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固体花菁染料

阅读：370发布：2023-02-26

专利汇可以提供固体花菁染料专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本申请提供式I化合物的多晶型物及其制备方法，该化合物是2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸基-1-(4-磺酸基丁基)吲哚-2-亚基)-亚乙基)-2-苯氧基-环己-1-烯-1-基)-乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸盐。还提供器官成像的方法，包括向受试者施用诊断有效量的包含式I之多晶型物的组合物。在一个实施方案中，所述器官包括肾、膀胱、输尿管、尿道、胆管、肝和胆囊中的一种或多种。，下面是固体花菁染料专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种固体形式，其是式I的形式A-13：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.8110、11.9583和19.3205°2θ(±
0.1°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK 辐射获得的。
2.根据权利要求1所述的固体形式，其具有图15所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表15中列出。
3.一种固体形式，其是式I的形式A-1：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在4.2561、9.6141、12.8879、18.7236和
20.7367°2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
4.根据权利要求1所述的固体形式，其具有图1所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表
1中列出。
5.一种固体形式，其是式I的形式A-2：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.0201、21.3092、21.9298和16.4226°
2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
6.根据权利要求5所述的固体形式，所述固体形式具有图2所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表2中列出。
7.一种固体形式，其是式I的形式A-3：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在5.4582、8.9758、15.5042、18.0678°2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
8.根据权利要求7所述的固体形式，所述固体形式具有图3所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表3中列出。
9.一种固体形式，其是式I的形式A-4：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在4.6095、6.1473、11.9990、12.4243、
16.4064和20.4115°2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
10.根据权利要求9所述的固体形式，所述固体形式具有图4所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表4中列出。
11.一种固体形式，其是式I的形式A-5：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在5.0928、5.3751、7.1146和19.2858°2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
12.根据权利要求11所述的固体形式，所述固体形式具有图5所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表5中列出。
13.一种固体形式，其是式I的形式A-6：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在11.8430、4.7214、5.6359、10.7093、
11.8430、17.1609和18.1502°2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
14.根据权利要求13所述的固体形式，所述固体形式具有图6所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表6中列出。
15.一种固体形式，其是式I的形式A-7：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.1726、21.0470、11.9862和5.9858°2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的，其他峰出现在表7中。
16.根据权利要求15所述的固体形式，所述固体形式具有图7所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰分别在表7中列出。
17.一种固体形式，其是式I的形式A-7：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.0630、19.8202、19.1703、19.0409、
12.9775和9.5680°2θ(±0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
18.根据权利要求17所述的固体形式，所述固体形式具有图8所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰分别在表8中列出。
19.一种固体形式，其是式I的形式A-7：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.0557、17.4402和12.8685°2θ(±
0.1°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
20.根据权利要求19所述的固体形式，所述固体形式具有图9所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰分别在表9中列出。
21.一种固体形式，其是式I的形式A-8：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.6831、20.9865和19.0394°2θ(±
0.1°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
22.根据权利要求21所述的固体形式，所述固体形式具有图10所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表10中列出。
23.一种固体形式，其是式I的形式A-9：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.6988、15.2962、13.9016和13.7110°
2θ(±0.1°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
24.根据权利要求23所述的固体形式，所述固体形式具有图11所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表11中列出。
25.一种固体形式，其是式I的形式A-10：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.5520、21.0470、21.5370和19.0628°
2θ(±0.1°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
26.根据权利要求25所述的固体形式，所述固体形式具有图12所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表12中列出。
27.一种固体形式，其是式I的形式A-11：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰21.2861、20.7567、14.2428和5.3149°2θ(±0.1°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
28.根据权利要求27所述的固体形式，所述固体形式具有图13所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表13中列出。
29.一种固体形式，其是式I的形式A-12：
其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰21.0467、20.5000和4.1778°2θ(±0.1°
2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。
30.根据权利要求29所述的固体形式，所述固体形式具有图14所示的X射线粉末衍射图谱，其中峰在表14中列出。
31.一种用于肾输尿管成像的方法，所述方法包括：
向受试者施用包含诊断有效量的式I的多晶型物的组合物：
其中所述多晶型物选自A-1至A-13，其中所述施用在选自以下的一个或多个时间执行：
在手术之前、手术期间、手术之后、以及它们的组合，
将所述受试者的肾系统的组织暴露于电磁辐射；以及
检测来自化合物的荧光辐射。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述施用是静脉内进行的。
33.根据权利要求31-32中任一项所述的方法，其中药学上可接受的阳离子选自由钾或钠组成的组。
34.根据权利要求31-33中任一项所述的方法，其中所述组合物包含药学上可接受的载体，所述载体选自以下组中：生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗或0.5N盐水溶液以及磷酸盐缓冲溶液。
35.根据权利要求31-34中任一项所述的方法，其中所述施用在大约3000.0μg/kg至大约1500.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
36.根据权利要求31-35中任一项所述的方法，其中所述施用在大约1500.0μg/kg至大约1000.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
37.根据权利要求31-36中任一项所述的方法，其中所述施用在大约1000.0μg/kg至大约500.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
38.根据权利要求31-37中任一项所述的方法，其中所述施用在大约500.0μg/kg至大约
170.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
39.根据权利要求31-38中任一项所述的方法，其中所述施用在大约170.0μg/kg至大约
120.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
40.根据权利要求31-39中任一项所述的方法，其中所述施用在大约120.0μg/kg至大约
60.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
41.根据权利要求31-37中任一项所述的方法，其中所述施用在大约60.0μg/kg至大约
30.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
42.根据权利要求31-37中任一项所述的方法，其中所述施用在大约30.0μg/kg至大约
1.0μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
43.根据权利要求31-37中任一项所述的方法，其中所述施用在大约1.0μg/kg至大约
0.1μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
44.根据权利要求31-37中任一项所述的方法，其中所述施用在大约0.1μg/kg至大约
0.01μg/kg范围的诊断有效量的所述化合物下进行。
45.根据权利要求31-40中任一项所述的方法，其进一步包括在施用后的时间段测量保留在所述受试者的肾系统的所述组织处的所施用的化合物的荧光强度。
46.根据权利要求31-45中任一项所述的方法，其中测量的所施用的化合物的荧光强度是施用后大约24小时的背景荧光。
47.根据权利要求31至46中任一项所述的方法，其中所述手术选自腹腔镜手术、机器人手术、机器人腹腔镜手术和开放式手术。
48.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中在施用后大约多达六小时，与测量的所施用的化合物在脾、肠、心脏、肺、肌肉或其组合中的一个或多个中的荧光强度相比，测量的所施用的化合物的荧光强度在肾中更高。
49.一种药物组合物，其包含诊断成像量的式I的多晶型物，和药学上可接受的载体。
50.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体包括盐水。
51.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述多晶型物是权利要求1-30中任一项的多晶型物。
52.根据权利要求49-51中任一项所述的药物组合物，其中所述配制包括具有糖或糖醇和有机酸的冻干团块的重构。
53.根据权利要求52所述的药物组合物，其中所述酸是选自以下组中的成员：柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、甲酸、抗坏血酸、富马酸、葡糖酸、琥珀酸、马来酸、己二酸及其任何混合物。
54.根据权利要求52所述的药物组合物，其中所述糖或所述糖醇是选自以下组中的成员：赤藓糖醇、塔格糖、蔗糖、果糖、葡萄糖、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、甘草皂苷、马里醇、麦芽糖、乳糖、木糖、阿拉伯糖、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、海藻酮糖、核糖及其任何混合物。
55.一种试剂盒，其包括权利要求49-51中任一项所述的药物组合物和说明手册。
56.一种制备选自式I的形式A-1至A-13的化合物的方法：
其中所述方法包括：
将式I的形式溶解在溶剂体系中以产生混合物；
任选地对所述混合物种晶；
加入反溶剂以产生浆料；以及
过滤最终浆料以产生式I的形式A-1至A-13的所述化合物。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述溶剂体系包含有机溶剂和水。
58.根据权利要求56所述的方法，其中所述溶剂体系包含约5％v/v至约95％v/v的有机溶剂。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述溶剂体系包含约5％v/v至约50％v/v的有机溶剂。
60.根据权利要求58所述的方法，其中所述溶剂体系包含约50％v/v至约80％v/v的有机溶剂。
61.根据权利要求56所述的方法，其中所述溶剂体系包含约5％v/v至约95％v/v的水。
62.根据权利要求56所述的方法，其中所述溶剂体系包含约5％v/v至约50％v/v的水。
63.根据权利要求56所述的方法，其中所述溶剂体系包含约50％v/v至约80％v/v的水。
64.根据权利要求57所述的方法，其中所述有机溶剂是选自丙酮和C1-C6烷醇组成的组的成员。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述C1-C6烷醇是选自以下组中的成员：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇以及它们的混合物。
66.根据权利要求56-65中任一项所述的方法，其中所述反溶剂是有机溶剂。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述有机溶剂选自以下组中：丙酮和C1-C6烷醇。
68.根据权利要求56-67中任一项所述的方法，其中溶解式I的形式包括选自以下组中的基本上纯形式的式I的化合物：结晶、无定形、非晶体、固体、各形式的混合物或其任意组合。
69.根据权利要求56-68中任一项所述的方法，其中溶解式I的形式包括将所述样品从约25℃加热至约70℃。
70.根据权利要求69所述的方法，其中溶解式I的形式包括将所述样品从约35℃加热至约70℃。
71.根据权利要求70所述的方法，其中溶解式I的形式包括将所述样品从约40℃加热至约60℃。
72.根据权利要求56-71中任一项所述的方法，其中在式I的形式溶解后，冷却所述混合物。
73.根据权利要求56-72中任一项所述的方法，其中所产生的化合物是选自形式A1至形式A13组成的组的成员。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所产生的化合物是形式A13。

