吡唑衍生物
阅读：480发布：2021-06-27
专利汇可以提供吡唑衍生物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且公开了通式(I)化合物，通式(I)，其中，R、Rl、Rc、Rd、Re、Rf、X、Y、Z、A和B如本 申请 中定义。，下面是吡唑衍生物专利的具体信息内容。
1.通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐：
其中：
A和B以及和它们连接的碳一起表示C6-10芳基或C3-10环烃基；
Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、C1-6烷基或C1-6烷酰基；
R1选自氢、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
R选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷基吡咯烷基、C1-6卤代烷基吡咯烷基、C3-12环烷基吡咯烷基、C1-6烷基哌啶基、C6-10芳基或C7-16芳烷基；
X表示氧或硫；以及
Y和Z均为氮。
2.如权利要求1所述的化合物，其中X为氧。
3.如权利要求1所述的化合物，其中R选自氢、C1-6烷基、C1-6烷基吡咯烷基、C1-6卤代烷基吡咯烷基、C3-12环烷基吡咯烷基或C1-6烷基哌啶基。
4.如权利要求1所述的化合物，其中Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢或C1-6烷基。
5.如权利要求1所述的化合物，其中A和B以及和它们连接的碳一起表示苯基、环戊基或环己基。
6.如权利要求1所述的化合物，其中R选自C1-6烷基、苯基、C1-6烷基吡咯烷基、C1-6卤代烷基吡咯烷基、C3-12环烷基吡咯烷基或C1-6烷基哌啶基。
7.如权利要求1所述的化合物，其中R选自甲基、异丙基、苯基、乙基吡咯烷基、丙基吡咯烷基、三氟丙基吡咯烷基、环戊基吡咯烷基、乙基哌啶基或丙基哌啶基。
8.如权利要求1所述的化合物，其选自：
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(1,3-二甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(1-异丙基-3-甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(1-苯基-3-甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 -1-((R)-1- 丙 基 吡 咯
烷-2-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯
烷-2-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-(1- 丙 基 吡 咯
烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-(1- 乙 基 吡 咯
烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-(3,3,3-三氟丙基)吡咯
烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((R)-1- 丙 基 吡 咯
烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯
烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(1-(1-乙基哌啶-2-基)-3-甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-2-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-4-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-(1- 丙 基 吡 咯
烷-3-基)-3,6,7,8-四氢环戊烷并[d]吡唑并[3,4-b]吡啶-5-氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-(1- 环 戊 基 吡 咯
烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 -1-(R)-1- 异 丙 基 吡 咯
烷-2-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(1,3-二甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(1-异丙基-3-甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(3-甲基-1-苯基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 乙 酰 基 -6-(3- 甲 基 -1-((R)-1- 丙 基 吡 咯烷-2-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5- 三 乙 酰 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；以及
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三 乙 酰 氧 基-6-(1-(1- 乙 基 哌 啶 -2-基 )-3- 甲基-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(3-甲-1-(R)-1-异丙基吡咯烷-2-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯。
9.制备权利要求1所述的化合物的方法，所述方法包括将通式(XIV)化合物与通式(XVI)化合物反应得到通式(I)化合物，
其中，W为卤素，A、B、X、Y、Z、R、R1、Rc、Rd、Re和Rf如权利要求1中所定义。
10.如权利要求9所述的方法，其中通式(XIV)化合物在碱作用下与通式(VI)化合物进行反应。
11.药物组合物，其包括药物可接受的载体以及治疗有效量的权利要求1-8中任一权利要求所述的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物或其药物可接受的盐。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其还包含至少一种其它活性成分，其中所述活性成分选自氮芥、氮丙啶、甲基蜜胺、磺酸烷基酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗癌疫苗、阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、阿多来新、阿地白介素、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、安曲霉素、门冬酰胺酶、曲林霉素、阿扎胞苷、阿扎替哌、阿佐霉素、巴马司他、苯佐替哌、比卡鲁胺、盐酸比生群、甲磺酸双萘法德、比折来新、硫酸博来霉素、白消安、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、卡莫司汀、盐酸卡柔比星、苯丁酸氮芥、西罗霉素、克拉屈滨、甲磺酸克立那托、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他宾、多西他塞、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、盐酸表柔比星、盐酸依索比星、雌莫司汀、依他消唑、依托泊苷、氟尿苷、氟尿嘧啶、氟西他滨、吉西他宾、盐酸依达比星、异环磷酰胺、白介素II、干扰素α-2a、干扰素α-2b、盐酸依立替康、来曲唑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、氯苯氨啶、丝列霉素、米托蒽酮、紫杉醇、丙卡巴肼、赛替哌、长春碱、长春新碱、血管生成抑制剂、喜树碱、地塞米松、阿司匹林、乙酰氨基酚、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、美洛昔康、皮质类固醇或肾上腺皮质类固醇。
13.权利要求1-8中任一权利要求所述的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐，或者权利要求11所述的药物组合物在制备抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)活性的药物中的用途。
14.权利要求1-8中任一权利要求所述的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐，或者权利要求11所述的药物组合物在制备治疗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的药物中的用途。
15.如权利要求14所述的用途，其中所述疾病或疾病状态选自炎症性疾病或疾病状态、感染性疾病或疾病状态、免疫类疾病或疾病状态、癌症类疾病或疾病状态以及变性类疾病或疾病状态。
16.如权利要求14所述的用途，其中所述疾病或疾病状态选自头部癌、甲状腺癌、颈癌、眼癌、皮肤癌、口腔癌、咽喉癌、食道癌、胸癌、骨癌、血癌、骨髓癌、肺癌、结肠癌、乙状结肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肠癌、心脏癌、肾上腺癌、皮下组织癌、淋巴结癌、色素瘤、恶性神经胶质瘤、HIV、肝炎、成人呼吸窘迫综合症、骨吸收病、慢性阻塞性肺病、慢性肺炎、炎性皮肤病、囊性纤维变性、败血症性休克、脓毒症、内毒素性休克、血液动力性休克、脓毒病综合症、局部缺血后再灌注损伤、脑膜炎、银屑病、纤维变性疾病、恶病质、移植物抗宿主疾病的移植排斥、类风湿性脊椎炎、关节炎病症、骨质疏松症、肠炎、多发性硬化病、系统性红斑狼疮、麻风病中的麻风性结节性红斑(ENL)、辐射损伤、哮喘、富氧性肺损伤或微生物感染。
17.如权利要求14所述的用途，其中所述疾病或疾病状态选自特异性皮炎、溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎或骨关节炎。
18.如权利要求14所述的用途，其中所述疾病或疾病状态选自皮炎、自身免疫病、微生物感染综合症或节段性回肠炎。
19.如权利要求14所述的用途，其中通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物或其药物可接受的盐的单位剂量为0.1mg-1,000mg。
20.如权利要求14-19中任一权利要求所述的用途，其中所述药物还包括至少一种其它活性成分，其中所述活性成分选自氮芥、氮丙啶、甲基蜜胺、磺酸烷基酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗癌疫苗、阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、阿多来新、阿地白介素、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、安曲霉素、门冬酰胺酶、曲林霉素、阿扎胞苷、阿扎替哌、阿佐霉素、巴马司他、苯佐替哌、比卡鲁胺、盐酸比生群、甲磺酸双萘法德、比折来新、硫酸博来霉素、白消安、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、卡莫司汀、盐酸卡柔比星、苯丁酸氮芥、西罗霉素、克拉屈滨、甲磺酸克立那托、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他宾、多西他塞、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、盐酸表柔比星、盐酸依索比星、雌莫司汀、依他消唑、依托泊苷、氟尿苷、氟尿嘧啶、氟西他滨、吉西他宾、盐酸依达比星、异环磷酰胺、白介素II、干扰素α-2a、干扰素α-2b、盐酸依立替康、来曲唑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、氯苯氨啶、丝列霉素、米托蒽酮、紫杉醇、丙卡巴肼、赛替哌、长春碱、长春新碱、血管生成抑制剂、喜树碱、地塞米松、阿司匹林、乙酰氨基酚、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、美洛昔康、皮质类固醇或肾上腺皮质类固醇。
21.如权利要求20所述的用途，其中同时、协同、分别或顺序给予所述通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐，以及至少一种其它活性成分。
吡唑衍生物
[0001] 领域
[0003] 背景
[0004] 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase，PARP]，也称为聚腺苷二磷酸核糖合成酶(PARS)或聚腺苷二磷酸转移酶(PADPRT)，是存在于真核细胞中的一个关键细胞核酶家族之一。到目前为止，已经确认PARP这个细胞核酶大家族有18个成员，其中含量最丰富的成员PARP-1起到百分之九十以上的二磷酸核糖聚合作用。
[0005] 这个家族的另一个成员PARP-2结构上和PARP-1最接近，二者都含有3个区域：一个是含有两个“锌指”结构的DNA结合和核酸定位区域，这个区域通过锌指结构识别DNA的损伤；其次是中心自修饰区域，包含15个高度保守的谷氨酸残基，被认为是自身聚腺苷二磷酸核糖化的靶位；第三是含有NAD结合位点和合成聚腺苷二磷酸核糖催化位点的C端区域。在人的全身细胞中尤其是在免疫细胞和生殖细胞中PARP的含量是相当丰富的。很多生理过程中都有聚ADP核糖化发生，其多重作用包括染色质的降解、DNA的复制、DNA修复、基因的表达、细胞的分裂和分化以及细胞的凋亡。
[0006] PARP还在转录水平调解各种蛋白的表达，包括介导炎症的NO合成酶等。PARP作为DNA单链或双链损伤的传感器，在DNA损伤应答中起关键作用。当DNA的双链或单链由于辐射、氧化剂和烷基化药物等作用出现断裂时，PARP的活性会显著增强。一旦被激活，PARP将NAD切割为烟酰胺和ADP核糖并将后者聚合到包括组蛋白、转录因子和PARP本身的核受体蛋白上。形成一个与核酸相似的高度分支的二磷酸腺苷核糖高聚体(PAR)。该具有高度负电荷高聚体的形成，导致DNA和组蛋白之间的静电脉冲，染色质结构松弛。有利于染色质重组、DNA修复及转录调节的进行。造成了其它诸如XRCC1、LIGIII等DNA修复酶的侵入，是DNA修复机制的关键步骤。
[0007] 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶在DNA损伤中所起的作用有着相反的两个方面：一方面，PARP是细胞存活并保持染色体稳定的一个重要因素；另一方面，PARP过度激活是导致细胞死亡的重要原因之一。产生这个矛盾的主要原因在于外界刺激(如烷基化试剂、射线、氧化等)所造成DNA损伤程度的不同，当细胞受到轻微的损伤时，PARP被激活，修复损伤的部位；当细胞遭受较强的损伤时，PARP被大量激活，消耗大量的NAD，进而耗竭细胞中的ATP，使细胞处于能量缺乏状态，细胞受到更大且不可修复的损伤，从而导致细胞坏死或凋亡。
[0008] 概述
[0009] 一方面，本申请涉及通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物：
[0010]
[0011] 其中：
[0012] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0014] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0015] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0016] X选自氧或硫；以及
[0017] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0018] 又一方面，本申请涉及通式(I)化合物的制备方法，所述方法包括将通式(XIV)化合物与通式(VI)化合物反应得到通式(I)化合物，
[0019]
[0020] 其中：
[0021] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0022] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0023] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0024] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0025] W为卤素；
[0026] X选自氧或硫；以及
[0027] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0028] 另一方面，本申请涉及药物组合物，其包括药物可接受的载体以及治疗有效量的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物：
[0029]
[0030] 其中：
[0031] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0032] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0033] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0034] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0035] X选自氧或硫；以及
[0036] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0037] 又一方面，本申请涉及抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)活性的方法，所述方法包括将治疗有效量的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物与PARP接触，
[0038]
[0039] 其中：
