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一种非人灵长类脑卒中模型研发方法

阅读：408发布：2020-06-28

专利汇可以提供一种非人灵长类脑卒中模型研发方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及临床科学研究技术领域，且公开了准备实验材料：18gage的针头、5F动脉套管、4F动脉造影导管、0.25mm动脉造影微导丝、数字减影血管造影 (DSA)系统、MRI系统、核磁共振兼容呼吸机、核磁共振兼容生理信号检测系统。该非人灵长类脑卒中模型研发方法，通过血管内弹簧圈栓塞法精准制备了稳定的食蟹猴脑缺血再灌注动物模型，实验动物梗死面积适中且未出现再灌注后梗死区出血转化，动物能长期存活，具有相应神经功能缺损症状并通过长期影像学及行为的评估证明了模型的稳定性，采用该方法可以精确控制卒中的部位以及程度，且实验动物能够保持稳定的临床症状，因此，此模型适合进行脑卒中新疗法和新药物的安全性和有效性评估。，下面是一种非人灵长类脑卒中模型研发方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种非人灵长类脑卒中模型研发方法，其特征在于，包括以下步骤：
A1.准备实验材料：18gage的针头、5F动脉套管、4F动脉造影导管、0.25mm动脉造影微导丝、数字减影血管造影(DSA)系统、MRI系统、核磁共振兼容呼吸机、核磁共振兼容生理信号检测系统；
A2.准备实验动物：五只青壮年食蟹猴，雄性，年龄6-8岁，体重5-6kg、五只老年食蟹猴，雄性，年龄大于10岁，体重大于10kg；
A3.准备实验动物术前健康和基线检测与检查(baseline profiling check)，实验代谢参数，肝肾功能，CBC；
采集额外的整份血清样本并保存，为了后期的生物标记分析；
神经学基线评估(Baseline neurological assessment)；
A4.局限性脑缺血模型的建立方法:选择6-9岁体重相近的食蟹猴，实验动物备皮消毒，静脉麻醉后，采取头侧位，外导尿，给予心电血压监护，必要时面罩给氧，采用改良的Seldinger’s法穿刺右侧股动脉，置入4F动脉鞘，经鞘插入4F导管至右侧颈总动脉，行右侧颈总动脉正侧位造影，之后沿4F导管插入微导管及导丝至右侧大脑中动脉M1段中外1/3，造影确认位置准确后置入弹簧圈(2X6mm)致密栓塞2小时后退出弹簧圈并在特定时间点进行影像学、行为学、血液生化检查评估；
A5.术后护理
在手术后监测手术动物肛温，血压和心率48个小时，动物呼吸道要维持通畅的状态直到动物完全醒来；
在术后介入设备要取出，按压穿刺点30分钟，然后用消毒绷带进行加压包扎；
镇痛药物：注射叔丁啡0.01-0.03mg/ml；
抗生素：由于持续的外露伤口手术操作，在术前和术后都需要根据兽医的指导进行给药，药物选择需要有效对抗常见的能引起伤口感染的病原菌，例如：头孢菌素，术前半小时，术后5-7天，在这种情况下：头孢哌酮钠100mg/kg,bid；
液体供给：在兽医的指导对动物进行液体供给，动物恢复过程需要在恢复室进行，在此期间IV导管会保留，是为了液体供给，如果动物出现缺水症状，需要给动物每次静脉滴注
100ml盐溶液，根据MRI显示的动物受伤程度，脱水治疗是为了降低颅内压；
如果动物出现癫痫样式的痉挛，要给动物抗癫痫药；
饮食：动物将接受补液疗法，直到恢复正常饮食；
A6.术后跟进
神经学的评估：
在T2-成像之前，在MCAO术后，每只动物都会根据常用的非人灵长类动物神经学评分量化表格得到评估，会有两个独立的在神经功能缺陷评估方面有经验的观察者各自评分，这个表格着重于运动机能，并且也会考虑行为变化(精神状态)和视觉的和脑神经的损伤，得分较低代表糟糕的功能产出；
A7.MRI检查
磁共振血管造影检查会在脑局部缺血后一个小时、再灌注后两个小时，以及MCAO和再灌注手术后24小时，在再灌注一个小时后进行T2液体衰减翻转恢复和磁共振弥散张量成像来观察局部缺血损伤和再灌注损伤，因为栓塞量是通过T2/Flair影像来衡量的，T2/Flair影像与组织学的评价具有高度相关性，梗塞损伤的评估完全基于T2影像。

说明书全文

一种非人灵长类脑卒中模型研发方法

技术领域

[0001] 本发明涉及临床科学研究技术领域，具体为一种非人灵长类脑卒中模型研发方法。

背景技术

[0002] 脑卒中已经成为全球第二大常见死因，其造成的死亡和残疾为全世界带来了沉重的经济负担，根据2014年全球卒中概貌分析显示，卒中发病率居世界首位，死亡率居世界第二，约有3/4的卒中患者会留有不同程度的后遗症，缺血性脑卒中约占卒中的60.3-80.5％。

