整链蛋白偶联性激酶抑制剂
阅读：420发布：2023-03-06
专利汇可以提供整链蛋白偶联性激酶抑制剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且描述了若干化合物，和所述化合物在通过向受 治疗 者施用药物组合物来治疗或 预防 受治疗者中的癌症的方法中的用途，所述药物组合物包含式I的化合物或其药用可接受的盐。 I，所述化合物也可用于抑制细胞中的整链蛋白偶联性激酶，其对Akt 信号 传导途径有影响。，下面是整链蛋白偶联性激酶抑制剂专利的具体信息内容。
1. 根据式I的化合物:
I
其中Ar选自取代的或未取代的联苯、萘基、蒽基,和菲基基团；
Y选自胺磺酰、
,和 ，其中n是0-3的整数，
1 2
R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、或苯甲基；和R 是H、甲基或乙基；
X选自吗啉、胍、硝基、
和 ，其中
3 4
R 是H、SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln，和R是H、甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN；
或其药用可接受的盐。
2. 根据权利要求1所述的化合物，其中Ar是根据式II的联苯基团
II
5
其中R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、CF3、CCl3、羟基、OMe、CN、NO2、NH2、CONH2、CONHMe、乙酸酯、CO2H、CO2Me、F、Cl、Br、或I。
3. 根据权利要求1所述的化合物，其中Ar是萘基、蒽基、或菲基基团。
4. 根据权利要求1所述的化合物，其中Ar是菲基，X是哌嗪，Y是 ，
1
和R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
5
5. 根据权利要求2所述的化合物，其中R 是CF3。
1
6. 根据权利要求5所述的化合物，其中X是哌嗪，Y是 ，和R 是H、甲基、乙
基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
1
7.根据权利要求5所述的化合物，其中X是哌嗪，Y是 ，和R 是H、甲
基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
1
8. 根据权利要求7所述的化合物，其中R 是甲基或乙基。
9. 根据权利要求5所述的化合物，其中X是 ，Y是 ，和
1
R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
10.根 据 权 利 要 求5所 述 的 化 合 物，其 中X是 ，Y 是
1
，和R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
11. 根据权利要求2所述的化合物，其中X是哌嗪。
5 1
12. 根据权利要求11所述的化合物，其中R 是CN，Y是 ，和R 是
H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
5 1
13. 根据权利要求11所述的化合物，其中R 是甲基，Y是 ，和R 是
H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
5 1
14. 根据权利要求11所述的化合物，其中R 是氢，Y是 ，和R 是H、
甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基。
15. 一种治疗或预防受治疗者中癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用包含式I
的化合物或其药用可接受的盐的药物组合物，
I
其中Ar选自取代的或未取代的联苯、萘基、蒽基，和菲基基团；
Y选自胺磺酰、
和 ，其中n是0-3的整数，
R1是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、或苯甲基；和R2是H、甲基或乙基；
X选自吗啉、胍、硝基、
和 ，其中
3 4
R 是H、SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln，和R是H、甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN。
16. 根据权利要求15所述的方法，其中癌症选自白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌，和乳腺癌。
17. 根据权利要求15所述的方法，其中X是哌嗪，Y是 ，和Ar是根
据式II的联苯基团
II
其中R1是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基；和R5是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、CF3、CCl3、羟基、OMe、CN、NO2、NH2、CONH2、CONHMe、乙酸酯、CO2H、CO2Me、F、Cl、Br，或I。
18. 根据权利要求17所述的方法，其中R1是甲基或乙基，和R5是CF3。
19. 一种使细胞与式I的化合物或其药用可接受的盐接触来抑制所述细胞中整链蛋
白偶联性激酶的方法，
I
其中Ar选自取代的或未取代的联苯、萘基、蒽基、和菲基基团；
Y选自胺磺酰、
、和 ，其中n是0-3的整数，
1 2
R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、或苯甲基；和R 是H、甲基或乙基；
X选自吗啉、胍、硝基、
和 ，其中
3 4
R 是H、SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln，和R是甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN。
20. 根据权利要求19所述的方法，其中X是哌嗪，Y是 ，和Ar是根
据式II的联苯基团
II
其中R1是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苯甲基和R5是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、CF3、CCl3、羟基、OMe、CN、NO2、NH2、CONH2、CONHMe、乙酸酯、CO2H、CO2Me、F、Cl、Br，或I。
21. 根据权利要求20所述的方法，其中R1是甲基或乙基，和R5是CF3。
整链蛋白偶联性激酶抑制剂
[0002] 政府资助本发明受由美国国立卫生研究院院长办公室（OD）资助的国家研究资源中心的资金第R01 CAI 12250号支持。政府对本发明具有一定权益。