[0040] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0041] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0042] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0043] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0044] X选自氧或硫；以及
[0045] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0046] 再一方面，本申请涉及治疗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的方法，所述方法包括向需要所述方法的个体给予治疗有效量的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物：
[0047]
[0048] 其中：
[0049] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0050] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0051] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0052] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0053] X选自氧或硫；以及
[0054] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0055] 详述
[0056] 在以下的说明中，包括某些具体的细节以对各个公开的实施方案提供全面的理解。然而，相关领域的技术人员会认识到，不采用一个或多个这些具体的细节，而采用其它方法、部件、材料等的情况下可实现实施方案。
[0057] 除非本申请中另外要求，在整个说明书和其后的权利要求书中，词语“包括(comprise)”及其英文变体例如“包括(comprises)”和“包括(comprising)”应解释为开放式的、含括式的意义，即“包括但不限于”。
[0058] 在整个本说明书中提到的“一实施方案”或“实施方案”或“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”意指在至少一实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，在整个说明书中不同位置出现的短语“在一实施方案中”或“在实施方案中”或“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”不必全部指同一实施方案。此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或多个实施方案中结合。
[0059] 应当理解，在本申请说明书和附加的权利要求书中用到的单数形式的冠词“一”(对应于英文“a”、“an”和“the”)包括复数的对象，除非文中另外明确地规定。因此，例如提到的包括“催化剂”的反应包括一种催化剂，或两种或多种催化剂。还应当理解，术语“或”通常以其包括“和/或”的含义而使用，除非文中另外明确地规定。
[0060] 定义
[0061] 由表明在所示化学基团中找到的碳原子总数的简化符号在前面标示本文中命名的某些化学基团。例如，C7-C12烷基描述具有总数为7至12个碳原子的如下定义的烷基，并且C4-C12环烃基烷基描述具有总数为4至12个碳原子的如下定义的环烃基烷基。简化符号中碳原子总数并不包含可能存在于所述基团的取代基中的碳。
[0062] 因此，非另有相反的说明，否则说明书及所附权利要求中所用的下列术语具有以下的意思：
[0063] “羟基”指-OH基团。
[0064] “氰基”指-CN基团。
[0065] “硝基”指-NO2基团。
[0066] “氨基”指-NH2基团。
[0067] “巯基”指-SH基团。
[0068] “烷基”指仅由碳和氢原子组成的，不含不饱和的，具有一至十二个碳原子的，尤其是具有一至八个碳原子或一至六个碳原子的，且由单键与分子的其余部分相连的直链或支链烃链基团，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)等。
[0069] 烷基基团可以是任意取代的，亦即取代或未取代的。当被取代时，取代基团是单独地并且独立地选自下列的一个或多个基团：环烃基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烃氧基、芳氧基、巯基、烃硫基、芳硫基、氰基、卤代、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-亚磺酰氨基、N-亚磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、异氰酸根合、氰硫基、异硫氰酸根合、硝基、甲硅烷基、三卤代甲烷磺酰基、-NR’R”或包括单-和二-取代的氨基基团在内的氨基，及其被保护的衍生物。通常烃基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。每当取代基被描述为被“任意取代的”时，取代基可被上述取代基之一取代。
[0070] “烷氧基”是指通式-OR，其中R是上文所定义的烷基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、叔戊氧基等。烷氧基基团的烷基部分可以如对上述烷基基团定义的那样被任意地取代。
[0071] “环烃基”指仅由碳和氢原子组成的，具有三至十五个碳原子的，尤其是具有三至十二个碳原子的，并且其为饱和或不饱和的，并且通过单键与分子的其余部分相连的稳定的非芳香族单环或双环烃基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环癸基等。
[0072] 环烃基基团可以是任意取代的，亦即取代或未取代的。当被取代时，取代基团是单独地并且独立地选自下列的一个或多个基团：环烃基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烃氧基、芳氧基、巯基、烃硫基、芳硫基、氰基、卤代、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-亚磺酰氨基、N-亚磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、异氰酸根合、氰硫基、异硫氰酸根合、硝基、甲硅烷基、三卤代甲烷磺酰基、-NR’R”或包括单-和二-取代的氨基基团在内的氨基，及其被保护的衍生物。通常烃基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。每当取代基被描述为被“任意取代的”时，取代基可被上述取代基之一取代。
[0073] “杂环基”指由碳原子和一至五个选自氮、氧和硫的杂原子组成的稳定的三至十八员的非芳香族环基团。针对本申请的目的，杂环基可以是单环、双环、三环或四环环体系，其可以包含稠合的或桥联的环体系，并且杂环基基团中的氮、碳或硫原子可以被任意地氧化；氮原子可以被任意地季铵化；并且杂环基基团可以是部分或全部饱和的。这样的杂环基基团的实例包括但不限于二氧环戊基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、噻吗啉基、1-氧代-硫代吗啉基和1，1-二氧代-硫代吗啉基。
[0074] 杂环基基团可以是任意取代的，亦即取代或未取代的。当被取代时，取代基团是单独地并且独立地选自下列的一个或多个基团：环烃基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烃氧基、芳氧基、巯基、烃硫基、芳硫基、氰基、卤代、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-亚磺酰氨基、N-亚磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、异氰酸根合、氰硫基、异硫氰酸根合、硝基、甲硅烷基、三卤代甲烷磺酰基、-NR’R”或包括单-和二-取代的氨基基团在内的氨基，及其被保护的衍生物。通常烃基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。每当取代基被描述为被“任意取代的”时，取代基可被上述取代基之一取代。
[0075] “卤素”指溴、氯、氟或碘。
[0076] “卤代烷基”指被一个或多个上述定义的卤素所取代的上述定义的烷基，例如三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2，2，2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1-溴甲基-2-溴乙基等。卤代烷基的烷基部分可以如对上述烷基的定义那样被任意地取代。
[0077] “芳基”指仅由氢和碳组成的，并且含六至十九个碳原子，尤其是具有六至十个碳原子的芳香族单环或多环烃环体系，其中所述环体系可以是部分或完全饱和的。芳基基团包括但不限于芴基、苯基及萘基。
[0078] “芳烷基”指通式-RaRb基团，其中Ra是上述定义的烷基并且Rb是上述定义的一个或多个芳基基团，例如苄基、二苯基甲基等。芳烷基基团的芳基部分可以如对上述芳基定义的那样被任意地取代。芳烷基基团的烷基部分可以如对上述烷基基团的定义那样被任意地取代。
[0079] “杂芳基”指由碳原子和一至五个选自氮、氧和硫的杂原子组成的五至十八员的芳环基团。针对本申请的目的，杂芳基基团可以是单环、双环、三环或四环环体系，其可以包含稠合的或桥联的环体系；并且杂芳基基团中的氮、碳或硫原子可以任意地被氧化；氮原子可以任意地季铵化。实例包括但不限于氮杂卓基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并噻二唑基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并二噁英基、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(苯并苯硫基)、苯并三唑基、苯并[4，6]咪唑并[1，2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、二苯并呋喃基、呋喃基、呋喃酮基、异噻唑基、咪唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、中氮茚基、异噁唑基、萘啶基、噁二唑基、2-氧代氮杂卓基、噁唑基、环氧乙烷基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、2，3-二氮杂萘基、喋啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、奎宁环基、异喹啉基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基以及苯硫基。
[0080] 杂芳基基团可以是任意取代的，亦即取代或未取代的。当被取代时，取代基团是单独地并且独立地选自下列的一个或多个基团：环烃基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烃氧基、芳氧基、巯基、烃硫基、芳硫基、氰基、卤代、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-亚磺酰氨基、N-亚磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、异氰酸根合、氰硫基、异硫氰酸根合、硝基、甲硅烷基、三卤代甲烷磺酰基、-NR’R”或包括单-和二-取代的氨基基团在内的氨基，及其被保护的衍生物。通常烃基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。每当取代基被描述为被“任意取代的”时，取代基可被上述取代基之一取代。
[0081] “硫醚基”指-SR基团，其中R可以是上文定义的烷基、环烃基、杂环基、芳基、杂芳基等基团。硫醚基的实例包括但不限于-SCH3和-SCH2CH3。
[0082] “酰基”指-C(＝O)R基团，其中R可以是上文定义的烷基(此时称为烷酰基)、环烃基(此时称为环烃基酰基)、杂环基(此时称为杂环基酰基)、芳基(此时称为芳基酰基)、杂芳基(此时称为杂芳基酰基)等基团。酰基的实例包括但不限于-C(＝O)CH3(乙酰基)、-C(＝O)CH2CH3(丙酰基)、-C(＝O)C(CH3)3(丁酰基)和-C(＝O)Ph(苯甲酰基或苯酮)。
[0083] “酰氨基”指-NR1C(＝O)R2基团，其中R1、R2可以独立地是氢或者是上文定义的烷基、环烃基、杂环基、芳基、杂芳基等基团。酰胺基的实例包括但不限于-NHC(＝O)H(甲酰氨基)、-NHC(＝O)CH3(乙酰氨基)和-NHC(＝O)NHPh(苯甲酰氨基)。
[0084] “亚磺酰基”指-S(＝O)R基团，其中R可以是上文定义的烷基、环烃基、杂环基、芳基、杂芳基等基团。亚磺酰基的实例包括但不限于-S(＝O)CH3和-S(＝O)CH2CH3。
[0085] “磺酰基”指-S(＝O)2R基团，其中R可以是上文定义的烷基、环烃基、杂环基、芳基、杂芳基等基团。磺酰基的实例包括但不限于-S(＝O)2CH3(甲磺酰基)、-S(＝O)2CF3、-S(＝O)2CH2CH3和4-甲基苯磺酰基(甲苯磺酰基)。
[0086] “前药”指可以在生理条件下或通过溶剂分解转化成本申请的生物活性化合物的化合物。因而，术语“前药”指药物可接受的本申请化合物的代谢前体。在对需要前药的个体给药时，前药可以是无活性的，但在体内前药可以转化成本申请的活性化合物。前药通常可在体内快速转化以获得本申请的母体化合物，例如通过血液中的水解。前药化合物通常在哺乳动物的有机体中提供溶解度、组织相容性或缓释的优点(参见Bundgard，H.，Design of Prodrugs(前药的设计)(1985)，pp.7-9，21-24(Elsevier，Amsterdam))。
[0087] Higuchi，T.，et al，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems(作为新颖输送系统的前药)，”A.C.S.Symposium Series，Vol.14和Bioreversible Carriers in Drug Design(药物设计的生物可逆载体)，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中提供了前药的讨论，本文引入二者的全部内容作为参考。
[0088] 术语“前药”还包括当将该前药对哺乳动物个体给药时，可以体内释放本申请活性化合物的任何共价键结合的载体。可以通过这样的方式修饰存在于本申请化合物中的官能团来制备本申请化合物的前药，以致使用常规操作或在体内均可以使修饰断裂而形成本申请的母体化合物。前药包含本申请化合物，其中羟基、氨基或巯基基团与任意基团成键，在对哺乳动物个体给予本申请化合物的前药时，所述的成键基团会断裂以分别形成游离的羟基、游离的氨基或游离的巯基。前药的实例包括但不限于本申请化合物中的醇或胺官能团的乙酸盐、甲酸盐和苯甲酸盐的衍生物等。
[0089] “代谢物”旨在指本申请的活性化合物可以在生理条件下或体内转化成的有机化合物。其化学结构可以和本申请的活性化合物近似，也可以相差较大，通常有一定的生物活性。“代谢物”的形成可以在人体循环系统比如血液，也可以在其它组织或细胞内。“代谢物”有时在哺乳动物的有机体中提供溶解度、组织相容性或缓释的优点。
[0090] “任意的”或“任意地”指后续叙述的状况可能出现或可能不出现，并且该叙述包括所述事件或状况发生的情况和不发生的情况。例如，“任意取代的芳基”指芳基基团可能被取代或可能不被取代，并且该叙述包括取代的芳基基团和未取代的芳基基团。
[0091] “药物可接受的载体”包括但不限于已经被美国食品与药品管理局认可的而可用于人类或动物的任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、香味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗压剂、溶剂或乳化剂等对组成药物组合物无副作用的各种形式的载体。
[0092] “药物可接受的盐”包括“药物可接受的酸加合盐”和“药物可接受的碱加合盐”。
[0093] “药物可接受的酸加合盐”指保持游离碱的生物学有效性和性质的那些盐，所述酸加合盐是在生物学或其它方面合适的并且是使用无机酸或有机酸来形成的，所述无机酸例如但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有机酸例如但不限于乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯羧酸、4-乙酰胺基苯羧酸、樟脑酸、樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷基氨基磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1，2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羟基乙烷磺酸、甲酸、富马酸、粘酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、马尿酸、异丁酸、乳酸、乳糖醛酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲烷磺酸、黏酸、萘-1，5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、十一碳烯酸等。
[0094] “药物可接受的碱加合盐”指保持游离酸的生物学有效性和性质的那些盐，所述碱加成盐是在生物学或其它方面合适的。向游离酸中加入无机碱或有机碱来制备这些盐。由无机碱衍生的盐包括但不限于钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。优选的无机盐为铵、钠、钾、钙及镁盐。由有机碱衍生的盐包括但不限于伯、仲和叔胺的盐、包括天然存在的取代的胺在内的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂的盐，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、二甲氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、苄胺、苯乙二胺、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、氨基丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。特别优选的有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱和咖啡因。