说明书全文

固体花菁染料

[0001] 相关申请案的交叉引用

[0002] 本申请要求于2017年4月11日递交的第62/484,242号美国临时专利申请的优先权，其公开内容出于所有目的通过引用整体并入本文。

背景技术

[0003] 使用花菁染料的荧光成像是快速发展的领域，以支持外科手术导航并提供解剖结构的实时照明。700nm-900nm范围内的发射可以避免组织自动荧光的干扰，并且可以穿透大约1cm的组织，如Adamsdes等人的“Comparison of visible and near-infrared wavelength-excitable fluorescent dyes for molecular imaging of cancer”J Biomed Opt.2007 12(2),024017；和Keereweer等人的“Optical Image-Guided Cancer Surgery:Challenges and Limitations”Clin Cancer Res.2013 19(14),3745-3754中所述。

[0004] 荧光成像的另一个应用是用于胆解剖学(包括胆道和胆囊管)的实时手术中成像。目前的方法通常在手术前通过胆内注射或静脉内注射来使用吲哚菁绿(ICG)染料。然而，研究已经显示在使用ICG染料时有明显的问题。这些包括排泄到胆汁内的不良效率和动力学(Tanaka等人的“Real-time intraoperative assessment of the extrahepatic bile ducts in rats and pigs using invisible near-infrared fluorescent light”Surgery 2008 144(1)39-48)以及与患者的不良反应(Benya等人的“Adverse reactions to indocyanine green:a case report and a review of the literature”Cathet Cardiovasc Diagn.1989 17(4)231-233)。

[0005] 存在对敏感组合物和用以非侵入性地检测和测量内靶的方法的需要。具体地，存在对用以检测对各种器官的损伤的改进的稳定花菁染料的需要，该损伤可在腹腔镜或机器人手术期间出现。本发明满足这些和其它需要。

发明内容

[0006] 在一个实施方案中，本公开提供一种固体形式，该固体形式是式I的形式A-1至A-13：

[0007]

[0008] 在某些方面，式I的固体形式是具有图1A所示的 X射线粉末衍射图谱的形式A-1，其中峰在表1A中列出。

[0009] 在某些方面，式I的固体形式是具有图1B所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-1，其中峰在表1B中列出。

[0010] 在某些方面，式I的固体形式是具有图2所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-2，其中峰在表2中列出。

[0011] 在某些方面，式I的固体形式是具有图3所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-3，其中峰在表3中列出。

[0012] 在某些方面，式I的固体形式是具有图4所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-4，其中峰在表4中列出。

[0013] 在某些方面，式I的固体形式是具有图5所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-5，其中峰在表5中列出。

[0014] 在某些方面，式I的固体形式是具有图6所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-6，其中峰在表6中列出。

[0015] 在某些方面，式I的固体形式是具有图7、8和9所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-7，其中峰分别在表7-9中列出。

[0016] 在某些方面，式I的固体形式是具有图10所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-8，其中峰在表10中列出。

[0017] 在某些方面，式I的固体形式是具有图11所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-9，其中峰在表11中列出。

[0018] 在某些方面，式I的固体形式是具有图12所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-10，其中峰在表12中列出。

[0019] 在某些方面，式I的固体形式是具有图13所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-11，其中峰在表13中列出。

[0020] 在某些方面，式I的固体形式是具有图14所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-12，其中峰在表14中列出。

[0021] 在某些方面，式I的固体形式是具有图15所示的X射线粉末衍射图谱的形式A-13，其中峰在表15中列出。

[0022] 在某些方面，本文所述的多晶型物基本上是纯的。多晶型物可包含式I的化合物，基本上由式I的化合物组成，或由式I的化合物组成。在其它方面，多晶型物可以是多晶型物或共晶体的混合物，或以各种比例的结晶和无定形形式的混合物。

[0023] 在另一个实施方案中，本公开提供一种用于肾输尿管成像的方法，该方法包括：向受试者施用包含诊断有效量的式I的多晶型物的组合物：

[0024]

[0025] 其中所述多晶型物选自A-1至A-13，其中施用在选自以下的一个或多个时间执行：在手术之前、手术期间、手术之后、以及它们的组合；将所述受试者的肾系统的组织暴露于电磁辐射(例如红外光)；以及检测来自化合物的荧光辐射。

[0026] 在某些方面，所述施用是静脉内进行的。

[0027] 在一个实施方案中，本公开提供一种药物组合物，其包含诊断成像量的式I的多晶型物，和药学上可接受的载体。

[0028] 在某些方面，所述多晶型物是本文所述的任何多晶型物。

[0029] 在又一个实施方案中，本公开提供包含药物组合物的试剂盒，该试剂盒包括本文所述的多晶型物和说明手册。

[0030] 在又一个实施方案中，本发明提供一种制备选自式I的形式A-1至A-13的化合物的方法：

[0031]

[0032] 其中该方法包括：

[0033] 将基本上纯形式的式I溶解在溶剂体系中以产生混合物；

[0034] 任选地对该混合物种晶；

[0035] 加入反溶剂以产生浆料；以及

[0036] 过滤最终浆料以产生式I的形式A-1至A-13的化合物。

[0037] 当与随后的详细描述和附图一起阅读时，其他实施方案、方面和目的将变得更好理解。

附图说明

[0038] 图1A显示式I的固体形式--形式A-1的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱1。

[0039] 图1B显示式I的固体形式--形式A-1-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱1。