[0003] 非人灵长类动物由于解剖结构、发育及功能上与人类神经系统高度相似，因此利用猴卒中模型开展卒中治疗研究，是实现从较成熟的啮齿类动物模型向未知的人类临床应用转化中必不可少的一步，但目前国内外尚缺乏标准的、被广泛接受的灵长类脑卒中模型，国内外报道的灵长类动物模型普遍存在实验动物存活率低，能长期存活的动物往往没有相应的神经功能缺损症状，无法进行后续的评估，这是因为目前常用的建模方法如血栓栓塞法、球囊栓塞法、线栓法、结扎法、光化学法等对梗死面积的可控性较差，梗死面积过大动物缺血反应重，死亡率高，梗死面积小，虽能长期存活却症状轻微或没有明显症状，或部分建模方法与疾病本身的病理生理改变相差较大，并且目前的研究由于动物存活率低，几乎没有纳入影像学及行为学的长期评估，尤其是行为学的评估。

发明内容

[0004] (一)解决的技术问题

[0005] 针对现有技术的不足，本发明提供了一种非人灵长类脑卒中模型研发方法，解决了无法对功能改善情况进行长期的评估的问题。

[0006] (二)技术方案

[0007] 为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种非人灵长类脑卒中模型研发方法，包括以下步骤：

[0008] A1.准备实验材料：18gage的针头、5F动脉套管、4F动脉造影导管、0.25mm动脉造影微导丝、数字减影血管造影(DSA)系统、MRI 系统、核磁共振兼容呼吸机、核磁共振兼容生理信号检测系统。

[0009] A2.准备实验动物：五只青壮年食蟹猴，雄性，年龄6-8岁，体重5-6kg、五只老年食蟹猴，雄性，年龄大于10岁，体重大于10kg。

[0010] A3.准备实验动物术前健康和基线检测与检查(baseline profiling check)，[0011] 实验代谢参数，肝肾功能，CBC。

[0012] 采集额外的整份血清样本并保存，为了后期的生物标记分析。

[0013] 神经学基线评估(Baseline neurological assessment)。

[0014] A4.局限性脑缺血模型的建立方法:选择6-9岁体重相近的食蟹猴，实验动物备皮消毒，静脉麻醉后，采取头侧位，外导尿，给予心电血压监护，必要时面罩给氧，采用改良的Seldinger’s法穿刺右侧股动脉，置入4F动脉鞘，经鞘插入4F导管至右侧颈总动脉，行右侧颈总动脉正侧位造影，之后沿4F导管插入微导管及导丝至右侧大脑中动脉M1段中外1/3，造影确认位置准确后置入弹簧圈(2X6mm) 致密栓塞2小时后退出弹簧圈并在特定时间点进行影像学、行为学、血液生化检查评估。

[0015] A5.术后护理

[0016] 在手术后监测手术动物肛温，血压和心率48个小时，动物呼吸道要维持通畅的状态直到动物完全醒来。

[0017] 在术后介入设备要取出，按压穿刺点30分钟，然后用消毒绷带进行加压包扎。

[0018] 镇痛药物：注射叔丁啡0.01-0.03mg/ml。

[0019] 抗生素：由于持续的外露伤口手术操作，在术前和术后都需要根据兽医的指导进行给药，药物选择需要有效对抗常见的能引起伤口感染的病原菌，例如：头孢菌素，术前半小时，术后5-7天，在这种情况下：头孢哌酮钠100mg/kg,bid。

[0020] 液体供给：在兽医的指导对动物进行液体供给，动物恢复过程需要在恢复室进行，在此期间IV导管会保留，是为了液体供给，如果动物出现缺水症状，需要给动物每次静脉滴注100ml盐溶液，根据 MRI显示的动物受伤程度，脱水治疗是为了降低颅内压。

[0021] 如果动物出现癫痫样式的痉挛，要给动物抗癫痫药。

[0022] 饮食：动物将接受补液疗法，直到恢复正常饮食。

[0023] A6.术后跟进

[0024] 神经学的评估：

[0025] 在T2-成像之前，在MCAO术后，每只动物都会根据常用的非人灵长类动物神经学评分量化表格得到评估，会有两个独立的在神经功能缺陷评估方面有经验的观察者各自评分，这个表格着重于运动机能，并且也会考虑行为变化(精神状态)和视觉的和脑神经的损伤，得分较低代表糟糕的功能产出。

[0026] A7.MRI检查

[0027] 磁共振血管造影检查会在脑局部缺血后一个小时、再灌注后两个小时，以及MCAO和再灌注手术后24小时，在再灌注一个小时后进行 T2液体衰减翻转恢复和磁共振弥散张量成像来观察局部缺血损伤和再灌注损伤，因为栓塞量是通过T2/Flair影像来衡量的，T2/Flair 影像与组织学的评价具有高度相关性，梗塞损伤的评估完全基于T2 影像。

