Na2CO3水溶液、0.6mL脱气的无水甲苯和0.2mL脱气的无水 EtOH处理并将混合物在100℃加热21小时。在冷却到RT之后，将混 合物倾倒在EtOAc(10mL)中，用盐水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且真 空浓缩。在5-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使用含1-3％EtOH的二 氯甲烷，得到126mg的标题化合物(通过RP-HPLC(C18柱)测定为74％ 纯度，为与三苯膦的混合物)，为黄色油状物，其不经进一步纯化用于随 后的反应。质谱(ESI，m/z)：C17H23N3O3，计算值302.2(M+H)，实测值 302.2。
b)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]- 酰胺
向含122mg(0.299mmol，基于74％纯度)的1-(3-环己-1-烯基-4-硝 基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如前述步骤制备)的5.0mL EtOH-水(2∶1)加入83.8 mg(1.50mmol)铁粉和160mg(2.99mmol)NH4Cl并将混合物在Ar下回流 12小时。加入另外的83.8mg(1.50mmol)铁粉，并将混合物回流1小时。 将混合物倾倒在EtOAc(12mL)中，过滤(Celite)，用EtOAc洗涤(2x 4 mL)，真空浓缩并溶解于无水THF(4.0mL)。将得到的苯胺溶液置于Ar 下并且立即用于随后的反应。
将含61.6mg(0.449mmol)的5-氰基呋喃-2-甲酸(如实施例1中制备) 的2.5mL无水二氯甲烷在CaSO4干燥管下用60.0μL(0.688mmol)草酰 氯处理，随后用10μL的无水DMF处理。将溶液搅拌25分钟并且迅速 地在20-25℃真空浓缩。将残余物置于高真空下2-3分钟，然后立即置于 Ar下，在冰浴中冷却到0℃并且用上述得到的苯胺溶液处理，随后用104 μL(0.598mmol)的DIEA处理。在RT搅拌30分钟之后，将混合物真空 浓缩，溶解于EtOAc(20mL)，用1M K2CO3(2x10mL)和盐水(10mL)洗 涤，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。得到的残余物在10-g二氧化硅SPE柱 上色谱纯化，使用1-4％MeOH-二氯甲烷，得到黄色树脂状物，然后其 从Et2O-己烷结晶，得到84.7mg(72％)的标题化合物，为结晶状黄色固 体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.57(br s，1H)，8.26(d，1H，J＝9.0Hz)， 7.20，7.23(AB q，2H，J＝3.7Hz)，6.86(dd，1H，J＝9.0，2.9Hz)，6.74(d，1H， J＝2.9Hz)，5.84-5.85(m，1H)，3.20-3.22(m，4H)，2.57-2.59(m，4H)，2.36(s， 3H)，2.23-2.30(m，4H)和1.79-1.84(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C23H26N4O2， 计算值391.2(M+H)，实测值391.2。
实施例12
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-(4-甲基-哌嗪-1-基) -苯基-酰胺
a)1-[3-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-硝基-苯基]-4-甲基-哌嗪
在Ar下将含1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如实施例9步骤(a) 中制备)(225.1mg，0.79mmol)、K2CO3(310.9mg，2.25mmol)和4-(4，4，5，5- 四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡喃(Murata，M.等 人，Synthesis，778，(2000))(157mg，0.75mmol)的二氧杂环己烷(5mL)在 80℃加热过夜。使反应混合物冷却到RT，浓缩，并将得到的残余物在 二氧化硅上色谱纯化(10％EtOAc/己烷-20％MeOH/EtOAc)，得到标题 化合物(82mg，36％)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.04(d，1H，J＝9.4 Hz)，6.78(dd，1H，J＝9.4，2.6Hz)，6.58(m，1H，J＝2.6Hz)，5.58(m，1H)， 4.34(m，2H)，3.95(t，2H，J＝5.3Hz)，3.46(m，4H)，2.57(m，4H)，2.38(s，3H)， 2.30(m，2H)。
b)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-(4-甲基-哌嗪-1- 基)-苯基-酰胺
使用与实施例4步骤(d)相似的方法将1-[3-(3，6-二氢-2H-吡喃-4- 基)-4-硝基-苯基]-4-甲基-哌嗪(如前述步骤制备)(80mg，0.26mmol)转化 为相应的胺，并且在0℃与在CH2Cl2(2mL)中的5-氰基-呋喃-2-甲酰氯(如 实施例9步骤(c)中制备)(得自137mg，1.00mmol的5-氰基-呋喃-2-甲酸， 如实施例1中制备)偶联。通过二氧化硅上的快速色谱法分离产物(50％ EtOAc/己烷-10％MeOH/EtOAc)，得到标题化合物(62.2mg，60％)。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.35(br s，1H)，8.12(d，1H each，J＝8.76Hz)， 7.24(d，1H，J＝5.08Hz)，7.19(d，1H，J＝5.08Hz)，6.88(dd，1H，J＝8.76， 2.7Hz)，6.73(d，1H，J＝2.7Hz)，5.88(br s，1H)，4.34(m，2H)，3.94(t，2H，J＝ 5.3Hz)，3.23(m，4H)，2.59(m，4H)，2.38(br s，5H)。LC-MS(ESI，m/z)： C22H24N4O3，计算值393.1(M+H)，实测值393.2。
实施例13
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)- 酰胺三氟乙酸盐
a)4-(4-氨基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
根据实施例35步骤(b)中的方法通过4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂 硼杂环戊烷-2-基)-苯胺与4-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲 酸叔丁酯(Synthesis，993，(1991))的Suzuki偶联制备标题化合物。质谱(ESI， m/z)：C16H22N2O2，计算值275.2(M+H)，实测值275.1。
b)4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(4-氨基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0.35g，1.2 mmol)(如前述步骤制备)的甲醇溶液在10％Pd/C上在20psi下氢化1小 时。将溶液过滤并且浓缩，得到0.35g(100％)的标题化合物，为黄色固 体。质谱(ESI，m/z)：C16H24N2O2，计算值277.2(M+H)，实测值277.1。
c)4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.20g，0.71mmol)(如前述步 骤制备)的DCM(3mL)溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)(0.13g，0.71 mmol)并将反应在RT搅拌10小时。反应用EtOAc(10mL)稀释并用 NaHCO3(2x 10mL)和盐水(10mL)洗涤。将有机层浓缩，得到0.26g(100 ％)的标题化合物，为黄色泡沫状物。质谱(ESI，m/z)：C16H23BrN2O2，计 算值355.1(M+H)，实测值355.1。
d)4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向烧瓶加入4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.13g，0.36 mmol)(如前述步骤制备)、环己-1-烯基硼酸(0.060g，0.48mmol)、 Pd(PPh3)4(0.04g，10mol％)，2M Na2CO3水溶液(1.5mL)、乙醇(1.5mL)、 和甲苯(3mL)，并且在80℃加热3小时。将反应用EtOAc(10mL)稀释， 用NaHCO3(2x 10mL)和盐水(10mL)洗涤，并将有机层用Na2SO4干燥， 然后浓缩。用30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化硅)洗脱标题化合 物，得到0.10g(85％)的标题化合物，为黄色油状物。质谱(ESI，m/z)： C22H32N2O2，计算值357.2(M+H)，实测值357.1。
e)4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐
向烧瓶加入4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (0.050g，0.14mmol)(如前述步骤制备)、4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(0.019g， 0.14mmol)(如实施例2中制备)、EDCI(0.040g，0.21mmol)、HOBt(0.019 g，0.14mmol)、DIEA(0.073mL，0.42mmol)、和DCM(0.5mL)并且在25℃ 搅拌10小时。将反应直接加载到10-g固相萃取(SPE)柱(二氧化硅)上并 将得到的中间体用30％EtOAc/己烷洗脱。将混合物在50％TFA/DCM(2 mL)中RT搅拌1小时然后浓缩并且通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50 ％CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分钟内洗脱，得到标题化合物(0.052g， 77％)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：7.59(s，1H)，7.50(d，1H)，7.22(d，1H)， 7.16(m，2H)，5.74(m，1H)，3.54.(m，2H)，3.16(m，2H)，2.94(m，1H)，2.29(m， 2H)，2.15(m，4H)，1.92(m，2H)，1.72(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C23H26N4O， 计算值375.2(M+H)，实测值375.1。
实施例14
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺三氟乙酸盐
a)4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐 (3.34g，10.9mmol)(如实施例3步骤(d)中制备)在20mL DCM中的溶液 加入DIEA(3.8mL，21.8mmol)和PyBroP(5.6g，12.0mmol)，并将反应在 25℃搅拌15分钟。加入4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁 酯(3.9g，10.9mmol)(如实施例13步骤(d)中制备)在10mL DCM中的溶 液并且反应在25℃搅拌8小时。将反应用EtOAc(60mL)稀释并用 NaHCO3(2x 60mL)和盐水(100mL)洗涤，有机层用Na2SO4干燥，然后 浓缩。标题化合物通过快速色谱法纯化(硅胶，2％EtOAc/DCM)，得到 5.5g(85％)的标题化合物，为黄色油状物。质谱(ESI，m/z)：C33H47N5O4Si， 计算值606.2(M+H)，实测值606.2。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐
向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g，2.5mmol)(如 前述步骤制备)在10mL DCM和0.3mL EtOH中的溶液加入3mL的TFA 并将溶液在25℃搅拌3小时。反应用5mL EtOH稀释然后浓缩。残余物 从甲醇和乙醚结晶，得到0.85g(70％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(400MHz，CD3OD)8.18(d，1H)，8.04(s，1H)，7.22(dd，1H)， 7.12(d，1H)，5.76(m，1H)，3.54.(m，2H)，3.16(m，2H)，2.92(m，1H)，2.30(m， 4H)，2.10(m，2H)，1.75(m，6H)。质谱(ESI，m/z)：C22H25N5O，计算值 376.2(M+H)，实测值376.2。
实施例15
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基) -2-环己-1-烯基-苯基]-酰胺
根据实施例37中的方法从4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4- 哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例13步骤(e)中制备)制备标题 化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)10.82(s，1H)，8.28(d，1H)，8.18(s，1H)， 7.48(d，1H)，7.16(dd，1H)，7.02(s，1H)，6.72(s，1H)，5.88(m，1H)，4.82(m， 1H)，3.98.(m，1H)，3.20(m，1H)，2.70(m，2H)，2.29(m，4H)，2.18(s，3H)， 1.80(m，8H)。质谱(ESI，m/z)：C25H28N4O2，计算值417.2(M+H)，实测值 417.1。
实施例16
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基) -2-环己-1-烯基-苯基]-酰胺
根据实施例37中的方法从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4- 哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例13步骤(b)中制备)制备标题 化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)13.12(br s，1H)，9.58(s，1H)，8.34(d， 1H)，7.76(s，1H)，7.21(dd，1H)，7.05(d，1H)，5.86(s，1H)，4.84(m，2H)， 4.00(m，1H)，3.22(m，1H)，2.72(m，2H)，2.30(m，4H)，2.21(s，3H)，1.80(m， 8H)。质谱(ESI，m/z)：C24H27N5O2，计算值418.2(M+H)，实测值418.1。
实施例17
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基) -4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例14的方法从4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(d)中制备)和4-[4-氨基-3-(4-甲 基-环己-1-烯基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根据实施例13步骤(d)中的方 法制备，用4-甲基-1-环己-1-烯基硼酸代替环己-1-烯基硼酸)制备标题化 合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.18(d，1H)，8.04(s，1H)，7.22(dd，1H)， 7.12(d，1H)，5.80(m，1H)，3.54.(m，2H)，3.18(m，2H)，2.94(m，1H)，2.30(m， 3H)，2.12(m，2H)，1.92(m，5H)，1.54(m，1H)，1.12(d，3H)。质谱(ESI，m/z)： C23H27N5O，计算值390.2(M+H)，实测值390.2。
实施例18
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环戊-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺三氟乙酸盐
根据实施例14的方法从4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(d)中制备)和4-(4-氨基-3-环戊 -1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根据实施例13步骤(d)中的方法制备， 用环戊烯-1-基硼酸代替环己-1-烯基硼酸)制备标题化合物。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)14.25(br s，1H)，10.00(s，1H)，8.36(s，1H)，7.72(d，1H)， 7.18(m，2H)，6.06(s，1H)，4.12(m，1H)，3.42(m，2H)，3.18(m，2H)，3.00(m， 3H)，2.80(m，2H)，1.92(m，5H)。质谱(ESI，m/z)：C21H23N5O，计算值 362.2(M+H)，实测值362.2。
实施例19
以下描述用于合成实施例1中所述中间体的替代方法。
5-氰基-呋喃-2-甲酸
向装备有机械搅拌器、加热罩、和冷凝器的250-mL三口圆底烧瓶 加入5-甲酰基-2-呋喃甲酸(9.18g，65.6mmol)和吡啶(60mL)。加入羟胺 盐酸盐(5.01g，72.2mmol)并且混合物加热到85℃。加入乙酸酐(40mL) 并将反应在85℃搅拌3小时，然后在40℃减压蒸发溶剂。将残余物溶 解于水，用2.0N NaOH溶液碱化到pH 9，并且用4∶1二氯甲烷/2-丙醇 提取直到吡啶完全除去(5x 200mL)。然后将水溶液用2.0N HCl溶液酸 化到pH 2，用固体NaCl饱和，并且用4∶1二氯甲烷/2-丙醇提取(5x 200 mL)。合并的有机提取物用Na2SO4干燥并且真空浓缩到干燥。残余物从 二氯甲烷结晶，得到6.80g的标题化合物，为白色固体(76％)。质谱 (ESI-neg，m/z)C6H3NO3，计算值136.0(M-H)，实测值136.1。1H NMR谱 符合指定结构。
实施例20
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺
向烧瓶加入甲烷磺酰基-乙酸(14mg，0.10mmol)、EDCI(30mg，0.15 mmol)、HOBt(14mg，0.10mmol)、DIEA(36μL，0.20mmol)和0.5mL DCM 并且在25℃搅拌。在10分钟之后，加入包含4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2- 环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(40mg，0.08mmol)(如实施 例20步骤(b)中制备)和NEt3(14μL，0.09mmol)的0.5mL DCM溶液并使 反应在25℃进行10小时。将反应混合物加载在5-g SPE柱(二氧化硅) 上，并且用10％EtOH/EtOAc洗脱标题化合物，得到10mg(25％)的白 色固体。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：11.60(br s，1H)，9.52(s，1H)，8.30(d， 1H)，7.74(s，1H)，7.60(dd，1H)，7.03(d，1H)，5.86(m，1H)，4.84(m，1H)， 4.18(s，2H)，4.12(m，1H)，3.32(m，1H)，3.20(s，3H)，2.82(m，2H)，2.30(m， 4H)，1.98(m，2H)，1.84(m，5H)，1.72(m，1H)。质谱(ESI，m/z)：C25H29N5O4S， 计算值496.2(M+H)，实测值496.2。
实施例21
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-吡啶-2-基甲基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(88mg，0.18mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、吡啶 -2-甲醛(17μL，0.21mmol)、NEt3(30μL，0.21mmol)、三乙酰氧基硼氢化 钠(56mg，0.25mmol)和0.8mL 1，2-二氯乙烷并且在25℃搅拌10小时。 蒸发溶剂并将标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN 的0.1％TFA/H2O在20分钟内洗脱，得到81mg(78％)的白色固体。 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：14.25(br s，1H)，9.90(br s，1H)，9.79(s，1H)， 8.72(s，1H)，8.36(s，1H)，7.98(m，1H)，7.88(dd，1H)，7.58(d，1H)，7.52(m， 1H)，7.20(m，1H)，7.12(d，1H)，5.76(m，1H)，4.56(s，2H)，3.40(m，2H)， 3.18(m，2H)，2.88(m，1H)，2.20(m，4H)，2.00(m，4H)，1.72(m，4H)。质谱 (ESI，m/z)：C28H30N6O，计算值467.2(M+H)，实测值467.2。
实施例22
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-(1-吡啶-2-基甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
这个化合物根据实施例21中的方法从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸 [2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺(如实施例17中制备)和 吡啶-2-甲醛制备。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：14.25(br s，1H)，9.90(br s，1H)，9.79(s，1H)，8.72(s，1H)，8.36(s，1H)，7.98(m，1H)，7.86(dd，1H)， 7.54(d，1H)，7.52(m，1H)，7.20(m，1H)，7.12(d，1H)，5.74(m，1H)，4.56(s， 2H)，3.40(m，2H)，3.18(m，2H)，2.88(m，1H)，2.48-2.22(m，3H)，2.18-2.06(m， 4H)，1.98-1.82(m，3H)，1.52(m，1H)，1.02(s，3H)。质谱(ESI，m/z)： C28H32N6O，计算值481.2(M+H)，实测值481.2。
实施例23
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环戊-1-烯基-4-[1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基甲 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例21中的方法，这个化合物从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2- 环戊-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例18中制备)和1- 甲基-1H-咪唑-2-甲醛制备。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.03(m，2H)， 7.50(d，1H)，7.42(s，1H)，7.20(m，2H)，6.02(m，1H)，4.22(s，2H)，3.96(s，3H)， 3.30(m，2H)，2.82-2.40(m，7H)，2.13-1.84(m，6H)。质谱(ESI，m/z)： C26H29N7O，计算值456.2(M+H)，实测值456.2。
实施例24
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基} -哌啶-1-甲酸酰胺
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(51mg，0.10mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、 NEt3(22μL，0.15mmol)、三甲基甲硅烷基异氰酸酯(16μL，0.11mmol)和 1.0mL的DCM并且在25℃搅拌10小时。蒸发溶剂并将标题化合物通 过RP-HPLC(C18)纯化，用含35-60％CH3CN的0.1％TFA/H2O在11分 钟内洗脱，得到30mg(70％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)： δ14.28(br s，1H)，9.76(s，1H)，8.34(s，1H)，7.84(d，1H)，7.18(dd，1H)， 7.08(d，1H)，6.00(br s，2H)，5.72(m，1H)，4.18(m，2H)，2.80-2.60(m，3H)， 2.24-2.10(m，4H)，1.80-1.60(m，6H)，1.50(m，2H)。质谱(ESI，m/z)： C23H26N6O，计算值419.2(M+H)，实测值419.0。
实施例25
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡啶 -4-基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(75mg，0.15mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、 K2CO3(84mg，0.60mmol)、2-氟吡啶(27μL，0.30mmol)和0.3mL的N，N- 二甲基乙酰胺并且在120℃搅拌8小时。反应用3mL H2O稀释并且标题 化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O 在9分钟内洗脱，得到50mg(75％)的白色固体。1H-NMR(400MHz， CD3OD)：8.18(d，1H)，8.06(m，1H)，8.02(s，1H)，7.94(dd，1H)，7.48(d，2H)， 7.22(dd，1H)，7.12(d，1H)，6.98(t，1H)，5.82(m，1H)，4.32(m，2H)，3.46(m， 2H)，3.00(m，1H)，2.30(m，4H)，2.18(m，2H)，1.96-1.74(m，6H)。质谱(ESI， m/z)：C27H28N6O，计算值453.2(M+H)，实测值453.2。
实施例26
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-乙基)-哌啶-4-基]- 苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例21中的方法从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4- 哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例14步骤(b)中制备)、和羟基-乙醛 制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.18(d，1H)，8.02(s，1H)， 7.22(dd，1H)，7.14(d，2H)，5.82(m，1H)，3.94(m，2H)，3.74(m，2H)，3.30(m， 2H)，3.18(t，2H)，2.92(m，1H)，2.30(m，4H)，2.20-1.98(m，4H)，1.96-1.74(m， 4H)。质谱(ESI，m/z)：C24H29N5O2，计算值420.2(M+H)，实测值420.2。
实施例27
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氰基-乙基)-哌啶-4-基]-2-环己-1-烯基- 苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(77mg，0.16mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、NEt3 (24μL，0.16mmol)、丙烯腈(12μL，0.18mmol)、0.1mL MeOH和1.0mL 的1，2-二氯乙烷并且在80℃搅拌1小时。将反应浓缩并且标题化合物通 过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分 钟内洗脱，得到83mg(95％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.18(d，1H)，8.06(m，1H)，7.22(dd，1H)，7.12(d，1H)，5.82(m，1H)，3.76(m， 2H)，3.60(m，2H)，3.28(t，2H)，3.12(t，2H)，2.92(m，1H)，2.30(m，4H)， 2.18-1.98(m，4H)，1.92-1.74(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C25H28N6O，计算值 429.2(M+H)，实测值429.2。
实施例28
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-氨基甲酰基甲基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基 -苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(50mg，0.10mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、NEt3 (32μL，0.23mmol)、2-溴乙酰胺(16mg，0.12mmol)、和0.5mL的DCM 并且在25℃搅拌4小时。将反应浓缩并且标题化合物通过RP-HPLC(C18) 纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分钟内洗脱，得到 42mg(75％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ14.28(br s，1H)， 9.78(s，1H)，9.50(br s，1H)，8.34(s，1H)，8.00(s，1H)，7.88(d，1H)，7.72(s， 1H)，7.18(dd，1H)，7.10(d，1H)，5.76(m，1H)，3.94(s，2H)，3.58(m，2H)， 3.12(m，2H)，2.80(m，1H)，2.20(m，4H)，1.98(m，4H)，1.80(m，4H)。质谱 (ESI，m/z)：C24H28N6O2，计算值433.2(M+H)，实测值433.2。
实施例29
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-2-基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(25mg，0.05mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、吡啶 -2-基-乙酸盐酸盐(10mg，0.06mmol)、EDCI(12mg，0.06mmol)、 HOBt(8.0mg，0.06mmol)、DIEA(36μL，0.20mmol)和0.2mL DMF并且 在25℃搅拌10小时。反应用2mL H2O稀释并将标题化合物通过 RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O在9分钟 内洗脱，得到22mg(70％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.82(d，1H)，8.52(t，1H)，8.14(d，1H)，8.04(s，1H)，7.96(m，3H)，7.20(dd， 1H)，7.10(d，1H)，5.82(m，1H)，4.68(m，1H)，4.32(m，2H)，4.18(m，1H)， 3.40(m，1H)，2.88(m，2H)，2.30(m，4H)，2.06-1.60(m，8H)。质谱(ESI，m/z)： C29H30N6O2，计算值495.2.2(M+H)，实测值495.2。
实施例30
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-3-基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用吡啶-3-基-乙酸从4-氰基-1H-咪唑-2- 甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例14步骤(b) 中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.80(m，2H)， 8.54(d，1H)，8.10(d，1H)，8.06(t，1H)，7.98(s，1H)，7.18(dd，1H)，7.08(d，1H)， 5.78(m，1H)，4.68(m，1H)，4.20(m，1H)，4.18(s，2H)，3.36(m，1H)，2.84(m， 2H)，2.28(m，4H)，2.06-1.70(m，7H)，1.62(m，1H)。质谱(ESI，m/z)： C29H30N6O2，计算值495.2(M+H)，实测值495.2。
实施例31
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-4-基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用吡啶-4-基-乙酸从4-氰基-1H-咪唑-2- 甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例14步骤(b) 中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.78(d，2H)， 8.12(d，1H)，8.00(m，3H)，7.18(dd，1H)，7.08(d，1H)，5.80(m，1H)，4.66(m， 1H)，4.22(s，2H)，4.18(m，1H)，3.34(m，1H)，2.84(m，2H)，2.24(m，4H)， 2.00-1.70(m，7H)，1.64(m，1H)。质谱(ESI，m/z)：C29H30N6O2，计算值 495.2(M+H)，实测值495.2。
实施例32
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-乙 酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-乙酸从4-氰基 -1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施 例14步骤(b)中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.82(s，1H)，8.10(d，1H)，8.00(s，1H)，7.42(s，1H)，7.16(dd，1H)，7.06(d， 1H)，5.80(m，1H)，4.66(m，1H)，4.12(m，1H)，4.04(m，2H)，3.92(s，3H)， 3.28(m，1H)，2.82(m，2H)，2.26(m，4H)，2.00-1.70(m，7H)，1.64(m，1H)。质 谱(ESI，m/z)：C28H31N7O2，计算值498.2(M+H)，实测值498.2。
实施例33
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-1H-咪唑-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-乙酸从4-氰基 -1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施 例14步骤(b)中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.88(s，1H)，8.12(d，1H)，8.02(s，1H)，7.44(s，1H)，7.20(dd，1H)，7.10(d， 1H)，5.82(m，1H)，4.70(m，1H)，4.18(m，1H)，4.06(m，2H)，3.36(m，1H)， 2.84(m，2H)，2.30(m，4H)，2.00-1.70(m，7H)，1.64(m，1H)。质谱(ESI，m/z)： C27H29N7O2，计算值484.2(M+H)，实测值484.2。
实施例34
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺双三氟乙酸盐
a)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸{2-环 己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向烧瓶加入4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2- 甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(830mg，1.34 mmol)(如实施例39步骤(a)中制备)、K2CO3(600mg，4.34mmol)、碘化钠 (40mg，0.27mmol)、4-(2-氯-乙基)-吗啉盐酸盐(260mg，1.40mmol)、和 5.0mL N，N-二甲基乙酰胺并且在80℃搅拌8小时。反应用EtOAc(50mL) 稀释并用NaHCO3(2x 50mL)、盐水(50mL)洗涤并且浓缩。标题化合物 通过快速色谱法纯化(硅胶，5％MeOH/DCM)，得到650mg(78％)的白 色固体。质谱(ESI，m/z)：C34H50N6O3 Si，计算值619.4(M+H)，实测值 619.3。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸{2-环 己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(650mg，1.05 mmol)(如前述步骤制备)在10mL DCM中的溶液加入0.3mL EtOH和3.0 mL TFA，并使反应在25℃进行2小时。反应用10mL EtOH稀释并且浓 缩。标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％ TFA/H2O在9分钟内洗脱，得到600mg(80％)的白色固体。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)：8.18(d，1H)，8.04(s，1H)，7.24(dd，1H)，7.14(d，1H)， 5.84(m，1H)，3.84(m，4H)，3.76(m，2H)，3.50(m，2H)，3.30-3.10(m，4H)， 2.92(m，5H)，2.30(m，4H)，2.20-2.00(m，4H)，1.90-1.74(m，4H)。质谱(ESI， m/z)：C28H36N6O2，计算值489.2，实测值489.2。
实施例35
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-4-哌 啶-4-基-苯基]-酰胺
a)三氟甲烷磺酸3，6-二氢-2H-噻喃-4-基酯
在-78℃在Ar下将四氢-噻喃-4-酮(1.00g，8.61mmol)在10ml THF中 的溶液加入到LDA(2.0M，4.52ml，9.04mmol)的20ml THF溶液中。使 混合物回温到RT并且搅拌0.5小时，然后再次冷却到-78℃。加入N- 苯基三氟甲烷磺酰亚胺(3.42g，9.47mmol)的在10ml THF中的溶液。得 到的混合物回温到RT并且在Ar下搅拌0.5小时。用200ml EtOAc处理， 混合物用H2O(3x50mL)、盐水(50mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除 去溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(己烷-3％EtOAc/己烷)， 得到810mg(38％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ6.01(m，1H)，3.30(m，2H)，2.86(dd，2H，J＝5.7，5.7Hz)， 2.58-2.64(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C6H7F3O3S2，计算值249.0(M+H)，实 测值249.3。
b)4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-噻喃
向4-硝基苯基硼酸(418mg，2.50mmol)、三氟-甲烷磺酸3，6-二氢 -2H-噻喃-4-基酯(如前述步骤制备，931mg，3.75mmol)、Pd(PPh3)4(433 mg，0.375mmol)和氯化锂(LiCl)(212mg，5.0mmol)在20mL 1，4-二氧杂 环己烷中的混合物加入2.0M Na2CO3水溶液(3.13mL，6.25mmol)。将 得到的混合物在80℃搅拌2小时然后冷却到RT。用200mL EtOAc处理， 混合物用H2O(30mL)、盐水(30mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去 溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(1-3％EtOAc/己烷)，得到 470mg(85％)的标题化合物，为浅棕色油状物。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：8.19(d，2H，J＝9.1Hz)，7.48(d，2H，J＝9.1Hz)，6.36(m，1H)， 3.39(m，2H)，2.91(t，2H，J＝5.7Hz)，2.72(m，2H)。质谱(ESI，m/z)： C11H11NO2S，计算值222.1(M+H)，实测值222.3。
c)4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-噻喃1，1-二氧化物
在-78℃在Ar下将3-氯过氧苯甲酸(1.04g，4.62mmol，77％)在15 mL二氯甲烷(DCM)中的溶液缓慢加入到4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H- 噻喃(如前述步骤制备，465mg，2.10mmol)在15mL DCM中的溶液。将 混合物在-78℃搅拌0.5小时，然后回温到RT。用100mL EtOAc处理， 混合物用10％Na2SO3(15mL)、饱和NaHCO3水溶液(20mL)、H2O(20 mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物 在硅胶上进行快速色谱纯化(2-5％EtOAc/DCM)，得到518mg(97％)的 标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：8.23(d，2H，J＝9.0 Hz)，7.52(d，2H，J＝9.0Hz)，6.04(m，1H)，3.86(m，2H)，3.26-3.31(m，2H)， 3.18-3.23(m，2H)。
d)4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺
在RT将4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-噻喃1，1-二氧化物(如前述步 骤制备，502mg，1.98mmol)和10％Pd/C(250mg，50wt％)在15mL MeOH中的混合物在H2(气球压力)下搅拌2小时。通过在硅藻土上过滤 除去Pd催化剂，并将滤液浓缩，得到314mg(70％)的标题化合物，为 略带黄色的固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：7.03(d，2H，J＝8.3Hz)， 6.67(d，2H，J＝8.3Hz)，3.51-3.79(br s，2H)，3.11-3.17(m，4H)，2.70(dddd， 1H，J＝12.3，12.3，2.9，2.9Hz)，2.31-2.43(m，2H)，2.15-2.23(m，2H)。
e)2-溴-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺
在0℃在Ar下向4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前述步 骤制备，174mg，0.77mmol)在20mL 3∶1DCM/MeOH中的悬浮液加入含 N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)(137mg，0.77mmol)的5mL DCM。使混合物回 温到RT并且在Ar下搅拌1小时。用100mL EtOAc处理，混合物用 H2O(20mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随 后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(2-3％EtOAc/DCM)，得到155 mg(66％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：7.28(d， 1H，J＝2.0Hz)，6.97(dd，1H，J＝8.3，2.0Hz)，6.73(d，1H，J＝8.3Hz)， 4.07(br s，2H)，3.09-3.14(m，4H)，2.66(dddd，1H，J＝12.1，12.1，3.3，3.3Hz)， 2.26-2.39(m，2H)，2.12-2.21(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C11H14BrNO2S，计 算值304.0(M+H)，实测值304.1。
f)2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺
向2-溴-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前述步骤制备， 150mg，0.493mmol)、环己烯-1-基硼酸(70mg，0.542mmol)和 Pd(PPh3)4(57mg，0.0493mmol)在5mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物加 入2.0M Na2CO3水溶液(2.0mL，4.0mmol)。将得到的混合物在Ar下在 80℃搅拌8小时，然后冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物用 H2O(15mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随 后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(2-5％EtOAc/DCM)，得到130 mg(86％)的标题化合物，为棕色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： 6.89(dd，1H，J＝8.4，2.3Hz)，6.84(d，1H，J＝2.3Hz)，6.65(d，1H，J＝8.4 Hz)，5.74(m，1H)，3.74(br s，2H)，3.08-3.17(m，4H)，2.66(dddd，1H，J＝12.1， 12.1，3.1，3.1Hz)，2.29-2.42(m，2H)，2.13-2.25(m，6H)，1.73-1.81(m，2H)， 1.65-1.73(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C17H23NO2S，计算值306.1(M+H)，实 测值306.1。
g)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺
向2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前述步 骤制备，122mg，0.50mmol)、4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾(如实施例3步骤(d)中制备，134mg，0.44mmol) 和溴代三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐(PyBroP)(205mg，0.44mmol)在5mL DMF中的混合物加入DIEA(209μL，1.20mmol)。得到的混合物在Ar下 在RT搅拌18小时，冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物用H2O(10 mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物 在硅胶上进行快速色谱纯化(1-3％EtOAc/DCM)，得到161mg(73％)的 标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.69(s，1H)， 8.29(d，1H，J＝8.4Hz)，7.78(s，1H)，7.14(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，7.04(d， 1H，J＝2.2Hz)，5.95(s，2H)，5.83(m，1H)，3.66(t，2H，J＝8.2Hz)， 3.11-3.20(m，4H)，2.77(dddd，1H，J＝12.1，12.1，3.2，3.2Hz)，2.35-2.47(m， 2H)，2.17-2.33(m，6H)，1.74-1.89(m，4H)，0.97(t，2H，J＝8.2Hz)，0.00(s， 9H)。质谱(ESI，m/z)：C28H38N4O4SSi，计算值555.2(M+H)，实测值555.3。
h)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻 喃-4-基)-苯基]-酰胺
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺(如前述步骤制 备，145mg，0.261mmol)在6mL DCM中的溶液加入0.20mL EtOH，随 后加入2mL TFA。得到的溶液在RT搅拌3小时。减压除去溶剂，随后 残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(20-25％EtOAc/DCM)，得到83 mg(90％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： 12.34(s，1H)，9.60(s，1H)，8.35(d，1H，J＝8.4Hz)，7.75(s，1H)，7.30(dd，1H， J＝8.4，2.2Hz)，7.08(d，1H，J＝2.2Hz)，5.86(m，1H)，3.11-3.23(m，4H)， 2.80(dddd，1H，J＝12.2，12.2，2.8，2.8Hz)，2.40-2.57(m，2H)，2.17-2.35(m， 6H)，1.74-1.91(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C22H24N4O3S，计算值 425.2(M+H)，实测值425.6。
实施例36
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-4-哌 啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
a)2-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-5，5-二甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环己烷
将三氟甲烷磺酸3，6-二氢-2H-噻喃-4-基酯(如实施例35步骤(a)中制 备，500mg，2.01mmol)、双(新戊基二醇根合)二硼(bis(neopentyl glycolato)diboron，478mg，2.11mmol)、Pd(dppf)Cl2(147mg，0.20mmol) 和KOAc(592mg，6.03mmol)在8mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物在Ar 下在80℃搅拌8小时，然后冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物 用H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂， 随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(0-5％EtOAc/DCM)，得到351 mg(82％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ 6.62(m，1H)，3.63(s，4H)，3.21(m，2H)，2.68(t，2H，J＝5.8Hz)，2.37(m，2H)， 0.96(s，6H)。质谱(ESI，m/z)：C10H17BO2S，计算值213.1(M+H)，实测值 213.1。
b)4-[4-氨基-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例13步骤(c)中 制备，200mg，0.563mmol)、2-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-5，5-二甲基-[1，3，2] 二氧杂硼杂环己烷(如前述步骤制备，131mg，0.619mmol)和 Pd(PPh3)4(65mg，0.056mmol)在5mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物加入 2.0M Na2CO3水溶液(2.25mL，4.5mmol)。将得到的混合物在Ar下在 80℃搅拌7小时，然后冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物用 H2O(15mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随 后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(15-30％EtOAc/己烷)，得到141 mg(67％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： 6.91(dd，1H，J＝8.2，2.2Hz)，6.81(d，1H，J＝2.2Hz)，6.65(d，1H，J＝8.2 Hz)，5.91(m，1H)，4.22(br s，2H)，3.66(br s，2H)，3.29-3.31(m，2H)，2.87(dd， 2H，J＝5.7，5.7Hz)，2.77(m，2H)，2.47-2.56(m，3H)，1.78(d，2H，J＝12.6 Hz)，1.50-1.63(m，2H)，1.48(s，9H)。质谱(ESI，m/z)：C21H30N2O2S，计算值 375.2(M+H)，实测值375.2。
c)4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-[4-氨基-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (如前述步骤制备，45mg，0.12mmol)、4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙 氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾(如实施例3步骤(d)中制备，44mg，0.144 mmol)和PyBroP(67mg，0.144mmol)在2mL DMF中的混合物加入 DIEA(4μL，0.24mmol)。将得到的混合物在Ar下在RT搅拌4h。用30 mL EtOAc处理，混合物用H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥 (Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(1-2％ EtOAc/DCM)，得到64mg(85％)的标题化合物，为浅黄色油状物。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.51(s，1H)，8.21(d，1H，J＝8.5Hz)，7.78(s， 1H)，7.16(dd，1H，J＝8.5，2.1Hz)，7.02(d，1H，J＝2.1Hz)，6.00(m，1H)， 5.92(s，2H)，4.25(br s，2H)，3.66(t，2H，J＝8.2)，3.42(m，2H)，2.93(dd，2H，J ＝5.7，5.7Hz)，2.79(m，2H)，2.63(dddd，1H，J＝12.3，12.3，3.3，3.3Hz)， 2.49-2.56(m，2H)，1.82(d，2H，J＝12.8Hz)，1.56-1.66(m，2H)，1.49(s，9H)， 0.97(t，2H，J＝8.2Hz)，0.00(s，9H)。
d)4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸 叔丁酯
在-78℃在Ar下将3-氯过氧苯甲酸(91mg，0.404mmol，77％)在1 mL DCM中的溶液缓慢加入到含4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙 氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶 -1-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备，120mg，0.192mmol)的3mL DCM中。 混合物在78℃搅拌15分钟，然后回温到RT。用40mL EtOAc处理，混 合物用15％Na2SO3(5mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)、H2O(10 mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物 在硅胶上进行快速色谱纯化(2-10％EtOAc/DCM)，得到85mg(67％)的 标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.23(s，1H)， 8.03(d，1H，J＝8.3Hz)，7.80(s，1H)，7.21(dd，1H，J＝8.3，2.0Hz)，7.06(d， 1H，J＝2.0Hz)，5.93(s，2H)，5.75(t，1H，J＝4.1Hz)，4.25(br s，2H)，3.86(br s，2H)，3.66(t，2H，J＝8.2Hz)，3.29(t，2H，J＝6.3Hz)，3.03(t，2H，J＝5.4 Hz)，2.74-2.86(m，2H)，2.64(dddd，1H，J＝12.3，12.3，3.3，3.3Hz)，1.82(d， 2H，J＝12.3Hz)，1.55-1.65(m，2H)，1.49(s，9H)，0.98(t，2H，J＝8.2Hz)， 0.01(s，9H)。质谱(ESI，m/z)：C32H45N5O6SSi，计算值656.3(M+H)，实测 值656.7。
e)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4- 基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺，三氟乙酸盐
向4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸 叔丁酯(如前述步骤制备，81mg，0.123mmol)在6mL DCM中的溶液加 入0.20mL EtOH，随后加入2mL TFA。得到的溶液在RT搅拌3小时。 减压除去溶剂，得到64mg(96％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：8.02(s，1H)，7.78(d，1H，J＝8.3Hz)，7.29(dd， 1H，J＝8.3，2.0Hz)，7.21(d，1H，J＝2.0Hz)，5.71(t，1H，J＝4.2Hz)，3.83(br s，2H)，3.51(d，2H，J＝12.4Hz)，3.33(t，2H，J＝6.0Hz)，3.15(td，2H，J＝ 13.1，2.6Hz)，3.01(m，2H)，2.94(dddd，1H，J＝12.2，12.2，3.5，3.5Hz)， 2.08(d，2H，J＝12.9Hz)，1.91(m，2H，J＝13.3，13.3，13.3，3.8Hz)。质谱 (ESI，m/z)：C21H23N5O3S，计算值426.2(M+H)，实测值426.2。
实施例37
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，1-二氧代-1，2，3，6- 四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺
在RT向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐(如实施例36步骤(e)中制 备，62mg，0.115mmol)在4mL的1∶1DCM/DMF中的悬浮液加入 DIEA(60μL，0.345mmol)。将混合物搅拌5分钟，然后将乙酸酐(11μL， 0.121mmol)缓慢加入到混合物中，并将得到的混合物在RT搅拌0.5小 时。用40mL EtOAc处理，混合物用H2O(20mL)洗涤。水层用 EtOAc(10mL)提取。合并的有机层真空浓缩。残余物通过硅胶上的快 速色谱法纯化(1-4％MeOH/DCM)，得到50.9mg(95％)的标题化合物， 为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：13.0(s，1H)，9.10(s，1H)，8.13(d， 1H，J＝8.4Hz)，7.77(d，1H，J＝2.3Hz)，7.26(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)， 7.08(d，1H，J＝2.0Hz)，5.77(t，1H，J＝4.3Hz)，4.84(dt，1H，J＝13.3，2.1 Hz)，4.00(dt，1H，J＝13.3，2.1Hz)，3.89(br s，2H)，3.31(t，2H，J＝6.2Hz)， 3.23(td，1H，J＝13.2，2.5Hz)，3.02(m，2H)，2.77(dddd，1H，J＝11.9，11.9， 3.4，3.4Hz)，2.68(ddd，1H，J＝12.6，12.6，2.9Hz)，2.18(s，3H)，1.70-1.97(m， 4H)。质谱(ESI，m/z)：C23H25N5O4S，计算值468.2(M+H)，实测值468.1。
实施例38
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，655mg，1.30mmol)在DCM(15mL) 中的混合物冷却到0℃并且加入DIEA(0.92mL，5.2mmol)。然后在10分 钟内分批加入二甲基氨基乙酰氯盐酸盐(211mg，1.3mol)。将反应混合物 在0℃搅拌30分钟并且使其回温到RT并且搅拌2小时。真空除去溶剂 并将得到的残余物在盐水和DCM之间分配。将有机层分离，干燥 (Na2SO4)并且浓缩。将得到的残余物在二氧化硅上纯化(5％MeOH： DCM)，得到432mg(70％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3； 400MHz)：δ9.49(s，1H)，8.24(d，1H，J＝2.3Hz)，7.70(s，1H)，7.12(dd，1H， J＝8.4，2.1Hz)，7.01(s，1H)，5.82(m，1H)，4.75(d，1H，J＝13.4Hz)，4.13(d， 1H，J＝13.4Hz)，3.57(d，1H，J＝14.2Hz)，3.18(d，1H，J＝14.2Hz)，3.12(td， 1H，J＝13.3，2.4Hz)，2.73(dddd，1H，J＝11.9，11.9，3.8，3.8Hz)，2.65(ddd， 1H，J＝13.3，13.3，2.4Hz)，2.40(s，6H)，2.18-2.32(m，4H)，1.60-1.98(m， 8H)。质谱(ESI，m/z)：C26H32N6O2，计算值461.3(M+H)，实测值461.2。
实施例38b
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲基氨基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺
实施例38a的HPLC纯化还得到少量的4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2- 环己-1-烯基-4-[1-(2-甲基氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.02(d，1H，J＝8.4Hz)，7.92(s，1H)， 7.07(dd，1H，J＝8.4Hz，J＝2.4Hz)，6.98(d，1H，J＝2.4Hz)，5.73-5.68(m， 1H)，4.60-4.51(m，1H)，3.76-3.68(m，1H)，3.20-3.11(m，1H)，2.81-2.70(m， 2H)，2.67(s，3H)，2.22-2.13(m，4H)，1.88-1.66(m，6H)，1.66-1.46(m，2H)。质 谱(ESI，m/z)：C25H30N6O2，计算值447.2(M+H)，实测值447.3。
实施例39
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1-甲酸 (2-羟基-乙基)-酰胺
a)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己 -1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺，三氟乙酸盐
在0℃向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑 -2-羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例14步 骤(a)中制备，81mg，0.123mmol)在18mL DCM中的溶液加入1mL EtOH，随后在加入5mL TFA。将得到的溶液在RT搅拌0.5小时，用 20mL EtOH处理，随后用20mL n-PrOH和5mL H2O处理。然后将混 合物减压浓缩，得到浅黄色固体。产物在硅胶上快速色谱纯化(2-4％ MeOH/DCM)，得到0.87g(85％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.70(s，1H)，9.66(br s，1H)，9.15(br s，1H)， 8.29(d，1H，J＝8.3Hz)，7.78(s，1H)，7.13(dd，1H，J＝8.3，2.2Hz)，7.03(d， 1H，J＝2.2Hz)，5.95(s，2H)，5.83(m，1H)，3.66(t，2H，J＝8.4Hz)，3.55(d， 2H，J＝12.3Hz)，2.95-3.11(m，2H)，2.76(m，1H)，2.18-2.33(m，4H)， 1.99-2.15(m，4H)，1.82(m，4H)，0.97(t，2H，J＝8.3Hz)，0.00(s，9H)。质谱 (ESI，m/z)：C28H39N5O2Si，计算值506.3(M+H)，实测值506.1。
b)4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
在-78℃在Ar下将4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪 唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如前述步 骤制备，116mg，0.192mmol)和DIEA(13μL，0.770mmol)在4mL DCM 中的溶液缓慢加入到三光气(23mg，0.0768mmol)在4mL DCM中的溶液 中。将混合物在-78℃搅拌15分钟，回温到RT并且搅拌15分钟，再次 冷却到-78℃。加入2-氨基-乙醇(35μL，5.77mmol)在4mL THF中的悬 浮液并使得到的混合物回温到RT并且在Ar下搅拌20小时。用100mL EtOAc处理，混合物用H2O(20mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥 (Na2SO4)。真空除去溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(10％ EtOAc/DCM，然后用5％MeOH/DCM)，得到95mg(83％)的标题化合 物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.68(s，1H)，8.25(d，1H， J＝8.4Hz)，7.77(s，1H)，7.12(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，7.01(d，1H，J＝2.2 Hz)，5.94(s，2H)，5.83(m，1H)，4.96(t，1H，J＝5.6Hz)，4.11(d，2H，J＝13.3 Hz)，3.75(ddd，2H，J＝4.4Hz)，3.66(t，2H，J＝8.3Hz)，3.44(ddd，2H，J＝ 5.0Hz)，3.36(t，1H，J＝4.6Hz)，2.91(ddd，2H，J＝13.0，2.2Hz)，2.66(dddd， 1H，J＝12.2，12.2，3.3，3.3Hz)，2.18-2.33(m，4H)，1.75-1.91(m，6H)， 1.67(dddd，2H，J＝12.9，12.9，12.9，4.0Hz)，0.97(t，2H，J＝8.3Hz)，0.00(s， 9H)。质谱(ESI，m/z)：C31H44N6O4Si，计算值593.3(M+H)，实测值593.1。
c)4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶 -1-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺(如前述 步骤制备，95mg，0.16mmol)在3mL DCM中的溶液加入0.10mL EtOH， 随后加入1.0mL TFA。将得到的溶液在RT搅拌6小时。减压除去溶剂， 随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(2-8％MeOH/DCM)，得到68 mg(92％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)： 8.09(d，1H，J＝8.4Hz)，8.00(s，1H)，7.15(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，5.79(m， 1H)，4.15(dd，2H，J＝13.3，1.1Hz)，3.61(t，2H，J＝5.9Hz)，3.27-3.32(m， 2H)，2.90(ddd，2H，J＝13.0，13.0，2.5Hz)，2.73(dddd，1H，J＝12.1，12.1， 2.6，2.6Hz)，2.26(m，4H)，1.73-1.88(m，6H)，1.62(dddd，2H，J＝12.6，12.6， 12.6，4.0Hz)。质谱(ESI，m/z)：C25HxN6O3，计算值463.2(M+H)，实测值 463.2。
实施例40
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺
a)甲烷磺酸2-甲烷磺酰基-乙酯
在Ar下在0℃向甲烷磺酰氯(484mg，4.23mmol)在15mL DCM中 的溶液加入含2-甲烷磺酰基-乙醇(500mg，4.03mmol)的10mL DCM，随 后加入DIEA(1.05L，6.05mmol)。使混合物回温到RT并且在Ar下搅拌 20小时。混合物用100mL EtOAc处理并用H2O(3x20mL)、盐水(20mL) 洗涤并且干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂，得到534mg(66％)的标题化合 物，为棕色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：4.67(d，2H，J＝5.5Hz)， 3.46(d，2H，J＝5.5Hz)，3.11(s，3H)，3.04(s，3H)。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
在RT向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)- 酰胺三氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，85mg，0.174mmol)和 DIEA(91μL，0.521mmol)在3mL DCM中的溶液加入2-甲烷磺酸2-甲烷 磺酰基-乙酯(如前述步骤制备，42mg，0.208mmol)。将得到的混合物在 RT搅拌3小时。用50mL EtOAc处理，混合物用H2O(20mL)、盐水 (10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂，随后残余物在硅胶上进 行快速色谱纯化(1-3％MeOH/DCM)，得到54mg(65％)的标题化合物， 为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.54(s，1H)，8.25(d，1H，J＝8.4 Hz)，7.72(s，1H)，7.15(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)，7.04(d，1H，J＝2.0Hz)， 5.85(m，1H)，3.21(t，1H，J＝6.5Hz)，3.09(s，3H)，3.02-3.11(m，2H)，2.92(t， 2H，J＝6.5Hz)，2.52(dddd，1H，J＝12.1，12.1，3.3，3.3Hz)，2.18-2.34(m， 4H)，2.18(t，2H，J＝10.8Hz)，1.64-1.94(m，8H)。质谱(ESI，m/z)： C25H31N5O3S，计算值482.2(M+H)，实测值482.2。
根据所示的实施例制备以下化合物：
质谱 方法参
实施例 结构 [M+H]+实测值 分子式 考的实
计算值 施例
41497.2 497.2 C28H28N6O3 29
42497.2 497.3 C28H28N6O3 29
实施例43
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(吡啶-3-羰基)-哌啶-4-基] -苯基}-酰胺
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，75.0mg，0.15mmol)的CH2Cl2(10 mL)溶液用Et3N(64.1μL，0.46mmol)处理并且冷却到0℃。混合物用烟酰 氯盐酸盐(0.030g，0.17mmol)处理并且在0℃搅拌15分钟，然后在室温 搅拌17小时。将反应混合物直接吸附在硅胶上。硅胶色谱纯化(含10％ MeOH的EtOAc)得到标题化合物(61.0mg，83％)，为白色固体。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ9.51(br s，1H)，8.77(s，1H)，8.70-8.66(m，1H)， 8.32(d，1H，J＝8.4Hz)，7.86-7.81(m，1H)，7.70(s，1H)，7.42-7.37(m，1H)， 7.17(d，1H，J＝8.4Hz)，7.06-7.04(m，1H)，5.87-5.82(m，1H)，4.98-4.87(m， 1H)，3.94-3.84(m，1H)，3.29-3.18(m，1H)，2.98-2.86(m，1H)，2.86-2.76(m， 1H)，2.34-2.20(m，4H)，1.94-1.72(m，9H)。LC-MS(ESI，m/z)：C28H28N6O2， 计算值481.2(M+H)，实测值481.3.
