用于治疗非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物
阅读：213发布：2020-09-16
专利汇可以提供用于治疗非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 的多个方面提供了用于 治疗 非酒精性脂肪性 肝炎 和相关肝 纤维 化的方法。具体地，本发明的多个方面涉及包含半乳糖‑鼠李糖半乳糖 醛 酸酯类化合物的治疗性制剂用于治疗非酒精性脂肪性肝炎和相关肝纤维化的用途。，下面是用于治疗非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物专利的具体信息内容。
1.一种组合物在制备用于治疗肝脏疾病的药物组合物中的用途，其中：
所述组合物包含处于可接受药用载体中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，并且所述组合物用于肠胃外或肠内施用，其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)残基主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链与α-1,2连接的鼠李糖残基和α-1,4-连接的GalA残基交替低聚物的支化杂聚物连接，所述鼠李糖残基携带1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合的低聚物的主要分支；
其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯与有效量的治疗剂共同施用，
其中，所述治疗剂是下述之一或下述的组合：
胆盐配制品，其中，所述胆盐配制品任选包括熊脱氧胆酸、天然存在的胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸、合成胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸；
正五聚蛋白，其中，所述正五聚蛋白任选是重组正五聚蛋白-2；
半乳糖凝集素抑制剂，其中，所述半乳糖凝集素抑制剂任选包括半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽、蛋白质抑制剂；
抗赖氨酰氧化酶的抗体；
抗氧化化合物，其中，所述抗氧化化合物任选包括硒、甘草酸苷、五味子、抗坏血酸、L-谷胱甘肽和d-α-生育酚，所述肝脏疾病包括以下至少一种疾病：脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎；并且
向需要其的受治疗者施用导致以下至少一种情况的有效量的组合物：
非酒精性脂肪性肝炎分级评分系统的严重性降低至少一分、非酒精性脂肪性肝炎活动性的血清标记的水平降低、非酒精性脂肪性肝炎疾病活动性减轻或非酒精性脂肪性肝炎的医学后果减轻。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，施用导致肝脏中脂肪的积累减少至少
10％。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，施用导致肝脏中脂肪的积累减少，所述肝脏中脂肪的积累以肝脏中具有脂肪的肝细胞的百分数评估。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述肝脏中脂肪的积累减少由超声成像法或磁共振成像法评估。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，施用导致肝细胞气球样变减少至少10％。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述肝细胞气球样变减少以肿胀肝细胞的百分数评估。
7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，施用导致肝脏样本的门脉区、中央区和小叶区中嗜中性粒细胞和淋巴细胞的浸润减少至少10％。
8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，施用导致肝脏中胶原蛋白的积累减少至少
5％。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，通过使用超声或磁共振弹性成像测量组织硬度/弹性，非侵入地确定肝脏中胶原蛋白积累的减少。
10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，非酒精性脂肪性肝炎活动性的血清标记选自由转氨酶、还原型或氧化型辅酶Q或其组合组成的组。
11.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，施用导致肝组织或血清中半乳糖凝集素-
3降低至少10％。
12.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯进一步包含木糖残基、葡萄糖残基、岩藻糖残基或其组合。
13.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基以2:1到3:1的比率存在。
14.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基、所述1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合相当于总摩尔糖的至少10摩尔百分数。
15.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从5kDa至55kDa的平均分子量。
16.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至80kDa的平均分子量。
17.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从20kDa至70kDa的平均分子量。
18.一种组合物在制备用于治疗肝脏疾病的药物组合物中的用途，其中：
所述组合物包含处于可接受药用载体中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，并且所述组合物用于肠胃外或肠内施用，其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)残基主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链与α-1,2连接的鼠李糖残基和α-1,4-连接的GalA残基交替低聚物的支化杂聚物连接，所述鼠李糖残基携带1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合的低聚物的主要分支；
其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯与有效量的治疗剂共同施用，
所述治疗剂是以下之一：半胱胺或其药学上可接受的盐、胱胺或其药学上可接受的盐、卵磷脂、复合维生素B、大麻素-1(CB1)受体的拮抗剂、大麻素-1(CB1)受体的反向激动剂、过氧化物酶体增殖物活化受体活性调节物、苯并硫氮杂 类或苯并硫杂 类化合物、抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反义构建体、杂原子连接的取代哌啶及其衍生物、吡咯烷衍生物、含有脂连素的促分泌素或诱导物活性的酰胺类化合物、季铵类化合物、醋酸格拉默、HMG-CoA还原酶抑制剂、异黄酮类化合物、大环内酯类抗生素或前述的任何组合，所述肝脏疾病包括以下至少一种疾病：脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎；并且向需要其的受治疗者施用导致以下至少一种情况的有效量的组合物：
非酒精性脂肪性肝炎分级评分系统的严重性降低至少一分、非酒精性脂肪性肝炎活动性的血清标记的水平降低、非酒精性脂肪性肝炎疾病活动性减轻或非酒精性脂肪性肝炎的医学后果减轻。
19.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述HMG-CoA还原酶抑制剂包括阿托伐他汀、辛伐他汀或它们的组合。
20.一种半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯在制备用于治疗脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物中的用途，其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)残基主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链与α-1,2连接的鼠李糖残基和α-1,4-连接的GalA残基交替低聚物的支化杂聚物连接，所述鼠李糖残基携带1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合的低聚物的主要分支，
