用于治疗糖尿病性视网膜病的组合物和方法
专利汇可以提供用于治疗糖尿病性视网膜病的组合物和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了用于 治疗 糖尿病性 视网膜 病的化合物和方法。具体地，在此描述了用来治疗糖尿病性视网膜病的LFA-I拮抗剂。本发明的一方面提供了糖尿病性视网膜病的诊断和患者在被诊断为糖尿病性视网膜病之后LFA-I拮抗剂的施用。，下面是用于治疗糖尿病性视网膜病的组合物和方法专利的具体信息内容。
1.一种治疗患糖尿病性视网膜病的受试者的方法，其包括向需要的所述受试者施用治疗有效量的能够抑制LFA-1和ICAM之间相互作用的治疗剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中糖尿病性视网膜病引起的损伤为黄斑水肿、视网膜新生血管形成、视网膜上的纤维血管生长、失明、基底膜增厚、视网膜水肿或视网膜缺血。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述ICAM为ICAM-1、ICAM-2或ICAM-3。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述ICAM为ICAM-1。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗剂为LFA-1拮抗剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂结合与ICAM-1结合位点重叠的LFA-1αL亚单元中的高亲和力结合位点。
7.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂直接与LFA-1αL亚单元上的
ICAM-1的结合相竞争。
8.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为LFA-1αL亚单元上的ICAM-1的结合的变构拮抗剂。
9.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为抗体。
10.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式I的化合物或其药学上可接受的盐或酯，其中
式I
1 2
R 和R 各独立地为氢、氨基酸侧链、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m杂芳基-其中m
1A 1B 1A 1B
为0-6、-CH(R )(OR )、-CH(R )(NHR )、U-T-Q或任选地被U-T-Q取代的脂肪族、脂环族、杂脂肪族或杂脂环族部分；
1A 1A 1A 1A
其中U为不存在、-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R )、-N(R )-、-N(R )C(＝O)-、-N(R )C(＝
1A 1B 1A
O)-O-、-N(R )C(＝O)-N(R )-、-N(R )-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、
1A 1A 1E
杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、-C(＝O)-N(R )-、-OC(＝O)N(R )-、-C(＝N-R )-、-C(＝
1E 1E 1A 1E 1A 1A 1E 1A
N-R )-O-、-C(＝N-R )-N(R )-、-O-C(＝N-R )-N( )-、-N(R )C(＝N-R )-、-N(R )C(＝
1E 1A 1E 1B 1A 1A
N-R )-O-、-N(R )C(＝N-R )-N(R )-、-P(＝O)(OR )-O-或-P(＝O)(R )-O-；
T为不存在、脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；且
1B 1B 1B 1B
Q为氢、卤素、氰基、异氰酸基、-OR 、-SR 、-N(R )2、-NHC(＝O)OR 、-NHC(＝O)
1B 1B 1B 1B 1B
N(R )2、-NHC( ＝ O)R 、-NHSO2R 、NHSO2N(R )2、-NHSO2NHC( ＝ O)OR 、-NHC( ＝ O)
1B 1B 1B 1B
NHSO2R 、-C(＝O)NHC(＝O)OR 、C(＝O)NHC(＝O)R 、-C(＝O)NHC(＝O)N(R )2、-C(＝
1B 1B 1B 1B 1B 1B
O)NHSO2R 、-C( ＝ O)NHSO2N(R )2、C( ＝ S)N(R )2、-SO2R 、-SO2OR 、-SO2N(R )2、-SO2-
1B 1B 1B 1B
NHC(＝ O)OR 、-OC( ＝O)-N(R )2、-OC(＝ O)R 、-OC( ＝O)NHC( ＝O)R 、-OC( ＝ O)
1B 1B 1 2
NHSO2R 、-OSO2R ，或脂肪族、杂脂肪族、芳基或杂芳基部分，或其中R 和R 一起为脂环族或杂环部分，或一起为
1A 1B
其中每次出现的R 和R 独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、
1C 1C 1D 1C 1D
烷基芳基或烷基杂芳基部分、-C(＝O)R 、或-C(＝O)NR R ；其中每次出现的R 和R 独立
1E
地为氢、羟基或脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；R 为氢、脂
1C 1C
肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-CN、-OR 、-NR
1D 1C
R 或-SO2R ；
3 3A 3A 3A 0
R 为-C(＝O)OR 、-C(＝O)H、-CH2OR 、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R )、-CH2X ；
3A
其中每次出现的R 独立地为氢、保护基、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳
3A
基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基、杂烷基杂芳基部分或药学上可接受的盐或酯，或R
1 2 0
与R 和R 一起形成杂环部分；其中X 为选自F、Br或I的卤素；
4
每次出现的R 独立地为氢、卤素、-CN、-NO2、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂G1
环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分，或为GR ，其中G为-O-、-S-、G2 G2 G2 G2
NR -、-CO-、-SO-、-SO2-、C(＝O)O-、-C(＝O)NR -、C(＝O)-、-NR C(＝O)-或-SO2NR -，G1 G2
且R 和R 独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；
n为0-4的整数；
1
AR 为单环或多环芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、脂环族或杂环部分；
A、B、D和E当化合价允许时经单键或双键连接；其中每次出现的A、B、D和E独立地为i ii i i i ii
C＝O、CRR 、NR、CR、N、O、S、-S(＝O)或SO2；其中每次出现的R 和R 独立地为氢、卤素、-CN、-NO2、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基G1 G2 G2
部分，或为-GR 其中G为-O-、-S-、-NR 、-CO-、-SO-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR -、-OC(＝G2 G2 G1 G2
O)-、-NR C(＝O)-或-SO2NR -，且R 和R 独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；或任何两个相邻的出现一起代表脂环族、杂脂环族、芳基或杂芳基部分；
p为0-4的整数；且
L不存在或为V-W-X-Y-Z，其中每次出现的V、W、X、Y和Z独立地为不存在、C＝O、L1 L1 L1 L1 L2 L1 L1
NR 、-O-、-C(R )＝、＝C(R )-、-C(R )(R )、C(＝N-OR )、C(＝NR )、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亚烯基或C2-6 alkenylidine链，其中最多达两个非相邻的亚甲基单元独L3
立地任选地被-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NR -、-OC(＝O)-、-OC(＝L3 L3 L4 L3 L4 L3 L3 L3 L4
O)NR -、-NR NR -、-NR NR C(＝O)-、-NR C(＝O)-、NR CO2-、NR C(＝O)NR -、-S(＝OL3 L3 L3 L4 L3 L3 L4
)-、-SO2-、-NR SO2-、-SO2NR 、-NR SO2NR 、-O-、-S-或-NR -代替；其中每次出现的R 和R独立地为氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或酰基；或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳L1 L2
基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；且每次出现的R 和R 独立地为氢、羟基、保护的羟基、氨基、保护的氨基、硫代、保护的硫代、卤素、氰基、异氰酸基、羧基、羧基烷基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、脲基、硫脲基、氰硫基、烷氧基、芳氧基、巯基、磺酰氨基、苄酰氨基、甲苯磺酰基或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基L1 L2
部分，或其中一次或多次出现的R 和R 一起或者还与V、W、X、Y或Z中的一个一起形成脂环族或杂环部分或形成芳基或杂芳基部分。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述式I的化合物为式II的化合物：
式II
27
其中R 为：
28
R 为：
29
且R 为氢，药学上可接受的盐或酯。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述式II的化合物进一步包括式II’中的立体化学：
式II’。
13.根据权利要求10所述的方法，其中所述式I的化合物为式IA、IIA或IIB的化合
物：
式IA 式IIA 式IIB
其中R17为氢，药学上可接受的盐或酯，且R27为
14.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂包括式III的化合物
式III
其中Cy为任选地被羟基、巯基、烷硫基、卤素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒、胍、硝基、烷基、烷氧基或酰基取代的芳香族碳环、芳香族杂环或非芳香族杂环；
10
X2为-CH2-NR -[二价烃链]-其中所述二价烃链任选地被羟基、巯基、卤素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代取代；
K为任选地被羟基、巯基、卤素、氧代、硫代、烷硫基、氨基、氨基烷基、碳环或杂环、烃、卤素取代的烃、氨基、脒、胍、氰基、硝基、烷氧基或酰基取代的杂环；
10
L2为-[二价烃链]-NR -CH2-其中所述二价烃链任选地被羟基、卤素、氧代或硫代取
10
代，且R 为H或烷基；
5
R 为H、OH、氨基、O-碳环或任选地被氨基、碳环、杂环取代的烷氧基，或为药学上可接受的盐或酯；
6-9
R 独立地为H、羟基、巯基、卤素、氰基、氨基、脒、胍、硝基或烷氧基；
10
R 为H或任选地被碳环或杂环取代的烃链；及其盐、溶剂化物和水合物。
15.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式IV的化合物
式IV
11
其中R 为下式基团
其中A为氢、羟基、氨基或卤素，B为氨基、羧基、氢、羟基、氰基、三氟甲基、卤素、低级烷基或低级烷氧基；
12
R 为下式基团
13
其中R 为氢、羧基或低级烷基；
n为0或1；
U2、V2和W2独立地为氢、卤素或低级烷基，条件是U2和V2不均为氢；
X3为羰基、苯基取代的低级亚烷基、亚氨基、取代的亚氨基或磺酰基；
Y2为低级亚烷基，其可被一个或多个氨基、取代的氨基、低级烷基或环状低级烷基取代，或Y2为低级亚烯基或低级亚烷基硫基；
k为0或1；
当k为1时，Z2为氢、低级烷硫基、-COOH、-CONH2、氨基；
当k为0或1时，Z2为1-金刚烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基]
吡嗪-2-基、羟基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羟基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，
6-二氯苯基)甲氧基]苯基；
当k为0或1时，Z2为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，或为含2个或3
个环的稠环系统，这些环独立地为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，任何环均可以是未取代的或被卤素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺酰基、硝基、氧代、羟基、芳基、芳氧基、未取代的低级烷基、卤素取代的低级烷基、低级烷氧基取代的低级烷基、低级烷氧基、低级烷基磺酰基、低级烷硫基、乙酰基、氨基羰基、肼基、羧基、烷氧羰基、乙酰氧基中的至少一个取代，或另外还被氨基低级烷基取代；且
20
R 为氢、药学上可接受的盐或酯。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述式III的化合物进一步包括式III’中的立体化学。
式III’。
17.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式V的化合物，其中：
式V
14
R 为下式基团
15
R 为氢、羧基或低级烷基；
U3、V3和W3独立地为氢、卤素；
U3、V3和W3为低级烷基，条件是U3和V3不均为氢；
X4为羰基、苯基取代的低级亚烷基、亚氨基、取代的亚氨基或磺酰基；
Y3为低级亚烯基、低级亚烷基硫基，或为低级亚烷基，其可被氨基、乙酰氨基或环状低级烷基取代；
k2为0或1；
当k2为1时，Z氢、低级烷硫基、-COOH、-CONH2-或氨基；
当k2为0或1时，Z3为1-金刚烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯吡啶-2-基)氨基]羰
基]吡嗪-2-基；
当k2为0或1时，Z为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，或为含2个或3
个环的稠环系统，这些环独立地为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，任何环均可以是未取代的或被卤素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺酰基、硝基、氧代、羟基、芳基、芳氧基、未取代的低级烷基、卤素取代的低级烷基、低级烷氧基取代的低级烷基、低级烷氧基、羧基、烷氧羰基或乙酰氧基中的至少一个取代；且
21
R 为氢、药学上可接受的盐或酯。
18.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式VI的化合物：
式VI
其中
D4为单环、双环或三环饱和、不饱和或芳香族环，各环在环中具有5、6或7个原子，其中环中的原子为碳或选自氮、氧和硫的1至4个杂原子，其中任何碳或硫环原子任选地被氧
31
化，各环被0-3个R 取代；
L3为选自下面的二价连接基团
3 2 1
-L-L-L-，
4 3 2 1
-L-L-L-L-和
5 4 3 2 1
-L-L-L-L-L-，
其中
1 32 32 32 30
L 选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR 、R 、CR het、NR 和N，
2 33 34 34 34 30
L 选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R )、CR R ′、CR 、het NR 和N，
3 33 35 35 35 30
L 选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R )、CR R ′、CR 、het NR 和N，
4 33 36 36 36 30
L 不存在或选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R )、CR R ′、CR 、NR 和N，
5 37 37 37 30 1 3
L 不存在或选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR R ′、CR 、NR 和N，条件是L-L 中仅
1 3 1 5
有一个可为het，且当L 至L 中的一个为het时，其他的L-L 可以不存在，
其中
32 32 34 34 35 35 36 36 37 37 38 39
R 、R ′、R 、R ′、R 、R ′、R 、R ′、R 和R ＇各独立地选自R 、R 和U-Q-V-W，
24 34
任选地，R 和R ′分别或一起与B3通过B上的取代基RP可形成饱和、不饱和或芳香族稠环，该稠环的环中含有5、6或7个原子且任选地含有1-3个选自O、S和N的杂原子，其中任何S或N可任选地被氧化；
35 35 36 36 31
任选地，R 和R 分别或一起以及R 和R ′分别或一起与D3通过D3上的取代基R
可形成饱和、不饱和或芳香族稠环，该稠环的环中含有5、6或7个原子且任选地含有1-3个选自O、S和N的杂原子，其中任何S或N任选地可被氧化；
1 5 32 37 30 1 5 32 37 30
还任选地，L-L 中的各R -R 、NR 或N与L-L 中的其他任何R -R 、NR 或N一起可
形成5、6或7元碳环或杂环，其可为饱和、不饱和或芳香族的，任选地含有选自N、O和S的
31
1-3个另外的杂原子，其中任何碳或硫环原子任选地可被氧化，各环被0-3个R 取代；并且其中s为0-2；B选自以下基团
其中 为含5、6或7个原子的稠合的杂环或碳环，该环为不饱和的、部分饱和或芳香族的，杂原子选自1-3个O、S和N，
30
Y3选自CH和NR ；n为0-3：
G3选自氢和C1-C6烷基，任选地G与T一起可形成任选地被-V-W取代的C3-C6环烷基；
T3选自以下基团
天然存在的α-氨基酸侧链，
和U4-Q4-V4-W4；
U4为任选地被取代的选自C1-C6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6烯基-Q，和C2-C6炔基-Q的二价基团：
38
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ；
Q4不存在或选自基团
30 30 30 30
-O-、-S(O)s-、-SO2-N(R )-、-N(R )-、-N(R )-C( ＝ O)-、-N(R )-C( ＝
30 30 30
O)-N(R )-、-N(R )-C(＝O)-O-、-N(R )-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-het-、-C(＝
30 30 30
O)-N(R )-、-O-C(＝O)-N(R )-、-PO(OR )O-和-P(O)O-；
其中
s为0-2且
het为单环或双环的5、6、7、9或10元杂环，各环含有选自N、O和S的1-4个杂原子，其中杂环可以是饱和的、部分饱和或芳香族的，且任何N或S任选地可被氧化，杂环被0-3个
41
R 取代；
V4不存在或为任选地被取代的选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C0-C6烷基-C6-C10芳基和C0-C6烷基-het的二价基团；
38 31
其中任何烷基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为1-3个R ；
W4选自以下基团
33 42 30 30 43 n n 43
氢、OR 、SR 、NR R 、NH-C( ＝ O)-O-R 、NH-C( ＝ O)-NRR 、NH-C( ＝ O)-R 、
37 30 30 43 37
NH-SO2-R 、NH-SO2-NR R 、NH-SO2-NH-C( ＝ O)-R 、NH-C( ＝ O)-NH-SO2-R 、C( ＝
43 43 30 30
O)-NH-C(＝O)-O-R 、C(＝O)-NH-C(＝O)-R 、C( ＝O)-NH-C(＝O)-NR R ′、C( ＝
37 30 30 30 30 37 37
O)-NH-SO2--R 、C( ＝ O)-NH-SO2-NR R ′、C( ＝ S)-NR R ′、SO2-R 、SO2-O-R 、
37 37 43 30 30 43
SO2-NR R ′、SO2-NH-C(＝O)-O-R 、SO2-NH-C(＝O)-NR R ′、SO2-NH-C(＝O)-R 、O-C(＝
30 30 43 43 46 37
O)-NR R ′、O-C(＝O)-R 、O-C(＝O)-NH-C(＝O)-R 、O-C(＝O)-NH-SO2R 和O-SO2-R ；
44 45
R 选自C(＝O)-R 、C(＝O)-H、CH2(OH)和CH2O-C(＝O)-C1-C6烷基；
38 38 38 38
R 为R ′或被1-3个R ′取代的R ″；其中
38
R ′选自以下基团
氢、卤素(F、Cl、Br、I)、氰基、异氰酸基、羧基、羧基-C1-C11烷基、氨基、氨基-C1-C8烷基、氨基羰基、甲酰胺基、氨基甲酰基、氨基甲酰氧基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、咪唑基、脲基、硫脲基、氰硫基、羟基、C1-C6烷氧基、巯基、磺酰胺基、het、苯氧基、苯基、苄酰氨基、甲苯磺酰基、吗啉代、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯啉基、咪唑基和吲哚基；