[0028] (三)有益效果

[0029] 与现有技术相比，本发明提供了一种非人灵长类脑卒中模型研发方法，具备以下有益效果：

[0030] 通过血管内弹簧圈栓塞法精准制备了稳定的食蟹猴脑缺血再灌注动物模型，实验动物梗死面积适中且未出现再灌注后梗死区出血转化，动物能长期存活，具有相应神经功能缺损症状并通过长期影像学及行为的评估证明了模型的稳定性，采用该方法可以精确控制卒中的部位以及程度，且实验动物能够保持稳定的临床症状，因此，此模型适合进行脑卒中新疗法和新药物的安全性和有效性评估。附图说明

[0031] 图1为本发明MCAO术后两个小时示意图；

[0032] 图2为本发明MCAO术后一周示意图。

具体实施方式

[0033] 下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0034] 一种非人灵长类脑卒中模型研发方法，包括以下步骤：

[0035] A1.准备实验材料：18gage的针头、5F动脉套管、4F动脉造影导管、0.25mm动脉造影微导丝、数字减影血管造影(DSA)系统、MRI 系统、核磁共振兼容呼吸机、核磁共振兼容生理信号检测系统。

[0036] A2.准备实验动物：五只青壮年食蟹猴，雄性，年龄6-8岁，体重5-6kg、五只老年食蟹猴，雄性，年龄大于10岁，体重大于10kg。

[0037] A3.准备实验动物术前健康和基线检测与检查(baseline profiling check),[0038] 实验代谢参数，肝肾功能，CBC。

[0039] 采集额外的整份血清样本并保存，为了后期的生物标记分析。

[0040] 神经学基线评估(Baseline neurological assessment)。

[0041] A4.局限性脑缺血模型的建立方法:选择6-9岁体重相近的食蟹猴，实验动物备皮消毒，静脉麻醉后，采取头侧位，外导尿，给予心电血压监护，必要时面罩给氧，采用改良的Seldinger’s法穿刺右侧股动脉，置入4F动脉鞘，经鞘插入4F导管至右侧颈总动脉，行右侧颈总动脉正侧位造影，之后沿4F导管插入微导管及导丝至右侧大脑中动脉M1段中外1/3，造影确认位置准确后置入弹簧圈(2X6mm) 致密栓塞2小时后退出弹簧圈并在特定时间点进行影像学、行为学、血液生化检查评估。

[0042] A5.术后护理

[0043] 在手术后监测手术动物肛温，血压和心率48个小时，动物呼吸道要维持通畅的状态直到动物完全醒来。

[0044] 在术后介入设备要取出，按压穿刺点30分钟，然后用消毒绷带进行加压包扎。

[0045] 镇痛药物：注射叔丁啡0.01-0.03mg/ml。

[0046] 抗生素：由于持续的外露伤口手术操作，在术前和术后都需要根据兽医的指导进行给药，药物选择需要有效对抗常见的能引起伤口感染的病原菌，例如：头孢菌素，术前半小时，术后5-7天，在这种情况下：头孢哌酮钠100mg/kg,bid。

[0047] 液体供给：在兽医的指导对动物进行液体供给，动物恢复过程需要在恢复室进行，在此期间IV导管会保留，是为了液体供给，如果动物出现缺水症状，需要给动物每次静脉滴注100ml盐溶液，根据 MRI显示的动物受伤程度，脱水治疗是为了降低颅内压。

[0048] 如果动物出现癫痫样式的痉挛，要给动物抗癫痫药。

[0049] 饮食：动物将接受补液疗法，直到恢复正常饮食。

[0050] A6.术后跟进

[0051] 神经学的评估：

[0052] 在T2-成像之前，在MCAO术后，每只动物都会根据常用的非人灵长类动物神经学评分量化表格得到评估。会有两个独立的在神经功能缺陷评估方面有经验的观察者各自评分，这个表格着重于运动机能，并且也会考虑行为变化(精神状态)和视觉的和脑神经的损伤，得分较低代表糟糕的功能产出。

[0053] A7.MRI检查

[0054] 磁共振血管造影检查会在脑局部缺血后一个小时、再灌注后两个小时，以及MCAO和再灌注手术后24小时，在再灌注一个小时后进行 T2液体衰减翻转恢复和磁共振弥散张量成像来观察局部缺血损伤和再灌注损伤，因为栓塞量是通过T2/Flair影像来衡量的，T2/Flair 影像与组织学的评价具有高度相关性，梗塞损伤的评估完全基于T2 影像。

[0055] 本发明的有益效果是：通过血管内弹簧圈栓塞法精准制备了稳定的食蟹猴脑缺血再灌注动物模型，实验动物梗死面积适中且未出现再灌注后梗死区出血转化，动物能长期存活，具有相应神经功能缺损症状并通过长期影像学及行为的评估证明了模型的稳定性，采用该方法可以精确控制卒中的部位以及程度，且实验动物能够保持稳定的临床症状，因此，此模型适合进行脑卒中新疗法和新药物的安全性和有效性评估。

[0056] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

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