实施例44
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基氨基)-乙酰 基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
a)[2-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌 啶-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯
将N-BOC-甘氨酸(0.29g，1.63mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液用 DIEA(0.85mL，4.90mmol)、HOBt(0.26g，1.96mmol)、和EDCI(0.38g， 1.96mmol)处理。混合物在室温搅拌10分钟并且加入到4-氰基-1H-咪唑 -2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例14 步骤(b)中制备，0.80g，1.63mmol)在CH2Cl2(20mL)中的悬浮液。溶液 在室温搅拌17小时。真空蒸发溶剂。硅胶色谱纯化(含50％EtOAc的 己烷)得到标题化合物(0.41g，47％)，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ9.53(s，1H)，8.26(d，1H，J＝8.4Hz)，7.80-7.78(m，1H)，7.71(s，1H)， 7.45-7.43(m，1H)，7.06(d，1H，J＝8.4Hz)，7.00(s，1H)，5.83(br s，1H)， 5.76(br s，1H)，4.78-4.68(m，1H)，3.96-3.85(m，2H)，3.17-3.03(m，1H)， 2.78-2.63(m，2H)，2.29(br s，2H)，2.22(br s，2H)，1.95-1.87(m，2H)， 1.86-1.72(m，4H)，1.70-1.55(m，2H)，1.44(s，9H)。LC-MS(ESI，m/z)： C29H36N6O4计算值533.3(M+H)，实测值532.9。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
将[2-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌 啶-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(如前述步骤制备，0.41g，0.77 mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液用EtOH(0.2mL)和TFA(6mL)处理。混合物 在室温搅拌45分钟并且真空蒸发溶剂。粗的物质直接用于下一步。 LC-MS(ESI，m/z)：C24H28N6O2计算值433.2(M+H)，实测值433.2。
c)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基氨基)- 乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐(如前述步骤制备，0.42g，0.77mmol)在 CH2Cl2(20mL)中的悬浮液用Na(OAc)3BH(0.33g，1.54mmol)和固体乙二 醛(44.6mg，0.77mmol)处理。将混合物在室温搅拌1小时，并且真空蒸 发溶剂。将残余物承载在MeOH中并且滤掉固体，将滤液真空浓缩。反 相HPLC(C-18柱)(含20％到60％乙腈的水，含0.1％TFA，在30分 钟内)得到标题化合物(83mg，19％，经两步)，为白色固体。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.16-8.09(m，1H)，8.05-8.01(m，1H)， 7.22-7.15(m，1H)，7.11-7.06(m，1H)，5.84-5.79(m，1H)，4.72-4.62(m，1H)， 4.24-3.91(m，2H)，3.89-3.80(m，2H)，3.28-3.18(m，2H)，2.92-2.79(m，2H)， 2.28(br s，4H)，1.98-1.89(m，2H)，1.89-1.76(m，4H)，1.76-1.57(m，2H)。 LC-MS(ESI，m/z)：C26H32N6O3计算值477.2(M+H)，实测值477.2。
实施例45
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基)-甲基-氨基- 乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基氨 基)-乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例44步骤(c)中制 备，50.0mg，0.085mmol)的MeOH(3mL)溶液用Na(OAc)3BH(39.5mg， 0.19mmol)和37％甲醛水溶液(8.2μL，0.10mmol)处理。混合物在室温搅 拌5.5小时，并且真空除去溶剂。反相HPLC(C-18柱)(含10％到50％乙 腈的水，含0.1％TFA，在30分钟内)，得到标题化合物(19.5mg，47％)， 为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.12(d，1H，J＝8.4Hz)，8.02(s， 1H)，7.19(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)，7.09(d，1H，J＝2.0Hz)，5.84-5.79(m， 1H)，4.72-4.64(m，1H)，4.39-4.23(m，2H)，3.84-3.79(m，1H)，3.31-3.21(m， 1H)，3.03-2.94(m，6H)，2.92-2.80(m，2H)，2.32-2.24(m，4H)，2.00-1.90(m， 2H)，1.90-1.76(m，5H)，1.78-1.59(m，2H)。LC-MS(ESI，m/z)：C27H34N6O3 计算值491.3(M+H)，实测值491.2.
实施例46
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢-吡啶-3- 基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
a)5-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
在Ar下将LDA(23.4mL，35.1mmol，1.5M，在环己烷中)的THF(50 mL)溶液冷却到-78℃。将该溶液通过滴加3-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (5.00g，25.1mmol)的THF(15mL)溶液处理并且搅拌15分钟。混合物用 1，1，1-三氟-N-苯基-N-[(三氟甲基)磺酰基]甲烷磺酰亚胺(12.5g，35.1 mmol)的THF(40mL)溶液处理。使混合物回温到室温并且搅拌2.5小时。 反应用NaHCO3饱和水溶液猝灭，用Et2O稀释，并用水洗涤。有机层 用MgSO4干燥并且真空浓缩。硅胶色谱纯化(含5％EtOAc的己烷)，得 到标题化合物(2.45g，30％)，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： δ5.97-5.89(m，1H)，4.09-4.01(m，2H)，3.54-3.45(m，2H)，2.36-2.26(m，2H)， 1.48(s，9H)。LC-MS(ESI，m/z)：C11H16F3NO5S计算值332.1(M+H)，实测 值332.1。
b)5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯
将PdCl2dppf(0.16g，0.22mmol)，KOAc(2.18g，22.2mmol)、 4，4，5，5，4’，4’，5’，5’-八甲基-[2，2’]双[[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷基](2.07g， 8.13mmol)、和dppf(0.12g，0.22mmol)置于圆底烧瓶中，并且将烧瓶用 Ar吹扫。向烧瓶加入脱气的5-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1- 甲酸叔丁酯(如前述步骤制备，2.45g，7.40mmol)的二氧杂环己烷(70mL) 溶液并且加热到80℃，16小时。混合物过滤通过玻璃烧结漏斗，以除 去固体KOAc，将滤液真空浓缩。硅胶色谱纯化(含5％EtOAc的己烷)， 得到标题化合物(1.62g，71％)，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ6.69-6.60(m，1H)，3.98(br s，2H)，3.49-3.42(m，2H)，2.24-2.16(m， 2H)，1.47(s，9H)，1.27(s，12H)。LC-MS(ESI，m/z)：C18H28BNO4计算值 310.2(M+H)，实测值311.0.
c)4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
通过实施例35步骤(b)的Suzuki偶联方法，使用4-硝基苯基硼酸(167 mg，1.00mmol)和4-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁 酯(如实施例13步骤(a)中制备，295mg，1.00mmol)制备标题化合物。硅 胶色谱纯化(含10％EtOAc的己烷)，得到标题化合物(273mg，90％)， 为油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.19(d，2H，J＝8.8Hz)，7.50(d， 2H，J＝8.8Hz)，6.23(m，1H)，4.12(m，2H)，3.66(m，2H)，2.54(m，2H)， 1.49(s，9H)。
d)1-[4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮
将4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步骤制 备，304mg，1.00mmol)在DCM/TFA的1∶1混合物(10mL)中的溶液在室 温搅拌3小时并且浓缩。残余物真空干燥过夜，承载在CH2Cl2(10mL) 中并且冷却到0℃。向这个溶液中滴加Et3N(280μL，2mmol)，随后滴加 乙酸酐(102μL，1mmol)。将得到的混合物在0℃搅拌1小时，并且允许 其回温到室温。反应混合物用盐水洗涤，并且将有机层分离，干燥并且 浓缩。使用与实施例4步骤(d)相似的方法将得到的产物还原，得到标题 化合物(143mg，65％)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ6.97(d，2H，J＝8.4 Hz)，6.64(d，2H，J＝8.4Hz)，4.75(m，1H)，3.93(m，1H)，3.13(m，3H)， 2.66(m，2H)，2.12(s，3H)，1.84(m，2H)，1.57(m，2H)。
e)1-[4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮
将1-[4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮(如前述步骤制备，0.36g，1.66 mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液冷却到-78℃并且用作为在CH2Cl2(4mL)中 悬浮液的NBS(0.28g，1.58mmol)处理。使反应回温到室温并且搅拌30 分钟。反应用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用 MgSO4干燥并且真空浓缩。粗的物质直接用于随后的反应。LC-MS(ESI， m/z)：C13H17BrN2O计算值297.1(M+H)，实测值297.1。
f)5-[5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-氨基-苯基]-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸 叔丁酯
将5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例46步骤(b)中制备，0.62g，2.02mmol)和 1-[4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮(如前述步骤制备，0.20g，0.67 mmol)在甲苯∶EtOH(2∶1，9mL)中的溶液用2.0MNa2CO3水溶液(2.7mL， 5.38mmol)处理并且在Ar下超声脱气。混合物加热到80℃，用 Pd(PPh3)4(54mg，0.05mmol)处理并且在80℃搅拌4.5小时。将反应冷却 到室温，用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4 干燥并且真空浓缩，得到标题化合物(0.25g，93％)，为灰白色固体。 LC-MS(ESI，m/z)：C23H33N3O3计算值422.2(M+Na)，实测值422.0.
g)5-(5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧 基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
将5-[5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-氨基-苯基]-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸 叔丁酯(如前述步骤制备，0.25g，0.63mmol)的CH2Cl2溶液用 PyBroP(0.44g，0.94mmol)和4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(d)中制备，0.21g，0.69mmol) 处理。将得到的浆状物冷却到0℃并且用DIEA(0.33mL，1.88mmol)处 理。除去冰浴并将混合物在室温搅拌18小时。反应用CH2Cl2稀释并用 饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。硅胶色 谱纯化(含25-45％EtOAc的己烷，然后用100％EtOAc)，得到标题化 合物(399mg，98％)，为白色固体。LC-MS(ESI，m/z)：C34H48N6O5Si计 算值649.4(M+H)，实测值649.9。
h)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢- 吡啶-3-基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
将5-(5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧 基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯 (如前述步骤制备，0.40g，0.61mmol)在CH2Cl2(20mL)和EtOH(0.4mL) 中的溶液用TFA(3mL)处理。溶液在室温搅拌0.5小时。真空蒸发溶剂， 并将残余物立即承载在EtOH(25mL)中并且在5℃储存11小时。将溶液 真空浓缩，并将残余物承载在CH2Cl2(20mL)和EtOH(0.4mL)中，然后 用TFA(6mL)处理。将反应在室温搅拌2小时，并且真空蒸发溶剂。反 相HPLC(C-18柱)(含10到80％乙腈的水，含0.1％TFA，在30分钟 内)，得到标题化合物(56.9mg，22％)，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ8.06(s，1H)，7.81(d，1H，J＝8.4Hz)，7.32(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(s， 1H)，6.10-6.03(m，1H)，4.74-4.64(m，2H)，4.11-4.02(m，1H)，3.95(s，2H)， 3.50-3.37(m，2H)，3.29-3.20(m，1H)，2.93-2.82(m，1H)，2.80-2.69(m，1H)， 2.62-2.53(m，2H)，2.16(s，3H)，1.98-1.84(m，2H)，1.78-1.54(m，2H)。 LC-MS(ESI，m/z)：C23H26N6O2计算值419.2(M+H)，实测值419.2.
实施例47
(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1-基)- 乙酸三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(33mg，0.067mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、溴代 乙酸叔丁酯(10μL，0.067mmol)、NEt3(20μL，0.135mmol)和0.25mL DCM并且在25℃搅拌10小时。反应混合物加载在5g SPE柱(二氧化硅) 上并且用25％EtOAc/DCM洗脱23mg(70％)的(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑 -2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1-基)-乙酸叔丁酯。将这个化合 物溶解于1mL DCM和20μL EtOH中并且加入1mL TFA，并将反应在 25℃搅拌3小时。标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％ CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分钟内洗脱，得到10mg(40％)的白色固 体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.16(d，1H)，8.02(s，1H)，7.22(dd，1H)， 7.10(d，1H)，5.72(m，1H)，4.04.(s，2H)，3.76(m，2H)，3.22(m，2H)，2.90(m， 1H)，2.29(m，4H)，2.10(m，4H)，1.82(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C24H27N5O3， 计算值434.2(M+H)，实测值434.2。
实施例48
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(3-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
a)[3-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌 啶-1-基)-1，1-二甲基-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，40.0mg，0.0818mmol)，3-叔丁氧 基羰基氨基-3-甲基-丁酸(J.Med.Chem.，34(2)，633-642，(1991)，21.4mg， 0.0981mmol)和PyBroP(55.0mg，0.0981mmol)在二氯乙烷(2mL)中的混 合物加入DIEA(43μL，0.25mmol)并将得到的混合物在Ar下在RT搅拌 1天。混合物用EtOAc(30mL)稀释并用H2O(2x10mL)、盐水(10mL) 洗涤，用Na2SO4干燥然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法(硅胶，10-40 ％EtOAc/己烷)纯化，得到33.0mg(70％)的标题化合物，为无色油状物。 质谱(ESI，m/z)：C32H42N6O4，计算值575.3(M+H)，实测值574.8。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(3-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌啶-4- 基]-2-环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
在0℃向[3-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯 基}-哌啶-1-基)-1，1-二甲基-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(33.0mg， 0.0574mmol)(如前述步骤制备)在3mL DCM和0.10mL EtOH中的溶液 加入1.0mL TFA，使混合物回温到RT并且搅拌3小时。反应用3mL n-PrOH稀释然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法(硅胶，3-8％ MeOH/DCM)纯化，得到33.5mg(99％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(400MHz，CDCl3)：13.3(s，1H)，9.52(s，1H)，8.57(br s，3H)， 8.26(d，1H，J＝8.6Hz)，7.69(s，1H)，7.02(dd，1H，J＝8.6，1.7Hz)，6.98(d， 1H，J＝1.7Hz)，5.78(m，1H)，4.67(br d，1H，J＝13.4Hz)，3.88(br d，1H，J＝ 13.4Hz)，3.10(m，1H)，2.55-2.85(m，4H)，2.23(m，4H)，1.72-2.01(m，8H)， 1.50(s，6H)。质谱(ESI，m/z)：C27H34N6O2，计算值475.3(M+H)，实测值 475.1。
实施例49
4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺双三氟乙酸盐
a)1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯
在0℃向NaH(60％分散体)(200mg，5.00mmol)在DMF(5mL)中的 悬浮液滴加1H-1，2，4-三唑甲酸甲酯(635mg，5.00mmol)的DMF(5mL) 溶液。将得到的悬浮液在相同的温度下搅拌30分钟并且用SEMCl(0.90 mL，5.0mmol)处理。将得到的溶液在RT搅拌30分钟并且倾倒在冰上。 产物用乙醚提取(3x20mL)。将乙醚层合并，干燥(Na2SO4)并且真空浓 缩。得到的残余物在二氧化硅上色谱纯化(10％EtOAc/己烷)，得到标题 化合物(530mg，41％)。质谱(ESI，m/z)：C10H19N3O3Si，计算值 258.1(M+H)，实测值258.2。
b)4-(3-环己-1-烯基-4-{[1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-[1，2，4-]三唑-3-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯 (如前述步骤制备，257mg，1.00mmol)的EtOH(2mL)溶液中加入2N KOH(0.5mL，1mmol)。得到的溶液在RT搅拌20分钟并且真空浓缩。 将得到的残余物悬浮于乙醚(10mL)中并且超声处理5分钟。然后真空除 去乙醚并将得到的残余物干燥4小时，得到1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧 基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸钾盐(273mg，97％)，其不经任何进一步 纯化用于下一步。
将1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸钾盐 (如上述制备，28mg，0.10mmol)、DIEA(34μL，0.20mmol)、4-(4-氨基-3- 环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例14步骤(b)中制备，35.6 mg，0.100mmol)和PyBroP(69.9mg，0.150mmol)在DCM(2mL)中的混合 物在RT搅拌12小时。反应混合物用DCM(5mL)稀释并用饱和NaHCO3 水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4)并且真空 浓缩。产物在二氧化硅上色谱纯化(20-40％EtOAc/己烷)，得到标题化合 物(31.9mg，55％)。质谱(ESI，m/z)：C31H47N5O4Si，计算值 481.2(M-BOC+2H)，实测值481.2。
c)4H-[1，2，4-]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺 双三氟乙酸盐
向4-(3-环己-1-烯基-4-{[1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步 骤制备，81.9mg，0.140mmol)的DCM(0.4mL)和EtOH(13μL)溶液中加 入TFA(0.13mL)。得到的溶液在RT搅拌3小时并且真空浓缩。得到的 残余物真空干燥1小时，悬浮于乙醚中(10mL)并且超声处理5分钟。通 过吸滤收集形成的固体，得到标题化合物(56mg，68％)。1H-NMR(CD3OD； 400MHz)：δ8.53(br s，1H)，8.20(d，1H，J＝8.4Hz)，7.21(dd，1H，J＝8.4， 2.1Hz)，7.11(d，1H，J＝2.1Hz)，5.83(br s，1H)，3.45(m，2H)，3.19(m，2H)， 2.98(m，1H)，2.28(m，4H)，2.14(m，2H)，和1.95-1.75(m，6H)。质谱(ESI， m/z)：C20H25N5O，计算值352.4(M+H)，实测值352.2。
实施例50
5-氯-4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺三氟乙酸盐
a)5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸 甲酯
在0℃，向NaH(60％分散体，53.9mg，1.34mmol)在DMF(5mL) 中的悬浮液滴加5-氯-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯(Bull.Pharm.Sci.， 20(1)：47-61，(1997)，218mg，1.35mmol)的DMF(10mL)溶液。将得到的悬 浮液在相同的温度下搅拌30分钟，然后用SEMCl(0.24mL，1.4mmol) 处理。得到的溶液在RT搅拌30分钟并且倾倒在冰上。混合物用乙醚提 取(3x20mL)，将乙醚层合并，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。得到的残 余物在二氧化硅上色谱纯化(10％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(227mg， 58％)。质谱(ESI，m/z)：C10H18ClN3O3Si，计算值292.0和294.0(M+H)， 实测值291.5和293.6。
b)4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]三唑-3- 甲酸甲酯(如前述步骤制备，227mg，0.780mmol)的EtOH(2mL)溶液中 加入2N KOH(0.4mL，0.8mmol)。得到的溶液在RT搅拌20分钟并且真 空浓缩。得到的残余物悬浮于乙醚(10mL)中并且超声处理5分钟。然 后除去乙醚并将得到的残余物真空干燥4小时，得到4-(4-{[5-氯-1-(2- 三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]三唑-3-甲酸钾盐(223mg，91％) 其不经任何进一步的纯化直接用于下一步。
将4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3- 甲酸钾盐(如上述制备，35mg，0.10mmol)、DIEA(34μL，0.10mmol)、4-(4- 氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例14步骤(b)中制 备，35.6mg，0.100mmol)和PyBroP(69.9mg，0.150mmol)在DCM(2mL) 中的混合物在室温搅拌12小时。反应混合物用DCM(5mL)稀释并用饱 和NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4) 并且真空浓缩。产物在二氧化硅上色谱纯化(20-40％EtOAc/己烷)，得到 标题化合物(52mg，85％)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ9.60(s，1H)， 8.29(d，1H，J＝8.4Hz)，7.18(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，7.13(d，1H，J＝2.2 Hz)，5.99(s，2H)，5.84(br s，1H)，4.18-4.25(m，2H)，3.72-3.76(m，2H)， 2.58-2.67(m，2H)，2.51-2.64(m，1H)，2.18-2.33(m，4H)，1.78-1.92(m，6H)， 1.55-1.65(m，2H)，1.49(s，9H)，0.93-0.98(m，2H)，0.10(s，9H)。
c)5-氯-1H-[1，2，4-]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰 胺三氟乙酸盐
向4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备， 63.3mg，0.102mmol)在DCM(0.5mL)和EtOH(11μL)中的溶液加入 TFA(0.1mL)。在将得到的混合物在RT搅拌12小时之后，加入另外的 0.1mL TFA。将反应混合物在室温搅拌另外的5小时，蒸发溶剂，并将 标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含20-70％CH3CN的0.1％ TFA/H2O在20分钟内洗脱，得到标题化合物(30mg，58％)。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.14(d，1H，J＝8.4Hz)，7.20(dd，1H，J＝8.4， 2.1Hz)，7.13(d，1H，J＝2.1Hz)，5.82(br s，1H)，3.45(m，2H)，3.19(m，2H)， 2.98(m，1H)，2.28(m，4H)，2.14(m，2H)，和1.95-1.75(m，6H)。质谱(ESI， m/z)：C20H24ClN5O，计算值386.1和388.1(M+H)，实测值386.2和388.1。
实施例51
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺双三氟乙酸盐，和
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺双三氟乙酸盐
a)顺式/反式2，6-二甲基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将顺式/反式-2，6-二甲基哌啶酮(Coll.Czech.Chem.Commun.：31(11)， 4432-41，(1966)，1.27g，10.0mmol)的乙醚(100mL)溶液用1N NaOH水溶 液(11mL，11mmol)和(BOC)2O(2.18g，10.0mmol)处理。将得到的混合物 在室温搅拌48小时。将乙醚层分离，干燥并且浓缩。残余物在二氧化 硅上色谱纯化(10％EtOAc-己烷)，得到标题化合物(1.10g，50％)： LC-MS(ESI，m/z)：C12H21NO3，计算值128.1(M-BOC+2H)，实测值128.1。
b)4-(4-氨基-苯基)-顺式/反式2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将顺式/反式N-Boc-2，6-二甲基哌啶酮(如前述步骤制备，1.14g，5.00 mmol)的THF(20mL)溶液冷却到-78℃并且在Ar下用LDA(1.5M溶液， 在环己烷、THF和乙基苯中，4.4mL，6.5mmol)处理。得到的混合物在 相同的温度下搅拌30分钟并且用含N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺(2.34g， 6.55mmol)的THF(20mL)处理。反应混合物搅拌另外的30分钟并且使 其回温到RT。在RT下30分钟之后，将反应混合物真空浓缩并将残余 物承载在乙醚(20mL)中并用冷水洗涤(2x10mL)。将乙醚层干燥(Na2SO4) 并且浓缩，得到顺式/反式-2，6-二甲基-4-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢 -2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(890mg，49％)，其直接用于下一步。
然后根据实施例35步骤(b)的Suzuki偶联方法，使用4-氨基苯基硼 酸(219mg，1.00mmol)和顺式/反式-2，6-二甲基-4-三氟甲烷磺酰基氧基 -3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如上述制备，321mg，1.00mmol)制备 标题化合物。硅胶色谱纯化(10-20％EtOAc/己烷)，得到4-(4-氨基-苯 基)-2，6-二甲基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(172mg，57％)：质谱(ESI， m/z)：C18H26N2O2，计算值303.2(M+H)，实测值303.1。
将4-(4-氨基-苯基)-2，6-二甲基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如 上述制备，380mg，1.25mmol)的MeOH(10mL)溶液在10％Pd/C(190mg) 上在20psi氢化1小时。将溶液过滤通过硅藻土垫并且浓缩，得到标题 化合物(360mg，94％)。质谱(ESI，m/z)：C18H28N2O2，计算值305.2(M+H)， 实测值305.6。
c)4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-顺式/反式2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸 叔丁酯
向4-(4-氨基-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步骤中制 备，334mg，1.09mmol)的DCM(10mL)溶液中加入NBS(195mg，1.09 mmol)并将反应混合物在RT搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL) 稀释并用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离， 干燥(Na2SO4)并且真空浓缩，得到4-(4-氨基-3-溴-苯基)-顺式/反式-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(367mg，87％)。质谱(ESI，m/z)：C18H27BrN2O2， 计算值327.0和329.0(M-t-Bu+H)，实测值327.0和328.9。
然后根据实施例12步骤(d)的Suzuki偶联方法，使用环己-1-烯基硼 酸(157mg，1.25mmol)和4-(4-氨基-3-溴-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔 丁酯(如上述制备，382mg，1.00mmol)制备标题化合物并且在二氧化硅 上色谱纯化(20％EtOAc/己烷)，得到254mg(66％)。质谱(ESI，m/z)： C24H36N2O2，计算值384.2(M+H)，实测值385.1。
d)4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和 4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨 基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸，钾盐 (如实施例3步骤(d)中制备，384mg，1.00mmol)、DIEA(0.34μL，2.0 mmol)、4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如 前述步骤制备，384mg，1.00mmol)和PyBroP(699mg，1.50mmol)在 DCM(20mL)中的混合物在室温搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL) 稀释并用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离， 干燥(Na2SO4)并且真空浓缩，得到上述两种标题化合物的混合物(321mg， 50.7％)。使混合物经在二氧化硅上色谱法(10-20％EtOAc/己烷)，得到 单独的标题化合物。
4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]- 氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(31mg)。 质谱(ESI，m/z)：C35H51N5O4Si，计算值634.3(M+H)，实测值634.1。
混杂10％的4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪 唑-2-羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔 丁酯的4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(290 mg)。质谱(ESI，m/z)：C35H51N5O4Si，计算值634.3(M+H)，实测值634.1。
e)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶 -4-基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐和5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯 基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐
根据实施例14步骤(b)中的方法从290mg(0.457mmol)4-(4-{[4-氰 基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-3-环己-1- 烯基-苯基)-顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和31mg(0.048mmol) 4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨 基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯制备标题 化合物。
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐(93mg，32％)：1H-NMR(CD3OD；400 MHz)：δ8.17(d，1H，J＝8.4Hz)，8.03(s，1H)，7.22(d，1H，J＝8.4Hz)， 7.11(s，1H)，5.72(br s，1H)，3.87(m，1H)，3.78(m，1H)，3.45(m，1H)，3.23(m， 1H)，3.07(m，1H)，2.22(m，4H)，2.19(m，2H)，1.75-1.92(m，4H)，1.56(m，3H)， 1.37(m，6H)。质谱，ESI，m/z)：C24H29N5O，计算值404.2(M+H)，实测值 404.2。
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐(17.3mg，56％)。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ13.9(br s，1H)，10.3(br s，1H)，9.98(s，1H)，8.41(d，1H，J＝8.4Hz)， 7.75(br s，1H)，7.26(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)，7.15(d，1H，J＝2Hz)，5.92(br s， 1H)，4.12(m，1H)，3.59(m，1H)，3.1-3.3(m，4H)，2.25-2.42(m，6H)， 2.05-1.78(m，6H)，1.62(d，3H，J＝7.1Hz)，1.43(d，3H，J＝6.3Hz)。质谱(ESI， m/z)：C24H29N5O，计算值404.2(M+H)，实测值404.2。
实施例52
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)-(2，3-二羟基-丙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
a)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)2，2-二甲基 -[1，3]二氧杂环戊烷-4-羰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-甲酸甲酯(0.16mL，1.0 mmol)的MeOH(2mL)溶液加入2N KOH(0.5mL，1mmol)。得到的溶液 在RT搅拌20分钟并且真空浓缩。将得到的残余物悬浮于乙醚(10mL) 中并且超声处理5分钟。然后除去乙醚并将得到的残余物真空干燥4小 时，得到(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-甲酸钾盐(173mg，94 ％)，其不经纯化直接用于下一步。
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺， 三氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，40mg，0.08mmol)的DCM(1.5 mL)溶液中加入(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-甲酸钾盐(如上 述制备，18mg，0.090mmol)、EDCI(18.8mg，0.0900mmol)、HOBt(13.2mg， 0.0900mmol)和DIEA(42μL，0.24mmol)的混合物。将得到的混合物在 RT搅拌6小时。加入水(10mL)并将DCM层分离，干燥(Na2SO4)并且浓 缩。得到的残余物在二氧化硅上色谱纯化(2％MeOH/DCM)，得到标题 化合物(47mg，97％)。质谱(ESI，m/z)：C28H33N5O4，计算值504.2(M+H)， 实测值503.9。
b)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)-(2，3-二羟基- 丙酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(2，2-二甲基-[]，3] 二氧杂环戊烷-4-羰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(如前述步骤制备，45mg， 0.090mmol)的MeOH(1mL)溶液中加入2N HCl水溶液(2mL)。得到的 混合物在RT搅拌12小时。真空除去溶剂并将得到的残余物干燥4小时。 加入乙醚(10mL)并且超声处理5分钟。真空除去乙醚并将残余物干燥 12小时，得到标题化合物(21.3mg，52％)。1H-NMR(DMSO；400MHz)： δ14.1(br s，1H)，9.85(s，1H)，8.32(s，1H)，7.92(d，1H，J＝8.4Hz)，7.18(dd， 1H，J＝8.4，2.1Hz)，7.13(d，1H，J＝2.1Hz)，5.72(br s，1H)，4.51(m，1H)， 4.33(m，1H)，4.15(m，1H)，3.55(m，1H)，3.43(m，1H)，3.08(m，1H)，2.81(m， 1H)，2.63(m，1H)，2.12-2.24(m，4H)，1.31-1.38(m，10H)。质谱(ESI，m/z)： C25H29N5O4，计算值464.2(M+H)，实测值464.1。
实施例53
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基] -酰胺三氟乙酸盐
a)4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺
将N-甲氧基哌啶酮(J.Org.Chem.，26，1867，(1961)，650mg，5.00 mmol)的THF(20mL))的溶液冷却到-78℃并且在Ar下用LDA(1.5M溶 液，在环己烷、THF和乙基苯中，4.3mL，6.4mmol)处理。得到的混合 物在相同温度下搅拌30分钟并且用含N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺(2.3g， 6.4mmol)的THF(20mL)处理。反应混合物搅拌另外的30分钟并且使其 回温到RT。在RT 30分钟之后，将反应混合物真空浓缩并将得到的残 余物承载在EtOAc(20mL)中并用冷水洗涤(2x10mL)。将EtOAc层干燥 (Na2SO4)并且浓缩，得到三氟甲烷磺酸1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-酯 (980mg，71％)，为白色泡沫状物，其直接用于下一步。
然后根据实施例35步骤(b)的Suzuki偶联方法使用4-氨基苯基硼酸 (219mg，1.00mmol)和三氟甲烷磺酸1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基酯 (如上述制备，261mg，1.00mmol)制备标题化合物。硅胶色谱纯化(20-50 ％EtOAc/己烷)，得到60mg(29％)。质谱(ESI，m/z)：C12H16N2O，计算值 205.1(M+H)，实测值205.2。
b)2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺
将4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺(如前述步骤制备)(40.8 mg，0.200mmol)的MeOH(5mL)溶液在10％Pd/C(20.4mg)上在20psi氢 化1小时。溶液过滤通过硅藻土垫并且浓缩，得到4-(1-甲氧基-哌啶-4- 基)-苯胺(38mg，92％)，其不经纯化直接用于下一步。
向4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如上述制备，42mg，0.20mmol)的 DCM(2mL)溶液中加入NBS(36.2mg，0.20mmol)并将反应混合物在RT 搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液 (10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩， 得到2-溴-4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺(43mg，74.5％)，其 不经纯化用于下一步。
然后根据实施例12步骤(d)的Suzuki偶联方法使用环己-1-烯基硼酸 (27.9mg，1.00mmol)和2-溴-4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺 (如上述制备，44mg，0.15mmol)制备标题化合物，并且在二氧化硅上色 谱纯化(20-50％EtOAc/己烷)，得到2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4- 基)-苯胺(33mg，74％)。质谱，(ESI，m/z)：C18H26N2O，计算值287.2(M+H)， 实测值286.8。
c)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺
将4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸，钾盐 (如实施例3步骤(d)中制备，35.6mg，0.100mmol)、DIEA(0.34μL，0.20 mmol)、2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如前述步骤中制备， 28.6mg，0.1mmol)和PyBroP(69.9mg，0.150mmol)在DCM(2mL)中的混 合物在室温搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL)稀释并用饱和 NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4) 并且真空浓缩。产物在二氧化硅上色谱纯化(20-40％EtOAc/己烷)，得到 标题化合物(26mg，48％)。质谱(ESI，m/z)：C29H41N5O3Si，计算值 536.3(M+H)，实测值536.2。
d)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺(如前述步骤中制备，31mg， 0.020mmol)在DCM(0.5mL)和EtOH(11μL)中的溶液加入TFA(0.1mL)。 得到的溶液在RT搅拌6小时。反应混合物真空浓缩并将得到的残余物 干燥1小时，悬浮于乙醚中(10mL)并且超声处理5分钟。通过吸滤收集 形成的固体，得到标题化合物(17.3mg，58％)。1H-NMR(DMSO；400 MHz)：δ9.70(s，1H)，8.30(s，1H)，7.83(d，1H，J＝8.4Hz)，7.14(d，1H，J＝ 8.4Hz)，7.05(s，1H)，5.71(br s，1H)，3.30-3.55(m，5H)，2.41-2.62(m，2H)， 2.12-2.19(m，4H)，1.60-1.85(m，8H)。质谱(ESI，m/z)：C23H27N5O2，计算值 406.2(M+H)，实测值406.1。
实施例54
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六 氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
a)5-硝基-3’，6’-二氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯
将202mg(0.994mmol)2-溴-5-硝基吡啶在4mL甲苯和2mL EtOH 中的溶液用338mg(1.09mmol)4-三氟甲烷-磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯(Synthesis，993，(1991))和1.49mL(2.981mmol)2M Na2CO3水溶液处理。混合物通过超声处理脱气，置于氩气下，用80.3 mg(0.00700mmol)Pd(PPh3)4处理并且加热到80℃，4小时。混合物用 EtOAc稀释并用水洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。得到的残 余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上色谱纯化，用10-25％ EtOAc-己烷洗脱，得到226mg(75％)的标题化合物，为浅黄色固体。质 谱(ESI，m/z)：C15H19N3O4，计算值306.1(M+H)，实测值305.7。
b)5-氨基-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯
将226mg(0.740mmol)5-硝基-3’，6’-二氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸 叔丁酯(如前述步骤制备)的15mL MeOH溶液用110mg 10％ Pd/C(Degussa型E101-NE/W，Aldrich，50重量％的水)和1atm H2在室温 处理18小时。混合物过滤通过硅藻土(Celite)，并将滤饼用MeOH洗涤。 浓缩，得到220mg(107％)的标题化合物，为无色的玻璃状固体。质谱(ESI， m/z)：C15H23N3O2，计算值278.2(M+H)，实测值278.0。
c)5-氨基-6-溴-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯
将220mg(0.793mmol)5-氨基-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’- 甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)的10mL CH2Cl2溶液用134mg(0.753 mmol)N-溴代琥珀酰亚胺在室温处理20分钟。混合物用CH2Cl2稀释并 用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余 物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上色谱纯化，使用10-35％ EtOAc-己烷洗脱，得到209mg(74％)的标题化合物，为无色的玻璃状固 体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ6.97(d，1H，J＝8.0Hz)，6.91(d，1H，J＝ 8.0Hz)，4.28-4.15(br s，2H)，4.06-3.90(m，2H)，2.85-2.75(m，2H)， 2.77-2.68(m，1H)，1.92-1.83(m，2H)，1.68-1.54(m，2H)，1.47(s，9H)。
d)5-氨基-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡 啶-1’-甲酸叔丁酯
将209mg(0.587mmol)5-氨基-6-溴-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡 啶-1’-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)在5mL甲苯和2.5mL EtOH中的溶 液用99.3mg(0.645mmol)4，4-二环己-1-烯基硼酸和2.34mL(4.69mmol)2 M Na2CO3水溶液处理。混合物通过超声处理脱气，置于在氩气下，用 47.4mg(0.0410mmol)Pd(PPh3)4，处理并且加热到80℃，16小时。混合物 用EtOAc稀释并用水洗涤。水层用另外的EtOAc提取，并将合并的有 机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上色谱纯化，使用25％EtOAc-己烷洗脱，得到150 mg(66％)的标题化合物，为白色泡沫状固体。质谱(ESI，m/z)：C23H35N3O2， 计算值386.3(M+H)，实测值386.3。
e)5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]- 氨基}-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’- 甲酸叔丁酯
将150mg(0.389mmol)5-氨基-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯 基)-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)在 15mL CH2Cl2中的溶液用131mg(0.428mmol)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅 烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(b)中制备)、272 mg(0.584mmol)PyBroP、和203μL(1.17mmol)DIEA在室温处理3小时。 混合物用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4 干燥并且真空浓缩。残余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上 色谱纯化，使用50％EtOAc-己烷洗脱，得到215mg(87％)的标题化合 物，为白色固体。质谱(ESI，m/z)：C34H50N6O4Si，计算值635.4(M+H)， 实测值635.3。
f)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯 基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
将215mg(0.339mmol)5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-3’，4’，5’，6’-四氢 -2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)在10mL CH2Cl2中的 溶液用三滴MeOH和3mL TFA在室温处理4小时。加入MeOH(10mL) 并且真空蒸发溶剂。残余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上 色谱纯化，使用10％MeOH-CH2Cl2洗脱，得到210mg(97％)的标题化 合物，为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.59(d，1H，J＝8.4Hz)， 8.04(s，1H)，7.28(d，1H，J＝8.4Hz)，6.02-5.93(m，1H)，3.58-3.48(m，2H)， 3.32-3.03(m，3H)，2.54-2.42(m，2H)，2.23-2.02(m，6H)，1.11(s，6H)。质谱 (ESI，m/z)：C23H28N6O，计算值405.2(M+H)，实测值405.2.
