技术领域
[0001] 本
发明属于
食品加工技术领域，具体涉及一种鹧鸪菜多糖的超声提取方法及应用。
背景技术
[0002] 鹧鸪菜Caloglossa leprieurii属红藻
门仙菜目红叶藻科，具有驱虫杀虫、健脾化痰、消积、安神等功效，能
治疗小儿因虫积或食积而至的腹胀腹痛、消化不良，是一种药食二用的海藻。国内外对鹧鸪菜化学成分的报道较少，主要分离出海人
草酸、甾醇、溴代倍半萜烯、糖苷铵、甘露醇等活性成分。
[0003] 多糖具有调节
机体免疫
力、抗
氧化、抗
肿瘤、降血糖、降血脂等作用，尤其是海藻
硫酸酯多糖具有良好的抗病毒、清除自由基、抗蛋白非糖基化等功效，在保健品、
食品添加剂、药品等领域具有广泛的潜在应用价值。目前，未见有关海藻鹧鸪菜多糖的提取报道。
[0004] 研究鹧鸪菜化学成分，一般需要首先用醇浸泡鹧鸪菜，然后对醇溶液进一步处理，而鹧鸪菜残渣虽含有丰富多糖，但常被作为废物丢弃。为了综合开发利用鹧鸪菜资源，提高资该源利用率，以醇浸后鹧鸪菜为原料，开发鹧鸪菜多糖提取技术具有重要意义。
发明内容
[0005] 本发明的目的是提供一种操作便捷、原料利用率高的鹧鸪菜多糖的超声辅助提取方法，且所得鹧鸪菜多糖具有良好的抗氧化性能。该发明提取工艺适用于醇浸后鹧鸪菜，也适用于未经过醇浸的鹧鸪菜。具体技术方案如下：
[0006] 一种鹧鸪菜多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0007] 1)捣碎：用组织捣碎机将预处理过的鹧鸪菜捣碎；
[0008] 2)提取：在1)捣碎鹧鸪菜中加入蒸馏
水，固液比为1g:20-60mL，超声功率为100-500w，在20-70℃条件下，超声提取2-48min，提取1-3次；
[0009] 3)离心浓缩：离心分离2)所得混合物，将上清液用
旋转蒸发仪在50-60℃时浓缩，直至浓缩液体积为浓缩前体积的1/6-1/5；
[0010] 4)脱蛋白：在3)浓缩液中加入sevag
试剂，萃取分离出上清液；
[0011] 5)
透析：将4)上清液用透析袋透析；
[0012] 6)浓缩：将5)透析后溶液用
旋转蒸发仪在50-60℃时浓缩，直至浓缩液体积为浓缩前体积的1/15-1/10；
[0013] 7)醇沉：于搅拌条件下，向6)浓缩液中加入浓缩液体积4-5倍的
乙醇，降温至0-4℃，静置10-15小时；
[0014] 8)离心：将7)醇沉静置后的混合物离心，收集沉淀物；
[0015] 9)润洗干燥：依次用无水乙醇、丙
酮、乙醚洗涤8)沉淀物，于50-60℃烘干即得到鹧鸪菜多糖；
[0016] 优选地，步骤1)中鹧鸪菜预处理方法是先将干燥的鹧鸪菜切分成1-2cm,按照1g鹧鸪菜加入10-15mL 95％工业酒精的比例投料，室温浸泡60天，过滤，滤液留存；按相同固液比，滤渣继续用80％工业酒精在50℃提取2小时，重复提取1次，过滤，滤液留存，滤渣干燥后即为本发明原料；上述滤液用于研究鹧鸪菜化学成分，不在本发明涉及范围；所用组织捣碎机为实验室用型。
[0017] 优选地，步骤2)中
超声波参数设置为每超声2秒停3秒，超声提取时间指实际超声运行时间，比如本发明中超声提取时间4min表示：设置超声时间为10min，其中超声处理样品时间总计是4min，停歇总计6min；
[0018] 优选地，步骤2)中本发明所述的鹧鸪菜多糖的提取方法中，最优选的技术特征是：提取时，鹧鸪菜与蒸馏水固液比1:50，超声功率350w，在60℃超声提取28min，提取2次。
[0019] 优选地，步骤4)中所述sevag试剂组成是体积比为4:1的氯仿与正丁醇，脱除次数要通过紫外
光谱中200-400nm处吸光度确定；浓缩液与sevag试剂的体积比为5-4:1。
[0020] 优选地，步骤5)中透析使用的透析袋规格是8000-14000截留分子量，透析2小时，换水继续透析，重复2-3次。
[0021] 优选地，步骤3)和步骤8)中离心的转速为8000-10000rpm，离心15-20min。
[0022] 优选地，步骤9)中所用
有机溶剂的量为沉淀物重量的1-2倍。
[0023] 此外，本发明还提供了用上述方法提取的鹧鸪菜多糖。
[0024] 本发明的优点和有益效果：
[0025] 1、本发明首次提供了从海藻鹧鸪菜Caloglossa leprieurii提取多糖的方法，尤其是以醇浸后鹧鸪菜为原料，提高了鹧鸪菜利用率，同时，醇浸液可用于鹧鸪菜活性成分研发，一举多得，为充分开发利用鹧鸪菜资源奠定了
基础。
[0026] 2、本发明采用
超声波辅助法提取鹧鸪菜多糖，操作简单，提取时间短，并且该方法可用于没有经过醇浸的鹧鸪菜作为原料提取多糖。