其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯与有效量的治疗剂共同施用，
其中，所述治疗剂是下述之一或下述的组合：
胆盐配制品，其中，所述胆盐配制品任选包括熊脱氧胆酸、天然存在的胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸、合成胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸；
正五聚蛋白，其中，所述正五聚蛋白任选是重组正五聚蛋白-2；
半乳糖凝集素抑制剂，其中，所述半乳糖凝集素抑制剂任选包括半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽、蛋白质抑制剂；
抗赖氨酰氧化酶的抗体；
抗氧化化合物，其中，所述抗氧化化合物任选包括硒、甘草酸苷、五味子、抗坏血酸、L-谷胱甘肽和d-α-生育酚。
21.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基以2:1到3:1的比率存在。
22.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合相当于总摩尔糖的至少10摩尔百分数。
23.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从5kDa至55kDa的平均分子量。
24.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至80kDa的平均分子量。
25.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从20kDa至70kDa的平均分子量。
26.一种含有在药学上可接受载体中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治疗剂的混合物在制备用于治疗脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物中的用途，其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)残基主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链与α-1,2连接的鼠李糖残基和α-
1,4-连接的GalA残基交替低聚物的支化杂聚物连接，所述鼠李糖残基携带1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合的低聚物的主要分支，
其中，所述治疗剂是下述之一或下述的组合：
胆盐配制品，其中，所述胆盐配制品任选包括熊脱氧胆酸、天然存在的胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸、合成胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸；
正五聚蛋白，其中，所述正五聚蛋白任选是重组正五聚蛋白-2；
半乳糖凝集素抑制剂，其中，所述半乳糖凝集素抑制剂任选包括半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽、蛋白质抑制剂；
抗赖氨酰氧化酶的抗体；
抗氧化化合物，其中，所述抗氧化化合物任选包括硒、甘草酸苷、五味子、抗坏血酸、L-谷胱甘肽和d-α-生育酚。
27.一种含有在药学上可接受载体中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治疗剂的混合物在制备用于治疗脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物中的用途，其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)残基主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链与α-1,2连接的鼠李糖残基和α-
1,4-连接的GalA残基交替低聚物的支化杂聚物连接，所述鼠李糖残基携带1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合的低聚物的主要分支，
其中所述治疗剂是以下之一：半胱胺或其药学上可接受的盐、胱胺或其药学上可接受的盐、抗氧化化合物、卵磷脂、复合维生素B、胆盐配制品、大麻素-1(CB1)受体的拮抗剂、大麻素-1(CB1)受体的反向激动剂、过氧化物酶体增殖物活化受体活性调节物、苯并硫氮杂类或苯并硫杂 类化合物、抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶的RNA反义构建体PTPRU、杂原子连接的取代哌啶及其衍生物、吡咯烷衍生物、含有脂连素的促分泌素或诱导物活性的酰胺类化合物、季铵类化合物、醋酸格拉默、正五聚蛋白、HMG-CoA还原酶抑制剂、N-乙酰半胱氨酸、异黄酮类化合物、大环内酯类抗生素、半乳糖凝集素抑制剂、抗体或前述的任何组合。
28.根据权利要求26所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基以2:1到3:1的比率存在。
29.根据权利要求26所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合相当于总摩尔糖的至少10摩尔百分数。
30.根据权利要求26所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从5kDa至55kDa的平均分子量。
31.根据权利要求26所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至80kDa的平均分子量。
32.根据权利要求26所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从20kDa至70kDa的平均分子量。
用于治疗非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病的半乳
糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物
[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求2011年9月16日提交的美国临时申请系列号61/535,655和2012年6月6日提交的美国临时申请系列号61/656,288的权益和优先权，每份文献的全部公开内容通过引用的方式完整地并入本文。
背景技术
[0003] 非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和脂肪性肝炎(NASH)在美国是常见的肝病。在组织病理学上，这些病症类似于酒精性肝病，但是它们出现在很少饮酒或不饮酒的人中。肝脏中的病理学变化包括但不限于肝细胞中脂肪积累、肝细胞变性迹象、炎性细胞浸润、过多纤维组织沉积、肝细胞结节形成、肝硬化和肝细胞癌。迄今，不存在针对这些病症的特异性疗法。因此，对提供用于在具有或没有相关肝纤维化的情况下治疗非酒精性脂肪性肝炎的方法存在需求。发明内容
[0004] 本发明的多个方面涉及使用用于肠胃外或肠内施用的治疗性组合物治疗患有脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(NALFD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪性肝炎伴发肝纤维化、非酒精性脂肪性肝炎伴发肝硬化或非酒精性脂肪性肝炎伴发肝硬化及肝细胞癌的受治疗者的方法，所述治疗性组合物包含在可接受药用载体中的含有半乳糖的多糖化合物。在一些方面，本发明涉及用于治疗脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴发肝纤维化、NASH伴发肝硬化或NASH伴发肝硬化及肝细胞癌的含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯类化合物 的组合物。本发明的其他方面涉及半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯类化合物在制备用于治疗脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴发肝纤维化、NASH伴发肝硬化或NASH伴发肝硬化及肝细胞癌的药物组合物中的用途。在一些实施方案中，含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治疗剂的混合物可以用于治疗脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴发肝纤维化、NASH伴发肝硬化或NASH伴发肝硬化及肝细胞癌或用于制备治疗这些疾病的药物组合物。