38
R ″选自以下基团
C0-C10烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C10烯基-Q-C0-C6烷基、C0-C10炔基-Q-C0-C6烷基、C3-C11环烷基-Q-C0-C6烷基、C3-C10环烯基-Q-C0-C6烷基、C1-C6烷基-C6-C12芳基-Q-C0-C6烷基、C6-C10芳基-C1-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-het-C0-C6烷基、het-C0-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-C6-C12芳基，和-Q-C1-C6烷基；
43
R 选自氢和取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C11环烷基、C3-C10环烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C-6烷基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基和het，
38
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为
31
1-3个R ；
31 40 41
R 选自R 和R ；
41
R 选自以下基团
43 42 30 30
OH、OCF3、OR 、SR 、卤素(F、Cl、Br、I)、CN、异氰酸基、NO2、CF3、C0-C6烷基-NR R ′、
30 30 38
C0-C6烷基-C(＝O)-NR R ′、C0-C6烷基-C(＝O)-R 、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C6环烷基、C3-C6环烯基、C1-C6烷基-苯基、苯基-C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基、苯基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、SO2-het、-O-C6-C12芳基、-SO2-C6-C12芳基、-SO2-C1-C6烷基和het，
其中任何烷基、烯基或炔基任选地可被选自OH、卤素(F、Cl、Br、I)、硝基、氨基和氨基羰基的1-3个基团取代，且任何芳基或het上的取代基为1-2个羟基、卤素(F、Cl、Br、I)、CF3、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基和氨基；
42 30 30
R 选自S-C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-NR R ′、C1-C6烷基、卤素(F、Cl、Br、I)-C1-C6烷基、苄基和苯基；
30 43 43 43 43 46
R 选 自 R 、NH-C( ＝ O)-O-R 、NH-C( ＝ O)-R 、NH-C( ＝ O)-NHR 、NH-SO2-R 、
43 37 43 43
NH-SO2-NH-C( ＝ O)-R 、NH-C( ＝ O)-NH-SO2-R 、C( ＝ O)-O-R 、C( ＝ O)-R 、C( ＝
43 43 43 46
O)-NHR 、C( ＝ O)-NH-C( ＝ O)-O-R 、C( ＝ O)-NH-C( ＝ O)-R 、C( ＝ O)-NH-SO2-R 、
37 37 37 43 43
C(＝O)-NH-SO2-NHR 、SO2-R 、SO2-O-R 、SO2-N(R )2、SO2-NH-C(＝O)-O-R 、SO2-NH-C(＝
43 43
O)-O-R 和SO2-NH-C(＝O)-R ；
30
R ′选自氢、羟基和取代或未取代的C1-C11烷基、C1-C11烷氧基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C11环烷基、C3-C10环烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C6烷基、C6-C10芳基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基、het、C1-C6烷基羰基、C1-C8烷氧羰基、C3-C8环烷基羰基、C3-C8环烷氧羰基、C6-C11芳氧基羰基、C7-C11芳基烷氧羰基、杂芳基烷氧羰基、杂芳基烷基羰基、杂芳基羰基、杂芳基烷基磺酰基、杂芳基磺酰基、C1-C6烷基
38
磺酰基和C6-C10芳基磺酰基，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ，且任何芳
31
基、het或杂芳基上的取代基为1-3个R ；
30 30
R 和R ′与它们所连接的共同的氮一起可形成任选地被取代的选自吗啉基、哌嗪基、硫代吗啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、1，2，3，4-四氢-喹啉基，1，
38
2，3，4-四氢-异喹啉基、噻唑烷基和氮杂二环壬基的杂环，其中取代基为1-3个R ；
33
R 选自氢和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8
38
环烷基和苯甲酰基，其中任何烷基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基上的取代基为1-3个
40
R ；
40 43 42 43 43 30 30
R 选自OH、卤素(F、Cl、Br、I)、CN、异氰酸基、OR 、SR 、SOR 、NO2、CF3、R 、NR R ′、
30 43 43 43 30 30 43
NR C(＝O)-O-R 、NRC(＝O)-R 、C0-C6烷基-SO2-R 、C0-C6烷基-SO2-NR R ′、C(＝O)-R 、
43 43 30 30
O-C(＝O)-R 、C(＝O)-O-R 和C(＝O)-NR R ′，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基
38 31
为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为1-3个R ；
46
R 为取代或未取代的选自以下的基团
C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C3-C6环烯基、C0-C6烷基-苯基、苯基-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het和het-C0-C6烷基，
38
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为
31
1-3个R ；
45
R 为取代或未取代的选自以下的基团：羟基、C1-C11烷氧基、C3-C12环烷氧基、C8-C12芳烷氧基、C8-C12芳环烷氧基、C6-C10芳氧基、C3-C10烷基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧羰基烷氧基、C5-C10环烷基羰氧基烷氧基、C5-C10环烷氧基羰氧基烷氧基、C5-C10环烷氧羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳
30 30
基羰氧基烷氧基、C5-C10烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R )(R )N(C1-C10烷氧基)-、
38
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为
31
1-3个R
及其药学上可接受的盐。
19.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为以下化合物之一：
及其药学上可接受的盐和酯。
20.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为以下化合物之一：
或其药学上可接受的盐和酯。
21.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式VII的化合物：
式VII
及其药学上可接受的盐和前药：
其中R1、R2、R3、R4和R5各独立地为氢、烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、烷酰基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、环烷基、醚、酯、卤素、杂环基、羟基、酮、硝基、氧代、全氟烷基、磺酰基、磺酸酯、硫代或其他含羰基的基团，R6为未取代的烷基、未取代的饱和的环烷基、未取代的羧基烷基或未取代的杂环基烷基，其中未取代的饱和环烷基、未取代的羧基烷基和未取代的杂环基烷基通过烷基与式VII的NH键合，其中未取代的羧基烷基包括分支的烷基链，
条件是R1和R3中的至少一个选自：
A.选自如下定义的顺-肉桂酰胺或反-肉桂酰胺的肉桂酰胺
“顺-肉桂酰胺”“反-肉桂酰胺”
其中R8和R9各独立地为氢、醛、烷基、烯基、炔基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、羧基、氰基、环烷基、酯、醚、卤素、羟基、酮、硝基、磺酸酯、磺酰基硫代或其他含羰基的基团；
B.式VII-a的取代基：
式VII-a
其中D、B、Y和Z各独立地为-CR31＝、-CR32R33-、-C(O)-、-O-、-SO2-、-S-、-N＝、或-NR34-；
n为0-3的整数；且R31、R32、R33和R34各独立地为氢、烷基、羧基、羟基烷基、单烷基氨基羰基烷基、二烷基氨基羰基烷基或羧基烷基；
C.选自如下定义的顺-环丙酸、反-环丙酸、顺-环丙酰胺和反-环丙酰胺的环丙基衍生物
“顺-环丙酸”“反-环丙酸”
“顺-环丙酰胺”“反-环丙酰胺”
其中R35和R36各独立地为氢、烷基、羧基、羟基烷基或羧基烷基，且
其中R37和R38各独立地为氢、烷基、羧基烷基、单烷基氨基羰基烷基或二烷基氨基羰基烷基；
D.式VII-b的取代基：
式VII-b
其中R8和R9如上定义；
E.式VII-c的肉桂酸：
“顺-肉桂酸”“反-肉桂酸”
式VII-c
其中R8和R9如上定义；
其中：
R10和R11各独立地为氢、烷酰基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、酰氨基、芳基、芳烷基、羧基、氰基、环烷基、酯、醚、杂环基、羟基、酮、硝基、磺酰基硫代或其他含羰基的基团，或R10和R11与N一起形成杂环基，其包含独立地为氢、烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、烷酰基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、环烷基、醚、酯、卤素、杂环基、羟基、酮、硝基、氧代、全氟烷基、磺酰基、磺酸酯、硫代或其他含羰基的基团的至少一个取代基，或当R3为肉桂酰胺、式VII-a的取代基、式VII-b的取代基或如上定义的环丙基衍生物时，R1和R2，和/或R4和R5连接在一起形成5至7元环烷基、芳基或杂环基环；或当R1选自肉桂酰胺、式VII-a的取代基、式VII-b的取代基和如上定义的环丙基衍生物时，R2和R3和/或R3和R4和/或R4和R5连接在一起形成5至7元环烷基、芳基或杂环基环；且
其中Ar为具有至少一个取代基的取代的芳基或取代的杂芳基，该取代基独立地为氢、烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、烷酰基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、环烷基、醚、酯、卤素、杂环基、羟基、酮、硝基、氧代、全氟烷基、磺酰基、磺酸酯、硫代或其他含羰基的基团。
22.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式VIII的化合物：
式VIII
其中m为0、1或2；X为H、环烷基或苯基，其为未取代的或被一个或多个低级烷基、羟基或卤素取代基取代；n为0或1；Y为苯基、呋喃基、吲哚或吡咯，其全部可被一个或多个独立地为低级烷基、低级烷氧基、卤素、(3，5-二甲基苯氧基)丙氧基或苯基的取代基取代，其中苯基可进一步被一个或多个卤素原子、硝基、氨基或羧基取代。
23.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式IX的化合物：
式IX
其中虚线是键或不是键，R1为氢、任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、烷氧基、芳基、杂环基、羟基、SH、SR5、氰基、卤素或氨基；或
虚线不是键，且R1通过双键连接到环系统上并且为氧代；
R2为氢，或R2为任选地取代的环烷基、芳基或杂环基；
R3为氢、COOR6或氨基羰基，或R3为任选地取代的烷基、烯基、炔基、芳烷基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基或杂环氧基；
R4为氢、卤素、羟基、SH、任选地取代的烷基、烯基、炔基、烷氧基或烷硫基，或R4为三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基、N3或氨基，或
R4为杂环基，其包含至少一个作为杂原子的氮原子并通过该氮原子结合到式IX的化合物上，或R4为氧代；且
R5和R6独立地为烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或杂环基。
24.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式X的化合物：
式X
其中a---b和α---β各独立地为单键或双键；R1为
烷基或
Ra为H、任选地被OH或C1-4烷氧基取代的C1-6烷基、C2-6烯基或芳基-C1-4烷基；
R2为OH；-O-CO-R5；
R4为H或OR19，其中R19为C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、C1-4烷氧基-C1-6烷基、芳基-C1-4烷基或C1-4烷氧羰基-C1-4烷基；
R5为C1-8烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基-C1-4烷基、芳基或芳基-C1-4烷基；或R5为-O-R6，其中R6为通过其羰基连接到O上的α-氨基酸的残基；或R5为-CHR7--COR8，其中R7为H、C1-4烷基、杂C1-4烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基-C1-4烷基、芳基或芳基-C1-4烷基，且R8为OH、C1-4烷氧基或NR9R10；
R9和R10各独立地为H或C1-4烷基，或R9和R10与它们连接的氮一起形成杂芳基；
R3为式X-a的内酰胺；
其中R30为C1-8烷基、C3-7环烷基、芳基、C3-7环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基、杂芳基或杂芳基-C1-4；且
R31为OH、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基-羰基-C1-4烷基、羟基-C1-5烷氧基、C1-4烷氧基-C1-5烷氧基、C1-4烷氧基-羰基-C1-4烷基、氨基-C1-4烷氧基、HOOC--C1-4烷氧基、HOOC--C1-4烷基、R9a R10a N--C1-5烷氧基，其中R9a和R10a独立地为R9或R10。
25.根据权利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为式XI的化合物：
式XI
及其对映异构体、药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：
R16为：
各R17独立地为-OR18、-NR18R19、-C(＝O)R18、-CO2R18、
-C( ＝ O)NR18R19、-NR18C( ＝ O)R19、-NR18C( ＝ O)OR19、-S(O)pR19，、-NR18SO2R19或-SO2NR18R19；
R18和R19独立地为氢、烷基、取代的烷基、环烷基或取代的环烷基；
q为1、2或3；
且p为1或2。
26.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗剂经局部、口服、眼周、眼内、注射、鼻、气溶胶、插入物、植入装置或点滴施用。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述治疗剂在运载体中施用，该运载体为液滴、液体洗液、喷雾液、凝胶、软膏、气溶胶、喷雾、聚合物微粒和纳米颗粒、溶液、悬浮液、固体、生物可降解基质、粉末、晶体、泡沫或脂质体。
28.根据权利要求26所述的方法，其中所述治疗剂经局部施用，并且所述局部施用包括使用装置将所述化合物输注到所述眼中，该装置选自泵-导管系统、插入物、连续或选择性释放装置、生物可吸收植入物、连续或缓释制剂和隐形眼镜。
29.根据权利要求1所述的方法，其中治疗有效量的所述治疗剂经局部或系统施用递送到所述受试者的眼中。
30.根据权利要求26所述的方法，其中所述治疗剂经注射施用，并且所述注射是经眼内、玻璃体内、眼周、皮下、结膜下、眼球后或眼房内进行的。
31.根据权利要求1所述的方法，其中所述施用是通过施用所述化合物的凝胶、乳膏、粉末、泡沫、晶体、脂质体、喷雾、聚合物微粒或纳米颗粒或液体悬浮液形式的眼内滴注实现的。
-8 -1
32.根据权利要求1所述的方法，其中以足以达到约1×10 至约1×10 摩尔/升的
眼内或视网膜浓度的量向所述受试者施用所述化合物。
33.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物每年至少施用一次。
34.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物每天至少施用一次。
35.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物每周至少施用一次。
36.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物每月至少施用一次。
37.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括确定所述受试者需要治疗糖尿病性视网膜病的步骤。
38.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在施用所述LFA-1拮抗剂之前、一起、同时或之后施用第二治疗剂。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述第二治疗剂选自抗氧化剂、抗炎剂、抗微生物剂、类固醇、蛋白激酶C抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂、抗血管生成剂、补体抑制剂和抗细胞凋亡剂。
40.根据权利要求38所述的方法，其中所述第二治疗剂为具有LFA-1上的变构竞争性结合位点的抗粘附治疗剂。
41.根据权利要求38所述的方法，其中所述第二治疗剂为抗粘附治疗抗体或抗体片段。
42.一种治疗患黄斑水肿的受试者的方法，包括向需要的受试者施用治疗有效量的抑制LFA-1和ICAM之间相互作用的治疗剂，从而降低和/或预防所述受试者眼睛的黄斑水肿。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述ICAM为ICAM-1、ICAM-2或ICAM-3。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述ICAM为ICAM-1。
45.根据权利要求42所述的方法，其中所述治疗剂为LFA-1拮抗剂。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂能结合与ICAM-1结合位点重叠的LFA-1αL亚单元中的高亲和力结合位点。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂直接与LFA-1αL亚单元上的ICAM-1的结合相竞争。
48.根据权利要求45所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为抗体。
49.根据权利要求45所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂包括具有以下结构的式I、III、IV或VI的化合物及其药学上可接受的盐或酯：
式I
1 2
R 和R 各独立地为氢、氨基酸侧链、-(CH2)mOH，-(CH2)m芳基、-(CH2)m杂芳基-其中m
1A 1B 1A 1B
为0-6、-CH(R )(OR )、-CH(R )(NHR )、U-T-Q，或任选地被U-T-Q取代的脂肪族、脂环族、杂脂肪族或杂脂环族部分；
1A 1A 1A 1A
其中U为不存在、-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R )、-N(R )-、-N(R )C(＝O)-、-N(R )C(＝
1A 1B 1A
O)-O-、-N(R )C(＝O)-N(R )-、-N(R )-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、
1A 1A 1E
杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、-C(＝O)-N(R )-、-OC(＝O)N(R )-、-C(＝N-R )-、-C(＝
1E 1E 1A 1E 1A 1A 1E 1A
N-R )-O-、-C(＝N-R )-N(R )-、-O-C(＝N-R )-N(R )-、-N(R )C(＝N-R )-、-N(R )C(＝
1E 1A 1E 1B 1A 1A
N-R )-O-、-N(R )C(＝N-R )-N(R )-、-P(＝O)(OR )-O-或-P(＝O)(R )-O-；
T为不存在、脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；且
1B 1B 1B 1B
Q为氢、卤素、氰基、异氰酸基、-OR 、-SR 、-N(R )2、-NHC(＝O)OR 、-NHC(＝O)
1B 1B 1B 1B 1B
N(R )2、-NHC( ＝ O)R 、-NHSO2R 、NHSO2N(R )2、-NHSO2NHC( ＝ O)OR 、-NHC( ＝ O)
1B 1B 1B 1B