[0040] 图2显示式I的固体形式--形式A-2-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱2。

[0041] 图3显示式I的固体形式--形式A-3-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱3。

[0042] 图4显示式I的固体形式--形式A-4-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱4。

[0043] 图5显示式I的固体形式--形式A-5-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱5。

[0044] 图6显示式I的固体形式--形式A-6-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱6。

[0045] 图7显示式I的固体形式--形式A-7-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱7。

[0046] 图8显示式I的固体形式--形式A-7-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱7。

[0047] 图9显示式I的固体形式--形式A-7-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱7。

[0048] 图10显示式I的固体形式--形式A-8-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱8。

[0049] 图11显示式I的固体形式--形式A-9-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱9。

[0050] 图12显示式I的固体形式--形式A-10-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱10。

[0051] 图13显示式I的固体形式--形式A-11-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱11。

[0052] 图14显示式I的固体形式--形式A-12-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱12。

[0053] 图15显示式I的固体形式--形式A-13-的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱13。

[0054] 图16显示式I的固体形式--形式A-1的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱1，其在形式A-11，图谱11上方出现。

[0055] 图17显示式I的固体形式--形式A-11的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，图谱11，其在形式A-1，图谱1上方出现。

[0056] 图18A将图1A中的图谱1与图1B中的图谱1进行比较。

[0057] 图18B将图1A中的图谱1与图1B中的图谱1进行比较。

具体实施方式

[0058] I.定义

[0059] 本文所使用的术语“一”、“一个”或“所述(该)”不仅包括具有一个成员的方面，而且还包括具有多于一个成员的方面。例如，包括使用本文所述的化合物的成像方法的实施方案将包括其中该方法包括使用本文所述的两种或更多种化合物的方面。

[0060] 本文所使用的用于修饰数值的术语“大约”或“约”表示围绕该值的限定范围。如果“X”是该值，则“大约X”或“约X”将表示0.9X至1.1X的值，更优选地表示0.95X至1.05X的值。任何对“大约X”或“约X”的引用具体地表示至少值X、0.95X、0.96X、0.97X、0.98X、0.99X、
1.01X、1.02X、1.03X、1.04X和1.05X。例如，“大约X”或“约X”旨在教导和提供对于例如“0.98X”的权利要求限制的书面描述支持。

[0061] 当数量“X”仅允许整数值(例如，“X个碳”)且X为最多15时，“约X”表示(X-1)至(X+1)。在这种情况下，如本文所使用的“约X”具体地表示至少值X、X-1和X+1。如果X为至少16，则将0.90X和1.10X的值四舍五入到最接近的整数值以定义范围的边界。

[0062] 当修饰词“大约”或“约”用来描述数值范围的开始时，它适用于该范围的两端。因此，“大约700至850nm”相当于“大约700nm至大约850nm”。因此，“约700至850nm”相当于“约700nm至约850nm”。当“大约”或“约”用来描述一组值的第一值时，其用于该组中的所有值。
因此，“约680、700或750nm”相当于“约680nm、约700nm或约750nm”。

[0063] 本文所使用的“平衡电荷”包括在标准生理条件下化合物及其相关反离子的净电荷为零的条件。为了达到平衡电荷，本领域技术人员将理解，在平衡吲哚啉鎓环的+1电荷的第一附加磺酸基之后，必须添加阳离子反离子(例如，I族金属诸如钠的阳离子)以平衡来自附加磺酸基的负电荷。类似地，必须添加阴离子反离子以平衡任何另外的阳离子基团(例如，生理条件下最基本的氨基)。

[0064] II.实施方案

[0065] 虽然在本文中示出和描述了本公开的优选实施方案，但是这样的实施方案仅以示例的方式提供，并且不意图以其它方式限制本发明的范围。可以在实践它们时采用本公开的所描述的实施方案的各种替代方案。

[0066] 花菁染料的一些优点包括：(1)花菁染料强烈吸收和发射荧光；(2)许多花菁染料在荧光显微镜下不会快速光漂白；(3)许多结构和合成工序是可用的，并且染料类型是通用的；并且(4)花菁染料相对小(典型的分子量为约1,000道尔顿)，因此它们不会引起明显的空间干扰。

[0067] 通常根据Hamer,F.M.,Cyanine Dyes and Related Compounds,Weissberger,Mass.,ed.Wiley Interscience,N.Y.1964中教导的工序制备花菁染料。例如，美国专利号6,663,847、6,887,854、6,995,274、7,504,089、7,547,721、7,597,878和8,303,936()描述了各种花菁染料的合成机制，这些文献通过引用并入本文。

[0068] 含有反应性官能团的其他花菁染料是已知的。例如，美国专利号4,337,063、4,404,289和4,405,711(通过引用并入本文)描述了具有N-羟基丁二酰亚胺活性酯基的各种花菁染料的合成。美国专利申请号4,981,977(通过引用并入本文)描述了具有羧酸基团的花菁染料的合成。美国专利申请号5,268,486(通过引用并入本文)描述了一种用于制备芳基磺酸酯花菁染料的方法。美国专利申请号6,027,709(通过引用并入本文)描述了用于制备具有亚磷酰胺基团的花菁染料。美国专利号6,048,982(通过引用并入本文)公开了制备具有反应性基团的花菁染料的方法，该反应性染料选自以下组中：异硫氰酸酯、异氰酸酯、亚磷酰胺、单氯三嗪、二氯三嗪、单卤素或二卤素取代的吡啶、单卤素或二卤素取代的二嗪、氮丙啶、磺酰基卤、酰基卤、羟基琥珀酰亚胺酯、羟基磺基琥珀酰亚胺酯、亚氨基酯、乙二醛和醛。

[0069] 在一个实施方案中，本公开提供一种固体形式，该固体形式是式I的形式A-1：

[0070]

[0071] 其具有图1A所示的X射线粉末衍射，图谱1。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在4.2561、9.6141、12.8879、18.7236和20.7367°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表1A中。

[0072] 在某些方面，本公开提供一种固体形式，该固体形式是式I的形式A-1。式I的形式A-1具有图1B所示的X射线粉末衍射图谱，图谱1。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在4.29、9.60、12.93、18.74和20.80°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表1B中。

[0073] 在某些方面，式I的固体形式是具有图2所示的X射线粉末衍射图谱--图谱2的形式A-2。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.0201、21.3092、21.9298和16.4226°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表2中。

[0074] 在某些方面，式I的固体形式是具有图3所示的X射线粉末衍射图谱--图谱3的形式A-3。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在5.4582、8.9758、15.5042、18.0678°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表3中。

[0075] 在某些方面，式I的固体形式是具有图4所示的X射线粉末衍射图谱--图谱4的形式A-4。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在4.6095、6.1473、11.9990、12.4243、16.4064和20.4115°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表4中。

[0076] 在某些方面，式I的固体形式是具有图5所示的X射线粉末衍射图谱--图谱5的形式A-5。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在5.0928、5.3751、7.1146和19.2858°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表5中。

[0077] 在某些方面，式I的固体形式是具有图6所示的X射线粉末衍射图谱--图谱6的形式A-6。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在11.8430、4.7214、5.6359、10.7093、11.8430、17.1609和18.1502°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表6中。

[0078] 在某些方面，式I的固体形式是具有图7所示的X射线粉末衍射图谱--图谱7的形式A-7。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.1726、21.0470、11.9862和5.9858°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表7中。

[0079] 在某些方面，式I的固体形式是具有图8所示的X射线粉末衍射图谱--图谱7的形式A-7，实施例2。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.0630、19.8202、19.1703、19.0409、12.8775和9.5680°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表8中。