[0005] 在一些实施方案中，含有半乳糖的多糖化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0006] 在一些实施方案中，该方法包括步骤：获得用于肠胃外或肠内施用的组合物，所述组合物包含在可接受药用载体中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯类化合物；向受治疗者施用有效量的用于肠胃外施用的组合物，所述受治疗者患有脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴发肝纤维化、NASH伴发肝硬化或NASH伴发肝硬化及肝细胞癌中的一种。
[0007] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致NAFLD或NASH分级评分系统的严重性降低至少一分、NASH活动性的血清标记的水平降低、NASH疾病活动性降低或NASH的医学后果减轻。
[0008] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致肝脏中脂肪的积累(脂肪肝)减少，如通过评估肝细胞中微泡状和大泡状脂肪颗粒或通过非侵入成像方法(包括但不限于超声法或磁共振法)从肝组织学切片所确定。在一些实施方案中，肝脏中脂肪的积累减少至少10%，如以含有脂肪的肝细胞的百分数评估并按照NAFLD分级系统或通过图像分析分级。
[0009] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致肝细胞气球样变减少，如通过评估表示毒性和无能力调节细胞体积的肝细胞肿胀从肝组织学切片确定。在一些实施方案中，肝细胞气球样变减少至少10%，如以肿胀肝细胞的百分数评估并按照NAFLD分级系统分级。
[0010] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致肝组织学样本中炎性细胞浸润减少，如通过肝脏样本的门脉区、中央区和小叶区中嗜中性粒细胞和淋巴细胞的数目评估。在一些实施方案中，肝组织学样本中炎性细胞浸润减少至少10%，如以使用NAFLD分级系统所评定的炎性细胞的百分数评估。
[0011] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致肝脏中胶原蛋白的积累减少，如通过定量分析肝组织学切片的天狼猩红染色所确定。在一些实施方案中，肝脏中胶原蛋白的积累减少至少5%，如以指示胶原蛋白的天狼猩红的肝组织染色阳性的百分数评估。
[0012] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致NASH活动性的血清标记的水平降低。在一些实施方案中，NASH活动性的血清标记可以包括但不限于转氨酶的血清水平、还原型或氧化型辅酶Q的血清水平或本领域已知的NASH活动性的其他血清标记的组合。
[0013] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致肝纤维化或肝硬化减少，这基于包括纤维化的生物化学标记的水平降低、肝纤维化或肝硬化的非侵入性检验或纤维化或肝硬化的肝组织学分级的证据。
[0014] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致NAFLD或NASH分级评分系统(一种广泛使用的评分系统)的严重性降低至少一分，所述分级评分系统包括但不限于NAFLD活动性评分(NAS)，由NASH临床研究网络(在2002年由国家糖尿病、消化病及肾病研究所(NIDDK)建立)提出。
[0015] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受治疗者中施用时，所述有效量的组合物可以导致NASH伴发肝纤维化或肝硬化的医学后果如门静脉高压症、肝蛋白质合成减少、高胆红素血症或脑病减轻。
[0016] 在一些实施方案中，所述化合物是多糖并且可以在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是含有主链的选择性解聚的支化杂聚物，所述主链主要包含1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，该主链转而与任意数目的主要包含1,4-β-D-半乳糖(Gal)的侧链连接。在一些实施方案中，所述化合物是含有主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链主要包含1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，该主链转而与任意数目的主要包含1,4-β-D-半乳糖(Gal)残基和1,5-α-L-阿拉伯糖(Ara)残基的侧链连接。其他的侧链次要组分可以包括木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和岩藻糖(Fuc)。
[0017] 在一些实施方案中，所述半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包含以2:1到3:1的比率存在的1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基。在一些实施方案中，所述半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包含相当于总摩尔糖的至少10摩尔百分数的1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合。
[0018] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从5kDa至55kDa、2kDa至80kDa或20kDa至70kDa的平均分子量。
[0019] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的治疗剂联合使用。在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以用于混合物中。
[0020] 在一些实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的半胱胺或其药学上可接受的盐，或胱胺或其药学上可接受的盐联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0021] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的各种抗氧化化合物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含甘草酸苷、五味子、抗坏血酸、L-谷胱甘肽、水飞蓟素、硫辛酸和d-α-生育酚的组合物。
[0022] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的各种抗氧化 化合物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含水溶性维生素E配制品、混合的类胡萝卜素或硒的组合物。
[0023] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的肠胃外或口服施用的卵磷脂或复合维生素B联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0024] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的胆盐配制品联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述胆盐配制品包括但不限于熊脱氧胆酸、其他天然存在或合成性胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸。
[0025] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的大麻素-1(CB1)受体拮抗剂和/或反向激动剂联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0026] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的PPAR(过氧化物酶体增殖物活化受体)活性调节物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0027] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的由以下式代表的苯并硫氮杂类或苯并硫杂 类化合物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述化合物含有硫代酰胺键和季铵取代基。
