[0001] 本发明涉及一种医疗诊断仪器用试剂，具体涉及一种血细胞分析仪用试剂。

[0002] 血细胞分析是临床检验最常用项目，能检测20多项血液项目的病理性变化，对于抗生素的合理应用、各种贫血检查、血液病筛查、过敏疾病筛查等都有很大帮助；采用血细胞分析技术，可及时监测人体的身体状况，减少发病机率或控制病情。

[0003] 血细胞五分类技术是当前该领域最先进的分析技术，其分析系统由仪器和试剂组成。国外目前只有美国雅培、库尔特、法国ABX、日本西森美康等公司生产；国内厂商，仅见有深圳迈瑞公司报道有产品。如美国雅培公司推出的CELL-DYN3000、CELL-DYN3200、CELL-DYN 3500和CELL-DYN 3700血细胞分析仪在国内就存在较大的市场，但与该仪器配套使用的试剂国内则长期依赖进口，导致试剂价格偏高，不利于国内广大医院，特别是基层医院的推广和应用。为降低试剂的成本，国内已出现有自行研制出的该类试剂，如公开号为CN1424582的中国发明专利，公开了一种雅培3700全自动五分类血细胞分析仪试剂，它包括稀释液、清洗剂、溶血剂和鞘液四种配套试剂，其中稀释液的组成为：NaCl10～20g/L、Na2SO45～15g/L、EDTA-K20.1～0.5g/L、甲基脲0.5～1.5g/L，噻唑啉酮0.3～0.8g/L，哌嗪烷基磺酸1～4g/L；清洗剂的组成为：NaCl10～20g/L、Na2SO45～18g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.2～0.7g/L、磷酸钠0.7～1.4g/L、哌嗪烷基磺酸3～10g/L、噻唑啉酮0.2～0.8g/L，溶血剂的组成为：季胺盐30～70g/L、KCN0.1～0.5g/L、Triton X-1000.5～1.5ml/L、乙醇30～60ml/L；鞘液的组成为：氨基甲烷1.2g/L，聚氧乙烯醚96mg/L，甲基脲4.5g/L，苯醚6g/L，噻唑啉酮8.8g/L。该发明血细胞分析仪试剂较国外进口试剂成本低，具有较好的推广使用价值；但是该试剂中溶血剂中仍含有剧毒化合物氰化钾，不仅危害操作人员的身体健康，同时对环境造成污染。

[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种成本低廉、试剂性能优越且不含氰化物的适于五分类全自动血细胞分析仪用试剂。

[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

[0006] 血细胞分析仪用试剂，由稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液组成，其中：

[0007] 所述稀释液的组成及含量为：

[0008] 硼酸2～12g/L、硼砂2～10g/L、氯化钠5～15g/L、硫酸钠8～20g/L、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)0.1～0.5g/L、甲基脲0.5～2.0g/L、盐酸羟胺3～9g/L、氯化钾0.2～1.0g/L；

[0009] 所述溶血剂的组成及含量为：

[0010] 季铵盐10～25g/L、二乙醇胺1～5ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚(Tri tonX-100)0.5～2ml/L、异丙醇0.3～1.5ml/L、氯化钠1～5g/L；

[0011] 所述鞘液的组成及含量为：

[0012] 氨基甲烷1～10g/L、甲基脲0.1～1g/L、芳香醇1～15ml/L、乙醇5～15ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.5g/L；

[0013] 所述清洗液的组成及含量为：

[0014] 硼酸2～12g/L、硼砂2～15g/L、氯化钠2～10g/L、硫酸钠4～10g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5～2g/L、次氯酸钠0.5～2g/L。

[0015] 上述稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液的组成优选如下：

[0016] 稀释液的组成及含量为：

[0017] 硼酸8.5～12g/L、硼砂3～6g/L、氯化钠5～10g/L、硫酸钠8～12g/L、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)0.1～0.3g/L、甲基脲0.5～1.0g/L、盐酸羟胺3～6g/L、氯化钾0.2～0.8g/L；

[0018] 溶血剂的组成及含量为：

[0019] 季 铵 盐15 ～25g/L、二 乙 醇 胺1～ 3ml/L、聚 乙 二 醇 辛 基 苯 基 醚(TritonX-100)0.5～1ml/L、异丙醇0.3～1ml/L、氯化钠3～5g/L；