[0003] 发明背景Akt信号传导途径是多种生物过程例如凋亡、细胞增殖、和新陈代谢的重要调节剂。 这种途径经常在人癌症中通过很多不同机制被上调，从而促进癌细胞的存活并促成治疗癌症患者的临床挑战。Akt的完全活化需要在两个氨基酸残基上磷酸化：由肌醇磷脂依赖性激酶( PDKI )磷酸化的苏氨酸-308（T308），和称为PDK2位点并据报导由许多不同的激酶磷酸化的丝氨酸-473（S473）。这些之一的整链蛋白偶联性激酶（ILK）被鉴定为有前景的抗癌靶点，因为它的表达和活性在多种类型的癌症中增强，并且它的抑制通过诱发凋亡和细胞周期停滞来抑制癌细胞存活（Hannigan等，Nature Reviews Cancer 5，51( 2005 ))。开发新型的、有效的，和安全的ILK抑制剂可以提供新的靶向疗法用于治疗癌症。
[0004] 此前申请人已制备用作PDK-l/Akt信号传导抑制剂或用于其它应用的许多塞来昔布衍生物。例如美国专利第7,026,346号和第7,576,116号以及专利公开第2008/0269309号，描述了用作PDK-l/Akt信号传导抑制剂和抗癌剂的许多化合物。申请人的美国专利申请第12/428,035号描述了用于治疗弗朗西斯菌（Francisella bacteria）感染的许多塞来昔布衍生物。
[0005] 还报导了ILK的小分子抑制剂。这些中QLT0267似乎集聚了近来的关注，因为它在临床前研究中表现出功效（Kalra等，Breast Cancer Res 11，R25（2009）；Eke等，PLoS ONE 4：e6434（2009）；Edwards等，Mol Cancer Ther 7，59(2008))。在乳腺癌细胞中，体外72小时处理之后，报导的QLT0267用于抑制细胞成活力的IC50值在9.8－70.9µM范围，通过口服或腹膜内途径的体内给药需要/使用100或200mg/kg以抑制小鼠的肿瘤生长。但是仍然存在对其它ILK抑制剂的需求，特别是表现出高活性水平的那些。
[0006] 发明简述本发明的化合物提供另外的ILK抑制剂，并包括展示出比之前本领域已知的那些更大的体外和体内效力的若干化合物。
[0007] 一方面，本发明提供根据式I 的化合物：I
其中，Ar选自取代的或未取代的联苯、萘基、蒽基、和菲基；Y选自胺磺酰、
1
、和 ，其中n是0-3的整数，R 是H、甲基、乙基、丙基、异
丙基、或苯甲基；和R2是H、甲基或乙基；X选自吗啉、胍、硝基、 和 ，其中R3是
4
H、SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln ，和R 是H、甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN；或其药用可接受的盐。
其中，Ar选自取代的或未取代的联苯、萘基、蒽基、和菲基；Y选自胺磺酰、
1
、和 ，其中n是0-3的整数，R 是H、甲基、乙基、丙基、异
丙基、或苯甲基；和R2是H、甲基或乙基；X选自吗啉、胍、硝基、 和 ，其中R3是
4
H、SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln ，和R 是H、甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN；或其药用可接受的盐。
[0008] 另一方面，本发明提供治疗或预防受治疗者的癌症的方法，其包括向受治疗者施用药物组合物，所述药物组合物包含本文描述的式I化合物，或其药用可接受的盐。在本发明的实施方式中，癌症可以是白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌，或乳腺癌。
[0009] 另一方面，本发明提供抑制细胞中整链蛋白偶联性激酶的方法，其通过将细胞与本文描述的式I化合物，或其药用可接受的盐接触。
[0011] 图2 提供了（A）在5 %胎牛血清(FBS )存在下，以在2.5µM处理24小时之后，化合物1－9对PC-3人前列腺癌细胞中的PDKI（T308）和PDK2（S473）位点的Akt磷酸化的效果的Western印迹分析，和（B）化合物1－9对在A中如上面描述处理的PC-3细胞的成活力上的剂量依赖效果，。细胞生存力由MIT试验评估（点，平均值；条，±SD）。
[0012] 图3显示了化合物2在前列腺和乳腺癌细胞系和非恶性的前列腺和乳上皮细胞的组中的抗增殖效果。测定了化合物2对（A）前列腺癌症（PC-3，LNCaP）和非恶性的前列腺上皮细胞（PrEC），和（B）乳腺癌（MDA-MB-468，MDA-MB-231，CAL51，MCF-7，SKBR3）和非恶性的乳上皮细胞（MEC）中的细胞成活力的时间和/或剂量依赖效果。将细胞在指示的浓度处理12、24、或48小时，细胞成活力由MIT试验评估（点，平均值；条，±SD）。
[0013] 图4提供了化合物2抑制ILK信号传导途径的证据。化合物2对PC-3和MDA-MB-231细胞中ILK下游靶点（Akt-S473；GSK3β-S9）的剂量依赖效果的Western印迹分析。将细胞在5 % FBS存在下在指示的浓度处理24小时。
[0014] 图5提供了筛选化合物10－13的结果。（A）在5 %FBS 存在下在2.5µM处理24小时之后，化合物10－13和2对PC-3细胞成活力的剂量依赖效果。细胞成活力由MIT试验评估（点，平均值；条，±SD）。（B）化合物2和13对PC-3细胞中ILK下游靶点的磷酸化状态的Western印迹分析。
[0015] 图6显示了乳腺癌细胞中化合物4－9的抗增殖活性。在5 % FBS存在下24小时的处理之后，化合物4－9在MCF-7 (上组)和SKBR3(下)细胞中的剂量依赖效果。细胞成活力由MIT试验评估（点，平均值；条，±SD）。
[0016] 图7显示了化合物2口服给药对无胸腺裸鼠中建立的PC-3肿瘤的生长的效果。通5
过皮下注射包含50 % Matrigel的总体积为0.1mL的无血清介质中的5×10 的PC-3细胞在雄性无胸腺裸鼠中建立PC-3肿瘤。将建立肿瘤的小鼠随机分成三组，通过强饲法接受指示的处理一天一次持续35天。每周测量肿瘤大小和体重（点，平均值；条，±SD）。
过皮下注射包含50 % Matrigel的总体积为0.1mL的无血清介质中的5×10 的PC-3细胞在雄性无胸腺裸鼠中建立PC-3肿瘤。将建立肿瘤的小鼠随机分成三组，通过强饲法接受指示的处理一天一次持续35天。每周测量肿瘤大小和体重（点，平均值；条，±SD）。
[0017] 发明详述本发明开发了许多新化合物，其可用作整链蛋白偶联性激酶抑制剂并用于治疗或预防受治疗者中的癌症。这些化合物由式I描述，取代基更详细地在本文中定义。
[0019] 如本文所用，术语“有机基团”用于意指烃基团，其分类为脂肪族基团、环状基团，或脂肪族和环状基团的组合（例如，烷芳基或芳烷基）。烷芳基是通过介入的烷基连接到结构的剩余部份的芳基，反之芳烷基是直接连接到结构的芳基，但其包括一个或更多个连接到其上的其它的烷基。在本发明上下文中，对于本发明化合物适合的有机基团是不干扰化合物所需的活性（例如它们的抗癌活性）的那些。在本发明上下文中，术语“脂肪族基团”指饱和的或不饱和的直链或支链的烃基团。这个术语用于包括例如烷基、烯基、和炔基。
[0020] 如本文所用，术语“烷基”、“烯基”和前缀“烷－”包括直链基团和支链基团。除非另外规定，这些基团包含1至20个碳原子，烯基包含2至20个碳原子。在一些实施方式中，这些基团具有总数至多10个碳原子、至多8个碳原子、至多6个碳原子、或至多4个碳原子。含有4个或更少碳原子的烷基也可称为低级烷基。烷基也可通过它们所包含的碳原子数目来提及（即C1－C4烷基是含有1－4个碳原子的烷基）。