[0095] “药物组合物”指本申请化合物与通常被本领域所接受的将生物活性化合物输送至个体的介质所形成的制剂。这样的介质包括所有药物可接受的载体。
[0096] 含有通式(I)化合物的药物组合物，可按配方制造且作为以下剂型使用：供口服给药的片剂、胶囊或酏剂；供直肠给药的栓剂；供注射给药的无菌溶液，悬浮液；供透皮给药的贴片以及皮下沉积物等。注射剂可以下列常规形式制备：溶液或悬浮液、在注射前适合制成溶液或悬浮液的固体剂型、或乳剂。适合的赋形剂是，例如，水、盐水、葡萄糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、半胱氨酸盐酸盐等。另外，如果需要，所述的注射用药物组合物可包含较少量的无毒性辅助物，例如湿润剂、pH缓冲剂等。如果需要，也可使用吸收增强剂(例如，脂质体)。
[0097] 用于非肠道给药的制剂包括以水溶性形式存在的所述活性化合物的水溶液。另外，所述活性化合物的悬浮液可制备成合适的油状注射悬液。适合的亲脂性溶剂或载体包括诸如芝麻油的脂肪油，或其它诸如大豆油、柚油或杏仁油的有机油，或诸如油酸乙酯或甘油三酯的合成的脂肪酸酯，或脂质体。水性注射悬液可包含增加所述悬液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，所述的混悬液可包含适合的稳定剂或提高所述化合物的溶解性的试剂，使得可制备高浓度的溶液。
[0098] 用于口服的药物制剂可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体赋形剂结合，任选地碾磨所得的混合物，以及加工该颗粒混合物，如果需要，在加入适合的辅助剂后得到了片剂或糖衣剂核。适合的赋形剂是，具体而言，诸如糖的填充剂，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、和\或者聚乙烯吡咯酮(PVP)。如果需要，可加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或诸如藻酸钠的藻酸盐。对糖衣剂核进行适合的包被。为了这个目的，可使用浓缩的糖溶液，该溶液可任选地包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝胶、聚乙二醇和\或二氧化钛、紫胶漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了识别或表示活性化合物剂量的不同组合的特征，可向片剂或糖衣剂包衣中加入染料或色素。使用本领域中公知的方法可制造这些制剂。
[0099] 本申请还涉及在制药领域中公知的用于包括眼内的、鼻内的和耳内的输送的各种药物组合物。药物配方包括所述活性化合物的水性眼用溶液，其可以诸如滴眼剂的水溶性形式存在，或以结冷胶或水凝胶；眼用软膏；眼用混悬液，例如微粒，悬浮在液体载体介质中的包含药物的小聚合粒子，脂溶性制剂，和微球；以及眼用嵌入剂。为了稳定性和舒适性，这些合适的药物制剂最经常和优选地制造成无菌的、等渗的和缓冲的制剂。药物组合物也包括滴剂和喷雾剂，其常在许多方面模拟鼻分泌物来确保正常纤毛作用的维持。正如本领域的技术人员公知的那样，合适的制剂最常和优选地是等渗的，保持pH值5.5到6.5的轻度缓冲的，且最经常和优选地包括抗菌性防腐剂和适当的药物稳定剂。用于耳内转运的药物制剂包括悬浮液和在耳内局部应用的软膏。用于这些耳用制剂的普通溶剂包括甘油和水。
[0100] 当作为抑制PARP的化合物使用时，通式(I)化合物或包含通式(I)化合物的药物组合物可通过口服或非口服途径给药。当口服给药时，它可以以胶囊、片剂、颗粒剂、喷雾剂、糖浆剂或其它剂型给药。当非口服给药时，它可以以水性悬浮液、油性制剂等或以滴剂、栓剂、油膏剂、软膏剂等给药，当注射给药时，通过皮下、腹膜内、静脉内、肌内等方式给药。
[0101] “治疗有效量”指当对个体，例如哺乳动物，尤其对人类给药时，本申请化合物足以有效治疗(如下定义)个体，例如哺乳动物的，尤其是人类的RARP介导的疾病或疾病状态的量。根据所选择的化合物、疾病状态及其严重性、以及待治疗哺乳动物的年龄，构成“治疗有效量”的本申请化合物的量将会不同，但是本领域的技术人员根据其自身的知识以及本公开可以依惯例确定本申请化合物的量。
[0102] 本文所用的“进行治疗”或“治疗”涵盖患有相关疾病或病症的个体，例如哺乳动物，尤其是人类中治疗相关的疾病或疾病状态，并且包括：
[0103] (i)预防疾病或疾病状态在个体例如哺乳动物中发生，尤其是当该个体例如哺乳动物易感于所述疾病状态，但尚未被诊断出患有这种疾病状态时；
[0104] (ii)抑制疾病或疾病状态，即阻止其发生；或者
[0105] (iii)缓解疾病或疾病状态，即使疾病或疾病状态消退。
[0106] 在整个治疗过程中，体内给药可以以单次给药、连续或间歇给药(例如以分割的剂量以适宜的间隔给药)的方式来进行。测定最有效的给药方式和剂量的方法是本领域技术人员公知的，并随着治疗所用的制剂、治疗的目的、所治疗的靶细胞以及所治疗的个体而改变。可以进行单次或多次给药，剂量水平和模式由主治医师进行选择。
[0107] 正如本文所用的那样，术语“疾病”和“疾病状态”可以相互交换使用，或者可以是不同的，因为特殊的疾病或疾病状态可能并没有已知的致病因子(因此不能用病因学解释)，因此其不被公认为是疾病，而是被认为是不期望的疾病状态或病症，其中临床医生已经鉴定出或多或少的特定系列的症状。
[0108] 本文中所用的“接触”指使两种或多种物质靠近至可以相互作用。
[0109] “立体异构体”指由相同的键键合的相同的原子组成的，但具有不可互换的不同三维结构的化合物。本申请涵盖各种立体异构体及其混合物。
[0110] 本申请的化合物或其药物可接受性盐可以含一个或多个不对称中心，并且因此可以产生对映异构体、非对映异构体、以及其它立体异构形式，可以根据绝对立体化学将其定义为(R)-或(S)-，或氨基酸的(D)-或(L)-。本申请“立体异构体”旨在包括所有这些可能的异构体，以及其外消旋形式和光学纯的形式。可使用手性合成子或手性试剂制备旋光的(+)和(-)、(R)-和(S)-、或(D)-和(L)-异构体，或使用常规技术进行拆分，如使用手性柱的HPLC。当本文所述的化合物含有烯双键或其它几何不对称中心时，除非另有说明，否则意味着化合物包括E和Z几何异构体。同样，还意味着包括所有的互变异构形式。
具体实施方式
[0111] 一方面，本申请涉及通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物：
[0112]
[0113] 其中：
[0114] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0115] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0116] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0117] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0118] X选自氧或硫；以及
[0119] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0120] 在某些实施方案，任意取代的烷基为任意取代的C1-C12烷基。
[0121] 在某些实施方案，任意取代的烷基为任意取代的C1-C8烷基。
[0122] 在某些实施方案，任意取代的烷基为任意取代的C1-C6烷基。
[0123] 在某些实施方案，任意取代的烷氧基为任意取代的C1-C12烷氧基。
[0124] 在某些实施方案，任意取代的烷氧基为任意取代的C1-C8烷氧基。
[0125] 在某些实施方案，任意取代的烷氧基为任意取代的C1-C6烷氧基。
[0126] 在某些实施方案，任意取代的卤代烷基为任意取代的C1-C12卤代烷基。
[0127] 在某些实施方案，任意取代的卤代烷基为任意取代的C1-C8卤代烷基。
[0128] 在某些实施方案，任意取代的卤代烷基为任意取代的C1-C6卤代烷基。
[0129] 在某些实施方案，任意取代的卤代烷氧基为任意取代的C1-C12卤代烷氧基。
[0130] 在某些实施方案，任意取代的卤代烷氧基为任意取代的C1-C8卤代烷氧基。
[0131] 在某些实施方案，任意取代的卤代烷氧基为任意取代的C1-C6卤代烷氧基。
[0132] 在某些实施方案，任意取代的环烃基为任意取代的C3-C15环烃基。
[0133] 在某些实施方案，任意取代的环烃基为任意取代的C3-C12环烃基。
[0134] 在某些实施方案，任意取代的杂环基为任意取代的C2-C13杂环基。
[0135] 在某些实施方案，任意取代的杂环基为任意取代的C3-C10杂环基。
[0136] 在某些实施方案，任意取代的芳基为任意取代的C6-C19芳基。
[0137] 在某些实施方案，任意取代的芳基为任意取代的C6-C10芳基。
[0138] 在某些实施方案，任意取代的芳烷基为任意取代的C7-C31芳烷基。
[0139] 在某些实施方案，任意取代的芳烷基为任意取代的C7-C27芳烷基。
[0140] 在某些实施方案，任意取代的芳烷基为任意取代的C7-C16芳烷基。
[0141] 在某些实施方案，任意取代的杂芳基为任意取代的C4-C13杂芳基。
[0142] 在某些实施方案，任意取代的杂芳基为任意取代的C4-C9杂芳基。
[0143] 在某些实施方案中，A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的C6-C19芳基、任意取代的C4-C13杂芳基、任意取代的C3-C15环烃基、任意取代的C2-C13杂环烃基。
[0144] 在某些实施方案中，A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的C6-C10芳基、任意取代的C4-C9杂芳基、任意取代的C3-C12环烃基、任意取代的C3-C10杂环烃基。
[0145] 在某些实施方案中，A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基或任意取代的环烃基。
[0146] 在某些实施方案中，A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的C6-C19芳基或任意取代的C3-C15环烃基。
[0147] 在某些实施方案中，A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的C6-C10芳基或任意取代的C3-C10环烃基。
[0148] 在某些实施方案中，A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的苯基、任意取代的环戊基或任意取代的环己基。
[0149] 在某些实施方案中，X为氧。
[0150] 在某些实施方案中，Y和Z均为氮。
[0151] 在某些实施方案中，R1选自氢、任意取代的烷基或任意取代的卤代烷基。
[0152] 在某些实施方案中，R1选自氢、任意取代的C1-C12烷基或任意取代的C1-C12卤代烷基。
[0153] 在某些实施方案中，R1选自氢、任意取代的C1-C8烷基或任意取代的C1-C8卤代烷基。
[0154] 在某些实施方案中，R1选自氢、任意取代的C1-C6烷基或任意取代的C1-C6卤代烷基。
[0155] 在某些实施方案中，R1为甲基。
[0156] 在某些实施方案中，R选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基或任意取代的杂环基。
[0157] 在某些实施方案中，R选自烷基、苯基、烷基吡咯烷基、卤代烷基吡咯烷基、环烃基吡咯烷基或烷基哌啶基。
[0158] 在某些实施方案中，R选自C1-C12烷基、苯基、C1-C12烷基吡咯烷基、C1-C12卤代烷基吡咯烷基、C3-C15环烃基吡咯烷基或C1-C12烷基哌啶基。
[0159] 在某些实施方案中，R选自C1-C8烷基、苯基、C1-C8烷基吡咯烷基、C1-C8卤代烷基吡咯烷基、C3-C12环烃基吡咯烷基或C1-C8烷基哌啶基。
[0160] 在某些实施方案中，R选自C1-C6烷基、苯基、C1-C8烷基吡咯烷基、C1-C6卤代烷基吡咯烷基、C3-C12环烷基吡咯烷基或C1-C6烷基哌啶基。
[0161] 在某些实施方案中，R选自甲基、异丙基、苯基、乙基吡咯烷基、丙基吡咯烷基、三氟丙基吡咯烷基、环戊基吡咯烷基、乙基哌啶基、或丙基哌啶基。
[0162] 在某些实施方案中，Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢或任意取代的烷基。
[0163] 在某些实施方案中，Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢或任意取代的C1-C12烷基。
[0164] 在某些实施方案中，Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢或任意取代的C1-C8烷基。
[0165] 在某些实施方案中，Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢或任意取代的C1-C6烷基。
[0166] 在某些实施方案中，Rc、Rd、Re、Rf均为氢。
[0167] 在某些实施方案中，所述通式(I)化合物选自：
[0168] (2S，3S，4S，5R，6S)-6-(1，3-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-3，4，5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0169] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-异丙基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0170] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-苯基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0171] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲-1-((R)-1-丙基吡咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0172] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0173] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0174] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-乙基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0175] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-(3，3，3-三氟丙基)吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0176] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((R)-1- 丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0177] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0178] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-(1-乙基哌啶-2-基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0179] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0180] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0181] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-4-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0182] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3，6，7，8-四氢环戊烷并[d]吡唑并[3，4-b]吡啶-5-氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0183] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0184] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-环戊基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0185] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲-1-(R)-1-异丙基吡咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸；