[0080] 在某些方面，式I的固体形式是具有图9所示的X射线粉末衍射图谱--图谱7的形式A-7，实施例3。在某些方面，本公开提供了式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在21.0557、17.4402和12.8685°2θ(±0.1或者0.2°2θ)处的峰，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表9中。

[0081] 在某些方面，式I的固体形式是具有图10所示的X射线粉末衍射图谱--图谱8的形式A-8。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.6831、20.9865和19.0394°2θ(±0.1或者0.2°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表10中。

[0082] 在某些方面，式I的固体形式是具有图11所示的X射线粉末衍射图谱--图谱9的形式A-9。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.6988、15.2962、13.9016和13.7110°2θ(±0.1或者0.2°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表11中。

[0083] 在某些方面，式I的固体形式是具有图12所示的X射线粉末衍射图谱--图谱10的形式A-10。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.5520、21.0470、21.5370和19.0628°2θ(±0.1或者0.2°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表12中。

[0084] 在某些方面，式I的固体形式是具有图13所示的X射线粉末衍射图谱--图谱11的形式A-11。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰21.2861、20.7567、14.2428和5.3149°2θ(±0.1或者0.2°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表13中。

[0085] 在某些方面，式I的固体形式是具有图14所示的X射线粉末衍射图谱--图谱12的形式A-12。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰21.0467、20.5000和4.1778°2θ(±0.1或者0.2°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表14中。

[0086] 在某些方面，式I的固体形式是具有图15所示的X射线粉末衍射图谱--图谱13的形式A-13。在某些方面，本公开提供式I的化合物的结晶形式，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括峰20.8110、11.9583和19.3205°2θ(±0.1或者0.2°2θ)，其中所述XRPD是使用CuK辐射获得的。其他峰出现在表15中。

[0087] 在另一个实施方案中，本公开提供一种用于肾输尿管成像的方法，该方法包括：向受试者施用包含诊断有效量的式I的多晶型物的组合物：

[0088]

[0089] 其中所述多晶型物选自A-1至A-13，其中所述施用在选自以下的一个或多个时间执行：在手术之前、手术期间、手术之后、以及它们的组合；将所述受试者的肾系统的组织暴露于电磁辐射；以及检测来自化合物的荧光辐射。

[0090] 在某些方面，所述施用是静脉内进行的。

[0091] 在一个实施方案中，本公开提供一种药物组合物，其包含诊断成像量的式I的多晶型物，和药学上可接受的载体。

[0092] 在某些方面，所述多晶型物是本文所述的任何多晶型物。

[0093] 在又一个实施方案中，本公开提供包含药物组合物的试剂盒，该试剂盒包括本文所述的多晶型物和说明手册。

[0094] 在某些方面，本公开的多晶型物在施用给受试者之前配制成组合物，诸如药物组合物。

[0095] 式I的化合物可以以结晶或非结晶形式存在，或作为其混合物存在。对于呈结晶形式的本公开的盐，本领域技术人员将理解，可以形成药学上可接受的溶剂化物或水合物，其中溶剂分子在结晶期间将结合到晶格中。溶剂化物可涉及非水溶剂，诸如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯。在一个实施方案中，本公开提供结合到晶格中的式I的化合物的钠盐。

[0096] 在一个方面，本公开提供分离或纯形式的式I的化合物的多晶型物。相对于样品中可能存在的其他材料，“分离”或“纯”或“基本上纯”形式是指其中多晶型物是以＞50％、＞65％、＞75％、或80％、或85％或更多，特别地＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞
95％、＞96％、＞97％、＞98％，或＞99％的量存在的样品。

[0097] 根据本公开的方法制备的多晶型物可以通过根据本领域的任何方法表征。例如，根据本公开的方法制备的多晶型物可以通过X射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)、热台显微镜和光谱学(例如拉曼、固态核磁共振(ssNMR)和红外(IR))来表征。

[0098] X射线粉末衍射图谱XRPD

[0099] 根据本公开的多晶型物可以通过X射线粉末衍射图谱(XRPD)来表征。XRPD峰的相对强度可以根据样品制备技术、样品安装工序和所采用的具体仪器而变化。此外，仪器变化和其它因素可影响2θ值。因此，XRPD峰分配可以变化约+或－0.2度(±0.2或±0.15或±0.1)。

[0100] 本公开的多晶型物形式可用于制备成像剂，并且可以通过结晶方法获得，以产生结晶和半结晶形式。在各种实施方案中，所述结晶是如下进行的：在反应混合物中生成式I的化合物并将所需多晶型物从反应混合物中分离，或者将原始化合物溶解在溶剂中，任选地加热，然后通过冷却(包括主动冷却)和/或通过加入反溶剂达一段时间来结晶或固化产物。在结晶之后，可以在受控条件下进行干燥，直到最终多晶型物形式中达到所需的水或非水性溶剂含量。

[0101] 在另一个实施方案中，本发明提供一种制备式I的化合物的多晶型物(形式A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-10、A-11、A-12或A-13)的方法。在各实施方案中，本公开涉及制备式I的化合物的多晶型物的方法，其中该方法包括将无定形形式转化为所需多晶型物。在某些实施方案中，所述方法包括将包含无定形形式的组合物暴露于以下条件，该条件足以将无定形形式的总量的至少约50％转化成至少约50％的所需多晶型物并根据需要分离所需多晶型物。

[0102] 在某些情况下，结晶固体将比无定形固体更顺应纯化，并且结晶形式能够以更高纯度制备。这是因为在适当的条件下，与以更少受控的方式形成的无定形固体相反，晶体的形成倾向于从固体中排除杂质。类似地，结晶固体通常具有比无定形固体更好的稳定性，因为晶体堆积产生保护作用。对于为多晶型的材料，一些晶型在排除杂质和增强稳定性方面通常比其它晶型更有效。

[0103] 在一个实施方案中，该方法包括静脉内施用式I的化合物。式I的化合物可以以快速浓注(例如静脉内快速浓注)施用。在一些实施方案中，以快速浓注施用约0.1mL至5mL，诸如0.5、0.9、1、2、3、4或5mL，或约10mL，或约5、6、7、8、9或约10mL的包含式I的化合物的组合物。

[0104] 在一个实施方案中，该方法包括施用式I的化合物，其中药学上可接受的阳离子选自由钾或钠组成的组。

[0105] 在一个实施方案中，该方法包括将式I的化合物与药学上可接受的载体联合施用，该载体选自由生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液或0.5N或约1.0N以及磷酸盐缓冲溶液组成的组。在某些情况下，配制包括将冻干团块(约25mg 800BK、甘露糖醇和柠檬酸)重构成10mL的半浓度生理盐水(0.45％NaCl水溶液)。

[0106] 式I的化合物可高度溶于水。在一些实施方案中，式I的化合物再悬浮于水中至至少200mg/mL、或约300mg/mL至约320mg/mL的浓度。

[0107] 在一个实施方案中，该方法包括以大约3000.0μg/kg至大约1500.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0108] 在一个实施方案中，该方法包括以大约1500.0μg/kg至大约1000.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0109] 在一个实施方案中，该方法包括以大约1000.0μg/kg至大约500.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0110] 在一个实施方案中，该方法包括以大约500.0μg/kg至大约170.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0111] 在一个实施方案中，该方法包括以大约170.0μg/kg至大约120.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0112] 在一个实施方案中，该方法包括以大约120.0μg/kg至大约60.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0113] 在一个实施方案中，该方法包括以大约60.0μg/kg至大约30.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0114] 在一个实施方案中，该方法包括以大约30.0μg/kg至大约1.0μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0115] 在一个实施方案中，该方法包括以大约1.0μg/kg至大约0.1μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0116] 在一个实施方案中，该方法包括以大约0.1μg/kg至大约0.01μg/kg范围的诊断有效量的化合物来施用式I的化合物。