[0021] 如本文所用，环烷基指形成环结构的烷基（即，烷基、烯基、或炔基）。环状基团可以是单环的或多环的并优选地具有3－10个环碳原子。环烷基可通过含有4或更少个碳原子的烷基连接到主结构。示例性的环状基团包括环丙基、环丙基甲基、环戊基、环己基、金刚烷基以及取代的和未取代的冰片基、降冰片基和降冰片烯基。
[0022] 除非另外指明，“亚烷基”和“亚烯基”是如上定义“烷基”和“烯基”基团的二价形式。当“亚烷基”和“亚烯基”分别被取代后，使用术语“烷撑基（alkylenyl）”和“烯撑基（alkenylenyl）” 。例如芳烷撑基（arylalkylenyl）基团包含与芳基连接的亚烷基部份。
[0023] 术语“卤代烷基”包括用一个或更多个卤原子取代的基团，包括全氟基团。这也适于含有前缀“卤代”的其它基团。适合的卤代烷基的实例是氯甲基、三氟甲基等。卤代部份包括氯、溴、氟和碘。
[0024] 如本文所用，术语“芳基”包括碳环芳族环或环系统。芳基可包含单个芳族环、多个单独的芳族环，或稠合的芳族环系统。碳环芳族环不包含杂原子。芳基的实例包括苯基、萘基、联苯基、芴基和茚基。芳基可以是取代的或未取代的。
[0025] 除非另外指明，术语“杂原子”指原子O、S、或N。术语“杂芳基”包括含有至少一个环杂原子（例如O、S、N）的芳族环或环系统。在一些实施方式中，术语“杂芳基”包含含有2－12个碳原子、1－3个环、1－4个杂原子，和O、S和/或N作为杂原子的环或环系统。适合的杂芳基包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、三唑基、吡咯基、四唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基 、噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、咔唑基、苯并噁唑基、嘧啶基、苯并咪唑基、喹喔啉基、苯并噻唑基、萘啶基、异噁唑基、异噻唑基、嘌呤基、喹唑啉基、吡嗪基、1-氧化吡啶基（oxidopyridyl）、哒嗪基、三嗪基、四嗪基、噁二唑基，噻二唑基（thiadiazolyl）等。
[0026] 术语“稠合的芳基”包括稠合的碳环芳族环或环系统。稠合的芳基包含稠合以形成单一芳族系统的多个芳族环。稠合的芳基的实例包括萘（C10）、蒽（C14）、菲（C14），和芘（C16）稠合芳基。总体来说稠合的芳基可以参考它们包含的碳环原子的数目来提及，即C10－C18碳芳基。
[0027] 术语“稠合的杂芳基”指包含稠合以形成单一芳族系统的多个芳族环的稠合的芳族环系统，其中一个或更多个芳族环是杂芳族环。稠合的杂芳基类似于稠合的芳基。稠合的杂芳基的实例包括苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、异吲哚、衍生自喹啉、异喹啉、酞嗪、吡啶并吡啶的C10杂芳基，和衍生自吖啶和呫吨的C14杂芳基。
[0028] 当基团在本文描述的任何式或方案中出现多于一次时，无论是否清楚地说明，各基团（或取代基）是独立地选择的，例如对于式-C(O)-NR2，各R基团是独立地选择的。
[0029] 作为简化讨论和本申请全文中使用的某些术语陈述的方法，术语“基团”和“部份”用于区分允许取代和可被取代的化学种类与不允许取代或不可被如此取代的那些。因而，当术语“基团”用于描述化学取代基时，所述化学材料包括未取代的基团和具有一个或更多个非过氧化的O、N、S、或F取代基或其它常规取代基例如甲基的那种基团。在术语“部份”用于描述化学化合物或取代基之处，意在仅包括未取代的化学材料。例如短语“烷基”意在不仅包括纯开链饱和的烃烷基取代基例如甲基、乙基、丙基、叔丁基等，还包括具有本领域已知的进一步取代基的烷基取代基，所述本领域已知的进一步取代基例如羟基、烷氧基、烷基磺酰基、卤原子、氰基、硝基、氨基、羧基等。因而“烷基”包括醚基、卤代烷基、硝基烷基、羧基烷基、羟基烷基、氰基烷基等。另一方面，短语“烷基部份”限定为只包括纯开链饱和的烃烷基取代基，例如甲基、乙基、丙基、叔丁基等。
[0030] 在基团上任选地取代的其它取代基进一步如下定义。
[0031] 酯（羧酸酯、苯甲酸酯（carboxylic acid ester）、氧基羰基）：-C(=O)OR，其中R是酯取代基，例如C1-7烷基，或C5-20芳基，优选地是C1-7烷基（C1-7烷基酯）。酯基团的实例包括但不限制于-C(=O)OCH3、-C(=O)OCH2CH3、-C(=O)O(CH3)2、-(CH2)3C(＝O)OCH3和-C(=O)OPh。
[0032] 酰氨基（氨基甲酰基、氨基甲酰、氨基羰基、甲酰胺）：-C(=O)NR1R2，其中R1和R2独立地是如为氨基所定义的氨基取代基。酰胺基的实例包括但不限制于-C(=O)NH2、-C(=O)NHCH3、-C(=O)N(CH3)2、-C(=O)NHCH2CH3和-C(=O)N(CH2CH3)2。
[0033] 氨基：-NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，例如氢或C1-7烷基。氨基的实例包括但不限制于-NH2、-NHCH3、-NHCH(CH3)2、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2和-NHPh。环氨基的实例包括但不限制于氮丙啶基、吖丁啶基、吡咯烷基、 哌啶-1-基、哌嗪基、全氢二氮杂 基、吗啉基、和硫代吗啉基。
[0034] 酰氨基（酰氨基）：-NR1C(=O)R2，其中R1是酰胺取代基，例如氢或C1-7烷基。酰胺基团的实例包括但不限制于是-NHC(=O)CH3、-NHC(=O)CH2CH3、和-NHC(=O)Ph。酰胺基团可以是取代的；例如酰胺基团可以是胺取代的酰胺基团，具有式-NH-CO-(CH2)x-NH2，其中x是1－4的整数。
[0035] 脲基：-NR1CONR2R3，其中R2和R3独立地是如为氨基定义的氨基取代基，且R1是脲基取代基，例如氢或C1-7烷基。脲基的实例包括但不限制于-NHCONH2、-NHCONHMe、-NHCONHEt、-NHCONMe2、-NHCONEt2、-NMeCONH2、-NMeCONHMe、-NMeCONHEt、-NMeCONMe2、-NMeCONEt2，和-NHC(=O) NHPh。
[0036] 胺磺酰-S(=O)2NRR1，其中R1是如为氨基定义的氨基取代基，且R是胺磺酰基（sulfonamino）取代基，例如C1-7烷基或C5-20芳基。胺磺酰基团的实例包括但不限制于-S(=O)2NHCH3、-S(=O)2NHPh和-S(=O)2N(Me)2。
[0037] 本发明包括任何其药用可接受形式的本文描述的化合物，包括异构体（例如非对映体和对映体）、互变异构体、盐、溶剂化物、多晶型物、前药等。特别地，如果化合物是光学活性的，本发明具体地包括该化合物对映体的每一个，以及对映体的外消旋混合物。需理解术语“化合物”包括任何或所有这些形式，无论是否明确说明（虽然有时明确说明了“盐”）。 [0038] 如本文所用，“治疗（treat）”、“治疗（treating）”和“治疗（treatment）”等指向被病状或疾病例如癌症折磨的受治疗者提供益处的任何行为，包括通过减轻或抑制至少一种症状的病状改善、疾病发展的迟延、疾病发作的预防或迟延等。