[0020] 鞘液的组成及含量为：

[0021] 氨基甲烷1～5g/L、甲基脲0.1～0.5g/L、芳香醇1～10ml/L、乙醇5～10ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.3g/L；

[0022] 清洗液的组成及含量为：

[0023] 硼酸7～12g/L、硼砂2～6g/L、氯化钠4～10g/L、硫酸钠4～8g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5～1g/L、次氯酸钠0.5～1.5g/L。

[0024] 以上配方中，

[0025] 所述的鞘液中的芳香醇选自二苯醚、苯甲醇、苯乙醇和乙二醇苯醚中的一种或两种。

[0026] 鞘液中的聚氧乙烯月桂醚为聚氧乙烯月桂醚35(Brij35)。

[0027] 所述鞘液的渗透压为35～80mOsm/kg。

[0028] 所述稀释液的渗透压为280～350mOsm/kg。

[0029] 所述稀释液的pH值为6.5～8.0，具体可用盐酸来调。

[0030] 所述溶血剂的pH值为PH7.5～9.5，具体可用盐酸来调。

[0031] 所述鞘液的pH值为8.0～10.0，具体可用盐酸来调。

[0032] 所述清洗液的pH值为6.5～8.5，具体可用盐酸来调。

[0033] 与现有技术相比，本发明的优点在于：

[0034] 1、改变国内五分类全自动血细胞分析仪用试剂长期依赖进口的现状，试剂由国内生产、销售，大大降低了其成本；

[0035] 2、试剂中的溶血剂为无氰溶血剂，不仅大大降低了对生产单位人员和实验操作者身体健康的损害，同时也避免了使用氰化物对环境造成的污染；

[0036] 3、该试剂适用于五分类全自动血细胞分析仪，尤其适用于美国雅培公司的Cell-Dyn3700/3500、Cell-Dyn3000、Cell-Dyn3200五分类全自动血细胞分析仪，本申请试剂的PH、电导率、渗透压等参数均符合进口Cell-Dyn3700/3500五分类全自动血细胞分析仪的测试要求；溶血剂A750测试达到ICSH标准；白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板等与进口ABBOTTCELL-DYN3700/3500试剂相关系数均大于0.95；白细胞五分类图谱与进口试剂一致；

[0037] 4、该试剂在去除鞘液后也可适用于三分类血细胞分析仪；其中的溶血剂等也可用于其它系列的血液分析仪。附图说明

[0038] 图1为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN 3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的WBC项目的测试结果对比相关线性图；

[0039] 图2为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN 3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的RBC项目的测试结果对比相关线性图；

[0040] 图3为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN 3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的HGB项目的测试结果对比相关线性图；

[0041] 图4为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTT CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN 3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN
3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，所测的PLT项目的测试结果对比相关线性图。

[0042] 下面以实施例对本发明作进一步说明。

[0043] 以下实施例中用到的试剂均为分析纯试剂。

[0044] 实施例1

[0045] 在常温和常压下，分别按以下表1中指定的各组分以常规方法配制稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液粗品，其中鞘液中的芳香醇为苯甲醇；配制所得的粗品分别用0.2μm的纤维薄膜过滤，即得本发明所述的血细胞分析仪用试剂。

[0046] 实施例2

[0047] 分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用苯乙醇代替苯甲醇。

[0048] 实施例3

[0049] 分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用二苯醚代替苯甲醇。

[0050] 实施例4

[0051] 分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用苯甲醇代替二苯醚。

[0052] 实施例5

[0053] 分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用苯乙醇代替二苯醚。

[0054] 实施例6

[0055] 分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用乙二醇苯醚代替二苯醚。

[0056] 实施例7

[0057] 分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用二苯醚和乙二醇苯醚代替苯甲醇，其中二苯醚和乙二醇苯醚的体积比为1∶1。

[0058] 表1：

[0059]

[0060]

[0061] 对比实验例1

[0062] 分别用上述实施例1制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂1)、实施例2制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂2)和原装进口的美国ABBOTTCELL-DYN 3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN 3500and3700Systems DETERGENT、CELL-DYN 3500and3700 Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂(简称试剂A)对从桂林市第二人民医院随机抽取的一个血样用ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，每种试剂对该血样测试10次，所得结果如下表2所示，其中， 为测试10次的平均值，CV(％)为变异系数。