[0117] 式I的化合物可以是无毒的。它们可以吸收和发荧光，并且在荧光成像时不会快速光漂白。在施用后，式I的化合物可经由受试者中的体液的自然流动而输送到受试者的组织和器官。如此，可以将式I的化合物从施用位点携带或转移至所需位点、组织和器官，用于例如可视化。

[0118] 在某些实施方案中，本文的化合物和方法可对胆道进行成像，该胆道包括肝、胆囊、脾、小肠和相关管道的任何部分。在某些情况下，胆道包括肝内胆管、胆囊管——胆囊至胆总管——以及胆总管——肝和胆囊至小肠。在一些情况下，本文的化合物在施用后的一段时间于受试者的胆汁或尿液中被发现。本公开提供式I的化合物在尿液或胆汁中的组合物。

[0119] 在一个实施方案中，所述器官包括肾、膀胱、肝、脾、肠、心脏、肺和肌肉中的一个或多个。在一个实施方案中，所述器官是肾、膀胱或其组合或周围结构。在另一个实施方案中，所述器官是肾的输尿管。输尿管是将尿液从肾运送到膀胱的管。人具有两个输尿管，各附着到每个肾。输尿管的上半部位于腹部中，下半部位于骨盆区域中。在另一方面，感兴趣的器官是尿道。尿道是从膀胱到身体外部的管。

[0120] 在一个实施方案中，诊断有效量的式I的化合物在大约300.0μg/kg至大约150.0μg/kg的范围内。

[0121] 在一个实施方案中，诊断有效量的式I的化合物在大约150.0μg/kg至大约100.0μg/kg的范围内。

[0122] 在一个实施方案中，诊断有效量的式I的化合物在大约100.0μg/kg至大约50.0μg/kg的范围内。

[0123] 在一个实施方案中，诊断有效量的式I的化合物在大约50.0μg/kg至大约17.0μg/kg的范围内。

[0124] 在一个实施方案中，诊断有效量的式I的化合物在大约17.0μg/kg至大约12.0μg/kg的范围内。

[0125] 在一个实施方案中，诊断有效量的式I的化合物在大约12.0μg/kg至大约6.0μg/kg的范围内。

[0126] 在一个实施方案中，诊断有效量的式I的化合物在大约6.0μg/kg至大约0.5μg/kg的范围内。

[0127] 根据本公开的诊断有效量的式I的化合物在宽剂量范围内是有效的。确切的剂量将取决于施用途径、施用每种化合物的形式、待治疗的受试者的性别、年龄和体重以及施用者的偏好和经验。

[0128] 在所选的实施方案中，可以在例如以下时间段独立地测量所施用的式I的化合物中的每一个的荧光强度：小于施用后24小时、23小时、22小时、21小时、20小时、19小时、18小时、17小时、16小时、15小时、14小时、13小时、12小时、11小时、10小时、9.5小时、9.0小时、8.5小时、8.0小时、7.5小时、7.0小时、6.5小时、6.0小时、5.5小时、5.0小时、4.75小时、4.50小时、4.25小时、4.00小时、3.75小时、3.50小时、3.25小时、3.00小时、2.75小时、2.50小时、
2.25小时、2.00小时、1.75小时、1.50小时、1.25小时、1.00小时、0.90小时、0.80小时、0.70小时、0.60小时、0.50小时、0.40小时、0.30小时、0.20小时或施用后立即。

[0129] 在所选的实施方案中，可以在例如以下时间段独立地测量所施用的式I的化合物中的每一个的荧光强度：大于施用后23小时、22小时、21小时、20小时、19小时、18小时、17小时、16小时、15小时、14小时、13小时、12小时、11小时、10小时、9.5小时、9.0小时、8.5小时、8.0小时、7.5小时、7.0小时、6.5小时、6.0小时、5.5小时、5.0小时、4.75小时、4.50小时、
4.25小时、4.00小时、3.75小时、3.50小时、3.25小时、3.00小时、2.75小时、2.50小时、2.25小时、2.00小时、1.75小时、1.50小时、1.25小时、1.00小时、0.90小时、0.80小时、0.70小时、
0.60小时、0.50小时、0.40小时、0.30小时、0.20小时、0.10小时。

[0130] 在所选的实施方案中，可以在以下范围内的时间段独立地测量所施用的式I的化合物中的每一个的荧光强度：施用后大约0.10小时至大约24小时、大约0.20小时至大约23小时、大约0.30小时至大约22小时、大约0.40小时至大约21小时、大约0.50小时至大约20小时、大约0.60小时至大约19小时、大约0.70小时至大约18小时、大约0.80小时至大约17小时、大约0.90小时至大约16小时、大约1.00小时至大约15小时、大约1.25小时至大约14小时、大约1.50小时至大约13小时、大约1.75小时至大约12小时、大约2.00小时至大约11小时、大约2.25小时至大约10小时、大约2.50小时至大约9.5小时、大约2.75小时至大约9.0小时、大约3.00小时至大约8.5小时、大约3.25小时至大约8.0小时、大约3.50小时至大约7.5小时、大约3.75小时至大约7.0小时、大约4.00小时至大约6.5小时、大约4.25小时至大约6.0小时、大约4.50小时至大约5.5小时、大约4.75小时至大约5.0小时。

[0131] 在本文所述的方法的实施方案中，样品被选择用以产生可检测的光学响应的光波长照射，并采用用于检测该光学响应的装置来观察。可用于照射本公开的染料化合物的设备包括但不限于钨灯、手提式紫外灯、水银弧光灯、氙气灯、发光二极管(LED)、激光器和激光二极管。这些照明源任选地集成到手术摄像机、腹腔镜和显微镜中。本公开的优选实施方案是在波长633-636nm、647nm、660nm、680nm处或附近，以及超过700nm(诸如780nm、810nm和850nm)可激发的染料，因为这些区域与相对廉价的激发源的输出紧密匹配。光学响应可任选地通过视觉检查或通过使用以下装置中的任一者来检测：CCD摄像机、视频摄像机、照相胶片。

[0132] 所使用的NIR成像探针是式I的化合物；激发773nm和发射790nm。

[0133] 如本文所述的式I的化合物可以与剂量配方相容的方式施用，并且以有效或适合于体内成像的量施用。待施用的量取决于多种因素，包括例如个体的年龄、体重、身体活动和饮食、待成像的组织或器官、以及要执行的手术或外科手术的类型。在某些实施方案中，剂量的大小也可以通过伴随化合物在特定个体中的施用的任何不良副作用的存在、性质和程度来确定。

[0134] 然而，应当理解，任何特定患者的特定剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素，包括所采用的具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用长度、年龄、体重、遗传特征、一般健康、性别、饮食、模式和施用时间、排泄率、药物联合、特定病症的严重程度以及正接受治疗的宿主。

[0135] 在某些实施方案中，剂量可采取固体、半固体的形式或冻干粉末形式，优选以适合于精确剂量的简单施用的单位剂型。在一些实施方式中，剂量是以一次或多次施用的特定剂量在容器、小瓶或注射器中提供的。

[0136] 如本文所用，术语“单位剂型”是指适合作为人和其它哺乳动物的单一剂量的物理上离散的单位，每个单位包含预定量的显像剂以及合适的药物赋形剂(例如，安瓿)，该预定量的显像剂被计算以产生所需起效、耐受性和/或荧光效应。此外，可以制备更浓缩的剂量剂型，由此，然后可以制备更稀释的单位剂型。因此，更浓缩的剂量剂型将包含基本上多于例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多倍的成像剂的量。