[0027] 3、本发明所得的鹧鸪菜多糖具有良好的抗氧化活性。鹧鸪菜多糖浓度为400μg/mL时，其清除DPPH自由基的清除率为38.3％，略高于同条件下80μg/mL VC清除DPPH自由基的清除率(34.6％)。
附图说明
[0028] 图1是脱蛋白后鹧鸪菜多糖的紫外吸收光谱图。
[0029] 图2是经透析的脱蛋白后鹧鸪菜多糖的紫外吸收光谱图。
具体实施方式
[0030] 下面结合
实施例以及
说明书附图1-2对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0031] 实施例1：
[0032] 本实施例中超声提取鹧鸪菜多糖的方法，按以下步骤操作：
[0033] 按固液比1:20-60(g:mL),将用组织捣碎机捣碎的预处理过的鹧鸪菜中加入蒸馏水，在超声波中进行超声处理，超声功率100-500w，提取
温度20-70℃，处理时间4-48min，离心分离，上清液为鹧鸪菜多糖提取液，沉淀物为鹧鸪菜残渣，留取上清液，得第一次提取多糖液，沉淀物按相同固液比加水，再重复上述操作，可得到第二次、第三次多糖提取液，合并、定容，即得到超声提取鹧鸪菜的多糖提取液。通过计算得到鹧鸪菜多糖的提取率。
[0034] 采用
苯酚-硫酸法测量按上述步骤所得鹧鸪菜多糖提取液中多糖的含量(李宏睿等,山药多糖提取工艺的优化及抗氧化活性的测定,安徽农业科学,2011,39(6):3322-3324)。以
葡萄糖为标准品，在490nm比色测定多糖提取液的吸光度，以吸光度(A)与多糖
质量浓度(c)进行线性回归，得回归方程为：A＝1.9679c+0.0523，r＝0.9921。
[0035] 鹧鸪菜多糖提取率按下面公式计算：
[0036] 多糖提取率(％)＝[提取液中多糖浓度(g/mL)×提取液体积(mL)/原料质量(g)]×100％
[0037] 实施例2：
[0038] 本实施例是超声提取鹧鸪菜多糖的提取条件的优化实验。
[0039] (1)超声提取鹧鸪菜多糖的单因素实验
[0040] ①超声功率对鹧鸪菜多糖提取率的影响
[0041] 提取的方法步骤同实施例1，固液比、温度、超声时间分别是1g:30mL、20℃和4min，超声功率设置为100、200、300、400和500w，提取次数为1次，所得多糖提取率见表1：
[0042] 表1
[0043]
[0044] 由表1可以看出，超声功率在300w时，鹧鸪菜多糖的提取率较高，选250w、300w、350w为
正交实验考察的水平。
[0045] ②固液比对鹧鸪菜多糖提取率的影响
[0046] 提取的方法步骤同实施例1，超声功率、温度、超声时间分别是300w、20℃和4min，固液比设置为1:20、1:30、1:40、1:50和1:60(g:mL)，提取次数为1次，所得鹧鸪菜多糖提取率见表2：
[0047] 表2
[0048]
[0049] 由表2可以看出，固液比为1:50时，鹧鸪菜多糖的提取率较高，选1:40、1:45、1:50为正交实验考察的水平。
[0050] ③超声时间比对鹧鸪菜多糖提取率的影响
[0051] 提取的方法步骤同实施例1，超声功率、温度、固液比分别是300w、20℃和1:50(g:mL)，超声时间设置为2、4、8、12、16、20、24、32、40和48min，提取次数为1次，所得鹧鸪菜多糖提取率见表3：
[0052] 表3
[0053]
[0054] 由表3可以看出，超声时间为32min时，鹧鸪菜多糖的提取率较高，选择24、28和32min为正交考察的水平。
[0055] ④提取次数对鹧鸪菜多糖提取率的影响
[0056] 提取的方法步骤同实施例1，超声功率、温度、固液比、超声时间分别是300w、20℃、1:50(g:mL)和32min，提取次数为1次、2次和3次，所得鹧鸪菜多糖提取率见表4：
[0057] 表4
[0058]
[0059] 由表4可以看出，提取次数为2次时，鹧鸪菜提取效率较高，选择1次、2次和3次为正交实验考察的水平。
[0060] ⑤提取温度对鹧鸪菜多糖提取率的影响
[0061] 提取的方法步骤同实施例1，超声功率、固液比、超声时间分别是300w、1:50(g:mL)和32min，提取次数为2次，提取温度设置为20、30、40、50、60和70℃，所得鹧鸪菜多糖提取率见5：
[0062] 表5
[0063]
[0064] 由表5可以看出，提取温度在60℃时，鹧鸪菜多糖的提取率较高，60℃为最佳提取温度。
[0065] (2)超声提取鹧鸪菜多糖条件优化的正交实验
[0066] 根据单因素实验结果，确定优化超声提取鹧鸪菜多糖正交实验的因素为固液比(A)、超声时间(B)、超声功率(C)和提取次数(D)，提取温度确定为60℃，每个因素各选择3个水平，按正交设计表L9(34)进行实验，因素水平表见表6.