NHSO2R 、-C(＝O)NHC(＝O)OR 、C(＝O)NHC(＝O)R 、-C(＝O)NHC(＝O)N(R )2、-C(＝O)
1B 1B 1B 1B 1B 1B
NHSO2R 、-C(＝O)NHSO2N(R )2、C(＝S)N(R )2、-SO2R 、-SO2OR 、-SO2N(R )2、-SO2-NHC(＝
1B 1B 1B 1B 1B 1B
O)OR 、-OC(＝O)-N(R )2、-OC(＝O)R 、-OC(＝O)NHC(＝O)R 、-OC(＝O)NHSO2R 、-OSO2R
1 2
或脂肪族、杂脂肪族、芳基或杂芳基部分，或其中R 和R 一起为脂环族或杂环部分，或一起为
1A 1B
其中每次出现的R 和R 独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳
1C 1C 1D 1C
基、烷基芳基或烷基杂芳基部分、-C(＝O)R 或-C(＝O)NR R ；其中每次出现的R
1D
和R 独立地为氢、羟基或脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部
1E
分；且R 为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部
1C 1C 1D 1C
分、-CN、-OR 、-NR R 或-SO2R ；
3 3A 3A 3A 0
R 为-C(＝O)OR 、-C(＝O)H、-CH2OR 、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R ).-CH2X ；
3A
其中每次出现的R 独立地为氢、保护基、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基、杂烷基杂芳基部分，或药学上可接受的盐或酯，或
3A 1 2 0
者R 与R 和R 一起形成杂环部分；其中X 为卤素，选自F、Br或I；
4
每次出现的R 独立地为氢、卤素、-CN、-NO2、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂G1
环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分，或为GR 其中G为-O-、-S-、
G2 G2 G2
NR -、-CO-、-SO-、-SO2-、C(＝O)O-、-C(＝O)NR -、C(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NR -，G1 G2
且R 和R 独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；
n为0-4的整数；
1
AR 为单环或多环芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、脂环族或杂环部分；
A、B、D和E当化合价允许时经单键或双键连接；其中每次出现的A、B、D和E独立地为i ii i i i ii
C＝O、CRR 、NR、CR、N、O、S、-S(＝O)或SO2；其中每次出现的R 和R 独立地为氢、卤素、-CN、-NO2、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基G1 G2 G2
部分，或为-GR 其中G为-O-、-S-、-NR 、-CO-、-SO-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR -、-OC(＝G2 G2 G1 G2
O)-、-NR C(＝O)-或-SO2NR -，且R 和R 独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分，或任何两个相邻的出现一起代表脂环族、杂脂环族、芳基或杂芳基部分；
p为0-4的整数；且
L不存在或为V-W-X-Y-Z，其中每次出现的V、W、X、Y和Z独立地为不存在、C＝O、L1 L1 L1 L1 L2 L1 L1
NR 、-O-、-C(R )＝、＝C(R )-、-C(R )(R )、C(＝N-OR )、C(＝NR )、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亚烯基或C2-6alkenylidine链，其中最多达两个非相邻的亚甲基单元独L3
立地任选地被-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NR -、-OC(＝O)-、-OC(＝L3 L3 L4 L3 L4 L3 L3 L3 L4
O)NR -、-NR NR -、-NR NR C(＝O)-、-NR C(＝O)-、NR CO2-、NR C(＝O)NR -、-S(＝OL3 L3 L3 L4 L3 L3 L4
)-、-SO2-、-NR SO2-、-SO2NR 、-NR SO2NR 、-O-、-S-或-NR -代替；其中每次出现的R 和R独立地为氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或酰基；或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳L1 L2
基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；且每次出现的R 和R 独立地为氢、羟基、保护的羟基、氨基、保护的氨基、硫代、保护的硫代、卤素、氰基、异氰酸基、羧基、羧基烷基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、脲基、硫脲基、氰硫基、烷氧基、芳氧基、巯基、磺酰氨基、苄酰氨基、甲苯磺酰基、或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基L1 L2
部分，或其中一次或多次出现的R 和R 一起或者与V、W、X、Y或Z中的一个一起形成脂环族或杂环部分或形成芳基或杂芳基部分；
或
式III
其中Cy为任选地被羟基、巯基、烷硫基、卤素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒、胍、硝基、烷基、烷氧基或酰基取代的芳香族碳环、芳香族杂环或非芳香族杂环；
10
X2为-CH2-NR -[二价烃链]-其中所述二价烃链任选地被羟基、巯基、卤素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代取代；
K为任选地被羟基、巯基、卤素、氧代、硫代、烷硫基、氨基、氨基烷基、碳环或杂环、烃、卤素取代的烃、氨基、脒、胍、氰基、硝基、烷氧基或酰基取代的杂环；
10
L2为-[二价烃链]-NR -CH2-其中所述二价烃链任选地被羟基、卤素、氧代或硫代取
10
代，且R 为H或烷基；
5
R 为H、OH、氨基、O-碳环或任选地被氨基、碳环、杂环取代的烷氧基，或为药学上可接受的盐或酯；
6-9
R 独立地为H、羟基、巯基、卤素、氰基、氨基、脒、胍、硝基或烷氧基；
10
R 为H或任选地被碳环或杂环取代的烃链；及其盐、溶剂化物和水合物；
或
式IV
11
其中R 为下式的基团
其中A为氢、羟基、氨基或卤素，且B为氨基、羧基、氢、羟基、氰基、三氟甲基、卤素、低级烷基或低级烷氧基；
12
R 为下式的基团
13
其中R 为氢、羧基或低级烷基；
n为0或1；
U2、V2和W2独立地为氢、卤素或低级烷基，条件是U2和V2不均为氢；
X3为羰基、苯基取代的低级亚烷基、亚氨基、取代的亚氨基或磺酰基；
Y2为低级亚烷基，其可被氨基、取代的氨基、低级烷基或环状低级烷基中的一个或多个取代，或Y2为低级亚烯基或低级亚烷基硫基；
k为0或1；
当k为1时，Z2为氢、低级烷硫基、-COOH、-CONH2、氨基；
当k为0或1时，Z2为1-金刚烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基]
吡嗪-2-基、羟基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羟基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，
6-二氯苯基)甲氧基]苯基；
当k为0或1时，Z2为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，或为含2个或3
个环的稠环系统，这些环独立地为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，任何环均可以是未取代的，或被卤素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺酰基、硝基、氧代、羟基、芳基、芳氧基、未取代的低级烷基、卤素取代的低级烷基、低级烷氧基取代的低级烷基、低级烷氧基、低级烷基磺酰基、低级烷硫基、乙酰基、氨基羰基、肼基、羧基、烷氧羰基、乙酰氧基中的至少一个取代，或另外还被氨基低级烷基取代；且
20
R 为氢、药学上可接受的盐或酯；
或
式V
14
R 为下式的基团
15
R 为氢、羧基或低级烷基；
U3、V3和W3独立地为氢、卤素；
U3、V3和W3为低级烷基，条件是U3和V3不均为氢；
X4为羰基、苯基取代的低级亚烷基、亚氨基、取代的亚氨基或磺酰基；
Y3为低级亚烯基、低级亚烷基硫基，或为低级亚烷基，其可被氨基、乙酰氨基或环状低级烷基取代；
k2为0或1；
当k2为1时，Z氢、低级烷硫基、-COOH、-CONH2-或氨基；
当k2为0或1时，Z3为1-金刚烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯吡啶-2-基)氨基]羰
基]吡嗪-2-基；
当k2为0或1时，Z为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，或为含2个或3
个环的稠环系统，这些环独立地为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，任何环可为未取代的，或被卤素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺酰基、硝基、氧代、羟基、芳基、芳氧基、未取代的低级烷基、卤素取代的低级烷基、低级烷氧基取代的低级烷基、低级烷氧基、羧基、烷氧羰基或乙酰氧基中的至少一个取代；且
21
R 为氢、药学上可接受的盐或酯
或
式VI
其中
D4为单环、双环或三环饱和、不饱和或芳香族环，各环在环中具有5、6或7个原子，其中环中的原子为碳或选自氮、氧和硫的1至4个杂原子，其中任何碳或硫环原子任选地可被氧
31
化，各环由0-3个R 取代；
L3为选自下面的二价连接基团
3 2 1
-L-L-L-，
4 3 2 1
-L-L-L-L-和
5 4 3 2 1
-L-L-L-L-L-，
其中
1 32 32 32 30
L 选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR 、R 、CR het、NR 和N，
2 33 34 34 34 30
L 选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R )、CR R ′、CR 、het NR 和N，
3 33 35 35 35 30
L 选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R )、CR R ′、CR 、het NR 和N，
4 33 36 36 36 30
L 不存在或选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R )、CR R ′、CR 、NR 和N，
5 37 37 37 30 1 3
L 不存在或选自氧(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR R ′、CR 、NR 和N，条件是L 至L 中
1 3 1 5
仅有一个可为het，且当L-L 中的一个为het时，其他的L-L 可以不存在，
其中
32 32 34 34 35 35 36 36 37 37 38 39
R 、R ′、R 、R ′、R 、R ′、R 、R ′、R 和R ′各独立地选自R 、R 和U-Q-V-W，
24 34
任选地，R 和R ′分别或一起与B3通过B上的取代基RP可形成饱和、不饱和或芳香族稠环，该稠环的环中含有5、6或7个原子且任选地含有选自O、S和N的1-3个杂原子，其中任何S或N任选地可被氧化；
35 35 36 36 31
任选地，R 和R 分别或一起以及R 和R ′分别或一起与D3通过D3上的取代基R
可形成饱和、不饱和或芳香族稠环，该稠环的环中含有5、6或7个原子且任选地含有选自O、S和N的1-3个杂原子，其中任何S或N任选地可被氧化；
1 5 32 37 30 1 5 32 37 30
另外任选地，L-L 中的各R -R 、NR 或N与L-L 中的其他任何R -R 、NR 或N一起
可形成饱和、不饱和或芳香族的5、6或7元碳环或杂环，其任选地含有选自N、O和S的1-3
31
个另外的杂原子，其中任何碳或硫环原子任选地可被氧化，各环由0-3个R 取代；且其中s为0-2；B选自：
其中 为含5、6或7个原子的稠合的杂环或碳环，该环为不饱和的、部分饱和或芳香族的，杂原子选自1-3个O、S和N，
Y3选自CH和NR30；n为0-3：
G3选自氢和C1-C6烷基，任选地G与T一起可形成任选地被-V-W取代的C3-C6环烷基；
T3选自基团：
天然存在的α-氨基酸侧链，
和U4-Q4-V4-W4；
U4为任选地取代的选自C1-C6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6烯基-Q和C2-C6炔基-Q的二价基团；
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R38；
Q4不存在或选自：
-O-、-S(O)s-、-SO2-N(R30)-、-N(R30)-、-N(R30)-C( ＝ O)-、-N(R30)-C( ＝
O)-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-O-、-N(R30)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-het-、-C(＝O)-N(R30)-、-O-C(＝O)-N(R30)-、-PO(OR30)O-和-P(O)O-；
其中
s为0-2且
het为单环或双环的5、6、7、9或10元杂环，各环含有选自N、O和S的1-4个杂原子，其中杂环可以是饱和的、部分饱和或芳香族的，且任何N或S任选地可被氧化，杂环被0-3个R41取代；
V4不存在或为任选地取代的选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C0-C6烷基-C6-C10芳基和C0-C6烷基-het的二价基团；
其中任何烷基上的取代基为1-3个R38，且任何芳基或het上的取代基为1-3个R31；
W4选自以下基团：
氢、OR33、SR42、NR30R30、NH-C( ＝ O)-O-R43、NH-C( ＝ O)-NRnRn 、NH-C( ＝ O)-R43、NH-SO2-R37、NH-SO2-NR30R30、NH-SO2-NH-C( ＝ O)-R43、NH-C( ＝ O)-NH-SO2-R37、C( ＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C( ＝O)-NH-C(＝O)-NR30R30′、C( ＝O)-NH-SO2--R37、C( ＝ O)-NH-SO2-NR30R30 ′、C( ＝ S)-NR30R30 ′、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-NR37R37′、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-NR30R30′、SO2-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NR30R30′、O-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-SO2R46和O-SO2-R37；
R44选自C(＝O)-R45、C(＝O)-H、CH2(OH)和CH2O-C(＝O)-C1-C6烷基；
R38为R38′或被1-3个R38′取代的R38″；其中
R38′选自以下基团：
氢、卤素(F、Cl、Br、I)、氰基、异氰酸基、羧基、羧基-C1-C11烷基、氨基、氨基-C1-C8烷基、氨基羰基、甲酰氨基、氨基甲酰基、氨基甲酰氧基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、咪唑基、脲基、硫脲基、氰硫基、羟基、C1-C6烷氧基、巯基、磺酰氨基、het、苯氧基、苯基、苄酰氨基、甲苯磺酰基、吗啉代、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯啉基、咪唑基和吲哚基；
38
R ″选自以下基团：
C0-C10烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C10烯基-Q-C0-C6烷基、C0-C10炔基-Q-C0-C6烷基、C3-C11环烷基-Q-C0-C6烷基、C3-C10环烯基-Q-C0-C6烷基、C1-C6烷基-C6-C12芳基-Q-C0-C6烷基、C6-C10芳基-C1-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-het-C0-C6烷基、het-C0-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-C6-C12芳基和-Q-C1-C6烷基；
43
R 选自氢和取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C11环烷基、C3-C10环烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C6烷基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基和het，
38
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R 且任何芳基或het上的取代基为
31
1-3个R ；
31 40 41
R 选自R 和R ；
41
R 选自以下基团：
43 42 30 30
OH、OCF3、OR 、SR 、卤素(F、Cl、Br、I)、CN、异氰酸基、NO2、CF3、C0-C6烷基-NR R ′、
30 30 38
C0-C6烷基-C(＝O)-NR R ′、C0-C6烷基-C(＝O)-R 、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C6环烷基、C3-C6环烯基、C1-C6烷基-苯基、苯基-C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、苯基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、SO2-het、-O-C6-C12芳基、-SO2-C6-C12芳基、-SO2-C1-C6烷基和het，
其中任何烷基、烯基或炔基任选地被选自OH、卤素(F、Cl、Br、I)、硝基、氨基和氨基羰基的1-3个基团取代，且任何芳基或het上的取代基为1-2个羟基、卤素(F、Cl、Br、I)、CF3、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基和氨基；
m 30 30
R 选自S-C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-NR R ′、C1-C6烷基、卤素(F、Cl、Br、I)-C1-C6烷基、苄基和苯基；
30 43 43 43 43
R 选 自 以 下 基 团：R 、NH-C(＝ O)-O-R 、NH-C(＝ O)-R 、NH-C(＝ O)-NHR 、
46 43 37 43 43
NH-SO2-R 、NH-SO2NH-C(＝O)-R 、NH-C(＝O)-NH-SO2-R 、C(＝O)-O-R 、C(＝O)-R 、
43
C(＝O)-NHR 、
43 43 46
C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R 、C(＝O)-NH-C(＝O)-R 、C(＝O)-NH-SO2-R 、
37 37 37 43 43
C( ＝ O)-NH-SO2-NHR 、SO2-R 、SO2-O-R 、SO2-N(R )2、SO2-NH-C( ＝ O)-O-R 、
43 43
SO2-NH-C(＝O)-O-R 和SO2-NH-C(＝O)-R ；
30
R ′选自氢、羟基和取代或未取代的C1-C11烷基、C1-C11烷氧基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C11环烷基、C3-C10环烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C-6烷基、C6-C10芳基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基、het、C1-C6烷基羰基、C1-C8烷氧羰基、C3-C8环烷基羰基、C3-C8环烷氧羰基、C6-C11芳氧基羰基、C7-C11芳基烷氧羰基、杂芳基烷氧羰基、杂芳基烷基羰基、杂芳基羰基、杂芳基烷基磺酰基、杂芳基磺酰基、C1-C6烷基
38
磺酰基和C6-C10芳基磺酰基，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ，且任何芳
31
基、het或杂芳基上的取代基为1-3个R ；
30 30
R 和R ′与它们所连接的共同的氮一起可形成任选地被取代的选自吗啉基、哌嗪基、硫代吗啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、1，2，3，4-四氢-喹啉基，1，
38
2，3，4-四氢-异喹啉基、噻唑烷基和氮杂二环壬基的杂环，其中取代基为1-3个R ；
33
R 选自氢和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8
38
环烷基和苯甲酰基，其中任何烷基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基上的取代基为1-3个
40
R ；
40 43 42 43 43 30 30
R 选自OH、卤素(F、Cl、Br、I)、CN、异氰酸基、OR 、SR 、SOR 、NO2、CF3、R 、NR R ′、
30 43 43 43 30 30 43