[0186] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(1，3-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0187] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(1-异丙基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0188] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(3-甲基-1-苯基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0189] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三 乙 酰 基-6-(3-甲 基 -1-((R)-1-丙 基 吡 咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0190] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0191] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0192] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-乙基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0193] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-(3，3，3-三氟丙基)吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0194] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三 乙 酰 基-6-(3-甲 基 -1-((R)-1-丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0195] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三 乙 酰 基-6-(3-甲 基 -1-((S)-1-丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0196] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(1-(1-乙基哌啶-2-基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0197] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0198] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0199] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-4-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0200] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3，6，7，8-四氢环戊烷并[d]吡唑并[3，4-b]吡啶-5-氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0201] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；
[0202] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-环戊基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯；以及[0203] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲-1-(R)-1-异丙基吡咯烷-2-基)-6，
7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯。
7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯。
[0204] 又一方面，本申请涉及通式(I)化合物的制备方法，所述方法包括将通式(XIV)化合物与通式(VI)化合物反应得到通式(I)化合物，
[0205]
[0206] 其中：
[0207] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0208] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0209] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0210] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的以及和它们连接的碳芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0211] W为卤素；
[0212] X选自氧或硫；以及
[0213] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0214] 在某些实施方案中，通式(XIV)化合物在碱作用下与通式(VI)化合物进行反应得到通式(I)化合物。
[0215] 在某些实施方案中，通式(XIV)化合物先与氢化钠反应并用硝酸银处理后再与通式(VI)化合物进行反应得到通式(I)化合物。
[0216] 另一方面，本申请涉及药物组合物，其包括药物可接受的载体以及治疗有效量的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物：
[0217]
[0218] 其中：
[0219] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0220] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0221] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0222] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0223] X选自氧或硫；以及
[0224] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0225] 在某些实施方案中，所述药物组合物还包含至少一种其它活性成分。
[0226] 能够用于本申请的实例性的活性成分包括但不限于氮芥、氮丙啶、甲基蜜胺、磺酸烷基酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗癌疫苗、阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、阿多来新、阿地白介素、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、安曲霉素、门冬酰胺酶、曲林霉素、阿扎胞苷、阿扎替哌、阿佐霉素、巴马司他、苯佐替哌、比卡鲁胺、盐酸比生群、甲磺酸双萘法德、比折来新、硫酸博来霉素、白消安、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、卡莫司汀、盐酸卡柔比星、苯丁酸氮芥、西罗霉素、克拉屈滨、甲磺酸克立那托、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他宾、多西他塞、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、盐酸表柔比星、盐酸依索比星、雌莫司汀、依他消唑、依托泊苷、氟尿苷、氟尿嘧啶、氟西他滨、吉西他宾、盐酸依达比星、异环磷酰胺、白介素II、干扰素α-2a、干扰素α-2b、盐酸依立替康、来曲唑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、氯苯氨啶、丝列霉素、米托蒽酮、紫杉醇、丙卡巴肼、赛替哌、长春碱、长春新碱、血管生成抑制剂、喜树碱、地塞米松、阿司匹林、乙酰氨基酚、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、美洛昔康、皮质类固醇和肾上腺皮质类固醇。
[0227] 又一方面，本申请涉及抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)活性的方法，所述方法包括将治疗有效量的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物与PARP接触，
[0228]
[0229] 其中：
[0230] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0231] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0232] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0233] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0234] X选自氧或硫；以及
[0235] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0236] 在某些实施方案中，抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)活性的方法是在体外进行的。
[0237] 在某些实施方案中，接触可以在诸如试管、petri培养皿等的容器中完成。
[0238] 在某些实施方案中，接触可以在其它物质存在下进行。
[0239] 在某些实施方案中，接触可在细胞存在下进行。
[0240] 在某些这类实施方案中，接触的一种或多种物质可以在细胞内。细胞可以是存活的或死亡的。细胞可以是完整的或不完整的。
[0241] 再一方面，本申请涉及治疗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的方法，所述方法包括向需要所述方法的个体给予治疗有效量的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物：
[0242]
[0243] 其中：
[0244] A和B独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的烷氧基、任意取代的卤代烷基、任意取代的卤代烷氧基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基、任意取代的杂芳基、卤素、羟基、硝基、氨基、任意取代的酰氨基、巯基、任意取代的硫醚基、任意取代的亚磺酰基或任意取代的磺酰基；或者
[0245] A和B以及和它们连接的碳一起表示任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环烃基；
[0246] Rc、Rd、Re、Rf独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的酰基；
[0247] R1和R独立地选自氢、任意取代的烷基、任意取代的卤代烷基、任意取代的环烃基、任意取代的杂环基、任意取代的芳基、任意取代的芳烷基或任意取代的杂芳基；
[0248] X选自氮氧或硫；以及
[0249] Y、Z独立地选自氮、氧、硫或任意取代的亚甲基。
[0250] 在某些实施方案中，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的实例包括但不限于炎症性疾病或疾病状态、感染性疾病或疾病状态、免疫类疾病或疾病状态、癌症类疾病或疾病状态以及变性类疾病或疾病状态。
[0251] 在某些实施方案中，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的实例包括但不限于头部癌、甲状腺癌、颈癌、眼癌、皮肤癌、口腔癌、咽喉癌、食道癌、胸癌、骨癌、血癌、骨髓癌、肺癌、结肠癌、乙状结肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肠癌、心脏癌、肾上腺癌、皮下组织癌、淋巴结癌、色素瘤、恶性神经胶质瘤、HIV、肝炎、成人呼吸窘迫综合症、骨吸收病、慢性阻塞性肺病、慢性肺炎、皮炎、炎性皮肤病、特异性皮炎、囊性纤维变性、败血症性休克、脓毒症、内毒素性休克、血液动力性休克、脓毒病综合症、局部缺血后再灌注损伤、脑膜炎、银屑病、纤维变性疾病、恶病质、移植物抗宿主疾病的移植排斥、自身免疫病、类风湿性脊椎炎、关节炎病症(如类风湿性关节炎或骨关节炎)、骨质疏松症、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、肠炎、多发性硬化病、系统性红斑狼疮、麻风病中的麻风性结节性红斑(ENL)、辐射损伤、哮喘、富氧性肺损伤、微生物感染和微生物感染综合症。
[0252] 在某些实施方案中，向需要治疗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的个体给予通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物的单位剂量为0.1mg-1000mg。
[0253] 在某些实施方案中，向需要治疗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的个体给予通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物的单位剂量为1mg-1000mg。
[0254] 在某些实施方案中，需要治疗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的方法包括向需要所述方法的个体给予治疗有效量的通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物，以及至少一种其他活性成分。
[0255] 能够用于本申请的其它活性成分的实例包括但不限于氮芥、氮丙啶、甲基蜜胺、磺酸烷基酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗癌疫苗、阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、阿多来新、阿地白介素、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、安曲霉素、门冬酰胺酶、曲林霉素、阿扎胞苷、阿扎替哌、阿佐霉素、巴马司他、苯佐替哌、比卡鲁胺、盐酸比生群、甲磺酸双萘法德、比折来新、硫酸博来霉素、白消安、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、卡莫司汀、盐酸卡柔比星、苯丁酸氮芥、西罗霉素、克拉屈滨、甲磺酸克立那托、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他宾、多西他塞、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、盐酸表柔比星、盐酸依索比星、雌莫司汀、依他消唑、依托泊苷、氟尿苷、氟尿嘧啶、氟西他滨、吉西他宾、盐酸依达比星、异环磷酰胺、白介素II、干扰素α-2a、干扰素α-2b、盐酸依立替康、来曲唑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、氯苯氨啶、丝列霉素、米托蒽酮、紫杉醇、丙卡巴肼、赛替哌、长春碱、长春新碱、血管生成抑制剂、喜树碱、地塞米松、阿司匹林、乙酰氨基酚、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、美洛昔康、皮质类固醇或肾上腺皮质类固醇。
[0256] 在某些实施方案中，向需要治疗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)介导的疾病或疾病状态的方法的个体同时、协同、分别或顺序给予所述通式(I)化合物、其单一立体异构体、或立体异构体的混合物、其药物可接受的盐、其前药或其代谢物，以及至少一种其它活性成分。
[0257] 本申请化合物的制备
[0258] 应当理解，在以下说明中，只有当取代基的组合和/或所述通式的变体可以得到稳定的化合物时，这类取代基的组合和/或所述通式的变体才是允许的。
[0259] 本领域技术人员可以理解，在下所述的方法中，中间体化合物的官能团可能需要被适当的保护基保护。这样的官能团包括羟基、氨基、巯基和羧酸。合适的羟基保护基包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苄基等。合适的氨基、咪基和胍基保护基包括叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等。合适的巯基保护基包括-C(O)-R”(其中R”是烷基、芳基或芳烷基)、对甲氧基苄基、三苯甲基等。合适的羧酸保护基包括烷基、芳基或芳烷基酯类。
[0260] 根据本领域技术人员熟知的和本文所述的标准技术可以引入或除去保护基。
[0261] 以下反应方案说明了制备本申请化合物的方法。应该理解，本领域技术人员可以通过类似的方法或通过本领域技术人员已知的方法制备这些化合物。
[0262] 通常，可以根据反应方案1中所述的一般操作合成本申请的通式(I)化合物，其中X是O，Y和Z均是N，A和B以及和它们连接的碳一起表示苯基。
[0263]
[0264] 上述反应方案的起始物质可以商业获得，或者可以根据本领域技术人员已知的方法或通过本文公开的方法制备。通常，可以根据上述反应方案如下列制备本申请化合物：
[0265] (1)β-羰基取代乙腈2的合成，起始原料化合物1中的R选自氢、任意取代的C1-C12烷基、任意取代的C1-C12卤代烷基、任意取代的C3-C15环烃基、任意取代的C2-C13杂环基、任意取代的C6-C19芳基、任意取代的C7-C31芳烷基或任意取代的C4-C13杂芳基，对于起始原料中含有活泼性官能团包括但不限于含有任意一至四个氮、氧或硫，以及C3-C12杂环基、羟基或氨基等，要先使用惰性的保护基团保护；该步反应中苯基乙腈先使用强碱包括但不限于正丁基锂脱氢，形成的负离子再使用脂化合物1处理生成化合物2，通过预先取代苯基乙氰，该反应还适用于合成本申请化合物中苯环上含有其它取代基的衍生物。