[0028] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反义构建体联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0029] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的可用作组胺H3拮抗剂的杂原子连接的取代哌啶及其衍生物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0030] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的抑制硬脂酰-辅酶αδ-9去饱和酶的吡咯烷衍生物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0031] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的含有脂连素的促分泌素或诱导物活性的酰胺类化合物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0032] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的季铵类化合物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0033] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的异黄酮类化合物联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0034] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的大环内酯类抗生素联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0035] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的目前用来治疗多发性硬化的免疫调节剂药物醋酸格拉默(Glatiramer acetate)(也称作共聚物1、Cop-1或克帕松(copaxone)，如Teva Pharmaceuticals所销售)联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0036] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的正五聚蛋白(包括但不限于重组正五聚蛋白-2)联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0038] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的N-乙酰半胱氨酸联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0039] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的可以抑制单一半乳糖凝集素蛋白或一组半乳糖凝集素蛋白的另一种半乳糖凝集素抑制剂联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述半乳糖凝集素抑制剂包括但不限于半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽或蛋白质抑制剂。
[0040] 在另一个实施方案中，所述化合物是与治疗有效量的抑制赖氨酰氧化酶(或交联胶原蛋白的其他类似酶)的单克隆抗体或抗结缔组织生长因子的单克隆抗体联合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0041] 在一些实施方案中，所述用于肠胃外施用的组合物的功效可以通过将该组合物施用于NASH的动物模型来确定，所述动物模型包括但不限于导致糖尿病并饲喂高脂膳食的小鼠。在一些实施方案中，将该组合物施用于NASH的动物模型可以导致肝细胞脂肪积累减少至少5%、肝脏的炎性细胞浸润减少至少5%或肝脏胶原蛋白含量减少至少5%，如通过形态定量法所确定。附图说明
[0042] 将参考附图对本发明进行进一步解释，其中相同的结构在几个视图中始终由相同的数字表示。所示的图不必然地符合比例，相反当说明本发明的原理时通常将作为重点。
[0043] 图1示出了脂肪性肝炎STAM小鼠模型中治疗的实验设计。
[0044] 图2A是显示在第6-9周治疗组中STAM小鼠体重变化的图。图2B是显示在第9-12周治疗组中STAM小鼠体重变化的图。
[0045] 图3A是显示在第6-9周治疗组中STAM小鼠内的全血葡萄糖的比较图。图3B是显示在第9-12周治疗组中STAM小鼠内的全血葡萄糖的比较图。
[0046] 图4显示用苏木精和伊红(H&E)以及用天狼猩红染色的正常小鼠和NASH小鼠模型的组织学。
[0047] 图5A显示溶媒处理的NASH小鼠模型和GR-MD-02处理的NASH小鼠模型的组织学。图5B是显示治疗组之间的STAM小鼠内NFLD活动性评分比较的图。
[0048] 图6显示在第6-9周和在第9-12周采用天狼猩红染色的实验组的肝组织学。
[0049] 图7A是显示在第6-9周实验组之间肝组织学中天狼猩红阳性面积比较的图。图7B是显示在第9-12周实验组之间肝组织学中天狼猩红阳性面积比较的图。图7C是显示在全部动物中实验组之间肝组织学中天狼猩红阳性面积比较的图。
[0050] 图8A显示了实验组肝组织中的α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的免疫组织化学染色。图8B显示了实验组肝组织中的α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的数字式形态测量学。
[0051] 图9A显示了实验组肝组织中的半乳糖凝集素-3的免疫组织化学染色。图9B显示了实验组肝组织中的半乳糖凝集素-3的数字式形态测量学。
具体实施方式
[0052] 本文中公开了本发明的详细实施方案；然而，应当理解所公开的实施方案仅是说明可以按多种形式体现的本发明。此外，所给出的与本发明的多个实施方案相关的每个实施例意在是示意性的并且非限制性的。另外，附图不必然地按照比例，可以放大一些特征以显示特定组分的细节。此外，图中所显示的任何量值、说明等意在是示意性的并且非限制性的。因此，本文中公开的特定结构和功能细节不得理解为限制性的，而仅应理解为教导本领域技术人员以多种方式使用本发明的代表性基础。
[0053] 除非另外说明，否则本文中所表述的全部百分数均是重量/重量。
[0054] 非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的主要特征是肝细胞中脂肪积累伴有少量炎症。通常基于肝脏活组织检查鉴定这些患者，所述肝脏活组织检查因为血清中轻度升高的肝脏转氨酶水平或在非侵入性检验(如计算机化断层成像或超声法)时怀疑脂肪肝而进行。
[0055] 发现一个亚类的患有NAFLD的个体患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，其为脂肪肝外加炎性细胞(包括但不限于嗜中性粒细胞或淋巴细胞)浸润在小叶、中央静脉和门脉区内部形成和肝细胞损伤迹象，包括但不限于气球样变性。NASH的这种炎性状态可以导致纤维组织(包括但不限于胶原蛋白)沉积，这可以导致肝硬化、结节形成并最终导致肝细胞癌。
[0056] 疾病进程是隐伏的，因为大部分患有NASH的人感觉良好并且没有意识到他们具有肝脏问题。尽管缺少症状，但NASH可能是严重的 并且可以导致纤维物质在肝脏中沉积，这可以导致严重瘢痕化和/或肝硬化以及在一些情况下导致肝细胞癌。因此，对可以早期鉴定NASH并跟踪其进展的临床检验存在需求。
[0057] NAFLD和NASH是常见病症。美国国家健康研究所报道，10-20%的美国人患有NAFLD并3-5%患有NASH。两种病症正在变得常见，因为更多数目的人患有肥胖症和糖尿病的，包括儿童和青少年。NASH可以进展成肝硬化的事实使之成为主要健康问题。
[0058] 虽然NASH已经变得更常见，但是其基础性病因仍不清楚。它最经常出现在超重或肥胖的中年人中，他们中许多患有代谢综合征、胰岛素抵抗或显性糖尿病。然而，NASH不简单地是影响肝脏的肥胖症。NASH可能侵袭儿童和青少年。
[0059] NASH中肝损伤的近因未知。已经提出了多个理论。这些理论中的一些包括肝细胞抵抗胰岛素作用，损伤肝脏并招募额外炎性细胞的炎性细胞因子由脂肪细胞及其他炎性细胞产生和肝细胞中的氧化应激，伴随产生损伤肝脏细胞并引起炎症的反应性氧自由基。
[0060] 目前，不存在针对NASH的特异性疗法并且目前仅向患者提供一般健康建议。这些建议包括减轻体重、摄入平衡和健康膳食、增加体力活动并避免酒和不必要的药物。减轻体重可以在一些NASH患者中改善血清肝脏检验并且可以改善组织学肝损伤迹象，但是它不逆转严重肝病。此外，并非全部NASH患者均超重。