NR C(＝O)-O-R 、NRC(＝O)-R 、C0-C6烷基-SO2-R 、C0-C6烷基-SO2-NR R ′、C(＝O)-R 、
43 43 30 30
O-C(＝O)-R 、C(＝O)-O-R 和C(＝O)-NR R ′，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基
38 31
为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为1-3个R ；
46
R 为取代或未取代的选自以下的基团：
C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、C3-C6环烯基、C0-C6烷基-苯基、苯基-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het和het-C0-C6烷基，
38
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为
31
1-3个R ；
45
R 为取代或未取代的选自以下的基团：羟基、C1-C11烷氧基、C3-C12环烷氧基、C8-C12芳烷氧基、C8-C12芳环烷氧基、C6-C10芳氧基、C3-C10烷基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧羰基烷氧基、C5-C10环烷基羰氧基烷氧基、C5-C10环烷氧羰氧基烷氧基、C5-C10环烷氧羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳基羰氧
30 30
基烷氧基、C5-C10烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R )(R )N(C1-C10烷氧基)-、
其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R38，且任何芳基或het上的取代基为
1-3个R31
及其药学上可接受的盐。
50.根据权利要求42所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂在治疗上可接受的制剂中经滴注、眼内植入、眼周植入、注射、口服、鼻内、局部或离子透入施用。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述注射施用是经眼内、玻璃体内、眼周、皮下、结膜下、眼球后或眼房内进行的。
52.根据权利要求42所述的方法，其中所述药学上可接受的制剂包括凝胶、乳膏、粉末、泡沫、晶体、脂质体、喷雾、聚合物微粒或纳米颗粒、生物可降解基质、液体悬浮液、溶液、悬浮液、软膏、包、生物可吸收植入物或眼插入物。
53.一种治疗受试者的糖尿病性视网膜病的方法，包括对所述受试者进行糖尿病性视网膜病的诊断测试；基于所述诊断测试的结果来确定所述受试者是否患有糖尿病性视网膜病；以及在诊断为所述糖尿病性视网膜病之后，向所述受试者施用在药学上可接受的制剂中的有效量的淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)拮抗剂。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述诊断测试是通过使所述受试者的眼睛成像或分析所述受试者的眼睛的生物样品进行的。
55.一种降低和/或预防患糖尿病的受试者的术后眼部炎症的方法，包括向需要的所述受试者施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂，从而降低和/或预防所述受试者眼睛的术后炎症。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述术后炎症是由于玻璃体切割术、激光凝固疗法、光动力疗法或LASIK导致的。
57.根据权利要求42、53或55所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂选自：
及其药学上可接受的盐和酯。
58.根据权利要求42、53或55所述的方法，其中所述LFA-1拮抗剂为以下化合物之一：
或其药学上可接受的盐和酯。
59.一种配制为用于眼部递送的药物组合物，包含权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体。
60.根据权利要求59所述的药物组合物，其中所述权利要求1的化合物为式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X或XI的化合物。
61.根据权利要求59所述的药物组合物，其中所述药物组合物适于局部施用。
62.根据权利要求59所述的药物组合物，其中所述药物组合物适于经注射施用。
63.根据权利要求59所述的药物组合物，其中药物组合物适于作为植入物施用。
用于治疗糖尿病性视网膜病的组合物和方法
背景技术
的损伤和退化的糖尿病并发症之一。该视觉功能丧失之后工作及个人功能的丧失对个体以
及个体周围社会整体具有严重的影响。几乎所有的糖尿病患者都显示出一定程度的糖尿病
性视网膜病，并且糖尿病患者数量逐渐增加，因此需要更有效的治疗视力丧失以及DR和相
关黄斑水肿的症状的方法。
发明内容
防所述受试者眼睛的黄斑水肿。
是否患糖尿病性视网膜病；以及在诊断为所述糖尿病性视网膜病之后，向所述受试者施用
在药学上可接受的制剂中的有效量的(LFA-1)拮抗剂。
一些实施方案中，LFA-1拮抗剂能结合与ICAM-1结合位点重叠的LFA-1αL亚单元中的高
亲和力结合位点。在本发明的其他实施方案中，LFA-1拮抗剂直接与LFA-1αL亚单元上的
ICAM-1的结合相竞争。在本发明的一些实施方案中，LFA-1拮抗剂为LFA-1与ICAM-1之间
相互作用的竞争性抑制剂。在本发明的一些实施方案中，所述LFA-1拮抗剂为LFA-1αL亚
单元上的ICAM-1的结合的变构拮抗剂。
周或眼内注射或植入来递送治疗剂。
稠剂。在本发明的其他实施方案中，治疗剂的制剂中使用PLGA微粒或纳米颗粒。
施用一次。在本发明的其他实施方案中，化合物每天至少施用一次。在本发明的其他实施方案中，化合物每周至少施用一次。在本发明的一些实施方案中，化合物每月至少施用一次。
的眼睛成像或分析受试者的眼睛的生物样品进行的。
包含抑制LFA-1和ICAM之间相互作用的治疗剂，该治疗剂为式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X或XI的化合物。在一些实施方案中，药物组合物适于局部施用。在一些实施方案中，药物组合物适于经注射施用。在一些实施方案中，药物组合物适于作为植入物施用。
闭塞和闭合为特征的。作用机理包括糖尿病诱导的血管炎症，导致白细胞和血小板堵塞血
管腔，随后周皮细胞和内皮细胞最终死亡。炎症过程引起的白细胞对血管壁的吸引和粘附
导致白细胞临时地粘附在内皮上(白细胞停滞)、释放毒性因子和损伤或杀死内皮细胞。受
损的内皮表面启动血小板粘附、聚积、微血栓形成、血管闭塞和局部缺血。内皮损伤的另一后果是血液-视网膜屏障(BRB)中的改变，其导致了血管通透性的增加。这可由在荧光素
血管造影术中的荧光素渗漏或通过光学相干断层摄影术(OCT)评估的视网膜增厚来进行
证明。该渗漏的后果可能是临床上显著的黄斑水肿和导致视网膜增厚的视网膜内脂蛋白的
沉积(硬性渗出物)。随着进程的发展，视网膜的神经节细胞损失，导致了视力丧失或失明。
由内皮细胞血管系统改变、周皮细胞死亡和毛细管闭塞导致的自动调整破坏和视网膜血流
降低是DR进展的标志，并导致了视网膜缺血的发展，其使得DR发展到更严重的增生期。
测，并且导致激光凝固治疗，以降低视力丧失的风险。由于大部分糖尿病性视网膜病患者同时也患有该病症，因此它是相关的临床干预目标。所有的这些损伤或退行性损伤可导致视
力的损害或甚至于完全丧失，并为治疗干预提供了目标。目前还没有有效的治疗选择。激
光凝固术包括使用激光烧灼眼睛的不同位置，并用于治疗许多新生血管形成相关病症。具
体地，新生血管形成通常使用散射或全视网膜激光凝固术进行治疗。但是，激光治疗可引起对应于治疗区域的永久性盲点。激光治疗还可引起持久或复发性的出血，增加视网膜脱落
的风险或诱发新生血管形成或纤维化。用于眼部相关病症的其他治疗选择包括温热疗法、
玻璃体切割术、光动力疗法、放射疗法、手术(例如去除过多的眼组织)等。但是，在绝大多数情况下，所有可获得的治疗选择均有有限的治疗效果、需要重复的、昂贵的操作，和/或与危险的副作用相关。
进展和/或逆转已经发生的损伤的有用的干预点。此外，BRB破坏和毛细管无灌注开始的
早期事件似乎是白细胞粘附到糖尿病视网膜血管系统上。
胞粘附和视网膜内皮细胞损伤和死亡。(A.M.Joussen，T.Murata，A.Tsujikawa，B.Kirchof，S-E.Bursell，A.P.Adamis“Leukocyte-Mediated Endothelial Cell Injury andDeath in the Diabetic Retina”(2001)A，J.Pathol.158(1)：147-162)。
内粘附分子-1(ICAM-1)的相互作用介导这些分子事件中的每一个。因此，本发明的LFA-1
拮抗剂可用于治疗该疾病中观察到的一种或多种病理症状。
胞/白细胞粘附、迁移和增殖过程的细胞外受体结构域的分子，导致炎症反应的级联。在优选的实施方案中，该方法提供了如以下详细描述的体外和体内抗炎作用，并且可用于治疗
DR。
的一组白整联蛋白中的一种，并被认为是与作为配体的多种ICAM相作用的淋巴整联蛋白。
破坏这些相互作用，因此破坏免疫/炎症反应，降低了炎症，特别是眼睛的炎症。
蛋白之间的相互作用在免疫系统的功能中起作用。免疫过程例如抗原递呈、白细胞介导的
细胞毒性、T细胞介导的细胞毒性和白细胞跨内皮迁移(血细胞渗出)可能需要由ICAM与
白整联蛋白之间相互作用介导的细胞粘附。
因子/趋化因子-激活了在白细胞上组成型表达的整联蛋白。血管内皮细胞还响应于相同
细胞因子/趋化因子的存在上调ICAM-1。当翻滚的白细胞接近激活的内皮细胞时，它们的
进程首先被这些上调的ICAM-1受体减缓。这之后是LFA-1与在血管内皮细胞表面表达的
ICAM-1之间的配体/受体作用，其进一步阻止了淋巴细胞的翻滚。然后淋巴细胞变平，并发生游出。该过程对于通过血管内皮的淋巴细胞游出以及淋巴细胞从外周血向淋巴结的运输
都是重要的。但是，在糖尿病性视网膜病(DR)中，如上所述，白细胞停滞是损害和/或杀死局部区域内皮细胞的细胞毒性因子释放的最初触发事件。该损伤导致血管渗漏和炎症，其
持续和/或扩大有害的反应。
导致了T细胞的激活。LFA-1与ICAM-1之间的相互作用似乎还向静息T细胞提供了共刺激
信号，如图3所示。CD4+细胞增殖和细胞因子合成是由该相互作用介导的，作为炎症反应的一部分。
相互作用)。同时，由于LFA-1在涉及许多信号传导途经的ICAM家族(ICAM-1、ICAM-2和
ICAM-3)内具有几种配体，在本发明的一些实施方案中，希望选择性地调控这些相互作用。
在本发明的一些实施方案中，提供了干扰LFA-1与ICAM-1、ICAM-2和/或ICAM-3结合的治
疗剂，从而调控每对相互作用的各自的信号传导途经。
晚期阶段。例如，在圈合和跨内皮迁移之前，内皮细胞或白细胞上的ICAM-1或LFA-1的上
调(激活)可用在此描述的方法和组合物进行调控。本发明可用于调控在白细胞运输过程
中激活ICAM-1和LFA-1的细胞因子或趋化因子的表达、调控细胞因子或趋化因子的转运、
阻止捕获的白细胞的游出、通过涉及损伤或炎症部位白细胞增殖的其他机理调控信号传导
等。
ICAM。更特别地，本发明提供了结合LFA-1的治疗剂，以抑制LFA-1与ICAM-1、ICAM-2和/
或ICAM-3的结合，因此作为LFA-1拮抗剂。在一些实施方案中，本发明提供的治疗剂在与
ICAM-1结合位点重叠的αL亚单元中的高亲和力结合位点处结合，ICAM-1为LFA-1的直接
竞争性拮抗剂。在一些实施方案中，本发明提供的治疗剂抑制LFA-1与ICAM-1之间的相互
作用，但是不完全阻断与ICAM-1结合位点重叠的αL亚单元中的高亲和力结合位点，并且
是LFA-1的竞争性的但不是直接竞争性的拮抗剂。在一些实施方案中，本发明提供的治疗
剂在与ICAM-1结合位点重叠的αL亚单元中的高亲和力位点以外的位点处结合，并且是变
构拮抗剂。在一些实施方案中，本发明提供的治疗剂为变构拮抗剂，并且是LFA-1的竞争性的但不是直接竞争性的拮抗剂。在本发明的一些实施方案中，所述治疗剂可用于治疗糖尿
病性视网膜病和与该疾病相关的病症。
原子。在另外其他的实施方案中，本发明中使用的烷基、烯基和炔基包含约1-8个脂肪族碳原子。在另外其他的实施方案中，本发明中使用的烷基、烯基和炔基包含约1-6个脂肪族碳原子。在另外其他的实施方案中，本发明中使用的烷基、烯基和炔基含约1-4个碳原子。因此示例性的脂肪族基团包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、烯丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、异戊基、叔戊基、正己基、仲己基部分等，同时这些基团可具有一个或多个取代基。
包含约1-8个脂肪族碳原子。在另外其他的实施方案中，烷基包含约1-6个脂肪族碳原子。
在另外其他的实施方案中，烷基包含约1-4个脂肪族碳原子。烷氧基的例子包括但不限于
甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等。
肪族碳原子。在某些其他的实施方案中，烷基包含约1-10个脂肪族碳原子。在另外其他的
实施方案中，本发明中使用的烷基包含约1-8个脂肪族碳原子。在另外其他的实施方案中，烷基包含约1-6个脂肪族碳原子。在另外其他的实施方案中，烷基包含约1-4个脂肪族碳
原子。烷硫基的例子包括但不限于甲基硫基、乙基硫基、丙基硫基、异丙基硫基、正丁基硫基等。
外其他的实施方案中，本发明中使用的烷基包含约脂肪族碳原子。在另外其他的实施方案
中，烷基包含约1-6个脂肪族碳原子。在另外其他的实施方案中，烷基包含约1-4个脂肪族
碳原子。烷基氨基的例子包括但不限于甲基氨基等。
烷基杂芳基；杂烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；芳基硫基；
杂烷基硫基；Rx独立地包括但不限于脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上述和此处的任何脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可为取代或未取代的、支链或非支链的、饱和或不饱和的，并且其中上述和此处的任何芳基或杂芳基取代基可为取代或未取代的。常用取
代基的其他例子通过此处描述的实施例中所示的具体实施方案来阐明。
电子的数目为(4n+2)，其中n为整数)的平面环。不满足一个或所有这些芳香族性标准的
单环或多环不饱和部分在此被定义为“非芳香族的”并包括在术语“脂环族”中。
选自O、S和N的杂原子代替环碳原子。在某些实施方案中，术语“杂芳香族部分”指包含至少一个杂原子、在每个环原子上具有垂直于环平面的p-轨道并且满足休克尔规则(环中的
π电子数为(4n+2)，其中n为整数)的平面环。
香族部分。因此，如本文中所用的短语“芳香族或杂芳香族部分”和“芳香族、(杂烷基)芳香族、-(杂烷基)杂芳香族和(杂烷基)杂芳香族的”可互换。取代基包括但不限于任何
前述取代基，例如描述的用于脂肪族部分或用于在此公开的其他部分的取代基，造成形成
稳定的化合物。
选自S和N的其他杂原子；其余的环原子为碳，该基团通过任何环原子连接到分子的其它部
分上，例如，如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、噻吩基(thiophenyl)、呋喃基、喹啉基、异喹啉基等。
于：脂肪族；脂环族；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；杂烷基芳基；烷基杂芳基；杂烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；芳基硫基；杂烷基硫基；杂芳基硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝O)Rx；-C(＝O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中每次出现的Rx独立地包括但不限于脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上述和在此描述的任何脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可为取代或未取代的、支链或非支链的、饱和或不饱和的，且其中上述和在此描述的任何芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、-(烷基)芳基或-(烷基)杂芳基取代基
可为取代或未取代的。此外，还应该理解，任何两个相邻的基团连接在一起可以代表4、5、6或7元取代或未取代的脂环族或杂环部分。常用取代基的其它例子在本文所述实施例所示
的具体实施方案中说明。
2CH3；-C(＝O)Rx；-C(O)N(Rx)2；-OC(O)Rx；-OCO2Rx；-OC(O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中每次出现的Rx独立地包括但不限于脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上述和此处描述的任何脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以为取代或未取代的、支链或非支链的、饱和或不饱和的，而且其中上述和此处描述的任何芳香族、杂芳香族、芳基或杂芳基取代基可以为取代或未取代的。常用取代基的其它例子在本文所述
实施例所示的具体实施方案中说明。
硅原子的脂肪族链。杂脂肪族部分可以为直链或支链、饱和或不饱和的。在某些实施方
案中，杂脂肪族部分通过其上的一个或多个氢原子独立地被一个或多个包括但不限于
下述基团的部分代替而被取代：脂肪族；脂环族；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；烷基杂芳基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷基硫基；
芳基硫基；杂芳基硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH
2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝ O)Rx；-C(C＝O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝ O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中每次出现的Rx独立地包括但不限于脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上述和此处描述的任何脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以为取代或未取代的、支链或非支链的、饱和或不饱和的，而且上述和此处描述的任何芳香族、杂芳香族、芳基或杂芳基取代基可以为取代或未取代的。常用取代基的其它例子在本文所述实施例所示的具体实施方案中说明。
其中环体系任选地被一个或多个本文中定义的官能团取代。在某些实施方案中，术语“杂
环烷基”、“杂环”或“杂环的”指其中至少一个环杂原子选自S和N(其中氮和硫杂原子可以任选地被氧化)的非芳香族5、6或7元环或多环基团，其包括但不限于双环或三环基团，
包括具有1-3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的稠合六元环，其中(i)各5元环具有0-2
个双键，各6元环具有0-2个双键，各7元环具有0-3个双键，(ii)氮和硫杂原子可以任选
地被氧化，(iii)氮杂原子可以任选地被季铵化，且(iv)上述任何杂环可以与芳环或杂芳
环稠合。代表性的杂环包括但不限于杂环，例如呋喃基、吡喃基、吡咯基、噻吩基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑基、异噁唑烷基、二噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、三唑基、噻三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吗啉基、噻唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、二噻唑基、二噻唑烷基、四氢呋喃基，及其苯并稠合的衍生物。在某些实施方案中，使用“取代的杂环或杂环烷基或杂环”基团，且如本文中所用的，其指上述定义的杂环或杂环烷基或杂环基，其上的一个、两个或三个氢原子独立地被下述但并不限于此的基团取代：脂肪族；脂环族；杂脂肪族；杂环；芳香族；杂芳香族；芳基；杂芳基；烷基芳基；杂烷基芳基；烷基杂芳基；杂烷基杂芳基；烷氧基；芳基氧；杂烷氧基；杂芳基氧；烷基硫基；芳基硫基；杂烷基硫基；杂芳基硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(C＝O)Rx；-CC＝O)N(Rx)2；-OC(O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中每次出现的Rx独立地包括但不限于脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、芳香族、杂芳香族、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂烷基芳基或杂烷基杂芳基，其中上述和此处所述的任何脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂环、烷基芳基或烷基杂芳基取代基可以为取代或未取代的、支链或非支链的、饱和或不饱和的，而且其中上述和此处所述的任何芳香族、杂芳香族、芳基或杂芳基可以为取代或未取代的。此外，应该理解，上述和此处所述的任何脂环族或杂环部分可以包括与之稠合的芳基或杂芳基部分。
间。
(Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、半胱氨酸(Cys)和甲硫氨酸(Met)。
布。在另外的某些实施方案中，生物电子等排体显示类似的生物学性质。在优选的实施方
案中，生物电子等排体具有类似的分子形状和体积；具有大约相同的电子分布；并且显示
类似的生物学性质。
的化合物的任何其他加合物或衍生物，或其代谢物或残余物。因此，药学上可接受的衍生物尤其包括前药。前药是通常具有显著降低的药理活性的化合物衍生物，其含有在体内易于