[0266] (2)当含有一个β-羰基取代乙腈结构的化合物2和甲基肼或其衍生物一起加热的时候形成5-氨基吡唑衍生物3，本步反应中既可以使用诸如酒精等溶剂、也可以直接和甲基肼衍生物加热，其中R1选自氢、任意取代的C1-C12烷基、任意取代的C1-C12卤代烷基、任意取代的C3-C15环烃基、任意取代的C2-C13杂环基、任意取代的C6-C19芳基、任意取代的C7-C31芳烷基或任意取代的C4-C13杂芳基等的取代基，对于其实原料中含有活泼性官能团包括但不限于含有任意一至四个氮、氧或硫，以及C3-C12杂环基、羟基或氨基等，要先使用惰性的保护基团保护。
[0267] (3)化合物3和异氰酸苯酯反应在室温下形成溶解度相对较低的加成物，该中间体受热环化形成化合物5。
[0268] (4)化合物5使用氢化钠脱氢、而后用硝酸银处理得其银盐中间体，再和已知化合物6反应得本申请化合物7；或者化合物5，在氧化银存在下，和已知化合物6反应得本申请化合物7。
[0269] 最后可以使用现有技术的方法脱去保护基得到本申请化合物。
[0270] 通常，可以根据反应方案2中所述的一般操作合成本申请的通式(I)化合物，其中X是O，Y和Z均是N，A和B以及和它们连接的碳一起表示环己基。
[0271]
[0272] 上述反应方案的起始物质可以商业获得，或者可以根据本领域技术人员已知的方法或通过本文公开的方法制备。通常，可以根据上述反应方案如下列制备本申请化合物：
[0273] (1)β-羰基取代乙腈8的合成，起始原料化合物1中的R选自氢、任意取代的C1-C12烷基、任意取代的C1-C12卤代烷基、任意取代的C3-C15环烃基、任意取代的C2-C13杂环基、任意取代的C6-C19芳基、任意取代的C7-C31芳烷基或任意取代的C4-C13杂芳基，对于起始原料中含有活泼性官能团包括但不限于含有任意一至四个氮、氧或硫，以及C3-C12杂环基、羟基或氨基等，要先使用惰性的保护基团保护；该步反应中乙腈先使用强碱包括但不限于正丁基锂脱氢，形成的负离子再使用脂化合物1处理生成化合物2。
[0274] (2)当含有一个β-羰基取代乙腈结构的化合物8和甲基肼或其衍生物一起加热的时候形成5-氨基吡唑衍生物9，本步反应中既可以使用诸如酒精等溶剂、也可以直接和甲基肼衍生物加热，其中R1选自氢、任意取代的C1-C12烷基、任意取代的C1-C12卤代烷基、任意取代的C3-C15环烃基、任意取代的C2-C13杂环基、任意取代的C6-C19芳基、任意取代的C7-C31芳烷基或任意取代的C4-C13杂芳基等的取代基，对于起始原料中含有活泼性官能团包括但不限于含有任意一至四个氮、氧或硫，以及C3-C12杂环基、羟基或氨基等。
[0275] (3)化合物9在乙酸中和环己酮反应生成5-氨基吡唑衍生物11，该步反应可以使用诸如乙酸的其它酸催化，也可以使用其它诸如稀土金属等催化该反应，其中环己酮还可以预先取代，从而使最终本申请化合物含有其它取代基。
[0276] (4)化合物11和异氰酸乙脂反应在室温下形成溶解度相对较低的加成物，该中间体在吡啶或其它惰性溶剂中加热环化形成化合物12。
[0277] (5)化合物12使用氢化钠脱氢、而后用硝酸银处理得其银盐中间体，再和已知化合物6反应得本申请化合物13；或者化合物12，在氧化银存在下，和已知化合物6反应得本申请化合物13。
[0278] 最后可以使用现有技术的方法脱去保护基得到本申请化合物。
[0279] 实施例
[0280] 虽然任何本领域技术人员能够依据上述公开的一般技术来制备本申请化合物，但为方便起见，本说明书中的其它地方提供更加详细的本申请化合物的合成技术。另外，本领域技术人员已知合成中所使用的所有试剂及反应条件并且可以由普通的商品来源获得。
[0281] 通过但不限于以下的实施例说明本申请化合物的合成。
[0282] 实施例1
[0283] (2S，3S，4S，5R，6S)-6-(1，3-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-3，4，5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0284] 实施例1A
[0285] 1，3-二甲基-5-氨基-1H-吡唑
[0286] 氮气保护下，将2-氰基丙酮(8g，0.096mol)和200mL无水乙醇加入到500mL的单口瓶中，室温下搅拌溶解，然后加入甲基肼(4.43g，0.096mol)，缓慢升温至回流，反应3小+时后，旋蒸除去溶剂，得到油状物，柱层析纯化，得到产物4.2g。MS(ESI)：m/z112(M+H)。
[0287] 实施例1B
[0288] 1，3-二甲基-4-环己烯基-5-氨基-1H-吡唑
[0289] 氮气保护下，将实施例1A(2.2g，0.02mol)室温下溶解在40mL冰醋酸中，然后加入环己酮(3.8g，0.04mol)，搅拌均匀。缓慢升温至50℃，反应过夜。停止反应，旋蒸除去冰醋酸；粗产品用乙酸乙酯溶解后，用稀碳酸氢钠水溶液洗至弱碱性，水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，干燥，旋蒸除去溶剂。柱层析纯化(淋洗剂：DCM∶MeOH＝15∶1)，得到+产物2.5g。MS(ESI)：m/z192(M+H)。
[0290] 实施例1C
[0291] 1，3-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮
[0292] 氮气保护下，将实施例1B(3g，15.7mmol)室温下溶解在20mL吡啶中，搅拌下加入异氰酸乙酯(3.34g，47mmol)，缓慢升温至回流，反应过夜。停止反应，降至室温，旋蒸除去吡啶，得到油状物。加入适量甲醇后，有大量固体析出，抽滤，滤饼用甲醇洗涤后抽干得到产品。再将滤液浓缩后，用制备薄层板纯化(淋洗剂：DCM∶MeOH＝12∶1)，分离又得到一+部分产品，合计共得到产物1.68g。MS(ESI)：m/z218(M+H)。
[0293] 实施例1D
[0294] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(1，3-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0295] 氮气保护下，将实施例1C(100mg，0.46mmol)，氧化银(426.6mg，1.84mmol)，溴代三乙酰基-D-葡萄糖醛酸甲酯(365.6mg，0.92mmol)和甲苯(30mL)在室温下依次加入到100mL的单口瓶中。避光条件下，缓慢升温至回流反应1小时。停止反应，降至室温。抽滤除去固体，滤液旋干，得到油状物，用制备板层析分离纯化(淋洗剂：DCM∶MeOH＝15∶1)，+
得到纯产品162mg。MS(ESI)：m/z534(M+H)。
得到纯产品162mg。MS(ESI)：m/z534(M+H)。
[0296] (2S，3S，4S，5R，6S)-6-(1，3-二甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-3，4，5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0297] 将实施例1D(180mg，0.34mmol)加入到100mL单口瓶中，而后加入30mLTHF和8mL水，控制温度在10至15℃之间。向反应瓶中加入2mL的碱液(碱液配置方法：准确量取1416mg的LiOH·H2O，加入到50mL的容量瓶中，加入水溶解并稀释至50mL)，反应2小时后，用冰醋酸调节pH至中性，旋蒸除去THF(控制温度低于30℃)，HPLC分离纯化得到产物+ 1
37.0mg。MS(ESI)：m/z394(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.82-1.87(m，4H)；2.56(s，3H)；
2.71(t，J＝10.4Hz，2H)；3.10(t，J＝10.8Hz，2H)；3.52-3.59(m，3H)；3.79(d，J＝9.2Hz，
1H)；3.86(s，3H)；6.17(d，J＝8.4Hz，1H)
37.0mg。MS(ESI)：m/z394(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.82-1.87(m，4H)；2.56(s，3H)；
2.71(t，J＝10.4Hz，2H)；3.10(t，J＝10.8Hz，2H)；3.52-3.59(m，3H)；3.79(d，J＝9.2Hz，
1H)；3.86(s，3H)；6.17(d，J＝8.4Hz，1H)
[0298] 实施例2
[0299] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-异丙基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0300] 实施例2A
[0301] 4-甲基-3-羰基戊腈
[0302] 将异丁酸甲酯(100g，0.98mol)、乙醇钠(66.63g，0.98mol)、乙腈(53.9g，0.98mol)和300ml甲醇室温下加入到1L的单口瓶中，缓慢升温至回流，反应6小时，停止反应，降至室温。旋蒸除去溶剂，减压蒸馏收集102-104℃(12mmHg)的纯产品56.2g。
[0303] 实施例2B
[0304] 1-甲基-3-异丙基-5-氨基-1H-吡唑
[0305] 氮气保护下，将实施例2A(8.03g，72mmol)溶解在酒精(50mL)中，然后加入甲基肼(3.32g，72mmol)，搅拌下缓慢升温至回流，反应3小时。停止反应，降至室温，旋蒸除去乙醇，得到油状物粗品。柱层析纯化(淋洗剂：石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)，得到产物5.2g。+
MS(ESI)：m/z140(M+H)。
MS(ESI)：m/z140(M+H)。
[0306] 实施例2C
[0307] 1-甲基-3-异丙基-4-环己烯基-5-氨基-1H-吡唑
[0308] 氮气保护下，将实施例2B(5.2g，38mmol)和40mL冰醋酸加入到100mL单口瓶中，搅拌溶解后，加入环己酮(8.22g，76mmol)，搅拌下缓慢升温至50℃，反应过夜。停止反应，旋蒸除去冰醋酸。加入乙酸乙酯溶解，用稀碳酸氢钠水溶液洗至弱碱性，分出乙酸乙酯层；水层用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层并用无水MgSO4干燥，旋蒸除溶剂。柱层析纯化(淋+
洗剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到产物4.5g。MS(ESI)：m/z220(M+H)。
洗剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到产物4.5g。MS(ESI)：m/z220(M+H)。
[0309] 实施例2D
[0310] 1-异丙基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮[0311] 氮气保护下，将实施例2C(0.5g，2.3mmol)溶解在20mL吡啶中，然后搅拌下加入异氰酸乙酯(0.522g，4.6mmol)，缓慢升温至回流，反应过夜。停止反应，降至室温。旋蒸除去吡啶，得到油状物。加入适量甲醇后，有大量固体析出，抽滤，滤饼用甲醇洗涤后抽干得到产品。再将滤液浓缩后，用制备薄层板纯化(淋洗剂：DCM∶MeOH＝18∶1)，分离又得到一+部分产品，合计共得到产物408mg。MS(ESI)：m/z246(M+H)。
[0312] 实施例2E
[0313] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(1-异丙基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0314] 氮气保护下，将实施例2D(100mg，0.41mmol)、氧化银(377.85mg，1.64mmol)、溴代三乙酰基-D-葡萄糖醛酸甲酯(323.8mg，0.82mmol)和甲苯(30mL)加入到100mL单口瓶中。反应瓶避光，缓慢升温至回流，反应40分钟。停止反应，降至室温。抽滤除去反应液中的固体，滤饼用甲苯洗涤两次。合并滤液，旋蒸除去溶剂，得到油状物，HPLC分离纯化，得到标题+
产品187mg。MS(ESI)：m/z562(M+H)。
产品187mg。MS(ESI)：m/z562(M+H)。
[0315] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-异丙基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0316] 将实施例2E(187mg，0.33mmol)加入到100mL单口瓶中，加入30mL THF和8mL水，控制温度在10至15℃。向反应瓶中加入2mL的碱液(碱液配置方法：准确量取1416mg的LiOH·H2O，加入到50mL的容量瓶中，加入水溶解并稀释至50mL，反应2小时后，用冰醋酸调节pH至中性，旋蒸除去THF(控制温度低于30℃)，HPLC分离纯化得到产物62mg。+ 1
MS(ESI)：m/z421(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.35(d，J＝6.8Hz，6H)；1.84-1.85(m，
4H)；2.74-2.80(m，2H)；3.10-3.12(m，2H)；3.50-3.53(m，1H)；3.55-3.58(m，3H)；3.80(d，J＝9.2Hz，1H)；3.89(s，3H)；6.18(d，J＝8.0Hz，1H)
MS(ESI)：m/z421(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.35(d，J＝6.8Hz，6H)；1.84-1.85(m，
4H)；2.74-2.80(m，2H)；3.10-3.12(m，2H)；3.50-3.53(m，1H)；3.55-3.58(m，3H)；3.80(d，J＝9.2Hz，1H)；3.89(s，3H)；6.18(d，J＝8.0Hz，1H)
[0317] 实施例3
[0318] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-苯基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0319] 实施例3A
[0320] 1-甲基-3-苯基-4-环己烯基-5-氨基-1H-吡唑
[0321] 氮气保护下，将1-甲基-3-苯基-5-氨基-1-氢-吡唑(5g，28mmol)和40mL冰醋酸加入到100mL单口瓶中，搅拌溶解后，加入环己酮(5.6g，57mmol)。搅拌下升温至50℃，保温过夜。停止反应，旋蒸除去溶剂，加入适量乙酸乙酯，用稀碳酸氢钠水溶液洗至中性，分出乙酸乙酯层。水层用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层。无水MgSO4干燥，旋蒸除去溶剂。+
粗品用柱层析纯化，得到纯产品4.4g，产率54.26％。MS(ESI)：m/z254(M+H)。
粗品用柱层析纯化，得到纯产品4.4g，产率54.26％。MS(ESI)：m/z254(M+H)。
[0322] 实施例3B
[0323] 1-苯基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮[0324] 室温下，将实施例3A(2g，8mmol)溶解在吡啶(30mL)中，加入异氰酸乙酯(1.67g，24mmol)，缓慢升温至回流，搅拌过夜。停止反应，旋蒸除去溶剂，加入少量的乙醇，有大量固体析出，抽滤除去固体，旋蒸滤液除去溶剂，残留物用柱层析纯化，得到纯品1.618g。
+
MS(ESI)：m/z280(M+H)。
+
MS(ESI)：m/z280(M+H)。
[0325] 实施例3C
[0326] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(3-甲基-1-苯基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0327] 氮气保护下，将溴代三乙酰基-D-葡萄糖醛酸甲酯(850mg，2.2mmol)、氧化银(1g，4eq)、实施例3B(300mg，1.1mmol)和甲苯(30mL)加入到100mL单口烧瓶中，搅拌均匀。反应瓶避光，升温至回流，反应1小时。停止反应，降至室温。抽滤除去固体，滤饼用甲苯洗涤两次。合并滤液后，旋蒸除去溶剂。粗品用柱层析纯化(淋洗剂：DCM∶MeOH＝25∶1)，+
得到产物450mg。MS(ESI)：m/z596(M+H)。
得到产物450mg。MS(ESI)：m/z596(M+H)。
[0328] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-苯基-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0329] 将实施例3C(450mg，0.76mmol)溶解在40ml的THF中，然后加入6mL水(控制温度在15-20℃)。加入碱液4mL(碱液配制方法：量取1.585g LiOH·H2O加入到50mL的容量瓶中，用水稀释到刻度)，搅拌反应1小时。停止反应，用醋酸中和至中性后，旋蒸除去溶剂(温度控制在低于30℃)。HPLC分离纯化，得到白色固体产物160mg，产率46.5％。MS(ESI)：m/+ 1z456(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.56-1.58(m，2H)；1.71-1.72(m，2H)；2.55-2.57(m，
2H)；2.58-2.61(m，2H)；3.45-3.51(m，3H)；3.74(d，J＝9.6Hz，1H)；3.91(s，3H)；6.13(d，J＝8.4Hz，1H)；7.35(t，J＝3.2Hz，1H)；7.37-7.38(m，2H)；7.44-7.46(m，2H)[0330] 实施例4
2H)；2.58-2.61(m，2H)；3.45-3.51(m，3H)；3.74(d，J＝9.6Hz，1H)；3.91(s，3H)；6.13(d，J＝8.4Hz，1H)；7.35(t，J＝3.2Hz，1H)；7.37-7.38(m，2H)；7.44-7.46(m，2H)[0330] 实施例4
[0331] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲-1-((R)-1-丙基吡咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0332] 实施例4A
[0333] (R)-N-苄氧羰基脯氨酸甲酯