[0063] 表2：

[0064]

[0065] 上述表2中的数据表明，实施例1、2所制得的血细胞分析仪用试剂的测试结果与原装进口的美国ABBOTT CELL-DYN 3000，3500and3700 SystemsDILUENT、CELL-DYN3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN 3500and3700Systems WIC/Hgb LYSE REAGENT、CELL-DYN 3000，3500and3700 SystemsSHEATH试剂的测试结果一致。

[0066] 对比实验例2

[0067] 将本发明实施例2制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂2)与原装进口的ABBOTT CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems DILUENT、CELL-DYN 3500and3700 Systems DETERGENT、CELL-DYN 3500and3700 Systems WIC/HgbLYSE REAGENT、CELL-DYN 3000，3500and3700 Systems SHEATH试剂(简称试剂A)对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本用ABBOTT CELL-DYN3700进行测试，测试结果如下表3所示，其中所测WBC、RBC、HGB和PLT项目的测试结果对比相关线性图分别如图1、2、3和4所示，其相关性R＞0.95。

[0068] 表3：

[0069]

[0070]4 4.07 3.94 4.65 4.64 134 133 143 133
5 7.51 7.47 4.66 4.68 141 140 266 280
6 5.24 5.35 6.26 6.19 127 127 207 211
7 4.72 4.73 4.79 4.83 141 143 225 238
8 5.19 5.13 4.98 5.13 160 162 219 235
9 4.62 4.78 5.53 5.51 161 162 227 226
10 3.78 4 4.56 4.53 143 142 211 207
11 8.23 8.02 4.89 4.83 154 154 217 224
12 8.36 8.38 5.4 5.45 170 173 237 225
13 9.14 9.25 4.07 4.08 127 128 234 227
14 7.67 7.6 4.61 4.57 136 136 172 177
15 4.2 4.13 4.28 4.24 121 121 203 178
16 6 6.11 4.66 4.67 145 145 250 250
17 4.23 4.24 5.12 5.1 154 155 236 229
18 5.31 5.44 2.64 2.64 84.7 84.5 201 180
.19 5.45 5.91 4.89 4.89 144 144 221 209
20 4.24 4.32 4.34 4.36 121 122 168 177
21 5.23 5.5 4.5 4.52 141 140 202 186
22 4.62 4.84 4.01 4.05 133 133 159 163
23 7.67 7.58 4.84 4.7 139 135 415 462
24 4.95 5 5.03 4.98 149 149 213 192
25 8.72 8.89 4.71 4.68 126 126 327 3儿
26 6.46 6.47 5.17 5.1 148 147 241 234
27 8.34 8.38 3.71 3.71 114 113 204 184
28 5.12 5.14 5.64 5.56 164 164 306 282
29 4.01 4.2 4.4 4.3 137 137 294 296
30 8.38 8.2 5.01 4.94 149 148 231 206
31 5.62 5.9 4.65 4.71 138 138 237 220
32 4.44 4.47 3.54 3.6 55.4 54.8 362 332
33 4.92 5.17 4.09 4.14 121 122 238 228
34 5.56 5.95 4.64 4.66 136 136 272 266
35 10.2 11.8 4.8 5.07 145 153 208 199
36 8.37 8.47 5.34 5.5 112 113 299 333
37 5.22 5.49 4.06 4.03 125 125 399 284
38 4.45 4.58 4.35 4.36 131 131 273 261
39 8.07 8.11 4.71 4.73 135 136 373 391
40 9.45 9.36 4.87 4.73 142 138 300 287
41 6.51 6.88 5.01 5.02 142 141 295 276
42 7.27 7.34 4.62 4.61 123 122 345 350
43 4.72 4.79 3.92 3.83 116 113 197 185
44 7.73 7.36 5.28 5.11 147 143 202 190
45 1.58 1.31 4.93 4.95 150 150 191 188
46 5.87 5.59 3.64 3.58 104 101 233 251
47 13.5 14.8 5.24 5.14 105 104 341 348
48 7.34 7.33 5.17 5.14 138 138 273 268
49 5.14 4.96 3.92 3.89 120 120 203 197
50 4.76 4.8 4.42 4.4 131 132 238 245
