技术领域

本发明涉及杀灭微生物的杀生物剂。

                        背景技术

曾多次试图研制能够有效消灭对人类健康有害的微生物的杀生物 剂组合物。通常，研制工作受一种或多种不利因素的影响，因为所研 制出的溶液对人类或其他非预定目标生命体的毒性太大，或者因为溶 液不够稳定，不能进行有效储藏和在实际环境中应用。另外，许多杀 生物组合物对于杀灭某些微生物(例如，炭疽杆菌(Bacillus anthracis))的孢子形式是无效的。

因此，仍然需要特别有效的杀灭微生物的杀生物剂组合物，无论 是营养体型或孢子型，足够稳定，便于储藏、运输和在一般的环境下 使用，而没有明显的杀生物效果的丧失(即，微生物杀伤率＞10％的降 低)。

                          发明概述

本发明能够以独特和非常容易的方式来满足该需要和其他需要。 在本发明的一个技术方案中，提供了由包含过氧化物和次氯酸盐的成 分形成的杀生物剂组合物，其中，杀生物剂组合物通过将过氧化物成 分加入到次氯酸盐成分中形成，使次氯酸盐与过氧化物的重量比不低 于约10∶1。

在本发明的另一实施方案中，提供了制备杀生物剂组合物的方 法。该方法包括向容器中加入一定量的次氯酸盐，然后向加入的次氯 酸盐中加入一定量的过氧化物，加入的次氯酸盐与加入到其中的过氧 化物的重量比不低于约10∶1。

在本发明的另一实施方案中，提供了一种方法，该方法包括用杀 生物有效量的本发明的杀生物剂组合物接触微生物。

根据下面的附图、本发明的详细描述和附加的权利要求，本发明 的上述和其他实施方案将会马上变得明显。

                        附图概述

图1是描述本发明杀生物剂组合物的谱型图。利用UV可见扫描得 到该谱型。

图2是描述本发明的杀生物剂组合物在蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)孢子存在下的谱型图，显示有单态氧的释放。谱型是利用荧 光探针得到的。低线代表本发明以10∶1重量比的杀生物剂加探针溶 液，高线是杀生物剂、探针和细菌孢子的组合。

图3是描述根据本发明制备的过氧化氢和次氯酸钠漂白 (2500∶25000ppm)的混合物和单独的过氧化氢在所示时间间隔得到的 UV读数图。

图4是描述根据本发明制备的过氧化氢和次氯酸钠漂白 (2500∶25000ppm)的混合物和单独的次氯酸钠漂白在所示时间间隔得 到的UV读数图。

图5是描述在所示时间间隔内，对于对照溶液、过氧化氢、次氯 酸钠，以及根据本发明的后两种成分的组合，每6.45平方厘米(英寸) 所出现的菌落形成单位(cfu)的图。

                优选实施方案的详细描述

现在，可以理解，在至少一个实施方案中，本发明提供了快速杀 灭营养体型或孢子型的多种细菌的双组分触杀性杀生物剂。本发明的 杀生物剂组合物对其他类型的微生物(例如病毒和真菌)同样有效。 浸渍和喷雾方式都是有效的，喷雾或以泡沫的形式使用时效果发挥更 佳。该组合物没有腐蚀性，并且不受pH的限制(即，可在任一pH的 制剂中使用)。该组合物在环境压力下至少4-100℃也是有效的。对有 生物膜的微生物也有效果。

本发明的双组分触杀性杀生物剂(杀孢子剂或杀菌剂)是过氧化 氢和次氯酸盐的混合物，利用特殊的加入次序和在所需比例内利用相 对的量来制备。先前认为上述两组分混合会导致过氧化氢的破坏。但 是，根据本发明，发现在没有有机化合物的存在下，该破坏是缓慢的， 在本发明的某些实施方案中，本发明杀生物络合物的杀生物活性在至 少6天内是有效的。一般地，本发明杀生物络合物的损坏在有机物质 (包括微生物)的存在下是迅速的。在开始混合化合物时，一般立即 产生氧气。