[0067] 表6
[0068]
[0069] 以鹧鸪菜多糖的提取率为评价指标，确定最适宜的提取条件，正交实验结果见表7。
[0070] 表7
[0071]
[0072] 由表7的结果可以看出，影响鹧鸪菜多糖提取率的因素主次顺序为D>B>C>A，综合各因素的K值和R值并结合
软件分析，得到超声提取鹧鸪菜多糖的最佳提取工艺条件是A3B2C3D2，即固液比1:50(g:mL)，超声时间28min，超声功率350w，提取温度60℃，提取次数2次，在此条件下，鹧鸪菜多糖提取率为14.51％。
[0073] 实施例3：
[0074] 1)按照实施例2的最佳工艺条件得到鹧鸪菜多糖提取液；
[0075] 2)将1)所得提取液用旋转蒸发仪在60℃时浓缩，直至浓缩液体积为浓缩前体积的1/6；
[0076] 3)在2)浓缩液中加入sevag试剂，萃取分离出上清液，脱除8次，取样，测定样品1的紫外吸收光谱，见图1；
[0077] 4)将3)除蛋白后的溶液置于透析袋中，透析3次，得到去除海人草酸的鹧鸪菜多糖提取液，取样，测定样品2的紫外可见吸收光谱，见图2；
[0078] 从图1可以看出，除蛋白后的鹧鸪菜多糖提取液在300-350nm之间，有一个明显的宽峰；而图2在此
波长范围内，没有任何吸收峰，说明经过透析处理，可以有效去除脱蛋白后鹧鸪菜多糖中所含的海人草酸。
[0079] 实施例4：
[0080] 1)将实施例3得到的透析后鹧鸪菜多糖提取液用旋转蒸发仪在60℃时浓缩，直至浓缩液体积为浓缩前体积的1/10；
[0081] 2)于搅拌条件下，向1)浓缩液中加入浓缩液体积5倍的乙醇，降温至0-4℃，静置15小时，后于10000rpm离心15min，收集沉淀物；
[0082] 3)依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤2)所得的沉淀物，于60℃烘干即得到鹧鸪菜多糖；
[0083] 4)将3)得到的多糖进行抗氧化评价，采用DPPH法(邱松山等,无花果多糖提取工艺及抗氧化活性研究,食品与机械,2011,27(1):40-42)测定3)得到的鹧鸪菜多糖对DPPH自由基的清除作用。
[0084] 具体评价方法如下：在10mL具塞试管中加入2mL 40μg/mL DPPH乙醇溶液，加入一定量的鹧鸪菜多糖溶液或VC溶液，用50％乙醇定容到5mL，摇匀，置于37℃水浴锅中，避光反应30min，以乙醇为参比，空白对照以乙醇代替样品。反应结束后立即用紫外分光光度计测514nm处吸光度A值，鹧鸪菜多糖及VC对DPPH的清除率按照下面公式进行计算：
[0085] DPPH清除率/％＝[1-(Ai-Aj)]×100％/A0
[0086] 其中：A0是空白对照的吸光度；Ai是加样品液后吸光度；Aj是样品液本底吸收。
[0087] 结果发现，当VC质量浓度为80μg/mL时，VC清除DPPH自由基的清除率为34.6％，而相同条件下，鹧鸪菜多糖浓度为400μg/mL时，其清除DPPH自由基的清除率(38.3％)略高于80μg/mL VC；说明本发明方法提取的鹧鸪菜多糖具有良好的抗氧化活性。
[0088] 以上详细描述了本发明的较佳实施例，凡依本发明
申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应在由
权利要求书所确定的保护范围内。