[0334] 将草酰氯(38.07g，300mmol)、苯(350mL)、(R)-N-Cbz-脯氨酸(62.30g，250mmol)和DMF(6滴)加入到1000mL的反应瓶中，室温下搅拌反应3小时后加入甲醇(350mL)，继续搅拌反应1小时，停止反应。旋蒸除去溶剂，加入乙酸乙酯(400mL)，依次用饱和NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，然后用无水Na2SO4干燥，浓缩后得到浅黄色液体产物65.51g，产率99.5％。
[0335] 实施例4B
[0336] (R)-2-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-1-甲酸苄酯
[0337] 氮气保护下，将干燥的乙腈(15.54mL，298.6mmol)和无水THF(350mL)加入到1000mL的反应瓶中，冷却至零下78℃，缓慢加入正丁基锂(171mL，1.6mol/L，273.7mmol)，在此温度下搅拌反应30分钟。然后加入实施例4A(65.51g，248.8mmol)的THF(100mL)溶液，继续在此温度下反应1小时。然后升温到零下20℃反应30分钟，最后升温至室温再反应30分钟。停止反应，向反应体系中加入乙醚(100mL)稀释，加入水(100mL)淬灭。用稀盐酸酸化至pH为3，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩后柱层析分离，得浅黄色液体产+
物59.5g，产率87.8％。MS(ESI)：m/z273(M+H)。
物59.5g，产率87.8％。MS(ESI)：m/z273(M+H)。
[0338] 实施例4C
[0339] (R)-2-(5-氨基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸苄酯
[0340] 将 实 施 例 4B(59.5g，218.51mmol)、无 水 乙 醇(300mL) 和 甲 基 肼 (18mL，327.76mmol)加入到500mL反应瓶中，氮气保护下加热至回流，反应3小时。停止反应，旋蒸除去溶剂得粗品，柱层析分离，得黄色固体产物47.86g，产率72.9％。MS(ESI)：m/+
z301(M+H)。
z301(M+H)。
[0341] 实施例4D
[0342] (R)-2-(5-氨基-4-环己烯基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡咯烷-1-甲酸苄酯[0343] 将实施例4C(47.86g，159.32mmol)、环己酮(31.27g，318.64mmol)和乙酸(300mL)加入到500mL的反应瓶中，氮气保护下加热至50-60℃，反应过夜。停止反应，冷却到室温。旋蒸除去乙酸得粗品。柱层析分离，得白色固体产物45.53g，产率75.1％。MS(ESI)：m/+
z381(M+H)。
z381(M+H)。
[0344] 实施例4E
[0345] (R)-2-(3-甲基-5-氧基-4，5，6，7，8，9-六氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-1-基)吡咯烷-1-甲酸苄酯
[0346] 将实施例4D(27.2g，71.48mmol)、异氰酸乙酯(15.24g，214.45mmol)和吡啶(150mL)加入到500mL反应瓶中，氮气保护下回流反应过夜。停止反应，冷却到室温，旋蒸浓缩后，加入甲醇，静置后析出固体，抽滤，得产物15.2g，产率52.3％。MS(ESI)：m/+z407(M+H)。
[0347] 实施例4F
[0348] (R)-3-甲基-1-(吡咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮
[0349] 将0.2g10％Pd/C加入单口反应瓶中，在氮气保护下加入实施例4E(1.2g)在甲醇(30mL)和二氯甲烷(30mL)的混合溶液。置入氢气，室温下搅拌过夜。抽滤、母液浓缩后得+到产物，收率100％。MS(ESI)：m/z273(M+H)。
[0350] 实施例4G
[0351] (R)-3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮
[0352] 将实施例4F(1.39g，5.1mmol)、丙醛(0.888g，15.31mmol)和甲醇(90mL)加入到250mL反应瓶中，室温下搅拌反应2小时。然后加入氰基硼氢化钠(1.0g，15.9mmol)，搅拌反应过夜。停止反应，旋蒸浓缩后，柱层析分离得到产物1.4g，产率87.5％。MS(ESI)：m/+
z315(M+H)。
z315(M+H)。
[0353] 实施例4H
[0354] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三 乙 酰 基-6-(3-甲 基 -1-((R)-1-丙 基 吡 咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0355] 将实施例4G(0.5g，1.59mmol)、溴代三乙酰基-D-葡萄糖醛酸甲酯(1.31g，3.18mmol)、氧化银(1.47g，6.36mmol)和甲苯(125mL)加入到250mL反应瓶中，回流反应2小时。停止反应，冷却至室温。抽滤除去氧化银，母液旋蒸浓缩除去甲苯得粗品。柱层析+
(淋洗剂：二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得到产物0.7g，产率70％。MS(ESI)：m/z631(M+H)。
(淋洗剂：二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得到产物0.7g，产率70％。MS(ESI)：m/z631(M+H)。
[0356] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲-1-(R)-1-丙基吡咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0357] 将实施例4H(0.26g，0.41mmol)、四氢呋喃(25mL)和水(4mL)加入到100mL反应瓶中，加入氢氧化锂水溶液(2mL)(配制方法：称取1.72g一水氢氧化锂，用50mL水溶解即得)，室温下反应2小时。停止反应，用乙酸调节pH至6-7。室温下旋蒸除去溶剂，HPLC分+ 1离纯化，得到严物30mg。MS(ESI)：m/z491(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.90(t，J＝
7.6Hz，3H)；1.60-1.66(m，2H)；1.85-1.86(m，4H)；2.04-2.11(m，1H)；2.13-2.16(m，1H)；
2.17-2.19(m，1H)；2.57-2.69(m，2H)；2.73-2.79(m，1H)；2.91-2.93(m，1H)；2.98-3.02(m，
1H)；3.05-3.07(m，1H)，3.09-3.13(m，2H)；3.51-3.60(m，3H)；3.76-3.78(m，1H)；
3.79-3.80(m，1H)；3.97(s，3H)；4.83(t，J＝4.0Hz，1H)；6.16(d，J＝8.0Hz，1H)[0358] 实施例5
7.6Hz，3H)；1.60-1.66(m，2H)；1.85-1.86(m，4H)；2.04-2.11(m，1H)；2.13-2.16(m，1H)；
2.17-2.19(m，1H)；2.57-2.69(m，2H)；2.73-2.79(m，1H)；2.91-2.93(m，1H)；2.98-3.02(m，
1H)；3.05-3.07(m，1H)，3.09-3.13(m，2H)；3.51-3.60(m，3H)；3.76-3.78(m，1H)；
3.79-3.80(m，1H)；3.97(s，3H)；4.83(t，J＝4.0Hz，1H)；6.16(d，J＝8.0Hz，1H)[0358] 实施例5
[0359] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0360] 用Cbz-S-脯氨酸代替实施例4A中的Cbz-R-脯氨酸采用实施例4类似的实验+ 1步骤和方法制备实施例5。MS(ESI)：m/z491(M+H) ；HNMR(400MHz，CD3OD)：δ0.93(t，J＝
7.2Hz，3H)；1.63-1.71(m，2H)；1.84-1.88(m，4H)；2.14-2.17(m，1H)；2.19-2.23(m，1H)；
2.25-2.29(m，1H)；2.65-2.68(m，2H)；2.70-2.74(m，1H)；2.95-3.01(m，1H)；3.04-3.05(m，
1H)；3.06-3.09(m，1H)，3.10-3.25(m，2H)；3.51-3.61(m，3H)；3.78-3.79(d，J＝2Hz，1H)；
3.84-3.85(m，1H)；3.86(s，3H)；5.05(t，J＝7.6Hz，1H)；6.15(d，J＝7.6Hz，1H)[0361] 实施例6
7.2Hz，3H)；1.63-1.71(m，2H)；1.84-1.88(m，4H)；2.14-2.17(m，1H)；2.19-2.23(m，1H)；
2.25-2.29(m，1H)；2.65-2.68(m，2H)；2.70-2.74(m，1H)；2.95-3.01(m，1H)；3.04-3.05(m，
1H)；3.06-3.09(m，1H)，3.10-3.25(m，2H)；3.51-3.61(m，3H)；3.78-3.79(d，J＝2Hz，1H)；
3.84-3.85(m，1H)；3.86(s，3H)；5.05(t，J＝7.6Hz，1H)；6.15(d，J＝7.6Hz，1H)[0361] 实施例6
[0362] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0363] 用Cbz-3-吡咯羧酸代替实施例4A中的Cbz-R-脯氨酸，采用实施例4类似的实+ 1验步骤和方法制备实施例6。MS(ESI)：m/z491(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.06(t，J ＝ 7.2Hz，3H)；1.75-1.89(m，6H)；2.14-2.22(m，1H)；2.46-2.55(m，1H)；2.62-2.84(m，
2H)；2.96-3.02(m，2H)；3.06-3.16(m，2H)；3.40-3.48(m，1H)；3.58-3.64(m，3H)；
3.84-3.88(m，1H)；3.89(s，3H)，3.92-3.94(m，0.5H)；3.99-4.07(m，1H)；4.30-4.36(m，
0.5H)；4.61-4.69(m，1H)；6.15(d，J＝7.2Hz，1H)
2H)；2.96-3.02(m，2H)；3.06-3.16(m，2H)；3.40-3.48(m，1H)；3.58-3.64(m，3H)；
3.84-3.88(m，1H)；3.89(s，3H)，3.92-3.94(m，0.5H)；3.99-4.07(m，1H)；4.30-4.36(m，
0.5H)；4.61-4.69(m，1H)；6.15(d，J＝7.2Hz，1H)
[0364] 实施例7
[0365] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-乙基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0366] 实施例7A
[0367] 1-(3-吡咯基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-酮
[0368] 用Cbz-3-吡咯羧酸代替实施例4A中的Cbz-R-脯氨酸，采用实施例4A-4F类似的+实验步骤和方法制备实施例7A。MS(ESI)：m/z273(M+H)。
[0369] 实施例7B
[0370] 1-(1-乙基-3-吡咯基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-酮[0371] 氮气保护下，将实施例7A(0.2g，0.7mmol)、氰基硼氢化钠(0.13g，2.1mmol)、氯化锌(0.2g，1.47mmol)和甲醇(50mL)加入到250mL反应瓶中，室温搅拌数分钟后，加入新蒸馏的乙醛(0.097g，2.2mmol)，搅拌2小时。反应完毕后加盐酸调节pH至2-3，浓缩除去甲醇和水，制备硅胶板提纯，得到200mg白色固体产物，收率91.3％。MS(ESI)：m/1
z301(M+1，100％)；302(M+2，60％)；303(M+3，10％)；H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.43(t，J＝7.2Hz，3H)；1.78-1.84(m，4H)；2.15-2.22(m，1H)；2.54-2.59(m，2H)；2.60-2.61(m，1H)；
2.82-2.98(m，4H)；3.14-3.15(m，2H)；3.60-3.63(m，1H)；3.80-3.84(m，1H)；3.97(s，3H)[0372] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-乙基吡咯烷-3-基)-6，7，
8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
z301(M+1，100％)；302(M+2，60％)；303(M+3，10％)；H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.43(t，J＝7.2Hz，3H)；1.78-1.84(m，4H)；2.15-2.22(m，1H)；2.54-2.59(m，2H)；2.60-2.61(m，1H)；
2.82-2.98(m，4H)；3.14-3.15(m，2H)；3.60-3.63(m，1H)；3.80-3.84(m，1H)；3.97(s，3H)[0372] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-乙基吡咯烷-3-基)-6，7，
8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0373] 用实施例7B代替实施例4H中的其始原料实施例4G，采用实施例4H、实施例41
类似的实验步骤和方法制备实施例7。MS(ESI)：m/z477(M+1，100％)；H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.12-1.16(m，3H)；1.71-1.79(m，4H)；2.05-2.33(m，3H)；2.53-2.82(m，6H)；
2.89-2.96(m，3H)；2.99-3.02(m，2H)；3.24(m，2H)；3.44-3.50(m，3H)；3.70-3.73(m，1H)；
3.80(d，J＝4。0Hz，3H)；4.40-4.45(m，1H)；6.05-6.08(m，1H)
类似的实验步骤和方法制备实施例7。MS(ESI)：m/z477(M+1，100％)；H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.12-1.16(m，3H)；1.71-1.79(m，4H)；2.05-2.33(m，3H)；2.53-2.82(m，6H)；
2.89-2.96(m，3H)；2.99-3.02(m，2H)；3.24(m，2H)；3.44-3.50(m，3H)；3.70-3.73(m，1H)；
3.80(d，J＝4。0Hz，3H)；4.40-4.45(m，1H)；6.05-6.08(m，1H)
[0374] 实施例8
[0375] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-(3，3，3-三氟丙基)吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0376] 实施例8A
[0377] 1-(1-3，3，3-三氟丙基-3-吡咯基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-酮
[0378] 氮气保护下，将实施例7A(0.2g，0.73mmol)、氰基硼氢化钠(0.14g，2.2mmol)、氯化锌(0.2g，1.47mmol)和甲醇(50mL)加入到250mL反应瓶中，室温搅拌数分钟后，加入3，3，3-三氟丙醛(0.25g，2.2mmol)，搅拌2小时。反应完毕后加盐酸调节pH至2-3，浓缩除去甲醇和水，制备硅胶板提纯，得到238.1mg白色固体产物，收率88.6％。MS(ESI)：
1
m/z369(M+1，100 ％ )；H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.76-1.87(m，4H)；2.16-2.26(m，1H)；
2.27-2.45(m，3H)；2.51-2.52(m，2H)；2.64-2.70(m，1H)；2.71-2.80(m，1H)；2.83-2.98(m，
5H)；3.01-3.02(m，1H)；3.75-3.83(m，1H)；4.01(s，3H)
1
m/z369(M+1，100 ％ )；H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.76-1.87(m，4H)；2.16-2.26(m，1H)；
2.27-2.45(m，3H)；2.51-2.52(m，2H)；2.64-2.70(m，1H)；2.71-2.80(m，1H)；2.83-2.98(m，
5H)；3.01-3.02(m，1H)；3.75-3.83(m，1H)；4.01(s，3H)
[0379] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-(3，3，3-三氟丙基)吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0380] 用实施例8A代替实施例4H中的其始原料实施例4G，采用实施例4H、实施例4类似的实验步骤和方法制备实施例8。MS(ESI)：m/z545(M+1，100％)；MS(ESI)：m/z545(M+1，1
100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ1.80-1.81(m，4H)；2.22-2.24(m，2H)；2.32-2.41(m，4H)；
2.62-2.68(m，5H)；2.76-2.83(m，1H)；2.83-2.87(m，2H)；3.04-3.12(m，1H)；3.52-3.63(m，
3H)；3.90(s，3H)；5.04-5.08(m，1H)；6.15(d，J＝7.6Hz，1H)