本发明的杀生物剂组合物通过向次氯酸盐中加入过氧化物而形 成。发现当以任何其他的次序(例如向过氧化物中加入次氯酸盐)混 合上述组分时，得不到稳定的组合物。加入到次氯酸盐中的过氧化物 的量也是重要的。加入到次氯酸盐中的过氧化物的量优选足以得到次 氯酸盐∶过氧化物的重量比不低于约10∶1，比例也可以高达50∶1， 100∶1或更高，但不是优选的。更优选地，次氯酸盐与过氧化物的重量 比约10∶1。所形成的组合物特别稳定，杀生物特别有效。

用于本发明实践中的过氧化物是那些与次氯酸盐形成稳定的杀生 物组合物的过氧化物。适合的过氧化物的实例可包括过氧化氢、碱金 属和碱土金属过氧化物以及其他的金属过氧化物。具体的非限定性的 实例包括过氧化钡、过氧化锂、过氧化镁、过氧化镍、过氧化锌、过 氧化钾、过氧化钠，优选过氧化氢和过氧化钠，特别优选过氧化氢。

用于本发明实践中的次氯酸盐是那些与过氧化物形成稳定的杀生 物剂组合物的次氯酸盐。适合的次氯酸盐的实例可包括碱金属次氯酸 盐，例如次氯酸钠、次氯酸钙、次氯酸锂，优选次氯酸钠。

根据需要，本发明的杀生物剂组合物可与其他非有机组分或材料 混合使用或另外使用。与有机材料的接触在使用前应当避免，以避免 破坏组合物。在典型的使用条件下，杀生物剂组合物的组分可与含水 液体一起形成液体杀生物剂组合物。各种含水组分溶液的浓度可进行 调整，只要在最后的组合物中观察到所需的重量比。

过氧化物和次氯酸盐组分合并形成本发明杀生物剂的条件可进行 变化，但一般是在环境温度和压力下。多种加入的方法(即间歇式、 半连续、连续)都是可以的，包括共同加入，但是以指定的特殊次序 的间歇式方法是优选的，以确保稳定组合物的形成。

不受理论的限制，可以相信，氧气的来源是过氧化物的和/或次氯 酸盐向次氯酸转化的。图1表示利用次氯酸钠和过氧化氢根据本发明 制备的10∶1重量比混合物的光谱扫描，显示有半稳定中间体的形成， 一段时间后消失。本发明杀生物络合物所采取的形式是不确定的，可 以是过氧化物和次氯酸盐的半稳定的络合物，被有机材料破坏。本发 明混合物的杀孢子活性最有可能是氧化和还原机制的联合效果。次氯 酸是已知的杀生物剂。在本发明的实践中，过氧化物形成游离基团， 也是非常强的抗菌化合物。参见，例如图2，证实了单态氧的释放。图 2描述了对照样品与指定的细菌孢子的溶液和本发明的杀生物剂的样 品进行比较，该杀生物剂具有该段先前所描述的特征，为10∶1重量比 的杀生物剂。由下文中可看出，部分抑菌浓度(FIC)值显示了在任何 表面的所有生物的协同效果。最有可能的是通过有机材料将本发明的 半稳定杀生物络合物破坏所产生的联合鸡尾酒(cocktail)的增效作 用。

本发明杀生物剂络合物的效果与单独组分和其他已知杀生物剂组 合物的效果比较如下文所示。在同一浓度基础上，效果优于先前已知 的杀生物剂。例如，目前推荐的用于炭疽杆菌孢子消毒的是15％的漂 白剂1小时，或使用戊二醛或甲醛。关于毒性，开始由于组分的混合 产生的大量气体是氧气。可能产生微量的氯气，但是由于蒸气压和氯 气在水中的溶解性，不可能是一个问题。

实验

在下面的实验部分中，应该注明，除非另有说明，所使用的过氧 化物组分是过氧化氢的水溶液(30％重量/体积)，所使用的次氯酸盐 是次氯酸钠的水溶液(5％重量/体积)。当所使用的过氧化物被指定 为过氧化钠时，过氧化钠是30％重量/体积的水溶液。