[0137] 制备这样的剂型的方法是本领域技术人员已知的(参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,18th Ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1990))。剂型通常包括常规的药物载体或赋形剂，并且可另外包括其它药剂、载体、佐剂、稀释剂、组织渗透增强剂、增溶剂等。合适的赋形剂可以通过本领域熟知的方法调整为特定的剂型和施用途径(参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,18th Ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1990))。

[0138] 在某些实施方案中，所述剂量剂型含有用于化合物的储存、分离、纯化和/或冻干的稳定剂。用于冻干的试剂包括但不限于糖类，诸如单糖、二糖或葡聚糖。其它糖类包括葡萄糖、半乳糖、木糖、葡糖醛酸、海藻糖、葡聚糖、羟乙基淀粉、甘露糖醇或5％右旋糖。

[0139] 对于肠胃外施用，例如静脉内注射、动脉内注射、皮下注射、肌内注射等，有效剂量可以是无菌可注射溶液和无菌包装粉末的形式。优选地，可注射溶液以约4.5至约10，诸如4.6、5、6、7、8、9或10的pH，或生理pH配制。

[0140] 在一些方面，用于成像的有效剂量的式I直接施用到感兴趣的器官或解剖结构中。合适的器官或解剖结构包括例如肾、膀胱或其组合或周围结构。在另一个实施方案中，器官是输尿管或尿道或周围的解剖结构。

[0141] 在一些实施方案中，用于成像的有效剂量包含本文所述的以高质量、易溶形式的冻干化合物，其在室温下稳定数月。式I的冻干化合物可以储存在任何合适类型的密封容器中，诸如密封的小瓶或注射器，其含有一定量的用于受试者(例如成人)的单一剂量的化合物。本文广泛使用的术语“小瓶”是指任何药品包装装置，其被设计并适合于密封和无菌储存、运输和处理小(例如，单剂量)量的药品。单室小瓶(其将仅含有冻干化合物，没有水)是众所周知的；典型的单室小瓶可以被设计为与静脉输液袋一起使用。或者，可使用包含冻干化合物和无菌水溶液两者的两室小瓶，以实现含有式I的化合物的水溶液的立即重构和注射。

[0142] 在某些情况下，可注射的重构溶液含有酸，诸如有机酸或无机酸。合适的酸包括但不限于磷酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、甲酸、抗坏血酸、富马酸、葡糖酸、琥珀酸、马来酸、己二酸及其任何混合物。其它合适的酸包括但不限于盐酸、溴酸、硝酸、硫酸、高氯酸、乙酸、乳酸、乙醇酸、琥珀酸、酒石酸、半乳糖醛酸、草酸、谷氨酸、天冬氨酸、草酸、D-或L-苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、4-甲苯磺酸、水杨酸、苯甲酸、丙二酸及其混合物。

[0143] 酸的量通常为0.50mg/mL至约12.0mg/mL(w/v)。例如，酸的量可为约1.50至约10.0mg/mL，或约1.90至约9.8或约1.92mg至约9.6mg，或约1.92mg/mL(w/v)。

[0144] 在一个方面，所述酸是约1.92mg/mL至约9.6mg/mL的无水柠檬酸。

[0145] 在某些情况下，所述冻干粉接着用水、缓冲液或盐水进行重构以注射。在某些情况下，溶液的pH为约6.0至约8.5，诸如6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0。8.1、8.2、8.3、8.4或8.5。在某些情况下，重构溶液的pH为约7.0至7.8，或约7.1至7.6或约7.3至约7.5，诸如7.4。

[0146] 盐水可以是0.1N至约2.0N，或约0.5N至约1.5N或约1N盐水。

[0147] 在某些情况下，重构溶液包含糖或糖醇，其可以是D或L或DL构型。合适的糖包括但不限于赤藓糖醇、塔格糖、蔗糖、果糖、葡萄糖、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、甘草皂苷、马里醇(malitol)、麦芽糖、乳糖、木糖、阿拉伯糖、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、海藻酮糖、核糖及其任何混合物。

[0148] 糖的量通常为约10mg/mL至约500mg/mL，或约20mg/mL至约400mg/mL，或约40mg/mL至约250mg/mL，或约42.8mg/mL至约214mg/mL，或约42.8mg/mL。

[0149] 在一个方面，糖是D-甘露糖醇，其用量为约42.8mg/mL至约214mg/mL，例如42.8mg/mL。

[0150] 在某些方面，式I的染料以约0.5mg/mL至约20mg/mL，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或约20mg/mL存在。在某些情况下，式I的化合物的量为约0.5至约10mg/mL，或约1mg/mL至约7mg/mL，或约1mg/mL至约5mg/mL。小瓶可以为约1-10mL或约1至约5mL，其在5mg/mL下为5mg/小瓶-25mg/小瓶。

[0151] 在一个实施方案中，该方法包括将式I的化合物与药学上可接受的载体联合施用，该载体选自生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液或0.5N或约1.0N以及磷酸盐缓冲溶液。在某些情况下，配制包括将冻干团块(约25mg 800BK、甘露糖醇和柠檬酸)重构成10mL的半浓度生理盐水(0.45％NaCl水溶液)。

[0152] 在一个实施方案中，该方法包括将式I的化合物与药学上可接受的载体联合施用，该载体选自生理无菌盐水溶液、无菌水溶液、无热原水溶液、等渗盐水溶液或0.5N或约1.0N以及磷酸盐缓冲溶液。在某些情况下，配制包括具有以下成分的pH7.4(范围7.3-7.5)下的冻干团块的重构：D-甘露糖醇——42.8mg-214mg(例如42.8mg/mL)、无水柠檬酸——1.92mg-9.6mg(例如1.92mg/mL)。

[0153] 本文在此提供含有式I的化合物的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包括含有例如冻干形式的式I的化合物的一个或多个小瓶或注射器。此类试剂盒还可包括药学上可接受的载体或无菌水溶液，例如用于在施用之前重构化合物的无菌水。在一些情况下，所述试剂盒还包括用于肠胃外施用化合物或者与静脉输注袋一起使用的无菌注射器。试剂盒还可以包括供使用的说明手册。

[0154] 在某些实施方案中，本发明提供一种制备选自式I的形式A-1至A-13的化合物的方法：

[0155]

[0156] 其中该方法包括：

[0157] 将基本上纯形式的式I溶解在溶剂体系中以产生混合物；

[0158] 任选地对该混合物进行种晶；

[0159] 加入反溶剂以产生浆料；以及

[0160] 过滤最终浆料以产生式I的形式A-1至A-13的化合物。

[0161] 在某些方面，基本上纯形式的式I的化合物可以是结晶、无定形、非晶体、固体、混合物的形式或前述的任意组合。这些形式中的任何一种都可以溶解在有机溶剂体系中。

[0162] 在某些方面，溶剂体系包含有机溶剂和水。在某些方面，有机溶剂以约5％v/v至约95％v/v的形式存在。在某些方面，有机溶剂以约5％v/v至约50％v/v，或约50％v/v至约
80％v/v存在。在某些方面，有机溶剂以约35％v/v至约70％v/v，或约40％v/v至约60％v/v，或约45％v/v至约55％v/v存在。

[0163] 在某些方面，溶剂体系包含约5％v/v至约95％v/v、或约5％v/v至约50％v/v、或约50％v/v至约80％v/v的水。

[0164] 在某些方面，有机溶剂是丙酮或C1-C6烷醇。C1-C6烷醇选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇及其混合物。还包括烷醇的所有异构体，例如1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、3-丁醇、1-戊醇、2-戊醇等。