实施例55
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[1’-(2-二甲基氨基-乙酰基)-6-(4，4-二甲基-环己 -1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
将20.9mg(0.203mmol)N，N-二甲基甘氨酸在4mL CH2Cl2中的悬浮 液用49.8mg(0.197mmol)双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(phosphinic chloride)(BOP-Cl)和75μL(0.54mmol)Et3N在室温处理1小时。然后将 混合物用70.0mg(0.135mmol)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环 己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐(如 实施例54步骤(f)中制备)在室温处理18小时。混合物用CH2Cl2稀释并 用水洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余物通过 RP-HPLC(C18)纯化，使用含10-80％CH3CN的0.1％TFA/H2O在30分 钟内洗脱，得到34.9mg(53％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.38(d，1H，J＝8.4Hz)，8.05(s，1H)，7.33(d， 1H，J＝8.4Hz)，6.05-5.98(m，1H)，4.68(d，1H，J＝15.2Hz)，3.82(d，1H，J＝ 15.2Hz)，3.16-3.05(m，1H)，3.01-2.94(m，6H)，2.52-2.40(m，2H)，2.39(s， 6H)，2.17-2.10(m，2H)，2.09-1.87(m，2H)，1.67-1.59(m，2H)，1.12(s，6H)。质 谱(ESI，m/z)：C27H35N7O2，计算值490.3(M+H)，实测值490.4。
实施例56
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’-(2-甲烷磺酰基- 乙基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
将70.0mg(0.135mmol)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己 -1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺(如实施例54步骤 (f)中制备)在10mL CH2Cl2中的溶液用32.7mg(0.162mmol)甲烷磺酸2- 甲烷磺酰基-乙酯(如实施例40步骤(a)中制备)和70.5μL(0.405 mmol)DIEA在室温处理6小时。混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。有 机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余物通过RP-HPLC(C18)纯化，使 用含20-60％CH3CN的0.1％TFA/H2O在30分钟内洗脱，得到48mg(85 ％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.65(d，1H， J＝8.4Hz)，8.05(s，1H)，7.34(d，1H，J＝8.4Hz)，6.05-5.98(m，1H)， 3.85-3.66(m，6H)，3.29-3.21(m，2H)，3.20-3.01(m，1H)，3.14(s，3H)， 2.53-2.45(m，2H)，2.30-2.15(m，4H)，2.15-2.10(m，2H)，1.62(t，2H，J＝6.4 Hz)，1.11(s，6H)。质谱(ESI，m/z)：C26H34N6O3S，计算值511.2(M+H)，实 测值511.3。
实施例57
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
a){2-[4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-基]-1，1-二甲基-2-氧代-乙基}- 氨基甲酸叔丁酯
向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(231mg，0.380 mmol)(如实施例14步骤(a)中制备)在2.5mL DCM和0.4mL EtOH中的 溶液加入700μL TFA并将溶液在25℃搅拌3小时。反应用4mL EtOH 稀释然后浓缩，得到通过1H-NMR和LC/MS测定为5-氰基-1-(2-三甲基 甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺三氟乙酸盐与起始原料的约2∶1的混合物，其不经进一步纯化 用于随后的步骤。将在3mL DCM中的混合物加入到2-叔丁氧基羰基氨 基-2-甲基-丙酸(53mg，0.70mmol)、DIEA(122μL，0.700mmol)和 PyBroP(144mg，0.300mmol)在3mL DCM中的溶液并将反应在25℃搅 拌过夜。反应用EtOAc(25mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液(1x25mL) 和盐水(25mL)洗涤，将有机层用Na2SO4干燥然后浓缩。残余物通过制 备性TLC纯化(50％EtOAc-己烷)，得到40mg(15％)的标题化合物，为 白色固体。质谱(ESI，m/z)：C37H55N6O5Si，计算值691.3(M+H)，实测值 691.1。
b)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-哌啶-4- 基]-2-环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向{2-[4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-基]-1，1-二甲基-2-氧代-乙基}- 氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.050mmol)在2mL DCM和20μL EtOH中的溶 液加入1.5mL TFA。将溶液在25℃搅拌3小时，用2mL EtOH稀释并 且真空浓缩。残余物与乙醚一起研磨，得到8.4mg(29％)的标题化合物， 为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.10(d，1H，J＝8.4Hz)，8.00(s， 1H)，7.16(d，1H，J＝8.4Hz)，7.07(s，1H)，5.79(s，1H)，4.55-4.48(m，1H)， 3.30(s，6H)，2.89-2.87(m，2H)，2.40-2.25(m，4H)，1.96-1.93(m，2H)， 1.86-1.83(m，6H)，1.64-1.61(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C26H33N6O2，计算值 461.2(M+H)，实测值461.3。
实施例58
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1′-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶-5-基]-酰胺
a)5-氨基-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁 酯
向5-氨基-6-溴-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯(331 mg，0.93mmol)(如实施例54步骤(c)中制备)和环己烯-1-基硼酸(141mg， 1.11mmol)在5mL EtOH、10mL甲苯和5mL 2M Na2CO3中的混合物 加入Pd(PPh3)4(107mg，0.0930mmol)，并将得到的混合物在80℃加热16 小时。反应用100mL乙醚和100mL盐水稀释并且分液。将有机层干燥 (Na2SO4)并且真空浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，30-60％乙醚- 己烷)，得到248mg(74％)标题化合物，为浅棕色油状物。LC-MS(ESI， m/z)：C21H32N3O2(M+H)，计算值358.2，实测值358.1。
b)5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]- 氨基}-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐 (296mg，0.970mmol)(如实施例3步骤(d)中制备)的在8mL DCM中的溶 液中加入DIEA(291μL，1.72mmol)和PyBroP(512mg，1.10mmol)，将反 应在25℃搅拌15分钟。加入5-氨基-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢 -2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯(233mg，0.65mmol)(如前述步骤制备)的 在4mL DCM中的溶液并将反应在25℃搅拌过夜。反应用EtOAc(25mL) 稀释并用NaHCO3(1x25mL)和盐水(25mL)洗涤，将有机层用Na2SO4 干燥，然后浓缩。残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，5％MeOH-CHCl3)， 得到167mg(40％)的标题化合物，为白色固体。质谱(ESI，m/z)： C32H46N6O4Si，计算值607.3(M+H)，实测值607.3。
c)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(6-环己-1-烯基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联 吡啶-5-基)-酰胺三氟乙酸盐
使用与实施例14步骤(b)相似的方法从5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅 烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢 -2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯(167mg，0.27mmol)制备标题化合物，得 到57mg(43％)的标题化合物，为白色固体。LC-MS(ESI，m/z)：C21H24N6O， 计算值377.2(M+H)，实测值377.2。
d)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1′-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶-5-基]-酰胺
向5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(6-环己-1-烯基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联 吡啶-5-基)-酰胺三氟乙酸盐(57mg，0.11mmol)在5mL DCM中的浆状物 加入DIEA(50.4μL，0.290mmol)，随后加入30.5mg(0.150mmol)的甲烷 磺酸2-甲烷磺酰基-乙酯(如实施例40步骤(a)中制备)。将反应搅拌过夜， 用20mL DCM稀释，用饱和NaHCO3水溶液(1x20mL)洗涤并且用 Na2SO4干燥。通过制备性TLC纯化(硅胶，40％EtOAc-己烷)，得到22.3 mg(40％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(DMSO；400MHz)： δ10.02(s，1H)，8.24(s，1H)，8.11(d，1H，J＝8.4Hz)，7.18(d，1H，J＝8.4Hz)， 5.96(s，1H)，3.04(s，3H)，3.02-2.99(m，3H)，2.73(t，2H，J＝2.7Hz)， 2.39-2.37(m，2H)，2.11-2.05(m，4H)，1.85-1.64(m，10H)。质谱(ESI，m/z)： C24H31N6O3S，计算值483.2(M+H)，实测值483.3。
实施例59
以下描述用于合成实施例3中所述中间体的替代方法。
4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
a)1H-咪唑-4-甲腈
向装备有机械搅拌器、温度探针、冷凝器、和具有氮气入口的加料 漏斗的22-L四口圆底烧瓶加入1H-咪唑-4-甲醛(Aldrich，1.10kg，11.5 mol)和吡啶(3.0L，3.0mol)。用冰浴将反应烧瓶冷却到8℃并且分批缓慢 加入羟胺盐酸盐(871g，12.5mol)，以维持内部温度低于30℃。使反应冷 却到环境温度并且在环境温度下搅拌2小时。用加热罩将得到的浓稠的 黄色溶液加热到80℃并且在200分钟内滴加乙酸酐(2.04L，21.6mol)， 维持加入过程中温度低于110℃。将反应混合物在100℃加热30分钟， 然后使其冷却到环境温度，然后进一步在冰浴中冷却。通过加入25重 量％NaOH(5.5L)调节pH到8.0(pH计)，加入速率为使得保持内部温度 低于30℃。然后将反应混合物转移到22-L分液漏斗并且用乙酸乙酯(6.0 L)提取。合并的有机层用盐水洗涤(2x4.0L)，用MgSO4干燥，过滤， 并且在35℃减压浓缩到干燥，得到粗产物，为黄色半固体。将得到的 半固体悬浮于甲苯(3.0L)中并且搅拌1小时，之后将其过滤，得到浅黄 色固体，将其再悬浮于甲苯(3.0L)中并且搅拌1小时。将得到的浆状物 过滤并将滤饼用甲苯洗涤(2x500mL)，得到标题化合物，为浅黄色固体 [870g，82％)。1H和13C NMR谱符合指定结构。
b)1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈和3-(2-三甲基 甲硅烷基-乙氧基甲基)-3H-咪唑-4-甲腈
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的加料漏斗的 22-L四口圆底烧瓶加入1H-咪唑-4-甲腈(830g，8.91mol，如前述步骤制 备)、碳酸钾(2.47kg，17.8mol)、和丙酮(6.0L)。开动搅拌并用冰浴将混 合物冷却到10℃。通过加料漏斗在210分钟内加入SEMCl(1.50kg，9.00 mol)，以保持内部温度低于15℃。然后使反应回温到环境温度并且在环 境温度搅拌过夜(20小时)。然后将反应混合物在冰浴中冷却到10℃并且 通过加入水(8.0L)猝灭，所述水在30分钟内缓慢加入以保持内部温度低 于30℃。将得到的混合物转移到22-L分液漏斗并且用乙酸乙酯提取(2x 7.0L)。将合并的有机物在35℃减压浓缩，得到粗产物，为深棕色油状 物，其通过硅胶短柱(16.5x20cm，2.4kg硅胶)纯化，使用2∶1庚烷/乙 酸乙酯(15L)作为洗脱剂。将包含产物的级分合并并且在35℃减压浓缩， 得到标题化合物的混合物，为浅棕色油状物[1785g，90％)。1H NMR谱 符合指定结构，并且表明为64∶36比例的区域异构体(regioisomer)。
c)2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的冷凝器的22-L 四口圆底烧瓶加入1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈和 3-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-3H-咪唑-4-甲腈[600g，2.69mol，如 前述步骤制备)和四氯化碳(1.8L)的混合物。开动搅拌并将混合物加热到 60℃。这时，在30分钟内分几个部分加入N-溴代琥珀酰亚胺(502g，2.82 mol)，其引起放热，温度升高到74℃。使反应冷却到60℃并且在60℃ 另外搅拌1小时。使反应缓慢冷却到环境温度并将得到的浆状物过滤， 将滤液用饱和NaHCO3溶液(4.0L)洗涤。使有机物通过硅胶短柱(8x15 cm，硅胶；600g)，使用2∶1庚烷/乙酸乙酯(6.0L)作为洗脱剂。包含产 物的级分(基于TLC分析)合并并且减压浓缩，得到结晶状浅黄色固体， 然后将其过滤并用庚烷(500mL)洗涤，得到标题化合物，为结晶状白色 固体[593g，73％)。1H和13C NMR谱符合指定结构并且表明没有次要的 区域异构体存在。
d)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸乙酯
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的加料漏斗的 12-L四口圆底烧瓶加入2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑 -4-甲腈[390g，1.29mol，如前述步骤制备)和无水四氢呋喃(4.0L)。开 动搅拌并使用干冰/丙酮浴将反应混合物冷却到-50℃。通过加料漏斗在 30分钟内加入异丙基氯化镁(2.0M，在THF中，760mL，1.52mol)，以保 持内部温度低于-40℃。将反应在-43℃搅拌另外的30分钟，然后将其冷 却到-78℃。通过加料漏斗在10分钟内加入氯代甲酸乙酯(210mL，2.20 mol)，以保持内部温度低于-60℃。将反应在-70℃搅拌另外的40分钟， 这时移去干冰/丙酮浴并使反应在1.5小时内回温到环境温度。反应混合 物在冰浴中冷却到0℃并且通过缓慢加入饱和氯化铵溶液(1.8L)猝灭， 加入速率为使得内部温度保持低于10℃。将反应混合物转移到12-L分 液漏斗中，用乙酸乙酯(4.0L)稀释，并且将层分离。有机层用盐水洗涤 (2x2.0L)并且在35℃减压浓缩，得到棕色油状物。将粗的油状物溶解 于二氯甲烷(300mL)并且通过色谱法纯化(15x22cm，1.5kg硅胶，10∶1 到4∶1的庚烷/乙酸乙酯)，得到黄色油状物，将其溶解于EtOAc(100mL)， 用庚烷2.0L)稀释并且在冷冻器中保存5小时。将得到的浆状物过滤， 得到标题化合物，为结晶状白色固体(141g，37％)。1H和13C NMR谱符 合指定结构。
e)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的加料漏斗的5-L 三口圆底烧瓶加入5[400g，1.35mol)和乙醇(4.0L)。开动搅拌并且在所 有固体溶解之后施加水浴。在15分钟内通过加料漏斗加入6N KOH的 溶液(214.0mL，1.29mol)，以保持内部温度低于25℃并将反应在室温搅 拌5分钟。然后将溶液在20℃减压浓缩到干燥，得到白色固体。将得到 的固体悬浮于甲基叔丁基醚(MTBE，4.0L)并且搅拌30分钟，之后将浆 状物过滤并将滤饼用MTBE(1.0L)洗涤，得到标题化合物，为白色固体， 将其进一步在环境温度下真空干燥4天[366g，89％)。1H NMR、13C NMR、和质谱符合指定结构。元素分析：C11H16KN3O3Si：C，43.25；H，5.28； N，13.76。实测值：C，42.77；H，5.15；N，13.37。Karl Fisher：1.3％H2O。
生物活性
体外试验
进行以下典型的体外试验，以测定式I的化合物的FLT3生物活性。 以非限制性方式给出它们用于说明本发明。
FLT3酶活性、MV4-11增殖和Baf3-FLT3磷酸化的抑制示例了FLT3 酶和依赖于FLT3活性的细胞过程的特异性抑制。使用Baf3细胞增殖的 抑制作为FLT3非依赖性细胞毒性的试验。本文中所有实施例表现出对 FLT3激酶和FLT3依赖性细胞反应的显著的和特异性的抑制。本发明化 合物还可透过细胞。
FLT3荧光偏振激酶试验
为了在体外激酶试验中测定本发明的化合物的活性，使用以下荧光 偏振(FP)规程进行对分离的人FLT3受体(a.a 571-993)的激酶域的抑制。 FLT3 FP试验利用了在由Invitrogen提供的Panvera Phospho-Tyrosine Kinase Kit(Green)中包含的荧光素标记的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗体。 当FLT3使多聚Glu4Tyr磷酸化时，在抗磷酸酪氨酸抗体中，荧光素标 记的磷酸肽被磷酸化的多聚Glu4Tyr取代，从而降低FP值。将FLT3激 酶反应在以下条件下在室温下培养30分钟：10nM FLT3 571-993、 20ug/mL多聚Glu4Tyr、150uM ATP、5mM MgCl2、1％化合物含在DMSO 中。通过加入EDTA使激酶反应终止。加入荧光素标记的磷酸肽和抗磷 酸酪氨酸抗体并且在室温下培养30分钟。
数据点是一式三份样品的平均值。使用GraphPad Prism进行抑制和 IC50数据分析，使用非线性回归，与多参数、S形剂量-应答(可变斜率) 方程拟合。激酶抑制的IC50表示与DMSO媒介物对照相比，产生激酶 活性50％抑制的化合物剂量。
MV4-11细胞增殖的抑制
为了评价本发明的化合物的细胞效力，在白血病细胞系 MV4-11(ATCC保藏号：CRL-9591)中测量FLT3特异性生长抑制。 MV4-11细胞得自患有幼年型急性粒-单核细胞白血病的患者，所述患者 具有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含FLT3-ITD突变(AML亚 型M4)(1，2)。MV4-11细胞在没有活性FLT3ITD的情况下不能生长和存 活。
使用IL-3依赖性的鼠B细胞淋巴瘤细胞系Baf3作为对照，通过测 量由本发明的化合物引起的非特异性生长抑制证实本发明的代表性化 合物对增殖抑制的选择性(数据未表示)。
为了测量由本发明的化合物引起的增殖抑制，使用基于荧光素酶的 CellTiterGlo试剂(Promega)，其基于总的细胞ATP浓度测量总细胞数。 将细胞以每孔10,000个细胞铺板在100ul的RPMI培养基中，该培养基 包含penn/strep、10％FBS和对于MV4-11和Baf3细胞分别为1ng/ml的 GM-CSF或1ng/ml的IL-3。
将化合物稀释物或0.1％DMSO(媒介物对照)加入到细胞中并且允 许细胞在标准细胞生长条件(37℃、5％CO2)下生长72小时。对于在50％ 血浆中生长的MV4-11细胞的活性测量，将细胞以每孔10,000个细胞铺 板在生长培养基和人血浆为1∶1的混合物中(最终容积100μL)。为了测量 总的细胞生长，根据生产商的说明书，将等体积的CellTiterGlo试剂加 入到每个孔中，并且测定发光量。总的细胞生长被量化为第0天细胞数 的发光计数(相对光单位，RLU)与第3天的总细胞数(72小时生长和/或 化合物处理)者相比的差。百分之百的生长抑制率被定义为等于第0天读 数的RLU。零抑制百分率被定义为生长第三天DMSO媒介物对照的RLU 信号。
数据点是一式三份样品的平均值。生长抑制的IC50表示在第三天引 起DMSO媒介物对照的总细胞生长发生50％抑制的本发明化合物的剂 量。使用GraphPad Prism进行抑制和IC50数据分析，使用非线性回归， 与多参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
MV4-11细胞表达FLT3内部串联重复突变，因此其生长完全依赖于 FLT3活性。期望针对MV4-11细胞的强活性是本发明所期望的性质。相 比之下，Baf3细胞增殖由细胞因子IL-3驱动，因此用作非特异性毒性对 照。本发明的实施例#38在3μM的剂量下表现出＜50％抑制(未包括数 据)，表明其不具有细胞毒性，并且具有良好的FLT3选择性。
基于细胞的FLT3受体Elisa
FLT配体诱导的野生型FLT3磷酸化的特异性细胞抑制根据以下方 式测量：过度表达FLT3受体的Baf3FLT3细胞得自Dr.Michael Heinrich(Oregon Health and Sciences University)。通过用野生型FLT3对 亲代Baf3细胞(生长依赖于细胞因子IL-3的鼠B淋巴瘤细胞系)稳定转 染产生Baf3FLT3细胞系。根据细胞在不存在IL-3和存在FLT3配体的 条件下的生长能力选择细胞。
在37℃、5％CO2条件下，将Baf3细胞保存在具有10％FBS、 penn/strep和10ng/ml FLT配体的RPMI 1640中。为了测量对野生型FLT3 受体活性和磷酸化的直接抑制，开发了三明治ELISA方法，其类似于用 于其它RTK而开发的那些(3，4)。将200μL的Baf3FLT3细胞(1×106/mL) 铺板在96孔皿中，在含0.5％血清和0.01ng/mL IL-3的RPMI 1640中培 养16小时，随后与化合物或DMSO媒介物培养1小时。在37℃将细胞 用100ng/mL Flt配体(R&D Systems Cat#308-FK)处理10分钟。将细胞制 成团粒(pelleted)，洗涤并在补充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和蛋白酶抑 制剂(Sigma Cat#P8340)的100ul细胞裂解缓冲液(50mM Hepes、150mM NaCl、10％甘油、1％Triton-X-100、10mM NaF、1mM EDTA、1.5mM MgCl2、10mM焦磷酸钠)中裂解。然后通过在4℃下以1000xg离心5 分钟使裂解产物澄清。将细胞裂解产物转移到涂有50ng/孔的抗FLT3抗 体(Santa Cruz Cat#sc-480)的白色壁96孔微量滴定板(Costar#9018)中并 且用SeaBlock试剂(Pierce Cat#37527)封闭。将裂解产物在4℃培养2小 时。将板用200ul/孔的PBS/0.1％Triton-X-100洗涤3次。然后在室温下 将板与HRP-结合型抗磷酸酪氨酸抗体(Clone 4G10、Upstate Biotechnology Cat#16-105)的1∶8000稀释物培养1小时。将板用200ul/ 孔的PBS/0.1％Triton-X-100洗涤3次。根据生产商的说明书用Berthold 微板光度计进行信号检测，使用Super Signal Pico试剂((Pierce Cat#37070)。
数据点是一式三份样品的平均值。在存在0.1％DMSO对照条件下 的Flt配体刺激的FLT3磷酸化的总的相对光单位(RLU)被定义为0％抑 制百分率，100％抑制百分率是在基础状态下的裂解产物中的总的RLU。 使用GraphPad Prism进行抑制和IC50数据分析，使用非线性回归，与多 参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
生物学方法参者文献
1.Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook. Academic Pres：San Diego，CA，2000.
2.Quentmeier H，Reinhardt J，Zaborski M，Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloid leukemia cell lines.Leukemia.2003 Jan； 17：120-124.
3.Sadick，MD，Sliwkowski，MX，Nuijens，A，Bald，L，Chiang，N， Lofgren，JA，Wong WLT.Analysis of Heregulin-Induced ErbB2 Phosphorylation with a High-Throughput Kinase Receptor Activation Enzyme-Linked Immunsorbent Assay，Analytical Biochemistry.1996； 235：207-214.
4.Baumann CA，Zeng L，Donatelli RR，Maroney AC.Development of a quantitative，high-throughput cell-based enzyme-linked immunosorbent assay for detection of colony-stimulating factor-1 receptor tyrosine kinase inhibitors.J Biochem Biophys Methods.2004；60：69-79.
生物学数据
FLT3的生物学数据
选择的本发明的化合物的活性提供如下。所有的活性以μM为单位， 并且具有以下不确定性：FLT3激酶：±10％；MV4-11和Baf3-FLT3：±20％。
优选的本发明的化合物是实施例5、17、23、34、38、和51。
体内测定法
进行以下代表性的体内测定法，以测定本发明的实施例#38的生物 活性。以非限制性方式给出它们用于举例说明本发明。
使用裸鼠MV4-11人肿瘤异种移植物退化模型进行体内评价本发明 的实施例#38的口服抗肿瘤效力。
雌性无胸腺裸鼠(CD-1，nu/nu，9-10周龄)得自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)并且根据NIH标准喂养。所有小鼠分组被 安置(5只小鼠/笼)在无菌的微型隔离笼中清洁室内条件下，以12小时光 照/黑暗循环，房间保持为21-22℃和40-50％的湿度。给小鼠喂养经辐射 的标准啮齿动物饮食并且不限量供应水。所有的动物安置在完全由the American Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care(AAALAC)认可的Laboratory Animal Medicine设备中。涉及 动物的所有操作依照the NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals进行，并且所有的规程由Internal Animal Care and Use Committee(IACUC)审定。
人白血病MV4-11细胞系得自美国典型培养物保藏中心(the American Type Culture Collection)(ATCC保藏号：CRL-9591)并且在包含 10％FBS(胎牛血清)和5ng/mL GM-CSF(R&D Systems)的RPMI培养基中 繁殖。MV4-11细胞得自患有幼年型急性粒-单核细胞白血病的患者，该 患者带有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含FLT3-ITD突变 (AML亚型M4)(1，2)。由于自然发生的FLT3/ITD突变，MV4-11细胞结 构性表达活性的磷酸化FLT3受体。期望在裸鼠肿瘤异种移植物模型中 针对MV4-11瘤生长的强抗肿瘤活性是本发明合乎需要的性质。
在先导生长研究中，确定以下条件允许在裸鼠中作为皮下实体瘤异 种移植物的MV4-11细胞生长。在即将注射之前，将细胞在PBS中洗涤 并且计数，悬浮在PBS：Matrigel混合物(BD Biosciences)中1∶1，然后加 载到预先冷却的装备25号针头的1cc注射器中。通过在0.2mL的递送 量中包含5×106个肿瘤细胞在大腿左侧腹股沟区对重量不低于20-21克 的雌性无胸腺裸鼠进行皮下接种。对于退化研究，在开始给药之前让肿 瘤生长到预定尺寸。在肿瘤细胞接种之后约3周，将带有从100到586 mm3大小(有60只小鼠在此范围内，平均体积为288±133mm3(SD))皮下 肿瘤的小鼠随机分为处理组。通过在一周除周末外的日子每天两次 (b.i.d.)和在周未每天一次(q.d.)管饲媒介物(对照组)或不同剂量的化合物 对小鼠进行口服给药。给药持续11个连续日，根据用媒介物处理的对 照小鼠中的瘤生长的动力学和肿瘤大小而定。如果对照小鼠中的肿瘤达 到体重的～10％(～2.0克)，研究终止。每天新制备本发明的实施例#38， 其为在20％HPβCD/D5W，pH 3-4或者其它适当的媒介物中的透明溶液 (1、5和10mg/mL)，并且如上所述口服给药。在研究过程中，使用电子 游标卡尺每周三次(M、W、F)测量肿瘤生长。使用公式(LxW)2/2计算 肿瘤体积(mm3)，其中L＝肿瘤的长度(mm)和W＝肿瘤的宽度(最短距 离，mm)。每周测量三次体重，并且将体重减轻超过10％用作缺乏化合 物耐受性(tolerability)的指示。不可接受的毒性被定义为在研究过程中体 重损失＞20％。每天在每次给药时仔细检查小鼠是否有有害的、与药物 相关的副作用的明显临床征兆。
在研究终止的当天(第12天)，测量每只动物的最终肿瘤体积和最终 体重。将小鼠用100％CO2实施安乐死，并且立即将肿瘤完整切除和称 重，最终肿瘤湿重(克)作为初级效力终点。
本发明的实施例#38对MV4-11肿瘤生长的抑制效果随时间的变化 在图1中说明。数值表示每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。在研 究的最后一天，相对于用媒介物处理的对照组中的肿瘤生长计算肿瘤生 长的抑制百分率(％I)。通过方差分析(ANOVA)随后进行Dunnett’s t-检验 确定相对于对照的统计显著性：*p＜0.05，**p＜0.01。
如图1中所示，通过管饲法b.i.d.口服给予10、50和100mg/kg的 本发明的实施例#38连续11个连续日，对裸鼠中皮下生长的MV4-11肿 瘤生长产生统计显著的、剂量依赖性的抑制。在处理的最后一天(第11 天)，与媒介物处理组的平均肿瘤体积相比，在50和100mg/kg剂量下 的平均肿瘤体积剂量依赖性地降低达100％抑制(p＜0.001)。在50mg/kg 和100mg/kg剂量下的本发明的实施例#38产生肿瘤退化，相对于第1 天的起始平均肿瘤体积，分别为98％和93％的统计显著降低。在10mg/kg 的最低试验剂量，没有观察到与媒介物处理的对照组相比为显著的生长 延迟。在100mg/kg处理的剂量组中在第12天给药停止并且允许肿瘤再 生长时，只有6/12的小鼠在研究的第34天时表现出可触知的(papable)、 可测量的肿瘤。
本发明的实施例#38产生实质上完全的肿瘤质量消退，如在研究终 止时没有可测量的残余肿瘤所示的。(参见图2)。图2中的条形图表示 每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。如图所示，在10mg/kg剂量 时没有最终肿瘤重量的显著降低，与图1中的肿瘤体积数据一致。在50 mg/kg的剂量下，在图上没有表示为条形图，这是因为在终止时在这些 小鼠中没有可测量的肿瘤质量可被检测到，这与图1中所示的完全的肿 瘤体积退化一致。在图2中没有表示100mg/kg剂量组，这是因为这些 小鼠被停药并且如上所述允许残余的肿瘤继续生长。
在口服给药11个连续日之后，本发明的实施例#38与媒介物处理组 的平均肿瘤重量相比产生最终肿瘤重量的剂量依赖性降低，在50mg/kg 剂量下观察到肿瘤质量的完全消退。(参见图2)。
在研究过程中小鼠每周称重三次(M、W、F)，并且每天在给药时检 查任何有害的、与药物相关的副作用的明显临床征兆。对于本发明的实 施例#38，没有观察到明显的毒性，并且在高达200mg/kg/天的剂量下在 11天的治疗过程中没有观察到对体重的显著不利影响(参见图3)。总地 说来，在所有的剂量组中，相对于起始体重，没有显著的体重减轻，表 明本发明的实施例#38被良好耐受。
为了进一步确立本发明的实施例#38到达肿瘤组织中的期望靶，测 量了得自用媒介物处理的小鼠和用化合物处理的小鼠的肿瘤组织中的 FLT3磷酸化水平。本发明的实施例#38的结果表示在图4中。对于这项 药效动力学研究，将来自用媒介物处理的对照组的6只小鼠的亚组随机 分为三组，每组2只小鼠，然后用另一剂量的媒介物或化合物(10和100 mg/kg，po)处理。在6小时后收获肿瘤，并且快速冻结，用于通过蛋白 质印迹评价FLT3磷酸化。
将收获的肿瘤冻结并以如下方式进行处理用于进行FLT3磷酸化的 免疫印迹分析：200mg肿瘤组织在补充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和 蛋白酶抑制剂(Sigma Cat#P8340)的裂解缓冲液(50mM Hepes、150mM NaCl、10％甘油、1％Triton-X-200、10mM NaF、1mM EDTA、1.5mM MgCl2、10mM焦磷酸钠)中杜恩斯匀浆。通过在4℃下在1000xg离心 5分钟除去不溶性碎片。将澄清的裂解液(15mg总蛋白，10mg/ml，在裂 解缓冲液中)与10μg的与琼脂糖结合的抗FLT3抗体，克隆C-20(Santa Cruz cat#sc-479ac)在和缓搅拌下在4℃培养2小时。然后将得自肿瘤裂 解产物的经免疫沉淀的FLT3用裂解缓冲液洗涤四次，并且通过 SDS-PAGE进行分离。将SDS-PAGE凝胶转移到硝化纤维，并且用抗磷 酸酪氨酸抗体(克隆-4G10，UBI cat.#05-777)、然后用碱性磷酸酶结合型 山羊抗小鼠二次抗体(Novagen cat.#401212)进行免疫印迹。蛋白质的检 测通过使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging系统(Molecular Dynamics，Sunyvale，CA)测量碱性磷酸酶与底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲 基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二铵盐(DDAO磷酸盐)(Molecular Probes cat.#D 6487)反应的荧光产物进行。然后将印迹剥离并且用抗FLT3抗体再次探 测，用于磷酸化信号的归一化。
如图4中说明的，在100mg/kg下的单剂量的本发明的实施例#38 在MV4-11肿瘤中，与得自用媒介物处理的小鼠的肿瘤(肿瘤1和2)相比， 产生FLT3磷酸化水平的生物学显著降低(上图，肿瘤5和6)。(总的FLT3 表示在下方图中)。在用10mg/kg化合物处理的动物(肿瘤3-4)中也发生 磷酸化的部分降低。这些结果进一步证明，本发明的化合物事实上与期 望的肿瘤中FLT3靶相互作用。
治疗/预防的方法
本发明包括本发明的化合物抑制细胞或受试者的FLT3激酶活性、 或治疗受试者中与FLT3激酶活性或表达有关的病症的用途。
在这个方面的一个实施方案中，本发明提供降低或抑制细胞中FLT3 激酶活性的方法，包括使本发明的化合物接触细胞的步骤。本发明还提 供降低或抑制受试者的FLT3激酶活性的方法，包括对受试者给予本发 明的化合物的步骤。本发明另外提供抑制细胞中细胞增殖的方法，包括 使细胞接触本发明的化合物的步骤。
细胞或受试者中的FLT3激酶活性可以通过本领域公知的方法测 定，例如本文中描述的FLT3激酶试验。
如本文中使用的，术语“受试者”是指已经成为治疗、观察或实验的 对象的动物，优选哺乳动物，最优选人。
如本文中使用的，术语“接触”是指将化合物加入到细胞中，使得化 合物被细胞吸收。
在这个方面的其它实施方案中，本发明提供预防和治疗学方法，用 于治疗处于形成细胞增殖性病症或FLT3相关病症危险下(或对形成所述 病症敏感)的受试者。
在一个实例中，本发明提供预防受试者中细胞增殖性病症或FLT3 相关病症的方法，包括对受试者给予预防有效量的药物组合物，该药物 组合物包括本发明的化合物和可药用的载体。所述预防剂的给予可以在 表现出细胞增殖性病症或FLT3相关病症的症状特征之前进行，使得疾 病或病症得到预防，或者做为选择，延迟疾病或病症的进展。
在另一个实例中，本发明涉及治疗受试者中细胞增殖性病症或FLT3 相关病症的方法，包括对受试者给予治疗有效量的药物组合物，该药物 组合物包括本发明的化合物和可药用的载体。所述治疗剂的给予可以与 表现出该病症的症状特征同时进行，这样所述治疗剂起到用于校正细胞 增殖性病症或FLT3相关病症的治疗的作用。
术语“预防有效量”是指由研究人员、兽医、内科医生、或其它 临床医师所探求的在受试者中抑制或延迟病症发作的活性化合物或药 物的量。
在本文中使用的术语“治疗有效量”是指由研究人员、兽医、内 科医生或其它临床医师所探求的在受试者中引起生物学或医学反应的 活性化合物或药物的量，所述反应包括减轻所治疗的疾病或病症的症 状。
测定包括本发明化合物的药物组合物的治疗和预防有效剂量的方 法在本文中公开并且是本领域中已知的。
如本文中使用的，术语“组合物”意在包括包含特定量的特定组分的 产物，以及由特定量的特定组分的组合直接或间接得到的任何产物。
如本文中使用的，术语“FLT3相关病症”、或“与FLT3受体有关 的病症”、或“与FLT3受体酪氨酸激酶相关的病症”包括与FLT3活性 相关或涉及FLT3活性(例如FLT3的过分活动)的疾病、和伴随有这些疾 病的状况。术语“FLT3的过分活动”是指下述之一，1)在通常不表达 FLT3的细胞中的FLT3表达；2)由通常不表达FLT3的细胞进行的FLT3 表达；3)引起不需要的细胞增殖的增加的FLT3表达；或4)引起FLT3 结构性活化的突变。“FLT3相关病症”的例子包括由于FLT3的量异常 高或FLT3突变引起FLT3过度刺激而产生的病症、或由于FLT3的量异 常高或FLT3突变引起FLT3活性异常高而产生的病症。已知FLT3的过 分活动在许多疾病的发病机理，包括下列的细胞增殖性病症、肿瘤病症 和癌症中被牵涉。
术语“细胞增殖性病症”是指对多细胞机体产生损害(即，不适或缩 短预期寿命)的在多细胞机体中一种或多种细胞亚型的有害的细胞增殖。 细胞增殖性病症可以在不同类型的动物和人中出现。如本文中使用的， “细胞增殖性病症”包括肿瘤病症。
如本文中使用的，“肿瘤病症”是指由异常或不受控制的细胞生长 产生的肿瘤。肿瘤病症的例子包括但不限于造血功能障碍，诸如例如， 骨髓增生异常，例如血小板增多、原发性血小板增多(ET)、特发性骨髓 外化生、骨髓纤维化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纤维化(MMM)、慢性特 发性骨髓纤维化(IMF)、真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少症和恶化前 脊髓发育不良综合征；癌症，例如神经胶质瘤癌、肺癌、乳癌、结肠直 肠癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌，和血液学 恶性肿瘤，包括脊髓发育不良、多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。血液 学恶性肿瘤的例子包括，例如白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇 金病(也称为霍奇金淋巴瘤)、和骨髓瘤——例如，急性淋巴细胞白血病 (ALL)、急性粒细胞白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性 淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性嗜中性粒细胞白 血病(CNL)、急性未分化细胞白血病(AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤 (ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)、 成人T细胞ALL、伴有三谱系脊髓发育不良AML(AML/TMDS)、混合型 谱系白血病(MLL)、脊髓发育不良综合征(MDS)、骨髓增生异常(MPD)、 和多发性骨髓瘤(MM)。
在这个方面的另一个实施方案中，本发明包括用于治疗或抑制受试 者的细胞增殖性病症或FLT3相关病症发作的组合治疗。组合治疗包括 对受试者给予治疗或预防有效量的本发明的化合物、和一种或多种其它 抗细胞增殖性治疗，包括化疗、放射治疗、基因治疗和免疫治疗。
在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物可与化疗组合给予。 如本文中使用的，化疗是指涉及化疗剂的治疗。各种化疗剂可用于本文 中公开的组合治疗方法。被考虑作为示例的化疗剂包括但不限于：铂化 合物(如顺铂，卡铂，奥沙利铂)；紫杉烷化合物(如，紫杉醇、多西他赛)； 喜树碱化合物(伊立替康、拓扑替康)；长春花生物碱(如，长春新碱、长 春碱、长春瑞滨)；抗肿瘤核苷衍生物(如，5-氟尿嘧啶、亚叶酸、吉西 他滨、卡培他滨)；烷化剂(如，环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、塞替 派)；表鬼臼毒素/鬼臼毒素(如依托泊苷、替尼泊苷)；芳香酶抑制剂(如， 阿那曲唑、来曲唑、依西美坦)；抗雌激素化合物(如，他莫昔芬、氟维 司群)、抗叶酸剂(如，培美曲塞(pemetrexed)二钠)；低甲基化药物(如， 阿扎胞苷)；生物制剂(如，吉姆单抗、西妥昔单抗、利妥西单抗、帕妥 珠单抗(pertuzumab)、曲妥珠单抗、贝伐单抗、埃罗替尼)；抗生素/蒽环 类(如伊达比星、放线菌素D、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、丝裂 霉素C、放线菌素D、洋红霉素、道诺霉素)；抗代谢物(如，氨基碟呤、 氯法拉宾、阿糖胞苷、甲氨蝶呤)；微管蛋白粘合剂(如考布他汀、秋水 仙碱、诺考达唑)；拓扑异构酶抑制剂(如，喜树碱)。另外有用的药物包 括维拉帕米，一种钙拮抗剂，被认为可用于与抗肿瘤剂组合以在对所接 受的化疗剂耐受的肿瘤细胞中建立化学敏感性和加强这种化合物在药 物敏感性恶性肿瘤中的效力。参见Simpson WG，The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapy.Cell Calcium.1985 Dec； 6(6)：449-67。另外，仍有化疗剂被考虑可用于与本发明的化合物组合。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的化合物可与放射治疗组合 给予。如本文中使用的，“放射治疗”是指包括使有需要的受试者暴露于 辐射下的治疗。这种治疗是本领域技术人员已知的。放射治疗的适当模 式与已用于其中单独使用放射治疗或将放射治疗与其它化疗药物组合 的临床治疗的那些模式相似。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的化合物可与基因治疗组合 给予。如本文中使用的，“基因治疗”是指靶向肿瘤发展所涉及的特定基 因的治疗。可能的基因治疗策略包括恢复缺陷型癌症抑制基因、用与编 码生长因子及其受体的基因对应的反义DNA进行细胞转导或转染、基 于RNA的策略例如核酶、RNA诱饵、反义信使RNA和小干扰性 RNA(siRNA)分子和所谓的“自杀基因”。
在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物可与免疫治疗组合给 予。如本文中使用的，“免疫治疗”是指通过对肿瘤发展所涉及的特定蛋 白质为特异性的抗体而靶向这种蛋白质的治疗。例如，针对血管内皮细 胞生长因子的单克隆抗体已经被用于治疗癌症。
在除了本发明的化合物之外使用第二种药物时，两种药物可同时给 予(如以单独的或单一的组合物形式)、以任何顺序、在大约相同的时间、 或根据单独的给药方案连续给予。在后一种情况中，两种化合物在足够 保证实现有利或协同效应的时间段内并且以足够保证实现有利或协同 效应的量和方式给予。应该理解，优选的给予方法和给予顺序及组合中 各组分的各自的剂量和方案根据要与本发明的化合物结合给予的特定 的化疗剂、它们的给药途径、所要治疗的特定的肿瘤、和所要治疗的特 定的宿主而定。
如本领域普通技术人员理解的，化疗剂的适当剂量一般类似于或小 于已经用于其中将化疗药物单独给予或与其它化疗药物组合给予的临 床治疗的那些剂量。
最佳的给药方法和顺序及剂量和给药方案可由本领域技术人员使 用常规方法并且考虑本文中所述的信息容易地确定。
只作为示例，铂化合物有利地以每平方米体表面积1到500 mg(mg/m2)的剂量给予，例如50到400mg/m2，具体地，顺铂为约75mg/m2 剂量，卡铂为约300mg/m2剂量每疗程。顺铂口服不能吸收，因此必须 通过静脉内、皮下、肿瘤内或腹膜内注射递送。
只作为示例，紫杉烷化合物有利地以每平方米体表面积50到400 mg(mg/m2)的剂量给予，例如75到250mg/m2，具体地，紫杉醇为约175 到250mg/m2剂量，多西他赛为约75到150mg/m2每疗程。
只作为示例，喜树碱化合物有利地以每平方米体表面积0.1到400 mg(mg/m2)的剂量给予，例如1到300mg/m2，具体地，伊立替康为约100 到350mg/m2剂量，拓扑替康为约1到2mg/m2每疗程。
只作为示例，长春花生物碱可有利地以每平方米体表面积2到30 mg(mg/m2)的剂量给予，具体地，长春碱为约3到12mg/m2，长春新碱 为约1到2mg/m2剂量，长春瑞滨为约10到30mg/m2剂量每疗程。
只作为示例，抗肿瘤核苷衍生物可有利地以每平方米体表面积200 到2500mg(mg/m2)的剂量给予，例如，700到1500mg/m2。5-氟尿嘧啶 (5-FU)通常以200到500mg/m2(优选3到15mg/kg/天)的剂量通过静脉内 给予。吉西他滨有利地以约800到1200mg/m2的剂量给予，卡培他滨有 利地以约1000到2500mg/m2每疗程给予。
只作为示例，烷化剂可有利地以每平方米体表面积100到500 mg(mg/m2)的剂量给予，例如，120到200mg/m2，具体地，环磷酰胺的 剂量为约100到500mg/m2，苯丁酸氮芥的剂量为约0.1到0.2mg/kg体 重，卡莫司汀的剂量为约150到200mg/m2，和洛莫司汀的剂量为约100 到150mg/m2每疗程。
只作为示例，鬼臼毒素衍生物可有利地以每平方米体表面积30到 300mg(mg/m2)的剂量给予，例如50到250mg/m2，具体地，依托泊苷的 剂量为约35到100mg/m2，替尼泊苷为约50到250mg/m2每疗程。
只作为示例，蒽环类衍生物可有利地以每平方米体表面积10到 75mg(mg/m2)的剂量给予，例如15到60mg/m2，具体地，多柔比星的剂 量为约40到75mg/m2，柔红霉素的剂量为约25到45mg/m2，伊达比星 的剂量为约10到15mg/m2每疗程。
只作为示例，抗雌激素化合物可有利地以每日约1到100mg的剂量 给予，根据特定的药物和要治疗的状况而定。他莫昔芬有利地以5到50 mg的剂量口服给予，优选10到20mg每天两次，持续治疗到充分的时 间以实现和维持治疗效果。托瑞米芬有利地以一天一次约60mg的剂量 口服给予，持续治疗到充分的时间以实现和维持治疗效果。阿那曲唑有 利地以一天一次约1mg的剂量口服给予。屈洛昔芬有利地以约20-100mg 一天一次口服给予。雷洛昔芬有利地以一天一次约60mg的剂量口服给 予。依西美坦有利地以一天一次约25mg的剂量口服给予。
只作为示例，生物制剂可有利地以约每平方米体表面积约1到5 mg(mg/m2)的剂量给予，或者如果不同，则如本领域中已知的。例如， 曲妥珠单抗有利地以1到5mg/m2的剂量给予，具体地，为2到4mg/m2 每疗程。
剂量可每疗程给予例如一次、两次或多次，其可按例如每7、14、 21或28天重复。
本发明的化合物可以系统地对受试者给予，例如静脉内、口服、皮 下、肌内、皮内、或非胃肠给予。本发明的化合物也可局部给予受试者。 局部递送系统的非限制性例子包括使用腔内医疗装置，包括血管内给药 导管、金属丝、药理学支架和腔内铺面(endoluminal paving)。本发明的 化合物还可与靶向剂组合给予受试者，以实现化合物在目标区域的高局 部浓度。另外，本发明的化合物可配制用于快速释放或缓慢释放，以维 持药物或药剂与靶组织接触几小时到几周的时间。
本发明还提供药物组合物，包括与可药用载体结合的本发明的化合 物。药物组合物可包含约0.1mg到1000mg，优选约100到500mg的 化合物，并且可构成为适合于所选给药方式的任何形式。
短语“可药用”是指在对动物、或对人适当地给予时，不会产生不利 的、过敏的或其它不良反应的分子实体和组合物。兽医学用途同样地包 括在本发明之内，并且“可药用”制剂包括用于临床和/或兽医用途的制 剂。
载体包括必要的和惰性的药物赋形剂，包括但不限于粘合剂、助悬 剂、润滑剂、调味剂、甜味剂、防腐剂、染料、和包衣。适合于口服给 予的组合物包括固体形式，例如丸剂、片剂、扁囊剂、胶囊(分别包括立 即释放、定时释放和持续释放制剂)、颗粒剂、和粉末剂，和液体形式， 例如溶液剂、糖浆剂、酏剂、乳剂、和悬浮剂。用于非胃肠给予的形式 包括无菌溶液剂、乳剂和悬浮剂。
本发明的药物组合物还包括用于缓慢释放本发明的化合物的药物 组合物。组合物包括缓释载体(典型地，为聚合物载体)和本发明的化合 物。
缓释的生物可降解的载体为本领域中公知的。这些是可以形成在其 中俘获活性化合物的粒子并且在适当的环境(如，水性、酸性、碱性环境 等)中缓慢降解/溶解并且从而在体液中降解/溶解和释放活性化合物的 那些材料。粒子优选是纳米粒子(即，直径为约1到500nm，优选直径 为约50-200nm，最优选直径为约100nm)。
本发明还提供制备本发明的药物组合物的方法。根据常规的药物混 配技术将作为活性成分的本发明的化合物与药物载体紧密混合，载体可 以为各种形式，根据期望给予的制剂形式而定，例如，口服、或非肠道 例如肌内给予。在制备口服剂型的组合物时，可使用任何通常的药物介 质。因此，对于液体口服制剂，诸如例如，悬浮剂、酏剂和溶液剂，适 合的载体和添加剂包括水、二醇、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色 剂等等；对于固体口服制剂，诸如例如，粉剂、胶囊、扁囊剂、软胶囊 和片剂，适合的载体和添加剂包括淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、 粘合剂、崩解剂等等。由于易于给予，片剂和胶囊代表了最有利的口服 剂量单位形式，在这些情况中，显然要利用固体药物载体。如果期望， 片剂可通过标准技术进行包糖衣或包肠溶衣。对于胃肠外给予，载体通 常包括无菌水，但是可包括其它成分，例如用于诸如有助于溶解度或便 于保存的目的。也可制备可注射悬浮剂，在该种情况下，可采用适当的 液体载体、助悬剂等。在用于缓慢释放的制剂中，首先将缓释载体(典型 地为聚合物载体)和本发明的化合物溶解或分散在有机溶剂中。然后将得 到的有机溶液加入到水溶液中，得到水包油型乳液。优选地，水溶液包 括表面活性剂。随后，将有机溶剂从水包油型乳液中蒸发掉，得到包含 缓释载体和本发明化合物的粒子的胶态悬浮剂。
本文中的药物组合物，每剂量单位例如片剂、胶囊、粉末剂、注射 剂、茶匙剂等将包含递送如上所述有效剂量所需量的活性成分。本文中 的药物组合物每单位剂量(例如片剂、胶囊、粉末剂、注射剂、栓剂、茶 匙剂等)包含每天约0.01mg到200mg/kg体重的范围。优选地，该范围 为每天约0.03到约100mg/kg体重，最优选地，为每天约0.05到约 10mg/kg体重。化合物可以按照每天1-5次的方案给予。然而，剂量可 根据患者的需要、所治疗状况的严重程度和所采用的化合物而定。可以 采用每天给药或一定时间间隔后给予(post-periodic dosing)。
优选地，这些组合物为单位剂量形式，例如片剂、丸剂、胶囊、粉 末剂、颗粒剂、无菌的胃肠外溶液剂或悬浮剂、计量式气雾剂或液体喷 雾剂、滴剂、安瓿剂、自喷射装置或栓剂；用于口服肠胃外、鼻内、舌 下或直肠方式给予，或用于通过吸入或吹入方式给予。或者，组合物可 为每周一次或每月一次给予的形式；例如活性化合物的不溶性盐(例如癸 酸盐)可配置为提供用于肌肉内注射的储库型制剂。对于制备固体组合物 例如片剂，将主要活性成分与药物载体(例如常规的压片成分，例如玉米 淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢钙、或 树胶)和其它药物稀释剂(例如水)混合，形成包含本发明化合物及其可药 用盐的均匀混合物的固体预制剂组合物。当提及这些预制剂组合物为均 匀的时候，意指活性成分均匀地分散在组合物中，使得组合物可以容易 地被再分成相等的有效剂量形式，例如片剂、丸剂和胶囊。然后将这种 固体预制剂组合物再分成上述类型的单位剂量形式，包含0.1到约500 mg的本发明的活性成分。新型的组合物的片剂或丸剂可以包衣，或者 以另外方式配制，以提供具有延长作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂 可包括内部剂量组份和外部剂量组份，后者为前者的包膜的形式。两种 组分可以由足以抵抗在胃中崩解并且允许内部组份完整进入十二指肠 或延迟释放的肠溶层隔开。有多种材料可用于这种肠溶层或包衣，这种 材料包括具有虫胶、乙酰基醇(acetyl alcohol)和醋酸纤维素等物质的 多种聚合物酸类。
其中可混合本发明的化合物用于口服或注射给予的液体形式包括 水溶液、适当调味的糖浆、水或油悬浮剂、和用食用油(例如棉子油、芝 麻油、椰子油或花生油)调味的乳剂，以及酏剂和类似的药物媒介物。用 于水悬浮剂的适当的分散剂或助悬剂包括合成的和天然的树胶，例如黄 蓍胶、阿拉伯胶、藻酸盐、右旋糖酐、羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、 聚乙烯吡咯烷酮或明胶。适当调味的助悬剂或分散剂的液体形式也可包 括合成和天然的树胶，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、甲基纤维素等。对于胃 肠外给药，期望无菌的悬浮剂和溶液。在期望静脉内给予时，采用通常 包含适当防腐剂的等渗制剂。
有利地，本发明的化合物可以单次日剂量给予，或者可将总的日剂 量分成每天二、三或四次的等分剂量给予。此外，本发明的化合物可通 过局部使用的适当的鼻内介质以鼻内形式给予，或者通过本领域技术人 员公知的透皮的皮肤用贴片形式给予。为了以透皮递送系统的形式给 予，在整个给药方案中剂量给药当然总是持续的而不是间断的。
例如，对于以片剂或胶囊形式口服给予，可以将活性药物组份与口 服的无毒可药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等混合。此外，当期望或 必要时，也可将适当的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂混合在混合物 中。适当的粘合剂包括但不限于淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β- 乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶)或油酸钠、 硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不 限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
本发明的产物的日剂量可以在每名成年人每天1到5000mg的宽范 围内变化。对于口服给予，优选组合物以片剂形式提供，包含0.01、0.05、 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250 和500毫克活性成分，对所治疗患者进行对症剂量调整。本发明的化合 物的有效量通常以每天约0.01mg/kg到约200mg/kg体重的剂量提供。 具体地，该范围为每天约0.03到约15mg/kg体重，更优选地，为每天 约0.05到约10mg/kg体重。本发明的化合物可根据每天最多四次或更多 次的方案给予，优选每天1到2次。
给予的最佳剂量可以容易地由本领域技术人员确定，并且随使用的 具体化合物、给予方式、制剂的浓度、给予方式、和疾病状况的进展而 变化。另外，与治疗的具体患者有关的因素，包括患者年龄、重量、膳 食和给予时间，将导致需要调整剂量。
本发明的化合物也可以脂质体递送系统(例如小单层脂质体、大单层 脂质体、和多层脂质体)的形式给予。脂质体可以由各种脂质形成，包括 但不限于两亲性脂质，例如卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆 碱、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸类、磷脂酰肌醇、二 酰基三甲铵丙烷、二酰基二甲铵丙烷和硬脂胺，中性类脂(例如甘油三 酯)，及其组合。它们可包含胆固醇，或者不含胆固醇。
给予本发明的化合物的另一个供选方法可通过使化合物与靶向试 剂结合，所述靶向试剂引导结合物到达其预定的作用位置，即到达血管 内皮细胞、或到达肿瘤细胞。抗体靶向试剂和非抗体靶向试剂都可使用。 由于靶向试剂与其相应的结合配对体之间的特异性相互作用，本发明的 化合物可以较高的局部浓度在目标位置或目标位置附近给予，并且由此 更有效地治疗目标位置的病症。
抗体靶向试剂包括与肿瘤细胞、肿瘤维管结构、或肿瘤基质的可靶 向的或可接近的组分结合的抗体或其抗原结合片段。肿瘤细胞、肿瘤维 管结构或肿瘤基质的“可靶向的或可接近的组分”优选为表面表达的、表 面可接近的或表面定位的组分。抗体靶向试剂还包括与从坏死的肿瘤细 胞释放的胞内组分结合的抗体或其抗原结合片段。优选地，这种抗体是 与不溶性胞内抗原结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述不溶性胞 内抗原存在于可被诱导为可渗透的细胞中、或存在于实质上所有的赘生 细胞和正常细胞的空细胞中，但是在哺乳动物的正常活细胞外部不存在 或不可接近。