研究1

生物和营养

孢子和产孢菌类：获自路易斯安那州立大学(Baton Rouge，LA) 生物科学系的枯草杆菌、短小芽孢杆菌RJ 0055和蜡状芽孢杆菌。获 自兽医LSU学校的炭疽杆菌的疫苗菌株。芽孢杆菌的营养细胞通过接 种于胰胨豆胨培养液(TSB)(Difco，Detroit，MI)的25ml烧瓶中 用2ml的过夜TSB悬浮液来制备。所有的烧瓶都在37℃培养24小时。 孢子悬浮液的制备通过在含有酵母膏和浓缩牛肉汁的琼脂平板上培育 芽孢杆菌来完成。收集孢子，洗涤三次，重新悬浮在灭菌的蒸馏水中。 洗涤的悬浮液在75-80℃加热20分钟消灭营养细胞。使用前孢子以浓 悬浮液的形式在蒸馏水中4℃储藏3天以便自溶。孢子在4℃保存直到 使用。通过Shaeffer-Fulton方法来完成孢子检测。参见Schaefler， A.B.and M.Fulton，A simplified method of staining endospores， Science 77：194(1933)。

营养细胞：获得野生型的单核细胞增生杆菌(Listeria monocytogenes)，在TSB上35℃培养24小时。肠膜明串珠菌 (Leuconostoc mesenieroides)B512F在乳杆菌MRS培养液(Difco， Sparks，MD)中培养，在30℃生长24小时。所有其他所使用的微生 物得自Dr.D.F.Day的收集培养。

最小抑菌浓度

为了确定每一种杀生物剂或组合的最小抑菌浓度(MIC)，每种杀 生物剂组分的稀释液用芽孢杆菌(孢子和营养细胞)和单核细胞增生 杆菌的TSB，肠膜明串珠菌的MRS培养液以及鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)ATCC14028、大肠杆菌(Escherichia coli)BATCC23226和嗜麦芽黄单孢菌(Xanthomonas maltophilia) #948的NBY来制备。每只试管用0.1ml细胞或孢子悬浮液(相应地) 来接种得到最后浓度大约为106营养细胞或孢子/毫升杀生物剂溶液。 培养物在适当的温度培养24小时，芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028为37℃，肠膜明串珠菌B512F为30℃，大肠杆菌、嗜麦芽 黄单孢菌#948和单核细胞增生杆菌为35℃。杀生物剂(只对于孢子) 的中和通过将0.5ml的每种杀生物剂或组合转移到5ml的D/E中和培 养液(Difco，Sparks，MD)中来完成。该悬浮液涡流混合1分钟。大 约0.1ml的每种悬浮液转移到5ml的TSB中并在上文所述的温度培养 24小时。MIC确定为防止浑浊所需的杀生物剂的最小浓度。对于所有 的实验，细胞或孢子悬浮液的存活计数在杀生物剂处理前进行测定。

部分抑菌浓度

部分抑菌浓度(FIC)基于Berenbaum的方法进行计算。参见下面 的公式：

                    Ac/Ae+Bc/Be

其中，Ac和Bc代表组合中使用的杀生物剂组分；Ae和Be代表单独使用 的杀生物剂组分，其中A代表杀生物剂中一种组分的有效浓度(MIC)， B代表杀生物剂中另一组分的有效浓度(MIC)。当上述分数的和是1 时，该组合是相加的；当和＜1时，该组合是增效的；当和＞1时，该组 合是拮抗的。测定杀生物剂组分组合的MIC值，根据上文所述计算 FIC。

杀生物剂时不锈钢上的孢子的抗菌活性

不锈钢试样(coupon)的制备：不锈钢试样(1cm×1cm)用1N NaOH 洗涤，除去任何的表面残留物，然后使用前在121℃高压灭菌15分钟。 枯草杆菌、短小芽孢杆菌RJ0055、或蜡状芽孢杆菌(107孢子/ml)的 孢子悬浮液(1ml)放置于试样上，然后在55℃培育箱中干燥过夜。对 照不锈钢试样粘有大约1×105个孢子/cm2。

暴露的时间效果：每种试样用本发明的杀生物络合物喷雾两次 (2.4ml)，并在4℃、23℃、和37℃暴露在其中30秒，1分钟和5 分钟。试样在含有5ml的0.1％蛋白胨溶液(pH7.2)和0.5g的3mm 灭菌玻璃丸(Fisher，Fair Lawn，NJ)的试管中涡流混合1分钟。 进行连续的稀释，加到胰胨豆胨琼脂(TSA)平板(Difco，Detroit， MI)上，在37℃培养24小时。对照试样用等量的水喷雾两次。