[0165] 在某些方面，所述反溶剂是诸如丙酮或C1-C6烷醇的有机溶剂。

[0166] 在某些方面，溶解非结晶形式的式I包括将样品从约25℃加热至约70℃，或从约35℃加热至约70℃，或从约40℃加热至约60℃，或从约45℃加热至约55℃。

[0167] 在某些方面，可任选地将晶种添加到溶液中以促进结晶。可以加入任何形式作为晶种，诸如形式A1至形式A13，例如形式A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、或A13。

[0168] 原则上，可以在搅拌期间加入晶种或者在搅拌之后加入晶种。在某些方面，可以任选地在将液体冷却之前加入晶种。晶种可用于促进一种多晶型物向另一种多晶型物的转化和/或提高转化速率。多晶型物转化反应通常通过各种方法的搅拌来进行。搅拌的形式可以是摇动反应容器或通过用磁力或机械搅拌器搅拌。多晶型转化反应也可以通过溶剂的沸腾作用来实现。

[0169] 在某些方面，在溶解所述形式的式I后，冷却混合物。结晶温度不受限制，但是优选的结果可以通过通常在冰-冷水浴的温度、室温或温水浴的温度下进行结晶而获得。晶种的添加也是任意的，但在添加晶种的情况下，可在较短时间内可靠地获得所需的多晶型晶体。

[0170] 在某些方面，所制备的化合物是选自形式A1至形式A13的成员，例如形式A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、或A13。

[0171] 当范围在本文使用时，旨在包括其中的范围和具体实施方案的组合和子组合。当提及数字或数值范围时，术语“大约”的使用意味着所提及的数字或数值范围是实验可变性内(或在统计实验误差内)的近似值，并且因此数字或数值范围可以例如在所述数量或数值范围的1％和15％之间变化。术语“包括(comprising)”(和相关术语诸如“包含(“comprise”或“comprises”)”或“具有”或“包括(including)”包括“由”所述特征“构成”或“基本由”所述特征“构成”的那些实施方案。

[0172] 实施例

[0173] 提供实施例以说明但不限制所要求保护的公开内容。

[0174] 实施例1：合成/用于分析的结晶样品

[0175] 式I的化合物可以如下进行合成：将3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氢-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺丁基)-2H-吲哚-2-亚基]-亚乙基]-1-环己烯-1-基]-乙烯基]-
5-磺基-1-(4-磺丁基)-3H-吲哚氢氧化物，内盐、三钠盐(1g,1.05mmol)溶解在25mL的水中并用氮气鼓泡15分钟。将4-羟基苯磺酸钠二水合物(875mg，3.77mmol)溶解在3.6mL 1N NaOH(3.6mmol)中，并加入反应混合物中。将反应混合物置于40℃的油浴中并搅拌16小时。
通过旋转蒸发将溶液干燥，然后用80:20的乙醇:水对产物重结晶。过滤该化合物，然后用乙醇洗涤，并在真空下在60℃下干燥18小时。

[0176] 在某些情况下，将3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氢-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺丁基)-2H-吲哚-2-亚基]-亚乙基]-1-环己烯-1-基]-乙烯基]-5-磺基-1-(4-磺丁基)-3H-吲哚氢氧化物，内盐、三钠盐(20g，21mmol)和4-羟基苯磺酸钠(5.84g，25.2mmol)的混合物悬浮在水(120mL)中。将该悬浮液加热至观察到完全溶解的85℃。逐滴加入氢氧化钠水溶液(10N，2.5mL，25mmol)，并将反应搅拌45分钟。缓慢加入异丙醇(360mL)以将反应温度维持在60℃以上。然后将该混合物缓慢冷却至环境温度，并过滤所得浆料。用40mL异丙醇：水(3:1)冲洗滤饼，用40mL异丙醇冲洗两次，在真空下在50-60℃下干燥，以得到为深绿色固体的18.4g式1的化合物。然后通过在大约70℃下溶解在水(50mL)和异丙醇(100mL)中，并将该混合物缓慢冷却至环境温度来重结晶10克(9mmol)的该材料。通过过滤收集固体，并用20mL异丙醇：水(2:1)冲洗，用20mL异丙醇冲洗两次，并在真空下在50-60℃下干燥，以得到为深绿色结晶固体的6.7g式1的化合物。

[0177] A.用于分析的结晶样品

[0178] 经由以下方法制备IRDye 800BK的晶体：在1.75透明的玻璃小瓶中，在预先制备的70％2-乙氧基乙醇：30％水(v/v)溶液中制备IRDye 800BK的饱和溶液，然后用刺穿的盖子盖住。将该溶液在环境温度下静置几天而不搅拌，以允许形成异常大的板状晶体以生长，该异常大的板状晶体适合通过单晶X射线衍射进行询问。

[0179] 经由以下方法制备IRDye 800BK的晶体的附加产品：在1.75透明的玻璃小瓶中，在预先制备的70％2-丙醇：30％水(v/v)溶液中制备IRDye 800BK的饱和溶液，然后用刺穿的盖子盖住。将该溶液在环境温度下静置几天而不搅拌，以允许形成异常大的板状晶体以生长，该异常大的板状晶体适合通过单晶X射线衍射进行询问。

[0180] B.300mL标度下的结晶发展

[0181] 使用玻璃的4叶片的40mm直径间距叶片叶轮在300mL CLR中完成结晶发展。用于所有8次结晶的输入和晶种材料是IRDye 800BK，批次：VE-759-79-2。用于结晶9的原材料的批号是C80104-01。

[0182] 首先进行的三个实验用于确定待使用的最有前景的溶剂体系。剩余实验使用2-丙醇：水(50:50v/v％)体系，其中种晶点(如果适用的话)、冷却速率以及反溶剂添加点和速率均作为变量进行评估。

[0183] 1.结晶1

[0184] 在丙酮:水溶剂体系中进行结晶1；使用以下工序：在50℃下将大约10g的IRDye800BK溶解于50mL丙酮：水(50:50v/v％)，以产生浓度为200mg/mL的溶液。

[0185] 在50℃下保持约30分钟后，在添加1％晶种之前以0.1℃/min的速率将实验冷却至45℃。在种晶后进一步保持30分钟后，在5℃下保持约6小时之前以0.1℃/min的速率将体系冷却至5℃。然后以30mL/h的速率进行丙酮的反溶剂添加，其中添加了总共75mL反溶剂(丙酮:水的最终比率为80:20v/v％)。以50％、67％、75％和80％丙酮含量取样用于浓度和多晶型分析。一旦完成反溶剂添加，则在5℃下应用另外2小时的保持，其中刚好在分离之前对最终浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用20mL丙酮洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前，在真空下将固体在环境温度下干燥约24小时。将另外的固体样品干燥48小时和140小时，通过XRPD、GC和TG/DTA分析所得固体材料。

[0186] 2.结晶2

[0187] 在乙醇∶水溶剂体系中进行结晶2；使用以下工序：在50℃下将大约9.5g的IRDye 800BK溶解于50mL乙醇∶水(50:50v/v％)，以产生浓度为190mg/mL的溶液。在50℃下保持约
30分钟后，在添加1％晶种之前以0.1℃/min的速率将实验冷却至45℃。在种晶后保持进一步的30分钟后，在5℃下保持约6小时之前以0.1℃/min的速率将体系冷却至5℃。然后以
30mL/h的速率进行丙酮的反溶剂添加，其中添加了总共75mL反溶剂(乙醇：水的最终比率为
80:20v/v％)。以50％、67％、75％和80％乙醇含量取样用于浓度和多晶型分析。一旦完成反溶剂添加，则在5℃下应用另外2小时的保持，其中刚好在分离之前对最终浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用20mL乙醇洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前在真空下将固体在环境温度下干燥约24小时。将另外的固体样品干燥48小时和140小时，通过XRPD、GC和TG/DTA分析所得固体材料。