100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ1.80-1.81(m，4H)；2.22-2.24(m，2H)；2.32-2.41(m，4H)；
2.62-2.68(m，5H)；2.76-2.83(m，1H)；2.83-2.87(m，2H)；3.04-3.12(m，1H)；3.52-3.63(m，
3H)；3.90(s，3H)；5.04-5.08(m，1H)；6.15(d，J＝7.6Hz，1H)
[0381] 实施例9
[0382] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((R)-1- 丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0383] 实施例9A
[0384] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0385] 用Cbz-3-吡咯羧酸代替实施例4A中的Cbz-R-脯氨酸，采用实施例4H类似的实+验步骤和方法制备实施例9A。MS(ESI)：m/z631(M+H)。
[0386] 实施例9B
[0387] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三 乙 酰 基-6-(3-甲 基 -1-((R)-1-丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0388] 实施例9A用配有手性色谱柱的制备HPLC分离(色谱柱型号及分离条件：手性制备柱-Chiralpak AD-H，25cm×3cm，流速：12mL/min，波长：220nm，柱温：40℃，流动相：乙醇∶二乙胺＝100∶0.1)，提供一个极性较小的组分(保留时间：12分钟)，浓缩以后得实+施例9B。MS(ESI)：m/z631(M+H)。
[0389] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((R)-1- 丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0390] 用实施例9B代替实施例4中的起始原料实施例4H，采用实施例4类似的实验步1
骤和方法制备实施例9。收率：92.6％。MS(ESI)：m/z491(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ0.80(t，J＝7.2Hz，3H)；1.52-1.58(m，6H)；2.04-2.13(m，1H)；2.31-2.43(m，3H)；
2.66-2.68(m，2H)；2.92-2.97(m，2H)；3.17-3.25(m，2H)；3.29-3.34(m，1H)；3.43-3.55(m，
4H)；3.07(s，3H)；3.80-3.87(m，2H)，5.96(d，J＝6.8Hz，1H)
骤和方法制备实施例9。收率：92.6％。MS(ESI)：m/z491(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ0.80(t，J＝7.2Hz，3H)；1.52-1.58(m，6H)；2.04-2.13(m，1H)；2.31-2.43(m，3H)；
2.66-2.68(m，2H)；2.92-2.97(m，2H)；3.17-3.25(m，2H)；3.29-3.34(m，1H)；3.43-3.55(m，
4H)；3.07(s，3H)；3.80-3.87(m，2H)，5.96(d，J＝6.8Hz，1H)
[0391] 实施例10
[0392] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0393] 实施例10A
[0394] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三 乙 酰 基-6-(3-甲 基 -1-((S)-1-丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)-四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0395] 实施例9A用配有手性色谱柱的制备HPLC分离(色谱柱型号及分离条件：手性制备柱-Chiralpak AD-H，25cm×3cm，流速：12mL/min，波长：220nm，柱温：40℃，流动相：乙醇∶二乙胺＝100∶0.1)，提供一个极性较大的组分(保留时间：19分钟)，浓缩以后得实+施例10A。MS(ESI)：m/z631(M+H)。
[0396] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5- 三 羟 基 -6-(3- 甲 基 -1-((S)-1- 丙 基 吡 咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0397] 用实施例10A代替实施例4中的起始原料实施例4H，采用实施例4类似的实验1
步骤和方法制备实施例10。收率：90％。MS(ESI)：m/z491(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ0.84(t，J＝7.6Hz，3H)；1.55-1.65(m，6H)；1.95-2.02(m，1H)；2.32-2.39(m，3H)；
2.61-2.66(m，2H)；3.02-3.10(m，2H)；3.24-3.39(m，2H)；3.41-3.58(m，5H)；3.65(s，3H)；
3.80(d，J＝9.6Hz，1H)；3.86-3.92(m，1H)；5.95(d，J＝7.2Hz，1H)
步骤和方法制备实施例10。收率：90％。MS(ESI)：m/z491(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ0.84(t，J＝7.6Hz，3H)；1.55-1.65(m，6H)；1.95-2.02(m，1H)；2.32-2.39(m，3H)；
2.61-2.66(m，2H)；3.02-3.10(m，2H)；3.24-3.39(m，2H)；3.41-3.58(m，5H)；3.65(s，3H)；
3.80(d，J＝9.6Hz，1H)；3.86-3.92(m，1H)；5.95(d，J＝7.2Hz，1H)
[0398] 实施例11
[0399] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-(1-乙基哌啶-2-基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0400] 实施例11A
[0401] 2-(2-氰基乙酰基)哌啶-1-甲酸苄酯
[0402] 将干燥的乙腈(5.01g，122mmol)加入到250mL三口瓶中，在氩气保护下加入无水THF(187mL)，冷却至-78℃。分批加入正丁基锂(70.6mL，113mmol)，加毕后在此温度下搅拌反应1小时。再分批加入N-Cbz-哌啶-2-甲酸甲酯(24.1g，87mmol)的无水THF(70mL)溶液，在-78℃下再反应45分钟。然后自然升至室温，加水淬灭，旋蒸除去THF。加水600mL，用100mL乙醚萃取除去杂质。水层用稀盐酸中和至pH＝7～8，二氯甲烷萃取，合并后的有机相用无水Na2SO4干燥，抽滤后母液浓缩，得到产物16.0g，产率64.3％。MS(ESI)：m/+z287(M+H)。
[0403] 实施例11B
[0404] 2-(1-甲基-5-氨基-1H-吡唑-3-基)哌啶-1-甲酸苄酯
[0405] 氮气保护下，将实施例11A(16.0g，55.9mmol)加入到250mL三口反应瓶中，然后加入乙醇(80mL)和甲基肼(12mL，224mmol)，回流反应5h。停止反应，旋蒸除去乙醇得粗品。柱层析(淋洗剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得到产物11.7g，产率66.6％。MS(ESI)：m/+
z315(M+H)。
z315(M+H)。
[0406] 实施例11C
[0407] 2-(1-甲基-4-环己烯基-5-氨基-1H-吡唑-3-基)哌啶-1-甲酸苄酯
[0408] 氮气保护下，将实施例11B(11.7g，37mmol)加入到250mL三口反应瓶中，然后加入乙酸(150mL)和环己酮(15.5mL，149mmol)，在50-60℃反应过夜。降至室温后旋蒸除去乙酸得粗品，柱层析(淋洗剂：石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得到产物8.0g，产率54.4％。+
MS(ESI)：m/z395(M+H)。
MS(ESI)：m/z395(M+H)。
[0409] 实施例11D
[0410] 2-(3-甲基-5-氧基-4，5，6，7，8，9-六氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸苄酯
[0411] 氮气保护下，将实施例11C(8.0g，20.3mmol)、异氰酸乙酯(8mL，101.4mmol)和吡啶(60mL)加入到250mL反应瓶中，回流反应过夜。反应降至室温后旋蒸除去吡啶。然后加+入乙醇重结晶，抽滤得到白色产物6.1g，产率71.5％。MS(ESI)：m/z421(M+H)。
[0412] 实施例11E
[0413] 3-甲基-1-(哌啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮[0414] 在置有0.2g10％Pd/C的单颈瓶中，在氮气保护下加入实施例11D(1.2g，2.85mmol)的二氯甲烷(30mL)和甲醇(30mL)混合溶液。置入氢气，室温下搅拌反应过夜。
+
抽滤除去固体、滤液浓缩后得到产物，产率100％。MS(ESI)：m/z287(M+H)。
+
抽滤除去固体、滤液浓缩后得到产物，产率100％。MS(ESI)：m/z287(M+H)。
[0415] 实施例11F
[0416] 1-(1-乙基哌啶-2-基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮
[0417] 氮气保护下，将实施例11E(0.8172g，2.85mmol)，乙醛(0.377g，8.56mmol)和甲醇(100mL)加入到250mL反应瓶中，室温下搅拌反应2h。然后加入氰基硼氢化钠(0.54g，8.56mmol)，搅拌反应过夜。停止反应，旋蒸除去甲醇得粗品，柱层析(淋洗剂：二氯甲烷∶+
甲醇＝10∶1)得到白色固体产物0.79g，产率88.1％。MS(ESI)：m/z315(M+H)。
甲醇＝10∶1)得到白色固体产物0.79g，产率88.1％。MS(ESI)：m/z315(M+H)。
[0418] 实施例11G
[0419] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(1-(1-乙基哌啶-2-基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸甲酯
[0420] 将实施例11F(0.5g，1.59mmol)、溴代三乙酰基-D-葡萄糖醛酸甲酯(1.31g，3.18mmol)、氧化银(1.47g，6.36mmol)和甲苯(125mL)加入到250mL反应瓶中，回流反应3小时。停止反应，抽滤除去氧化银，滤液旋蒸浓缩除去甲苯。柱层析(淋洗剂：二氯甲烷∶+
甲醇＝10∶1)得到产物0.7g，产率为70％。MS(ESI)：m/z631(M+H)。
甲醇＝10∶1)得到产物0.7g，产率为70％。MS(ESI)：m/z631(M+H)。
[0421] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(1-(1-乙基哌啶-2-基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0422] 将实施例11G(200mg，316.1mmol)、四氢呋喃(25mL)和水(4mL)加入到100mL反应瓶中。然后加入氢氧化锂水溶液(4mL)(配制方法：称取1.3264g一水氢氧化锂，用50mL水溶解)，室温下反应2小时。停止反应，用乙酸调节pH至6-7，室温下旋蒸除去THF。+ 1
HPLC制备得到产物63mg。MS(ESI)：m/z491(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.09(t，J＝
7.2Hz，3H)；1.39-1.49(m，1H)；1.62-1.70(m，2H)；1.75-1.78(m，2H)；1.79-1.83(m，2H)；
1.87-1.93(m，2H)；2.00-2.12(m，1H)；2.57-2.63(m，2H)；2.64-2.70(m，1H)；2.89-3.00(m，
3H)；3.02-3.07(m，1H)，3.41-3.53(m，3H)；3.62(d，J＝8.0Hz，1H)；3.70(d，J＝12。0Hz，
1H)；3.89(s，3H)；4.59(d，J＝6.4Hz，1H)；6.06(d，J＝8Hz，1H)
HPLC制备得到产物63mg。MS(ESI)：m/z491(M+H) ；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.09(t，J＝
7.2Hz，3H)；1.39-1.49(m，1H)；1.62-1.70(m，2H)；1.75-1.78(m，2H)；1.79-1.83(m，2H)；
1.87-1.93(m，2H)；2.00-2.12(m，1H)；2.57-2.63(m，2H)；2.64-2.70(m，1H)；2.89-3.00(m，
3H)；3.02-3.07(m，1H)，3.41-3.53(m，3H)；3.62(d，J＝8.0Hz，1H)；3.70(d，J＝12。0Hz，
1H)；3.89(s，3H)；4.59(d，J＝6.4Hz，1H)；6.06(d，J＝8Hz，1H)
[0423] 实施例12
[0424] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0425] 用丙醛代替实施例11F中的乙醛，采用实施例11类似的实验步骤和方法制备实1
施 例12。MS(ESI)：m/z505(M+1，100 ％ )；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.67-0.70(m，3H)；
1.44-1.68(m，4H)；1.72-1.79(m，4H)；1.84-2.00(m，6H)；2.57-2.69(m，2H)；2.74-2.92(m，
3H)；3.01-3.11(m，2H)；3.38-3.57(m，4H)；3.61-3.73(m，2H)；3.89(s，3H)；4.58-4.63(m，
1H)，6.07(d，J＝6.8Hz，1H)
施 例12。MS(ESI)：m/z505(M+1，100 ％ )；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ0.67-0.70(m，3H)；
1.44-1.68(m，4H)；1.72-1.79(m，4H)；1.84-2.00(m，6H)；2.57-2.69(m，2H)；2.74-2.92(m，
3H)；3.01-3.11(m，2H)；3.38-3.57(m，4H)；3.61-3.73(m，2H)；3.89(s，3H)；4.58-4.63(m，
1H)，6.07(d，J＝6.8Hz，1H)
[0426] 实施例13
[0427] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0428] 用Cbz-3-哌啶羧酸代替实施例4A中的Cbz-R-脯氨酸，采用实施例4类似的1
实验步骤和方法制备实施例13。MS(ESI)：m/z505(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：
δ0.79-0.84(m，3H)；1.33(d，J ＝ 6.4Hz，1H)；1.57-1.62(m，7H)；1.82-1.94(m，2H)；
1.95-2.01(m，1H)；2.37-2.46(m，2H)；2.49-2.52(m，1H)；2.71-3.05(m，7H)；3.44-3.49(m，
2H)；3.52(s，1H)；3.53-3.59(m，2H)；3.65(s，1H)；3.70(s，3H)；3.78-3.83(m，1H)；
5.94-5.99(m，1H)
实验步骤和方法制备实施例13。MS(ESI)：m/z505(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：
δ0.79-0.84(m，3H)；1.33(d，J ＝ 6.4Hz，1H)；1.57-1.62(m，7H)；1.82-1.94(m，2H)；
1.95-2.01(m，1H)；2.37-2.46(m，2H)；2.49-2.52(m，1H)；2.71-3.05(m，7H)；3.44-3.49(m，
2H)；3.52(s，1H)；3.53-3.59(m，2H)；3.65(s，1H)；3.70(s，3H)；3.78-3.83(m，1H)；
5.94-5.99(m，1H)
[0429] 实施例14
[0430] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基哌啶-4-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0431] 用Cbz-4-哌啶羧酸代替实施例4A中的Cbz-R-脯氨酸，采用实施例4类似的1
实验步骤和方法制备实施例14。MS(ESI)：m/z505(M+1，100％)；H NMR(400MHz，CD3OD)：
δ0.93(t，J ＝ 7.4Hz，3H)；1.17-1.35(m，2H)；1.64-1.84(m，7H)；1.89-1.95(m，1H)；
2.10-2.24(m，1H)；2.45-2.51(m，1H)；2.69-3.11(m，9H)；3.36-3.53(m，5H)；3.61-3.64(m，
1H)；3.72(s，3H)；3.80(d，J＝9.6Hz，1H)；6.02(d，J＝7.6Hz，1H)
实验步骤和方法制备实施例14。MS(ESI)：m/z505(M+1，100％)；H NMR(400MHz，CD3OD)：
δ0.93(t，J ＝ 7.4Hz，3H)；1.17-1.35(m，2H)；1.64-1.84(m，7H)；1.89-1.95(m，1H)；