本发明杀生物络合物的稳定性

本发明的杀生物剂络合物(pH10和6.5)的稳定性通过含有粘附 枯草杆菌孢子的不锈钢试样在4℃、24℃和37℃测试1周。不锈钢试 样如前文所述进行制备。

工业实用性

本发明的杀生物络合物，以喷雾的形式，在路易斯安那的糖磨坊 中，通过甘蔗洗涤桌的重度污染的梁来测验。选择表面的区域进行喷 雾，然后擦洗6.45平方厘米(1英寸)的面积，平板上进行微生物计 数。

杀生物络合物的制备

制备三种浓度的本发明杀生物剂络合物，5X、20X和50X，其中X 是35ppm重量/体积的过氧化氢：350ppm重量/体积的次氯酸钠，并现 场测验。

细菌种群降低：洗涤桌后面的20.32cm×101.6cm(8英寸×40 英寸)区域(被生物膜覆盖)用作试验区域。该区域被分为4个部分 (对照，5X、20X和50X)，每个部分大约20.32cm×15.24cm(8英 寸×6英寸)。不锈钢罩20.32cm×78.74cm×15.24cm(8英寸×31 英寸×6英寸)用来保护该区域防止滴水。每个区域在加入杀生物剂 (30秒、15分钟和30分钟)前后用棉花药签(tip)擦洗。本发明的 杀生物剂络合物由表面积30.48厘米(12英寸)处喷雾两次(大约 5.4ml)(Hudson sprayer Model 60136，Hasting，MN)。在对照 区域，用蒸馏水代替杀生物剂。棉花药签放入含有5ml磷酸缓冲液的 试管中，并在冰箱中保存。样品在同一天放于计数琼脂平板(PCA)上 增殖，在30℃培养24-48小时。每种杀生物剂组分与对照相同。

杀生物络合物的稳定性

混合后，本发明的杀生物络合物直到6天是有活性的。光谱扫描 显示，在约300nm的宽吸收峰处缓慢地降低，形成增长槽(利用次氯 酸盐作基本扫描-图4)或降低峰(当以过氧化物为基础时-图3)，可 以相信，它表示的是本发明的杀生物络合物。该波长的变化与杀生物 活性的消失有关。

测定MIC和FIC

计算本发明杀生物剂络合物的每一种食品级杀生物剂组分对营养 细胞的MIC和FIC。上述计算结果概括在下文的表1和2中。

                                          表1   生物                     MIC(wt％)   FIC   H2O2   NaHClO3   H2O2/NaHClO3   炭疽杆菌   0.01   0.05   0.0025/0.025   0.75   蜡状芽孢杆菌   0.025   0.1   0.0015/0.01   0.7   枯草杆菌   0.025   0.1   0.005/0.06   0.8   短小芽孢杆菌RJ 0055   0.025   0.1   0.0015/0.01   0.7   肠膜明串珠菌B 512F   0.006   0.035   0.0002/0.018   0.85   大肠杆菌ATCC 23226   0.01   0.02   0.005/0.005   0.75   鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028   0.01   0.02   0.005/0.005   0.75   单核细胞增生杆菌   0.005   0.05   0.001/0.025   0.7   嗜麦芽黄单孢菌948   0.005   0.01   0.0035/0.001   0.85

由表1看出，本发明的杀生物剂络合物对所有的供试细菌表现出 了增效效果。尽管某些具体种类，当加入少量过氧化物时，达到MIC 所需的次氯酸盐的量平均减少了四倍。

                                   表2   生物                 MIC(wt％)   FIC   H2O2   HClO3   H2O2/NaHClO3   炭疽杆菌   1.0   1.0   0.5/0.25   0.75   蜡状芽孢杆菌   5.0   4.0   0.25/2.5   0.68   枯草杆菌   5.0   4.0   0.25/2.5   0.68   短小芽孢杆菌RJ 0055   4.0   3.5   0.25/2.5   0.85

由表2看出，本发明的杀生物剂络合物对所有的供试孢子表现出 了增效效果。当加入少量过氧化物时，达到MIC所需的次氯酸盐的量 平均减少了2倍。

杀伤率测量

表3显示了用本发明的杀生物络合物在三个不同的温度处理0 秒、30秒、1和5分钟前后不锈钢试样上的芽孢杆菌孢子数目的对数。 对孢子的杀伤率低于30秒。次氯酸盐对孢子的杀伤率最好的记载需要 15分钟至1小时的接触时间。在供试的温度范围(4-37℃)内杀伤率 没有差异。