[0062] 半乳糖凝集素-3蛋白近来涉及NASH的发病机理。半乳糖凝集素(也称作半乳素或S-凝集素)是结合β-半乳糖苷的凝集素家族。半乳糖凝集素作为通用名在1994年针对动物凝集素家族提出(Barondes,S.H.等人,Galectins:a family of animal b-galactoside-binding lectins.Cell76,597-598,1994)。该家族由含有至少一个对β-半乳糖苷存在亲和力的特征性糖识别结构域(CRD)并共有某些序列元件定义。在相同肽链内部， 一些半乳糖凝集素含有仅存在一些额外氨基酸的CRD，而其他半乳糖凝集素含有由连接肽连接的两个CRD，并且一种半乳糖凝集素(半乳糖凝集素-3)含有与一种不同类型结构域连接的一个CRD。半乳糖凝集素糖识别结构域(CRD)是约135个氨基酸的β-夹层。两个折叠片略微弯曲，同时6条链形成凹陷侧并且5条链形成凸出侧。凹陷侧形成其中结合糖的槽(Leffler H,Carlsson S,Hedlund M,Qian Y,Poirier F(2004)."Introduction to galectins".Glycoconj.J.19(7-9):433-40)。
[0063] 已经显示广泛类型的生物现象与半乳糖凝集素相关，例如，发育、分化、形态发生、肿瘤转移、凋亡、RNA剪接等。然而，关于半乳糖凝集素借以展示这些功能(特别在糖识别方面)的机制，相对知之甚少。
[0065] 每种半乳糖凝集素蛋白含有一个半乳糖结合结构域和允许与其他半乳糖凝集素蛋白同型二聚化或异二聚化的其他结构域。半乳糖凝集素蛋白在生理条件下以低水平在宽范围的细胞和组织中表达并存在于胞核、细胞质中并且由非传统分泌途径分泌入胞外空间。
[0066] 半乳糖凝集素的半乳糖结合结构域与位于细胞表面上或胞外基质蛋白上的含有半乳糖的糖蛋白结合。半乳糖凝集素上的二聚化结构域促进半乳糖凝集素蛋白的相互作用，因而在膜或基质糖蛋白之间产生相互作用。这些相互作用促进细胞-细胞、细胞-基质和基质-基质相互作用和膜受体缔合，这可以造成细胞受体活性的激活、失活或调节，导致调节胞内信号传导和后续事件。
[0067] 某些半乳糖凝集素蛋白从处于病理状态的细胞明显上调并且以高的量分泌。处于组织炎症状态和修复(纤维化、瘢痕化)的多种炎性细胞(包括但不限于巨噬细胞和淋巴细胞)表达半乳糖凝集素，特别是半乳糖凝集素-1和半乳糖凝集素-3。
[0068] 缺少半乳糖凝集素-3基因的小鼠已经用来探索半乳糖凝集素-3在包括炎症和纤维化的许多疾病状态下作为关键组分的功能。这些半乳糖凝集素-3敲除小鼠已经显示出抵抗因毒素施用所致的肝纤维化、肺纤维化和肾纤维化。
[0069] 半乳糖凝集素-3敲除小鼠也已经用来探索半乳糖凝集素-3在NASH中的重要性。在这些实验中，小鼠饲以高脂膳食以引起NAFLD和NASH的形成。正常小鼠容易形成脂肪肝、肝脏中炎性浸润和肝纤维化。与之形成鲜明对比，半乳糖凝集素-3敲除小鼠不形成那样多的脂肪肝，并且具有最少的炎性浸润和纤维化。这些数据表明半乳糖凝集素-3可能是NASH疗法的重要靶。
[0070] 抑制半乳糖凝集素-3是本发明中一项作为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯功效基础的潜在机制。
[0071] 术语“有效量”意指半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或与半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯联合的其他药剂的量，所述量在作为肠胃外剂量或在口服制剂中施用于患有NAFLD、NASH或NASH伴发纤维化或肝硬化的动物或人时能够改善NAS评分至少一分或减少胶原蛋白面积百分数至少5%。
[0072] 在一些方面，表征了用于治疗需要其的受治疗者中半乳糖凝集素参与其中的一种或多种疾病、病症或病状(例如，控制、减轻、缓解、改善或延缓其进展)的方法或用于预防所述疾病、病症或病状的方法(例如，延迟其发作或降低形成风险)。所述方法包括向该受治疗者施用有效量的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯类化合物或向患有脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴发肝纤维化、NASH伴发肝硬化或NASH伴发肝硬化及肝细胞癌中的一种的受治疗者施用有效量的包含半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯类化合物的组合物。
[0073] 术语“药学上可接受的载体”指生理相容的任何和全部溶剂、分散介质，例如，人白蛋白或交联型明胶多肽、包衣、抗细菌剂和抗真菌药化合物、等渗剂(例如，氯化钠或谷氨酸钠)和吸收延迟性化合物等。用于药学活性物质的此类介质和化合物的用途是本领域熟知的。 优选地，载体适于口服、静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊髓或硬膜外施用(例如，通过注射或输注)。取决于施用途径，活性化合物可以包覆于保护该化合物免遭可能使这种化合物失活的酸和其他天然条件作用的材料中。
[0074] 术语“功效”在一些实施方案中指表明与NASH或NASH伴发纤维化或肝硬化相关的肝脏组织学研究结果改善，如通过NAS评分或胶原蛋白百分数所确定。
[0075] 在一些实施方案中，所述治疗方法包括获得包含在可接受的药用载体中的化合物的用于肠胃外或肠内施用的组合物的步骤。在一些实施方案中，该化合物是多糖并且可以在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，一种选择性解聚的支化杂聚物，其主链主要由1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分组成，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，该主链转而与任意数目的主要包含1,4-β-D-半乳糖(Gal)的侧链连接。其他侧链次要组分可以包括阿拉伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和岩藻糖(Fuc)。
[0076] 在一些实施方案中，该化合物是多糖并且可以在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯的亚型，称作半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，一种选择性解聚的支化杂聚物，其主链主要由1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分组成，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，该主链转而与任意数目的主要包含1,4-β-D-半乳糖(Gal)残基和1,5-α-L阿拉伯糖(Ara)残基的侧链连接。其他的侧链次要组分可以包括木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和岩藻糖(Fuc)。
[0077] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物可以通过美国系列号8,236,780中和名称为“Composition of Novel Carbohydrate Drug for Treatment of Human Diseases(用于治疗人类疾病的新糖药物组合物)”的国际专利申请No.PCT/US12/55311中描述的方法产生，这些文献通过引用的方式完整地并入用于全部目的。
[0078] 在一些实施方案中，所述化合物可以从天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果胶合成，如同从含有8-12%果胶的苹果渣制造出的那一种。
[0079] 在一些实施方案中，可以在糖苷连接的甲氧基化α-1,4-连接的GalA的充分受控和特异性水解情况下合成所述化合物，同时保留含有富集量的1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的侧链。可以通过GC-MS(气相色谱-质谱法)和AELC-PAD(阴离子交换液相色谱-脉冲安培检测器)法定量地测定1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的量。
[0080] 在一些实施方案中，可以通过如下的方法产生所述化合物，即，该方法包括在1至++100mM还原形式的额外过渡金属离子如Cu 存在或不存的情况下，通过从抗坏血酸产生的离子化OH-和/或过氧化物定向过氧化裂解糖苷键所分解代谢的解聚。其他过渡金属如Ca++或Fe++可以用于此目的。
[0081] 在一些实施方案中，所述解聚化合物可以在2℃至60℃的温度暴露于8至10之间的pH10至30分钟以启动受控有限的去甲氧基化，以产生与最高87%的初始水平相比甲氧基化程度为40%至70%的解聚化合物，并且可以称作中等甲氧基化的化合物。认为半乳糖醛酸的完全甲氧基化是大约DE87%。
[0082] 在一些实施方案中，所述解聚组合物可以暴露于多次热酸性醇洗涤(例如在范围从30℃至80℃的温度)以除去任何残留的内毒素、铜和重金属、农业污染物和其他杂质。
[0083] 在一些实施方案中，所述化合物是在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯的多糖，一种具有2,000至80,000、或20,000至70,000、或5,000至55,000道尔顿的平均分子量分布的支化杂聚物，如通过SEC-RI和/或SEC-MALLS法所确定。