[0039] 如本文所用，预防指向处于被病状或疾病例如癌症折磨的风险中的受治疗者提供益处的任何行为，包括避免癌症发展，或减少癌症可发展的疾病的一种或多种症状。该受治疗者由于暴露于致癌物或由于家族遗传而处于风险中。
[0040] 如本文所用，“药用可接受的”意指该化合物或组合物适合用于本文描述的方法施用到受治疗者，根据疾病的严重性和治疗的必要性没有不适当的有害副作用。
[0041] 术语“有效治疗的”和“药理学上有效的”意在限定各药剂的量，所述药剂的量将达到降低疾病严重性的目标同时避免不利的副作用，例如典型地伴随着可选择的疗法的那些。有效治疗的量可以一个或更多个剂量施用。
[0042] 本发明提供可用作抗癌剂或整链蛋白偶联性激酶抑制剂的多种化合物。这些化合物可根据式I描述：I
其中Ar选自取代的或未取代的联苯、萘基、蒽基，和菲基；Y选自胺磺酰、
1
，和 ，其中n是0-3的整数，R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基，
2 3
或苯甲基；和R 是H、甲基或乙基；X是选自吗啉、胍、硝基、 和 ，其中R 是H、
4
SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln，和R 是H、甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN；或其药用可接受的盐。X、Y、和Ar 取代基都可相互独立地变化。
其中Ar选自取代的或未取代的联苯、萘基、蒽基，和菲基；Y选自胺磺酰、
1
，和 ，其中n是0-3的整数，R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基，
2 3
或苯甲基；和R 是H、甲基或乙基；X是选自吗啉、胍、硝基、 和 ，其中R 是H、
4
SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln，和R 是H、甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN；或其药用可接受的盐。X、Y、和Ar 取代基都可相互独立地变化。
[0043] 在一些实施方式中，式I的化合物包含根据式II的联苯基团形式的ArII
其中R5是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、CF3、CCl3、羟基、OMe、CN、NO2、NH2、CONH2、CONHMe、乙酸酯、CO2H、CO2Me、F、Cl、Br、或I。在一些实施方式中，R5是卤代烷基、例如卤代甲基，而在进一步的实施方式中R5是三氟甲基部分(CF3)。
其中R5是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、CF3、CCl3、羟基、OMe、CN、NO2、NH2、CONH2、CONHMe、乙酸酯、CO2H、CO2Me、F、Cl、Br、或I。在一些实施方式中，R5是卤代烷基、例如卤代甲基，而在进一步的实施方式中R5是三氟甲基部分(CF3)。
[0044] 在式I的化合物的进一步的实施方式中，Ar基团是稠合的芳基。例如，Ar基团可以是萘基、蒽基、或菲基。稠合的芳基可通过沿环的任何位置连接到化合物的剩余部份。
[0045] 在一些实施方式中，式I化合物的Y取代基可选自胺磺酰、甲酰胺(即，)、和酯(即 )，其中n是0-3的整数，R1是H、甲基、乙基、丙基、异
2
丙基、或苯甲基；和R 是H、甲基或乙基。例如，Y可以是 或 。
2
丙基、或苯甲基；和R 是H、甲基或乙基。例如，Y可以是 或 。
[0046] 在另外的实施方式中，取代基X可以是不同的。例如，X可以是选自吗啉、胍、硝3
基、烷基胺(即， ) 和哌嗪(即， )。烷基胺的基团R 可以是H、SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln。在本发明优选的实施方式中，基
3 3
团R 是β-丙胺酸。R 的氨基酸通过它们的羧基部分连接到胺，形成酰胺或“肽”键。哌嗪
4
的R 基团可以是H（提供哌嗪），甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN。
基、烷基胺(即， ) 和哌嗪(即， )。烷基胺的基团R 可以是H、SO2NH2、L-Lys、D-Lys、β-Ala、L-Lue、L-Ile、Phe、Asp、Asn、Glu、或Gln。在本发明优选的实施方式中，基
3 3
团R 是β-丙胺酸。R 的氨基酸通过它们的羧基部分连接到胺，形成酰胺或“肽”键。哌嗪
4
的R 基团可以是H（提供哌嗪），甲基、乙基、烯丙基、CH2CH2OH、或CH2CN。
[0047] 上述取代基的具体组合用于本发明另外的实施方式中。例如，式I的化合物的一1
个附加的实施方式提供Ar为菲基，X为哌嗪，Y为 ，和R 为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、或苯甲基。
个附加的实施方式提供Ar为菲基，X为哌嗪，Y为 ，和R 为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、或苯甲基。
[0048] 在本发明的若干实施方式中，Ar基团是如下所示的4’-三氟甲基,1,1’-联苯部分：在其中Ar是4’-三氟甲基,1,1’-联苯部分的实施方式中，X是哌嗪，Y是
1 1
或 ，和R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、或苯甲基。可选地，R 可以
是甲基或乙基。
1 1
或 ，和R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、或苯甲基。可选地，R 可以
是甲基或乙基。
[0049] 在其中Ar是4’-三氟甲基,1,1’-联苯部份的进一步实施方式中，X是1
、Y是 或 ，和R 是H、甲基、乙基、丙基、异
丙基、丁基，或苯甲基。
、Y是 或 ，和R 是H、甲基、乙基、丙基、异
丙基、丁基，或苯甲基。
[0050] 在式I的化合物的若干实施方式中，Ar为根据式5
的联苯基团和X是哌嗪。在这些实施方式的一些中，R 是CN、甲基、
1
或氢，Y是 和R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、或苯甲基。
的联苯基团和X是哌嗪。在这些实施方式的一些中，R 是CN、甲基、
1
或氢，Y是 和R 是H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、或苯甲基。