                            表3                   孢子数/cm2   4℃   对照(log)   30秒   1分钟   5分钟   短小芽孢杆菌   RJ 0055   5.31   0   0   0   枯草杆菌   5.93   0   0   0   蜡状芽孢杆菌   4.81   0   0   0   23℃   短小芽孢杆菌   RJ 0055   5.67   0   0   0   枯草杆菌   6.07   0   0   0   蜡状芽孢杆菌   5   0   0   0   37℃   短小芽孢杆菌   RJ 0055   5.53   0   0   0   枯草杆菌   6.08   0   0   0   蜡状芽孢杆菌   4.93   0   0   0

表4给出了利用2500ppm重量/体积的过氧化氢：25000ppm重量/ 体积次氯酸钠(即，1∶10过氧化物与次氯酸盐的重量比)的不锈钢试 样上的炭疽杆菌孢子的存活数。

            表4   时间(分钟)   Log#孢子/cm3   0   4.35   1   3.0   3   0   15   0

本发明的杀生物剂络合物也在工业场所中对路易斯安那糖磨坊的 甘蔗洗涤设备中发现的肠膜明串珠菌的厚生物膜进行测量。通过喷雾 器，分散已知剂量的杀生物剂。结果概括在表5中。

                           表5                菌落形成单位/cm2   时间(分钟)   对照   A   B   A/B   0   8.4   6.7   7   7.3   0.3   8.2   6.9   4.6   2.8   15   8.2   6.8   4.5   1   30   8.3   6.7   4.5   1

在上表中，A＝过氧化氢；B＝次氯酸钠；A/B＝次氯酸盐与过氧化 物以10∶1的重量比组合。对照是喷水的区域。上述结果可在图5中由 图解看出。效果是非常迅速的，不到20分钟完全杀死。具有一定量的 残留活性，使生物膜在适合膜形成的条件下几小时内不会重组。

加入顺序

下表6显示出加入顺序对所形成络合物的半衰期的明显效果。半 衰期通过在碱性pH和24℃保存的样品的光谱来确定。为了进行比较， 对每种杀生物剂组分分别测定半衰期。

                  表6   第一   第二   半衰期(天)   过氧化氢   -   262   次氯酸钠   -   221   次氯酸钠   过氧化氢   809   过氧化氢   次氯酸钠   148

研究2

本研究评价杀生物剂对六种类型材料特征的文职办公室环境的性 能。试验表面统一被枯草杆菌孢子所污染，在室温干燥过夜。在用杀 生物剂处理前0分钟和用杀生物剂处理后5分钟和10分钟(当需要时) 对试验表面进行取样。

试验中使用的材料

*工业地毯，紧密编织的

*木材地板砖

*陈旧的混凝土块

*粗糙表面砖

*光滑表面砖

*消音天花板砖

污染方法

在内部空气循环系统的微生物学安全通风橱中进行枯草杆菌的污 染。用细喷嘴将枯草杆菌在约14英寸的距离直接垂直地喷到垂直悬挂 的试验面板(panel test)的表面上。每种试验材料用108孢子/ml 进行三次喷雾，最后淀积浓度约106个菌落形成单位(CFU)/取样面 积(1平方英寸)。

预去污染取样

污染的试验材料在室温干燥过夜约17小时。每种污染的材料在0 时间时于两个不同的位置取样。灭菌的棉花药签涂抹器在1.25英寸× 1.25英寸的面积内前后滚动，放入含有5ml D/E中和培养液(Difco， Sparks，MD)的试管中。含有药签样品的试管立即进行孢子存活分析。

去污染

在室温干燥约17小时后的试验材料用杀生物剂和每种杀生物剂组 分于微生物学安全通风橱内在约14英寸的距离处喷雾四次。暴露在每 种处理下5分钟或10分钟(当需要时)后，用棉花药签涂抹器擦洗1.25 英寸×1.25英寸的面积，药签被放入5ml的D/E中和培养液中。含有 药签样品的试管立即进行孢子存活分析。本发明的杀生物剂作为潜在 的消毒剂的效果将在下文中提供。