[0084] 在一些实施方案中，本发明化合物中1,5-α-L-Ara残基的摩尔百分数可以是零或仅以至多1%的痕量存在。
[0085] 在一些实施方案中，所述化合物是具有可以分别超过10%总摩尔糖的1,4-β-D-Gal残基和1,5-α-L-Ara残基摩尔百分数的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基的近似比率范围是从1:1至3:1。
[0086] 在一些实施方案中，所述化合物可以是分子量范围大幅度降低(例如从约2,000至约80,000D)的高度可溶的改性多糖，从而与治疗性制剂相容以通过多种途径用于多种施用，所述途径包括但不限于静脉内、皮下、关节内、吸入和口服。
[0087] 在一些实施方案中，所述化合物可以从天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果胶合成，所述果胶可以来自任何植物来源，包括但不限于柑橘果、苹果或甜菜。
[0088] 在一些实施方案中，所述化合物可以从天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果胶合成，如同从含有8-12%果胶的苹果渣制造出的那一种。
[0089] 在一些实施方案中，可以在糖苷连接的甲氧基化α-1,4-连接的GalA的充分受控和特异性水解情况下合成所述化合物，同时保留具有富集量的1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的侧链。可以通过GC-MS(气相色谱-质谱法)和AELC-PAD(阴离子交换液相色谱-脉冲安培检测器)法定量地测定1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的量。
[0090] 在一些实施方案中，可以通过如下的方法产生所述化合物，即，该方法包括在1至100mM还原形式的额外过渡金属离子如Cu++存在或不存的情况下，通过从抗坏血酸产生的离子化OH-和/或过氧化物定向过氧化裂解糖苷键所分解代谢的解聚。其他过渡金属如Ca++或Fe++可以用于此目的。
[0091] 在一些实施方案中，所述解聚化合物可以在2℃至30℃的温度暴露于8至10之间的pH10至30分钟以启动受控有限的去甲氧基化，以产生与最高87%的初始水平相比甲氧基化程度为40%至70%的解聚化合物，并且可以称作中等甲氧基化的化合物。认为半乳糖醛酸的完全甲氧基化是大约DE87%。
[0092] 在一些实施方案中，所述解聚组合物可以暴露于多次热酸性醇洗涤(50-65℃)以除去任何残留的内毒素、铜和重金属、农业污染物和其他杂质。
[0093] 在一些实施方案中，通过修饰天然存在的聚合物以针对所需范围降低分子量、减少烷基化基团(去甲氧基化或脱乙酰化)，制备可溶性化学改变的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。在化学修饰之前，天然多糖可以具有在大约40,000-1,000,000D之间的分子量范围，伴随多个糖分支，例如，由1至20个葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等单糖组成的分支，并且这些分支可以通过中性单糖如鼠李糖连接到主链。这些分子可以进一步包括单个或一连串可以从少到约2%至多到约70%酯化的糖醛酸糖主链。多个分支本身可以具有多个糖分支，所述多个分支任选地包含主要产生疏水实体的中性糖和中性糖衍生物。
[0094] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物可以使用来自任何植物来源的果胶原料通过各种处理产生，所述处理包括加热、高或低pH、多种形式的分子量排阻过滤(或这些方法的组合)，所述果胶原料包括但不限于苹果、柑橘或甜菜果胶，其中一些可作为USP果胶物质商业上可获得。
[0095] 在一些实施方案中，所述化合物落在包括基本上脱甲氧基化的聚半乳糖醛酸主链的大类内，所述聚半乳糖醛酸主链具有从其上悬垂的鼠李糖残基。认为在这种类型的物质中，从主链悬垂的末端半乳糖单元结合到半乳糖凝集素蛋白。剩余的分子主体可以激动化合物在调节免疫系统反应方面的作用。尽管不希望受推测限制，剩余的分子主体可以与剩余的半乳糖凝集素蛋白部分相互作用和/或可以延长糖部分与它的结合。
[0096] 在一些实施方案中，所述治疗性组合物可以口服、通过静脉内注射、通过皮下注射或通过输注施用。
[0097] 尽管前面的讨论已经主要涉及基于改性果胶的治疗性物质，但是应当理解本发明不受如此限制。根据本发明的一般原理，可以使用可与半乳糖凝集素相互作用于并且阻断半乳糖凝集素的一大类化合物 的任何成员。在一个实施方案中，这些物质包括糖类物质，因为这类物质毒性低并且显示出与半乳糖凝集素强烈的相互作用或显示出强烈的抗炎作用。改性果胶物质包括一个特定组的糖类物质。同样，可以类似地使用其合成和半合成类似物如聚半乳糖醛酸物质。
[0098] 然而，本发明的另一类物质包括具有与第二部分连接的第一部分的分子，所述第一部分一般是糖类并且能够结合到半乳糖凝集素，所述第二部分失活或否则调节蛋白质活性。该第二部分不需要是糖类并且可以包括交联包含半乳糖凝集素蛋白活性部分的蛋白质区段或与半乳糖凝集素相互作用的另一种蛋白质的活性部分或否则使之变性的物质。这类物质包括活性种类如单独或组合的硫或其他硫族元素如巯基、硫氢基等。其他活性种类可以包括氰基、硫氰酸酯、烷基化剂、醛等。一些活性种类可以是蛋白质，包括但不限于单克隆抗体。
[0099] 本发明的一些方面涉及在治疗NASH或NALD方面含有合适或增加的功效的NASH治疗性制剂。在一些实施方案中，所述NASH治疗性制剂包含有效量的半乳糖-多糖。在一些实施方案中，所述NASH治疗性制剂可以单独施用或在混合物或配方中与有效量的治疗剂共同施用。该制剂可以进一步包含额外的NASH治疗剂或赋形剂，其中制剂处于粉末形式或处于液体形式。
[0100] 在另一个实施方案中，有效量的含有半乳糖的多糖可以在用于口服施用的制剂中施用。配制可以包括物理改变化合物或添加各种增强含有半乳糖的多糖口服吸收的物质的方法。
[0101] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以用于混合物中。术语“混合物”意指混合在一起以形成组合的多于一种组分。出于本发明的目的，“混合物”意指在施用之前或之后或与之同时的任何时间，两种或更多种化合物的混合物。
[0102] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的半胱胺或其药学上可接受的盐、或胱胺或其药学上可接受的盐联合使用[参见美国专利No.7,994,226，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0103] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的各种抗氧化化合物联合使用，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含甘草酸苷、五味子、抗坏血酸、L-谷胱甘肽、水飞蓟素、硫辛酸和d-α-生育酚的组合物[参见美国专利No.7,078,064，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0104] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的各种抗氧化化合物联合使用，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含水溶性维生素E配制品、混合的类胡萝卜素或硒的组合物[参见美国专利No.6,596,762，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0105] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的肠胃外或口服施用的卵磷脂或复合维生素B联合使用[参见美国专利No.7,018,652；6,180,139，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0106] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的胆盐配制品联合使用，所述胆盐配制品包括但不限于熊脱氧胆酸、其他天然存在或合成性胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸[参见美国专利No.6,297,229，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0107] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的大麻素-1(CB1)受体拮抗剂和/或反向激动剂联合使用[参见美国专利No.7,999,107；7,906,652，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0108] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的PPAR(过氧化物酶体增殖物活化受体)活性调节物联合使用[参见美国专利No.7,994,353，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0109] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的由以下式代表的苯并硫氮杂 