除去而产生作为药理活性物质的母体分子的另外部分。前药的一个例子是酯，其在体内裂
解产生目标化合物。各种化合物和物质的前药以及衍生母体化合物产生前药的方法是已知
的，而且可以用于本发明。下文中将详细讨论某些示例性药物组合物和药学上可接受的衍
生物。
合物的最后分离和纯化过程中就地制备，或者如下文中一般性描述的，通过使游离碱或游
离酸的官能团与适当的试剂反应而单独制备。例如，游离碱官能团可以与适当的酸反应。此外，当本发明的化合物带有酸性部分时，其适当的药学上可接受的盐可以包括金属盐，例如碱金属盐，如钠或钾盐；和碱土金属盐，如钙或镁盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的例子为氨基与无机酸形成的盐，所述无机酸例如为盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或与有机酸形成的盐，所述有机酸例如为醋酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、或丙二酸，或利用本领域采用的其它方法，例如离子交换法制备的盐。其它药学上可接受的盐包括己二
酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、栉酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐等。如果适当，其它药学上可接受的盐包括：无毒铵盐、季铵盐，和使用抗衡离子形成的胺阳离子，所述抗衡离子例如为卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、磺酸根和芳基磺酸根。
术语“前药”指在体内迅速转化得到上式的母体化合物的化合物，例如通过在血液中水解
进行转化。T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as NovelDelivery Systems，A.C.S.专题
论文集系列14卷，和Edward B.Roche，ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，
AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中提供了详尽的论述，该两篇文献在此引入作为参考。
性结合试验进行识别，该竞争性结合试验如S.M.Keating，K.R.Clark，L.D.Stepanich，
F.Arellano，C.P.Edwards，S.C.Bodary，S.A.Spencer，T.R.Gadek，J.C，Marsters Jr.，M.H.Beresini，“Competition between intercellualr adhesion molecule-1and a small molecule antagonist for a common binding site on the αlsubunit of lymphocyte
function-associated antigen-1.”(2006)ProteinScience，15：290-303所述。与ICAM-1结合位点重叠的LFA-1上的该高亲和力位点已显示包含LFA-1αL亚单元的结构域I的
MIDAS基序。使用该试验设计还能识别变构拮抗作用，该作用可以是竞争性的但不是直接竞争性的。
大化特异性的高亲和力交联，需要在辐射之前通过凝胶过滤样品来去除未结合的或结合弱
的化合物5(图5，泳道e与f，和g与h)。在不进行凝胶过滤的情况下，化合物5与LFA-1α
亚单元、β亚单元和异二聚体显著交联(条带在大约200000)，而在进行凝胶过滤的样品中
未观察到非特异性的交联(数据未显示)。在进行凝胶过滤的情况下，化合物5仅与αL亚
单元特异性交联(图5，泳道c和g)。此外，在温育过程中化合物3的存在显著减少了氚向
αL亚单元中的引入(图5，泳道e与g)。类似地，在化合物3存在的情况下，在不进行凝
胶过滤的情况下，氚向αL亚单元、β2亚单元和异二聚体中的引入略有减少(图5，泳道f
与h)。当使用凝胶过滤的分离的、结构完整的αL或β2亚单元的样品时，化合物5不发生
交联(数据未显示)。因此，凝胶过滤以后交联所需的高亲和力结合位点是由完整的LFA-1
异二聚体提供的。
两个序列，第一个开始于残基1(序列为YNLDVRGARSFS(SEQ ID NO 1))，第二个开始于残基
30(序列为GVIVGAPGEGNST(SEQ ID NO 2))。通过它们在SDS-PAGE上的大小判断出这两
个肽的长度为约500个氨基酸(50-60kDa)；该片段大小与紧挨的两个预测的羟胺切割位点
(N-G)N507和N530一致。亚单元的C末端部分未引入标记。
生型αL一起转染到293细胞中，并且检测化合物2B与转染的细胞的结合(图6)。化合
物2B显示出与野生型αL转染的细胞具有显著结合，但是相对于与假(β2)转染的细胞的
结合，化合物2B与用缺少结构域I的αL转染的细胞无显著结合。还检测了转染子粘附
ICAM-1-Ig的能力，正如预期的，缺少结构域I的LFA-1转染的细胞和假转染子显示出不能
辨别的背景结合水平，而野生型αL转染的细胞显示出强的粘附(图6B)。通过评估一组
LFA-1抗体与转染的细胞之间的结合表明，除了丧失定位(mapped)到结构域I的抗体的结
合以外，LFA-1异二聚体看起来在缺少αL结构域I的转染的细胞中是完整的(数据未显
示)。
MIDAS基序。
能结合缺少结构域I的LFA-1，其中ICAM-1结合位点位于该结构域中。此外，A-286982变构
修饰ICAM-1-Ig和化合物2B的结合的能力同它们的结合位点与LFA-1α亚单元的结构域
I的IDAS基序中的A-286982结合位点紧密靠近相一致。化合物5与LFA-1α链的选择性
光化学交联将其结合位点定位在该亚单元的残基30-507内。上述所有发现与位于LFA-1α
链的结构域I中的单个高亲和力小分子结合位点相一致。
的蛋白质和交联模式。当样品在辐射之前被凝胶过滤以去除未结合或结合弱的分子时，仅
观察到α亚单元的高亲和力标记。但是，当不进行凝胶过滤步骤时，对化合物5与LFA-1的
复合物的辐射造成了与α亚单元的高强度的交联，以及与β亚单元中低亲和力位点的低
强度的交联，其中β亚单元与化合物5的复合物太弱以致于在凝胶过滤后不能存留。在这
两种情况下，观察到的交联被大量过量(290μM)的化合物3部分抑制(图5，泳道e和g，f
和h)，表明与这两个位点的结合具有特异性的特性。使化合物5与分离的α或β亚单元
交联的尝试不能产生能够在凝胶过滤过程后存留的高亲和力复合物。因此，看起来由化合
物3代表的该类化合物的高亲和力竞争性结合需要完整的全长LFA-1异二聚体的存在。在
LFA-1亚单元或分离的结构域I的构建体中捕获该结合位点的尝试使得LFA-1对ICAM-1和
化合物3的小分子类似物(例如XVA143)的亲和力减弱。特别值得关注的是，存在次要的
LFA-1异二聚体条带，该条带在不进行凝胶过滤时才出现(图5，条带＞200000道尔顿)。
由考马斯蓝染色和放射自显影法鉴定的LFA-1条带的强度与稳定异二聚体的β链上的第
二位点的低亲和力结合相一致。
结合的直接竞争性抑制。但是，负责化合物3稳定LFA-1的β亚单元结合位点可以与低亲
和力β亚单元交联位点相同。
合位点形成足以在凝胶过滤过程后存留的稳定(例如Kd＜25nM)的复合物。在本文报告
的结合试验中已经表征该小分子结合位点与ICAM-1结合位点重叠，并且与以下特性相关：
化合物3和4对LFA-1/ICAM-1结合的强烈抑制(化合物4IC50＝1.4nM)；对体外LFA-1诱
导的淋巴细胞增殖的强烈抑制(化合物4IC50＝3nM)；和对体内免疫系统应答的抑制。第
二个位点是参与在SDS-PAGE下稳定LFA-1异二聚体的β亚单元中的较低亲和力结合位点
(例如Kd＞1μM)。该位点的动力学性质更强(即较快的解离速率)，且在凝胶过滤/光分
解过程后不能存留。该第二低亲和力位点的特征与β亚单元的I样结构域中α/βI样变
构拮抗剂结合位点的特征相同。本文描述的ICAM-1模拟物与LFA-1β亚单元的低亲和力
结合(假定与I样结构域结合)可能是由于结构域I和I样结构域之间的序列同源性，特
别是MIDAS基序的相似性和它们对于该类拮抗剂共有的羧酸部分的亲和力。考虑到整联蛋
白β2家族(包括MAC-1)共有该亚单元，化合物对于β2亚单元中I样结构域的亲和力必
需减弱，以选择LFA-1特异性拮抗剂。
的ICAM-1结合位点重叠。这与提出的对ICAM-1表位的模拟一致，但是与它们作为LFA-1/
ICAM-1的αβI样变构拮抗剂的任何结论不一致。这些ICAM-1模拟物与β2整联蛋白亚
单元的结合虽然亲和力较低，但是提出了ICAM-1自身是否结合在I样结构域的第二位点上
作为反馈机理的一部分的问题。
本发明的一个优选实施方案是使用LFA-1的选择性抑制剂，其可提供治疗安全性的优点。
更可靠，这是由于LFA-1被抗体捕获而不是直接包被在ELISA板上。该试验是通过添加1/5
系列稀释的化合物3(-●-)、化合物2A(-▲-)、A-286982(-◆-)和sICAM-1 然
后再与ICAM-1-Ig(A)或化合物2B(B)在含捕获的LFA-1的板上温育而进行的。显示的数
据为一次试验中两个板的平均值，且是几个独立测量的代表。实线为数据的拟合。IC50值
(nM)在图例中提供。
高10倍的IC50值。A-286982和sICAM-1抑制ICAM-1-Ig与LFA-1的结合，但是其IC50值
比化合物3的IC50值高100倍以上。
效力与ICAM-1-Ig结合的抑制剂的效力类似。化合物3、化合物2A和sICAM-1抑制化合物
2B与LFA-1的结合，其IC50值分别为3、56和1200nM。A-286982不是抑制而是增强化合物
2B与LFA-1的结合，其证据是吸光度值暂时增加，在下降之前达到约4μM的最大效果。
所示(在LFA-1与ICAM-1的ELISA和LFA-1与小分子的ELISA中拮抗剂竞争的IC50值的
相关性)。一组不同的化合物(4个肽、5个小分子和sICAM-1)与化合物2B相竞争的IC50
值相对于在与ICAM-1-Ig竞争结合LFA-1中确定的IC50值作图。斜率为0.964，y-截距为
0.237，R＝0.940。每个数据点为两个板的IC50值的平均值，在对于该不同组的化合物(包
括sICAM-1、化合物2A和3)的两个配体结合测定中的每一个中，在5个log单位的效力中，
在竞争IC50值之间存在良好的相关性(R＝0.94)。在使用ICAM-1-Ig和化合物2B作为配
体的两个拮抗剂竞争性ELISA之间的共同的效力趋势表明：各化合物以机理上类似的方式
破坏了ICAM-1和小分子配体的结合。这种抑制效力的相似性表明：ICAM-1-Ig和化合物2B
与LFA-1上的相同的位点结合。因此，本发明的化合物为LFA-1的竞争性拮抗剂。
以消除的，但是需要在存在浓度增加的直接竞争性抑制剂的情况下增加配体的量。直接竞
争性化合物3、变构拮抗剂A-286982和sICAM-1对ICAM-1-Ig和化合物2B与LFA-1的结
合曲线的影响示于图9中，作为显示直接竞争的拮抗剂的例子。在LFA-1/ICAM-1ELISA和
LFA-1/小分子ELISA中，在不存在(-◇-)或存在拮抗剂的情况下滴定ICAM-1-Ig(A、C、E)
或化合物2B(B、D、F)。以两倍稀释添加拮抗剂，起始为2.4μM(A)和2.7μM(B)的sICAM-1、
0.040μM(C)和0.10μM(D)的化合物3和20μM(E)和50μM(F)的A-286982。拮抗剂浓度
的顺序为-□-(添加的最低拮抗剂浓度)、-Δ-、-○-、-◆-、-■-、-▲-至-●-(最
高的拮抗剂浓度)。该数据的拟合如实线所示。显示的数据来自一个板中，并代表至少两
个试验。(注释：A-286982(F)导致化合物与LFA-1的结合增加)。相反，变构抑制剂通过
降低曲线向右偏移的最大结合或饱和可以改变配体结合曲线。如图9A所示，当存在浓度增
加的sICAM-1时，ICAM-1-Ig结合曲线明显会向右偏移至较高的EC50值。此外，正如所预期
的，当同一天然配体的两种分子形式直接竞争与受体上一个位点的结合时，在存在和不存
在sICAM-1时观察到相同最大程度的ICAM-1-Ig与LFA-1的结合。类似地，增加化合物3
的浓度还使ICAM-1-Ig的结合偏移至较高的EC50值，最大ICAM-1-Ig结合具有最小的变化
(图9C)。尽管在存在竞争性拮抗剂时配体结合曲线的向右偏移通常是平行的，但也不总是
这样。在存在或不存在化合物3的情况下，LFA-1/ICAM-1-Ig结合曲线的不平行的斜率可
能是由于在使用该化合物的异源配体结合ELISA条件下不能够实现完全平衡。在配体结合
ELISA的LFA-1/化合物2B形式中，增加化合物3的浓度还明显地使化合物2B结合曲线偏
移至较高的EC50值，且最大结合没有降低(图9D)。增加sICAM-1的浓度也显示出类似的效
果(图9B)，尽管曲线的偏移程度受限于可达到的最大sICAM-1浓度2.7μM。因此，sICAM-1
和化合物3对ICAM-1-Ig和化合物2与LFA-1结合的影响是上述直接竞争的特征。
与LFA-1的最大结合随着A-286982浓度的增加而显著降低。随着A-286982浓度的增加，
最大结合的降低和配体结合曲线的向右偏移反映了如上所述的变构抑制。A-286982导致
配体亲和力和结合能力都降低；这表明A-286982为ICAM-1-Ig结合的不可克服的拮抗剂。
相反，在LFA/小分子ELISA中，微摩尔浓度A-286982的存在使得化合物2B结合曲线向较
低的EC50值偏移，且看起来提高了化合物2B与LFA-1的结合(图9F)。A-286982对化合物
2B和ICAM-1-Ig结合的相反影响可能是由于与LFA-1上的IDAS位点结合的化合物的已知
变构效应。A-286982结合数据用于表明在该方法中证明的结合试验中对小分子和蛋白质配
体结合LFA-1的变构抑制。
占有的结果，且最大的结合在存在拮抗剂时未改变。在Schild分析中，剂量比为存在拮抗
剂与不存在拮抗剂时的EC50值比，且是导致等活性响应的配体浓度的量度。确定拮抗剂各
浓度的该剂量比，Schild回归的作图示于图10中。Schild回归中斜率为1的线性响应表明
拮抗剂的抑制是直接竞争性的和可逆的。在不导致最大结合降低的变构抑制剂的情况下，
Schild分析将产生非线性关系和/或显著偏离1的斜率。sICAM-1和化合物3的Schild
回归示于图10中，分别具有相当的斜率1.26和1.24。LFA-1/ICAM-1配体结合ELISA中
s-ICAM-1(-▲-)和化合物3(-●-)拮抗作用的Schild回归分别根据图5(A)和(C)中
的数据进行作图。化合物3的图线的斜率为1.24，y-截距为10.9，R＝0.99832。sICAM-1
的图线的斜率为1.26，y-截距为8.51，R＝0.99131。尽管Schild分析要求斜率接近1的
线性回归以表明直接竞争性抑制，但是在大量的文献中没有关于什么范围的Schild值是
可接受的教导。1.24和1.26的斜率落于用于支持竞争性结合结论的许多发表的Schild值
的范围内，因此，并不认为这些斜率值显著不同于1。回归作图的线性以及相关性斜率的相似性与配体(ICAM-1-Ig)和两个拮抗剂(sICAM-1和化合物3)以相似方式结合相同位点是
一致的。
经研究了抗CD11a MAb对体外的许多T细胞依赖性免疫功能和体内的多种免疫应答的影
响。抗CD11aMAb在体外抑制T细胞活化(参见Kuypers T.W.，Roos D.1989″Leukocyte
membrane adhesion proteins LFA-1，CR3 and p150，95：areview of functional and
regulatory aspects ″ Res.Immunol.，140：461-465；Fischer A，Durandy A，Sterkers G，Griscelli C.1986“Roleof the LFA-1 molecule in cellular interactions
required for antibodyproduction in humans”J.Immunol.，136，3198)、细胞 毒性T
淋巴细胞对靶细胞的裂解(Krensky et al.，同上)、免疫偶联物的形成(SandersVM，
Snyder JM，Uhr JW，Vitetta ES.，“Characterization of the physicalinteraction
between antigen-specific B and T cells”.J.Immunol.，137：2395(1986)；Mentzer
SJ，Gromkowski SH，Krensky AM，BurakoffSJ，Martz E.1985“LFA-1 membrane molecule in the regulation ofhomotypic adhesions of human B lymphocytesn”J.Immunol.，
135：9))和T细胞与血管内皮的粘附(Lo SK，Van Seventer GA，Levin SM，WrightSD.，
Two leukocyte receptors(CD11a/CD18 and CD11b/CD18)mediatetransient adhesion to endothelium by binding to different ligands.，J.Immunol.，143：3325(1989))。两种抗CD11a MAb-HI11和G43-25B可从Pharmingen/BD Biosciences购得。此外，包括F8.8、
CBR LFA 1/9、BL5、May.035、TS1/11、TS1/12、TS1/22、TS2/14、25-3-1、MHM2和依法珠单抗的研究评价了这些抗体占据的LFA-1上的结合位点的范围。参见Lu，C；Shimaoka，M.；
Salas，A.；Springer，T.A.2004，“TheBinding Sites for Competitive Antagonistic，Allosteric Antagonistic，andAgonistic Antibodies to the I Domain of Integrin
LFA-1”J.Immun.173：3972-3978及其中引用的文献。已显示在抗LFA-1抗体中，依法珠单
抗为LFA-1的直接竞争性拮抗剂。
糖尿病性视网膜病。美国专利No.5,843,885描述了使用双肽降低LFA-1与ICAM-1之间的
相互作用，第一个是ICAM-1的调节剂，第二个是具有来自LFA-1的序列的阻断肽。美国专
利No.6,630,447中描述了环肽作为LFA-1与ICAM-1之间相互作用的抑制剂。
为最高约5000Da，在一些实施方案中最高约2000Da，在其他的实施方案中，最高约1000Da。
基(其中m为0-6)、-CH(R )(OR )、-CH(R )(NHR )、U-T-Q或任选地被U-T-Q取代
的脂肪族、脂环族、杂脂肪族或杂脂环族部分；其中U可不存在或为下述之一：-O-、
1A 1A 1A 1A 1A
-S(O)0-2-、-SO2N(R )、-N(R )-、-N(R )C( ＝ O)-、-N(R )C( ＝ O)-O-、-N(R )C( ＝
1B 1A
O)-N(R )-、-N(R )-SO2-、-C(＝O)-、-C( ＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳 基、杂 芳基、烷
1A 1A 1E
基芳 基、烷基 杂芳 基、-C(＝O)-N(R )-、-OC(＝O)N(R )-、-C(＝N-R )-、-C( ＝
1E 1E 1A 1E 1A 1A 1E 1A
N-R )-O-、-C(＝N-R )-N(R )-、-O-C(＝N-R )-N(R )-、-N(R )C(＝N-R )-、-N(R )C(＝
1E 1A 1E 1B 1A 1A
N-R )-O-、-N(R )C(＝N-R )-N(R )-、-P(＝O)(OR )-O-或-P(＝O)(R )-O-；其中T不存
在或为脂肪族、杂脂肪族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；Q为氢、卤素、氰基、
1B 1B 1B 1B 1B
异氰酸基(isocyanate)、-OR 、-SR 、-N(R )2、-NHC(＝O)OR 、-NHC(＝O)N(R )2、-NHC(＝
1B 1B 1B 1B 1B
O)R 、-NHSO2R 、NHSO2N(R )2、-NHSO2NHC(＝O)OR 、-NHC(＝O)NHSO2R 、-C(＝O)NHC(＝
1B 1B 1B 1B
O)OR 、C(＝O)NHC( ＝O)R 、-C(＝ O)NHC(＝O)N(R )2、-C(＝O)NHSO2R 、-C(＝ O)
1B 1B 1B 1B 1B 1B
NHSO2N(R )2、C(＝S)N(R )2、-SO2R 、-SO2OR 、-SO2N(R )2、-SO2-NHC(＝O)OR 、-OC(＝
1B 1B 1B 1B 1B
O)-N(R )2、-OC(＝O)R 、-OC(＝O)NHC(＝O)R 、-OC(＝O)NHSO2R 、-OSO2R ，或脂肪族、
1 2
杂脂肪族、芳基或杂芳基部分，或其中R 和R 一起为脂环族或杂环部分，或一起为
NRG2-、-CO-、-SO-、-SO2-、C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、C(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，且RG1和RG2独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；
O)-、-NR C(＝O)-或-SO2NR -，且R 和R 独立地为氢、脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；或任何两个相邻的出现一起代表脂环族、杂脂环族、芳基或杂芳基部分；
L3
地任选地被-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NR -、-OC(＝O)-、-OC(＝
L3 L3 L4 L3 L4 L3 L3 L3 L4
O)NR -、-NR NR -、-NR NR C(＝O)-、-NR C(＝O)-、NR CO2-、NR C(＝O)NR -、-S(＝O
L3 L3 L3 L4 L3 L3 L4
)-、-SO2-、-NR SO2-、-SO2NR 、-NR SO2NR 、-O-、-S-或-NR -代替；其中每次出现的R 和R独立地为氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或酰基；或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳L1 L2