[0051] 可在动物模型中测试候选药剂。典型地，动物模型是用于癌症研究的一种。动物模型(例如，小鼠)中各种癌症的研究是用于人癌症研究的普遍接受的实践。例如，其中将人肿瘤细胞注射进动物中的裸鼠模型，被普遍接受为对研究多种类的癌症有用的一般模式（参见例如，Polin等，Investig. New Drugs，15:99-108 (1997))。典型地在用候选药剂处理的对照动物和未接受治疗的对照同窝（control littermate）之间比较结果。转基因动物模型也可用并普遍接受为人疾病的模型（参见，例如，Greenberg等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，92:3439-3443 (1995))。候选药剂可以用在这些动物模型中以确定候选药剂是否减少与癌症有关的一种或更多种症状，包括，例如，癌症转移、癌细胞活动力、癌细胞侵袭力、或其组合。
[0052] 使用本发明的化合物治疗癌症本发明提供通过向受治疗者施用包含式I的化合物或药用可接受的盐的药物组合物来治疗或预防受治疗者的癌症发展的方法。癌症是异常和过度的细胞增殖的疾病。癌症一般由环境危害或复制错误引起，所述复制错误使得细胞的小部分避开对增殖的正常控制并增加它们的数目。损坏或错误通常影响DNA编码细胞周期的限制点控制，或细胞生长控制的相关方面例如肿瘤抑制基因。当这部分细胞增殖时，可能产生其他的遗传性变型，并且如果它们提供生长优势，它们将以进化方式被选择。具有发展的生长优势但还没有变成完全癌性的细胞称为前癌细胞。癌症导致受治疗者中增加的数量的癌症细胞。这些细胞可形成反常的细胞团，称为肿瘤，其细胞称为肿瘤细胞。受治疗者体中肿瘤细胞的总量称为肿瘤量。肿瘤可以是良性的或恶性的。良性的肿瘤包含增殖中的但保持在特定位置的细胞，并经常是被包囊的。另一方面，恶性肿瘤的细胞可通过称为转移的过程侵袭和破坏邻近的组织并扩散至身体的其它部份。
[0053] 癌症通常基于其起源组织而命名。有几种主要类型的癌症。癌是从加衬或覆盖内部器官的皮肤或组织开始的癌症。肉瘤是从骨、软骨、脂肪、肌肉、血管、或其它连接性的或支持性的组织开始的癌症。白血病是从血液形成组织例如骨髓开始的癌症，并导致大量异常的血液细胞产生并进入血流中。淋巴癌和多发性骨髓瘤是从免疫系统细胞中开始的癌症。可用本发明的化合物治疗的癌症类型的实例包括选自以下的癌症：白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌，和乳腺癌。
[0054] 通过调节癌性或潜在癌性细胞中信号传导途径以防止过度生长或提供对细胞中的其它异常过程的调节来治疗或预防癌症。不意欲受理论限制，本发明化合物可通过提供对Akt信号传导途径的调节来治疗或预防癌症。Akt信号传导途径包括是丝氨酸/苏氨酸特异蛋白激酶家族的成员的酶，并通过例如抑制凋亡程序涉及细胞存活途径。Akt的激活需要在两个氨基酸残基上磷酸化，其中一个是磷酸肌醇依赖性激酶2( PDK2 )位置。整链蛋白偶联性激酶（ILK）被确定为能够磷酸化PDK2位点的激酶中的一种。如在本文提供的实施例中阐明的，本发明的化合物因抑制整链蛋白偶联性激酶而能够防止PDK2磷酸化，从而减少Akt的活化。因此，本发明一方面提供通过将该细胞与式I的化合物或其药用可接受的盐接触来抑制细胞中整链蛋白偶联性激酶的方法。该细胞可在体内、体外、或离体接触。在一些实施方式中，被接触的细胞可以是癌细胞。
[0055] 本发明的化合物可用于提供预防性的和/或治疗性的处理。例如可在癌症发生前向受治疗者预防性地施用本发明化合物。预防性（即预防性的）施用有效降低受治疗者后续癌症发生的可能性，或降低随后发生的癌症的严重性。可向处于升高的发展癌症的风险中的受治疗者提供预防治疗，受治疗者例如具有癌症家族史或暴露于高水平的致癌物的受治疗者。可选地，例如可将本发明的化合物治疗性地施用至已遭受癌症折磨的受治疗者。在一个治疗性施用的实施方式中，所述化合物的施用有效消除癌症；在另一个实施方式中，化合物的施用有效降低癌症的严重性或延长被折磨的受治疗者的寿命。受治疗者优选地是哺乳动物，例如家养农场动物（例如牛、马、猪）或宠物（例如狗、猫）。更优选地，受治疗者是人。
[0056] 本发明的化合物的施用和制剂本发明也提供药物组合物，其包含作为活性成分的化合物例如由式I定义的那些，和与活性成分组合的药用可接受的液体或固体载体（一种或多种）。适于治疗癌症的上述化合物中的任何一种可以被包含在本发明的药物组合物中。
[0057] 化合物可以作为药用可接受的盐施用。药用可接受的盐指化合物的相对无毒性的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在本发明化合物最后的分离和纯化中原位制备，或通过将纯化的本发明的化合物与适合的抗衡离子（取决于该化合物的性质）单独反应，并分离由此形成的盐。代表性抗衡离子包括盐酸根、氢溴酸根、硝酸根、铵、硫酸根、甲苯磺酸根、磷酸根、酒石酸根、乙二胺、和马来酸盐等。参见例如Haynes等，J. Pharm. Sci.，94，p.2111-2120(2005)。
[0058] 药物组合物包含与一种或更多种不同的生理可接受的载体一起递送至患者的一种或更多种本发明的化合物，载体包括本领域普通技术人员已知的多种稀释剂或赋形剂。例如，对于肠胃外施用，优选等渗盐水。对于局部施用，可使用霜剂，其包含载体例如二甲基亚砜(DMSO)或不阻碍或抑制该化合物的活性的典型地在局部霜剂中存有的其它剂。其它适合的载体包括但不限制于醇、磷酸盐缓冲盐水和其它平衡盐溶液。
[0059] 制剂可便利地以单位剂量形式存在，且可以通过药学领域里熟知的任何方法制备。优选地，这些方法包括将活性剂与构成一种或更多种补充成分的载体组合的步骤。通常，通过将活性剂与液体载体、精细分散的固体载体、或两者均匀地和紧密地组合，并且然后若需要将产品定型成所需的制剂，来制备制剂。本发明方法包括向受治疗者，优选地哺乳动物，且更优选地人施用产生所需效果的有效量的本发明组合物。配制的化合物可作为单一剂量或多个剂量施用。活性剂的有用剂量可以通过在动物模型中比较它们的体外活性和体内活性来确定。将小鼠和其它动物中的有效剂量外推至人的方法是现有技术已知的；例如参见美国专利第4,938,949号。
[0060] 本发明的药剂优选以药物组合物被配制并且然后，根据本发明的方法，以适于所选施用途径的多种形式向受治疗者例如人患者施用。制剂包括但不限制于适于口服、直肠、阴道、局部、鼻的、眼的、或肠胃外（包括皮下的、肌内的、腹膜内的、瘤内的（intratumoral）、和静脉内的）施用的那些。
[0061] 适于口服施用的本发明制剂可作为含有预定量的粉末或颗粒形式的活性剂的离散单位、作为含有活性化合物的脂质体，或作为在水性液体或非水性液体中的溶液或混悬液存在，所述离散单位例如片剂、糖锭、胶囊剂、锭剂、薄片（wafer）、或扁囊剂，所述溶液或混悬液例如糖浆剂、酏剂、乳剂、或饮剂（draught）。这些组合物和制剂典型地含有至少约0.1重量%的活性剂。本发明的化合物（即活性剂）的量是这样的：剂量水平将有效地在受治疗者中产生所需的结果。
[0062] 鼻喷雾制剂包含活性剂以及防腐剂和等渗剂的纯化的水溶液。优选地将这种制剂调节至与鼻黏膜相容的pH和等渗状态。直肠或阴道施用的制剂可以与适合的载体例如可可脂、或氢化油脂或氢化脂肪羧酸，以栓剂存在。眼制剂通过与鼻喷雾类似的方法制备，除了pH和等渗因子优选地调节至与眼睛匹配外。局部制剂包含溶解或悬浮在一种或更多种介质中的活性剂，所述介质例如是矿物油、石油、聚羟基醇、或局部药物制剂所用的其它基底。