如本文中使用的，术语“抗体”广泛地是指任何免疫结合试剂，例如 IgG、IgM、IgA、IgE、F(ab’)2，单价碎片，例如Fab′、Fab、Dab，以及 工程抗体例如重组抗体、人源化抗体、双特异性抗体等等。抗体可以为 多克隆抗体或单克隆抗体，但是优选单克隆抗体。本领域已知有非常广 泛的一系列抗体对实质上任何实体瘤类型的细胞表面有免疫特异性(参 见Summary Table on monoclonal antibodies for solid tumors，在Thorpe 等人的美国专利5,855,866中)。本领域技术人员已知产生和分离针对 肿瘤的抗体的方法(参见Thorpe等人的美国专利5,855,866和Thorpe等 人的美国专利6,34,2219)。
使治疗性部分与抗体结合的技术是公知的。(参见例如，Amon等人， ″Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy″， in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Reisfeld等人，(eds.)，pp. 243-56(Alan R.Liss，Inc.1985)；Hellstrom等人，″Antibodies For Drug Delivery″，in Controlled Drug Delivery(2nd Ed.)，Robinson等人，(eds.)，pp. 623-53(Marcel Dekker，Inc.1987)；Thorpe，″Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review″，in Monoclonal Antibodies ′84：Biological和Clinical Applications，Pinchera等人，(eds.)，pp. 475-506(1985))。相似的技术还可用于使本发明的化合物附着于非抗体靶 向试剂。本领域技术人员会知道或能确定与非抗体靶向试剂例如小分 子、寡肽、多糖或其它多阴离子化合物形成结合物的方法。
尽管在血液中适当稳定的任何连接部分可用于将本发明的化合物 连接于靶向试剂，但是优选生物学可解离的键和/或可选择性裂解的间隔 基或连接体。“生物学可解离的键”和“可选择性裂解的间隔基或连接体” 在循环中仍具有适当的稳定性，但是只有或优先在一定条件下，即，在 某一环境中、或在与特定的试剂接触时，可解离、可裂解或可水解。这 种键包括例如二硫键和三硫键和酸不稳定键，如美国专利5,474,765和 5,762,918中描述的；和酶敏感性键，包括肽键、酯、酰胺、磷酸二酯和 糖苷，如美国专利5,474,765和5,762,918中描述的。这种选择性释放的 设计特点有助于在预定的目标位置从结合物释放化合物。
本发明另外提供治疗FLT3相关病症特别是肿瘤的方法，包括对受 试者给予治疗有效量的与靶向试剂结合的本发明的化合物。
当将蛋白质例如抗体或生长因子、或多糖用作靶向试剂时，优选它 们以可注射的组合物形式给予。可注射的抗体溶液可在2分钟到约45 分钟，优选10到20分钟给予到静脉、动脉或脊髓液中。在某些情况下， 皮内和腔内给予对于局限于接近皮肤的特定区域的范围和/或接近特定 体腔的肿瘤是有利的。另外，鞘内给予也可用于脑中的肿瘤。
与靶向试剂结合的本发明的化合物的治疗有效剂量根据个体、疾病 类型、疾病状态、给药方法和其它临床变量而定。有效剂量可使用得自 动物模型(包括本文中提供的那些)的数据容易地测定。
尽管前述说明书教导了本发明的原则，提供实施例用于示例性目 的，但是应该理解，本发明的实践包括所有通常的变体、改进和/或修改， 其都落在权利要求及其等价内容的范围内。
相关申请的交叉引用
本申请要求2005年10月18日提交的美国专利临时申请No. 60/727,687的优先权，所述申请被全文并入本文。
从以下本发明的详细说明和权利要求显而易见本发明的其它特征 和利益。
附图简述
图1表示本发明实施例#38的口服给予对裸鼠中MV4-11肿瘤异种 移植物生长的影响。
图2表示本发明实施例#38的口服给予对裸鼠中MV4-11肿瘤异种 移植物的最后重量的影响。
图3表示本发明实施例#38的口服给予对小鼠体重的影响。
图4表示在从用本发明实施例#38处理的小鼠得到的MV4-11肿瘤 中的FLT3磷酸化作用。
发明详述
术语“包括”、“包含”、和“含有”用在本文中表示其开放式的、非限 制性的意义。
缩写
如本文中使用的，以下缩写意在具有以下含义(另外的缩写在需要时 在说明书中提供)：
ATP 三磷酸腺苷
Boc或BOC 叔-丁氧基羰基
DCM 二氯甲烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DIEA 二异丙基乙基胺
EDCI 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
EDTA 乙二胺四乙酸
EtOAc 乙酸乙酯
FBS 胎牛血清
FP 荧光偏振
GM-CSF 粒细胞和巨噬细胞集落刺激因子
HOBT或HOBt 1-羟基苯并三唑水合物
HPβCD 羟基丙基β-环糊精
HRP 辣根过氧化物酶
LC/MS(ESI) 液相色谱/质谱(电喷射离子化)
MeOH 甲醇
NMR 核磁共振
PBS 磷酸盐缓冲盐水
RPMI Rosewell Park Memorial Institute
RT 室温
RTK 受体酪氨酸激酶
SDS-PAGE 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
定义
术语“烷基”是指具有最多12个碳原子的直链和支链的基团，优选 最多6个碳原子，除非另有陈述，并且包括但不限于甲基、乙基、丙基、 异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、异己 基、庚基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。
术语“羟基烷基”是指具有最多6个碳原子的直链和支链的基团，其 中一个氢原子已经被OH基团代替。
术语“羟基烷基氨基”是指羟基烷基基团，其中碳链的一个氢原子已 经被氨基代替，其中氮是与分子的其余部分连接的点。
术语“环烷基”是指由3到8个碳原子组成的饱和或部分不饱和的 环。在环上可以任选地存在有最多四个烷基取代基。实例包括环丙基、 1，1-二甲基环丁基、1，2，3-三甲基环戊基、环己基、环戊烯基、环己烯基、 和4，4-二甲基环己烯基。
术语“二氢磺酰代吡喃基(dihydrosulfonopyranyl)”是指以下基团：
术语“羟基烷基”是指与烷基链上的任何碳原子结合的至少一个羟 基基团。
术语“氨基烷基”是指与烷基链上的任何碳原子结合的至少一个伯 或仲氨基基团，其中烷基是与分子其余部分连接的点。
术语“烷基氨基”是指具有一个烷基取代基的氨基，其中氨基是与分 子的其余部分连接的点。
术语“二烷基氨基”是指具有两个烷基取代基的氨基，其中氨基是与 分子的其余部分连接的点。
术语“杂芳族的”或“杂芳基”是指5-7元的单环系统或8-10元的二环 芳族环系统，其任何环可以包括一到四个选自N、O或S的杂原子，其 中氮和硫原子可以以任何允许的氧化态存在。实例包括苯并咪唑基、苯 并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异 噁唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、 噻唑基和噻吩基。
术语“杂原子”是指氮原子、氧原子或硫原子，其中氮和硫原子可以 以任何允许的氧化态存在。
术语“烷氧基”是指与氧原子结合的具有最多12个碳原子的直链或 支链的基团，除非另有陈述。实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙 氧基和丁氧基。
术语“芳基”是指在环中包含6到12个碳的单环或二环芳族环系统。 在环上可以任选地存在有烷基取代基。实例包括苯、联苯和萘。
术语“芳烷基”是指包含芳基取代基的C1-6烷基。实例包括苄基、苯 乙基或2-萘甲基。
术语“磺酰基”是指基团-S(O)2Ra，其中Ra为氢、烷基、环烷基、卤 代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基。“磺酰化试剂”将-S(O)2Ra 基团添加到分子。
式I
本发明包括式I的化合物(本文中称为“本发明的化合物”)或其溶剂 化物、水合物、互变异构体或可药用盐的用法：
其中：
A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
W为吡咯基(包括1H-吡咯-2-基)、咪唑基(包括1H-咪唑-2-基)、异噁 唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一个可以 通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4- 三唑基、或呋喃基可包含一个与任何另外的碳原子连接的-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、噻吩基、二氢磺酰代吡喃 基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被 以下各个基团中的一个或两个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基(包括4，4-二 甲基环己烯基、4-甲基环己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)，条件 是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于环A；
X为
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为相对地顺式或反式取向；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，另外的条件是如果E为N并且Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
R3为氢、苯基、羟基烷基氨基(包括2-羟基乙基氨基)、(羟基烷基)2 氨基、羟基烷基(烷基)氨基(包括1-羟基乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包 括甲基氨基)、氨基烷基(包括2-氨基异丙基)、二羟基烷基(包括1，3-二羟 基异丙基、1，2-二羟基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、二烷基氨基(包括二 甲基氨基)、羟基烷基(包括1-羟基乙-2-基)、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2- 烷基-R4(包括-SO2CH3)、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地 包含选自S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或 6元环可为饱和的、部分不饱和的或芳香的(包括哌啶基、吗啉基、咪唑 基、和吡啶基)，其中该5或6元环中的芳香氮可作为N-氧化物存在(包 括吡啶基N-氧化物)，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基 氨基、或烷氧基取代(包括1-甲基咪唑基)；R3也可以不存在，条件是当 E为氮时，R3不能不存在；
和
R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基。
实施方案
本发明的实施方案包括式I的化合物，其中：
a)A为苯基或吡啶基，其任一个可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2、-NH(烷 基)、-N(烷基)2、-S(烷基)、-O(烷基)、或4-氨基苯基之一取代；
b)A为苯基；
c)W为吡咯基(包括1H-吡咯-2-基)、咪唑基、(包括1H-咪唑-2-基)、 异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一个 可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、 1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3-取代基；
d)W为呋喃-2-基、1H-吡咯-2-基、或1H-咪唑-2-基，其任一个可在 4或5位的碳上被-CN取代；
e)W为3H-2-咪唑基-4-甲腈或5-氰基-1H-吡咯-2-基；
f)W为3H-2-咪唑基-4-甲腈；
g)R2为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、噻吩基、二氢磺酰代吡 喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地 被以下各个基团中的一个或两个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基(包括4，4- 二甲基环己烯基、4-甲基环己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)，条 件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于环A；
h)R2为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、其可被一个或两个C(1-3) 烷基取代(包括4，4-二甲基环己烯基、4-甲基环己烯基)；
i)R2为环己烯基，其可被一个或两个C(1-3)烷基取代；
j)R2为环己烯基、4，4-二甲基环己烯基、或4-甲基环己烯基；
k)R2为环己烯基；
l)X为
m)X为
n)X为
o)Z为CH或N；
p)Z为CH；
q)D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
r)D1和D2各自为氢；
s)D3和D4各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
t)D3和D4各自为氢；
u)D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可为顺式或反式相对取向；
v)Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、 或杂芳烷基；
w)E为N、S、O、SO或SO2，条件是如果同时满足以下三个条件： Qa不存在、Qb不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点 为N，则E不能是N；
x)E为N，条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存 在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是 N；
y)Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
z)Qa为不存在、-CH2CH2-、或C(O)；
aa)Qa为不存在、或C(O)；
bb)Qa为C(O)；
cc)Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果 Qa为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E为N和Qa不存 在，则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其 中与Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
dd)Qb为不存在、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa为C(O)，则 Qb不能是C(O)；
ee)Qb为不存在、或C(O)，条件是如果Qa为C(O)，则Qb不能是C(O)；
ff)R3为氢、苯基、羟基烷基氨基(包括2-羟基乙基氨基)、(羟基烷基)2 氨基、羟基烷基(烷基)氨基(包括1-羟基乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包 括甲基氨基)、氨基烷基(包括2-氨基异丙基)、二羟基烷基(包括1，3-二羟 基异丙基、1，2-二羟基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、二烷基氨基(包括二 甲基氨基)、羟基烷基(包括1-羟基乙-2-基)、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2- 烷基-R4(包括-SO2CH3)、-NH2、或包含至少一个杂原子N并且可任选地 包含选自S、SO2、N、和O的另外的杂部分的5或6元环，并且该5或 6元环可为饱和的、部分不饱和的或芳香的(包括哌啶基、吗啉基、咪唑 基、和吡啶基)，其中该5或6元环中的芳香氮可作为N-氧化物存在(包 括吡啶基N-氧化物)，并且该5或6元环可任选地被甲基、卤素、烷基 氨基、或烷氧基取代(包括1-甲基咪唑基)；R3也可不存在，条件是当E 为氮时，R3不能不存在；
gg)R3为氢、苯基、2-羟基乙基氨基、1-羟基乙-2-基(甲基)氨基、甲 基氨基、2-氨基异丙基、1，3-二羟基异丙基、1，2-二羟基乙基、甲氧基、 二甲基氨基、1-羟基乙-2-基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2-、-SO2CH3)、 -NH2、哌啶基、吗啉基、咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物)、或1-甲 基咪唑基；
hh)R3为烷基氨基(包括甲基氨基)、二烷基氨基(包括二甲基氨基)、 或-SO2-烷基-R4(包括-SO2CH3)；
ii)R3为甲基氨基、二甲基氨基、或-SO2CH3；
jj)R3为二甲基氨基；
kk)R4为氢、-OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基、或氨基甲酰基；
和
ll)R4为氢；
和含a)和ll)在内的所述a)到ll)的所有组合。
优选的式I的化合物为其中W被一个-CN取代的那些。
其它优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基，其可被氯、氟、和甲基之一取代；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃 基，其任一个可通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、 噁唑基、1，2，4-三唑基、或呋喃基可包含连接于任何另外的碳原子的一个 -Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、噻吩基、二氢磺酰代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡 啶基、或二氢吡喃基，其任一个可独立地被以下各个基团中的一个或两 个取代：氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡啶基通过碳-碳键连接于 环A；
X为
并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式II中 所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N或SO2；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb 不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不 能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，并且另外的条件是如果E为N和Qa不存 在，则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其 中与Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基 烷基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、吗啉基；R3也可不存 在，条件是当E为氮时，R3不能不存在。
更优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、或1，2，4-三唑基，其任 一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑 基、或1，2，4-三唑基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A。
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N或SO2；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb 不存在、和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不 能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是，如果E是N和Qa不存 在，则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其 中与Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基 烷基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、吗啉基；R3也可不存 在，条件是当E为氮时，R3不能不存在。
更优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基；
W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、或1，2，4-三唑基，其任 一个可以通过任何碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑 基、或1，2，4-三唑基可包含连接于任何另外的碳原子的一个-Cl、-CN、 -NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A.
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存在、 和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是N；
Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)；
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基烷基氨基、(羟基 烷基)2氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、羟基烷基、-COOH、-CONH2、-CN、 -SO2CH3、-NH2、或吗啉基。
特别优选的式I的化合物为其中为以下的那些：
A为苯基；
W为吡咯基、或咪唑基，其中吡咯基、或咪唑基可包含连接于任何 另外的碳原子的一个-Cl、-CN、-NO2、-OMe、或-CF3取代基；
R2为环烷基、呋喃基、或四氢吡啶基，其任一个可独立地被一个或 两个取代基取代，每个取代基选自氯、氟、和C(1-3)烷基，条件是四氢吡 啶基必须通过碳-碳键连接于环A。
X为并且连接于苯基A环的氮取代基的对位，如式 II中所示的；
Z为CH或N；
D1和D2各自为氢或结合在一起形成与氧结合的双键；
D3和D4为氢；
E为N；条件是如果同时满足以下三个条件：Qa不存在、Qb不存在、 和R3为氨基或环状氨基，且其中与E的连接点为N，则E不能是N；
Qa为CO
Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-、或C(O)，条件是如果Qa 为C(O)，则Qb不能是C(O)，和另外的条件是如果E是N和Qa不存在， 则Qb不能是-NH-，另外的条件是如果R3为氨基或环状氨基，且其中与 Qb的连接点为N，则Qb不能是-NH-；
和
R3为氢、哌啶基、羟基烷基氨基、(羟基烷基)2氨基、烷基氨基、二 烷基氨基、咪唑基、1-甲基咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物、羟基烷 基、-COOH、-CONH2、-CN、-SO2CH3、-NH2、或吗啉基。
式I的化合物的实例包括：
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-苯 基]-酰胺、和
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(2-甲基-噻吩基-3-基)-苯 基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另外的实例包括：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢-吡 啶-3-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻 喃-4-基)-苯基]-酰胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰 胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-(4-甲基-哌嗪-1- 基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4- 基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，1-二氧代 -1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺、
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰 胺、和
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺， 及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另外的实例为：
(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 基)-乙酸、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-氨基甲酰基甲基-哌啶-4-基)-2-环己-1- 烯基-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-哌啶-4-基-苯基]- 酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-乙基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-(1-吡啶-2-基甲 基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-1-羟基甲基-乙 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氰基-乙基)-哌啶-4-基]-2-环己-1-烯 基-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-吡啶-2-基甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环戊-1-烯基-4-[1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基 甲基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环戊-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联 吡啶-4-基)-苯基]-酰胺、和
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基-苯 基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的其它实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(1-氧基-吡啶-3-羰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(1-氧基-吡啶-4-羰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(3-吗啉-4-基-丙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 甲酸酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(吡啶-3-羰基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺、
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1- 甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-3H-咪唑-4-基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4- 基)-乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-3-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-2-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、和
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基-苯 基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另一个实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-{2-[(2-羟基-乙基)-甲基 -氨基]-乙酰基}-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另一个实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-二甲基氨基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另一个实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的其它实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(3-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌啶-4-基]-2- 环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐、
4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺双三 氟乙酸盐、
5-氯-4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺 三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)-(2，3-二羟基-丙 酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯 基]-酰胺三氟乙酸盐、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’- 六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐、
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-哌啶-4-基]-2- 环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐、和
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1′-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶-5-基]-酰胺，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
式I的化合物的另外的实例为：
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲基氨基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺、
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[1’-(2-二甲基氨基-乙酰基)-6-(4，4-二甲基- 环己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐、 和
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’-(2-甲烷磺酰 基-乙基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐，
及其溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。
如本文中使用的，术语“本发明的化合物”应该还包括其溶剂化物、 水合物、互变异构体或可药用盐。
可药用盐
如所述的，本发明的化合物还可以作为可药用盐的形式存在。
对于用于药物，本发明的化合物的盐是指无毒的“可药用盐”。FDA 批准的可药用盐形式(参考International J.Pharm.1986，33，201-217；J. Pharm.Sci.，1977，Jan，66(1)，p1)包括可药用的酸式/阴离子型或碱式/阳 离子型的盐。
可药用酸式/阴离子型盐包括但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、 碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸 盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依 托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、glyceptate、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇 酰基对氨苯基砷酸盐、己基间苯二酚盐、哈胺、氢溴化物、氢氯化物、 羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、 马来酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸 盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/磷酸氢 盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、 硫酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、和 三乙基碘。有机或无机酸还包括但不限于氢碘酸、高氯酸、硫酸、磷酸、 丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、草酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、 环己烷氨基磺酸、己糖酸或三氟乙酸。
可药用碱式/阳离子型盐包括但不限于铝、2-氨基-2-羟基甲基-丙烷 -1，3-二醇(又名三(羟基甲基)氨基甲烷、氨基丁三醇(tromethane)或 “TRIS”)、氨、N，N’-二苄基乙二胺(benzathine)、叔丁胺、钙、葡萄糖 酸钙、氢氧化钙、氯普鲁卡因、胆碱、胆碱碳酸氢盐、氯化胆碱、环己 胺、二乙醇胺、乙二胺、锂、LiOMe、L-赖氨酸、镁、葡甲胺、NH3、 NH4OH、N-甲基-D-葡糖胺、哌啶、钾、叔丁醇钾、氢氧化钾(含水的)、 普鲁卡因、奎宁、钠、碳酸钠、2-乙基己酸钠(SEH)、氢氧化钠、或锌。
前体药物
本发明在其范围内还包括本发明的化合物的前体药物。通常，这种 前体药物为该化合物的功能衍生物，其可在体内容易地转化为活性化合 物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给予”包括用本发明的化合物 或其前体药物治疗、改善或预防本文中所述综合症、病症或疾病的含义， 其明显地包括在本发明范围内，即使任一特定的化合物没有明确地披 露。选择和制备适当的前体药物衍生物的常规方法在例如“Design of Prodrugs”，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述。
立体化学异构体
本领域技术人员知道，本发明的某些化合物可在其结构中具有一个 或多个不对称碳原子。本发明在其范围内意在包括本发明的化合物的单 个对映体形式、外消旋混合物、和其中存在对映体过量的对映体混合物。
如本文中使用的术语“单个对映体”定义了本发明的化合物及其N- 氧化物、加成盐、季铵类、以及生理学功能性衍生物可能具有的所有可 能的纯手性形式。
立体化学纯的异构形式可通过应用已知技术原理得到。非对映异构 体可通过物理分离方法分离，例如分步结晶和色谱技术，并且对映体可 通过与光学活性的酸或碱形成的非对映体盐的选择结晶彼此分离，或者 通过手性色谱法彼此分离。也可从适当的立体化学纯的原料、或通过使 用立体选择性反应合成制备纯的立体异构体。
术语“异构体”是指具有相同组成和分子量但是物理和/或化学性质 不同的化合物。这种物质具有相同的原子数和原子种类，但是在结构上 不同。结构差异可以是构成方式(几何异构体)或者在使偏振光平面旋转 的能力方面(对映体)不同。
术语“立体异构体”是指具有相同构造但是它们的原子空间排列不 同的异构体。对映体和非对映体是立体异构体的实例。
术语“手性”是指分子的不能将其与其镜象重叠的结构特性。
术语“对映体”是指彼此为镜像而不能重叠的一对分子之一。
术语“非对映体”是指彼此不是镜像的立体异构体。
符号“R”和“S”表示手性碳原子上取代基的构型。
术语“外消旋物”或“外消旋混合物”是指由等摩尔量的两种对映体组 成的组合物，其中该组合物没有旋光性。
术语“纯手性的”是指对映体纯状态。
术语“旋光性”是指纯手性分子或手性分子的非外消旋混合物旋转 偏振光平面的程度。
应该理解，用于制备本发明的化合物的各种取代基立体异构体、几 何异构体、及其混合物或者是市售的、可以从市售原料合成制备的、或 者可以制备为异构混合物、然后使用本领域技术人员公知的技术拆分异 构体得到。。
异构描述符“R”和“S”在本文中用于描述相对于核心分子的原子构 型，并且意在以在文献中的定义使用(IUPAC Recommendations for Fundamental Stereochemistry(Section E)，Pure Appl.Chem.，1976， 45：13-30)。
本发明的化合物可以通过异构体特异性合成或从异构体混合物拆 分制备为单独的异构体。常规的拆分技术包括使用光学活性的盐形成异 构体对的每种异构体的游离碱(随后分步结晶和回收游离碱)、形成异构 体对的每种异构体的酯或酰胺(随后色谱分离和去除手性辅助剂)或使用 制备型TLC(薄层色谱法)或手性HPLC柱拆分原始材料或最终产物的异 构混合物。
多晶型物和溶剂化物
此外，本发明的化合物可具有一种或多种多晶型物或无定形的结晶 形式，因此意在被包括在本发明范围内。另外，所述化合物可形成溶剂 化物，例如与水形成的溶剂化物(即，水合物)或与常见的有机溶剂形成 的溶剂化物。如本文中使用的，术语“溶剂化物”是指本发明的化合物与 一种或多种溶剂分子的物理缔合。这种物理缔合包括不同程度的离子键 合和共价键合，包括氢键。在某些情况中，溶剂化物能够分离，例如当 一个或多个溶剂分子结合到结晶固体的晶格中时。术语“溶剂化物”意在 包括溶液相和可分离的溶剂化物。适当的溶剂化物的非限制性实例包括 乙醇化物、甲醇化物等。
本发明在其范围内意在包括本发明的化合物的溶剂化物。因此，在 本发明的治疗方法中，术语“给予”包括用本发明的化合物或其溶剂化物 治疗、改善或预防本文中所述综合症、病症或疾病的含义，其明显的包 括在本发明范围内，虽然没有明确地披露。
N-氧化物
本发明的化合物可根据技术上已知的用于将三价氮转化为其N-氧 化物形式的方法被转化为相应的N-氧化物形式。所述N-氧化反应通常 可以通过使起始原料与适当的有机或无机过氧化物反应进行。适合的无 机过氧化物包括例如过氧化氢、碱金属或碱土金属过氧化物，例如过氧 化钠、过氧化钾；适合的有机过氧化物可以包括过氧酸，诸如例如，过 氧苯甲酸或卤素取代的过氧苯甲酸(例如3-氯过氧苯甲酸)、过氧链烷酸 (例如过氧乙酸)、烷基过氧化氢(例如叔丁基过氧化氢)。适当的溶剂是例 如水、低级醇(例如乙醇等)、烃类(例如甲苯)、酮类(例如2-丁酮)、卤代 烃类(例如二氯甲烷)、以及这些溶剂的混合物。
互变异构形式
本发明的化合物还可以作为其互变异构形式存在。尽管在本发明中 没有明确地指出，但是意在将这种形式包括在本发明范围内。
本发明的化合物的制备
在制备本发明的化合物的任何方法中，有必要和/或期望保护任何所 关注分子上的敏感或活性基团。这可以通过常规的保护基来实现，例如 在Protecting Groups，P.Kocienski，Thieme Medical Publishers，2000；和 T.W.Greene & P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd ed.Wiley Interscience，1999中描述的那些。保护基可以使用本领域中已 知的方法在随后的适当阶段被除去。
制备方法
图解1
图解1举例说明制备式I的化合物的一般方法。式1-2的化合物可 以通过式1-1的氨基化合物的邻位卤化(优选溴化)随后通过与硼酸或硼 酸酯的金属催化的偶联反应(Suzuki反应，其中R2M为R2B(OH)2或硼酸 酯)或与锡试剂反应(Stille反应，其中R2M为R2Sn(烷基)3)得到(综述， 参见N.Miyaura，A.Suzuki，Chem.Rev.，95：2457(1995)；J.K.Stille， Angew.Chem，Int.Ed.Engl.，25：508024(1986)和A.Suzuki in Metal-Catalyzed Coupling Reactions，F.Deiderich，P.Stang，Eds.， Wiley-VCH，Weinheim(1988))。式1-1的化合物可为市售的，或者可使用 上述的钯介导的交叉偶联反应从起始原料1-0形成式1-1的化合物。
使1-1溴化的优选条件是在适当的溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺 (DMF)二氯甲烷(DCM)或乙腈中的N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)。金属催化 的偶联(优选Suzuki反应)可以根据标准方法进行，优选在钯催化剂例如 四(三苯膦)合钯(0)(Pd(PPh3)4)、碱水溶液如Na2CO3水溶液、和适合的溶 剂例如甲苯、乙醇、二甲氧基乙烷(DME)、或DMF的存在下进行。
式I的化合物可以通过使式1-2的化合物与羧酸WCOOH根据酰胺 键形成的标准方法反应制备(综述参见：M.Bodansky和A.Bodansky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，NY(1984))或通过与酰基氯 WCOCl或活化的酯WCO2Rq(其中Rq为离去基团，例如五氟苯基或N- 琥珀酰亚胺)反应制备。用于与WCOOH偶联的优选条件是：当W是呋 喃时，在DMF作为催化剂的情况下使用在DCM中的草酰氯以形成酰基 氯WCOCl，然后在三烷基胺如DIEA的存在下进行偶联；在W为吡咯 时，使用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基 苯并三唑-6-磺酰胺基甲基盐酸盐(HOBt)；和在W为咪唑时，优选的条 件是在DCM中的溴代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)和二异丙基乙 基胺(DIEA)。
应该理解，存在于式I中环A上的任选的取代可存在于起始原料1-1 或1-3中，并且在这种情况下，在图解1中所述的合成过程中自始至终 存在。或者，可以通过如下所述的许多方法引入式I的化合物上的各种 取代基，以提供对式I的任选的取代。存在于式1-0或1-3中环A上的 离去基团“L1”可以在图解1任何步骤之前或图解1过程中的任何步骤被 置换。在这种离去基团(优选为氟或氯)被式1-3的硝基适合亲核攻击活 化时，它们可以进行直接的被氨和叠氮化物阴离子亲核性芳香取代或在 适当的碱例如K2CO3、N，N-二异丙基乙基胺(DIEA)或NEt3的存在下被 胺、醇、硫醇和其它亲核试剂亲核性芳香取代。当离去基团适合于金属 催化的偶联(优选为溴或三氟甲烷磺酰氧基)时，可以进行许多交叉偶联 反应(例如如上讨论的用于引入R2的Suzuki或Stille反应)。可以采用的 其它金属催化的偶联反应包括芳香族的和杂芳族的胺化和酰胺化(综述 参见：S.L.Buchwald等人，Top.Curr.Chem.，219：131-209(2001)和J.F. Hartwig，“Organopalladium Chemistry for Organic Synthesis，”Wiley Interscience，NY(2002))。如果L1是被硝基活化的溴、碘、或氯，可以采 用使用2，4，6-三甲基-环丙硼氧烷(cyclotriboroxane)的另外的金属催化的 交叉偶联反应，以形成任选的甲基取代(参见M.Gray等人，Tetrahedron Lett.，41：6237-40(2000))。
在一些情况中，最初的取代基可以如下所述进一步衍生化，以提供 最终的式I的取代。
在环A上引入含氮杂环取代基的替代方法是从环A上的氨基形成 杂环。该氨基可以作为被保护的或未被保护的形式原来存在于起始原料 中，或者可由硝基还原产生，所述硝基也可以原来存在于起始材料中或 是通过硝化反应附加的。另外，氨基可通过叠氮基的还原形成，所述叠 氮基可以存在于起始材料中或者如上所述通过叠氮化物阴离子亲核性 芳香取代活化的卤化物产生。氨基还可以通过氨或通过被保护的氨等价 物阴离子例如氨基甲酸叔丁酯亲核性芳香取代活化的卤化物(例如，在硝 基卤代化合物中)产生。如果以被保护的形式引入，可以根据标准文献方 法将胺脱保护。(胺保护基和脱保护方法的实例参见：Theodora W.Greene 和Peter G.M.Wuts，John Wiley and Sons，Inc.，NY(1991).)成环反应涉及 用适合的任选取代的二亲电子试剂(di-electrophile)(优选二卤化物或二 羰基化合物)处理苯胺氨基，使得氨基的两个取代形成任选取代杂环。在 二卤化物的情况中，可以加入多种适宜碱的任一种，作为除酸剂，例如 碳酸钾、氢氧化钠、或三烷基胺如三乙胺。因此，用双(2-卤代乙基)胺 如双(2-氯乙基)胺或双(2-溴乙基)胺处理可得到哌嗪环(参见例如J.Med. Chem.，29：640-4(1986)和J.Med.Chem.，46：2837(2003))。该试剂的胺 氮上的任选的取代将在哌嗪的末端胺上引入任选的取代。例如，用N，N- 双(2-氯乙基)苯胺处理得到N-苯基哌嗪基。用双(2-卤代乙基)醚或双(2- 卤代乙基)硫醚处理将分别得到吗啉或硫代吗啉环。
直接取代以在环A上引入杂环取代基的另一个替代方法是从醛(即 从环A上的甲酰基)形成杂环。甲酰基可作为被保护的或未被保护的形 式原来存在于起始材料中，或者可以通过文献中已知的许多甲酰化反应 中的任一种产生，包括Vilsmeier-Haack反应(关于甲酰化化学综述，参 见：G.A.Olah等人，Chem Rev.，87：(1987))或通过硝基芳香化合物的对 位甲酰化产生(参见：A.Katritsky和L.Xie，Tetrahedron Lett.， 37：347-50(1996))。
最后，应该理解，式I的化合物可以被进一步衍生化。式I的化合 物上的保护基可以根据标准合成方法除去。(Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts，John Wiley and Sons，Inc.，NY(1991))并且然后可以进行进一 步的衍生化。化合物I的进一步衍生化的实例包括但不限于：在式I的 化合物包含伯胺或仲胺时，可以在还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠的存 在下使胺与醛或酮反应(参见Abdel-Magid J.Org.Chem.61，pp. 3849-3862，(1996))以进行还原烃化；与如上所述的酰基氯或羧酸和酰胺 键形成试剂反应以形成酰胺；与磺酰氯反应以形成磺酰胺；与异氰酸酯 反应以形成脲；在如上所述钯催化剂的存在下与芳基-或杂芳基-卤化物 反应(参见上述的Buchwald和Hartwig参考文献)以形成芳基和杂芳基 胺。另外，当式I的化合物包含芳基卤化物或杂芳基卤化物时，这些化 合物可进行金属-催化的与硼酸的反应(例如，如上所述的Suzuki或Stille 偶联)，或者与胺或醇反应(Buchwald-或Hartwig-型偶联，参见上述的 Buchwald和Hartwig参考文献)。当式I的化合物包含氰基时，这个基团 可以在酸性或碱性条件下水解为酰胺或酸。碱性的胺可以氧化为N-氧化 物，并且反之N-氧化物可以还原为碱性的胺。当式I的化合物包含非环 状或环状的硫化物时，硫化物可以进一步氧化为相应的亚砜或砜。可以 通过使用适当的氧化剂例如一当量的(间氯过氧苯甲酸)MCPBA氧化或 通过用NaIO4处理得到亚砜(参见例如，J.Regan等人，J.Med.Chem.，46： 4676-86(2003))并且可以通过使用二当量的MCPBA或通过用4-甲基吗 啉N-氧化物和催化性的四氧化锇处理得到砜(参见例如PCT申请WO 01/47919)。
图解2a
图解2a举例说明得到式I的化合物的途径。F表示-NQaQbR3-、-O-、 S、SO、或SO2，和AA表示-NH2或-NO2。D1和D2只是用于说明性的 目的表示；本领域技术人员知道，还可以存在有D5、D6、D7、D8。式 2-1的酮可以通过用非亲核性的碱例如LDA处理然后用三氟甲磺酸化试 剂例如三氟甲烷磺酸酐或优选N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺捕获得到的烯 醇化物转化为式2-2乙烯基三氟甲磺酸酯。使式2-3的硼酸或硼酸酯与 式2-2的乙烯基三氟甲磺酸酯进行Suzuki偶联可以得到其中Z为C的式 2-4的化合物(Synthesis，993(1991))。
对于式2-4的化合物，用Pd/C处理可以还原烯烃(和硝基，如果AA 是NO2)两者，得到Z为CH、AA为NH2的化合物。可以通过用MCPBA 氧化或图解1中描述的其它方法从其中AA为-NO2和F为硫化物(F为-S-) 的化合物制备其中F表示-SO2的式2-4的化合物。然后可以将硝基用 Pd/C还原，以将硝基和烯烃还原。
然后如图解1中所述将式2-4的化合物(AA为NH2)转化为式2-5的 化合物(如果不需要进一步的修饰，其还表示式I的化合物)。
式2-5的化合物可以进行进一步的修饰以提供另外的式I的化合物。 例如，在其中F为-NQaQbR3-、QaQb为键、和R3表示BOC保护基(CO2tBu) 的情况中，可以根据标准方法除去BOC基团，例如含三氟乙酸(TFA)的 DCM(Greene和Wuts，出处同上)，以提供仲胺，其可以进一步衍生化以 提供式I的化合物。进一步的衍生化包括但不限于：在还原剂例如三乙 酰氧基硼氢化钠的存在下与醛或酮反应，以提供其中F为-NCH2R3的 式II的化合物(A.F.Abdel-Magid，出处同上)；与酰基氯或与羧酸和酰 胺键形成试剂反应(如图解1中所述)以提供其中F为-NCOR3的式II的化 合物；与磺酰氯反应(如图解1中所述)以提供其中F为-NSO2Ra的式I 的化合物；与异氰酸酯反应(如图解1中所述)以提供其中F为-NCONRaRb 的式II的化合物；或如图解1中所述进行金属催化的取代反应以提供其 中F为-NR3的式I的化合物(S.L.Buchwald等人，出处同上；J.H Hartwig，出处同上)。对于上述实例，Ra和Rb独立地为氢、烷基、环烷 基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基。
图解2b
图解2b举例说明了图解2a的变型，用于合成部分不饱和的式I的 化合物。E表示-NQaQbR3-、-O-(D1和D2为H)、-S-(D1和D2为H)、-(D1 和D2为H)、或-SO2-(D1和D2为H)，和RAA表示-NH2或-NO2。式2-4 的化合物如图解2中所述制备。如果RAA为-NO2，则必须通过不会还原 烯烃的方法还原硝基，例如铁和氯化铵。如果式2-4的RAA是氨基，则 不再必需另外的步骤，并且式2-4的化合物也就是式2-7的化合物。为 了制备其中E为-SO2-或-SO-的式2-7的化合物，必须对如上所述的其中 RAA为-NO2的化合物2-4进行硫化物的氧化，随后进行硝基还原。
图解3
图解3举例说明制备用于合成式I的化合物的中间体，其中环A为 吡啶基，和R5为环A上的任选的取代或如式I中定义的杂环取代基之 一。K为NH2或其它官能团，例如NO2、COOH或COOR，其可以通过 已知的文献方法转化为氨基，例如NO2的还原(如对于图解1所讨论的) 或通过COOH的Curtius重排(综述参见Organic Reactions，3：337(1947))。 L3和L4为卤素。(K为COOH还可以通过简单的碱或酸催化的水解从K 为COOR形成)。
通常，引入R2和R5时的选择性和顺序可以通过在化合物(3-1)中选 择的卤素L3和L4的相对反应性、杂环固有的选择性和/或采用的反应条 件而实现。在选择性地引入R2和R5时利用卤素L3和L4的相对反应性 的实例包括如下情况：在其中L3为氟和L4为溴的式3-1的化合物中， 可以实现由亲核试剂选择性地取代氟，随后通过金属催化的取代化学(例 如如下进一步说明的Suzuki或Stille交叉偶联反应)取代保留的溴。同样 地，在其中L3和L4之一为碘、另一个为溴或氯的式3-1的化合物中， 可以实现对碘基团的选择性的金属催化的取代化学(例如，如下进一步讨 论的Suzuki或Stille交叉偶联反应或Buchwald/Hartwig胺化)，随后通过 另一个金属催化的取代反应置换保留的溴或氯基团。
如图解3中举例说明的，可首先将式3-1的离去基团L3置换，以得 到式3-3的化合物，或者可以首先将离去基团L4置换以得到式3-2的化 合物。然后可以使化合物3-2或3-3反应以置换L3或L4，得到式3-4的 化合物。
因此，将式3-1的化合物用仲胺、氨或被保护的胺例如氨基甲酸叔 丁酯直接亲核取代或金属催化的胺化(综述参见Modern Amination Methods：Ricci，A.，Ed.；Wiley-VCH：Weinheim，2000)可以用于将R5引入 到式3-2或3-3中，其中R5为伯胺或仲胺、氨基(NH2)、和胺等价物或 被保护的氨基。化合物3-1与硼酸或硼酸酯之间的金属催化的偶联 (Suzuki反应，M为硼酸基团或硼酸酯基团)、或如图解1中所述的与有 机锡化合物之间的金属催化的偶联(Stille反应，M为SnR3，其中R为 烷基和其它取代基(如上述定义的)可以提供式3-2或3-3的化合物。
化合物3-2可以如上所述通过金属催化的Suzuki或Stille偶联进一 步转化为化合物3-4。化合物3-3中的L4随后还可以被R5代替，以得到 式3-4的化合物，这是通过用亲核试剂直接亲核取代或金属催化的反应， 或者如上所述通过相同的金属催化的交叉偶联反应进行的。当式(3-2、 3-3或3-4)中的R5为被保护的胺并且K不是氨基时，可以将其脱保护， 以暴露氨基官能团。随后，这个氨基官能团可以进一步如图解1中所述 衍生化。当式3-4中的K基团不是氨基(例如上面描述的官能团)时，其 可以根据已知的文献方法转化为氨基(参见例如Comprehensive Organic Transformations：Larock，R.S.；Wiley and Sons Inc.，USA，1999)并且得到 的胺3-5可以被用于如图解(1)所述的酰胺键形成反应，以得到式I的化 合物。当式3-4中的K是氨基时，其可以直接用于如上所述的酰胺偶联。
图解4a
图解4b
图解4a和4b举例说明通过在第一个离去基团的置换已经完成之后 引入第二个离去基团从式4-1和4-5的单卤代取代的化合物开始制备用 于根据图解3进一步修饰的中间体。这些还可以用于合成式I的化合物， 其中环A是吡啶并且R5或者是环A上的任选的取代或者是杂环取代基 之一。如图解3中所示，吡啶环上的其余位置可以如式I中描述的被取 代。K为NH2或可以通过已知的文献方法例如图解3中所述的还原或 Curtius重排最终转化为氨基的其它官能团，例如NO2、COOH或COOR。 L3和L4为卤素。在这些化合物中，T或者是H，或者是可以通过已知的 文献方法(参见例如Nicolai，E.等人，J.Heterocyclic Chemistry， 31，(73)，(1994))转化为离去基团L3或L4例如卤素、三氟甲磺酸酯或甲磺 酸酯的官能团例如OH。将式4-1的化合物中的L3或式4-5中的L4通过 图解3中所述的方法置换，可以得到式4-2和4-6的化合物。这时，化 合物4-2或4-6的取代基T可以通过标准方法转化为离去基团L4或L3(优 选卤素)，以提供式4-3和4-5的化合物。例如，当T是OH时，实现这 种转化的优选试剂是亚硫酰氯、PCl5、POCl3、或PBr3(参见例如Kolder， den Hertog.，Recl.Trav.Chim.Pays-Bas；285，(1953)，和Iddon，B等人，J. Chem.Soc.Perkin Trans.1.，1370，(1980))。当T为H时，其可以被直接 卤化(优选溴化)，以提供式4-3或4-7的化合物(参见例如Canibano，V. 等人，Synthesis，14，2175，(2001))。优选的溴化条件是在适合的溶剂例如 DCM或乙腈中的NBS。
式4-3或4-7的化合物可以通过上面描述的方法分别地引入其余的 基团R2或R5转化为式4-4或4-8的化合物，然后通过图解3描述的用 于将式3-4和3-5的化合物转化为式I的化合物的方法到式I的化合物上。
本发明的代表性的化合物和它们的合成在以下图表和随后的实施 例中提供。以下只是用于示例性目的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
5-氰基-呋喃-2-甲酸
在Ar下向具有搅拌棒和Vigreaux柱的烧瓶加入2-甲酰基-5-呋喃甲 酸(2.8g，20mmol)、羟胺盐酸盐(2.7g，40mmol)、和无水吡啶(50mL)。 混合物加热到85℃，加入乙酸酐(40mL)并将混合物搅拌3小时。在冷 却到60℃之后，加入水(250mL)并将混合物在RT搅拌70小时。用浓盐 酸将混合物酸化到pH 2并且用3∶1二氯甲烷-异丙醇提取(8x100mL)。 合并的有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并 且真空浓缩，得到标题化合物，为黄褐色固体(1.26g，46％)。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ14.05(br s，1H)，7.74(d，1H，J＝3.8Hz)， 7.42(d，1H，J＝3.8Hz)。
实施例2
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸
标题化合物通过文献方法制备(Loader和Anderson，Canadian J. Chem.59：2673(1981))。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ12.70(br s，1H)， 7.78(s，1H)，7.13(s，1H)。
实施例3
4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
a)1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈
将装有咪唑-4-甲腈(0.5g，5.2mmol)(Synthesis，677，2003)、2-(三甲 基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(SEMCl)(0.95mL，5.3mmol)、K2CO3(1.40g， 10.4mmol)、和丙酮(5mL)的烧瓶在RT搅拌10小时。混合物用 EtOAc(20mL)稀释并且用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，有机层用 MgSO4干燥。粗产物用30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化硅)洗脱， 得到0.80g(70％)的标题化合物，为无色油状物。质谱(CI(CH4)， m/z)C10H17N3OSi，计算值224.1(M+H)，实测值224.1。