基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基部分；且每次出现的R 和R 独立地为氢、羟基、保护的羟基、氨基、保护的氨基、硫代、保护的硫代、卤素、氰基、异氰酸基、羧基、羧基烷基、甲酰基、甲酰氧基、叠氮基、硝基、脲基、硫脲基、氰硫基、烷氧基、芳氧基、巯基、磺酰氨基、苄酰氨基、甲苯磺酰基，或脂肪族、脂环族、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、烷基芳基或烷基杂芳基L1 L2
部分，或其中一次或多次出现的R 和R 一起或者与V、W、X、Y或Z中的一个一起形成脂环
族或杂环部分或形成芳基或杂芳基部分。
氧代(＝O)、硫代(＝S)、氨基、脒、胍、硝基、烷基或烷氧基取代的5或6元非芳香族杂环。
在更优选的实施方案中，Cy为任选地被羟基、氧代、硫代、Cl、C1-4烷基(优选甲基)或C1-4烷酰基(优选乙酰基、丙酰基或丁酰基)取代的5元非芳香族杂环。更优选地，非芳香族杂环
包括一个或多个杂原子(N、O或S)，且任选地被羟基、氧、巯基、硫、甲基、乙酰基、丙酰基或丁基取代。在特别的实施方案中，非芳香族杂环包括至少一个氮原子，且任选地被甲基或乙酰基取代。在特别优选的实施方案中，非芳香族杂环选自任选地被羟基、氧代、巯基、硫代、烷基或烷酰基取代的哌啶、哌嗪、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、噁唑烷、噻唑烷。在最优选的实施方案中，Cy为选自四氢呋喃-2-基、噻唑烷-5-基、噻唑烷-2-酮-5-基和噻唑烷-2-硫
酮-5-基和吡咯烷的非芳香族杂环。在优选的实施方案中，Cy为任选地被羟基、巯基、卤素(优选F或Cl)、氧代(＝O)、硫代(＝S)、氨基、脒、胍、硝基、烷基或烷氧基取代的5或6
元芳香族碳环或杂环。在更优选的实施方案中，Cy为任选地被羟基、氧代、硫代、Cl、C1-4烷基(优选甲基)或C1-4烷酰基(优选乙酰基、丙酰基或丁酰基)取代的5元芳香族碳环或
杂环。更优选地，芳香族或杂环包含一个或多个杂原子(N、O或S)，且任选地被羟基、氧代、巯基、硫代、甲基、乙酰基、丙酰基或丁基取代。
10 10
的实施方案中，X2为-CH2-NR -C(O)-，其中其羰基-C(O)-部分邻近(即共价结合)Cy，且R
为烷基，如甲基，或更优选地为H。
10 10 10
H-C(O)-NR -CH2-、-CH2-NR -C(O)-、-C(O)-NR -CH2-、-CH(OH)-(CH2)2-、-(CH2)2-CH(OH)-、-(C
10 10 10 16 10
H2)3-、-C(O)-NR -CH(R7)-C(O)-NR -、-NR -C(O)-CH(R )-NR -C(O)-、-CH(OH)-CH2-O-或-C
10 16
H(OH)-CF2-CH2-，其中各R 独立地为H或烷基，且R 为氨基酸侧链。优选的氨基酸侧链包
括非天然存在的侧链，例如苯基，或天然存在的侧链。优选的侧链为Phe、Tyr、Ala、Gln和
10
Asn的侧链。在优选的实施方案中，L2为-CH＝CH-C(O)-NR -CH2-，其中其-CH＝CH-部分
10
邻近(即共价结合)K。在其他优选实施方案中，L2为-CH2-NR -C(O)-，其中其亚甲基部分
(-CH2-)邻近K。
受的盐或酯。在优选的实施方案中，R 为H、苯基或任选地被碳环(例如苯基)取代的C1-4
5 5
烷氧基。在特定的实施方案中，R 为H。在另一特定的实施方案中，R 为甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、苯氧基或苄氧基。在又另一特定的实施方案
5 5 5
中，R 为NH2。在特别优选的实施方案中，R 为乙氧基。在另一特别优选的实施方案中，R
5
为异丁氧基。在另一特别优选的实施方案中，R 为被氨基取代的烷氧基，例如2-氨基乙氧
基、N-吗啉代乙氧基、N，N-二烷基氨基乙氧基、季铵羟基烷氧基(例如三甲基铵羟基乙氧
基)。
特别的实施方案中，R 和R 独立地为H、F、Cl、Br或I。在另一特别的实施方案中，R 和R
6 7
均为H。在另一特别的实施方案中，R 和R 中的一个是卤素，而另一个是氢或卤素。在特别
7 6 8 9 6 7
优选的实施方案中，R 是Cl而R、R 和R 各为H。在另一特别优选的实施方案中，R 和R
8 9
均为Cl而R 和R 均为H。
基，如甲基、乙基、丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。在特别的实施方案中，R 为H。
基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羟基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，6-二氯苯基)
甲氧基]苯基；此外，当k为0或1时，Z2可以为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或
芳基，或为含2个或3个环的稠环系统，这些环独立地为含0至3个相同或不同杂原子的环
烷基或芳基，任何环均可以是未取代的，或被卤素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺酰基、硝基、氧代、羟基、芳基、芳氧基、未取代的低级烷基、卤素取代的低级烷基、低级烷氧基取代的低级烷基、低级烷氧基、低级烷基磺酰基、低级烷硫基、乙酰基、氨基羰基、肼基、羧基、烷氧
20
羰基、乙酰氧基中的至少一个取代，或还被氨基低级烷基取代；且R 为氢、药学上可接受的盐或酯。
k2为0或1时，Z可以为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，或为含2个或3个
环的稠环系统，这些环独立地为含0至3个相同或不同杂原子的环烷基或芳基，任何环均可
以是未取代的，或被卤素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺酰基、硝基、氧代、羟基、芳基、芳氧基、未取代的低级烷基、卤素取代的低级烷基、低级烷氧基取代的低级烷基、低级烷氧基、羧基、烷氧羰基或乙酰氧基中的至少一个取代；且
选地可被氧化，各环被0-3个R 取代；
仅有一个可为het，且当L-L 中的一个为het时，其他的L-L 可以不存在，
其中任何S或N任选地可被氧化；
R 可形成饱和、不饱和或芳香族稠环，该稠环的环中含有5、6或7个原子且任选地含有选
自O、S和N的1-3个杂原子，其中任何S或N任选地可被氧化；
的1-3个另外的杂原子，其中任何碳或硫环原子任选地可被氧化，各环被0-3个R 取代；且
其中s为0-2；B选自以下基团：
30
基上的取代基为1-3个R ；
O)-N(R )-、
41
0-3个R 取代；
R ；
O)-R 、NH-SO2-R 、NH-SO2-NR R 、NH-SO2-NH-C( ＝ O)-R 、NH-C( ＝ O)-NH-SO2-R 、
43 43 30 30
C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R 、C(＝O)-NH-C(＝O)-R 、C(＝O)-NH-C(＝O)-NR R ′、
37 30 30 30 30 37 37
C(＝O)-NH-SO2-R 、C(＝O)-NH-SO2-NR R ′、C(＝S)-NR R ′、SO2-R 、SO2-O-R 、
37 37 43 30 30 43
SO2-NR R ′、SO2-NH-C(＝O)-O-R 、SO2-NH-C(＝O)-NR R ′、SO2NH-C(＝O)-R 、O-C(＝
30 30 43 43 46 37
O)-NR R ′、O-C(＝O)-R 、O-C(＝O)-NH-C(＝O)-R 、O-C(＝O)-NH-SO2R 或O-SO2-R 、
基为1-3个R ；
基-NR R ′、C0-C6烷基-C(＝O)-NR R ′、C0-C6烷基-C(＝O)-R 、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C6环烷基、C3-C6环烯基、C1-C6烷基-苯基、苯基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氧羰基、苯基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、SO2-het、-O-C6-C12芳基、-SO2-C6-C12芳基、-SO2-C1-C6烷基或het，
NH-SO2NH-C( ＝ O)-R 、NH-C( ＝ O)-NH-SO2-R 、C( ＝ O)-O-R 、C( ＝ O)-R 、C( ＝
43 43 43 46
O)-NHR 、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R 、C(＝O)-NH-C(＝O)-R 、C(＝O)-NH-SO2-R 、C(＝
37 37 37 43 43 43
O)-NH-SO2NHR 、SO2-R 、SO2-O-R 、SO2-N(R )2、SO2NH-C(＝O)-O-R 、SO2NH-C(＝O)-O-R
43
或SO2NH-C(＝O)-R ；
磺酰基或C6-C10芳基磺酰基，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基为1-3个R ，且任何芳
31
基、het或杂芳基上的取代基为1-3个R ；
1，2，3，4-四氢-喹啉基，1，2，3，4-四氢-异喹啉基、噻唑烷基或氮杂二环壬基，其中取代基
38
为1-3个R ；
环烷基或苯甲酰基，其中任何烷基上的取代基为1-3个R ，且任何芳基上的取代基为1-3个
40
R ；
NR C(＝O)-O-R 、NRC(＝O)-R 、C0-C6烷基-SO2-R 、C0-C6烷基-SO2NR R ′、C(＝O)-R 、
43 43 30 30
O-C(＝O)-R 、C(＝O)-O-R 或C(＝O)-NR R ′，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基
38 31
为1-3个R ，且任何芳基或het上的取代基为1-3个R ；
基为1-3个R ；
C5-C10烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R )(R )N(C1-C10烷氧基)-，
基为1-3个R 和
R 、R、R 、R 、R 、R 、R 、R 、R 和在R 上的羧酸酯可为低级烷基或-CH2CH2-R ，其中R为以下之一：
cinnamides as antagonists ofleukocyte function-associated antigen-1/
intracellular adhesionmolecule-1 interaction.1.Identification of an additional binding pocketbased on an anilino diaryl sulfide lead.”J.Med.Chem.43，
4015-4030。
的羧基烷基包括支链烷基链，
或-NR -；
自肉桂酰胺、式VII-a的取代基、式VII-b的取代基或如上定义的环丙基衍生物时，R2和R3
和/或R3和R4和/或R4和R5连接在一起形成5-7元环烷基、芳基或杂环基环；且
法中是有用的。
1419-1421。来自莫维诺林(mevinolin)/康帕定(compactin)基序的分子也显示具有
抗LFA-1的活性。参见Welzenbach，K.，Hommel，U.，和Weitz-Schmidt，G.2002.“Small molecule inhibitors induceconformational changes in the I domain and the
I-like domain ofLymphocyte Function-Associated Antigen-1”，J.Biol.Chem.，277：
10590-10598，和美国专利No.6,630,492。
20050004153、20040259897、20040248920、20040009998和20020143035。
国专利No.6803384、美国专利No.6,515,124、美国专利No.6331640)和专利申请(包
括 U.S.20020119994、U.S.20040058968、U.S.20050080119、WO99/49856、WO00/21920、
WO01/58853、WO02/59114、WO05/044817)等中。所有引用文献的内容通过引用完整并入本
文。
生一种或多种多晶型物。因此，本发明包括上述本发明化合物、它们的多晶型物、它们的药学上可接受的盐、它们的药学上可接受的溶剂化物和包含它们的药学上可接受的组合物。
作用的选择性、有效的和直接的竞争性抑制剂)实施，以治疗糖尿病性视网膜病的症状。
善一种或多种与根本病症有关的生理症状来实现治疗性有益效果，从而在受试者身上观察
到改善，尽管受试者可能仍旧经受该根本病症的折磨。对于预防性有益效果而言，即使可能还未作出该疾病的诊断，也可以将组合物施用于具有发生特定疾病的危险的受试者，或者
施用于据称具有该疾病的一种或多种生理症状的受试者。可以将组合物施用于受试者，以
预防生理症状或根本病症的发展。
拮抗剂。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂为LFA-1的变构拮抗剂。在本发明的一些实施方
案中，LFA-1拮抗剂可以调控白细胞介导的炎症。本发明的另一实施方案通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以调节与眼部炎症相关的炎症来治疗受试者。本发明的一个实施方案通
过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂来治疗具有糖尿病性视网膜病症状的受试者。在本发明
的一些实施方案中，提供了通过施用施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂来治疗具有II型糖尿
病症状的受试者的方法。在本发明的一些实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂来治疗具有I型糖尿病症状的受试者的方法。在本发明的一些实施方案中，提供了
通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以降低受试者眼中的视网膜水肿来治疗受试者的方
法。在本发明的其他实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以减少黄斑
水肿来治疗受试者的方法。在其他实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗
剂以降低受试者眼中的基底膜增厚来治疗受试者的方法。在本发明的其他实施方案中，提
供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以降低受试者眼中的视网膜新生血管形成来治
疗受试者的方法。在本发明的一些实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗
剂以延缓由于糖尿病性视网膜病导致的视力丧失来治疗受试者的方法。在一些实施方案
中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以降低受试者眼中的视网膜缺血来治疗受
试者的方法。在其他实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以降低糖尿
病性视网膜病患者眼中视网膜上纤维血管生长的方法。在一些实施方案中，提供了通过施
用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以降低患有糖尿病性视网膜病的受试者眼中由于糖尿病性
视网膜病导致的视网膜损伤或退化的方法。在其他实施方案中，提供了通过施用治疗有效
量的LFA-1拮抗剂限制患有糖尿病性视网膜病的受试者眼中视网膜的非增生性损伤的方
法。在其他实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂来减缓患有糖尿病性
视网膜病的受试者眼中视网膜的增生性损伤的方法。在其他实施方案中，提供了通过施用
治疗有效量的LFA-1拮抗剂以降低或预防需要的受试者眼中白细胞与毛细管上皮细胞的
粘附的方法。在其他一些实施方案中，提供了通过施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂以降低
或防止需要的受试者眼中由缺血再灌注引起的损伤的方法。在本发明的一些实施方案中，
提供了一种方法，其中向患有糖尿病性视网膜病的受试者施用的LFA-1拮抗剂在与ICAM-1
结合位点重叠的LFA-1αL亚单元的高亲和力结合位点上结合。本发明的一些实施方案利
用了作为LFA-1/ICAM-1之间相互作用的直接竞争性抑制剂的化合物。本发明的一些实施
方案利用了直接竞争LFA-1上的共同ICAM-1高亲和力结合位点的化合物。在一些实施方
案中，提供了向需要治疗的受试者施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂的方法，该LFA-1拮抗剂
为式I、II、II’、III、III’、IV、IV’、V或VI的化合物。在一些实施方案中，提供了向需要治疗的受试者施用治疗有效量的LFA-1拮抗剂的方法，该LFA-1拮抗剂为式VII、VIII、IX、X或XI的化合物。
糖尿病患者中严重。因此，可能理想的是使用本发明的LFA-1拮抗剂来减轻炎症。在本发
明的一些实施方案中，提供了通过向需要的受试者施用LFA-1拮抗剂来减轻经历玻璃体切
割术的糖尿病受试者中的术后炎症的方法。此外，在一些实施方案中，本发明的LFA-1拮抗剂可以在玻璃体切割术之前施用给受试者，以预防性地减轻术后炎症。
抗剂来减轻正在经历光力学治疗(PDT)过程的糖尿病受试者中的术后炎症的方法。此外，
在一些实施方案中，本发明的LFA-1拮抗剂可在PDT过程之前施用给受试者，以预防性地减
轻术后炎症。
抗剂来减轻正在经历激光凝固术治疗过程的糖尿病受试者中的术后炎症的方法。此外，在
一些实施方案中，本发明的LFA-1拮抗剂可在激光凝固术治疗过程之前施用给受试者，以
预防性地减轻术后炎症。
症、从而减轻该炎症的方法。施用是在术后或术前进行的，以预防性地预防或减轻该炎症。
并发症是当其进展为新生血管性青光眼时虹膜的新生血管形成。其他的前房并发症包括在
新植入的眼内透镜(IOL)表面上具有沉淀物的色素分散、纤维素性渗出物或前房中的膜形
成(由炎症引起)。在本发明的一些实施方案中，提供了通过向需要的受试者施用LFA-1拮
抗剂来减轻患有DME的受试者眼中白内障术后前段或后段并发症的方法。在一些实施方案
中，提供了向患有DME的受试者预防性地施用LFA-1拮抗剂以减轻或预防形成白内障的方
法，患有DME的受试者比健康的受试者具有更高的发展为白内障的风险。
性视网膜病或调控组合中一种或多种药物的副作用。由于该疾病状态中的病理事件的特点
是减弱的自动调节、凋亡、局部缺血、再灌注组织、新生血管形成和炎症刺激的组合，可能理想的是与其他治疗剂联合施用本发明的LFA-1拮抗剂，以加成地或协同地进行干预。在一
些实施方案中，第二治疗剂为抗氧化剂、抗炎剂、抗微生物剂、抗血管生成剂和/或抗细胞凋亡剂。在本发明的一些实施方案中，除了施用直接竞争结合LFA-1的化合物以外，还可以施用其他治疗剂，该治疗剂是如上所述的LFA-1的变构拮抗剂，但是不是直接竞争性拮抗
剂，可能导致协同效果。该变构拮抗剂的例子为LFA-1的乙内酰脲抑制剂类型。变构拮抗
剂的其他例子包括式VII、VIII、IX、X或XI的化合物。
VEGF抑制剂可用于本发明的组合物中，其包括但不限于1)VEGF或其受体的中和性单克隆
抗体、2)VEGF受体的小分子酪氨酸激酶抑制剂、3)作为VEGF的诱饵受体的可溶性VEGF受
体、4)特异性地靶向VEGF的核酶，和5)特异性地靶向VEGF信号传导蛋白质的siRNA。具
有抗VEGF活性的抗体的一些例子为，例如，Lucentis(兰尼单抗)和Avastin(贝伐单抗)。
寡核苷酸药物的例子为，例如，Macugen(哌加他尼钠注射液)。小分子酪氨酸激酶抑制剂包括，例如，帕唑帕尼、索拉非尼、舒尼替尼等。
剂、苯磷硫胺或干预AGE的阻断的其他药物(晚期糖化终产物)、醛糖还原酶抑制剂、iNOS
抑制剂、FasL抑制剂或血管生成素-1。
6，6-四甲基-1-哌啶氧(TEMPO)、DOXYL、PROXYL硝基氧化合物；4-羟基-2，2，6，6-四甲
基-1-哌啶氧(Tempol)、M-40401、M-40403、M-40407、M-40419、M-40484、M-40587、M-40588等。
体激活的下游事件。施用补体抑制剂和LFA-1拮抗剂可以更完全地调节表达LFA-1的白细
胞。补体抑制剂的一个例子是艾库组单抗(eculizumab)。其他的补体抑制剂包括但不限于
美国专利No.7166568、6319897、5843884、5135916和5624837中所述。
生血管性青光眼。用于青光眼的一些治疗剂包括但不限于前列腺素类似物，例如拉坦前列
素、比马前列素和曲伏前列素；局部β-肾上腺素受体拮抗剂，例如噻吗洛尔、左布诺洛尔和倍他洛尔；α2-肾上腺素能激动剂，例如溴莫尼定；拟交感神经药，例如肾上腺素或肾上腺异戊酯；缩瞳剂，例如匹鲁卡品；碳酸酐酶抑制剂，例如多佐胺、布林唑胺和乙酰醋氨；或毒扁豆碱。
素、氧咪苄青霉素、羧苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、氟氯青霉素、磺唑氨苄青霉素、乙氧萘胺青霉素、青霉素、哌拉西林、替卡西林等；β-内酰胺酶抑制剂；碳青霉烯类，例如厄他培南、亚胺培南、倍能等；头孢菌素类，例如头孢克洛、头孢羟唑、头孢西丁、头孢罗齐、头孢呋辛、头孢克肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢羟氨苄、头孢他定、头孢布坦、头孢唑肟、头孢曲松(ceffiriaxone)、头孢唑啉、头孢克肟、头孢氨苄、头孢吡肟等；喹诺酮类，例如环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、左氧氟沙星、乙吗噻嗪、诺氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星等；大环内酯类，例如阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、乙琥红霉素、米尔倍霉素、醋竹桃霉素等；单环内酰胺类，例如氨曲南等；四环素类，例如地美环素、多西环素、米诺环素、地霉素、四环素等；氨基糖苷类，例如阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、巴龙霉素、链霉素、妥布霉素等；碳头孢烯，例如氯拉卡比等；链阳性菌素；磺胺类，例如甲磺灭脓、偶氮磺胺、磺胺醋酰、磺胺甲噻唑、氨苯磺胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺乙酰异噁唑、三甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶一磺胺甲基异恶唑等；和组合药物，例如磺胺甲噁唑和三甲氧苄氨嘧啶等；多肽，例如杆菌肽、粘菌素、多粘菌素B等。