[0063] 片剂、糖锭、丸剂、胶囊剂等也可包含以下中的一种或更多种：粘合剂例如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或凝胶；赋形剂例如磷酸二钙；崩解剂例如玉米淀粉、土豆淀粉、海藻酸等；润滑油例如硬脂酸镁；甜味剂例如蔗糖、果糖、乳糖、或阿司帕坦；和天然的或人造的调味剂。当单位计量形式是胶囊时，其可进一步包含液体载体，例如植物油或聚乙二醇。多种其它材料可以包衣，或另外地改变固体单位剂量形式的物理形式存在。例如片剂、丸剂，或胶囊可包被有凝胶、蜡、虫胶、糖等。糖浆剂或酏剂可包含一种或更多种甜味剂，防腐剂例如羟苯甲酯或羟苯丙酯，延迟糖结晶的剂，增大任何其它成分的溶解性的剂例如多元醇（例如甘油或山梨醇）、染料、和风味剂。用于制备任何单位剂量形式的材料就所用的量基本上是无毒的。活性剂可以并入缓慢释放的制剂和装置中。
[0064] 化合物的制备本发明化合物可通过合成路径合成，所述合成路径包含类似于化学领域熟知的那
些，特别地根据本文包含的说明书的过程。起始材料通常可得自商业来源例如Aldrich Chemicals ( Milwaukee，Wisconsin，USA )或使用本领域技术人员熟知的方法简易地制备（例如，由在如下文献中通常描述的方法制备：Louis F. Fieser和Mary Fieser，有机合成试剂（Reagents for Organic Synthesis），1-19卷，Wiley，New York，（1967-1999版）；Alan R. Katritsky，Otto Meth-Cohn，Charles W. Rees，综合有机官能团转化（Comprehensive Organic Functional Group Transformations），1-6 卷，Pergamon Press，Oxford，England，(1995)；Barry M. Trost和Ian Fleming，综合有机合成（Comprehensive Organic Synthesis），1-8卷，Pergamon Press，Oxford，England，(1991)；或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie，4，Aufl. Ed. Springer-Verlag，Berlin，Germany，包括补遗（通过Beilstein在线数据库也可得））。
些，特别地根据本文包含的说明书的过程。起始材料通常可得自商业来源例如Aldrich Chemicals ( Milwaukee，Wisconsin，USA )或使用本领域技术人员熟知的方法简易地制备（例如，由在如下文献中通常描述的方法制备：Louis F. Fieser和Mary Fieser，有机合成试剂（Reagents for Organic Synthesis），1-19卷，Wiley，New York，（1967-1999版）；Alan R. Katritsky，Otto Meth-Cohn，Charles W. Rees，综合有机官能团转化（Comprehensive Organic Functional Group Transformations），1-6 卷，Pergamon Press，Oxford，England，(1995)；Barry M. Trost和Ian Fleming，综合有机合成（Comprehensive Organic Synthesis），1-8卷，Pergamon Press，Oxford，England，(1991)；或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie，4，Aufl. Ed. Springer-Verlag，Berlin，Germany，包括补遗（通过Beilstein在线数据库也可得））。
[0065] 本领域技术人员将理解其它合成路径可用于合成本发明的化合物。虽然特定的起始材料和试剂描述在反应方案中并在下文中讨论，但是可容易地取代其它起始材料和试剂以提供多种衍生物和/或反应条件。另外，通过下文描述的方法制备的很多化合物可以根据本公开内容使用本领域技术人员熟知的常规方法进一步改进。
[0066] 本发明通过下列实施例阐明。应当理解特别的实施例、材料、量和工序将根据本文陈述的本发明的范围和精神宽泛地解释。
[0067] 实施例实施例1：制备式I的化合物
制备本发明的化合物的通用途径在图1中显示。
制备本发明的化合物的通用途径在图1中显示。
[0068] 在图1的步骤1中显示1-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙酮前体的合成。将4-溴苯乙酮（11.8 g，59 mmol）、三氯甲基苯基硼酸 (11.4 g，60 mmol)、醋酸钯(II)（250 mg，2 mol%），碳酸钾粉末（20.3 g，147 mmol），和四丁基溴化铵（20.1 g，62 mmol）的混合物用氩气冲洗，并用注射器引入水(500 mL)。将所得的悬浮液搅拌并加热至60°C持续两小时，然后冷却至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，在Na2SO4上干燥并在真空下浓缩至干燥以得到产物（淡黄色固体；15.6 g，定量的产率)。不经进一步纯化在步骤2中使用该产品。
[0069] 在步骤2中显示 (Z)-2-羟基-4-氧代-4-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)丁-2-烯酸乙基酯前体的合成。在氩气中向氢化钠（矿物油中60%；6.3 g，157 mmol）在100 mL无水四氢呋喃 (THF)中的悬浮液中加入草酸乙酯(14.4 g，99 mmol)。在室温 (RT)下搅拌10分钟后，将1-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙酮 (13.7 g，52 mmol)在50 mL四氢呋喃中的溶液逐滴地加入该溶液中。在室温下30分钟内混合物变得澄清并变成暗红色。然后将混合物真空浓缩并悬浮在水中，用盐酸(2N)中和，该混合物变成嫩黄色悬浮液。真空过滤该混合物以得到产物（黄色固体；18.5 g，定量的产率）。不经进一步纯化在步骤3中使用该产品。
[0070] 如步骤3中显示地进行1-(4-硝基苯基)-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙基酯(14)的合成。向(Z)-2-羟基-4-氧代-4-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)丁-2-烯酸乙基酯(10g，27mmol)在200 mL乙醇中的悬浮液加入4-硝基-苯基盐酸肼 (5g，33mmol)。在室温下搅拌16小时以后，该混合物变成具有褐色悬浮体的暗褐色溶液。真空浓缩溶液，并用乙醇重结晶以得到产物（褐色固体；8.2 g，
63%）。不经进一步纯化在步骤4中使用该产品。
63%）。不经进一步纯化在步骤4中使用该产品。