微生物学测定法

通过计数琼脂平板(PCA)测定枯草杆菌的浓度(去污染前后)。 孢子悬浮液连续地用pH为7的Butterfield/Es磷酸缓冲液稀释至 100-106。每种样品的适合的稀释液的等分试样重复三次。所有的平板 在37℃培养24-48小时。

工业表面材料上的芽孢杆菌孢子的去污染技术比较

由Harper和Larsen(2001)提供的对芽孢杆菌的多种消毒技术 的数据用于证明本发明的杀生物剂作为潜在的杀孢子剂/去污剂的效 果。结果概括在表7、8、9和10中。上述表中所使用的“本发明”是 根据本发明利用次氯酸钠和过氧化氢以重量比10∶1形成的杀生物剂。

                        表7

        混凝土块上的芽孢杆菌孢子的去污技术比较   技术*   杀死   时间   (分钟)   去污前的   平均污染率   (cfu/in2)   去污后   存活的孢子   (cfu/in2)   University of Michigan   Nanotek   90   9.15×107   7.1×101   Foam(Sandia National   Laboratory)   N/A   7.4×107   9.25×102   L-Gel(Lawrence   Livermore Laboratory)   30   3.8×107   6.67×103   活性次氯酸盐   (Naval Laboratory)   N/A   5.4×106   3.7×104   反应性纳米颗粒   (Nantek，Inc.)   N/A   2.31×107   7.23×105   GD-5去污剂   (O.W.Rittersbach)   N/A   1.06×102   1.22×106   Ozone-UV(Diligen II)   N/A   1.71×107   7.58×106   本发明   5   1.47×106   1.92

*除了本发明，所有的数据都取自SBCCOM Report(Harper and Larsen，2001)

NA：数据不可用。

                            表8

        对消音天花板砖上的芽孢杆菌孢于的去污技术比较 技术*   杀死   时间   (分钟)   去污前的   平均污染率   (cfu/in2)   去污后   存活的孢子   (cfu/in2) University of Michigan Nanotek   90   3.6×107   1.06×102 Foam(Sandia National Laboratory)   N/A   3.4×107   6.8×103 L-Gel(Lawrence Livermore Laboratory)   30   2.65×107   9×103 活性次氯酸盐 (Naval Laboratory)   N/A   2.5×107   3.95×104 反应性纳米颗粒 (Nantek，Inc.)   N/A   4.25×107   1.63×107 GD-5去污剂 (O.W.Rittersbach)   N/A   2.19×107   2.75×105 Ozone-UV(Diligen II)   N/A   4.5×107   1.63×107 本发明   5   7.4×105   1×101

*除了本发明，所有的数据都取自SBCCOM Report(Harper and Larsen，2001。)

NA：数据不可用。

                            表9

        对紧密编织的地毯上的芽孢杆菌孢子的去污技术比较   技术*   杀死   时间   (分钟)   去污前的   平均污染率   (cfu/in2)   去污后   存活的孢子   (cfu/in2)   University of Michigan   Nanotek   90   6.85×107   2.26×104   Foam(Sandia National   Laboratory)   N/A   5.72×107   1.49×103   L-Gel(Lawrence   Livermore Laboratory)   30   6×107   1.42×103   活性次氯酸盐   (Naval Laboratory)   N/A   5.1×107   3.45×103   反应性纳米颗粒   (Nantek，Inc.)   N/A   4×107   4.22×106   GD-5去污剂   (O.W.Rittersbach)   N/A   3.5×107   4.48×106   Ozone-UV(Diligen II)   N/A   5.45×107   3.55×107   本发明   10   1.17×106   0

*除了本发明，所有的数据都取自SBCCOM Report(Harper and Larsen，2001。)

NA：数据不可用。

                            表10

            对钢铁表面上的芽孢杆菌孢子去污的技术比较   技术*   杀死   时间   (分钟)   处理前孢子计数   cfu/cm2   处理后孢子计数   cfu/cm2   Ozone-UV(Diligen)   -   7.6×106   3.53×106   反应性纳米颗粒   (Nanotek)   -   9.3×106   2.1×107   L-Gel(Lawrence-   Livermore)   30   6.67×106   4.5×102   U Michigan Nanotek   90   1.3×107   0   Sandia Foam   -   7.2×106   0   活性次氯酸盐   -   3.7×106   1.56×102   GD-5去污剂   -   1.9×107   2.1×105   本发明   3   1×106   0