类或苯并硫杂 类化合物联合使用，所述化合物含有硫代酰胺键和季铵取代基[参见美国专利No.7,973,030，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0110] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反义构建体联合使用[参见美国专利No.7,897,583，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0111] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的可用作组胺H3拮抗剂的杂原子连接的取代哌啶及其衍生物联合使用[参见美国专利No.7,846,946，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0112] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的抑制硬脂酰-辅酶αδ-9去饱和酶的吡咯烷衍生物联合使用[参见美国专利No.7,754,745，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0113] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的含有脂连素的促分泌素或诱导物活性的酰胺类化合物联合使用[参见美国专利No.7,732,637，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0114] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的季铵类化合物联合使用[参见美国专利No.7,312,208，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0115] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的异黄酮类化合物联合使用[参见美国专利No.6,592,910，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0116] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的大环内酯类抗生素联合使用[参见美国专利No.5,760,010，该文献通过引用的方式明确地并入用于全部目的]。
[0117] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的目前用来治疗多发性硬化的免疫调节剂药物醋酸格拉默(Glatiramer acetate)(也称作共聚物1、Cop-1或克帕松(copaxone)，如Teva Pharmaceuticals所销售)联合使用。
[0118] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的司汀联合使用，所述司汀例如但不限于HMG-CoA还原酶抑制剂如阿托伐他汀和辛伐他汀。
[0119] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的Ｎ-乙酰半胱氨酸联合使用。
[0120] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的可以抑制单一半乳糖凝集素蛋白或一组半乳糖凝集素蛋白的另一种半乳糖凝集素抑制剂联合使用，所述半乳糖凝集素抑制剂包括但不限于半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽或蛋白质抑制剂。
[0121] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的抑制赖氨酰氧化酶的单克隆抗体或与结缔组织生长因子结合的单克隆抗体联合使用。
[0122] 在另一个实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的正五聚蛋白(包括但不限于重组正五聚蛋白-2)联合使用。
[0123] 在一些实施方案中，将所述的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和其他化合物作为单独或与上文所列出的其他化合物组合的疗法提出，用于人NASH，作为缓解或逆转肝细胞脂肪积累、门脉内和小叶内炎性浸润和纤维化(包括但不限于窦周隙中胶原蛋白沉积)、肝硬化以及用于阻止肝细胞癌进展的方法。另外，提出了肝病病变的这些改善将通过减少肝纤维化和肝硬化的并发症(包括肝细胞癌形成)对个体健康产生因而发生的积极作用。
[0124] 在一些实施方案中，有效量的含有半乳糖的多糖可以通过多种途径施用，所述途径包括通过作为重复静脉推注或恒量输注给予的静脉 内输注的肠胃外途径、皮内注射、作为重复快速浓注或恒量输注皮下给予或口服施用。
[0125] 对于实验动物，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内、腹内或皮下给予)是在2mg/kg直至160mg/kg体重、或10mg/kg、或30mg/kg、或60mg/kg、或90mg/kg或120mg/kg体重范围内。
[0126] 对于实验动物，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内、腹内或皮下给予)可以每周三次、每周二次、每周一次、每两周一次、每月一次或作为恒量输注施用。
[0127] 对于人类受治疗者，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内或皮下给予)是在0.5mg/kg直至25mg/kg体重、或1mg/kg、或2mg/kg、或5mg/kg、或7.5mg/kg、或10mg/kg体重或15mg/kg体重的范围内。
[0128] 对于人类受治疗者，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内或皮下给予)可以每周三次、每周二次、每周一次、每两周一次、每月一次或作为恒量输注施用。
[0129] 在一些实施方案中，可以通过NASH的血清生物标记水平至少10%的变化评价治疗有效量，所述血清生物标记包括但不限于透明质酸和胶原蛋白的其他分解产物、细胞角蛋白-18和其他细胞骨架细胞蛋白、金属蛋白酶I和II的组织抑制剂和其他来自肝脏的胶原蛋白和基质蛋白酶。可以使用免疫测定法和与疾病严重性和治疗相关的水平在血清或肝组织中测量这些化合物和生物标记。
[0130] 在一些实施方案中，可以通过NASH的血清生物标记至少10%的变化评价治疗有效量，所述血清生物标记包括但不限于脂质或蛋白质来源的反应性氧产物、还原或氧化型形式的辅酶Q和脂质分子或缀合物。可以通过包括免疫测定法和电泳以及它们与疾病严重性和治疗相关的水平的各种手段测量这些生物标记。
[0131] 在一些实施方案中，治疗有效量可以由NASH的血清生物标记至少10%的变化评价，所述血清生物标记包括但不限于包括但不限于TNF-α、TGF-β或IL-8的细胞因子、骨桥蛋白、或指示NASH存在或 严重性的血清组分的代谢谱(这些包括血清标记和尿标记)。一种或多种这些细胞因子谱，如通过免疫测定法或采用LC质谱的蛋白质组评估所测量，可以提供对疾病活动性的评估和疾病治疗中追踪的标记。
[0132] 在一些实施方案中，治疗有效量可以由NASH的病理生理学谱至少10%的变化评价，所述病理生理学谱包括在肝脏活组织检查时的组织病理学研究结果，包括但不限于肝细胞内脂肪迹象、肝细胞毒性，包括但不限于透明体、炎性细胞浸润(包括但不限于淋巴细胞和各种淋巴细胞亚类和嗜中性粒细胞)、胆管细胞变化、内皮细胞变化、枯否(Kupffer)巨噬细胞数目、胶原蛋白沉积(包括但不限于窦周、门脉和中央胶原蛋白沉积和门脉至中央桥接胶原蛋白沉积)、扭曲正常构造的肝细胞结节、与恶变一致的肝细胞异型性和组合用于NASH严重性分级的各类观察结果的各种量表和方法。这类组织学的评估是NASH诊断的必要条件并且因此整体地与评估疗法相关。