[0071] 如步骤4中显示地进行N-乙基-1-(4-硝基苯基)-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺 (15) 的合成。向化合物14 (218 mg，0.45 mmol)在5 mL乙醇中的悬浮液加入乙胺(甲醇中70%，5 mL)。将混合物溶液转移到密封的试管内，脱气并密封该瓶。将该瓶加热至120°C并搅拌16小时。反应混合物变成具有黄色悬浮体的黑色溶液。加热之后，真空下去除溶剂，并用乙醇重结晶以得到产物（黄色固体；153mg，70 %）。
[0072] 如图1的步骤5中所示进行1-(4-氨基苯基)-N-乙基-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(16) 的合成。向化合物15 (153 mg，0.32 mmol)在20 mL甲醇中的溶液加入在活性炭上的钯（Pd/C；15 mg），在70 psi 的H2下搅拌
12小时。然后将该溶液用Celite过滤垫过滤以去除催化剂，并在真空下浓缩至干燥。然后将粗产品用氯仿重结晶以得到产物（白色固体；130 mg，91 %）。
12小时。然后将该溶液用Celite过滤垫过滤以去除催化剂，并在真空下浓缩至干燥。然后将粗产品用氯仿重结晶以得到产物（白色固体；130 mg，91 %）。
[0073] 如步骤6中显示地进行N-甲基-3-(1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-基)丙酰胺(2)的合成。化合物20 (2 g，4.3 mmol)在20 mL 二甲苯中的悬浮液中加入二(2-氯乙基)胺盐酸盐(1053 mg，5.9 mmol)，而后将化合物加热至170°C。搅拌20小时后，该溶液变成褐色粘性混合物。使用真空去除溶剂，并将粗产物通过硅胶色谱法纯化，再用乙酸乙酯重结晶以得到产物（白色固体；1334 mg，58 %)。
[0074] 如步骤7和8中显示地进行1-(4-(3-氨基丙酰胺)苯基)-N-甲基-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺 (4) 的合成。向化合物16 (95 mg，0.21 mmol)在15 mL无水四氢呋喃中的溶液加入β-Ala-OH (111 mg，0.59 mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺（EDC，248 mg，1.6 mmol）。然后将混合物在室温下搅拌16小时，然后真空下浓缩至干燥。将残余物悬浮在水中，并用二氯甲烷萃取产物。在硫酸钠上干燥有机相，并真空下浓缩至干燥以得到化合物17（61 mg，47 %）。将化合物17 (61 mg，0.1 mmol)溶解在10 mL盐酸甲醇溶液(3N，41 mL)中，在室温下搅拌2小时，并真空下浓缩至干燥。将粗产物通过硅胶色谱法纯化以得到白色粉末状化合物4（(59 mg，定量的产率)。
[0075] 如步骤9中显示地进行(Z)-4-羟基-6-氧代-6-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)己-4-烯酸乙基酯前体的合成。在氩气中向1-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙酮 (17 g，64 mmol)在500mL二氯甲烷中的溶液加入预先制备的的4-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-4-氧代丁酸乙基酯(19.8 g，80 mmol)、溴化镁乙基醚合物 (22 g，85 mmol)。在室温下搅拌10分钟以后，在氩气下将N,N-二异丙基乙胺 (DIPEA，20 ml，115 mmol))逐滴加入溶液中。室温下搅拌16小时之后，用水洗涤(200 mL x 2)。在硫酸钠上干燥有机相，并真空下浓缩至干燥。然后将粗产物通过硅胶色谱法纯化，再用乙醇重结晶以得到产物（白色晶体；20.9 g，83 %）。
[0076] 使用上述的方法制备若干其它的化合物。需注意使用本领域技术人员已知的技1
术，Ar基团可轻易地与图1中所示的不同。这些其它化合物的名称和有关的 H NMR (质子核磁共振)和高分辨率质谱数据在下面提供。
术，Ar基团可轻易地与图1中所示的不同。这些其它化合物的名称和有关的 H NMR (质子核磁共振)和高分辨率质谱数据在下面提供。
[0077] N-乙 基 -1-(4-( 哌 嗪-1- 基 )苯 基 )-5-(4'-( 三 氟 甲 基 )-[1,1'- 联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺 (1)：理论质量, 520.2324；实际质量, 520.2312。
[0078] N-甲 基-3-(1-(4-(哌 嗪-1-基) 苯基 )-5-(4'-(三 氟甲 基)-[1,1'- 联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-基)丙酰胺 (2)：理论质量, 534.2481；实际质量, 534.2467。
[0079] N-乙 基-3-(1-(4-(哌 嗪-1-基) 苯基 )-5-(4'-(三 氟甲 基)-[1,1'- 联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-基)丙酰胺(3)；理论质量 548.2637；实际质量, 548.2623。
[0080] 1-(4-(3-氨基丙 酰胺)苯基)-N-甲 基-5-(4'-(三氟甲基 )-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(4)：
理论质量 508.1960；实际质量, 508.1953。
理论质量 508.1960；实际质量, 508.1953。
[0081] 1-(4-(3-氨基丙 酰胺)苯基)-N-乙 基-5-(4'-(三氟甲基 )-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(5)：
理论质量, 522.2117；实际质量, 522.2112。
理论质量, 522.2117；实际质量, 522.2112。
[0082] 1-(4-(3-氨基丙酰胺)苯基)-N-异丙基-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联1 +
苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(6)；(H-NMR数据未获得)；C29H28F3N5O2：HRMS (M+H)：理论质量, 536.2273；实际质量, 536.2269。
苯]-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(6)；(H-NMR数据未获得)；C29H28F3N5O2：HRMS (M+H)：理论质量, 536.2273；实际质量, 536.2269。
[0083] 3-氨基-N-(4-(3-(3-(甲基氨基)-3-氧丙基)-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-1-基)苯基)丙酰胺(7)：理论质量, 536.2273；实际质量, 536.2269。