b)2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈
向1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈(0.70g，3.1 mmol)(如前述步骤制备)的CCl4(10mL)溶液中加入NBS(0.61g，3.4 mmol)和AIBN(cat)，并将混合物在60℃加热4小时。反应用EtOAc(30mL) 稀释并且用NaHCO3(2x30mL)和盐水(30mL)洗涤，有机层用Na2SO4 干燥，然后浓缩。标题化合物用30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化 硅)洗脱，得到0.73g(77％)的黄色固体。质谱(CI(CH4)， m/z)C10H16BrN3OSi，计算值302.0/304.0(M+H)，实测值302.1/304.1。
c)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸乙酯
在-40℃向2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈 (0.55g，1.8mmol)(如前述步骤制备)的THF(6mL)溶液中滴加2M i-PrMgCl的THF溶液(1mL)。将反应在-40℃搅拌10分钟，然后冷却到 -78℃，并且加入氰基甲酸乙酯(0.3g，3.0mmol)。使反应达到RT并且搅 拌1小时。反应用NH4Cl饱和水溶液猝灭，用EtOAc(20mL)稀释并用 盐水洗涤(2x 20mL)，有机层用Na2SO4干燥，然后浓缩。标题化合物用 30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化硅)洗脱，得到0.4g(74％)无色固 体。质谱(ESI，m/z)：C13H21N3O3Si，计算值296.1(M+H)，实测值296.1。
d)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸乙酯 (0.4g，1.3mmol)(如前述步骤制备)的乙醇(3mL)溶液中加入6M KOH溶 液(0.2mL)并将反应搅拌10分钟，然后浓缩，得到0.40g(100％)的标题 化合物，为黄色固体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)7.98(s，1H)，5.92(s，2H)， 3.62(m，2H)，0.94(m，2H)，0.00(s，9H)。质谱(ESI-neg，m/z)C11H17N3O3Si， 计算值266.1(M-H)，实测值266.0。
实施例4
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (3-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-酰胺
a)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪
在0℃将2-溴-4-氟硝基苯(949mg，4.31mmol)分为两个部分加入到 纯的N-甲基哌嗪(8mL)并且允许其回温到室温。将反应加热到60℃，1 小时，然后将其用50mL的EtOAc稀释并且倾倒在H2O(50mL)中。分 液并将有机层用NaHCO3饱和水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩， 得到580mg(45％)的标题化合物，为黄色固体。质谱(ESI，m/z)： C11H14BrN3O2，计算值300.0(M+H)，实测值300.1。
b)4，4，5，5-四甲基-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷
在-40℃向搅拌的2-溴-3-甲基噻吩(337mg，1.9mmol)在8mL THF 中的溶液加入n-BuLi(0.8mL，2.5M/己烷)，并将反应搅拌30分钟。这时， 加入2-异丙氧基-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(775μL，3.8 mmol)，并将反应回温到环境温度，并且继续搅拌1小时。然后将反应 冷却到0℃并且用NaHCO3饱和水溶液(10mL)猝灭。将混合物倾倒在 EtOAc(100mL)中，用H2O洗涤(2x 50mL)，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。 残余物通过硅胶制备薄层色谱法纯化(20％EtOAc-己烷)，得到224 mg(53％)标题化合物，为油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ1.36(s， 12H)，2.5(s，3H)，6.99(d，1H，J＝4.8Hz)，7.50(d，1H，J＝4.8Hz)。
c)1-甲基-4-[3-(3-甲基-噻吩基-2-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪
向包含1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(68mg，0.2mmol，如实施 例4步骤(a)制备)、4，4，5，5-四甲基-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-[1，3，2]二氧杂 硼杂环戊烷(61mg，0.27mmol，如前述步骤制备)和Pd(PPh3)4(14mg，6 mol％)的烧瓶加入甲苯(3mL)、乙醇(3mL)和2M Na2CO3(4mL)。将得 到的混合物在80℃加热2小时，然后倾倒在EtOAc(25mL)中。将有机 层分离，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。通过硅胶制备薄层色谱法纯化 (EtOAc)，得到40mg(63％)的标题化合物，为浅黄色固体。质谱(ESI， m/z)：C16H19N3O2S，计算值318.1(M+H)，实测值318.2。
d)5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2- 基)-苯基]-酰胺
在H2(1atm)下将1-甲基-4-[3-(3-甲基-噻吩基-2-基)-4-硝基-苯基]-哌 嗪(60mg，0.18mmol，如前述步骤制备)与含40mg 5％Pd-C的MeOH(5 mL)搅拌2小时。将反应过滤通过硅藻土(Celite)并且真空浓缩，得到40 mg(72％)的4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-苯胺，为棕色 固体，其不经进一步纯化立即使用。使用与实施例9步骤(c)相似的方法， 使4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基-2-基)-苯胺(40mg，0.13mmol) 与5-氰基-呋喃-2-甲酰氯(30mg，0.19mmol，如实施例9步骤(c)中制备) 在DIEA(61μL，0.34mmol)的存在下反应，得到18.9mg(36％)标题化合 物，为黄色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ2.13(s，3H)，2.38(s，3H)， 2.59-2.62(m，4H)，3.24-3.27(m，4H)，6.92(d，1H，J＝2.8Hz)，7.06(d，1H，J ＝5.1Hz)，7.15(d，1H，J＝3.7Hz)，7.19(d，1H，J＝3.7Hz)，7.02(dd，1H， J＝2.8，9.0Hz)，7.42(d，1H，J＝5.1Hz)，8.11(s，1H)，8.34(d，1H，J＝9.0Hz)； 质谱(ESI，m/z)：C22H22N4O2S，计算值407.1(M+H)，实测值407.1。
实施例5
5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (4-甲基-噻吩基-3-基)-苯基]-酰胺
a)4，4，5，5-四甲基-2-(2-甲基-噻吩基-3-基)-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷
使用与实施例4步骤(b)相似的方法，将3-溴-4-甲基噻吩(571mg，3.2 mmol)用n-BuLi(1.41mL，2.5M/己烷)处理，然后使其与2-异丙氧基 -4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(775μL，3.8mmol)反应，得到 189mg(26％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： δ1.32(s，12H)，2.42(s，3H)，6.90-6.91(m，1H)，7.84(d，1H，J＝2.9Hz)。
b)1-甲基-4-[3-(4-甲基-噻吩基-3-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪
使用与实施例4步骤(c)相似的方法，使1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基 -哌嗪(162mg，0.54mmol)、4，4，5，5-四甲基-2-(2-甲基-噻吩基-3-基)-[1，3，2] 二氧杂硼杂环戊烷(145mg，0.64mmol)和Pd(PPh3)4(37mg，6mol％)反 应，得到108mg(71％)的标题化合物，为黄色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ2.02(s，3H)，2.37(s，3H)，2.55-2.57(m，4H)，3.42-3.45(m，4H)， 6.66(d，1H，J＝2.8Hz)，6.87(s，1H)，6.99-7.00(m，1H)，7.09(d，1H，J＝3.2 Hz)，8.13(d，1H，J＝9.2Hz)。
c)4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(4-甲基-噻吩基-3-基)-苯胺
使用与实施例4步骤(d)相似的方法，将1-甲基-4-[3-(4-甲基-噻吩基 -3-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪(100mg，0.32mmol)与80mg 5％Pd-C在H2下 搅拌，得到82mg(89％)的标题化合物，为黑色油状物，其不经进一步 纯化立即使用。质谱(ESI，m/z)：C16H21N3S，计算值288.15(M+H)，实测 值288.1。
d)5-氰基-呋喃-2-甲酸[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(4-甲基-噻吩基-3- 基)-苯基]-酰胺
使用与实施例9步骤(c)相似的方法，使5-氰基-呋喃-2-甲酰氯(64mg， 0.41mmol，如实施例9步骤(c)中制备)与4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(4-甲基 -噻吩基-3-基)-苯胺(80mg，0.27mmol，如前述步骤制备)在DIEA(0.10mL， 0.59mmol)的存在下反应，得到25.8mg(24％)的标题化合物，为黄色固 体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ2.09(s，3H)，2.37(s，3H)，2.59-2.60(m， 4H)，3.24-3.26(m，4H)，6.83(d，1H，J＝2.9Hz)，6.98-7.06(m，2H)， 7.14-7.21(m，3H)，7.96(s，1H)，8.32(d，1H，J＝9.0Hz)。质谱(ESI，m/z)： C22H22N4O2S，407.1计算值(M+H)，实测值407.1。
实施例6
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-1-羟基甲基-乙基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
a)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2，2-二甲基-[1，3]二 氧杂环己烷-5-基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(81mg，0.16mmol，如实施例14步骤(b)中制备)在CH2Cl2(3mL) 中的浆状物中加入NEt3(33μL，0.24mmol)。然后将溶液用2，2-二甲基 -[1，3]二氧杂环己烷-5-酮(31mg，0.24mmol)处理并将反应搅拌3小时。 这时，一次性加入NaBH(OAc)3(51mg，0.24mmol)，并将反应搅拌另外 的4小时。反应用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc提取(2x 25mL)。将有 机提取物干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。通过硅胶制备薄层色谱法纯化(10 ％MeOH-CHCl3)，得到22mg(28％)的标题化合物，为灰白色半固体。 质谱(ESI，m/z)：C28H35N5O3，计算值490.2(M+H)，实测值490.6。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-1-羟基甲基- 乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2，2-二甲基-[1，3]二 氧杂环己烷-5-基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(22mg，0.04mmol，如前述步骤 制备)的THF-H2O(1mL，4∶1v/v)溶液中加入TFA(0.4mL)并将反应搅拌1 小时。真空除去溶剂，得到14mg(60％)的标题化合物，为琥珀色泡沫 状物。1H-NMR(CD3OD，400MHz)：δ1.78-1.90(m，4H)，2.03-2.16(m，3H)， 2.29(br s，4H)，2.88-2.96(m，1H)，3.37-3.40(m，1H)，3.46-3.53(m，2H)， 3.74-3.78(m，3H)，5.83(s，1H)，7.13(d，1H，J＝2.0Hz)，7.22(dd，1H，J＝2.0， 8.4Hz)，8.03(s，1H)，8.17(d，1H，J＝8.4Hz)；质谱(ESI，m/z)：C25H31N5O3， 计算值450.2(M+H)，实测值450.2。
实施例7
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙酰基) -哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
通过注射器向吗啉-4-基-乙酸乙酯(117mg，0.67mmol)的乙醇(4mL) 溶液中加入6N KOH(110μL，0.67mmol)并且继续搅拌3小时。真空浓 缩，得到122mg(100％)的吗啉-4-基-乙酸钾盐。向吗啉-4-基-乙酸钾盐(29 mg，0.15mmol)、4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺三氟乙酸盐(65.1mg，0.13mmol，如实施例14步骤(b)中制备) 和PyBroP(93mg，0.19mmol)在CH2Cl2(4mL)中的混合物加入DIEA(51 μL，0.29mmol)并将反应搅拌过夜。反应用CH2Cl2(50mL)稀释，用H2O 洗涤(2x 25mL)，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。粗产物通过硅胶制备TLC 纯化，得到8.1mg(12％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ1.68-2.04(m，5H)，2.20-2.29(m，4H)，2.53-2.78(m，5H)， 3.09-3.23(m，6H)，3.35-3.40(m，1H)，3.72(br s，4H)，4.16-4.22(m，1H)， 4.73-4.77(m，1H)，5.82(s，1H)，7.00(s，1H)，7.12(dd，1H，J＝0.6，8.0Hz)， 7.73(s，1H)，8.27(d，1H，J＝8.1Hz)，9.48(s，1H)；质谱(ESI，m/z)： C28H34N6O3，计算值503.27(M+H)，实测值503.1。
实施例8
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(3-吗啉-4-基-丙酰基) -哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向包含3-吗啉-4-基-丙酸钾盐(94mg，0.47mmol，完全如实施例7 中所述从3-吗啉-4-基-丙酸乙酯制备)、4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己 -1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(179mg，0.36mmol，如实施 例14(b)中制备)、EDCI(83mg，0.43mmol)、和HOBT(68mg，0.5mmol) 的烧瓶加入DMF(4mL)。向搅拌的浆状物加入DIEA(157μL，0.9mmol) 并将反应搅拌过夜。反应用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc提取(2x25 mL)。将合并的有机提取物干燥(Na2SO4)，真空浓缩并将粗产物通过硅 胶制备TLC纯化，得到10.4mg(6％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ1.49-1.93(m，5H)，2.22-2.31(m，3H)，2.52(br s，4H)，2.58-2.63(m，3H)，2.74-2.76(m，4H)，3.10-3.17(m，2H)，3.72(br s， 4H)，3.97-4.02(m，2H)，4.76-4.81(m，2H)，5.81-5.82(m，1H)，6.81-6.82(m， 1H)，6.99-7.00(m，1H)，7.09-7.13(m，1H)，7.70(s，1H)，8.26(d，1H，J＝8.2 Hz)，9.51(s，1H)；质谱(ESI，m/z)：C29H36N6O3，计算值517.28M+H)，实 测值517.3。
实施例9
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺
a)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪
向冷却(0℃)的1.00g(4.55mmol)的2-溴-4-氟硝基苯(Oakwood)在12 mL EtOH中的溶液加入1.52mL(13.7mmol)哌啶。将溶液在0℃搅拌0.5 小时，然后在60℃搅拌4小时。将混合物真空浓缩，溶解于EtOAc(60mL) 中，用水(3x 100mL)和盐水(100mL)洗涤，并且干燥(Na2SO4)。真空浓 缩并且在50-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，用1-3％MeOH-二氯甲烷 洗脱，得到1.06g(77％)的标题化合物，为棕黄色固体。质谱(ESI，m/z)： C11H14BrN3O2，计算值300.0(M+H，79Br)，实测值300.1。
b)1-甲基-4-(2′-甲基-6-硝基-联苯-3-基)-哌嗪
在Ar下将200mg(0.666mmol)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如 前述步骤制备)、136mg(0.999mmol)和77.0mg(0.0666mmol)四(三苯膦) 合钯(0)的混合物加入4.0mL脱气的二甲氧基乙烷(DME)和400μL(0.799 mmol)的2.0M Na2CO3水溶液。将混合物在搅拌下在Ar下在80℃加热 14小时。将冷却(RT)的混合物浓缩并且在10-g二氧化硅SPE柱上色谱 纯化，使用含1-5％MeOH的二氯甲烷-己烷(1∶1)。产物级分用80mg脱 色炭处理，过滤，浓缩，然后在类似的柱上再次色谱纯化，使用1-3％ EtOH-二氯甲烷，得到265mg的标题化合物，为黄色树脂状物(通过 1H-NMR测定为75％纯度，为与三苯膦的混合物)，其不经进一步纯化 用于随后的反应。质谱(ESI，m/z)：C11H21N3O3，计算值312.2(M+H)，实 测值312.2。
c)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰 胺
将140mg(0.337mmol，基于75％纯度)1-甲基-4-(2′-甲基-6-硝基-联 苯-3-基)-哌嗪(如前述步骤制备)和70mg的10％炭载钯(Degussa型 E101-NE/W，Aldrich，50重量％的水)在5mL THF中的混合物在氢气气 球下剧烈搅拌1小时。将混合物过滤(Celite)，用二氯甲烷洗涤(2x2mL) 并将得到苯胺溶液置于Ar下并且立即用于随后的反应。
与上述反应同时地，将在2.5mL无水二氯甲烷中的55.4mg(0.404 mmol)5-氰基呋喃-2-甲酸(如实施例1中制备)在CaSO4干燥管下用52.9 μL(0.606mmol)草酰氯处理随后用10μL的无水DMF处理。将溶液搅 拌25分钟并且迅速地在20-25℃真空浓缩。将得到的5-氰基-呋喃-2-甲 酰氯置于高真空下2-3分钟，然后立即置于Ar下，在冰浴中冷却到0℃， 并且用上述得到的苯胺溶液处理随后用141μL(0.808mmol)的N，N-二异 丙基乙胺(DIEA)处理。在RT搅拌30分钟之后，混合物真空浓缩，并将 得到的残余物在20-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使用2-10％EtOH- 二氯甲烷，得到黄色树脂状物(其从EtOAc-己烷结晶)，得到17.2mg(13％) 为黄色固体的纯标题化合物，以及70.3mg不纯的标题化合物。将不纯 的级分溶解于50mL EtOAc，用饱和NaHCO3水溶液-1M K2CO3(1∶1，2x 20mL)和盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且浓缩，得到43.4mg(32％) 另外的标题化合物，为结晶状黄色固体(总收率45％)。1H-NMR(CDCl3； 400MHz)：δ8.32(d，1H，J＝9.0Hz)，7.73(br s，1H)，7.34-7.54(m，3H)， 7.25(d，1H，J＝7.7Hz)，7.12，7.14(AB q，2H，J＝3.7Hz)，7.01(dd，1H，J＝ 9.0，2.8Hz)，3.25-3.27(m，4H)，2.59-2.62(m，4H)，2.38(s，3H)，和2.15(s， 3H)。质谱(ESI，m/z)：C21H24N4O3，计算值401.2(M+H)，实测值401.1。
实施例10
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺
a)1-(2′-氟-6-硝基-联苯-3-基)-4-甲基-哌嗪
根据实施例9步骤(b)的方法，使用含75.0mg(0.250mmol)1-(3-溴-4- 硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如实施例9步骤(a)中制备)、136mg(0.999 mmol)2-氟苯基硼酸、26.8mg(0.0232mmol)四(三苯膦)合钯(0)和400 μL(0.799mmol)的2.0M Na2CO3水溶液的DME，不同之处在于将混合物 加热22小时。在5-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使用含1-5％MeOH 的二氯甲烷-己烷(1∶1)，得到95.0mg的标题化合物(通过1H-NMR测定 纯度为76％，为与三苯膦的混合物)，为黄色树脂状物，其不经进一步 纯化用于随后的反应。质谱(ESI，m/z)：C17H18FN3O3，计算值 316.1(M+H)，实测值316.2。
b)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2′-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-联苯-2-基]-酰胺
根据实施例9步骤(c)的方法，使用93.2mg(0.225mmol，基于76％ 纯度)1-(2′-氟-6-硝基-联苯-3-基)-4-甲基-哌嗪(如前述步骤制备)、46mg 的10％炭载钯、37.0mg(0.270mmol)的5-氰基呋喃-2-甲酸(如实施例1 中制备)、35.3μL(0.405mmol)草酰氯、5.0μL的无水DMF，和94.1 μL(0.540mmol)的DIEA制备。在5-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使 用1-4％MeOH-二氯甲烷，得到69.8mg(77％)的标题化合物，为黄色树 脂状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.04(d，1H，J＝9.0Hz)，7.93(br s， 1H)，7.434-7.48(m，1H)，7.37(td，1H，J＝7.5，1.8Hz)，7.22-7.31(m，2H)， 7.13，7.18(AB q，2H，J＝3.7Hz)，7.02(dd，1H，J＝9.0，2.9Hz)，6.88(d，1H， J＝2.9Hz)，3.24-3.27(m，4H)，2.57-2.60(m，4H)，和2.36(s，3H)。质谱(ESI， m/z)：C23H21FN4O2，计算值405.2(M+H)，实测值405.2。
实施例11
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰胺
a)1-(3-环己-1-烯基-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪
将102mg(0.340mmol)1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如实施例 9步骤(a)中制备)、59.7mg(0.474mmol)环己烯-1-基硼酸、43.8mg(0.0379 mmol)的四(三苯膦)合钯(0)的混合物在Ar下用206μL(0.412mmol)的2.0 M脱气的Na2CO3水溶液、0.6mL脱气的无水甲苯和0.2mL脱气的无水 EtOH处理并将混合物在100℃加热21小时。在冷却到RT之后，将混 合物倾倒在EtOAc(10mL)中，用盐水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并且真 空浓缩。在5-g二氧化硅SPE柱上色谱纯化，使用含1-3％EtOH的二 氯甲烷，得到126mg的标题化合物(通过RP-HPLC(C18柱)测定为74％ 纯度，为与三苯膦的混合物)，为黄色油状物，其不经进一步纯化用于随 后的反应。质谱(ESI，m/z)：C17H23N3O3，计算值302.2(M+H)，实测值 302.2。
b)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]- 酰胺
向含122mg(0.299mmol，基于74％纯度)的1-(3-环己-1-烯基-4-硝 基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如前述步骤制备)的5.0mL EtOH-水(2∶1)加入83.8 mg(1.50mmol)铁粉和160mg(2.99mmol)NH4Cl并将混合物在Ar下回流 12小时。加入另外的83.8mg(1.50mmol)铁粉，并将混合物回流1小时。 将混合物倾倒在EtOAc(12mL)中，过滤(Celite)，用EtOAc洗涤(2x 4 mL)，真空浓缩并溶解于无水THF(4.0mL)。将得到的苯胺溶液置于Ar 下并且立即用于随后的反应。
将含61.6mg(0.449mmol)的5-氰基呋喃-2-甲酸(如实施例1中制备) 的2.5mL无水二氯甲烷在CaSO4干燥管下用60.0μL(0.688mmol)草酰 氯处理，随后用10μL的无水DMF处理。将溶液搅拌25分钟并且迅速 地在20-25℃真空浓缩。将残余物置于高真空下2-3分钟，然后立即置于 Ar下，在冰浴中冷却到0℃并且用上述得到的苯胺溶液处理，随后用104 μL(0.598mmol)的DIEA处理。在RT搅拌30分钟之后，将混合物真空 浓缩，溶解于EtOAc(20mL)，用1M K2CO3(2x10mL)和盐水(10mL)洗 涤，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。得到的残余物在10-g二氧化硅SPE柱 上色谱纯化，使用1-4％MeOH-二氯甲烷，得到黄色树脂状物，然后其 从Et2O-己烷结晶，得到84.7mg(72％)的标题化合物，为结晶状黄色固 体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.57(br s，1H)，8.26(d，1H，J＝9.0Hz)， 7.20，7.23(AB q，2H，J＝3.7Hz)，6.86(dd，1H，J＝9.0，2.9Hz)，6.74(d，1H， J＝2.9Hz)，5.84-5.85(m，1H)，3.20-3.22(m，4H)，2.57-2.59(m，4H)，2.36(s， 3H)，2.23-2.30(m，4H)和1.79-1.84(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C23H26N4O2， 计算值391.2(M+H)，实测值391.2。
实施例12
5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-(4-甲基-哌嗪-1-基) -苯基-酰胺
a)1-[3-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-硝基-苯基]-4-甲基-哌嗪
在Ar下将含1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(如实施例9步骤(a) 中制备)(225.1mg，0.79mmol)、K2CO3(310.9mg，2.25mmol)和4-(4，4，5，5- 四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡喃(Murata，M.等 人，Synthesis，778，(2000))(157mg，0.75mmol)的二氧杂环己烷(5mL)在 80℃加热过夜。使反应混合物冷却到RT，浓缩，并将得到的残余物在 二氧化硅上色谱纯化(10％EtOAc/己烷-20％MeOH/EtOAc)，得到标题 化合物(82mg，36％)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.04(d，1H，J＝9.4 Hz)，6.78(dd，1H，J＝9.4，2.6Hz)，6.58(m，1H，J＝2.6Hz)，5.58(m，1H)， 4.34(m，2H)，3.95(t，2H，J＝5.3Hz)，3.46(m，4H)，2.57(m，4H)，2.38(s，3H)， 2.30(m，2H)。
b)5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-(3，6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4-(4-甲基-哌嗪-1- 基)-苯基-酰胺
使用与实施例4步骤(d)相似的方法将1-[3-(3，6-二氢-2H-吡喃-4- 基)-4-硝基-苯基]-4-甲基-哌嗪(如前述步骤制备)(80mg，0.26mmol)转化 为相应的胺，并且在0℃与在CH2Cl2(2mL)中的5-氰基-呋喃-2-甲酰氯(如 实施例9步骤(c)中制备)(得自137mg，1.00mmol的5-氰基-呋喃-2-甲酸， 如实施例1中制备)偶联。通过二氧化硅上的快速色谱法分离产物(50％ EtOAc/己烷-10％MeOH/EtOAc)，得到标题化合物(62.2mg，60％)。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.35(br s，1H)，8.12(d，1H each，J＝8.76Hz)， 7.24(d，1H，J＝5.08Hz)，7.19(d，1H，J＝5.08Hz)，6.88(dd，1H，J＝8.76， 2.7Hz)，6.73(d，1H，J＝2.7Hz)，5.88(br s，1H)，4.34(m，2H)，3.94(t，2H，J＝ 5.3Hz)，3.23(m，4H)，2.59(m，4H)，2.38(br s，5H)。LC-MS(ESI，m/z)： C22H24N4O3，计算值393.1(M+H)，实测值393.2。
实施例13
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)- 酰胺三氟乙酸盐
a)4-(4-氨基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
根据实施例35步骤(b)中的方法通过4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂 硼杂环戊烷-2-基)-苯胺与4-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲 酸叔丁酯(Synthesis，993，(1991))的Suzuki偶联制备标题化合物。质谱(ESI， m/z)：C16H22N2O2，计算值275.2(M+H)，实测值275.1。
b)4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(4-氨基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0.35g，1.2 mmol)(如前述步骤制备)的甲醇溶液在10％Pd/C上在20psi下氢化1小 时。将溶液过滤并且浓缩，得到0.35g(100％)的标题化合物，为黄色固 体。质谱(ESI，m/z)：C16H24N2O2，计算值277.2(M+H)，实测值277.1。
c)4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.20g，0.71mmol)(如前述步 骤制备)的DCM(3mL)溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)(0.13g，0.71 mmol)并将反应在RT搅拌10小时。反应用EtOAc(10mL)稀释并用 NaHCO3(2x 10mL)和盐水(10mL)洗涤。将有机层浓缩，得到0.26g(100 ％)的标题化合物，为黄色泡沫状物。质谱(ESI，m/z)：C16H23BrN2O2，计 算值355.1(M+H)，实测值355.1。
d)4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向烧瓶加入4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.13g，0.36 mmol)(如前述步骤制备)、环己-1-烯基硼酸(0.060g，0.48mmol)、 Pd(PPh3)4(0.04g，10mol％)，2M Na2CO3水溶液(1.5mL)、乙醇(1.5mL)、 和甲苯(3mL)，并且在80℃加热3小时。将反应用EtOAc(10mL)稀释， 用NaHCO3(2x 10mL)和盐水(10mL)洗涤，并将有机层用Na2SO4干燥， 然后浓缩。用30％EtOAc/己烷从20-g SPE柱(二氧化硅)洗脱标题化合 物，得到0.10g(85％)的标题化合物，为黄色油状物。质谱(ESI，m/z)： C22H32N2O2，计算值357.2(M+H)，实测值357.1。
e)4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐
向烧瓶加入4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (0.050g，0.14mmol)(如前述步骤制备)、4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(0.019g， 0.14mmol)(如实施例2中制备)、EDCI(0.040g，0.21mmol)、HOBt(0.019 g，0.14mmol)、DIEA(0.073mL，0.42mmol)、和DCM(0.5mL)并且在25℃ 搅拌10小时。将反应直接加载到10-g固相萃取(SPE)柱(二氧化硅)上并 将得到的中间体用30％EtOAc/己烷洗脱。将混合物在50％TFA/DCM(2 mL)中RT搅拌1小时然后浓缩并且通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50 ％CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分钟内洗脱，得到标题化合物(0.052g， 77％)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：7.59(s，1H)，7.50(d，1H)，7.22(d，1H)， 7.16(m，2H)，5.74(m，1H)，3.54.(m，2H)，3.16(m，2H)，2.94(m，1H)，2.29(m， 2H)，2.15(m，4H)，1.92(m，2H)，1.72(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C23H26N4O， 计算值375.2(M+H)，实测值375.1。
实施例14
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺三氟乙酸盐
a)4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐 (3.34g，10.9mmol)(如实施例3步骤(d)中制备)在20mL DCM中的溶液 加入DIEA(3.8mL，21.8mmol)和PyBroP(5.6g，12.0mmol)，并将反应在 25℃搅拌15分钟。加入4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁 酯(3.9g，10.9mmol)(如实施例13步骤(d)中制备)在10mL DCM中的溶 液并且反应在25℃搅拌8小时。将反应用EtOAc(60mL)稀释并用 NaHCO3(2x 60mL)和盐水(100mL)洗涤，有机层用Na2SO4干燥，然后 浓缩。标题化合物通过快速色谱法纯化(硅胶，2％EtOAc/DCM)，得到 5.5g(85％)的标题化合物，为黄色油状物。质谱(ESI，m/z)：C33H47N5O4Si， 计算值606.2(M+H)，实测值606.2。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐
向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g，2.5mmol)(如 前述步骤制备)在10mL DCM和0.3mL EtOH中的溶液加入3mL的TFA 并将溶液在25℃搅拌3小时。反应用5mL EtOH稀释然后浓缩。残余物 从甲醇和乙醚结晶，得到0.85g(70％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(400MHz，CD3OD)8.18(d，1H)，8.04(s，1H)，7.22(dd，1H)， 7.12(d，1H)，5.76(m，1H)，3.54.(m，2H)，3.16(m，2H)，2.92(m，1H)，2.30(m， 4H)，2.10(m，2H)，1.75(m，6H)。质谱(ESI，m/z)：C22H25N5O，计算值 376.2(M+H)，实测值376.2。
实施例15
4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基) -2-环己-1-烯基-苯基]-酰胺
根据实施例37中的方法从4-氰基-1H-吡咯-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4- 哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例13步骤(e)中制备)制备标题 化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)10.82(s，1H)，8.28(d，1H)，8.18(s，1H)， 7.48(d，1H)，7.16(dd，1H)，7.02(s，1H)，6.72(s，1H)，5.88(m，1H)，4.82(m， 1H)，3.98.(m，1H)，3.20(m，1H)，2.70(m，2H)，2.29(m，4H)，2.18(s，3H)， 1.80(m，8H)。质谱(ESI，m/z)：C25H28N4O2，计算值417.2(M+H)，实测值 417.1。
实施例16
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基) -2-环己-1-烯基-苯基]-酰胺
根据实施例37中的方法从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4- 哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例13步骤(b)中制备)制备标题 化合物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)13.12(br s，1H)，9.58(s，1H)，8.34(d， 1H)，7.76(s，1H)，7.21(dd，1H)，7.05(d，1H)，5.86(s，1H)，4.84(m，2H)， 4.00(m，1H)，3.22(m，1H)，2.72(m，2H)，2.30(m，4H)，2.21(s，3H)，1.80(m， 8H)。质谱(ESI，m/z)：C24H27N5O2，计算值418.2(M+H)，实测值418.1。
实施例17
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基) -4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例14的方法从4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(d)中制备)和4-[4-氨基-3-(4-甲 基-环己-1-烯基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根据实施例13步骤(d)中的方 法制备，用4-甲基-1-环己-1-烯基硼酸代替环己-1-烯基硼酸)制备标题化 合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.18(d，1H)，8.04(s，1H)，7.22(dd，1H)， 7.12(d，1H)，5.80(m，1H)，3.54.(m，2H)，3.18(m，2H)，2.94(m，1H)，2.30(m， 3H)，2.12(m，2H)，1.92(m，5H)，1.54(m，1H)，1.12(d，3H)。质谱(ESI，m/z)： C23H27N5O，计算值390.2(M+H)，实测值390.2。
实施例18
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环戊-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺三氟乙酸盐
根据实施例14的方法从4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(d)中制备)和4-(4-氨基-3-环戊 -1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根据实施例13步骤(d)中的方法制备， 用环戊烯-1-基硼酸代替环己-1-烯基硼酸)制备标题化合物。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)14.25(br s，1H)，10.00(s，1H)，8.36(s，1H)，7.72(d，1H)， 7.18(m，2H)，6.06(s，1H)，4.12(m，1H)，3.42(m，2H)，3.18(m，2H)，3.00(m， 3H)，2.80(m，2H)，1.92(m，5H)。质谱(ESI，m/z)：C21H23N5O，计算值 362.2(M+H)，实测值362.2。
实施例19
以下描述用于合成实施例1中所述中间体的替代方法。
5-氰基-呋喃-2-甲酸
向装备有机械搅拌器、加热罩、和冷凝器的250-mL三口圆底烧瓶 加入5-甲酰基-2-呋喃甲酸(9.18g，65.6mmol)和吡啶(60mL)。加入羟胺 盐酸盐(5.01g，72.2mmol)并且混合物加热到85℃。加入乙酸酐(40mL) 并将反应在85℃搅拌3小时，然后在40℃减压蒸发溶剂。将残余物溶 解于水，用2.0N NaOH溶液碱化到pH 9，并且用4∶1二氯甲烷/2-丙醇 提取直到吡啶完全除去(5x 200mL)。然后将水溶液用2.0N HCl溶液酸 化到pH 2，用固体NaCl饱和，并且用4∶1二氯甲烷/2-丙醇提取(5x 200 mL)。合并的有机提取物用Na2SO4干燥并且真空浓缩到干燥。残余物从 二氯甲烷结晶，得到6.80g的标题化合物，为白色固体(76％)。质谱 (ESI-neg，m/z)C6H3NO3，计算值136.0(M-H)，实测值136.1。1H NMR谱 符合指定结构。
实施例20
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺
向烧瓶加入甲烷磺酰基-乙酸(14mg，0.10mmol)、EDCI(30mg，0.15 mmol)、HOBt(14mg，0.10mmol)、DIEA(36μL，0.20mmol)和0.5mL DCM 并且在25℃搅拌。在10分钟之后，加入包含4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2- 环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(40mg，0.08mmol)(如实施 例20步骤(b)中制备)和NEt3(14μL，0.09mmol)的0.5mL DCM溶液并使 反应在25℃进行10小时。将反应混合物加载在5-g SPE柱(二氧化硅) 上，并且用10％EtOH/EtOAc洗脱标题化合物，得到10mg(25％)的白 色固体。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：11.60(br s，1H)，9.52(s，1H)，8.30(d， 1H)，7.74(s，1H)，7.60(dd，1H)，7.03(d，1H)，5.86(m，1H)，4.84(m，1H)， 4.18(s，2H)，4.12(m，1H)，3.32(m，1H)，3.20(s，3H)，2.82(m，2H)，2.30(m， 4H)，1.98(m，2H)，1.84(m，5H)，1.72(m，1H)。质谱(ESI，m/z)：C25H29N5O4S， 计算值496.2(M+H)，实测值496.2。
实施例21
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-吡啶-2-基甲基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(88mg，0.18mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、吡啶 -2-甲醛(17μL，0.21mmol)、NEt3(30μL，0.21mmol)、三乙酰氧基硼氢化 钠(56mg，0.25mmol)和0.8mL 1，2-二氯乙烷并且在25℃搅拌10小时。 蒸发溶剂并将标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN 的0.1％TFA/H2O在20分钟内洗脱，得到81mg(78％)的白色固体。 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：14.25(br s，1H)，9.90(br s，1H)，9.79(s，1H)， 8.72(s，1H)，8.36(s，1H)，7.98(m，1H)，7.88(dd，1H)，7.58(d，1H)，7.52(m， 1H)，7.20(m，1H)，7.12(d，1H)，5.76(m，1H)，4.56(s，2H)，3.40(m，2H)， 3.18(m，2H)，2.88(m，1H)，2.20(m，4H)，2.00(m，4H)，1.72(m，4H)。质谱 (ESI，m/z)：C28H30N6O，计算值467.2(M+H)，实测值467.2。
实施例22
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-(1-吡啶-2-基甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
这个化合物根据实施例21中的方法从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸 [2-(4-甲基-环己-1-烯基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺(如实施例17中制备)和 吡啶-2-甲醛制备。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：14.25(br s，1H)，9.90(br s，1H)，9.79(s，1H)，8.72(s，1H)，8.36(s，1H)，7.98(m，1H)，7.86(dd，1H)， 7.54(d，1H)，7.52(m，1H)，7.20(m，1H)，7.12(d，1H)，5.74(m，1H)，4.56(s， 2H)，3.40(m，2H)，3.18(m，2H)，2.88(m，1H)，2.48-2.22(m，3H)，2.18-2.06(m， 4H)，1.98-1.82(m，3H)，1.52(m，1H)，1.02(s，3H)。质谱(ESI，m/z)： C28H32N6O，计算值481.2(M+H)，实测值481.2。
实施例23
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环戊-1-烯基-4-[1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基甲 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例21中的方法，这个化合物从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2- 环戊-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例18中制备)和1- 甲基-1H-咪唑-2-甲醛制备。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.03(m，2H)， 7.50(d，1H)，7.42(s，1H)，7.20(m，2H)，6.02(m，1H)，4.22(s，2H)，3.96(s，3H)， 3.30(m，2H)，2.82-2.40(m，7H)，2.13-1.84(m，6H)。质谱(ESI，m/z)： C26H29N7O，计算值456.2(M+H)，实测值456.2。
实施例24
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基} -哌啶-1-甲酸酰胺
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(51mg，0.10mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、 NEt3(22μL，0.15mmol)、三甲基甲硅烷基异氰酸酯(16μL，0.11mmol)和 1.0mL的DCM并且在25℃搅拌10小时。蒸发溶剂并将标题化合物通 过RP-HPLC(C18)纯化，用含35-60％CH3CN的0.1％TFA/H2O在11分 钟内洗脱，得到30mg(70％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)： δ14.28(br s，1H)，9.76(s，1H)，8.34(s，1H)，7.84(d，1H)，7.18(dd，1H)， 7.08(d，1H)，6.00(br s，2H)，5.72(m，1H)，4.18(m，2H)，2.80-2.60(m，3H)， 2.24-2.10(m，4H)，1.80-1.60(m，6H)，1.50(m，2H)。质谱(ESI，m/z)： C23H26N6O，计算值419.2(M+H)，实测值419.0。
实施例25
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡啶 -4-基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(75mg，0.15mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、 K2CO3(84mg，0.60mmol)、2-氟吡啶(27μL，0.30mmol)和0.3mL的N，N- 二甲基乙酰胺并且在120℃搅拌8小时。反应用3mL H2O稀释并且标题 化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O 在9分钟内洗脱，得到50mg(75％)的白色固体。1H-NMR(400MHz， CD3OD)：8.18(d，1H)，8.06(m，1H)，8.02(s，1H)，7.94(dd，1H)，7.48(d，2H)， 7.22(dd，1H)，7.12(d，1H)，6.98(t，1H)，5.82(m，1H)，4.32(m，2H)，3.46(m， 2H)，3.00(m，1H)，2.30(m，4H)，2.18(m，2H)，1.96-1.74(m，6H)。质谱(ESI， m/z)：C27H28N6O，计算值453.2(M+H)，实测值453.2。
实施例26
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-羟基-乙基)-哌啶-4-基]- 苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例21中的方法从4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4- 哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例14步骤(b)中制备)、和羟基-乙醛 制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.18(d，1H)，8.02(s，1H)， 7.22(dd，1H)，7.14(d，2H)，5.82(m，1H)，3.94(m，2H)，3.74(m，2H)，3.30(m， 2H)，3.18(t，2H)，2.92(m，1H)，2.30(m，4H)，2.20-1.98(m，4H)，1.96-1.74(m， 4H)。质谱(ESI，m/z)：C24H29N5O2，计算值420.2(M+H)，实测值420.2。
实施例27
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氰基-乙基)-哌啶-4-基]-2-环己-1-烯基- 苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(77mg，0.16mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、NEt3 (24μL，0.16mmol)、丙烯腈(12μL，0.18mmol)、0.1mL MeOH和1.0mL 的1，2-二氯乙烷并且在80℃搅拌1小时。将反应浓缩并且标题化合物通 过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分 钟内洗脱，得到83mg(95％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.18(d，1H)，8.06(m，1H)，7.22(dd，1H)，7.12(d，1H)，5.82(m，1H)，3.76(m， 2H)，3.60(m，2H)，3.28(t，2H)，3.12(t，2H)，2.92(m，1H)，2.30(m，4H)， 2.18-1.98(m，4H)，1.92-1.74(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C25H28N6O，计算值 429.2(M+H)，实测值429.2。
实施例28
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-氨基甲酰基甲基-哌啶-4-基)-2-环己-1-烯基 -苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(50mg，0.10mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、NEt3 (32μL，0.23mmol)、2-溴乙酰胺(16mg，0.12mmol)、和0.5mL的DCM 并且在25℃搅拌4小时。将反应浓缩并且标题化合物通过RP-HPLC(C18) 纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分钟内洗脱，得到 42mg(75％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ14.28(br s，1H)， 9.78(s，1H)，9.50(br s，1H)，8.34(s，1H)，8.00(s，1H)，7.88(d，1H)，7.72(s， 1H)，7.18(dd，1H)，7.10(d，1H)，5.76(m，1H)，3.94(s，2H)，3.58(m，2H)， 3.12(m，2H)，2.80(m，1H)，2.20(m，4H)，1.98(m，4H)，1.80(m，4H)。质谱 (ESI，m/z)：C24H28N6O2，计算值433.2(M+H)，实测值433.2。
实施例29
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-2-基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(25mg，0.05mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、吡啶 -2-基-乙酸盐酸盐(10mg，0.06mmol)、EDCI(12mg，0.06mmol)、 HOBt(8.0mg，0.06mmol)、DIEA(36μL，0.20mmol)和0.2mL DMF并且 在25℃搅拌10小时。反应用2mL H2O稀释并将标题化合物通过 RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％TFA/H2O在9分钟 内洗脱，得到22mg(70％)的白色固体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.82(d，1H)，8.52(t，1H)，8.14(d，1H)，8.04(s，1H)，7.96(m，3H)，7.20(dd， 1H)，7.10(d，1H)，5.82(m，1H)，4.68(m，1H)，4.32(m，2H)，4.18(m，1H)， 3.40(m，1H)，2.88(m，2H)，2.30(m，4H)，2.06-1.60(m，8H)。质谱(ESI，m/z)： C29H30N6O2，计算值495.2.2(M+H)，实测值495.2。
实施例30
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-3-基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用吡啶-3-基-乙酸从4-氰基-1H-咪唑-2- 甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例14步骤(b) 中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.80(m，2H)， 8.54(d，1H)，8.10(d，1H)，8.06(t，1H)，7.98(s，1H)，7.18(dd，1H)，7.08(d，1H)， 5.78(m，1H)，4.68(m，1H)，4.20(m，1H)，4.18(s，2H)，3.36(m，1H)，2.84(m， 2H)，2.28(m，4H)，2.06-1.70(m，7H)，1.62(m，1H)。质谱(ESI，m/z)： C29H30N6O2，计算值495.2(M+H)，实测值495.2。