*除了本发明，所有的数据都取自SBCCOM Report“A Comparison of Decontamination Technologies for Biological Agents on Selected Commercial Surface Materials”Dr.B.Harper and Dr. L.Larsen，Dugway Proving Ground，April 2001。

研究3

对铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa)的杀生物剂增效效果 生物和营养

铜绿假单孢菌ATCC 1942获自American Type Culture Collection(ATCC，Manassas，VA)，在35℃通过营养肉汤(Difco， Detroit，MI)生长过夜至约108CFU/ml。在营养琼脂平板上继续培养 并在4℃贮藏。

贮备液的制备

制备新鲜的过氧化氢(2.5％和0.5％)(Sigma-Aldrich，St. Louis，MO)、次氯酸钠(5％和0.5％)(Sigma-Aldrich，Allentown， PA)和过氧化钠(0.5％)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)溶液， 然后每个实验用灭菌的蒸馏水稀释浓的贮备液。

确定最小抑菌浓度：每种杀生物剂或组合的最小抑菌浓度(MIC) 通过如下方法来获得，在15ml试管中混合每种杀生物组分或组合，逐 渐地加入营养肉汤至所需的杀生物剂浓度，最后体积为10ml。每只试 管然后用0.1ml等分试样的过夜铜绿假单孢菌ATCC 1942培养物接 种，最后浓度为约106CFU/ml。培养物在35℃培养24小时。24小时 后没有生长的杀生物剂的最低浓度视为MIC(Lorian，1991)。

确定部分抑菌浓度：部分抑菌浓度(FIC)根据Berenbaum方法所 述而获得的MIC值来计算。参见下文的公式

                Ac/Ae+Bc/Be

其中，Ac和Bc代表组合中使用的杀生物剂组分；Ae和Be代表单独使用 的杀生物剂组分，其中A代表杀生物剂中一种组分的有效浓度(MIC)， B代表杀生物剂中另一组分的有效浓度(MIC)。当上述分数的和是1 时，该组合是相加的；当和＜1时，该组合时增效的；当和＞1时，该组 合时拮抗的(Berenbaum，1978)。

结果：表11和12提供了上文所述根据本发明制备的杀生物剂组 合对铜绿假单孢菌ATCC 1942的MIC和FIC。

                  表11

     对铜绿假单孢菌ATCC 1942的MIC值   过氧化氢   (重量ppm)   过氧化钠   (重量ppm)   次氯酸钠   (重量ppm)   150   150   500

                表12

  对铜绿假单孢菌ATCC 1942的FIC值   杀生物剂组合(重量ppm)   FIC   过氧化氢∶次氯酸钠   25∶300   0.77   过氧化钠∶次氯酸钠   50∶250   0.83

根据本研究获得的数据，过氧化氢∶次氯酸钠和过氧化钠∶次氯酸 钠对铜绿假单孢菌ATCC 1942都存在增效效果。

如前文描述和实验研究所示，本发明提供了杀生物剂的制备和用 途，该杀生物剂具有极大的杀生物效果，同时提供了能够储存、使用 和/或运输的稳定组合物，并且在合理的时间内效果没有明显的降低。

应当注意，在该文件中任何地方用化学名或通式提到的化合物， 不管是单数的还是复数的，被认为在与化学名或化学型(例如，另一 种组分，或溶剂)提到的另一种物质接触前已经存在。即便是在所得 的混合物或溶液中发生化学变化也无关紧要，上述变化是在依照本说 明书所述的条件下将指定的物质放在一起的自然结果。将上述物质放 在一起结果发生转化对化学家通常是已知的，不需要进一步描述。

另外，即使权利要求可能涉及现在时(例如“包括”、“是”) 的物质，但是根据本说明书，该物质在与一种或多种其他物质开始接 触、加入、混和/混合前已经存在。

除非有其他另外的描述，在本文中如果使用了冠词“a”或“an”， 不是想限制说明书或权利要求中冠词所指的单个要素，而且也不应当 限制。相反，在本文中如果使用了冠词“a”或“an”是想覆盖一个或 多个上述要素，除非正文中有其他描述。

本发明在附加权利要求的本质和范围内可进行较大的改变。