TM
脲、meglinatide)，双胍类，例如二甲双胍(Glucophage )，α-葡糖苷酶抑制剂(阿卡波
TM TM
糖)，胰岛素增敏剂，例如噻唑酮化合物、罗西格列酮(Avandia )、曲格列酮(Rezulin )、环TM
格列酮、匹格列酮(Actos )和恩格列酮；(b)降低胆固醇药物，例如HMG-CoA还原酶抑制
剂(例如洛伐他汀、辛伐他汀、帕伐他汀、氟伐地汀、阿伐他汀和其他他汀类药物)、胆汁酸螯合剂(例如消胆胺和考来替泊)、维生素B3(也被称为烟酸或尼克酸)、维生素B6(吡哆
醇)、维生素B12(氰钴胺)、纤维酸衍生物(例如吉非贝齐、氯贝特、非诺贝特和苯扎贝特)、普罗布考、硝酸甘油和胆固醇吸收抑制剂(例如β-谷甾醇和乙酰CoA-胆固醇乙酰转移酶
(ACAT)抑制剂，例如甲亚油酰胺)、HMG-CoA合酶抑制剂、鲨烯环氧酶抑制剂和鲨烯合成酶
抑制剂；和(c)抗血栓形成剂，如溶栓剂(例如链激酶、阿替普酶、阿尼普酶和瑞替普酶)、肝素、水蛭素和华法林衍生物、β-阻断剂(例如阿替洛尔)、β-肾上腺素能拮抗剂(例如
异丙肾上腺素)、ACE抑制剂和血管扩张剂(例如硝普钠、盐酸尼卡地平、硝化甘油和依那普利拉(enaloprilat))。
些实施方案中，通过眼周植入施用治疗剂。在一些实施方案中，局部施用治疗剂。在一些实施方案中，通过滴眼剂局部施用治疗剂。如果将药物组合作为独立的组合物施用，则它们可以以相同途径或不同途径施用。如果药物组合在一种组合物中施用，则它们可以以任何适
当的途径施用。在一些实施方案中，将药物组合作为单一组合物经口服给药方式施用。在
一些实施方案中，将药物组合作为单一组合物以透皮给药方式施用。在一些实施方案中，将药物组合作为单一组合物经注射方式施用。在一些实施方案中，将药物组合作为单一组合
物局部施用。
干断层摄影术、非近视性照相术和β扫描超声法，单独的常规眼部检查、光学相干断层摄
影术、β扫描超声，全面的眼科检查及眼底照相术和荧光素血管造影术。
因为它们具有作为低成本的滴眼剂局部使用的潜力。类似地，口服施用提供了低成本产品
的优势。可植入装置可以是植入或注射到眼中或靠近眼部的眼周组织中的生物可降解的或
生物可吸收的或生物可降解的缓释或持续释放制剂，其可用于慢性疗法。
物。应用到眼睑外表面的皮肤乳膏因此将LFA-1拮抗剂透过眼睑递送至眼睑的内衬和中间
的结膜组织和附属泪腺，并且出现在眼泪中，并因此被眼睛吸收。该种递送形式对于治疗
LFA-1介导的眼睛炎症、特别是治疗糖尿病性视网膜病是理想的。
th
体 在 Remington“The Science and Practiceof Pharmacy”(20 Ed.，Lippincott
Williams&Wilkins，Baltimore MD)中描述，其全部在此引入作为参考。
式(例如使用掺入了胃肠道吸收较差的本发明化合物的漱口水或锭剂)来施用。对于可造
成本发明组合物的区域或局部递送的施用，可以使用离子透入或局部施用。
Alto，CA)中使用的那些。药物组合物可以掺入、携带或连接到隐形眼镜上，受试者然后佩戴该隐形眼镜。药物组合物可被喷洒到眼睛表面。
长释放的制剂，例如PLGA微球、微粒或纳米颗粒，它们可以通过如上所述的装置递送或者
眼内或眼周注射。
给药可以是大约每年1次、每年2次、每隔6个月、每隔4个月、每隔3个月、每隔60天、每
月1次、每两周1次、每周1次或每隔一天1次。在一个实施方案中，药物为止痛剂。在另
一实施方案中，LFA-1拮抗剂和其它治疗物质同时施用每日约1次至每日约10次。在另一
实施方案中，LFA-1拮抗剂和其它治疗物质的施用持续短于约7天。在另一实施方案中，共
同施用持续多于约6天、10天、14天、28天、2个月、6个月或1年。在一些情况中，只要需要就维持共同施用，例如对于慢性炎症的给药。
1x10 g-5000mg。如上所述，日剂量范围可以取决于使用的LFA-1拮抗剂的形式，例如酯或
盐，和/或施用途经。例如，对于系统施用而言，典型的日剂量范围为例如约1-5000mg、或约1-3000mg、或约1-2000mg、或约1-1000mg、或约1-500mg、或约1-100mg、或约10-5000mg、或约10-3000mg、或约10-2000mg、或约10-1000mg、或约10-500mg、或约10-200mg、或
约10-100mg、或约20-2000mg、或约20-1500mg、或约20-1000mg、或约20-500mg、或
约20-100mg、或约50-5000mg、或约50-4000mg、或约50-3000mg、或约50-2000mg、或
约50-1000mg、或约50-500mg、或约50-100mg、或约100-5000mg、或约100-4000mg、或约
100-3000mg、或约100-2000mg、或约100-1000mg、或约100-500mg。在一些实施方案中，
LFA-1拮抗剂的日剂量为约100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000mg。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为10mg。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为
100mg。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为500mg。在一些实施方案中，LFA-1拮
抗剂的日剂量为1000mg。
或约1x10 g-2.5g、或约 1x10 g-1.00g、或 约1x10 g-0.5g、或 约1x10 g-0.25g、或
-8 -8 -8 -8 -2
约1x10 g-0.1g、或约1x10 g-0.05g、或约1x10 g-0.025g、或约1x10 g-1x10 g、或约
-8 -3 -8 -3 -8 -3 -8 -4
1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或 约1x10 g-5x10 g、
-7 -7 -7 -7
或 约1x10 g-5.0g、或 约1x10 g-2.5g、或 约 1x10 g-1.00g、或 约1x10 g-0.5g、或
-7 -7 -7 -7
约1x10 g-0.25g、或约1x10 g-0.1g、或约1x10 g-0.05g、或约1x10 g-0.025g、或约
-7 -2 -7 -3 -7 -3 -7 -3
1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-2.5x10 g、或 约1x10 g-1x10 g、
-7 -4 -6 -6 -6
或 约 1x10 g-5x10 g、或 约 1x10 g-5.0g、或 约 1x10 g-2.5g、或 约 1x10 g-1g、或
-6 -6 -6 -6 -2
约1x10 g-0.5g、或约1x10 g-0.25g、或约1x10 g-0.1g、或约1x10 g-5x10 g、或约
-6 -2 -6 -2 -6 -2 -6 -3
1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、或
-6 -3 -6 -3 -6 -4 -5
约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-5g、或约
-5 -5 -5 -5 -5
1x10 g-2.5g、或约1x10 g-1g、或约1x10 g-0.5g、或约1x10 g-0.25g、或约1x10 g-0.1g、-5 -5 -2 -5 -2 -5 -3
或约1x10 g-0.05g、或约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、
-5 -3 -5 -3 -5 -4
或约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g。在一些实施方案中，
-7 -6 -5 -4 -3 -2 1
LFA-1拮抗剂的日剂量为约1x10 、1x10 、1x10 、1x10 、1x10 g、1x10 g、1x10g或1g。在-7
一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1x10 g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的
-5 -3
日剂量为1x10 g。在一些实施方案中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1x10 g。在一些实施方案
-2 -8
中，LFA-1拮抗剂的日剂量为1x10 g。在一些实施方案中，受试者的剂量为约1x10 g-5.0g、-8 -8 -8 -8
或约1x10 g-2.5g、或约 1x10 g-1.00g、或 约1x10 g-0.5g、或 约1x10 g-0.25g、或
-8 -8 -8 -8 -2
约1x10 g-0.1g、或约1x10 g-0.05g、或约1x10 g-0.025g、或约1x10 g-1x10 g、或约
-8 -3 -8 -3 -8 -3 -8 -4
1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或 约1x10 g-5x10 g、
-7 -7 -7 -7
或 约1x10 g-5.0g、或 约1x10 g-2.5g、或 约 1x10 g-1.00g、或 约1x10 g-0.5g、或
-7 -7 -7 -7
约1x10 g-0.25g、或约1x10 g-0.1g、或约1x10 g-0.05g、或约1x10 g-0.025g、或约
-7 -2 -7 -3 -7 -3 -7 -3
1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-2.5x10 g、或 约1x10 g-1x10 g、
-7 -4 -6 -6 -6
或 约 1x10 g-5x10 g、或 约 1x10 g-5.0g、或 约 1x10 g-2.5g、或 约 1x10 g-1g、或
-6 -6 -6 -6 -2
约1x10 g-0.5g、或约1x10 g-0.25g、或约1x10 g-0.1g、或约1x10 g-5x10 g、或约
-6 -2 -6 -2 -6 -2 -6 -3
1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、或
-6 -3 -6 -3 -6 -4 -5
约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、或约1x10 g-5g、或约
-5 -5 -5 -5 -5
1x10 g-2.5g、或约1x10 g-1g、或约1x10 g-0.5g、或约1x10 g-0.25g、或约1x10 g-0.1g、-5 -5 -2 -5 -2 -5 -3
或约1x10 g-0.05g、或约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g、或-5 -3 -5 -3 -5 -4
约1x10 g-2.5x10 g、或约1x10 g-1x10 g、或约1x10 g-5x10 g。在一些实施方案中，如上所述的个体的剂量每日重复1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
20mM或约25mM，从剂量至剂量。
200nM、约250nM、约300nM、约350nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约
1mM、约2mM、约3mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约15mM、约20mM或约
25mM，从剂量至剂量。
药期内释放约1mg-约50mg、约1-约25mg、约5mg-约100mg、约5-约50mg、约5-约25mg、
约10mg-约100mg、约10mg-约50mg、约10mg-约25mg或约15mg-约50mg。缓释眼内或眼
周装置和制剂的给药期通常为约10天-约1年、约30天-约1年、约60天-约1年、约3
个月-约1年、约4个月-约1年、约5个月-约1年、或约6个月-约1年。在一些实施
方案中，缓释眼内或眼周装置和制剂在约1个月-约9个月、约1个月-约8个月、约1个
月-约7个月、约1个月-约6个月、约1个月-约5个月、约1个月-约4个月、或约1个
月-约3个月的期限内释放治疗剂。在其他实施方案中，缓释制剂和装置释放治疗剂长达
1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、12个月、18个月、2年、30个月或3年。
约200nM、约250nM、约300nM、约350nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1mM、约2mM、约3mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约15mM、约20mM或约25mM。在本发明的一些实施方案中，缓释制剂和/或植入物在眼内或眼周释放的治疗剂
足以使LFA-1拮抗剂的水平在6个月内维持在至少约10nM、约50nM、约100nM、约150nM、
约200nM、约250nM、约300nM、约350nM、约500nM、约600nM、约700nM、约800nM、约900nM、约1mM、约2mM、约3mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约15mM、约20mM或约
25mM。
Williams&Wilkins，Baltimore MD)描述了合适的制剂和另外的载体，其全部内容在此通过引用并入本文。
酸-乙醇酸共聚物。这些材料可被制成微粒或纳米颗粒，它们携带药物，并且进一步涂覆或衍生化以提供较好的持续释放性能。适于眼周或眼内注射的载体包括例如治疗剂在注射级
水、脂质体和适于亲脂性物质的载体中的悬浮液。用于眼周或眼内注射的其他载体是本领
域已知的。
而可以作为制剂中的固体使用，这可以提供温度稳定性、储存期、易于运输和受试者易于使用的另外益处。
受的赋形剂可以包含无毒成分，例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠等。
粉。载体和赋形剂的其他非限制性例子包括牛乳、糖、某些类型的粘土、明胶、硬脂酸或其盐、硬脂酸钙、滑石、植物脂肪或油、树胶和二元醇。
种亲脂性表面活性剂的混合物。
水性的经验参数是亲水-亲脂平衡(“HLB”值)。具有较低HLB值的表面活性剂更加亲脂
或疏水，并且在油中的溶解性更大，而具有较高的HLB值的表面活性剂更加亲水，并且在水溶液中的溶解性更大。通常认为亲水性表面活性剂为HLB值大于约10的那些化合物，以及
HLB量度通常不适用的阴离子、阳离子或两性离子化合物。类似地，亲脂性(即，疏水性)表面活性剂为HLB值等于或小于约10的化合物。但是，表面活性剂的HLB值仅是常用于能够
配制工业、药物和化妆品乳液的粗略的指导。
单甘油酯和二甘油酯的单乙酰化和二乙酰化酒石酸酯；琥珀酰化的单甘油酯和二甘油酯；
单甘油酯和二甘油酯的柠檬酸酯；及其混合物。
酚，例如聚乙二醇烷基酚；聚氧化烯烷基酚脂肪酸酯，例如聚乙二醇脂肪酸单酯和聚乙二醇脂肪酸二酯；聚乙二醇脂肪酸甘油酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧化烯失水山梨醇脂肪酸酯，例如聚乙二醇失水山梨醇脂肪酸酯；多元醇与至少一个下组物质的亲水性酯交换产物：甘油
酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸和甾醇；聚氧乙烯甾醇，其衍生物和类似物；聚氧乙烯化维生素及其衍生物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；及其混合物；聚乙二醇失水山梨醇脂
肪酸酯，和多元醇与至少一个下组物质的亲水性酯交换产物：甘油三酯、植物油和氢化植物油。多元醇可以为甘油、乙二醇、聚乙二醇、山梨醇、丙二醇、季戊四醇或糖类。
酯、PEG-20油酸酯、PEG-20二油酸酯、PEG-32油酸酯、PEG-200油酸酯、PEG-400油酸酯、
PEG-15硬脂酸酯、PEG-32二硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20二月桂酸酯、PEG-25甘油基三油酸酯、PEG-32二油酸酯、PEG-20甘油基月桂酸酯、PEG-30甘油基月桂酸酯、PEG-20甘油基硬脂酸酯、PEG-20甘油基油酸酯、PEG-30甘油基油酸酯、PEG-30甘
油基月桂酸酯、PEG-40甘油基月桂酸酯、PEG-40棕榈仁油、PEG-50氢化蓖麻油、PEG-40蓖
麻油、PEG-35蓖麻油、PEG-60蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-60玉米油、PEG-6癸酸酯/辛酸酯甘油酯、PEG-8癸酸酯/辛酸酯甘油酯、聚甘油基-10月桂酸酯、
PEG-30胆甾醇、PEG-25植物甾醇、PEG-30大豆甾醇、PEG-20三油酸酯、PEG-40失水山梨醇油酸酯、PEG-80失水山梨醇月桂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、POE-9月桂基醚、POE-23月桂基醚、POE-10油烯基醚、POE-20油烯基醚、POE-20硬脂酰基醚、儿茶酚基PEG-100琥珀酸酯、PEG-24胆甾醇、聚甘油基-10油酸酯、Tween40、Tween 60、蔗糖单硬脂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单棕榈酸酯、PEG 10-100壬基酚系列、PEG 15-100辛基酚系列，和泊洛沙姆。
(alkonium)氯化物、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯和尼泊金丙酯。
本领域普通技术人员公知的。
维生素E的衍生物(例如醋酸生育酚)、类维生素A类(例如视黄酸、视黄醇、反-视黄醇、
顺-视黄醇、反-视黄醇和顺-视黄醇的混合物，3-去氢视黄醇和维生素A的衍生物(例
如视黄醇乙酸酯、视网膜和视黄醇棕榈酸酯，也被称为棕榈酸维生素A))、柠檬酸钠、亚硫酸钠、番茄红素、花色素、生物类黄酮(例如橙皮苷、柚皮苷、芦丁和槲皮苷)、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丁羟甲苯(BHT)、吲哚-3-甲醇、碧萝芷、褪黑激素、莱菔硫烷、孕烯醇酮、硫辛酸和4-羟基-5-甲基-3[2H]-呋喃酮。
本发明的一些实施方案中可能是优选的持续释放。该胃滞留制剂公开在Klausner，E.A.；
Lavy，E.；Barta，M.；Cserepes，E.；Friedman，M.；Hoffman，A.2003“Novelgastroretentive dosage forms：evaluation of gastroretentivity and itseffect on levodopa
in humans.”Pharm.Res.20，1466-73，Hoffman，A.；Stepensky，D.；Lavy，E.；Eyal，S.Klausner，E.；Friedman，M.2004“Pharmacokinetic and pharmacodynamic aspects
of gastroretentivedosage forms”Int.J.Pharm.11，141-53，Streubel，A.；Siepmann，J.；Bodmeier，R.；2006“Gastroretentive drug delivery systems”Expert Opin.Drug Deliver.3，217-3， 和 Chavanpatil，M.D.；Jain，P.；Chaudhari，S.；Shear，R.；Vavia，P.R.“Novel sustained release，swellable andbioadhesive gastroretentive drug
delivery system for olfoxacin”Int.J.Pharm.2006 epub 3月24日。可以使用可扩展
的、漂浮的和生物粘附技术来最大化本发明化合物的吸收。
泪腺组织，然后再被输送到视网膜组织中。可呼吸的颗粒可以是具有适当粒度的固体或液
体，如本领域已知对于吸收有效的。吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性或有
机溶剂中的溶液和悬浮液、或其混合，和粉末。液体或固体组合物可以包含上文描述的合适的药学上可接受的赋形剂。组合物优选地通过口服或鼻内呼吸途径施用，以达到局部或全
身效果。可以使用惰性气体对溶于优选的药学上可接受的溶剂中的组合物进行喷雾。可以
从喷雾装置直接吸入喷雾溶液，或者可以将喷雾装置连接在面罩或间歇式正压呼吸机上。
可以从以适当形式递送制剂的装置中施用溶液、悬浮液或粉末组合物，优选地通过口或鼻
施用。
助于治疗分子的递送。对于局部制剂领域的熟练技术人员而言，存在许多已知的增强渗透
性的分子。这些载体和赋形剂的例子包括但不限于湿润剂(例如尿素)、二醇类(例如丙
二醇)、醇类(例如乙醇)、脂肪酸(例如油酸)、表面活性剂(例如肉豆蔻酸异丙酯和月桂
基硫酸钠)，吡咯烷酮、单月桂酸甘油酯、亚砜，萜烯(例如薄荷醇)、胺类、酰胺类、烷烃、烷醇、水、碳酸钙、磷酸钙、各种糖类、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物，例如聚乙二醇。用于递送药剂的透皮贴剂的构造和应用是本领域已知的。参见，例如，美国专利No.5,023,252、
4,992,445和5,001,139。这种贴剂可以制成连续、脉动或按需递送药剂的形式。
部使用的所有制剂(例如，软膏、乳膏、凝胶、粉末、油膏、洗液、晶体形式、泡沫和喷雾)。在一些实施方案中，本发明的一些LFA-1拮抗剂的极好的溶解性使得可以制成浓缩的溶液制
剂，这样的制剂可向眼部递送治疗上相关的剂量。此外，可以使用用于局部给药于皮肤和鼻道的粘膜的所有适当制剂来递送本发明的化合物。本发明的药物组合物可以为用于局部或
口服给药的脂质体制剂，其中任何一种都是本领域已知适合于本发明目的的。
量％的量加入润滑剂。
对-甲氧基肉桂酸2-乙基己基酯、N，N-二甲基-对-氨基苯甲酸2-乙基己基酯、对-氨
基苯甲酸、2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、奥克立林、羟苯甲酮、水杨酸三甲环己酯、水杨酸辛酯、4，4′-甲氧基-叔-丁基二苯甲酰基甲烷、4-异丙基二苯甲酰基甲烷、3-亚苄基樟
脑、3-(4-甲基亚苄基)樟脑、氨基苯甲酸酯、超精细二氧化钛、氧化锌、氧化铁、二氧化硅、