[0084] 3-氨基-N-(4-(3-(3-(乙氨基)-3-氧代丙基)-5-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-1-基)苯基)丙酰胺(8)：理论质量, 550.2430；实际质量, 550.2429。
[0085] 3-氨 基-N-(4-(3-(3-( 异 丙 基 氨 基)-3- 氧 代 丙 基)-5-(4'-(三 氟 甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1H-吡唑-1-基)苯基)丙酰胺(9)：理论质量, 564.2586；实际质量, 564.2579。
[0086] 3-(5-(4'-氰基-[1,1'-联苯]-4-基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑-3-基)-N-甲基丙酰胺(10)：
N-甲基-3-(5-(4'-甲基-[1,1'-联苯]-4-基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡
唑-3-基)丙酰胺(11)：
3-(5-([1,1'-联苯]-4-基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑-3-基)-N-甲基
丙酰胺(12)：
N-甲基-3-(5-(菲-2-基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑-3-基)丙酰胺
(13)：
实施例2：化合物1－13的病理学
在PC-3人前列腺癌细胞中筛选化合物1－9的：（a）PDK2抑制活性的证据（即选择性地抑制PDK2位点[S473]相比PDK1位点[T308] 的Akt磷酸化的能力），和（b）分别通过Western印迹分析和MTT试验的抗增殖活性。如图2A中所示，筛选的化合物中的两个（2和
3）引起显著的有选择性的Akt-S473磷酸化抑制，显示了PDK2的抑制活性。另外化合物2和3在抗增殖活性方面也是9个化合物中最有效的。
N-甲基-3-(5-(4'-甲基-[1,1'-联苯]-4-基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡
唑-3-基)丙酰胺(11)：
3-(5-([1,1'-联苯]-4-基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑-3-基)-N-甲基
丙酰胺(12)：
N-甲基-3-(5-(菲-2-基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑-3-基)丙酰胺
(13)：
实施例2：化合物1－13的病理学
在PC-3人前列腺癌细胞中筛选化合物1－9的：（a）PDK2抑制活性的证据（即选择性地抑制PDK2位点[S473]相比PDK1位点[T308] 的Akt磷酸化的能力），和（b）分别通过Western印迹分析和MTT试验的抗增殖活性。如图2A中所示，筛选的化合物中的两个（2和
3）引起显著的有选择性的Akt-S473磷酸化抑制，显示了PDK2的抑制活性。另外化合物2和3在抗增殖活性方面也是9个化合物中最有效的。
[0087] 因为结构相关的化合物2和3只在N-烷基部份不同，即甲基相对乙基，选择化合物2用于更透彻的评价 。化合物2对细胞成活力上的剂量和时间依赖效果在两个前列腺癌（PC-3, LNCaP）和五个乳腺癌（MDA-MB-468，MDA-MB-231，CAL51，MCF-7，SKBR3）细胞系组中测定（图3A和B）。另外，也用非恶性前列腺和乳腺的上皮细胞（图3A的下组；3B右下组）平行地评价癌细胞系。重要地，相对于癌细胞的非恶性对应物，化合物2表现出对癌细胞的选择性细胞毒性。
[0088] 数据显示化合物2是整链蛋白偶联性激酶的推定的抑制剂。Akt的完全活化需要在两个氨基酸残基上磷酸化：由磷酸肌醇依赖的蛋白激酶-1（PDK1）磷酸化的T302，和已知为PDK2位点并可由许多不同的激酶磷酸化的S473。这些中的一个，整链蛋白偶联性激酶 （ILK），被确认为有前景的抗癌靶，因为其表达和活性在多种类型的癌症中增加并且其抑制可通过诱发凋亡和细胞周期停滞抑制癌细胞存活。
[0089] 基于显示相对于磷酸-Akt-T308的那些磷酸-Akt-S473水平有选择性地减少的western印迹数据（图2A），化合物2被确定为PDK2活性抑制剂。为了评价化合物2抑制ILK信号传导的能力，在PC-3和MDA-MB-468细胞中通过western印迹评估其对ILK的下游靶的影响（图4）。除了引起显著的和有选择性的磷酸-S473-Akt水平降低，化合物2也减少另一ILK底物GSK3β的磷酸化，说明化合物2是ILK抑制剂。
[0090] 在另一系列的测试中，通过PC-3人前列腺癌细胞中的MTT试验，与化合物2平行地筛选化合物10–13的抗增殖活性。如图5A中所示，化合物11和13显示出IC50值在2–3µM范围的最高的效力，虽然都未超过化合物2。由western印迹评价化合物13相对于化合物2，对PC-3细胞中ILK的下游靶的磷酸化状态的影响。相对于磷酸-Akt-T308化合物13引起磷酸-Akt-S473剧烈减少，但不像化合物2，它没有显示出针对GSK3磷酸化的大的抑制活性（图5B）。
[0091] 评价之前在前列腺癌细胞系中筛选（图2）的化合物4–9在MCF-7和SKBR3人乳腺癌细胞中的抗增殖活性。虽然化合物5是在测试的那些中在任一细胞系中显示活性的唯一化合物 (IC50值在4 – 5µM的范围)（图6），但在这些相同的细胞系中它不如化合物2有效（图3B）。
[0092] 也评价了化合物2在PC-3 前列腺肿瘤异种移植物模型中的体内肿瘤抑制活性。基于上述结果，化合物2被确定为作为新型ILK/PDK2抑制剂用于开发的榜样药剂。为了评价化合物2的体内抗肿瘤活性，用25或50 mg/kg的化合物2或用赋形剂（在无菌水中的
0.5%甲基纤维素和0.1%吐温80)每天一次口服治疗具有建立的皮下PC-3肿瘤异种移植
3
物(平均初始肿瘤体积，157.1±29.1 mm)的无胸腺裸鼠35天（n =5只小鼠）。如图7中所示，在35天的治疗中，相对于赋形剂治疗对照，用25mg/kg和50mg/kg的化合物2对小鼠的每日治疗分别抑制了肿瘤生长42%（P=0.10）和56%（P=0.03）的PC-3。口服施用后化合物2的体内功效显示了其口服的生物利用度。另外，该化合物也被小鼠良好地耐受，在研究过程中其没有显示明显的毒性迹象，也没有显著体重变化。
0.5%甲基纤维素和0.1%吐温80)每天一次口服治疗具有建立的皮下PC-3肿瘤异种移植
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物(平均初始肿瘤体积，157.1±29.1 mm)的无胸腺裸鼠35天（n =5只小鼠）。如图7中所示，在35天的治疗中，相对于赋形剂治疗对照，用25mg/kg和50mg/kg的化合物2对小鼠的每日治疗分别抑制了肿瘤生长42%（P=0.10）和56%（P=0.03）的PC-3。口服施用后化合物2的体内功效显示了其口服的生物利用度。另外，该化合物也被小鼠良好地耐受，在研究过程中其没有显示明显的毒性迹象，也没有显著体重变化。
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