51 6.37 6.46 4.1 4.15 119 121 231 244
52 6.43 6.73 3.95 4.11 117 122 255 275
53 4.79 4.66 4.98 4.9 150 147 188 194
54 5.68 5.91 4.81 4.77 142 142 178 185
55 5.99 6.32 4.83 4.88 153 155 213 245
56 5.99 6.08 5.42 5.24 164 159 198 208
57 5.38 5.27 5.17 5.17 155 154 225 218
58 5.53 5.45 4.36 4.42 127 132 273 282
59 7.5 7.06 5.34 5.16 149 145 185 179
60 7.03 7.24 4.95 4.88 149 149 252 238
61 12 12.2 4.54 4.49 115 115 223 216
62 6.71 6.84 5.46 5.5 119 119 280 262
63 8.4 8.48 4.58 4.57 133 134 285 297
64 6.86 7.1 4.24 4.21 125 124 219 216
65 4.92 5.06 4.29 4.18 123 120 186 182
66 7.02 7.06 3.97 3.95 117 118 320 314
67 10 9.55 4.9 4.87 140 140 177 170
68 8.58 8.83 3.83 3.8 76.3 76.9 242 227
69 5.98 5.99 4.33 4.33 120 119 220 222
70 15 14.8 6.74 6.6 130 131 158 164
71 4.84 5.13 4.42 4.54 136 139 313 326
72 7.04 7 4.57 4.46 132 131 262 270
73 15.5 15.2 4.3 4.27 137 137 182 180
74 14.4 15 5.21 5.19 144 144 249 230
75 7.29 7.46 5.75 5.68 170 172 241 258
76 7.23 7.37 4.6 4.67 134 134 344 347
77 6.71 6.74 5.36 5.28 123 122 256 236
78 6.42 6.64 4.52 4.43 148 146 141 152
79 4.64 4.49 4.76 4.84 121 120 254 257
80 5.62 5.38 4.76 4.89 142 143 166 158
81 5 5.07 4.17 4.13 141 140 197 191
82 3.87 3.94 3.9 3.89 120 119 247 227
83 4.92 4.86 4.74 4.73 148 147 159 160
84 6.24 6.16 4.47 4.45 134 134 227 232
85 5.86 5.9 5.12 5.11 150 149 197 210
86 11.2 11.3 4.42 4.35 129 129 272 290
87 6.2 6.34 4.65 4.74 139 139 280 272
88 4.55 4.6 4.59 4.55 141 141 180 183
89 4.36 4.52 4.48 4.48 142 142 182 169
90 2.84 2.77 4.42 4.41 123 124 168 186
91 7.37 7.41 6.97 6.94 139 140 451 444
92 11.7 11.6 5.16 5.05 160 159 213 226
93 9.37 9.08 4.47 4.42 127 127 292 316
.94 4.49 4.91 4.83 5.02 120 125 242 260
95 6.97 7.25 3.58 3.46 110 106 191 196
96 15.6 15.7 3.73 3.71 121 121 190 206
97 3.96 5.44 4.49 4.47 129 128 238 241
98 4.74 6.94 4.27 4.34 111 112 212 218
99 7.58 8.09 5.47 5.36 135 133 305 328
100 4.89 5.18 5.07 5.13 103 104 282 285

[0071] 对比实验例3

[0072] 本发明实施例3制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂3)、实施例4制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂4)、实施例5制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂5)和实施例6制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂6)的差别仅在于芳香醇的种类不同，为测试本发明所选用的四种芳香醇类物质对测试结果的影响，申请人分别用上述试剂3、4、5和6对同一支标本进行平行测试，所得结果如下表4所示。

[0073] 表4：

[0074]

[0075] 上述测试结果表明，本发明试剂中鞘液所使用的四种芳香醇类物质对测试结果没有影响，都能够良好的反应出标本的实际情况。

[0076] 当然，本发明并不局限于这些实施例，只要是不违背本发明的主题思想，均应属于本发明的保护范围，如可以在试剂中加入本领域技术人员很容易想到的一些不影响本发明所述试剂性能的其它非必要物质，例如在稀释液中加入少量的叠氮钠，在溶血剂中加入少量的氟化钠，在清洗液中加入少量的Triton X-100等，应该视为在本发明的保护范围内。