2，4-二羟基二苯甲酮的4-N，N-(2-乙基己基)甲基氨基苯甲酸酯、4-羟基二苯甲酰基甲
烷的4-N，N-(2-乙基己基)-甲基氨基苯甲酸酯、2-羟基-4-(2-羟基乙氧基)二苯甲酮
的4-N，N-(2-乙基己基)-甲基氨基苯甲酸酯、和4-(2-羟基乙氧基)二苯甲酰基甲烷的
4-N，N(2-乙基己基)-甲基氨基苯甲酸酯。合适的抗痤疮药物包括水杨酸；5-辛酰水杨
酸；间苯二酚；类维生素A类，例如视黄酸及其衍生物；半胱氨酸以外的含硫的D和L氨基
酸；硫辛酸；抗生素和抗微生物剂，例如过氧化苯甲酰、羟甲辛吡酮、四环素、2，4，4′-三氯-2′-羟基二苯基醚、3，4，4′-三氯甲氧苯、壬二酸、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯氧基异丙醇、乙酸乙酯、克林霉素和melclocycline)；黄酮类化合物；和胆汁盐，例如鲨胆甾醇硫酸盐、脱氧胆酸盐和胆酸盐。抗皱剂和抗皮肤萎缩剂的例子为视黄酸及其衍生物、视黄醇、视黄酯、水杨酸及其衍生物、半胱氨酸以外的合硫的D和L氨基酸、α-羟基酸(例如羟基
乙酸和乳酸)、肌醇六磷酸、硫辛酸和溶血磷脂酸。
和氯喹。如果存在的话，可向本发明的制剂中引入减轻刺激的添加剂，其浓度可有效地减轻刺激或皮肤损害，通常不多于组合物的约20重量％，更通常不多于组合物的约5重量％。
Aerosil。另一干燥感调节剂为美国专利No.6,488,916中公开的表氯醇交联的甘油基淀粉
类型。
组合使用，以产生精油。或者，可以制备酒精提取物用于混合芳香剂。但是，由于从天然物质中获得芳香剂的成本相对较高，所以目前的趋势是使用合成制备的芳香剂，特别是大规
模的产品。防晒组合物中任选地可包含一种或多种芳香剂，其量为约0.001-约5重量百分
比，优选约0.01-0.5重量百分比。如果需要的话，还可以使用另外的防腐剂，该防腐剂包括公知的防腐剂组合物，例如苄醇、苯基乙基醇和苯甲酸、二咪唑烷基尿素、氯苯甘醚、碘丙炔和氨基甲酸丁酯，等等。
如，PLGA微球、微粒或纳米颗粒)上受控释放。可以使用任何合适的生物可降解的和生物
相容的聚合物或基质。
(例如矿物油和白凡士林)、动物脂肪(例如羊毛脂)，丙烯酸聚合物(例如羧基聚亚甲基
凝胶)、植物脂肪(例如花生油)和多糖(例如葡聚糖)和糖胺聚糖(例如透明质酸钠)。
如果希望，还可以加入常用于滴眼剂中的添加剂。该添加剂包括等渗剂(例如氯化钠等)、
缓冲剂(例如硼酸、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠等)、防腐剂(例如苯扎氯铵、苄索氯铵、三氯叔丁醇等)、增稠剂(例如糖，如乳糖、甘露糖醇、麦芽糖等；例如透明质酸或其盐，如透明质酸钠、透明质酸钾等；例如粘多糖，如硫酸软骨素等；例如聚丙烯酸钠、羧基乙烯基聚合物、交联聚丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素，或本领域普通技术人员已知的其他试剂)。
糊精或本领域普通技术人员已知的其他试剂。该共溶剂的用量可以为约0.01％-2％(重
量)。
在本申请的组合物中，防腐剂，优选苯扎氯铵的用量可以为0.001％-小于0.01％，例如
0.001％-0.008％，优选约0.005％(重量)。已经发现，0.005％的苯扎氯铵浓度足以使本
发明的化合物防止微生物的侵袭。
含有本发明化合物的制剂的浓度可以为约0.0001-10.0W/V％、约0.005-10.0W/V％、约
0.01-10.0W/V％、约0.05-10.0W/V％、约0.1-10.0W/V％、约0.5-10.0W/V％、约1.0-10.0W/V％、约20-10.0W/V％、约3.0-10.0W/V％、约4.0-10.0W/V％，或约5.0-10.0W/V％。本发明一个实施方案的制剂具有约1.0-10.0W/V％的本发明化合物。本发明一个实施方案的制剂
具有约0.01-10.0W/V％的本发明化合物。本发明一个实施方案的制剂具有约5.0-10.0W/
V％的本发明化合物。给药可以为每日每只眼施用若干次，优选1-10次，更优选1-4次，最优选每日1次。施用的液滴大小可以为约10-100μl、约10-90μl、约10-80μl、约10-70μl、约10-60μl、约10-50μl、约10-40μl、约10-30μl、约 20-100μl、约20-90μl、约
20-80μl、约20-70μl、约20-60μl、约20-50μl、约20-40μl或约20-30μl。本发明的
一个实施方案施用约10-约30μl的滴眼剂。本发明的一个实施方案施用约10-约100μl
的滴眼剂。本发明的一个实施方案施用约20-约50μl的滴眼剂。本发明的一个实施方案
施用约10-约60μl的滴眼剂。
0.1-10.0W/V％、约0.5-10.0W/V％、约1.0-10.0W/V％、约20-10.0W/V％、约3.0-10.0W/
V％、约4.0-10.0W/V％，或约5.0-10.0W/V％。本发明一个实施方案的制剂具有约
1.0-10.0W/V％的本发明化合物。本发明一个实施方案的制剂中含有约0.01-10.0W/V％的
本发明化合物。本发明一个实施方案的制剂中含有约5.0-10.0W/V％的本发明化合物。这
些制剂可以每日施用或喷雾若干次，优选每日1-6次，更优选每日1-4次，最优选每日1次。
可以根据炎症或感染的程度适当提高或降低各成分的混合比例。
含量。
试剂盒的分隔容器内作为分开的组合物来提供。在一些实施方案中，将该治疗剂和本发明
的LFA-1拮抗剂在试剂盒容器内作为单一组合物来提供。适当的包装和其他使用物件(例
如用于液体制剂的量杯、使空气暴露最小化的铝箔包装、分配器等)是本领域已知的，也可以包括在试剂盒中。
NaCl，0.05％正辛基葡糖苷和0.05％牛丙种球蛋白(BGG)以及1mM MnCl2或1mM CaCl2和
1mM MgCl2的缓冲液中进行的。测定化合物1对LFA-1的亲和力的方法首先是向LFA-1的系
列稀释液中添加2mM的化合物1，该系列稀释液开始于1μM，在含MnCl2或CaCl2和MgCl2的
缓冲液中。通过向2mM化合物1(使用3nM LFA-1(MnCl2中)或40mM LFA-1(CaCl2和MgCl2
中))添加拮抗剂的系列稀释液来进行竞争性试验。在ICAM-1-Ig竞争性试验中，在两种二
价阳离子缓冲液的条件下，LFA-1的浓度降至2和20mM的LFA-1，以最大化ICAM-1-Ig的抑
制。在亲和力计算(见下文)中考虑试验中使用的不同的LFA-1的浓度。37℃下在96孔
黑色HE96板(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)中温育溶液2小时。在Analyst读板器
(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上使用485nm激发、530nm发射和505nm二色性滤光片进行荧光偏振(FP)测量。通过减去用不含化合物1的适当样品测量的强度来针对背景发射
校正所有原始强度数据。通过使用KaleidaGrap软件(Synergy Software，Reading，PA)进
行4参数方程的非线性最小二乘方拟合，分析LFA-1结合和拮抗剂竞争数据，以获得LFA-1
滴定的EC50值和拮抗剂的IC50值。用于拟合数据的方程是Y＝((A-D)/(1+(X/C)^B))+D，
其中Y为测定响应，A是上渐进线的Y值，B是斜率，C是IC50或EC50，D是下渐进线的Y值。
通常，在如下文所述的均相FP和非均相ELISA模式中测量的数据包含相对较大的信号：背
景比，并且拟合中的误差估计值通常小于拟合参数最终值的10％。使用Klotz和Hill分析
来计算在含有和不含A-286982时，LFA-1对化合物1的平衡解离常数(Kd)。使用IC50值、
化合物1/LFA-1的Kd和竞争性试验中化合物1和LFA-1的浓度来计算拮抗剂对LFA-1的
亲和力(Ki)。
是其在小分子和荧光素之间具有更长的连接体，用以使抗-荧光检测抗体的结合最大化。
4℃下，在96-孔板上包被5μg/ml(33.3nM)溶于磷酸盐缓冲液(PBS)中的小鼠抗-人类
B2整联蛋白(非功能阻断抗体)过夜。室温下用测定缓冲液(20mM Hepes，pH 7.2，140mM
NaCl，1mM MnCl2，0.5％牛血清白蛋白(BSA)和0.05％Tween-20)封闭该板1小时。在缓冲
液(50mMTris-HCl，pH 7.5，100mM NaCl，1mM MnCl2和0.05％Tween-20)中洗涤之后，加入
8nM LFA-1(LFA-1/ICAM-1 ELISA)或2nM LFA-1(LFA-1/小分子ELISA)，之后在37℃下温育
1小时。洗涤该板，且对于LFA-1/ICAM-1 ELISA而言，将小分子拮抗剂或sICAM-1的系列稀
释液加入到板中并保持30分钟，之后加入0.89nM的ICAM-I-Ig(终浓度)并在37℃下保持
2小时。再次洗涤之后，加入山羊抗-huIgG(Fc特定的)-HRP并在37℃下温育1小时。在
LFA-1/小分子ELISA中，将稀释的拮抗剂和25nM化合物2B同时加入到板中，之后在37℃
下温育2小时。洗涤之后加入绵羊抗荧光素-HRP，并在37℃下再温育1小时。对于两次测
定而言，在洗涤之后通过下述方式检测结合的HRP-偶联抗体：加入四甲基联苯胺(TMB)，之后在加入1M H3PO4终止反应后测量产物在450nm处的吸光度。使用KaleidaGraph软件拟
合上述的4参数方程，从而确定每条曲线的IC50值。
在所有情况下配体都与拮抗剂同时加入。在加入拮抗剂和配体之后，进行洗涤和加入检测
抗体之前，在37℃下将板温育6小时以达到平衡状态。通过拟合如上所述的4参数模型来
确定每条曲线的EC50值。通过Schild回归来分析存在和不存在拮抗剂的情况下所产生的
EC50值。按照下式计算Log(浓度比-1)对拮抗剂浓度的Schild图：(浓度比-1)＝((存
在拮抗剂时配体的EC50)/(不存在拮抗剂时配体的EC50))-1。通过将线拟合到线性方程Y＝
A+BX来计算Log(浓度比-1)对拮抗剂浓度的图的斜率。
pH 7.2的20mM Hepes、150mMNaCl、5mM CaCl2、5mM MgCl2、1mM MnCl2和1％正辛基葡糖苷中)在37℃下温育过夜。化合物5与LFA-1的摩尔比为3∶1。使用1％BSA预包被的96孔
板进行温育。恰在交联之前，采用以相同缓冲液平衡的96孔形式的G-25微旋柱，通过凝胶
过滤迅速除去过量的化合物5。通过暴露在高压汞蒸汽灯下(450瓦，一级玻璃，Vineland，NJ)使LFA-1/化合物5复合物发生交联。在照射过程中，在冰上冷却样品并用5mm厚的硼
硅玻璃板进行保护，以使蛋白质的降解最小化。按照上述方式用凝胶过滤法(G-25)除去剩
余的未连接的化合物5。然后在8M盐酸胍(GuHCl)中使交联复合物变性并还原和烷基化。
使处理后的蛋白质进行SDS-PAGE，之后进行考马斯蓝染色。通过放射自显影显示放射性标
记的蛋白质。
且用放射自显影法显示，或将其转移至聚偏二氟乙烯膜上，用考马斯蓝染色，之后通过N末端蛋白质测序进行确定。
个PfIMl限制性位点(Edwards等，1995)。为了产生缺少结构域I的突变体，制备了下列
引物：正向引物CACTGTGGCGCCCTGGTTTTCAGGAAGGTAGTGGATCAGGCACAAGCAAACAGGACCTGACTT
C(SEQ ID NO 3)，含有从Narl位点至结构域I的起点的序列、编码GSGSG的DNA序列(SEQ
ID NO3)和在结构域I末端之后的23bp的αL序列，以及反向引物TCTGAGCCATGTGCTGGTA
TCGAGGGGC(SEQ ID NO 5)，其在结构域I之后的第二个PfIMl限制性位点处引发。使用这
些引物和经BgI II线性化、在结构域I内的位点处切割的pLFA.huID.Δp进行PCR。扩增
DNA片段，所述片段含有从Nar 1位点至第二个PfIMl位点的序列，而且其中整个结构域I
从C125至G311均被编码GSGSG的DNA序列代替。纯化该段DNA，用Narl和PfIMl对其进
行消化并将其插入到人αL质粒(pRKLFAαm)内相应的Narl和PfIMl位点上。通过序列
分析确认编码GSGSG的DNA序列的正确插入。
液(0.02M HEPES，pH 7.2，0.14MNaCl，0.2％葡萄糖)中。按照所述方式(Edwards等，1998)与结合在板上的ICAM-I-Ig进行结合。为了结合化合物2B，将处于含有0.5％BGG，0.1mM
5
MnCl2，1μg/ml抗β2活化抗体MEM-48和1μM化合物2B的粘附缓冲液中的2×10 个细
胞加入到圆底96孔板的每个孔中。在37℃下将细胞培养1小时，用冷PBS洗涤并用1％的
甲醛/PBS固定。然后在室温下细胞与绵羊抗荧光素-HRP的1∶500稀释液温育1小时，
用PBS洗涤，并与TMB温育15分钟。用1M H3PO4终止反应并在450nm下读数。平行地，使
用一组具有已知的结合表位的抗体，通过FACS分析法检测转染子中表面表达的αL/β2复
合物的结构完整性和是否存在结构域I。
理，来建立非糖尿病对照组。之后的总计6天内，8只糖尿病大鼠的每只眼内每天接受溶于
适当的运载体的LFA-1拮抗剂的滴注。根据相同的给药日程，7只糖尿病动物接受相同体积
的仅有运载体的类似滴注。非糖尿病对照组的动物接受仅有运载体的滴注，并维持血糖正
常。
(micropictograph)检查视网膜组织。通过显微照相术的标准化形态分析来量化糖尿病对
照的角膜组织中发生微血管系统异常的程度、糖尿病治疗组中施用LFA-1拮抗剂对它们的
抑制以及与血糖正常对照组的对比。
洗板，并在室温下用溶于PBS的1％BSA封闭1小时。在PBS中将结构域5的ICAM-Ig稀释
至100ng/ml，并在4℃下以50μl/孔的量将其加入到板中过夜。HuT 78细胞以100g进行
离心，并在37℃下于5％CO2培养箱中用5mM EDTA处理细胞沉淀5分钟。在0.14M NaCl，
0.02M Hepes，0.2％葡萄糖和0.1mM MnCl2(测定缓冲液)中洗涤细胞并离心。将细胞重新
6
悬浮在测定缓冲液中，达到3.0×10 个细胞/ml。在测定缓冲液中将抑制剂稀释至2×终
浓度，并在室温下与HuT78细胞预温育30分钟。将100μl/孔的细胞和抑制剂加入到板
中并在室温下温育1小时。加入100μl/孔的PBS并将板密封，在100g下倒置离心5分
钟。将未贴附的细胞从板中轻轻弹出，并用纸巾吸收过量的PBS。将60μl/孔的对硝基苯
基N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷(0.257g，加至100ml柠檬酸盐缓冲液)加入到板中，并在
37℃下温育1.5小时。用90μl/孔的50mM甘氨酸/5mM EDTA终止酶反应，并在读板器上
读取405nM处的读数。使用Langegren，U.(1984).J.Immunol.Methods 57，379-388的对硝
基苯基正乙酰基β-D-氨基葡糖苷法测定HUT 78细胞与5dICAM-Ig的粘附。其结果示于
表1中。
粘膜保护剂)和环孢菌素A(CsA)的母液，并通过加入培养基达到理想的浓度来制备稀释
液。不使用SEB刺激制备了阴性对照。SEB刺激和载体(0.25％DMSO/培养基)用作阳性
对照。
用SEB刺激之前，在拮抗剂瑞巴派特或CsA的存在下在37℃培养细胞1小时。以1ng/ml的
量添加SEB，在第6、16和48小时收集细胞上清液。用Luminex多重测定来确定测定上清液
中的细胞因子水平。
LFA-1拮抗剂抑制细胞因子释放大于50％，该抑制模式与在CsA的对比中观察到的类似。这
种相似性的例外是，并未表明IL-3、IL-6和IL-12p40对T细胞介导的炎症是重要的。
(0.584-0.991mm)，厚度的平均值+/-标准差为0.030+/-0.004英寸(0.773+/-0.111mm)，变
异系数为14.4％。将组织样品固定在Bronaugh流通扩散池中。用再循环水浴将细胞维持
2
在32℃的恒定温度下。该池具有0.64cm 的标称扩散面积。使用含有0.1％叠氮钠和4％
牛血清白蛋白的pH 7.4的PBS作为固定的组织下的受体相。在组织之下，以标称1.0ml/hr
的流速持续泵送新鲜的受体相，并每隔6小时进行收集。收集受体相用于分析。
用钝性分离来分离表皮和真皮。分析表皮、真皮和受体相的LFA-1拮抗剂的含量。结果示
于表11中。
供了所应用剂量的1.4％，在24小时的接触时间内透过了皮肤组织的所有层。
测定，因此被认为是低估了表皮中存在的药物的量。
小时后LFA-1拮抗剂的真皮沉积为所应用剂量的0.66％(制剂6，0.258μg/cm)至4.4％
2
(制剂7，34.3μg/cm)。对于真皮中的制剂1-9而言，真皮中LFA-1拮抗剂的浓度经计算为
6.7μM(制剂6)或更大(即制剂7提供了54.1μM的真皮浓度)。这些浓度均远远高于体
外EC50浓度，该浓度是实施例7和相应的表1所示的LFA-1拮抗剂类型抑制炎性细胞因子
释放的半数最大效应的浓度。因此这些结果可预测已掺入1％W/W LFA-1拮抗剂的多种制
剂提供治疗有效水平的细胞因子释放体内抑制的能力。
425(1990))。
ELISA认证)过夜。第二天吸出包被溶液。然后用PBS洗板2次，加入100μl的17ng/
ml 5d-ICAM-1-Ig并在37℃下保持4小时。在加入CD4+T细胞之前用PBS洗板2次。从
取自健康供体的肝素化全血中分离外周血淋巴细胞。一种可选的方法是通过白细胞分离
法(leukophoresis)从健康供体获得全血。用盐水将血液1∶1稀释、分层并在LSM上以
2500×g离心分离30分钟(每100ml中使用6.2g Ficoll和9.4g泛影葡胺钠)(Organon
Technica，NJ)。使用骨髓样细胞消耗试剂法消耗单核细胞(Myeloclear，Labs，Hornby，
Ontario，Canada)。将PBL重新悬浮在90％的热灭活的胎牛血清和10％的DMSO中，等
分试样并贮存在液氮中。融化后，将细胞重新悬浮在RPMI 1640培养基中(Gibco，Grand
Island，NY)，所述培养基中补充了10％的热灭活的胎牛血清(Intergen，Purchase，NY)、
1mM丙酮酸钠、3mM L-谷氨酰胺、1mM非必需氨基酸、500μg/ml青霉素、50μg/ml链霉素、
50μg/ml庆大霉素(Gibco)。
下，在100ml培养基(RPMI1640(Gibco)，补充了10％的热灭活的FBS(Intergen)、0.1mM非
必需氨基酸、1nM丙酮酸钠、100单位/ml青霉素、100μg/ml链霉素、50μg/ml庆大霉素、
10mM Hepes和2mM谷氨酰胺)中培养72小时。在培养开始时将抑制剂加入到板中。在收
集细胞之前的最后6小时内加入1μCi/孔的氚化胸腺嘧啶，用以测定这些培养物的增殖响
应。通过液体闪烁计数来测定放射性标记的掺入(Packard 96孔收集器和计数器)。结果
用计数/分钟(cpm)表示。
抗剂在人类混合淋巴细胞反应的增殖和效应组中的作用。
Ficoll和9.4g泛影葡胺钠)(OrganonTechnica，NJ)。一种可选的方法是通过白细胞分离
法从健康供体获得全血。如上所述分离PBMC，将其重新悬浮在90％的热灭活的胎牛血清和
10％的DMSO中，等分试样并贮存在液氮中。融化后，将细胞重新悬浮在RPMI 1640培养基
中(Gibco，Grand Island，NY)，所述培养基中补充了10％的热灭活的胎牛血清(Intergen，Purchase，NY)、1mM的丙酮酸钠、3mM的L-谷氨酰胺、1mM的非必需氨基酸、500μg/ml青霉素、50μg/ml链霉素、50μg/ml庆大霉素(Gibco)。
养。在200μl的完全培养基中，1.5×10 个响应PBMC与等量的辐射(3000拉德，3分52
秒)的同种异体刺激PBMS共培养。在培养开始时加入LFA-1拮抗剂。在37℃下，在5％的
3
CO2中将培养物培养6天，然后用1μCi/孔的 H-胸苷(6.7Ci/mmol，NEN，Boston，MA)脉冲
6小时。在Packard细胞收集器(Packard，Canberra，加拿大)中收集培养物。用液体闪烁
计数法测定[3H]TdR的掺入。结果表示为每分钟的计数(cpm)。
被用作阳性对照。
孔板的各孔中的70μL测定培养基中，以每孔500,000个细胞的量，与70μL溶于测定培养
基的LFA-1拮抗剂或阳性对照温育30分钟。在LFA-1拮抗剂或阳性对照的存在下，在37℃
下，使100μL等份的这种荧光标记的Jurkat细胞悬浮液静止于96孔板中的孔中1小时，
该96孔板包被有表达为Fc嵌合体的重组人ICAM-1。经洗涤和在100g下离心1分钟来除
去未粘附的细胞。在荧光板读数器上确定粘附细胞的粘附荧光单位。
制剂3中配制的，表6)、油膏(如制剂5中配制的，表6)和1％DMSO溶液(对照)制剂，如
表12所示。
重量。
(第6组(凝胶)；第7组(油膏)；第8组(洗液)；第9组(DMSO))的经皮施用，每只动
物接受每天3次背部皮肤的局部应用(大致间隔4小时)，连续7天。
收的测试物质制剂。该条带合并至每个动物的一个样品小瓶中，将剩余的皮肤部分置于第
二个样品小瓶中。记录样品重量。
Pharmacology，(2003)”Celecoxib，a selectivecyclooxgenase-2 inhibitor，inhibits retinal vascular endothelial growthfactor expression and vascular leakage in a streptozotocin-induceddiabetic rat model”，458：283-289。)向大鼠眼睛施用一滴本
14
发明的 C放射性标记的LFA-1拮抗剂的1％溶液制剂(制剂12，表9，或制剂5，表10)，然
后随时间观察其放射性。t＝30分钟和t＝4小时的数据绘制在图12中。在图12中，每
个解剖区域内检测到的放射性标记的拮抗剂的浓度由对应于标记的解剖区域的方框的增
加的灰度来表示。该数据的数值示于表14中，以纳克当量放射性标记的LFA-1拮抗剂/克
组织表示。
水肿/糖尿病性视网膜病中起作用所需的预期的阈值10nM，该阈值对应于在HuT78细胞粘
附测定中具有约2-6nM的IC50的拮抗剂。
随后的一周内获得样品进行药物代谢动力学和药效学评价。从第8天开始，患者每天接受
相同剂量的LFA-1拮抗剂，总共持续14天。评价了PK/PD、安全性试验室研究、眼科研究、角膜染色和荧光素血管造影术。
机、受控的剂量测定试验。三组受试者接受单独的运载体或者两个LFA-1拮抗剂剂量水平
之一的滴注，所述拮抗剂被制成中性、缓冲、等渗的水溶液，每日给药，持续12周。在三个月的随访期内，通过荧光素血管造影术、眼底照相术和全面视敏度检查观察病人的安全性和
改善的证据。
人员可以进行各种变型、改变和替换。应该理解，在本发明的实施中可以采用本文中描述的本发明实施方案的各种替换形式。下列权利要求旨在定义本发明的范围，因此包括这些权
利要求的范围内的方法和结构及其等同方案。
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