实施例31
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吡啶-4-基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用吡啶-4-基-乙酸从4-氰基-1H-咪唑-2- 甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施例14步骤(b) 中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.78(d，2H)， 8.12(d，1H)，8.00(m，3H)，7.18(dd，1H)，7.08(d，1H)，5.80(m，1H)，4.66(m， 1H)，4.22(s，2H)，4.18(m，1H)，3.34(m，1H)，2.84(m，2H)，2.24(m，4H)， 2.00-1.70(m，7H)，1.64(m，1H)。质谱(ESI，m/z)：C29H30N6O2，计算值 495.2(M+H)，实测值495.2。
实施例32
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-乙 酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-乙酸从4-氰基 -1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施 例14步骤(b)中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.82(s，1H)，8.10(d，1H)，8.00(s，1H)，7.42(s，1H)，7.16(dd，1H)，7.06(d， 1H)，5.80(m，1H)，4.66(m，1H)，4.12(m，1H)，4.04(m，2H)，3.92(s，3H)， 3.28(m，1H)，2.82(m，2H)，2.26(m，4H)，2.00-1.70(m，7H)，1.64(m，1H)。质 谱(ESI，m/z)：C28H31N7O2，计算值498.2(M+H)，实测值498.2。
实施例33
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-1H-咪唑-4-基-乙酰基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
根据实施例29中的方法，使用(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-乙酸从4-氰基 -1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实施 例14步骤(b)中制备)制备标题化合物。1H-NMR(400MHz，CD3OD)： 8.88(s，1H)，8.12(d，1H)，8.02(s，1H)，7.44(s，1H)，7.20(dd，1H)，7.10(d， 1H)，5.82(m，1H)，4.70(m，1H)，4.18(m，1H)，4.06(m，2H)，3.36(m，1H)， 2.84(m，2H)，2.30(m，4H)，2.00-1.70(m，7H)，1.64(m，1H)。质谱(ESI，m/z)： C27H29N7O2，计算值484.2(M+H)，实测值484.2。
实施例34
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4- 基]-苯基}-酰胺双三氟乙酸盐
a)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸{2-环 己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向烧瓶加入4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2- 甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(830mg，1.34 mmol)(如实施例39步骤(a)中制备)、K2CO3(600mg，4.34mmol)、碘化钠 (40mg，0.27mmol)、4-(2-氯-乙基)-吗啉盐酸盐(260mg，1.40mmol)、和 5.0mL N，N-二甲基乙酰胺并且在80℃搅拌8小时。反应用EtOAc(50mL) 稀释并用NaHCO3(2x 50mL)、盐水(50mL)洗涤并且浓缩。标题化合物 通过快速色谱法纯化(硅胶，5％MeOH/DCM)，得到650mg(78％)的白 色固体。质谱(ESI，m/z)：C34H50N6O3 Si，计算值619.4(M+H)，实测值 619.3。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)- 哌啶-4-基]-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸{2-环 己-1-烯基-4-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(650mg，1.05 mmol)(如前述步骤制备)在10mL DCM中的溶液加入0.3mL EtOH和3.0 mL TFA，并使反应在25℃进行2小时。反应用10mL EtOH稀释并且浓 缩。标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％CH3CN的0.1％ TFA/H2O在9分钟内洗脱，得到600mg(80％)的白色固体。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)：8.18(d，1H)，8.04(s，1H)，7.24(dd，1H)，7.14(d，1H)， 5.84(m，1H)，3.84(m，4H)，3.76(m，2H)，3.50(m，2H)，3.30-3.10(m，4H)， 2.92(m，5H)，2.30(m，4H)，2.20-2.00(m，4H)，1.90-1.74(m，4H)。质谱(ESI， m/z)：C28H36N6O2，计算值489.2，实测值489.2。
实施例35
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-4-哌 啶-4-基-苯基]-酰胺
a)三氟甲烷磺酸3，6-二氢-2H-噻喃-4-基酯
在-78℃在Ar下将四氢-噻喃-4-酮(1.00g，8.61mmol)在10ml THF中 的溶液加入到LDA(2.0M，4.52ml，9.04mmol)的20ml THF溶液中。使 混合物回温到RT并且搅拌0.5小时，然后再次冷却到-78℃。加入N- 苯基三氟甲烷磺酰亚胺(3.42g，9.47mmol)的在10ml THF中的溶液。得 到的混合物回温到RT并且在Ar下搅拌0.5小时。用200ml EtOAc处理， 混合物用H2O(3x50mL)、盐水(50mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除 去溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(己烷-3％EtOAc/己烷)， 得到810mg(38％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ6.01(m，1H)，3.30(m，2H)，2.86(dd，2H，J＝5.7，5.7Hz)， 2.58-2.64(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C6H7F3O3S2，计算值249.0(M+H)，实 测值249.3。
b)4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-噻喃
向4-硝基苯基硼酸(418mg，2.50mmol)、三氟-甲烷磺酸3，6-二氢 -2H-噻喃-4-基酯(如前述步骤制备，931mg，3.75mmol)、Pd(PPh3)4(433 mg，0.375mmol)和氯化锂(LiCl)(212mg，5.0mmol)在20mL 1，4-二氧杂 环己烷中的混合物加入2.0M Na2CO3水溶液(3.13mL，6.25mmol)。将 得到的混合物在80℃搅拌2小时然后冷却到RT。用200mL EtOAc处理， 混合物用H2O(30mL)、盐水(30mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去 溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(1-3％EtOAc/己烷)，得到 470mg(85％)的标题化合物，为浅棕色油状物。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：8.19(d，2H，J＝9.1Hz)，7.48(d，2H，J＝9.1Hz)，6.36(m，1H)， 3.39(m，2H)，2.91(t，2H，J＝5.7Hz)，2.72(m，2H)。质谱(ESI，m/z)： C11H11NO2S，计算值222.1(M+H)，实测值222.3。
c)4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-噻喃1，1-二氧化物
在-78℃在Ar下将3-氯过氧苯甲酸(1.04g，4.62mmol，77％)在15 mL二氯甲烷(DCM)中的溶液缓慢加入到4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H- 噻喃(如前述步骤制备，465mg，2.10mmol)在15mL DCM中的溶液。将 混合物在-78℃搅拌0.5小时，然后回温到RT。用100mL EtOAc处理， 混合物用10％Na2SO3(15mL)、饱和NaHCO3水溶液(20mL)、H2O(20 mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物 在硅胶上进行快速色谱纯化(2-5％EtOAc/DCM)，得到518mg(97％)的 标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：8.23(d，2H，J＝9.0 Hz)，7.52(d，2H，J＝9.0Hz)，6.04(m，1H)，3.86(m，2H)，3.26-3.31(m，2H)， 3.18-3.23(m，2H)。
d)4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺
在RT将4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-噻喃1，1-二氧化物(如前述步 骤制备，502mg，1.98mmol)和10％Pd/C(250mg，50wt％)在15mL MeOH中的混合物在H2(气球压力)下搅拌2小时。通过在硅藻土上过滤 除去Pd催化剂，并将滤液浓缩，得到314mg(70％)的标题化合物，为 略带黄色的固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：7.03(d，2H，J＝8.3Hz)， 6.67(d，2H，J＝8.3Hz)，3.51-3.79(br s，2H)，3.11-3.17(m，4H)，2.70(dddd， 1H，J＝12.3，12.3，2.9，2.9Hz)，2.31-2.43(m，2H)，2.15-2.23(m，2H)。
e)2-溴-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺
在0℃在Ar下向4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前述步 骤制备，174mg，0.77mmol)在20mL 3∶1DCM/MeOH中的悬浮液加入含 N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)(137mg，0.77mmol)的5mL DCM。使混合物回 温到RT并且在Ar下搅拌1小时。用100mL EtOAc处理，混合物用 H2O(20mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随 后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(2-3％EtOAc/DCM)，得到155 mg(66％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：7.28(d， 1H，J＝2.0Hz)，6.97(dd，1H，J＝8.3，2.0Hz)，6.73(d，1H，J＝8.3Hz)， 4.07(br s，2H)，3.09-3.14(m，4H)，2.66(dddd，1H，J＝12.1，12.1，3.3，3.3Hz)， 2.26-2.39(m，2H)，2.12-2.21(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C11H14BrNO2S，计 算值304.0(M+H)，实测值304.1。
f)2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺
向2-溴-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前述步骤制备， 150mg，0.493mmol)、环己烯-1-基硼酸(70mg，0.542mmol)和 Pd(PPh3)4(57mg，0.0493mmol)在5mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物加 入2.0M Na2CO3水溶液(2.0mL，4.0mmol)。将得到的混合物在Ar下在 80℃搅拌8小时，然后冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物用 H2O(15mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随 后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(2-5％EtOAc/DCM)，得到130 mg(86％)的标题化合物，为棕色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： 6.89(dd，1H，J＝8.4，2.3Hz)，6.84(d，1H，J＝2.3Hz)，6.65(d，1H，J＝8.4 Hz)，5.74(m，1H)，3.74(br s，2H)，3.08-3.17(m，4H)，2.66(dddd，1H，J＝12.1， 12.1，3.1，3.1Hz)，2.29-2.42(m，2H)，2.13-2.25(m，6H)，1.73-1.81(m，2H)， 1.65-1.73(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C17H23NO2S，计算值306.1(M+H)，实 测值306.1。
g)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺
向2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前述步 骤制备，122mg，0.50mmol)、4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾(如实施例3步骤(d)中制备，134mg，0.44mmol) 和溴代三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐(PyBroP)(205mg，0.44mmol)在5mL DMF中的混合物加入DIEA(209μL，1.20mmol)。得到的混合物在Ar下 在RT搅拌18小时，冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物用H2O(10 mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物 在硅胶上进行快速色谱纯化(1-3％EtOAc/DCM)，得到161mg(73％)的 标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.69(s，1H)， 8.29(d，1H，J＝8.4Hz)，7.78(s，1H)，7.14(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，7.04(d， 1H，J＝2.2Hz)，5.95(s，2H)，5.83(m，1H)，3.66(t，2H，J＝8.2Hz)， 3.11-3.20(m，4H)，2.77(dddd，1H，J＝12.1，12.1，3.2，3.2Hz)，2.35-2.47(m， 2H)，2.17-2.33(m，6H)，1.74-1.89(m，4H)，0.97(t，2H，J＝8.2Hz)，0.00(s， 9H)。质谱(ESI，m/z)：C28H38N4O4SSi，计算值555.2(M+H)，实测值555.3。
h)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻 喃-4-基)-苯基]-酰胺
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1，1-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺(如前述步骤制 备，145mg，0.261mmol)在6mL DCM中的溶液加入0.20mL EtOH，随 后加入2mL TFA。得到的溶液在RT搅拌3小时。减压除去溶剂，随后 残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(20-25％EtOAc/DCM)，得到83 mg(90％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： 12.34(s，1H)，9.60(s，1H)，8.35(d，1H，J＝8.4Hz)，7.75(s，1H)，7.30(dd，1H， J＝8.4，2.2Hz)，7.08(d，1H，J＝2.2Hz)，5.86(m，1H)，3.11-3.23(m，4H)， 2.80(dddd，1H，J＝12.2，12.2，2.8，2.8Hz)，2.40-2.57(m，2H)，2.17-2.35(m， 6H)，1.74-1.91(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C22H24N4O3S，计算值 425.2(M+H)，实测值425.6。
实施例36
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-4-哌 啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
a)2-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-5，5-二甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环己烷
将三氟甲烷磺酸3，6-二氢-2H-噻喃-4-基酯(如实施例35步骤(a)中制 备，500mg，2.01mmol)、双(新戊基二醇根合)二硼(bis(neopentyl glycolato)diboron，478mg，2.11mmol)、Pd(dppf)Cl2(147mg，0.20mmol) 和KOAc(592mg，6.03mmol)在8mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物在Ar 下在80℃搅拌8小时，然后冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物 用H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂， 随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(0-5％EtOAc/DCM)，得到351 mg(82％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ 6.62(m，1H)，3.63(s，4H)，3.21(m，2H)，2.68(t，2H，J＝5.8Hz)，2.37(m，2H)， 0.96(s，6H)。质谱(ESI，m/z)：C10H17BO2S，计算值213.1(M+H)，实测值 213.1。
b)4-[4-氨基-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例13步骤(c)中 制备，200mg，0.563mmol)、2-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-5，5-二甲基-[1，3，2] 二氧杂硼杂环己烷(如前述步骤制备，131mg，0.619mmol)和 Pd(PPh3)4(65mg，0.056mmol)在5mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物加入 2.0M Na2CO3水溶液(2.25mL，4.5mmol)。将得到的混合物在Ar下在 80℃搅拌7小时，然后冷却到RT。用50mL EtOAc处理，混合物用 H2O(15mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随 后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(15-30％EtOAc/己烷)，得到141 mg(67％)的标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： 6.91(dd，1H，J＝8.2，2.2Hz)，6.81(d，1H，J＝2.2Hz)，6.65(d，1H，J＝8.2 Hz)，5.91(m，1H)，4.22(br s，2H)，3.66(br s，2H)，3.29-3.31(m，2H)，2.87(dd， 2H，J＝5.7，5.7Hz)，2.77(m，2H)，2.47-2.56(m，3H)，1.78(d，2H，J＝12.6 Hz)，1.50-1.63(m，2H)，1.48(s，9H)。质谱(ESI，m/z)：C21H30N2O2S，计算值 375.2(M+H)，实测值375.2。
c)4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-[4-氨基-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (如前述步骤制备，45mg，0.12mmol)、4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙 氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾(如实施例3步骤(d)中制备，44mg，0.144 mmol)和PyBroP(67mg，0.144mmol)在2mL DMF中的混合物加入 DIEA(4μL，0.24mmol)。将得到的混合物在Ar下在RT搅拌4h。用30 mL EtOAc处理，混合物用H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥 (Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(1-2％ EtOAc/DCM)，得到64mg(85％)的标题化合物，为浅黄色油状物。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.51(s，1H)，8.21(d，1H，J＝8.5Hz)，7.78(s， 1H)，7.16(dd，1H，J＝8.5，2.1Hz)，7.02(d，1H，J＝2.1Hz)，6.00(m，1H)， 5.92(s，2H)，4.25(br s，2H)，3.66(t，2H，J＝8.2)，3.42(m，2H)，2.93(dd，2H，J ＝5.7，5.7Hz)，2.79(m，2H)，2.63(dddd，1H，J＝12.3，12.3，3.3，3.3Hz)， 2.49-2.56(m，2H)，1.82(d，2H，J＝12.8Hz)，1.56-1.66(m，2H)，1.49(s，9H)， 0.97(t，2H，J＝8.2Hz)，0.00(s，9H)。
d)4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸 叔丁酯
在-78℃在Ar下将3-氯过氧苯甲酸(91mg，0.404mmol，77％)在1 mL DCM中的溶液缓慢加入到含4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙 氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-3-(3，6-二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶 -1-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备，120mg，0.192mmol)的3mL DCM中。 混合物在78℃搅拌15分钟，然后回温到RT。用40mL EtOAc处理，混 合物用15％Na2SO3(5mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)、H2O(10 mL)、盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂，随后残余物 在硅胶上进行快速色谱纯化(2-10％EtOAc/DCM)，得到85mg(67％)的 标题化合物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.23(s，1H)， 8.03(d，1H，J＝8.3Hz)，7.80(s，1H)，7.21(dd，1H，J＝8.3，2.0Hz)，7.06(d， 1H，J＝2.0Hz)，5.93(s，2H)，5.75(t，1H，J＝4.1Hz)，4.25(br s，2H)，3.86(br s，2H)，3.66(t，2H，J＝8.2Hz)，3.29(t，2H，J＝6.3Hz)，3.03(t，2H，J＝5.4 Hz)，2.74-2.86(m，2H)，2.64(dddd，1H，J＝12.3，12.3，3.3，3.3Hz)，1.82(d， 2H，J＝12.3Hz)，1.55-1.65(m，2H)，1.49(s，9H)，0.98(t，2H，J＝8.2Hz)， 0.01(s，9H)。质谱(ESI，m/z)：C32H45N5O6SSi，计算值656.3(M+H)，实测 值656.7。
e)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4- 基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺，三氟乙酸盐
向4-[4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸 叔丁酯(如前述步骤制备，81mg，0.123mmol)在6mL DCM中的溶液加 入0.20mL EtOH，随后加入2mL TFA。得到的溶液在RT搅拌3小时。 减压除去溶剂，得到64mg(96％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：8.02(s，1H)，7.78(d，1H，J＝8.3Hz)，7.29(dd， 1H，J＝8.3，2.0Hz)，7.21(d，1H，J＝2.0Hz)，5.71(t，1H，J＝4.2Hz)，3.83(br s，2H)，3.51(d，2H，J＝12.4Hz)，3.33(t，2H，J＝6.0Hz)，3.15(td，2H，J＝ 13.1，2.6Hz)，3.01(m，2H)，2.94(dddd，1H，J＝12.2，12.2，3.5，3.5Hz)， 2.08(d，2H，J＝12.9Hz)，1.91(m，2H，J＝13.3，13.3，13.3，3.8Hz)。质谱 (ESI，m/z)：C21H23N5O3S，计算值426.2(M+H)，实测值426.2。
实施例37
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，1-二氧代-1，2，3，6- 四氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺
在RT向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-(1，1-二氧代-1，2，3，6-四氢-1λ6-噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐(如实施例36步骤(e)中制 备，62mg，0.115mmol)在4mL的1∶1DCM/DMF中的悬浮液加入 DIEA(60μL，0.345mmol)。将混合物搅拌5分钟，然后将乙酸酐(11μL， 0.121mmol)缓慢加入到混合物中，并将得到的混合物在RT搅拌0.5小 时。用40mL EtOAc处理，混合物用H2O(20mL)洗涤。水层用 EtOAc(10mL)提取。合并的有机层真空浓缩。残余物通过硅胶上的快 速色谱法纯化(1-4％MeOH/DCM)，得到50.9mg(95％)的标题化合物， 为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：13.0(s，1H)，9.10(s，1H)，8.13(d， 1H，J＝8.4Hz)，7.77(d，1H，J＝2.3Hz)，7.26(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)， 7.08(d，1H，J＝2.0Hz)，5.77(t，1H，J＝4.3Hz)，4.84(dt，1H，J＝13.3，2.1 Hz)，4.00(dt，1H，J＝13.3，2.1Hz)，3.89(br s，2H)，3.31(t，2H，J＝6.2Hz)， 3.23(td，1H，J＝13.2，2.5Hz)，3.02(m，2H)，2.77(dddd，1H，J＝11.9，11.9， 3.4，3.4Hz)，2.68(ddd，1H，J＝12.6，12.6，2.9Hz)，2.18(s，3H)，1.70-1.97(m， 4H)。质谱(ESI，m/z)：C23H25N5O4S，计算值468.2(M+H)，实测值468.1。
实施例38
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}-酰胺
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，655mg，1.30mmol)在DCM(15mL) 中的混合物冷却到0℃并且加入DIEA(0.92mL，5.2mmol)。然后在10分 钟内分批加入二甲基氨基乙酰氯盐酸盐(211mg，1.3mol)。将反应混合物 在0℃搅拌30分钟并且使其回温到RT并且搅拌2小时。真空除去溶剂 并将得到的残余物在盐水和DCM之间分配。将有机层分离，干燥 (Na2SO4)并且浓缩。将得到的残余物在二氧化硅上纯化(5％MeOH： DCM)，得到432mg(70％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CDCl3； 400MHz)：δ9.49(s，1H)，8.24(d，1H，J＝2.3Hz)，7.70(s，1H)，7.12(dd，1H， J＝8.4，2.1Hz)，7.01(s，1H)，5.82(m，1H)，4.75(d，1H，J＝13.4Hz)，4.13(d， 1H，J＝13.4Hz)，3.57(d，1H，J＝14.2Hz)，3.18(d，1H，J＝14.2Hz)，3.12(td， 1H，J＝13.3，2.4Hz)，2.73(dddd，1H，J＝11.9，11.9，3.8，3.8Hz)，2.65(ddd， 1H，J＝13.3，13.3，2.4Hz)，2.40(s，6H)，2.18-2.32(m，4H)，1.60-1.98(m， 8H)。质谱(ESI，m/z)：C26H32N6O2，计算值461.3(M+H)，实测值461.2。
实施例38b
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲基氨基-乙酰基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺
实施例38a的HPLC纯化还得到少量的4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2- 环己-1-烯基-4-[1-(2-甲基氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.02(d，1H，J＝8.4Hz)，7.92(s，1H)， 7.07(dd，1H，J＝8.4Hz，J＝2.4Hz)，6.98(d，1H，J＝2.4Hz)，5.73-5.68(m， 1H)，4.60-4.51(m，1H)，3.76-3.68(m，1H)，3.20-3.11(m，1H)，2.81-2.70(m， 2H)，2.67(s，3H)，2.22-2.13(m，4H)，1.88-1.66(m，6H)，1.66-1.46(m，2H)。质 谱(ESI，m/z)：C25H30N6O2，计算值447.2(M+H)，实测值447.3。
实施例39
4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1-甲酸 (2-羟基-乙基)-酰胺
a)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己 -1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺，三氟乙酸盐
在0℃向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑 -2-羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例14步 骤(a)中制备，81mg，0.123mmol)在18mL DCM中的溶液加入1mL EtOH，随后在加入5mL TFA。将得到的溶液在RT搅拌0.5小时，用 20mL EtOH处理，随后用20mL n-PrOH和5mL H2O处理。然后将混 合物减压浓缩，得到浅黄色固体。产物在硅胶上快速色谱纯化(2-4％ MeOH/DCM)，得到0.87g(85％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.70(s，1H)，9.66(br s，1H)，9.15(br s，1H)， 8.29(d，1H，J＝8.3Hz)，7.78(s，1H)，7.13(dd，1H，J＝8.3，2.2Hz)，7.03(d， 1H，J＝2.2Hz)，5.95(s，2H)，5.83(m，1H)，3.66(t，2H，J＝8.4Hz)，3.55(d， 2H，J＝12.3Hz)，2.95-3.11(m，2H)，2.76(m，1H)，2.18-2.33(m，4H)， 1.99-2.15(m，4H)，1.82(m，4H)，0.97(t，2H，J＝8.3Hz)，0.00(s，9H)。质谱 (ESI，m/z)：C28H39N5O2Si，计算值506.3(M+H)，实测值506.1。
b)4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
在-78℃在Ar下将4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪 唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如前述步 骤制备，116mg，0.192mmol)和DIEA(13μL，0.770mmol)在4mL DCM 中的溶液缓慢加入到三光气(23mg，0.0768mmol)在4mL DCM中的溶液 中。将混合物在-78℃搅拌15分钟，回温到RT并且搅拌15分钟，再次 冷却到-78℃。加入2-氨基-乙醇(35μL，5.77mmol)在4mL THF中的悬 浮液并使得到的混合物回温到RT并且在Ar下搅拌20小时。用100mL EtOAc处理，混合物用H2O(20mL)、盐水(20mL)洗涤并且干燥 (Na2SO4)。真空除去溶剂，随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(10％ EtOAc/DCM，然后用5％MeOH/DCM)，得到95mg(83％)的标题化合 物，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.68(s，1H)，8.25(d，1H， J＝8.4Hz)，7.77(s，1H)，7.12(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，7.01(d，1H，J＝2.2 Hz)，5.94(s，2H)，5.83(m，1H)，4.96(t，1H，J＝5.6Hz)，4.11(d，2H，J＝13.3 Hz)，3.75(ddd，2H，J＝4.4Hz)，3.66(t，2H，J＝8.3Hz)，3.44(ddd，2H，J＝ 5.0Hz)，3.36(t，1H，J＝4.6Hz)，2.91(ddd，2H，J＝13.0，2.2Hz)，2.66(dddd， 1H，J＝12.2，12.2，3.3，3.3Hz)，2.18-2.33(m，4H)，1.75-1.91(m，6H)， 1.67(dddd，2H，J＝12.9，12.9，12.9，4.0Hz)，0.97(t，2H，J＝8.3Hz)，0.00(s， 9H)。质谱(ESI，m/z)：C31H44N6O4Si，计算值593.3(M+H)，实测值593.1。
c)4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶 -1-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺(如前述 步骤制备，95mg，0.16mmol)在3mL DCM中的溶液加入0.10mL EtOH， 随后加入1.0mL TFA。将得到的溶液在RT搅拌6小时。减压除去溶剂， 随后残余物在硅胶上进行快速色谱纯化(2-8％MeOH/DCM)，得到68 mg(92％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)： 8.09(d，1H，J＝8.4Hz)，8.00(s，1H)，7.15(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，5.79(m， 1H)，4.15(dd，2H，J＝13.3，1.1Hz)，3.61(t，2H，J＝5.9Hz)，3.27-3.32(m， 2H)，2.90(ddd，2H，J＝13.0，13.0，2.5Hz)，2.73(dddd，1H，J＝12.1，12.1， 2.6，2.6Hz)，2.26(m，4H)，1.73-1.88(m，6H)，1.62(dddd，2H，J＝12.6，12.6， 12.6，4.0Hz)。质谱(ESI，m/z)：C25HxN6O3，计算值463.2(M+H)，实测值 463.2。
实施例40
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙基)-哌啶 -4-基]-苯基}-酰胺
a)甲烷磺酸2-甲烷磺酰基-乙酯
在Ar下在0℃向甲烷磺酰氯(484mg，4.23mmol)在15mL DCM中 的溶液加入含2-甲烷磺酰基-乙醇(500mg，4.03mmol)的10mL DCM，随 后加入DIEA(1.05L，6.05mmol)。使混合物回温到RT并且在Ar下搅拌 20小时。混合物用100mL EtOAc处理并用H2O(3x20mL)、盐水(20mL) 洗涤并且干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂，得到534mg(66％)的标题化合 物，为棕色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：4.67(d，2H，J＝5.5Hz)， 3.46(d，2H，J＝5.5Hz)，3.11(s，3H)，3.04(s，3H)。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
在RT向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)- 酰胺三氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，85mg，0.174mmol)和 DIEA(91μL，0.521mmol)在3mL DCM中的溶液加入2-甲烷磺酸2-甲烷 磺酰基-乙酯(如前述步骤制备，42mg，0.208mmol)。将得到的混合物在 RT搅拌3小时。用50mL EtOAc处理，混合物用H2O(20mL)、盐水 (10mL)洗涤并且干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂，随后残余物在硅胶上进 行快速色谱纯化(1-3％MeOH/DCM)，得到54mg(65％)的标题化合物， 为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：9.54(s，1H)，8.25(d，1H，J＝8.4 Hz)，7.72(s，1H)，7.15(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)，7.04(d，1H，J＝2.0Hz)， 5.85(m，1H)，3.21(t，1H，J＝6.5Hz)，3.09(s，3H)，3.02-3.11(m，2H)，2.92(t， 2H，J＝6.5Hz)，2.52(dddd，1H，J＝12.1，12.1，3.3，3.3Hz)，2.18-2.34(m， 4H)，2.18(t，2H，J＝10.8Hz)，1.64-1.94(m，8H)。质谱(ESI，m/z)： C25H31N5O3S，计算值482.2(M+H)，实测值482.2。
根据所示的实施例制备以下化合物：
质谱 方法参
实施例 结构 [M+H]+实测值 分子式 考的实
计算值 施例
41497.2 497.2 C28H28N6O3 29
42497.2 497.3 C28H28N6O3 29
实施例43
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(吡啶-3-羰基)-哌啶-4-基] -苯基}-酰胺
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，75.0mg，0.15mmol)的CH2Cl2(10 mL)溶液用Et3N(64.1μL，0.46mmol)处理并且冷却到0℃。混合物用烟酰 氯盐酸盐(0.030g，0.17mmol)处理并且在0℃搅拌15分钟，然后在室温 搅拌17小时。将反应混合物直接吸附在硅胶上。硅胶色谱纯化(含10％ MeOH的EtOAc)得到标题化合物(61.0mg，83％)，为白色固体。 1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ9.51(br s，1H)，8.77(s，1H)，8.70-8.66(m，1H)， 8.32(d，1H，J＝8.4Hz)，7.86-7.81(m，1H)，7.70(s，1H)，7.42-7.37(m，1H)， 7.17(d，1H，J＝8.4Hz)，7.06-7.04(m，1H)，5.87-5.82(m，1H)，4.98-4.87(m， 1H)，3.94-3.84(m，1H)，3.29-3.18(m，1H)，2.98-2.86(m，1H)，2.86-2.76(m， 1H)，2.34-2.20(m，4H)，1.94-1.72(m，9H)。LC-MS(ESI，m/z)：C28H28N6O2， 计算值481.2(M+H)，实测值481.3.
实施例44
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基氨基)-乙酰 基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
a)[2-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌 啶-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯
将N-BOC-甘氨酸(0.29g，1.63mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液用 DIEA(0.85mL，4.90mmol)、HOBt(0.26g，1.96mmol)、和EDCI(0.38g， 1.96mmol)处理。混合物在室温搅拌10分钟并且加入到4-氰基-1H-咪唑 -2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例14 步骤(b)中制备，0.80g，1.63mmol)在CH2Cl2(20mL)中的悬浮液。溶液 在室温搅拌17小时。真空蒸发溶剂。硅胶色谱纯化(含50％EtOAc的 己烷)得到标题化合物(0.41g，47％)，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ9.53(s，1H)，8.26(d，1H，J＝8.4Hz)，7.80-7.78(m，1H)，7.71(s，1H)， 7.45-7.43(m，1H)，7.06(d，1H，J＝8.4Hz)，7.00(s，1H)，5.83(br s，1H)， 5.76(br s，1H)，4.78-4.68(m，1H)，3.96-3.85(m，2H)，3.17-3.03(m，1H)， 2.78-2.63(m，2H)，2.29(br s，2H)，2.22(br s，2H)，1.95-1.87(m，2H)， 1.86-1.72(m，4H)，1.70-1.55(m，2H)，1.44(s，9H)。LC-MS(ESI，m/z)： C29H36N6O4计算值533.3(M+H)，实测值532.9。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
将[2-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌 啶-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(如前述步骤制备，0.41g，0.77 mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液用EtOH(0.2mL)和TFA(6mL)处理。混合物 在室温搅拌45分钟并且真空蒸发溶剂。粗的物质直接用于下一步。 LC-MS(ESI，m/z)：C24H28N6O2计算值433.2(M+H)，实测值433.2。
c)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基氨基)- 乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐(如前述步骤制备，0.42g，0.77mmol)在 CH2Cl2(20mL)中的悬浮液用Na(OAc)3BH(0.33g，1.54mmol)和固体乙二 醛(44.6mg，0.77mmol)处理。将混合物在室温搅拌1小时，并且真空蒸 发溶剂。将残余物承载在MeOH中并且滤掉固体，将滤液真空浓缩。反 相HPLC(C-18柱)(含20％到60％乙腈的水，含0.1％TFA，在30分 钟内)得到标题化合物(83mg，19％，经两步)，为白色固体。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.16-8.09(m，1H)，8.05-8.01(m，1H)， 7.22-7.15(m，1H)，7.11-7.06(m，1H)，5.84-5.79(m，1H)，4.72-4.62(m，1H)， 4.24-3.91(m，2H)，3.89-3.80(m，2H)，3.28-3.18(m，2H)，2.92-2.79(m，2H)， 2.28(br s，4H)，1.98-1.89(m，2H)，1.89-1.76(m，4H)，1.76-1.57(m，2H)。 LC-MS(ESI，m/z)：C26H32N6O3计算值477.2(M+H)，实测值477.2。
实施例45
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基)-甲基-氨基- 乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
将4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-{1-[2-(2-羟基-乙基氨 基)-乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实施例44步骤(c)中制 备，50.0mg，0.085mmol)的MeOH(3mL)溶液用Na(OAc)3BH(39.5mg， 0.19mmol)和37％甲醛水溶液(8.2μL，0.10mmol)处理。混合物在室温搅 拌5.5小时，并且真空除去溶剂。反相HPLC(C-18柱)(含10％到50％乙 腈的水，含0.1％TFA，在30分钟内)，得到标题化合物(19.5mg，47％)， 为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.12(d，1H，J＝8.4Hz)，8.02(s， 1H)，7.19(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)，7.09(d，1H，J＝2.0Hz)，5.84-5.79(m， 1H)，4.72-4.64(m，1H)，4.39-4.23(m，2H)，3.84-3.79(m，1H)，3.31-3.21(m， 1H)，3.03-2.94(m，6H)，2.92-2.80(m，2H)，2.32-2.24(m，4H)，2.00-1.90(m， 2H)，1.90-1.76(m，5H)，1.78-1.59(m，2H)。LC-MS(ESI，m/z)：C27H34N6O3 计算值491.3(M+H)，实测值491.2.
实施例46
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢-吡啶-3- 基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
a)5-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
在Ar下将LDA(23.4mL，35.1mmol，1.5M，在环己烷中)的THF(50 mL)溶液冷却到-78℃。将该溶液通过滴加3-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (5.00g，25.1mmol)的THF(15mL)溶液处理并且搅拌15分钟。混合物用 1，1，1-三氟-N-苯基-N-[(三氟甲基)磺酰基]甲烷磺酰亚胺(12.5g，35.1 mmol)的THF(40mL)溶液处理。使混合物回温到室温并且搅拌2.5小时。 反应用NaHCO3饱和水溶液猝灭，用Et2O稀释，并用水洗涤。有机层 用MgSO4干燥并且真空浓缩。硅胶色谱纯化(含5％EtOAc的己烷)，得 到标题化合物(2.45g，30％)，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)： δ5.97-5.89(m，1H)，4.09-4.01(m，2H)，3.54-3.45(m，2H)，2.36-2.26(m，2H)， 1.48(s，9H)。LC-MS(ESI，m/z)：C11H16F3NO5S计算值332.1(M+H)，实测 值332.1。
b)5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯
将PdCl2dppf(0.16g，0.22mmol)，KOAc(2.18g，22.2mmol)、 4，4，5，5，4’，4’，5’，5’-八甲基-[2，2’]双[[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷基](2.07g， 8.13mmol)、和dppf(0.12g，0.22mmol)置于圆底烧瓶中，并且将烧瓶用 Ar吹扫。向烧瓶加入脱气的5-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1- 甲酸叔丁酯(如前述步骤制备，2.45g，7.40mmol)的二氧杂环己烷(70mL) 溶液并且加热到80℃，16小时。混合物过滤通过玻璃烧结漏斗，以除 去固体KOAc，将滤液真空浓缩。硅胶色谱纯化(含5％EtOAc的己烷)， 得到标题化合物(1.62g，71％)，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ6.69-6.60(m，1H)，3.98(br s，2H)，3.49-3.42(m，2H)，2.24-2.16(m， 2H)，1.47(s，9H)，1.27(s，12H)。LC-MS(ESI，m/z)：C18H28BNO4计算值 310.2(M+H)，实测值311.0.
c)4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
通过实施例35步骤(b)的Suzuki偶联方法，使用4-硝基苯基硼酸(167 mg，1.00mmol)和4-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁 酯(如实施例13步骤(a)中制备，295mg，1.00mmol)制备标题化合物。硅 胶色谱纯化(含10％EtOAc的己烷)，得到标题化合物(273mg，90％)， 为油状物。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ8.19(d，2H，J＝8.8Hz)，7.50(d， 2H，J＝8.8Hz)，6.23(m，1H)，4.12(m，2H)，3.66(m，2H)，2.54(m，2H)， 1.49(s，9H)。
d)1-[4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮
将4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步骤制 备，304mg，1.00mmol)在DCM/TFA的1∶1混合物(10mL)中的溶液在室 温搅拌3小时并且浓缩。残余物真空干燥过夜，承载在CH2Cl2(10mL) 中并且冷却到0℃。向这个溶液中滴加Et3N(280μL，2mmol)，随后滴加 乙酸酐(102μL，1mmol)。将得到的混合物在0℃搅拌1小时，并且允许 其回温到室温。反应混合物用盐水洗涤，并且将有机层分离，干燥并且 浓缩。使用与实施例4步骤(d)相似的方法将得到的产物还原，得到标题 化合物(143mg，65％)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ6.97(d，2H，J＝8.4 Hz)，6.64(d，2H，J＝8.4Hz)，4.75(m，1H)，3.93(m，1H)，3.13(m，3H)， 2.66(m，2H)，2.12(s，3H)，1.84(m，2H)，1.57(m，2H)。
e)1-[4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮
将1-[4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮(如前述步骤制备，0.36g，1.66 mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液冷却到-78℃并且用作为在CH2Cl2(4mL)中 悬浮液的NBS(0.28g，1.58mmol)处理。使反应回温到室温并且搅拌30 分钟。反应用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用 MgSO4干燥并且真空浓缩。粗的物质直接用于随后的反应。LC-MS(ESI， m/z)：C13H17BrN2O计算值297.1(M+H)，实测值297.1。
f)5-[5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-氨基-苯基]-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸 叔丁酯
将5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例46步骤(b)中制备，0.62g，2.02mmol)和 1-[4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-基]-乙酮(如前述步骤制备，0.20g，0.67 mmol)在甲苯∶EtOH(2∶1，9mL)中的溶液用2.0MNa2CO3水溶液(2.7mL， 5.38mmol)处理并且在Ar下超声脱气。混合物加热到80℃，用 Pd(PPh3)4(54mg，0.05mmol)处理并且在80℃搅拌4.5小时。将反应冷却 到室温，用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4 干燥并且真空浓缩，得到标题化合物(0.25g，93％)，为灰白色固体。 LC-MS(ESI，m/z)：C23H33N3O3计算值422.2(M+Na)，实测值422.0.
g)5-(5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧 基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
将5-[5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-氨基-苯基]-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸 叔丁酯(如前述步骤制备，0.25g，0.63mmol)的CH2Cl2溶液用 PyBroP(0.44g，0.94mmol)和4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(d)中制备，0.21g，0.69mmol) 处理。将得到的浆状物冷却到0℃并且用DIEA(0.33mL，1.88mmol)处 理。除去冰浴并将混合物在室温搅拌18小时。反应用CH2Cl2稀释并用 饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。硅胶色 谱纯化(含25-45％EtOAc的己烷，然后用100％EtOAc)，得到标题化 合物(399mg，98％)，为白色固体。LC-MS(ESI，m/z)：C34H48N6O5Si计 算值649.4(M+H)，实测值649.9。
h)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢- 吡啶-3-基)-苯基]-酰胺三氟乙酸盐
将5-(5-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧 基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯 (如前述步骤制备，0.40g，0.61mmol)在CH2Cl2(20mL)和EtOH(0.4mL) 中的溶液用TFA(3mL)处理。溶液在室温搅拌0.5小时。真空蒸发溶剂， 并将残余物立即承载在EtOH(25mL)中并且在5℃储存11小时。将溶液 真空浓缩，并将残余物承载在CH2Cl2(20mL)和EtOH(0.4mL)中，然后 用TFA(6mL)处理。将反应在室温搅拌2小时，并且真空蒸发溶剂。反 相HPLC(C-18柱)(含10到80％乙腈的水，含0.1％TFA，在30分钟 内)，得到标题化合物(56.9mg，22％)，为白色固体。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ8.06(s，1H)，7.81(d，1H，J＝8.4Hz)，7.32(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(s， 1H)，6.10-6.03(m，1H)，4.74-4.64(m，2H)，4.11-4.02(m，1H)，3.95(s，2H)， 3.50-3.37(m，2H)，3.29-3.20(m，1H)，2.93-2.82(m，1H)，2.80-2.69(m，1H)， 2.62-2.53(m，2H)，2.16(s，3H)，1.98-1.84(m，2H)，1.78-1.54(m，2H)。 LC-MS(ESI，m/z)：C23H26N6O2计算值419.2(M+H)，实测值419.2.