2.10-2.24(m，1H)；2.45-2.51(m，1H)；2.69-3.11(m，9H)；3.36-3.53(m，5H)；3.61-3.64(m，
1H)；3.72(s，3H)；3.80(d，J＝9.6Hz，1H)；6.02(d，J＝7.6Hz，1H)
[0432] 实施例15
[0433] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3，6，7，8-四氢环戊烷并[d]吡唑并[3，4-b]吡啶-5-氧基四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0434] 用环戊酮代替实施例4D中的环己酮，采用实施例4类似的实验步骤和方法制1
备实施例15。MS(ESI)：m/z477(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ0.69-0.76(m，3H)；
1.45-1.56(m，2H)；1.81-1.95(m，3H)；2.07-2.39(m，2H)；2.48-2.59(m，2H)；2.64-2.88(m，
2H)；2.90-2.92(m，1H)；2.96-3.09(m，3H)；3.16-3.24(m，2H)；3.38-3.44(m，3H)；3.56(s，
3H)，3.73-3.75(m，1H)；5.83-5.86(m，1H)
备实施例15。MS(ESI)：m/z477(M+1，100％)；H NMR(400MHz，D2O)：δ0.69-0.76(m，3H)；
1.45-1.56(m，2H)；1.81-1.95(m，3H)；2.07-2.39(m，2H)；2.48-2.59(m，2H)；2.64-2.88(m，
2H)；2.90-2.92(m，1H)；2.96-3.09(m，3H)；3.16-3.24(m，2H)；3.38-3.44(m，3H)；3.56(s，
3H)，3.73-3.75(m，1H)；5.83-5.86(m，1H)
[0435] 实施例16
[0436] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0437] 实施例16A
[0438] 3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5(4H)-酮[0439] 实施例16A用反应路线1所示的步骤并参照US7,501,412具体实验条件制备。
[0440] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3-基)-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0441] 用实施例16A代替实施例4H中的4G，采用实施例4类似的实验步骤和方法制备得实施例16。
[0442] 实施例17
[0443] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-环戊基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0444] 实施例17A
[0445] 1-(1-环戊基-3-吡咯基)-3-甲基-6，7，8，9-四氢吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-酮[0446] 氮气保护下，将实施例7A(0.5g，1.84mmol)、环戊酮(0.46g，5.51mmol)、氯化锌(0.5g，3.67mmol)和甲醇(100mL)加入到250mL反应瓶中，室温搅拌2小时，加氰基硼氢化钠(0.35g，5.51mmol)，搅拌过夜。反应完毕后浓缩除去甲醇，制备硅胶板提纯，得到500.4mg白色固体产物，收率80.0％。MS(ESI)：m/z341(M+1，100％)。
[0447] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲基-1-(1-环戊基吡咯烷-3-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0448] 用实施例17A代替实施例4H中的其始原料实施例4G，采用实施例4H、实施例41
类似的实验步骤和方法制备实施例17。MS(ESI)：m/z517(M+1，100％)；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.71-1.73(m，5H)；1.82-1.85(m，8H)；2.13-2.20(m，3H)；2.24-2.31(m，2H)；
2.43-2.52(m，2H)；2.65-2.75(m，4H)；2.96-3.05(m，3H)；3.55-3.59(m，3H)；3.87-3.88(m，
1H)；4.10(s，3H)；6.14(d，J＝7.2Hz，1H)
类似的实验步骤和方法制备实施例17。MS(ESI)：m/z517(M+1，100％)；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.71-1.73(m，5H)；1.82-1.85(m，8H)；2.13-2.20(m，3H)；2.24-2.31(m，2H)；
2.43-2.52(m，2H)；2.65-2.75(m，4H)；2.96-3.05(m，3H)；3.55-3.59(m，3H)；3.87-3.88(m，
1H)；4.10(s，3H)；6.14(d，J＝7.2Hz，1H)
[0449] 实施例18
[0450] (2S，3S，4S，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-(3-甲-1-(R)-1-异丙基吡咯烷-2-基)-6，7，8，9-四氢-3H-吡唑并[3，4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
[0451] 用丙酮代替实施例4G中的丙醛，采用实施例4类似的实验步骤和方法制备实施1
例18。MS(ESI)：m/z471(M-3，100％)；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.31(d，J＝6.4Hz，6H)；
1.82-1.94(m，5H)；2.05-2.22(m，3H)；2.61-2.77(m，4H)；3.06-3.13(m，3H)；3.33-3.38(m，
1H)；3.54-3.63(m，3H)；3.67-3.72(m，2H)；3.80(d，J ＝ 8.8Hz，1H)；3.98(s，3H)；
5.13-5.16(m，1H)；6.15(d，J＝8.0Hz，1H)
例18。MS(ESI)：m/z471(M-3，100％)；H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.31(d，J＝6.4Hz，6H)；
1.82-1.94(m，5H)；2.05-2.22(m，3H)；2.61-2.77(m，4H)；3.06-3.13(m，3H)；3.33-3.38(m，
1H)；3.54-3.63(m，3H)；3.67-3.72(m，2H)；3.80(d，J ＝ 8.8Hz，1H)；3.98(s，3H)；
5.13-5.16(m，1H)；6.15(d，J＝8.0Hz，1H)
[0452] 实施例19
[0453] 为了评价本申请化合物对PARP在体外、尤其在体内的抑制作用，参照Xuesong Liu等在Analytical Biochemistry381卷，第240-247页(2008年)发表的方法使用以下Elisa实验测定本申请化合物在小鼠肿瘤组织中对PAR的抑制效果。
[0454] PAR活检ELISA实验步骤
[0455] 化学试剂和抗体
[0456] 所有化学试剂均为分析纯和化学纯，并从不同化学公司采购，使用前未经纯化；下列试剂或抗体购买于美国Trevigen公司：PAR标准品(货号：4336-100-01)、抗PAR单抗(货号：(cat.4335-MC-100)、抗PAR多抗(货号：(cat.4336-BPC-100)、细胞裂解液(货号：FNN0011)；HRP结合山羊抗兔抗体购于美国KPL公司(货号：074-1506)，ELISA化学发光底物使用美国Thermo公司的产品(货号：37070)，牛血清白蛋白(BSA)及蛋白酶抑制剂分别从Sigma公司(货号：Sigma A-4503)和amresco公司(货号：M221)采购，BCA蛋白定量测定试剂盒购买于中国江苏碧云天生物科技有限公司(货号：P0012)。所有化学和生物试剂买来后严格按照说明书要求储存待用。
[0457] 试剂配制
[0458] 碳酸盐缓冲液：称取8.4g的NaHCO3，3.56g的Na2CO3，用蒸馏水定容为1L，用HCl调pH为9.6；0.01M标准PBS溶液配制：称取7.9g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4·12H2O和1.8g K2HPO4，溶于800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L。100×蛋白酶抑制剂：加1mL去离子水到amresco公司的冻干蛋白酶抑制剂粉末EP管中，震荡1分钟，离心30秒；Cell Lysis Buffer：1mL溶液中含Cell Extraction Buffer985μL，200mM PMSF5μL，100×蛋白酶抑制剂10μL；PBS清洗液：取100μL的Tween-20，用标准PBS溶液定容为100mL；PBS封闭液：取2g的BSA粉末(Sigma)，用标准PBS溶液定容为100mL；PBS稀释液：取2g的BSA粉末(Sigma)，0.5g的SDS粉末，用标准PBS溶液定容为100mL；0.9％NaCl标准品稀释液：称取0.9g的NaCl粉末，溶解于100mL的蒸馏水中；蛋白标准溶液的配置：取0.8mL蛋白标准配置液，加入BCA蛋白检测试剂盒蛋白标准(BSA)20mg，配置为25mg/mL浓度的蛋白标准溶液A，放置-20度保存；使用时取20μL的蛋白标准液A，980μL的标准品稀释液，配置为0.5mg/mL的蛋白标准液B；BCA工作液配置：取5mL的BCA试剂A，100μL的BCA试剂B，配置成5.1mL的BCA工作液。
[0459] PAR含量ELISA测定
[0460] 用0.1M的碳酸缓冲液将抗PAR单抗稀释500倍，按100μL/孔加入酶标96孔板，37℃包被2小时。弃去孔内液体，在纸巾上轻轻扣打以吸去残留液体，加入PBS清洗液(约
250μL/孔)，漂洗5次，每次3-5分钟。而后每孔加入250μL的PBS封闭液，用包膜盖住，
25℃温孵1小时，用吸水纸将封闭液去除，吸干，分别每孔加入75μL的PAR系列稀释标准液或各待测提取物样品，每组三孔。用薄膜封住各孔，4℃孵育过夜，移去包膜，用PBS清洗液每孔250μL漂洗5次，每次3-5分钟，为确保孔内液体去除完全，用吸水纸除去孔内液体。用PBS封闭液将抗PAR多抗稀释500倍，加100μL稀释后的PAR二抗，用薄膜封住各孔，室温温孵2小时，漩涡振荡混匀。移去包膜，用PBS清洗液每孔250μL漂洗5次，每次
3-5分钟。用PBS封闭液将山羊抗兔IgG-HRP结合抗体(三抗)稀释成浓度为2g/mL的酶标抗体，按每孔100μL加入新鲜配制的酶标抗体，封膜并室温下孵育1小时，漩涡振荡混匀。移去包膜，用PBS清洗液漂洗5次，每次3-5分钟，而后将化学发光底物A和B等体积混合，该混合物作为HRP底物发光剂，每孔加入100μL，并立刻用SpectraMax M5读取化合光数(相对光单位)。
250μL/孔)，漂洗5次，每次3-5分钟。而后每孔加入250μL的PBS封闭液，用包膜盖住，
25℃温孵1小时，用吸水纸将封闭液去除，吸干，分别每孔加入75μL的PAR系列稀释标准液或各待测提取物样品，每组三孔。用薄膜封住各孔，4℃孵育过夜，移去包膜，用PBS清洗液每孔250μL漂洗5次，每次3-5分钟，为确保孔内液体去除完全，用吸水纸除去孔内液体。用PBS封闭液将抗PAR多抗稀释500倍，加100μL稀释后的PAR二抗，用薄膜封住各孔，室温温孵2小时，漩涡振荡混匀。移去包膜，用PBS清洗液每孔250μL漂洗5次，每次
3-5分钟。用PBS封闭液将山羊抗兔IgG-HRP结合抗体(三抗)稀释成浓度为2g/mL的酶标抗体，按每孔100μL加入新鲜配制的酶标抗体，封膜并室温下孵育1小时，漩涡振荡混匀。移去包膜，用PBS清洗液漂洗5次，每次3-5分钟，而后将化学发光底物A和B等体积混合，该混合物作为HRP底物发光剂，每孔加入100μL，并立刻用SpectraMax M5读取化合光数(相对光单位)。
[0461] 肿瘤活检组织的获取及组织中蛋白的提取
[0462] 采集50mg肿瘤活检样品并转移到1.5mL离心管，在冰面上，加入500μL含有1×蛋白酶抑制剂和1mM的PMSF冷冻的细胞裂解液，充分均匀捣碎；高速漩涡振荡混合
30秒，并在2-3W功率下的超声裂解仪进行超声30秒，重复3次。而后用冷冻离心机4℃以13,000rpm离心15分钟；上清液加入SDS，要求最终SDS浓度为1％；样品震荡10秒，然后放入100℃沸水中煮5分钟；煮完后在碎冰冷却试管，以高速漩涡震荡10秒，再4℃以
13,000×g离心5-10分钟，澄清溶液，取上清液即为提取蛋白液。
30秒，并在2-3W功率下的超声裂解仪进行超声30秒，重复3次。而后用冷冻离心机4℃以13,000rpm离心15分钟；上清液加入SDS，要求最终SDS浓度为1％；样品震荡10秒，然后放入100℃沸水中煮5分钟；煮完后在碎冰冷却试管，以高速漩涡震荡10秒，再4℃以
13,000×g离心5-10分钟，澄清溶液，取上清液即为提取蛋白液。
[0463] BCA蛋白定量
[0464] 利用BCA法测定提取物蛋白质浓度：取0.8mL蛋白标准配置液，加入BCA蛋白检测试剂盒蛋白标准(BSA)20mg，配置为25mg/mL浓度的蛋白标准溶液A；而后取20μL的蛋白标准液A，980μL的0.9％NaCl溶液，配置为0.5mg/mL的蛋白标准液B。取5mL的BCA标准溶液A，100μL的BCA试剂B，配置成5.1mL的BCA工作液。将蛋白标准液B按照0、1、2、4、8、12、16、20μL分别加入到96孔板的标准品孔中，加0.9％NaCl稀释液补足到20μL。而后加入各样品液到96孔板的样品孔中，每孔加20μL，每个样品各加3孔；各孔加入200μL的BCA工作液，37℃放置20-30分钟；测定A562，根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
[0465] PAR标准曲线的制备
[0466] 取PAR标准液(Trevigen公司，4336-100-01)，用PBS稀释液配置为浓度分别是1200pg/mL、600pg/mL、300pg/mL、150pg/mL、75pg/mL、37.5pg/mL、18.75pg/mL的标准液，每个标准液配置量为250μL。按照PAR含量ELISA检测步骤进行化学发光检测并绘制标准曲线。
[0467] 小鼠肿瘤接种实验
[0468] C57BL/6荷瘤鼠的建立
[0469] B16F10黑色素瘤细胞株(南京凯基生物科技有限公司)复苏后用含10％小牛血清、0.25mM Hepes、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养液，于5％CO2培养箱37℃培养。指数增殖期细胞用0.25％胰酶消化并收集于无血清的培养液中，轻轻摇动，细胞悬液经计数，锥虫蓝染色等检测细胞活力超过95％。
[0470] SPF(无特定病原体)级封闭群近交系C57BL/6母小鼠(上海西普尔-必凯动物有限公司)，6-8周龄，每只20克左右用75％酒精消毒腹部皮肤，分别取上述B16F10黑色素瘤6
细胞溶液接种于小鼠左首肋部皮下，每只小鼠接种3.6×10 细胞并和基质胶按1∶1比例
3
混合接种。待肿瘤大小长到500mm 左右开始给药。
细胞溶液接种于小鼠左首肋部皮下，每只小鼠接种3.6×10 细胞并和基质胶按1∶1比例
3
混合接种。待肿瘤大小长到500mm 左右开始给药。
[0471] MX-1BALB/c裸鼠荷瘤鼠的建立
[0472] MX-1人乳腺癌细胞株(南京凯基生物科技有限公司)复苏后用含有10％的胎牛血清，1％(w/v)的青霉素和1％(w/v)链霉素的PRMI-1640培养液、于5％CO2培养箱37℃培养。传代扩增，收集指数增殖期细胞用吹管吹打，收集于无小牛血清的不完全培养液中，轻轻摇动制成细胞悬液，细胞计数及台盼蓝染色检测细胞活力超过95％。
[0473] SPF级Balb/c雌性裸鼠(上海西普尔-必凯动物有限公司)，4-6周龄，体重6
18-22g，用75％的酒精消毒后接种左侧下肢腹股沟部，每只小鼠接种2×10 细胞并和基质
3
胶按1∶1比例混合接种。待肿瘤大小长到500mm 左右开始给药。
18-22g，用75％的酒精消毒后接种左侧下肢腹股沟部，每只小鼠接种2×10 细胞并和基质
3
胶按1∶1比例混合接种。待肿瘤大小长到500mm 左右开始给药。
[0474] 给药方式
[0475] 制剂对照组：在100mL容量瓶中加入5mL乙醇、25mL PEG400，然后用含0.05％TW80的(在100mL中加1滴)PBS制剂溶液定溶、摇晃，室温保存备用。每只小鼠灌胃剂量0.2mL/3
只，从荷瘤鼠肿瘤大小为500mm 时每天给药两次，连续给药5天，肿瘤活检。
只，从荷瘤鼠肿瘤大小为500mm 时每天给药两次，连续给药5天，肿瘤活检。
[0476] 化合物给药组：使用上述制剂配制1.25mg/mL样品。每只小鼠灌胃剂量0.2mL/只，3
从荷瘤鼠肿瘤大小为500mm 时每天给药两次，连续给药5天，肿瘤活检。
从荷瘤鼠肿瘤大小为500mm 时每天给药两次，连续给药5天，肿瘤活检。
[0477] 本申请化合物在小鼠肿瘤中对PAR的抑制效果
[0478] 根据标准曲线，计算各待测样品相应的PAR含量值，而后和阴性空白实验值相比较，从而获得本申请化合物实施例对PAR形成的抑制作用-也就是体内对PARP活性的抑制作用。
[0479] 1.对B16F10黑色素瘤细胞株接种的C57BL/6荷瘤鼠肿瘤中PARP活性的抑制作用：
[0480] 下列实施例在小鼠体内在使用上述给药方式情况下对PAR形成的抑制效果等于或超过80％
[0481]2 4 9 10 1218 19
[0482] 下列实施例在小鼠体内在使用上述给药方式情况下对PAR形成的抑制效果等于或超过60％，但小于80％
[0483]1 3 5 6 7 8 11131415
[0484] 2.对MX-1人乳腺癌细胞株接种的Balb/c裸鼠肿瘤中PARP活性的抑制作用：
[0485] 下列实施例在小鼠体内在使用上述给药方式情况下对PAR形成的抑制效果等于或超过90％。
[0486]9 101819
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