[0133] 在一些实施方案中，治疗有效量可以通过NASH临床表现的至少10%的变化评价，所述临床表现包括但不限于临床检验的阶段和疾病的严重性、疾病的临床体征和症状和医学并发症。NASH的阶段和严重性的临床检验包括但不限于血液学检验(包括但不限于红细胞计数和形态、白细胞计数和分化及形态，血小板计数和形态)、血清或血浆脂类，包括但不限于甘油三酯、胆固醇、脂肪酸、脂蛋白种类和脂质过氧化种类、血清或血浆酶(包括但不限于天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AP)、γ谷氨酰转肽酶(GGTP)、乳酸脱氢酶(LDH)和同工型、指示肝脏合成能力的血清或血浆白蛋白和其他蛋白质、指示肝脏清除代谢副产物的能力的胆红素或其他化合物的血清或血浆水平、血清或血浆电解质(包括但不限于钠、钾、氯化物、钙、磷)、凝血谱，包括但不限于凝血酶时间(PT)、部分促凝血酶原激酶时间(PTT)、特定凝血因子水平、出血时间和血小板功能。临床检验还包括但不限于评估肝脏构造、结构完整性或功能的非侵入性和侵入性检验，包括但不限于计算机化断层成像(CT扫描)、超声法(US)、超声波弹性成像(包括但不限于FibroScan)或其他肝组织弹性测 量法、磁共振扫描或光谱法、经皮针或薄壁细针或经颈静脉肝脏活组织检查和组织学评估(包括但不限于使用亲和染料或免疫组织化学对不同组分染色)、测量肝门-静脉楔压梯度，或可以被开发用于评估肝组织中NASH严重性的其他非侵入性或侵入性检验。
[0134] 在一些实施方案中，治疗有效量可以通过疾病的临床体征和症状的至少10%的变化评价，所述临床体征和症状包括乏力，肌肉重量减轻、蛛形血管瘤、腹痛、腹胀、腹水、胃肠道出血、其他出血并发症、易于淤紫和淤斑、外周性水肿、肝肿大、结节性硬肝(nodular firm liver)、嗜睡、睡眠障碍和昏迷。NASH的医学并发症与肝硬化相关并且包括腹水、外周性水肿、食管及其他胃肠道血管曲张、胃肠道出血、其他出血并发症，消瘦和肌肉消耗、肝肾综合征和肝性脑病。与肝硬化相关的NASH其他并发症是形成足够严重到确保列入肝移植名单或接受肝移植的并发症。
[0135] 在一些实施方案中，治疗有效量在对糖尿病患者中全血糖或血清脂类升高的患者中血清脂类没有任何影响的情况下，对NASH肝病和/或纤维化具有影响。
[0136] 在一些实施方案中，可以通过肝组织或血清中半乳糖凝集素-3水平至少10%的降低评价治疗有效量。
[0137] 在一些实施方案中，可以通过血清中半乳糖凝集素-3水平的变化评价治疗有效量。
[0138] 实施例1：制造半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯类化合物的方法
[0139] 以下仅是产生治疗性多糖的示意性例子，不意在限制本发明。在这种情况下，所产生的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯已经在本申请中标记为GR-MD-02。
[0140] 将苹果果胶USP HM(50kg)溶解并且在水中加热至35-85℃。加入1M HCl或NaOH以将溶液的pH调节到pH5-7并充分混合。将混合在35-85℃设定点继续2小时。根据需要加入1M NaOH或HCl以 将pH再调节到5和7之间。将溶液冷却至30℃。在30℃，将pH调节到5和7之间。
[0141] 将CuSO4加入到调节过pH的果胶溶液中，从而形成1mM的最终CuSO4浓度。将1mM CuSO4溶液在10℃和30℃之间的温度混合30分钟。
[0142] 在30分钟1mM CuSO4混合步骤结束时，加入50克抗坏血酸钠(量经预先校准以获得所需的MW)并混合5到20分钟。加入H2O2，以0.02开始并直至1.0摩尔/kg果胶(对于初始的开始果胶MW预先校准)，并且将H2O2浓度维持4小时(使用定量检验，Sigma，St-Louis)，同时将溶液pH维持在4和7之间。
[0143] 向溶液加入5M NaOH从而形成8和10之间的溶液pH。将调节过pH的溶液混合10-30分钟。随后向调节过pH的溶液加入浓HCl以将溶液的pH调节到4和5之间。一旦调节到pH4和5之间，可以将溶液在2℃和8℃之间保持混合2至24小时。
[0144] 随后将溶液加热到80℃持续30-180分钟，并且向该溶液加入1-5kg过滤助剂(Celite)，并将添加过Celite的溶液搅拌30分钟，随后过滤。弃去过滤产生的固体。
[0146] 向该溶液加入冷的96%乙醇，并且随后将所产生的浆液搅拌30分钟。将溶液过滤并弃去滤液。重复96%乙醇浆液步骤，接着是最终过滤并回收白色至米白色沉淀物。
[0147] 实施例2：治疗脂肪性肝炎小鼠模型的方法
[0148] 该实施例中使用的实验模型是其中诱导糖尿病并施用高脂膳食的小鼠，一个已经称作STAM小鼠的模型。如图1中所示，在出生后立即用单次注射链佐星诱导糖尿病，接着4周后小鼠开始摄食高脂膳食。这是一个经证明的模型，其中小鼠一致地形成NASH伴随肝细胞 脂肪积累、肝细胞毒性迹象、门脉和小叶炎性浸润、窦周纤维化、晚期纤维化伴发结节形成、肝硬化并且最终在一定百分数的动物中形成肝细胞癌。
[0149] 疾病出现的进展是截止5周龄时脂肪肝(FL)，截止7周龄时脂肪性肝炎(NASH)，截止9周龄时纤维化(Fib)，截止13周龄时结节形成(N)，并且一些动物截止16周龄时形成肝细胞癌(HC)(图1)。
[0150] 在每个所示的开始时间，将如实施例1中所述产生的GR-MD-02以60mg/kg剂量每周二次静脉内给予四(4)周。在第6周至第9周给予早期治疗并且在第9周至第12周给予晚期治疗。
[0151] 在图2A-2B中显示了在早期和晚期治疗期后处死的动物的体重变化。与用GR-MD-02治疗的动物相比，对于用溶媒(仅生理盐水)治疗的动物不存在体重差异。这表明了在总体水平，几乎不存在或不存在治疗对动物的毒性效应，并且检测到的任何变化不太可能是由动物的总体健康引起。
[0152] 图3A-3B中显示了治疗组之间的全血葡萄糖的比较。这表明了血糖水平在溶媒对照和GR-MD-02组中均明显升高，同时在早期或晚期治疗方案情况下没有统计差异。小鼠中的正常血糖是大约100mg/dL并且STAM动物中的平均数在700和800mg/dL之间，因此表明了所有动物均患有显性糖尿病。
[0153] 图4显示了正常小鼠和NASH小鼠中肝脏的组织学。用苏木精和伊红(H&E)染色的肝脏切片显示出正常肝脏和NASH肝脏之间的明显差异，NASH肝脏显示出脂肪填充的巨大肝细胞、肝细胞气球样变性和炎性细胞浸润。用天狼猩红染色的肝脏切片突显了I型胶原蛋白的存在。图4显示了正常肝脏中非常少的胶原蛋白，但是在NASH肝脏中局限于中央静脉周围和窦周腔隙中的胶原蛋白增加。该结果表明在这个小鼠模型中获得了NASH病变。
[0154] NFLD活动性评分用来在肝脏组织学切片上评价肝病的严重性，并且给予三个NASH病变方面的评分，所述NASH病变方面包括脂肪肝(0(<5%)、1(5-33%)、2(33-66%)或3(>66%))、肝细胞气球样变 (0(无)、1(少许)或3(许多))以及小叶炎症(0(无病灶)、1(<2个病灶/200x视野)、2(2-4个病灶/200x视野)或3(>4个病灶/200x视野))。
[0155] 总分数是NFLD活动性评分。
[0156] 图5B显示了对早期治疗组中溶媒和GR-MD-02治疗组之间STAM小鼠内肝脏组织学的NFLD活动性评分的比较。溶媒治疗小鼠的评分是平均数5，证实了NASH的存在。当与溶媒动物相比时，在GR-MD-02治疗的STAM小鼠组中存在高度统计显著的NFLD活动性评分降低，平均评分为3并p-值小于0.01。这些数据表明了GR-MD-02减少肝脏中与NASH相关的病变。
[0157] 图6显示了在第6-9周和第9-12周溶媒组和GR-MD-02治疗组之间STAM小鼠的肝脏活组织检查中天狼猩红阳性面积的比较。天狼猩红是对胶原纤维具有特异性亲和力的组织学染料，使它们染成红色，并且因此是用于评估肝脏活组织检查中纤维化程度的定量工具。相对于溶媒对照，在早期治疗组和晚期治疗组中均存在在GR-MD-02治疗动物中所见到的天狼猩红染色明显减少。
[0158] 使用计算机辅助形态测量分析评估来自三个治疗组的每个组的肝脏组织病理学切片上天狼猩红染色的面积。图7A、7B和7C显示了胶原蛋白百分比面积在早期治疗组和晚期治疗组中并在合并两个组评估时明显统计显著地减少。这些结果表明了用GR-MD-02治疗由于降低NASH的活动性而减少小鼠中的肝纤维化。另外，晚期治疗组表明了用GR-MD-02治疗能够逆转NASH小鼠中的纤维化(图7B)。
[0159] 该数据进一步表明了在对全血糖不存在作用的情况下，所测试的治疗性化合物的功效对NASH肝病和纤维化具有作用。相对于对照组，治疗组中的血糖不降低，表明可以在没有有效治疗糖尿病的情况下治疗肝病。
[0160] 在肝脏中沉积胶原蛋白的原代细胞是活化的星状细胞。NASH中的炎性浸润活化静息星状细胞，所述星状细胞在其活化状态下分泌形成与疾病相关的纤维组织的胶原蛋白。图8A显示了蛋白质α-平滑肌肌动蛋白的免疫组织化学染色，α-平滑肌肌动蛋白是活化的星状细胞 的标记。用GR-MD-02治疗导致α-平滑肌肌动蛋白明显减少，这表明了活化的星状细胞明显减少(图8B)。这是采用治疗减少胶原蛋白沉积的机制之一。
[0161] 图9A显示了在溶媒治疗和GR-MD-02治疗的实验组的肝组织中半乳糖凝集素-3蛋白的免疫组织化学染色。在溶媒治疗的动物中的巨噬细胞内主要存在半乳糖凝集素-3的高水平表达。用GR-MD-02治疗导致肝脏中与疾病病变改善相关的半乳糖凝集素-3的明显减少(图9B)。
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