实施例47
(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1-基)- 乙酸三氟乙酸盐
向烧瓶加入4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺TFA盐(33mg，0.067mmol)(如实施例14步骤(b)中制备)、溴代 乙酸叔丁酯(10μL，0.067mmol)、NEt3(20μL，0.135mmol)和0.25mL DCM并且在25℃搅拌10小时。反应混合物加载在5g SPE柱(二氧化硅) 上并且用25％EtOAc/DCM洗脱23mg(70％)的(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑 -2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶-1-基)-乙酸叔丁酯。将这个化合 物溶解于1mL DCM和20μL EtOH中并且加入1mL TFA，并将反应在 25℃搅拌3小时。标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含30-50％ CH3CN的0.1％TFA/H2O在12分钟内洗脱，得到10mg(40％)的白色固 体。1H-NMR(400MHz，CD3OD)：8.16(d，1H)，8.02(s，1H)，7.22(dd，1H)， 7.10(d，1H)，5.72(m，1H)，4.04.(s，2H)，3.76(m，2H)，3.22(m，2H)，2.90(m， 1H)，2.29(m，4H)，2.10(m，4H)，1.82(m，4H)。质谱(ESI，m/z)：C24H27N5O3， 计算值434.2(M+H)，实测值434.2。
实施例48
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(3-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
a)[3-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌 啶-1-基)-1，1-二甲基-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，40.0mg，0.0818mmol)，3-叔丁氧 基羰基氨基-3-甲基-丁酸(J.Med.Chem.，34(2)，633-642，(1991)，21.4mg， 0.0981mmol)和PyBroP(55.0mg，0.0981mmol)在二氯乙烷(2mL)中的混 合物加入DIEA(43μL，0.25mmol)并将得到的混合物在Ar下在RT搅拌 1天。混合物用EtOAc(30mL)稀释并用H2O(2x10mL)、盐水(10mL) 洗涤，用Na2SO4干燥然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法(硅胶，10-40 ％EtOAc/己烷)纯化，得到33.0mg(70％)的标题化合物，为无色油状物。 质谱(ESI，m/z)：C32H42N6O4，计算值575.3(M+H)，实测值574.8。
b)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(3-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌啶-4- 基]-2-环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
在0℃向[3-(4-{4-[(4-氰基-1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-环己-1-烯基-苯 基}-哌啶-1-基)-1，1-二甲基-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(33.0mg， 0.0574mmol)(如前述步骤制备)在3mL DCM和0.10mL EtOH中的溶液 加入1.0mL TFA，使混合物回温到RT并且搅拌3小时。反应用3mL n-PrOH稀释然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法(硅胶，3-8％ MeOH/DCM)纯化，得到33.5mg(99％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(400MHz，CDCl3)：13.3(s，1H)，9.52(s，1H)，8.57(br s，3H)， 8.26(d，1H，J＝8.6Hz)，7.69(s，1H)，7.02(dd，1H，J＝8.6，1.7Hz)，6.98(d， 1H，J＝1.7Hz)，5.78(m，1H)，4.67(br d，1H，J＝13.4Hz)，3.88(br d，1H，J＝ 13.4Hz)，3.10(m，1H)，2.55-2.85(m，4H)，2.23(m，4H)，1.72-2.01(m，8H)， 1.50(s，6H)。质谱(ESI，m/z)：C27H34N6O2，计算值475.3(M+H)，实测值 475.1。
实施例49
4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺双三氟乙酸盐
a)1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯
在0℃向NaH(60％分散体)(200mg，5.00mmol)在DMF(5mL)中的 悬浮液滴加1H-1，2，4-三唑甲酸甲酯(635mg，5.00mmol)的DMF(5mL) 溶液。将得到的悬浮液在相同的温度下搅拌30分钟并且用SEMCl(0.90 mL，5.0mmol)处理。将得到的溶液在RT搅拌30分钟并且倾倒在冰上。 产物用乙醚提取(3x20mL)。将乙醚层合并，干燥(Na2SO4)并且真空浓 缩。得到的残余物在二氧化硅上色谱纯化(10％EtOAc/己烷)，得到标题 化合物(530mg，41％)。质谱(ESI，m/z)：C10H19N3O3Si，计算值 258.1(M+H)，实测值258.2。
b)4-(3-环己-1-烯基-4-{[1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-[1，2，4-]三唑-3-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯 (如前述步骤制备，257mg，1.00mmol)的EtOH(2mL)溶液中加入2N KOH(0.5mL，1mmol)。得到的溶液在RT搅拌20分钟并且真空浓缩。 将得到的残余物悬浮于乙醚(10mL)中并且超声处理5分钟。然后真空除 去乙醚并将得到的残余物干燥4小时，得到1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧 基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸钾盐(273mg，97％)，其不经任何进一步 纯化用于下一步。
将1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸钾盐 (如上述制备，28mg，0.10mmol)、DIEA(34μL，0.20mmol)、4-(4-氨基-3- 环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例14步骤(b)中制备，35.6 mg，0.100mmol)和PyBroP(69.9mg，0.150mmol)在DCM(2mL)中的混合 物在RT搅拌12小时。反应混合物用DCM(5mL)稀释并用饱和NaHCO3 水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4)并且真空 浓缩。产物在二氧化硅上色谱纯化(20-40％EtOAc/己烷)，得到标题化合 物(31.9mg，55％)。质谱(ESI，m/z)：C31H47N5O4Si，计算值 481.2(M-BOC+2H)，实测值481.2。
c)4H-[1，2，4-]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺 双三氟乙酸盐
向4-(3-环己-1-烯基-4-{[1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步 骤制备，81.9mg，0.140mmol)的DCM(0.4mL)和EtOH(13μL)溶液中加 入TFA(0.13mL)。得到的溶液在RT搅拌3小时并且真空浓缩。得到的 残余物真空干燥1小时，悬浮于乙醚中(10mL)并且超声处理5分钟。通 过吸滤收集形成的固体，得到标题化合物(56mg，68％)。1H-NMR(CD3OD； 400MHz)：δ8.53(br s，1H)，8.20(d，1H，J＝8.4Hz)，7.21(dd，1H，J＝8.4， 2.1Hz)，7.11(d，1H，J＝2.1Hz)，5.83(br s，1H)，3.45(m，2H)，3.19(m，2H)， 2.98(m，1H)，2.28(m，4H)，2.14(m，2H)，和1.95-1.75(m，6H)。质谱(ESI， m/z)：C20H25N5O，计算值352.4(M+H)，实测值352.2。
实施例50
5-氯-4H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基) -酰胺三氟乙酸盐
a)5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸 甲酯
在0℃，向NaH(60％分散体，53.9mg，1.34mmol)在DMF(5mL) 中的悬浮液滴加5-氯-1H-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯(Bull.Pharm.Sci.， 20(1)：47-61，(1997)，218mg，1.35mmol)的DMF(10mL)溶液。将得到的悬 浮液在相同的温度下搅拌30分钟，然后用SEMCl(0.24mL，1.4mmol) 处理。得到的溶液在RT搅拌30分钟并且倾倒在冰上。混合物用乙醚提 取(3x20mL)，将乙醚层合并，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩。得到的残 余物在二氧化硅上色谱纯化(10％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(227mg， 58％)。质谱(ESI，m/z)：C10H18ClN3O3Si，计算值292.0和294.0(M+H)， 实测值291.5和293.6。
b)4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]三唑-3- 甲酸甲酯(如前述步骤制备，227mg，0.780mmol)的EtOH(2mL)溶液中 加入2N KOH(0.4mL，0.8mmol)。得到的溶液在RT搅拌20分钟并且真 空浓缩。得到的残余物悬浮于乙醚(10mL)中并且超声处理5分钟。然 后除去乙醚并将得到的残余物真空干燥4小时，得到4-(4-{[5-氯-1-(2- 三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]三唑-3-甲酸钾盐(223mg，91％) 其不经任何进一步的纯化直接用于下一步。
将4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3- 甲酸钾盐(如上述制备，35mg，0.10mmol)、DIEA(34μL，0.10mmol)、4-(4- 氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实施例14步骤(b)中制 备，35.6mg，0.100mmol)和PyBroP(69.9mg，0.150mmol)在DCM(2mL) 中的混合物在室温搅拌12小时。反应混合物用DCM(5mL)稀释并用饱 和NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4) 并且真空浓缩。产物在二氧化硅上色谱纯化(20-40％EtOAc/己烷)，得到 标题化合物(52mg，85％)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ9.60(s，1H)， 8.29(d，1H，J＝8.4Hz)，7.18(dd，1H，J＝8.4，2.2Hz)，7.13(d，1H，J＝2.2 Hz)，5.99(s，2H)，5.84(br s，1H)，4.18-4.25(m，2H)，3.72-3.76(m，2H)， 2.58-2.67(m，2H)，2.51-2.64(m，1H)，2.18-2.33(m，4H)，1.78-1.92(m，6H)， 1.55-1.65(m，2H)，1.49(s，9H)，0.93-0.98(m，2H)，0.10(s，9H)。
c)5-氯-1H-[1，2，4-]-三唑-3-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰 胺三氟乙酸盐
向4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2，4]-三唑-3- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备， 63.3mg，0.102mmol)在DCM(0.5mL)和EtOH(11μL)中的溶液加入 TFA(0.1mL)。在将得到的混合物在RT搅拌12小时之后，加入另外的 0.1mL TFA。将反应混合物在室温搅拌另外的5小时，蒸发溶剂，并将 标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化，用含20-70％CH3CN的0.1％ TFA/H2O在20分钟内洗脱，得到标题化合物(30mg，58％)。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.14(d，1H，J＝8.4Hz)，7.20(dd，1H，J＝8.4， 2.1Hz)，7.13(d，1H，J＝2.1Hz)，5.82(br s，1H)，3.45(m，2H)，3.19(m，2H)， 2.98(m，1H)，2.28(m，4H)，2.14(m，2H)，和1.95-1.75(m，6H)。质谱(ESI， m/z)：C20H24ClN5O，计算值386.1和388.1(M+H)，实测值386.2和388.1。
实施例51
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺双三氟乙酸盐，和
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺双三氟乙酸盐
a)顺式/反式2，6-二甲基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将顺式/反式-2，6-二甲基哌啶酮(Coll.Czech.Chem.Commun.：31(11)， 4432-41，(1966)，1.27g，10.0mmol)的乙醚(100mL)溶液用1N NaOH水溶 液(11mL，11mmol)和(BOC)2O(2.18g，10.0mmol)处理。将得到的混合物 在室温搅拌48小时。将乙醚层分离，干燥并且浓缩。残余物在二氧化 硅上色谱纯化(10％EtOAc-己烷)，得到标题化合物(1.10g，50％)： LC-MS(ESI，m/z)：C12H21NO3，计算值128.1(M-BOC+2H)，实测值128.1。
b)4-(4-氨基-苯基)-顺式/反式2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将顺式/反式N-Boc-2，6-二甲基哌啶酮(如前述步骤制备，1.14g，5.00 mmol)的THF(20mL)溶液冷却到-78℃并且在Ar下用LDA(1.5M溶液， 在环己烷、THF和乙基苯中，4.4mL，6.5mmol)处理。得到的混合物在 相同的温度下搅拌30分钟并且用含N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺(2.34g， 6.55mmol)的THF(20mL)处理。反应混合物搅拌另外的30分钟并且使 其回温到RT。在RT下30分钟之后，将反应混合物真空浓缩并将残余 物承载在乙醚(20mL)中并用冷水洗涤(2x10mL)。将乙醚层干燥(Na2SO4) 并且浓缩，得到顺式/反式-2，6-二甲基-4-三氟甲烷磺酰基氧基-3，6-二氢 -2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(890mg，49％)，其直接用于下一步。
然后根据实施例35步骤(b)的Suzuki偶联方法，使用4-氨基苯基硼 酸(219mg，1.00mmol)和顺式/反式-2，6-二甲基-4-三氟甲烷磺酰基氧基 -3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如上述制备，321mg，1.00mmol)制备 标题化合物。硅胶色谱纯化(10-20％EtOAc/己烷)，得到4-(4-氨基-苯 基)-2，6-二甲基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(172mg，57％)：质谱(ESI， m/z)：C18H26N2O2，计算值303.2(M+H)，实测值303.1。
将4-(4-氨基-苯基)-2，6-二甲基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如 上述制备，380mg，1.25mmol)的MeOH(10mL)溶液在10％Pd/C(190mg) 上在20psi氢化1小时。将溶液过滤通过硅藻土垫并且浓缩，得到标题 化合物(360mg，94％)。质谱(ESI，m/z)：C18H28N2O2，计算值305.2(M+H)， 实测值305.6。
c)4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-顺式/反式2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸 叔丁酯
向4-(4-氨基-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前述步骤中制 备，334mg，1.09mmol)的DCM(10mL)溶液中加入NBS(195mg，1.09 mmol)并将反应混合物在RT搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL) 稀释并用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离， 干燥(Na2SO4)并且真空浓缩，得到4-(4-氨基-3-溴-苯基)-顺式/反式-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(367mg，87％)。质谱(ESI，m/z)：C18H27BrN2O2， 计算值327.0和329.0(M-t-Bu+H)，实测值327.0和328.9。
然后根据实施例12步骤(d)的Suzuki偶联方法，使用环己-1-烯基硼 酸(157mg，1.25mmol)和4-(4-氨基-3-溴-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔 丁酯(如上述制备，382mg，1.00mmol)制备标题化合物并且在二氧化硅 上色谱纯化(20％EtOAc/己烷)，得到254mg(66％)。质谱(ESI，m/z)： C24H36N2O2，计算值384.2(M+H)，实测值385.1。
d)4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和 4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨 基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸，钾盐 (如实施例3步骤(d)中制备，384mg，1.00mmol)、DIEA(0.34μL，2.0 mmol)、4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如 前述步骤制备，384mg，1.00mmol)和PyBroP(699mg，1.50mmol)在 DCM(20mL)中的混合物在室温搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL) 稀释并用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离， 干燥(Na2SO4)并且真空浓缩，得到上述两种标题化合物的混合物(321mg， 50.7％)。使混合物经在二氧化硅上色谱法(10-20％EtOAc/己烷)，得到 单独的标题化合物。
4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]- 氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(31mg)。 质谱(ESI，m/z)：C35H51N5O4Si，计算值634.3(M+H)，实测值634.1。
混杂10％的4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪 唑-2-羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔 丁酯的4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(290 mg)。质谱(ESI，m/z)：C35H51N5O4Si，计算值634.3(M+H)，实测值634.1。
e)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶 -4-基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐和5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯 基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐
根据实施例14步骤(b)中的方法从290mg(0.457mmol)4-(4-{[4-氰 基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-3-环己-1- 烯基-苯基)-顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和31mg(0.048mmol) 4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨 基}-3-环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯制备标题 化合物。
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐(93mg，32％)：1H-NMR(CD3OD；400 MHz)：δ8.17(d，1H，J＝8.4Hz)，8.03(s，1H)，7.22(d，1H，J＝8.4Hz)， 7.11(s，1H)，5.72(br s，1H)，3.87(m，1H)，3.78(m，1H)，3.45(m，1H)，3.23(m， 1H)，3.07(m，1H)，2.22(m，4H)，2.19(m，2H)，1.75-1.92(m，4H)，1.56(m，3H)， 1.37(m，6H)。质谱，ESI，m/z)：C24H29N5O，计算值404.2(M+H)，实测值 404.2。
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(反式-2，6-二甲基-哌啶-4- 基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐(17.3mg，56％)。1H-NMR(CDCl3；400 MHz)：δ13.9(br s，1H)，10.3(br s，1H)，9.98(s，1H)，8.41(d，1H，J＝8.4Hz)， 7.75(br s，1H)，7.26(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)，7.15(d，1H，J＝2Hz)，5.92(br s， 1H)，4.12(m，1H)，3.59(m，1H)，3.1-3.3(m，4H)，2.25-2.42(m，6H)， 2.05-1.78(m，6H)，1.62(d，3H，J＝7.1Hz)，1.43(d，3H，J＝6.3Hz)。质谱(ESI， m/z)：C24H29N5O，计算值404.2(M+H)，实测值404.2。
实施例52
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)-(2，3-二羟基-丙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
a)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)2，2-二甲基 -[1，3]二氧杂环戊烷-4-羰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-甲酸甲酯(0.16mL，1.0 mmol)的MeOH(2mL)溶液加入2N KOH(0.5mL，1mmol)。得到的溶液 在RT搅拌20分钟并且真空浓缩。将得到的残余物悬浮于乙醚(10mL) 中并且超声处理5分钟。然后除去乙醚并将得到的残余物真空干燥4小 时，得到(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-甲酸钾盐(173mg，94 ％)，其不经纯化直接用于下一步。
向4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺， 三氟乙酸盐(如实施例14步骤(b)中制备，40mg，0.08mmol)的DCM(1.5 mL)溶液中加入(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-甲酸钾盐(如上 述制备，18mg，0.090mmol)、EDCI(18.8mg，0.0900mmol)、HOBt(13.2mg， 0.0900mmol)和DIEA(42μL，0.24mmol)的混合物。将得到的混合物在 RT搅拌6小时。加入水(10mL)并将DCM层分离，干燥(Na2SO4)并且浓 缩。得到的残余物在二氧化硅上色谱纯化(2％MeOH/DCM)，得到标题 化合物(47mg，97％)。质谱(ESI，m/z)：C28H33N5O4，计算值504.2(M+H)， 实测值503.9。
b)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(+)-(2，3-二羟基- 丙酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺
向5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[1-(R)-(2，2-二甲基-[]，3] 二氧杂环戊烷-4-羰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(如前述步骤制备，45mg， 0.090mmol)的MeOH(1mL)溶液中加入2N HCl水溶液(2mL)。得到的 混合物在RT搅拌12小时。真空除去溶剂并将得到的残余物干燥4小时。 加入乙醚(10mL)并且超声处理5分钟。真空除去乙醚并将残余物干燥 12小时，得到标题化合物(21.3mg，52％)。1H-NMR(DMSO；400MHz)： δ14.1(br s，1H)，9.85(s，1H)，8.32(s，1H)，7.92(d，1H，J＝8.4Hz)，7.18(dd， 1H，J＝8.4，2.1Hz)，7.13(d，1H，J＝2.1Hz)，5.72(br s，1H)，4.51(m，1H)， 4.33(m，1H)，4.15(m，1H)，3.55(m，1H)，3.43(m，1H)，3.08(m，1H)，2.81(m， 1H)，2.63(m，1H)，2.12-2.24(m，4H)，1.31-1.38(m，10H)。质谱(ESI，m/z)： C25H29N5O4，计算值464.2(M+H)，实测值464.1。
实施例53
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基] -酰胺三氟乙酸盐
a)4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺
将N-甲氧基哌啶酮(J.Org.Chem.，26，1867，(1961)，650mg，5.00 mmol)的THF(20mL))的溶液冷却到-78℃并且在Ar下用LDA(1.5M溶 液，在环己烷、THF和乙基苯中，4.3mL，6.4mmol)处理。得到的混合 物在相同温度下搅拌30分钟并且用含N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺(2.3g， 6.4mmol)的THF(20mL)处理。反应混合物搅拌另外的30分钟并且使其 回温到RT。在RT 30分钟之后，将反应混合物真空浓缩并将得到的残 余物承载在EtOAc(20mL)中并用冷水洗涤(2x10mL)。将EtOAc层干燥 (Na2SO4)并且浓缩，得到三氟甲烷磺酸1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-酯 (980mg，71％)，为白色泡沫状物，其直接用于下一步。
然后根据实施例35步骤(b)的Suzuki偶联方法使用4-氨基苯基硼酸 (219mg，1.00mmol)和三氟甲烷磺酸1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基酯 (如上述制备，261mg，1.00mmol)制备标题化合物。硅胶色谱纯化(20-50 ％EtOAc/己烷)，得到60mg(29％)。质谱(ESI，m/z)：C12H16N2O，计算值 205.1(M+H)，实测值205.2。
b)2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺
将4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺(如前述步骤制备)(40.8 mg，0.200mmol)的MeOH(5mL)溶液在10％Pd/C(20.4mg)上在20psi氢 化1小时。溶液过滤通过硅藻土垫并且浓缩，得到4-(1-甲氧基-哌啶-4- 基)-苯胺(38mg，92％)，其不经纯化直接用于下一步。
向4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如上述制备，42mg，0.20mmol)的 DCM(2mL)溶液中加入NBS(36.2mg，0.20mmol)并将反应混合物在RT 搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液 (10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4)并且真空浓缩， 得到2-溴-4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺(43mg，74.5％)，其 不经纯化用于下一步。
然后根据实施例12步骤(d)的Suzuki偶联方法使用环己-1-烯基硼酸 (27.9mg，1.00mmol)和2-溴-4-(1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺 (如上述制备，44mg，0.15mmol)制备标题化合物，并且在二氧化硅上色 谱纯化(20-50％EtOAc/己烷)，得到2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4- 基)-苯胺(33mg，74％)。质谱，(ESI，m/z)：C18H26N2O，计算值287.2(M+H)， 实测值286.8。
c)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺
将4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸，钾盐 (如实施例3步骤(d)中制备，35.6mg，0.100mmol)、DIEA(0.34μL，0.20 mmol)、2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如前述步骤中制备， 28.6mg，0.1mmol)和PyBroP(69.9mg，0.150mmol)在DCM(2mL)中的混 合物在室温搅拌12小时。反应混合物用DCM(10mL)稀释并用饱和 NaHCO3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4) 并且真空浓缩。产物在二氧化硅上色谱纯化(20-40％EtOAc/己烷)，得到 标题化合物(26mg，48％)。质谱(ESI，m/z)：C29H41N5O3Si，计算值 536.3(M+H)，实测值536.2。
d)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)- 苯基]-酰胺三氟乙酸盐
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸[2-环 己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺(如前述步骤中制备，31mg， 0.020mmol)在DCM(0.5mL)和EtOH(11μL)中的溶液加入TFA(0.1mL)。 得到的溶液在RT搅拌6小时。反应混合物真空浓缩并将得到的残余物 干燥1小时，悬浮于乙醚中(10mL)并且超声处理5分钟。通过吸滤收集 形成的固体，得到标题化合物(17.3mg，58％)。1H-NMR(DMSO；400 MHz)：δ9.70(s，1H)，8.30(s，1H)，7.83(d，1H，J＝8.4Hz)，7.14(d，1H，J＝ 8.4Hz)，7.05(s，1H)，5.71(br s，1H)，3.30-3.55(m，5H)，2.41-2.62(m，2H)， 2.12-2.19(m，4H)，1.60-1.85(m，8H)。质谱(ESI，m/z)：C23H27N5O2，计算值 406.2(M+H)，实测值406.1。
实施例54
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六 氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
a)5-硝基-3’，6’-二氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯
将202mg(0.994mmol)2-溴-5-硝基吡啶在4mL甲苯和2mL EtOH 中的溶液用338mg(1.09mmol)4-三氟甲烷-磺酰基氧基-3，6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯(Synthesis，993，(1991))和1.49mL(2.981mmol)2M Na2CO3水溶液处理。混合物通过超声处理脱气，置于氩气下，用80.3 mg(0.00700mmol)Pd(PPh3)4处理并且加热到80℃，4小时。混合物用 EtOAc稀释并用水洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。得到的残 余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上色谱纯化，用10-25％ EtOAc-己烷洗脱，得到226mg(75％)的标题化合物，为浅黄色固体。质 谱(ESI，m/z)：C15H19N3O4，计算值306.1(M+H)，实测值305.7。
b)5-氨基-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯
将226mg(0.740mmol)5-硝基-3’，6’-二氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸 叔丁酯(如前述步骤制备)的15mL MeOH溶液用110mg 10％ Pd/C(Degussa型E101-NE/W，Aldrich，50重量％的水)和1atm H2在室温 处理18小时。混合物过滤通过硅藻土(Celite)，并将滤饼用MeOH洗涤。 浓缩，得到220mg(107％)的标题化合物，为无色的玻璃状固体。质谱(ESI， m/z)：C15H23N3O2，计算值278.2(M+H)，实测值278.0。
c)5-氨基-6-溴-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯
将220mg(0.793mmol)5-氨基-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’- 甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)的10mL CH2Cl2溶液用134mg(0.753 mmol)N-溴代琥珀酰亚胺在室温处理20分钟。混合物用CH2Cl2稀释并 用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余 物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上色谱纯化，使用10-35％ EtOAc-己烷洗脱，得到209mg(74％)的标题化合物，为无色的玻璃状固 体。1H-NMR(CDCl3；400MHz)：δ6.97(d，1H，J＝8.0Hz)，6.91(d，1H，J＝ 8.0Hz)，4.28-4.15(br s，2H)，4.06-3.90(m，2H)，2.85-2.75(m，2H)， 2.77-2.68(m，1H)，1.92-1.83(m，2H)，1.68-1.54(m，2H)，1.47(s，9H)。
d)5-氨基-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡 啶-1’-甲酸叔丁酯
将209mg(0.587mmol)5-氨基-6-溴-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡 啶-1’-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)在5mL甲苯和2.5mL EtOH中的溶 液用99.3mg(0.645mmol)4，4-二环己-1-烯基硼酸和2.34mL(4.69mmol)2 M Na2CO3水溶液处理。混合物通过超声处理脱气，置于在氩气下，用 47.4mg(0.0410mmol)Pd(PPh3)4，处理并且加热到80℃，16小时。混合物 用EtOAc稀释并用水洗涤。水层用另外的EtOAc提取，并将合并的有 机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上色谱纯化，使用25％EtOAc-己烷洗脱，得到150 mg(66％)的标题化合物，为白色泡沫状固体。质谱(ESI，m/z)：C23H35N3O2， 计算值386.3(M+H)，实测值386.3。
e)5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]- 氨基}-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’- 甲酸叔丁酯
将150mg(0.389mmol)5-氨基-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯 基)-3’，4’，5’，6’-四氢-2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)在 15mL CH2Cl2中的溶液用131mg(0.428mmol)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅 烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐(如实施例3步骤(b)中制备)、272 mg(0.584mmol)PyBroP、和203μL(1.17mmol)DIEA在室温处理3小时。 混合物用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。有机层用MgSO4 干燥并且真空浓缩。残余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上 色谱纯化，使用50％EtOAc-己烷洗脱，得到215mg(87％)的标题化合 物，为白色固体。质谱(ESI，m/z)：C34H50N6O4Si，计算值635.4(M+H)， 实测值635.3。
f)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯 基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
将215mg(0.339mmol)5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲 基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-3’，4’，5’，6’-四氢 -2’H-[2，4’]联吡啶-1’-甲酸叔丁酯(如前述步骤制备)在10mL CH2Cl2中的 溶液用三滴MeOH和3mL TFA在室温处理4小时。加入MeOH(10mL) 并且真空蒸发溶剂。残余物在50-g二氧化硅Varian MegaBond Elut柱上 色谱纯化，使用10％MeOH-CH2Cl2洗脱，得到210mg(97％)的标题化 合物，为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.59(d，1H，J＝8.4Hz)， 8.04(s，1H)，7.28(d，1H，J＝8.4Hz)，6.02-5.93(m，1H)，3.58-3.48(m，2H)， 3.32-3.03(m，3H)，2.54-2.42(m，2H)，2.23-2.02(m，6H)，1.11(s，6H)。质谱 (ESI，m/z)：C23H28N6O，计算值405.2(M+H)，实测值405.2.
实施例55
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[1’-(2-二甲基氨基-乙酰基)-6-(4，4-二甲基-环己 -1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
将20.9mg(0.203mmol)N，N-二甲基甘氨酸在4mL CH2Cl2中的悬浮 液用49.8mg(0.197mmol)双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(phosphinic chloride)(BOP-Cl)和75μL(0.54mmol)Et3N在室温处理1小时。然后将 混合物用70.0mg(0.135mmol)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环 己-1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐(如 实施例54步骤(f)中制备)在室温处理18小时。混合物用CH2Cl2稀释并 用水洗涤。有机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余物通过 RP-HPLC(C18)纯化，使用含10-80％CH3CN的0.1％TFA/H2O在30分 钟内洗脱，得到34.9mg(53％)的标题化合物，为白色固体。 1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.38(d，1H，J＝8.4Hz)，8.05(s，1H)，7.33(d， 1H，J＝8.4Hz)，6.05-5.98(m，1H)，4.68(d，1H，J＝15.2Hz)，3.82(d，1H，J＝ 15.2Hz)，3.16-3.05(m，1H)，3.01-2.94(m，6H)，2.52-2.40(m，2H)，2.39(s， 6H)，2.17-2.10(m，2H)，2.09-1.87(m，2H)，1.67-1.59(m，2H)，1.12(s，6H)。质 谱(ESI，m/z)：C27H35N7O2，计算值490.3(M+H)，实测值490.4。
实施例56
4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-1’-(2-甲烷磺酰基- 乙基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐
将70.0mg(0.135mmol)4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己 -1-烯基)-1’，2’，3’，4’，5’，6’-六氢-[2，4’]联吡啶-5-基]-酰胺(如实施例54步骤 (f)中制备)在10mL CH2Cl2中的溶液用32.7mg(0.162mmol)甲烷磺酸2- 甲烷磺酰基-乙酯(如实施例40步骤(a)中制备)和70.5μL(0.405 mmol)DIEA在室温处理6小时。混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。有 机层用MgSO4干燥并且真空浓缩。残余物通过RP-HPLC(C18)纯化，使 用含20-60％CH3CN的0.1％TFA/H2O在30分钟内洗脱，得到48mg(85 ％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.65(d，1H， J＝8.4Hz)，8.05(s，1H)，7.34(d，1H，J＝8.4Hz)，6.05-5.98(m，1H)， 3.85-3.66(m，6H)，3.29-3.21(m，2H)，3.20-3.01(m，1H)，3.14(s，3H)， 2.53-2.45(m，2H)，2.30-2.15(m，4H)，2.15-2.10(m，2H)，1.62(t，2H，J＝6.4 Hz)，1.11(s，6H)。质谱(ESI，m/z)：C26H34N6O3S，计算值511.2(M+H)，实 测值511.3。
实施例57
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-哌啶-4-基]-2-环己 -1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
a){2-[4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-基]-1，1-二甲基-2-氧代-乙基}- 氨基甲酸叔丁酯
向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(231mg，0.380 mmol)(如实施例14步骤(a)中制备)在2.5mL DCM和0.4mL EtOH中的 溶液加入700μL TFA并将溶液在25℃搅拌3小时。反应用4mL EtOH 稀释然后浓缩，得到通过1H-NMR和LC/MS测定为5-氰基-1-(2-三甲基 甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)-酰胺三氟乙酸盐与起始原料的约2∶1的混合物，其不经进一步纯化 用于随后的步骤。将在3mL DCM中的混合物加入到2-叔丁氧基羰基氨 基-2-甲基-丙酸(53mg，0.70mmol)、DIEA(122μL，0.700mmol)和 PyBroP(144mg，0.300mmol)在3mL DCM中的溶液并将反应在25℃搅 拌过夜。反应用EtOAc(25mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液(1x25mL) 和盐水(25mL)洗涤，将有机层用Na2SO4干燥然后浓缩。残余物通过制 备性TLC纯化(50％EtOAc-己烷)，得到40mg(15％)的标题化合物，为 白色固体。质谱(ESI，m/z)：C37H55N6O5Si，计算值691.3(M+H)，实测值 691.1。
b)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2-氨基-2-甲基-丙酰基)-哌啶-4- 基]-2-环己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐
向{2-[4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2- 羰基]-氨基}-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-基]-1，1-二甲基-2-氧代-乙基}- 氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.050mmol)在2mL DCM和20μL EtOH中的溶 液加入1.5mL TFA。将溶液在25℃搅拌3小时，用2mL EtOH稀释并 且真空浓缩。残余物与乙醚一起研磨，得到8.4mg(29％)的标题化合物， 为白色固体。1H-NMR(CD3OD；400MHz)：δ8.10(d，1H，J＝8.4Hz)，8.00(s， 1H)，7.16(d，1H，J＝8.4Hz)，7.07(s，1H)，5.79(s，1H)，4.55-4.48(m，1H)， 3.30(s，6H)，2.89-2.87(m，2H)，2.40-2.25(m，4H)，1.96-1.93(m，2H)， 1.86-1.83(m，6H)，1.64-1.61(m，2H)。质谱(ESI，m/z)：C26H33N6O2，计算值 461.2(M+H)，实测值461.3。
实施例58
5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1′-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶-5-基]-酰胺
a)5-氨基-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁 酯
向5-氨基-6-溴-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯(331 mg，0.93mmol)(如实施例54步骤(c)中制备)和环己烯-1-基硼酸(141mg， 1.11mmol)在5mL EtOH、10mL甲苯和5mL 2M Na2CO3中的混合物 加入Pd(PPh3)4(107mg，0.0930mmol)，并将得到的混合物在80℃加热16 小时。反应用100mL乙醚和100mL盐水稀释并且分液。将有机层干燥 (Na2SO4)并且真空浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，30-60％乙醚- 己烷)，得到248mg(74％)标题化合物，为浅棕色油状物。LC-MS(ESI， m/z)：C21H32N3O2(M+H)，计算值358.2，实测值358.1。
b)5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]- 氨基}-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯
向4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐 (296mg，0.970mmol)(如实施例3步骤(d)中制备)的在8mL DCM中的溶 液中加入DIEA(291μL，1.72mmol)和PyBroP(512mg，1.10mmol)，将反 应在25℃搅拌15分钟。加入5-氨基-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢 -2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯(233mg，0.65mmol)(如前述步骤制备)的 在4mL DCM中的溶液并将反应在25℃搅拌过夜。反应用EtOAc(25mL) 稀释并用NaHCO3(1x25mL)和盐水(25mL)洗涤，将有机层用Na2SO4 干燥，然后浓缩。残余物通过快速色谱法纯化(硅胶，5％MeOH-CHCl3)， 得到167mg(40％)的标题化合物，为白色固体。质谱(ESI，m/z)： C32H46N6O4Si，计算值607.3(M+H)，实测值607.3。
c)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(6-环己-1-烯基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联 吡啶-5-基)-酰胺三氟乙酸盐
使用与实施例14步骤(b)相似的方法从5-{[4-氰基-1-(2-三甲基甲硅 烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-羰基]-氨基}-6-环己-1-烯基-3′，4′，5′，6′-四氢 -2′H-[2，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯(167mg，0.27mmol)制备标题化合物，得 到57mg(43％)的标题化合物，为白色固体。LC-MS(ESI，m/z)：C21H24N6O， 计算值377.2(M+H)，实测值377.2。
d)5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1′-(2-甲烷磺酰基-乙 基)-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶-5-基]-酰胺
向5-氰基-1H-咪唑-2-甲酸(6-环己-1-烯基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联 吡啶-5-基)-酰胺三氟乙酸盐(57mg，0.11mmol)在5mL DCM中的浆状物 加入DIEA(50.4μL，0.290mmol)，随后加入30.5mg(0.150mmol)的甲烷 磺酸2-甲烷磺酰基-乙酯(如实施例40步骤(a)中制备)。将反应搅拌过夜， 用20mL DCM稀释，用饱和NaHCO3水溶液(1x20mL)洗涤并且用 Na2SO4干燥。通过制备性TLC纯化(硅胶，40％EtOAc-己烷)，得到22.3 mg(40％)的标题化合物，为白色固体。1H-NMR(DMSO；400MHz)： δ10.02(s，1H)，8.24(s，1H)，8.11(d，1H，J＝8.4Hz)，7.18(d，1H，J＝8.4Hz)， 5.96(s，1H)，3.04(s，3H)，3.02-2.99(m，3H)，2.73(t，2H，J＝2.7Hz)， 2.39-2.37(m，2H)，2.11-2.05(m，4H)，1.85-1.64(m，10H)。质谱(ESI，m/z)： C24H31N6O3S，计算值483.2(M+H)，实测值483.3。
实施例59
以下描述用于合成实施例3中所述中间体的替代方法。
4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
a)1H-咪唑-4-甲腈
向装备有机械搅拌器、温度探针、冷凝器、和具有氮气入口的加料 漏斗的22-L四口圆底烧瓶加入1H-咪唑-4-甲醛(Aldrich，1.10kg，11.5 mol)和吡啶(3.0L，3.0mol)。用冰浴将反应烧瓶冷却到8℃并且分批缓慢 加入羟胺盐酸盐(871g，12.5mol)，以维持内部温度低于30℃。使反应冷 却到环境温度并且在环境温度下搅拌2小时。用加热罩将得到的浓稠的 黄色溶液加热到80℃并且在200分钟内滴加乙酸酐(2.04L，21.6mol)， 维持加入过程中温度低于110℃。将反应混合物在100℃加热30分钟， 然后使其冷却到环境温度，然后进一步在冰浴中冷却。通过加入25重 量％NaOH(5.5L)调节pH到8.0(pH计)，加入速率为使得保持内部温度 低于30℃。然后将反应混合物转移到22-L分液漏斗并且用乙酸乙酯(6.0 L)提取。合并的有机层用盐水洗涤(2x4.0L)，用MgSO4干燥，过滤， 并且在35℃减压浓缩到干燥，得到粗产物，为黄色半固体。将得到的 半固体悬浮于甲苯(3.0L)中并且搅拌1小时，之后将其过滤，得到浅黄 色固体，将其再悬浮于甲苯(3.0L)中并且搅拌1小时。将得到的浆状物 过滤并将滤饼用甲苯洗涤(2x500mL)，得到标题化合物，为浅黄色固体 [870g，82％)。1H和13C NMR谱符合指定结构。
b)1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈和3-(2-三甲基 甲硅烷基-乙氧基甲基)-3H-咪唑-4-甲腈
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的加料漏斗的 22-L四口圆底烧瓶加入1H-咪唑-4-甲腈(830g，8.91mol，如前述步骤制 备)、碳酸钾(2.47kg，17.8mol)、和丙酮(6.0L)。开动搅拌并用冰浴将混 合物冷却到10℃。通过加料漏斗在210分钟内加入SEMCl(1.50kg，9.00 mol)，以保持内部温度低于15℃。然后使反应回温到环境温度并且在环 境温度搅拌过夜(20小时)。然后将反应混合物在冰浴中冷却到10℃并且 通过加入水(8.0L)猝灭，所述水在30分钟内缓慢加入以保持内部温度低 于30℃。将得到的混合物转移到22-L分液漏斗并且用乙酸乙酯提取(2x 7.0L)。将合并的有机物在35℃减压浓缩，得到粗产物，为深棕色油状 物，其通过硅胶短柱(16.5x20cm，2.4kg硅胶)纯化，使用2∶1庚烷/乙 酸乙酯(15L)作为洗脱剂。将包含产物的级分合并并且在35℃减压浓缩， 得到标题化合物的混合物，为浅棕色油状物[1785g，90％)。1H NMR谱 符合指定结构，并且表明为64∶36比例的区域异构体(regioisomer)。
c)2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的冷凝器的22-L 四口圆底烧瓶加入1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲腈和 3-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-3H-咪唑-4-甲腈[600g，2.69mol，如 前述步骤制备)和四氯化碳(1.8L)的混合物。开动搅拌并将混合物加热到 60℃。这时，在30分钟内分几个部分加入N-溴代琥珀酰亚胺(502g，2.82 mol)，其引起放热，温度升高到74℃。使反应冷却到60℃并且在60℃ 另外搅拌1小时。使反应缓慢冷却到环境温度并将得到的浆状物过滤， 将滤液用饱和NaHCO3溶液(4.0L)洗涤。使有机物通过硅胶短柱(8x15 cm，硅胶；600g)，使用2∶1庚烷/乙酸乙酯(6.0L)作为洗脱剂。包含产 物的级分(基于TLC分析)合并并且减压浓缩，得到结晶状浅黄色固体， 然后将其过滤并用庚烷(500mL)洗涤，得到标题化合物，为结晶状白色 固体[593g，73％)。1H和13C NMR谱符合指定结构并且表明没有次要的 区域异构体存在。
d)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸乙酯
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的加料漏斗的 12-L四口圆底烧瓶加入2-溴-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑 -4-甲腈[390g，1.29mol，如前述步骤制备)和无水四氢呋喃(4.0L)。开 动搅拌并使用干冰/丙酮浴将反应混合物冷却到-50℃。通过加料漏斗在 30分钟内加入异丙基氯化镁(2.0M，在THF中，760mL，1.52mol)，以保 持内部温度低于-40℃。将反应在-43℃搅拌另外的30分钟，然后将其冷 却到-78℃。通过加料漏斗在10分钟内加入氯代甲酸乙酯(210mL，2.20 mol)，以保持内部温度低于-60℃。将反应在-70℃搅拌另外的40分钟， 这时移去干冰/丙酮浴并使反应在1.5小时内回温到环境温度。反应混合 物在冰浴中冷却到0℃并且通过缓慢加入饱和氯化铵溶液(1.8L)猝灭， 加入速率为使得内部温度保持低于10℃。将反应混合物转移到12-L分 液漏斗中，用乙酸乙酯(4.0L)稀释，并且将层分离。有机层用盐水洗涤 (2x2.0L)并且在35℃减压浓缩，得到棕色油状物。将粗的油状物溶解 于二氯甲烷(300mL)并且通过色谱法纯化(15x22cm，1.5kg硅胶，10∶1 到4∶1的庚烷/乙酸乙酯)，得到黄色油状物，将其溶解于EtOAc(100mL)， 用庚烷2.0L)稀释并且在冷冻器中保存5小时。将得到的浆状物过滤， 得到标题化合物，为结晶状白色固体(141g，37％)。1H和13C NMR谱符 合指定结构。
e)4-氰基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-1H-咪唑-2-甲酸钾盐
向装备有机械搅拌器、温度探针、和具有氮气入口的加料漏斗的5-L 三口圆底烧瓶加入5[400g，1.35mol)和乙醇(4.0L)。开动搅拌并且在所 有固体溶解之后施加水浴。在15分钟内通过加料漏斗加入6N KOH的 溶液(214.0mL，1.29mol)，以保持内部温度低于25℃并将反应在室温搅 拌5分钟。然后将溶液在20℃减压浓缩到干燥，得到白色固体。将得到 的固体悬浮于甲基叔丁基醚(MTBE，4.0L)并且搅拌30分钟，之后将浆 状物过滤并将滤饼用MTBE(1.0L)洗涤，得到标题化合物，为白色固体， 将其进一步在环境温度下真空干燥4天[366g，89％)。1H NMR、13C NMR、和质谱符合指定结构。元素分析：C11H16KN3O3Si：C，43.25；H，5.28； N，13.76。实测值：C，42.77；H，5.15；N，13.37。Karl Fisher：1.3％H2O。
生物活性
体外试验
进行以下典型的体外试验，以测定式I的化合物的FLT3生物活性。 以非限制性方式给出它们用于说明本发明。
FLT3酶活性、MV4-11增殖和Baf3-FLT3磷酸化的抑制示例了FLT3 酶和依赖于FLT3活性的细胞过程的特异性抑制。使用Baf3细胞增殖的 抑制作为FLT3非依赖性细胞毒性的试验。本文中所有实施例表现出对 FLT3激酶和FLT3依赖性细胞反应的显著的和特异性的抑制。本发明化 合物还可透过细胞。
FLT3荧光偏振激酶试验
为了在体外激酶试验中测定本发明的化合物的活性，使用以下荧光 偏振(FP)规程进行对分离的人FLT3受体(a.a 571-993)的激酶域的抑制。 FLT3 FP试验利用了在由Invitrogen提供的Panvera Phospho-Tyrosine Kinase Kit(Green)中包含的荧光素标记的磷酸肽和抗磷酸酪氨酸抗体。 当FLT3使多聚Glu4Tyr磷酸化时，在抗磷酸酪氨酸抗体中，荧光素标 记的磷酸肽被磷酸化的多聚Glu4Tyr取代，从而降低FP值。将FLT3激 酶反应在以下条件下在室温下培养30分钟：10nM FLT3 571-993、 20ug/mL多聚Glu4Tyr、150uM ATP、5mM MgCl2、1％化合物含在DMSO 中。通过加入EDTA使激酶反应终止。加入荧光素标记的磷酸肽和抗磷 酸酪氨酸抗体并且在室温下培养30分钟。
数据点是一式三份样品的平均值。使用GraphPad Prism进行抑制和 IC50数据分析，使用非线性回归，与多参数、S形剂量-应答(可变斜率) 方程拟合。激酶抑制的IC50表示与DMSO媒介物对照相比，产生激酶 活性50％抑制的化合物剂量。
MV4-11细胞增殖的抑制
为了评价本发明的化合物的细胞效力，在白血病细胞系 MV4-11(ATCC保藏号：CRL-9591)中测量FLT3特异性生长抑制。 MV4-11细胞得自患有幼年型急性粒-单核细胞白血病的患者，所述患者 具有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含FLT3-ITD突变(AML亚 型M4)(1，2)。MV4-11细胞在没有活性FLT3ITD的情况下不能生长和存 活。
使用IL-3依赖性的鼠B细胞淋巴瘤细胞系Baf3作为对照，通过测 量由本发明的化合物引起的非特异性生长抑制证实本发明的代表性化 合物对增殖抑制的选择性(数据未表示)。
为了测量由本发明的化合物引起的增殖抑制，使用基于荧光素酶的 CellTiterGlo试剂(Promega)，其基于总的细胞ATP浓度测量总细胞数。 将细胞以每孔10,000个细胞铺板在100ul的RPMI培养基中，该培养基 包含penn/strep、10％FBS和对于MV4-11和Baf3细胞分别为1ng/ml的 GM-CSF或1ng/ml的IL-3。
将化合物稀释物或0.1％DMSO(媒介物对照)加入到细胞中并且允 许细胞在标准细胞生长条件(37℃、5％CO2)下生长72小时。对于在50％ 血浆中生长的MV4-11细胞的活性测量，将细胞以每孔10,000个细胞铺 板在生长培养基和人血浆为1∶1的混合物中(最终容积100μL)。为了测量 总的细胞生长，根据生产商的说明书，将等体积的CellTiterGlo试剂加 入到每个孔中，并且测定发光量。总的细胞生长被量化为第0天细胞数 的发光计数(相对光单位，RLU)与第3天的总细胞数(72小时生长和/或 化合物处理)者相比的差。百分之百的生长抑制率被定义为等于第0天读 数的RLU。零抑制百分率被定义为生长第三天DMSO媒介物对照的RLU 信号。
数据点是一式三份样品的平均值。生长抑制的IC50表示在第三天引 起DMSO媒介物对照的总细胞生长发生50％抑制的本发明化合物的剂 量。使用GraphPad Prism进行抑制和IC50数据分析，使用非线性回归， 与多参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
MV4-11细胞表达FLT3内部串联重复突变，因此其生长完全依赖于 FLT3活性。期望针对MV4-11细胞的强活性是本发明所期望的性质。相 比之下，Baf3细胞增殖由细胞因子IL-3驱动，因此用作非特异性毒性对 照。本发明的实施例#38在3μM的剂量下表现出＜50％抑制(未包括数 据)，表明其不具有细胞毒性，并且具有良好的FLT3选择性。
基于细胞的FLT3受体Elisa
FLT配体诱导的野生型FLT3磷酸化的特异性细胞抑制根据以下方 式测量：过度表达FLT3受体的Baf3FLT3细胞得自Dr.Michael Heinrich(Oregon Health and Sciences University)。通过用野生型FLT3对 亲代Baf3细胞(生长依赖于细胞因子IL-3的鼠B淋巴瘤细胞系)稳定转 染产生Baf3FLT3细胞系。根据细胞在不存在IL-3和存在FLT3配体的 条件下的生长能力选择细胞。
在37℃、5％CO2条件下，将Baf3细胞保存在具有10％FBS、 penn/strep和10ng/ml FLT配体的RPMI 1640中。为了测量对野生型FLT3 受体活性和磷酸化的直接抑制，开发了三明治ELISA方法，其类似于用 于其它RTK而开发的那些(3，4)。将200μL的Baf3FLT3细胞(1×106/mL) 铺板在96孔皿中，在含0.5％血清和0.01ng/mL IL-3的RPMI 1640中培 养16小时，随后与化合物或DMSO媒介物培养1小时。在37℃将细胞 用100ng/mL Flt配体(R&D Systems Cat#308-FK)处理10分钟。将细胞制 成团粒(pelleted)，洗涤并在补充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和蛋白酶抑 制剂(Sigma Cat#P8340)的100ul细胞裂解缓冲液(50mM Hepes、150mM NaCl、10％甘油、1％Triton-X-100、10mM NaF、1mM EDTA、1.5mM MgCl2、10mM焦磷酸钠)中裂解。然后通过在4℃下以1000xg离心5 分钟使裂解产物澄清。将细胞裂解产物转移到涂有50ng/孔的抗FLT3抗 体(Santa Cruz Cat#sc-480)的白色壁96孔微量滴定板(Costar#9018)中并 且用SeaBlock试剂(Pierce Cat#37527)封闭。将裂解产物在4℃培养2小 时。将板用200ul/孔的PBS/0.1％Triton-X-100洗涤3次。然后在室温下 将板与HRP-结合型抗磷酸酪氨酸抗体(Clone 4G10、Upstate Biotechnology Cat#16-105)的1∶8000稀释物培养1小时。将板用200ul/ 孔的PBS/0.1％Triton-X-100洗涤3次。根据生产商的说明书用Berthold 微板光度计进行信号检测，使用Super Signal Pico试剂((Pierce Cat#37070)。
数据点是一式三份样品的平均值。在存在0.1％DMSO对照条件下 的Flt配体刺激的FLT3磷酸化的总的相对光单位(RLU)被定义为0％抑 制百分率，100％抑制百分率是在基础状态下的裂解产物中的总的RLU。 使用GraphPad Prism进行抑制和IC50数据分析，使用非线性回归，与多 参数、S形剂量-应答(可变斜率)方程拟合。
生物学方法参者文献
1.Drexler HG.The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook. Academic Pres：San Diego，CA，2000.
2.Quentmeier H，Reinhardt J，Zaborski M，Drexler HG.FLT3 mutations in acute myeloid leukemia cell lines.Leukemia.2003 Jan； 17：120-124.
3.Sadick，MD，Sliwkowski，MX，Nuijens，A，Bald，L，Chiang，N， Lofgren，JA，Wong WLT.Analysis of Heregulin-Induced ErbB2 Phosphorylation with a High-Throughput Kinase Receptor Activation Enzyme-Linked Immunsorbent Assay，Analytical Biochemistry.1996； 235：207-214.
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生物学数据
FLT3的生物学数据
选择的本发明的化合物的活性提供如下。所有的活性以μM为单位， 并且具有以下不确定性：FLT3激酶：±10％；MV4-11和Baf3-FLT3：±20％。
优选的本发明的化合物是实施例5、17、23、34、38、和51。
体内测定法
进行以下代表性的体内测定法，以测定本发明的实施例#38的生物 活性。以非限制性方式给出它们用于举例说明本发明。
使用裸鼠MV4-11人肿瘤异种移植物退化模型进行体内评价本发明 的实施例#38的口服抗肿瘤效力。
雌性无胸腺裸鼠(CD-1，nu/nu，9-10周龄)得自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)并且根据NIH标准喂养。所有小鼠分组被 安置(5只小鼠/笼)在无菌的微型隔离笼中清洁室内条件下，以12小时光 照/黑暗循环，房间保持为21-22℃和40-50％的湿度。给小鼠喂养经辐射 的标准啮齿动物饮食并且不限量供应水。所有的动物安置在完全由the American Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care(AAALAC)认可的Laboratory Animal Medicine设备中。涉及 动物的所有操作依照the NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals进行，并且所有的规程由Internal Animal Care and Use Committee(IACUC)审定。
人白血病MV4-11细胞系得自美国典型培养物保藏中心(the American Type Culture Collection)(ATCC保藏号：CRL-9591)并且在包含 10％FBS(胎牛血清)和5ng/mL GM-CSF(R&D Systems)的RPMI培养基中 繁殖。MV4-11细胞得自患有幼年型急性粒-单核细胞白血病的患者，该 患者带有引起MLL基因重排的11q23易位并且包含FLT3-ITD突变 (AML亚型M4)(1，2)。由于自然发生的FLT3/ITD突变，MV4-11细胞结 构性表达活性的磷酸化FLT3受体。期望在裸鼠肿瘤异种移植物模型中 针对MV4-11瘤生长的强抗肿瘤活性是本发明合乎需要的性质。
在先导生长研究中，确定以下条件允许在裸鼠中作为皮下实体瘤异 种移植物的MV4-11细胞生长。在即将注射之前，将细胞在PBS中洗涤 并且计数，悬浮在PBS：Matrigel混合物(BD Biosciences)中1∶1，然后加 载到预先冷却的装备25号针头的1cc注射器中。通过在0.2mL的递送 量中包含5×106个肿瘤细胞在大腿左侧腹股沟区对重量不低于20-21克 的雌性无胸腺裸鼠进行皮下接种。对于退化研究，在开始给药之前让肿 瘤生长到预定尺寸。在肿瘤细胞接种之后约3周，将带有从100到586 mm3大小(有60只小鼠在此范围内，平均体积为288±133mm3(SD))皮下 肿瘤的小鼠随机分为处理组。通过在一周除周末外的日子每天两次 (b.i.d.)和在周未每天一次(q.d.)管饲媒介物(对照组)或不同剂量的化合物 对小鼠进行口服给药。给药持续11个连续日，根据用媒介物处理的对 照小鼠中的瘤生长的动力学和肿瘤大小而定。如果对照小鼠中的肿瘤达 到体重的～10％(～2.0克)，研究终止。每天新制备本发明的实施例#38， 其为在20％HPβCD/D5W，pH 3-4或者其它适当的媒介物中的透明溶液 (1、5和10mg/mL)，并且如上所述口服给药。在研究过程中，使用电子 游标卡尺每周三次(M、W、F)测量肿瘤生长。使用公式(LxW)2/2计算 肿瘤体积(mm3)，其中L＝肿瘤的长度(mm)和W＝肿瘤的宽度(最短距 离，mm)。每周测量三次体重，并且将体重减轻超过10％用作缺乏化合 物耐受性(tolerability)的指示。不可接受的毒性被定义为在研究过程中体 重损失＞20％。每天在每次给药时仔细检查小鼠是否有有害的、与药物 相关的副作用的明显临床征兆。
在研究终止的当天(第12天)，测量每只动物的最终肿瘤体积和最终 体重。将小鼠用100％CO2实施安乐死，并且立即将肿瘤完整切除和称 重，最终肿瘤湿重(克)作为初级效力终点。
本发明的实施例#38对MV4-11肿瘤生长的抑制效果随时间的变化 在图1中说明。数值表示每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。在研 究的最后一天，相对于用媒介物处理的对照组中的肿瘤生长计算肿瘤生 长的抑制百分率(％I)。通过方差分析(ANOVA)随后进行Dunnett’s t-检验 确定相对于对照的统计显著性：*p＜0.05，**p＜0.01。
如图1中所示，通过管饲法b.i.d.口服给予10、50和100mg/kg的 本发明的实施例#38连续11个连续日，对裸鼠中皮下生长的MV4-11肿 瘤生长产生统计显著的、剂量依赖性的抑制。在处理的最后一天(第11 天)，与媒介物处理组的平均肿瘤体积相比，在50和100mg/kg剂量下 的平均肿瘤体积剂量依赖性地降低达100％抑制(p＜0.001)。在50mg/kg 和100mg/kg剂量下的本发明的实施例#38产生肿瘤退化，相对于第1 天的起始平均肿瘤体积，分别为98％和93％的统计显著降低。在10mg/kg 的最低试验剂量，没有观察到与媒介物处理的对照组相比为显著的生长 延迟。在100mg/kg处理的剂量组中在第12天给药停止并且允许肿瘤再 生长时，只有6/12的小鼠在研究的第34天时表现出可触知的(papable)、 可测量的肿瘤。
本发明的实施例#38产生实质上完全的肿瘤质量消退，如在研究终 止时没有可测量的残余肿瘤所示的。(参见图2)。图2中的条形图表示 每个处理组中15只小鼠的平均值(±sem)。如图所示，在10mg/kg剂量 时没有最终肿瘤重量的显著降低，与图1中的肿瘤体积数据一致。在50 mg/kg的剂量下，在图上没有表示为条形图，这是因为在终止时在这些 小鼠中没有可测量的肿瘤质量可被检测到，这与图1中所示的完全的肿 瘤体积退化一致。在图2中没有表示100mg/kg剂量组，这是因为这些 小鼠被停药并且如上所述允许残余的肿瘤继续生长。
在口服给药11个连续日之后，本发明的实施例#38与媒介物处理组 的平均肿瘤重量相比产生最终肿瘤重量的剂量依赖性降低，在50mg/kg 剂量下观察到肿瘤质量的完全消退。(参见图2)。
在研究过程中小鼠每周称重三次(M、W、F)，并且每天在给药时检 查任何有害的、与药物相关的副作用的明显临床征兆。对于本发明的实 施例#38，没有观察到明显的毒性，并且在高达200mg/kg/天的剂量下在 11天的治疗过程中没有观察到对体重的显著不利影响(参见图3)。总地 说来，在所有的剂量组中，相对于起始体重，没有显著的体重减轻，表 明本发明的实施例#38被良好耐受。
为了进一步确立本发明的实施例#38到达肿瘤组织中的期望靶，测 量了得自用媒介物处理的小鼠和用化合物处理的小鼠的肿瘤组织中的 FLT3磷酸化水平。本发明的实施例#38的结果表示在图4中。对于这项 药效动力学研究，将来自用媒介物处理的对照组的6只小鼠的亚组随机 分为三组，每组2只小鼠，然后用另一剂量的媒介物或化合物(10和100 mg/kg，po)处理。在6小时后收获肿瘤，并且快速冻结，用于通过蛋白 质印迹评价FLT3磷酸化。
将收获的肿瘤冻结并以如下方式进行处理用于进行FLT3磷酸化的 免疫印迹分析：200mg肿瘤组织在补充有磷酸酶(Sigma Cat#P2850)和 蛋白酶抑制剂(Sigma Cat#P8340)的裂解缓冲液(50mM Hepes、150mM NaCl、10％甘油、1％Triton-X-200、10mM NaF、1mM EDTA、1.5mM MgCl2、10mM焦磷酸钠)中杜恩斯匀浆。通过在4℃下在1000xg离心 5分钟除去不溶性碎片。将澄清的裂解液(15mg总蛋白，10mg/ml，在裂 解缓冲液中)与10μg的与琼脂糖结合的抗FLT3抗体，克隆C-20(Santa Cruz cat#sc-479ac)在和缓搅拌下在4℃培养2小时。然后将得自肿瘤裂 解产物的经免疫沉淀的FLT3用裂解缓冲液洗涤四次，并且通过 SDS-PAGE进行分离。将SDS-PAGE凝胶转移到硝化纤维，并且用抗磷 酸酪氨酸抗体(克隆-4G10，UBI cat.#05-777)、然后用碱性磷酸酶结合型 山羊抗小鼠二次抗体(Novagen cat.#401212)进行免疫印迹。蛋白质的检 测通过使用Molecular Dynamics Typhoon Imaging系统(Molecular Dynamics，Sunyvale，CA)测量碱性磷酸酶与底物9H-(1，3-二氯-9，9-二甲 基吖啶-2-酮-7-基)磷酸二铵盐(DDAO磷酸盐)(Molecular Probes cat.#D 6487)反应的荧光产物进行。然后将印迹剥离并且用抗FLT3抗体再次探 测，用于磷酸化信号的归一化。
如图4中说明的，在100mg/kg下的单剂量的本发明的实施例#38 在MV4-11肿瘤中，与得自用媒介物处理的小鼠的肿瘤(肿瘤1和2)相比， 产生FLT3磷酸化水平的生物学显著降低(上图，肿瘤5和6)。(总的FLT3 表示在下方图中)。在用10mg/kg化合物处理的动物(肿瘤3-4)中也发生 磷酸化的部分降低。这些结果进一步证明，本发明的化合物事实上与期 望的肿瘤中FLT3靶相互作用。
治疗/预防的方法
本发明包括本发明的化合物抑制细胞或受试者的FLT3激酶活性、 或治疗受试者中与FLT3激酶活性或表达有关的病症的用途。
在这个方面的一个实施方案中，本发明提供降低或抑制细胞中FLT3 激酶活性的方法，包括使本发明的化合物接触细胞的步骤。本发明还提 供降低或抑制受试者的FLT3激酶活性的方法，包括对受试者给予本发 明的化合物的步骤。本发明另外提供抑制细胞中细胞增殖的方法，包括 使细胞接触本发明的化合物的步骤。
细胞或受试者中的FLT3激酶活性可以通过本领域公知的方法测 定，例如本文中描述的FLT3激酶试验。
如本文中使用的，术语“受试者”是指已经成为治疗、观察或实验的 对象的动物，优选哺乳动物，最优选人。
如本文中使用的，术语“接触”是指将化合物加入到细胞中，使得化 合物被细胞吸收。
在这个方面的其它实施方案中，本发明提供预防和治疗学方法，用 于治疗处于形成细胞增殖性病症或FLT3相关病症危险下(或对形成所述 病症敏感)的受试者。
在一个实例中，本发明提供预防受试者中细胞增殖性病症或FLT3 相关病症的方法，包括对受试者给予预防有效量的药物组合物，该药物 组合物包括本发明的化合物和可药用的载体。所述预防剂的给予可以在 表现出细胞增殖性病症或FLT3相关病症的症状特征之前进行，使得疾 病或病症得到预防，或者做为选择，延迟疾病或病症的进展。
在另一个实例中，本发明涉及治疗受试者中细胞增殖性病症或FLT3 相关病症的方法，包括对受试者给予治疗有效量的药物组合物，该药物 组合物包括本发明的化合物和可药用的载体。所述治疗剂的给予可以与 表现出该病症的症状特征同时进行，这样所述治疗剂起到用于校正细胞 增殖性病症或FLT3相关病症的治疗的作用。
术语“预防有效量”是指由研究人员、兽医、内科医生、或其它 临床医师所探求的在受试者中抑制或延迟病症发作的活性化合物或药 物的量。
在本文中使用的术语“治疗有效量”是指由研究人员、兽医、内 科医生或其它临床医师所探求的在受试者中引起生物学或医学反应的 活性化合物或药物的量，所述反应包括减轻所治疗的疾病或病症的症 状。
测定包括本发明化合物的药物组合物的治疗和预防有效剂量的方 法在本文中公开并且是本领域中已知的。
如本文中使用的，术语“组合物”意在包括包含特定量的特定组分的 产物，以及由特定量的特定组分的组合直接或间接得到的任何产物。
如本文中使用的，术语“FLT3相关病症”、或“与FLT3受体有关 的病症”、或“与FLT3受体酪氨酸激酶相关的病症”包括与FLT3活性 相关或涉及FLT3活性(例如FLT3的过分活动)的疾病、和伴随有这些疾 病的状况。术语“FLT3的过分活动”是指下述之一，1)在通常不表达 FLT3的细胞中的FLT3表达；2)由通常不表达FLT3的细胞进行的FLT3 表达；3)引起不需要的细胞增殖的增加的FLT3表达；或4)引起FLT3 结构性活化的突变。“FLT3相关病症”的例子包括由于FLT3的量异常 高或FLT3突变引起FLT3过度刺激而产生的病症、或由于FLT3的量异 常高或FLT3突变引起FLT3活性异常高而产生的病症。已知FLT3的过 分活动在许多疾病的发病机理，包括下列的细胞增殖性病症、肿瘤病症 和癌症中被牵涉。
术语“细胞增殖性病症”是指对多细胞机体产生损害(即，不适或缩 短预期寿命)的在多细胞机体中一种或多种细胞亚型的有害的细胞增殖。 细胞增殖性病症可以在不同类型的动物和人中出现。如本文中使用的， “细胞增殖性病症”包括肿瘤病症。
如本文中使用的，“肿瘤病症”是指由异常或不受控制的细胞生长 产生的肿瘤。肿瘤病症的例子包括但不限于造血功能障碍，诸如例如， 骨髓增生异常，例如血小板增多、原发性血小板增多(ET)、特发性骨髓 外化生、骨髓纤维化(MF)、伴骨髓外化生的骨髓纤维化(MMM)、慢性特 发性骨髓纤维化(IMF)、真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少症和恶化前 脊髓发育不良综合征；癌症，例如神经胶质瘤癌、肺癌、乳癌、结肠直 肠癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌，和血液学 恶性肿瘤，包括脊髓发育不良、多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。血液 学恶性肿瘤的例子包括，例如白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇 金病(也称为霍奇金淋巴瘤)、和骨髓瘤——例如，急性淋巴细胞白血病 (ALL)、急性粒细胞白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性 淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性嗜中性粒细胞白 血病(CNL)、急性未分化细胞白血病(AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤 (ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)、 成人T细胞ALL、伴有三谱系脊髓发育不良AML(AML/TMDS)、混合型 谱系白血病(MLL)、脊髓发育不良综合征(MDS)、骨髓增生异常(MPD)、 和多发性骨髓瘤(MM)。
在这个方面的另一个实施方案中，本发明包括用于治疗或抑制受试 者的细胞增殖性病症或FLT3相关病症发作的组合治疗。组合治疗包括 对受试者给予治疗或预防有效量的本发明的化合物、和一种或多种其它 抗细胞增殖性治疗，包括化疗、放射治疗、基因治疗和免疫治疗。
在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物可与化疗组合给予。 如本文中使用的，化疗是指涉及化疗剂的治疗。各种化疗剂可用于本文 中公开的组合治疗方法。被考虑作为示例的化疗剂包括但不限于：铂化 合物(如顺铂，卡铂，奥沙利铂)；紫杉烷化合物(如，紫杉醇、多西他赛)； 喜树碱化合物(伊立替康、拓扑替康)；长春花生物碱(如，长春新碱、长 春碱、长春瑞滨)；抗肿瘤核苷衍生物(如，5-氟尿嘧啶、亚叶酸、吉西 他滨、卡培他滨)；烷化剂(如，环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、塞替 派)；表鬼臼毒素/鬼臼毒素(如依托泊苷、替尼泊苷)；芳香酶抑制剂(如， 阿那曲唑、来曲唑、依西美坦)；抗雌激素化合物(如，他莫昔芬、氟维 司群)、抗叶酸剂(如，培美曲塞(pemetrexed)二钠)；低甲基化药物(如， 阿扎胞苷)；生物制剂(如，吉姆单抗、西妥昔单抗、利妥西单抗、帕妥 珠单抗(pertuzumab)、曲妥珠单抗、贝伐单抗、埃罗替尼)；抗生素/蒽环 类(如伊达比星、放线菌素D、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、丝裂 霉素C、放线菌素D、洋红霉素、道诺霉素)；抗代谢物(如，氨基碟呤、 氯法拉宾、阿糖胞苷、甲氨蝶呤)；微管蛋白粘合剂(如考布他汀、秋水 仙碱、诺考达唑)；拓扑异构酶抑制剂(如，喜树碱)。另外有用的药物包 括维拉帕米，一种钙拮抗剂，被认为可用于与抗肿瘤剂组合以在对所接 受的化疗剂耐受的肿瘤细胞中建立化学敏感性和加强这种化合物在药 物敏感性恶性肿瘤中的效力。参见Simpson WG，The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapy.Cell Calcium.1985 Dec； 6(6)：449-67。另外，仍有化疗剂被考虑可用于与本发明的化合物组合。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的化合物可与放射治疗组合 给予。如本文中使用的，“放射治疗”是指包括使有需要的受试者暴露于 辐射下的治疗。这种治疗是本领域技术人员已知的。放射治疗的适当模 式与已用于其中单独使用放射治疗或将放射治疗与其它化疗药物组合 的临床治疗的那些模式相似。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的化合物可与基因治疗组合 给予。如本文中使用的，“基因治疗”是指靶向肿瘤发展所涉及的特定基 因的治疗。可能的基因治疗策略包括恢复缺陷型癌症抑制基因、用与编 码生长因子及其受体的基因对应的反义DNA进行细胞转导或转染、基 于RNA的策略例如核酶、RNA诱饵、反义信使RNA和小干扰性 RNA(siRNA)分子和所谓的“自杀基因”。
在本发明的其它实施方案中，本发明的化合物可与免疫治疗组合给 予。如本文中使用的，“免疫治疗”是指通过对肿瘤发展所涉及的特定蛋 白质为特异性的抗体而靶向这种蛋白质的治疗。例如，针对血管内皮细 胞生长因子的单克隆抗体已经被用于治疗癌症。
在除了本发明的化合物之外使用第二种药物时，两种药物可同时给 予(如以单独的或单一的组合物形式)、以任何顺序、在大约相同的时间、 或根据单独的给药方案连续给予。在后一种情况中，两种化合物在足够 保证实现有利或协同效应的时间段内并且以足够保证实现有利或协同 效应的量和方式给予。应该理解，优选的给予方法和给予顺序及组合中 各组分的各自的剂量和方案根据要与本发明的化合物结合给予的特定 的化疗剂、它们的给药途径、所要治疗的特定的肿瘤、和所要治疗的特 定的宿主而定。
如本领域普通技术人员理解的，化疗剂的适当剂量一般类似于或小 于已经用于其中将化疗药物单独给予或与其它化疗药物组合给予的临 床治疗的那些剂量。
最佳的给药方法和顺序及剂量和给药方案可由本领域技术人员使 用常规方法并且考虑本文中所述的信息容易地确定。
只作为示例，铂化合物有利地以每平方米体表面积1到500 mg(mg/m2)的剂量给予，例如50到400mg/m2，具体地，顺铂为约75mg/m2 剂量，卡铂为约300mg/m2剂量每疗程。顺铂口服不能吸收，因此必须 通过静脉内、皮下、肿瘤内或腹膜内注射递送。
只作为示例，紫杉烷化合物有利地以每平方米体表面积50到400 mg(mg/m2)的剂量给予，例如75到250mg/m2，具体地，紫杉醇为约175 到250mg/m2剂量，多西他赛为约75到150mg/m2每疗程。
只作为示例，喜树碱化合物有利地以每平方米体表面积0.1到400 mg(mg/m2)的剂量给予，例如1到300mg/m2，具体地，伊立替康为约100 到350mg/m2剂量，拓扑替康为约1到2mg/m2每疗程。
只作为示例，长春花生物碱可有利地以每平方米体表面积2到30 mg(mg/m2)的剂量给予，具体地，长春碱为约3到12mg/m2，长春新碱 为约1到2mg/m2剂量，长春瑞滨为约10到30mg/m2剂量每疗程。
只作为示例，抗肿瘤核苷衍生物可有利地以每平方米体表面积200 到2500mg(mg/m2)的剂量给予，例如，700到1500mg/m2。5-氟尿嘧啶 (5-FU)通常以200到500mg/m2(优选3到15mg/kg/天)的剂量通过静脉内 给予。吉西他滨有利地以约800到1200mg/m2的剂量给予，卡培他滨有 利地以约1000到2500mg/m2每疗程给予。
只作为示例，烷化剂可有利地以每平方米体表面积100到500 mg(mg/m2)的剂量给予，例如，120到200mg/m2，具体地，环磷酰胺的 剂量为约100到500mg/m2，苯丁酸氮芥的剂量为约0.1到0.2mg/kg体 重，卡莫司汀的剂量为约150到200mg/m2，和洛莫司汀的剂量为约100 到150mg/m2每疗程。
只作为示例，鬼臼毒素衍生物可有利地以每平方米体表面积30到 300mg(mg/m2)的剂量给予，例如50到250mg/m2，具体地，依托泊苷的 剂量为约35到100mg/m2，替尼泊苷为约50到250mg/m2每疗程。
只作为示例，蒽环类衍生物可有利地以每平方米体表面积10到 75mg(mg/m2)的剂量给予，例如15到60mg/m2，具体地，多柔比星的剂 量为约40到75mg/m2，柔红霉素的剂量为约25到45mg/m2，伊达比星 的剂量为约10到15mg/m2每疗程。
只作为示例，抗雌激素化合物可有利地以每日约1到100mg的剂量 给予，根据特定的药物和要治疗的状况而定。他莫昔芬有利地以5到50 mg的剂量口服给予，优选10到20mg每天两次，持续治疗到充分的时 间以实现和维持治疗效果。托瑞米芬有利地以一天一次约60mg的剂量 口服给予，持续治疗到充分的时间以实现和维持治疗效果。阿那曲唑有 利地以一天一次约1mg的剂量口服给予。屈洛昔芬有利地以约20-100mg 一天一次口服给予。雷洛昔芬有利地以一天一次约60mg的剂量口服给 予。依西美坦有利地以一天一次约25mg的剂量口服给予。
只作为示例，生物制剂可有利地以约每平方米体表面积约1到5 mg(mg/m2)的剂量给予，或者如果不同，则如本领域中已知的。例如， 曲妥珠单抗有利地以1到5mg/m2的剂量给予，具体地，为2到4mg/m2 每疗程。
剂量可每疗程给予例如一次、两次或多次，其可按例如每7、14、 21或28天重复。
本发明的化合物可以系统地对受试者给予，例如静脉内、口服、皮 下、肌内、皮内、或非胃肠给予。本发明的化合物也可局部给予受试者。 局部递送系统的非限制性例子包括使用腔内医疗装置，包括血管内给药 导管、金属丝、药理学支架和腔内铺面(endoluminal paving)。本发明的 化合物还可与靶向剂组合给予受试者，以实现化合物在目标区域的高局 部浓度。另外，本发明的化合物可配制用于快速释放或缓慢释放，以维 持药物或药剂与靶组织接触几小时到几周的时间。
本发明还提供药物组合物，包括与可药用载体结合的本发明的化合 物。药物组合物可包含约0.1mg到1000mg，优选约100到500mg的 化合物，并且可构成为适合于所选给药方式的任何形式。
短语“可药用”是指在对动物、或对人适当地给予时，不会产生不利 的、过敏的或其它不良反应的分子实体和组合物。兽医学用途同样地包 括在本发明之内，并且“可药用”制剂包括用于临床和/或兽医用途的制 剂。
载体包括必要的和惰性的药物赋形剂，包括但不限于粘合剂、助悬 剂、润滑剂、调味剂、甜味剂、防腐剂、染料、和包衣。适合于口服给 予的组合物包括固体形式，例如丸剂、片剂、扁囊剂、胶囊(分别包括立 即释放、定时释放和持续释放制剂)、颗粒剂、和粉末剂，和液体形式， 例如溶液剂、糖浆剂、酏剂、乳剂、和悬浮剂。用于非胃肠给予的形式 包括无菌溶液剂、乳剂和悬浮剂。
本发明的药物组合物还包括用于缓慢释放本发明的化合物的药物 组合物。组合物包括缓释载体(典型地，为聚合物载体)和本发明的化合 物。
缓释的生物可降解的载体为本领域中公知的。这些是可以形成在其 中俘获活性化合物的粒子并且在适当的环境(如，水性、酸性、碱性环境 等)中缓慢降解/溶解并且从而在体液中降解/溶解和释放活性化合物的 那些材料。粒子优选是纳米粒子(即，直径为约1到500nm，优选直径 为约50-200nm，最优选直径为约100nm)。
本发明还提供制备本发明的药物组合物的方法。根据常规的药物混 配技术将作为活性成分的本发明的化合物与药物载体紧密混合，载体可 以为各种形式，根据期望给予的制剂形式而定，例如，口服、或非肠道 例如肌内给予。在制备口服剂型的组合物时，可使用任何通常的药物介 质。因此，对于液体口服制剂，诸如例如，悬浮剂、酏剂和溶液剂，适 合的载体和添加剂包括水、二醇、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色 剂等等；对于固体口服制剂，诸如例如，粉剂、胶囊、扁囊剂、软胶囊 和片剂，适合的载体和添加剂包括淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、 粘合剂、崩解剂等等。由于易于给予，片剂和胶囊代表了最有利的口服 剂量单位形式，在这些情况中，显然要利用固体药物载体。如果期望， 片剂可通过标准技术进行包糖衣或包肠溶衣。对于胃肠外给予，载体通 常包括无菌水，但是可包括其它成分，例如用于诸如有助于溶解度或便 于保存的目的。也可制备可注射悬浮剂，在该种情况下，可采用适当的 液体载体、助悬剂等。在用于缓慢释放的制剂中，首先将缓释载体(典型 地为聚合物载体)和本发明的化合物溶解或分散在有机溶剂中。然后将得 到的有机溶液加入到水溶液中，得到水包油型乳液。优选地，水溶液包 括表面活性剂。随后，将有机溶剂从水包油型乳液中蒸发掉，得到包含 缓释载体和本发明化合物的粒子的胶态悬浮剂。
本文中的药物组合物，每剂量单位例如片剂、胶囊、粉末剂、注射 剂、茶匙剂等将包含递送如上所述有效剂量所需量的活性成分。本文中 的药物组合物每单位剂量(例如片剂、胶囊、粉末剂、注射剂、栓剂、茶 匙剂等)包含每天约0.01mg到200mg/kg体重的范围。优选地，该范围 为每天约0.03到约100mg/kg体重，最优选地，为每天约0.05到约 10mg/kg体重。化合物可以按照每天1-5次的方案给予。然而，剂量可 根据患者的需要、所治疗状况的严重程度和所采用的化合物而定。可以 采用每天给药或一定时间间隔后给予(post-periodic dosing)。
优选地，这些组合物为单位剂量形式，例如片剂、丸剂、胶囊、粉 末剂、颗粒剂、无菌的胃肠外溶液剂或悬浮剂、计量式气雾剂或液体喷 雾剂、滴剂、安瓿剂、自喷射装置或栓剂；用于口服肠胃外、鼻内、舌 下或直肠方式给予，或用于通过吸入或吹入方式给予。或者，组合物可 为每周一次或每月一次给予的形式；例如活性化合物的不溶性盐(例如癸 酸盐)可配置为提供用于肌肉内注射的储库型制剂。对于制备固体组合物 例如片剂，将主要活性成分与药物载体(例如常规的压片成分，例如玉米 淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢钙、或 树胶)和其它药物稀释剂(例如水)混合，形成包含本发明化合物及其可药 用盐的均匀混合物的固体预制剂组合物。当提及这些预制剂组合物为均 匀的时候，意指活性成分均匀地分散在组合物中，使得组合物可以容易 地被再分成相等的有效剂量形式，例如片剂、丸剂和胶囊。然后将这种 固体预制剂组合物再分成上述类型的单位剂量形式，包含0.1到约500 mg的本发明的活性成分。新型的组合物的片剂或丸剂可以包衣，或者 以另外方式配制，以提供具有延长作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂 可包括内部剂量组份和外部剂量组份，后者为前者的包膜的形式。两种 组分可以由足以抵抗在胃中崩解并且允许内部组份完整进入十二指肠 或延迟释放的肠溶层隔开。有多种材料可用于这种肠溶层或包衣，这种 材料包括具有虫胶、乙酰基醇(acetyl alcohol)和醋酸纤维素等物质的 多种聚合物酸类。
其中可混合本发明的化合物用于口服或注射给予的液体形式包括 水溶液、适当调味的糖浆、水或油悬浮剂、和用食用油(例如棉子油、芝 麻油、椰子油或花生油)调味的乳剂，以及酏剂和类似的药物媒介物。用 于水悬浮剂的适当的分散剂或助悬剂包括合成的和天然的树胶，例如黄 蓍胶、阿拉伯胶、藻酸盐、右旋糖酐、羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、 聚乙烯吡咯烷酮或明胶。适当调味的助悬剂或分散剂的液体形式也可包 括合成和天然的树胶，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、甲基纤维素等。对于胃 肠外给药，期望无菌的悬浮剂和溶液。在期望静脉内给予时，采用通常 包含适当防腐剂的等渗制剂。
有利地，本发明的化合物可以单次日剂量给予，或者可将总的日剂 量分成每天二、三或四次的等分剂量给予。此外，本发明的化合物可通 过局部使用的适当的鼻内介质以鼻内形式给予，或者通过本领域技术人 员公知的透皮的皮肤用贴片形式给予。为了以透皮递送系统的形式给 予，在整个给药方案中剂量给药当然总是持续的而不是间断的。
例如，对于以片剂或胶囊形式口服给予，可以将活性药物组份与口 服的无毒可药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等混合。此外，当期望或 必要时，也可将适当的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂混合在混合物 中。适当的粘合剂包括但不限于淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β- 乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶)或油酸钠、 硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不 限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
本发明的产物的日剂量可以在每名成年人每天1到5000mg的宽范 围内变化。对于口服给予，优选组合物以片剂形式提供，包含0.01、0.05、 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250 和500毫克活性成分，对所治疗患者进行对症剂量调整。本发明的化合 物的有效量通常以每天约0.01mg/kg到约200mg/kg体重的剂量提供。 具体地，该范围为每天约0.03到约15mg/kg体重，更优选地，为每天 约0.05到约10mg/kg体重。本发明的化合物可根据每天最多四次或更多 次的方案给予，优选每天1到2次。
给予的最佳剂量可以容易地由本领域技术人员确定，并且随使用的 具体化合物、给予方式、制剂的浓度、给予方式、和疾病状况的进展而 变化。另外，与治疗的具体患者有关的因素，包括患者年龄、重量、膳 食和给予时间，将导致需要调整剂量。
本发明的化合物也可以脂质体递送系统(例如小单层脂质体、大单层 脂质体、和多层脂质体)的形式给予。脂质体可以由各种脂质形成，包括 但不限于两亲性脂质，例如卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆 碱、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸类、磷脂酰肌醇、二 酰基三甲铵丙烷、二酰基二甲铵丙烷和硬脂胺，中性类脂(例如甘油三 酯)，及其组合。它们可包含胆固醇，或者不含胆固醇。
给予本发明的化合物的另一个供选方法可通过使化合物与靶向试 剂结合，所述靶向试剂引导结合物到达其预定的作用位置，即到达血管 内皮细胞、或到达肿瘤细胞。抗体靶向试剂和非抗体靶向试剂都可使用。 由于靶向试剂与其相应的结合配对体之间的特异性相互作用，本发明的 化合物可以较高的局部浓度在目标位置或目标位置附近给予，并且由此 更有效地治疗目标位置的病症。
抗体靶向试剂包括与肿瘤细胞、肿瘤维管结构、或肿瘤基质的可靶 向的或可接近的组分结合的抗体或其抗原结合片段。肿瘤细胞、肿瘤维 管结构或肿瘤基质的“可靶向的或可接近的组分”优选为表面表达的、表 面可接近的或表面定位的组分。抗体靶向试剂还包括与从坏死的肿瘤细 胞释放的胞内组分结合的抗体或其抗原结合片段。优选地，这种抗体是 与不溶性胞内抗原结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述不溶性胞 内抗原存在于可被诱导为可渗透的细胞中、或存在于实质上所有的赘生 细胞和正常细胞的空细胞中，但是在哺乳动物的正常活细胞外部不存在 或不可接近。
如本文中使用的，术语“抗体”广泛地是指任何免疫结合试剂，例如 IgG、IgM、IgA、IgE、F(ab’)2，单价碎片，例如Fab′、Fab、Dab，以及 工程抗体例如重组抗体、人源化抗体、双特异性抗体等等。抗体可以为 多克隆抗体或单克隆抗体，但是优选单克隆抗体。本领域已知有非常广 泛的一系列抗体对实质上任何实体瘤类型的细胞表面有免疫特异性(参 见Summary Table on monoclonal antibodies for solid tumors，在Thorpe 等人的美国专利5,855,866中)。本领域技术人员已知产生和分离针对 肿瘤的抗体的方法(参见Thorpe等人的美国专利5,855,866和Thorpe等 人的美国专利6,34,2219)。
使治疗性部分与抗体结合的技术是公知的。(参见例如，Amon等人， ″Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy″， in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Reisfeld等人，(eds.)，pp. 243-56(Alan R.Liss，Inc.1985)；Hellstrom等人，″Antibodies For Drug Delivery″，in Controlled Drug Delivery(2nd Ed.)，Robinson等人，(eds.)，pp. 623-53(Marcel Dekker，Inc.1987)；Thorpe，″Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review″，in Monoclonal Antibodies ′84：Biological和Clinical Applications，Pinchera等人，(eds.)，pp. 475-506(1985))。相似的技术还可用于使本发明的化合物附着于非抗体靶 向试剂。本领域技术人员会知道或能确定与非抗体靶向试剂例如小分 子、寡肽、多糖或其它多阴离子化合物形成结合物的方法。
尽管在血液中适当稳定的任何连接部分可用于将本发明的化合物 连接于靶向试剂，但是优选生物学可解离的键和/或可选择性裂解的间隔 基或连接体。“生物学可解离的键”和“可选择性裂解的间隔基或连接体” 在循环中仍具有适当的稳定性，但是只有或优先在一定条件下，即，在 某一环境中、或在与特定的试剂接触时，可解离、可裂解或可水解。这 种键包括例如二硫键和三硫键和酸不稳定键，如美国专利5,474,765和 5,762,918中描述的；和酶敏感性键，包括肽键、酯、酰胺、磷酸二酯和 糖苷，如美国专利5,474,765和5,762,918中描述的。这种选择性释放的 设计特点有助于在预定的目标位置从结合物释放化合物。
本发明另外提供治疗FLT3相关病症特别是肿瘤的方法，包括对受 试者给予治疗有效量的与靶向试剂结合的本发明的化合物。
当将蛋白质例如抗体或生长因子、或多糖用作靶向试剂时，优选它 们以可注射的组合物形式给予。可注射的抗体溶液可在2分钟到约45 分钟，优选10到20分钟给予到静脉、动脉或脊髓液中。在某些情况下， 皮内和腔内给予对于局限于接近皮肤的特定区域的范围和/或接近特定 体腔的肿瘤是有利的。另外，鞘内给予也可用于脑中的肿瘤。
与靶向试剂结合的本发明的化合物的治疗有效剂量根据个体、疾病 类型、疾病状态、给药方法和其它临床变量而定。有效剂量可使用得自 动物模型(包括本文中提供的那些)的数据容易地测定。
尽管前述说明书教导了本发明的原则，提供实施例用于示例性目 的，但是应该理解，本发明的实践包括所有通常的变体、改进和/或修改， 其都落在权利要求及其等价内容的范围内。
相关申请的交叉引用
本申请要求2005年10月18日提交的美国专利临时申请No. 60/727,687的优先权，所述申请被全文并入本文。
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