[0188] 3.结晶3

[0189] 在2-丙醇：水溶剂体系中进行结晶3；使用以下工序：在50℃下将大约10g的IRDye 800BK溶解于50mL 2-丙醇：水(50:50v/v％)，以产生浓度为200mg/mL的溶液。在50℃下保持约30分钟后，在添加1％晶种之前以0.1℃/min的速率将实验冷却至45℃。在种晶后保持进一步的30分钟后，在5℃下保持约6小时之前以0.1℃/min的速率将体系冷却至5℃。然后以
30mL/h的速率进行2-丙醇的反溶剂添加，其中添加了总共75mL反溶剂(2-丙醇:水的最终比率为80:20v/v％)。以50％、67％、75％和80％2-丙醇含量取样用于浓度和多晶型分析。一旦完成反溶剂添加，则在5℃下应用另外2小时的保持，其中刚好在分离之前对最终浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用
20mL的2-丙醇洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前在真空下将固体在环境温度下干燥约24小时。将另外的固体样品干燥
48小时和140小时，通过XRPD、GC和TG/DTA分析所得固体材料。

[0190] 4.结晶4

[0191] 也在2-丙醇:水溶剂体系中进行结晶4，并且与结晶3相比，改变晶种和反溶剂加入温度。使用以下工序：在50℃下将大约10g的IRDye 800BK溶解于50mL 2-丙醇：水(50:50v/v％)，以产生浓度为200mg/mL的溶液。一旦完全溶解，则以0.1℃/min的速率将溶液冷却至40℃。一旦在40℃，则用1％IRDye 800BK对该系统种晶，并在该温度下保持30分钟。然后在
40℃下并且以30mL/h的速率进行2-丙醇的反溶剂添加，其中添加了总共75mL反溶剂(2-丙醇:水的最终比率为80:20v/v％)。以5％、60％、70％、75％和80％2-丙醇含量取样用于浓度和多晶型分析。一旦完成反溶剂添加，则在5℃下保持约6小时之前以0.2℃/min的速率将体系冷却至5℃。在保持期过后，刚好在分离之前对最终浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用20mL的2-丙醇:水(80:20v/v％)洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前，在真空下将固体在环境温度下干燥约100小时。

[0192] 5.结晶5

[0193] 在2-丙醇：水溶剂体系中进行结晶5，而无需种晶。与结晶4相比，反溶剂加入温度降低。使用以下工序：在50℃下将约10g的IRDye 800BK溶解于50mL 2-丙醇：水(50:50v/v％)，以产生浓度为200mg/mL的溶液。一旦完全溶解，则以0.1℃/min的速率将溶液冷却至5℃，并且一旦在5℃，则保持约8小时。然后以30mL/h的速率进行2-丙醇的反溶剂添加，其中添加了总共75mL反溶剂(2-丙醇:水的最终比率为80:20v/v％)。以50％、65％、75％和80％2-丙醇含量取样用于浓度和多晶型分析。在完成反溶剂添加之后，应用在5℃下另外2小时的保持，其中刚好在分离之前对最终浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用20mL的2-丙醇:水(80:20v/v％)洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前，在真空下将固体在环境温度下干燥约48小时。然后在通过XRPD、HPLC、GC和TG/DTA分析之前，进一步干燥固体的样品总计90小时。

[0194] 6.结晶6

[0195] 也在2-丙醇:水溶剂体系中进行结晶6，其中在40℃下添加晶种。与结晶5相比，反溶剂添加和最终温度也发生改变。使用以下工序：在50℃下将大约10g的IRDye800BK溶解于50mL 2-丙醇：水(50:50v/v％)，以产生浓度为200mg/mL的溶液。一旦完全溶解，则在用1％晶种进行种晶之前以0.1℃/min的速率将溶液冷却至40℃，并在该温度下保持30分钟。然后以0.1℃/min的速率将体系冷却至25℃。一旦在25℃，则以30mL/h的速率进行2-丙醇的反溶剂添加，其中添加了总共75mL反溶剂(2-丙醇:水的最终比率为80:20v/v％)。以50％、65％、
75％和80％2-丙醇含量取样用于浓度和多晶型分析。在完成反溶剂添加之后，进行在25℃下另外18小时的保持，其中刚好在分离之前对最终浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用20mL的2-丙醇:水(80:20v/v％)洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前，在真空下将固体在环境温度下干燥约24小时。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA分析之前，进一步干燥固体的样品总计80小时。

[0196] 7.结晶7

[0197] 在2-丙醇:水溶剂体系中进行结晶7，与结晶6相比，改变反溶剂体积和添加速率，以及最终体系温度。使用以下工序：在50℃下将大约10g的IRDye 800BK溶解于50mL 2-丙醇：水(50:50v/v％)，以产生浓度为200mg/mL的溶液。一旦完全溶解，则以0.1℃/min的速率将溶液冷却至20℃。一旦在20℃，则以20mL/h的速率进行2-丙醇的反溶剂添加，其中添加了总共50mL反溶剂(2-丙醇：水的最终比率为75:25v/v％)。以50％、60％、70％和75％2-丙醇含量取样用于浓度和多晶型分析。在完成反溶剂添加之后，进行在20℃下另外18小时的保持，其中刚好在分离之前对最终浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用20mL的2-丙醇:水(80:20v/v％)洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前，在真空下将固体在环境温度下干燥约24小时。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA分析之前，进一步干燥固体的样品总计80小时。

[0198] 8.结晶8

[0199] 也在2-丙醇：水溶剂体系中进行结晶8，与结晶7相比，具有改变的所使用的冷却速率。使用以下工序：在50℃下将大约10g的IRDye 800BK溶解于50mL 2-丙醇：水(50:50v/v％)，以产生浓度为200mg/mL的溶液。一旦完全溶解，则以0.05℃/min的速率将溶液冷却至20℃。一旦在20℃，则以20mL/h的速率进行2-丙醇的反溶剂添加，其中添加了总共50mL反溶剂(2-丙醇:水的最终比率为75:25v/v％)。在完成反溶剂添加之后，进行在20℃下另外2小时的保持，其中刚好在分离之前对浆料样品取样。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11μm)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。使用母液来洗涤容器，然后再过滤。一旦过滤，通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用20mL的2-丙醇:水(80:20v/v％)洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA进行分析之前，在真空下将固体在环境温度下干燥约48小时。然后在通过XRPD、HPLC、GC、PLM和TG/DTA分析之前，进一步干燥固体的样品总计140小时。

[0200] 9.结晶9

[0201] 在2-丙醇:水溶剂体系中进行结晶9，与结晶8相比，其具有改变的所使用的水和2-丙醇的体积。使用以下工序：将大约10g的IRDye 800BK溶解于50mL水中，以产生浓度为200mg/mL的溶液。过滤该溶液，并向溶液中滴加150mL 2-丙醇以获得浆料(2-丙醇:水的最终比率为75:25v/v％)。

[0202] 然后将浆料加热至70℃并将其在70℃下保持5分钟。然后将溶液冷却至25℃。使用具有70mm直径的Whatman1级滤纸(11Om)的布氏漏斗通过真空过滤分离浆料。将28mL的2-丙醇:水(75:25v/v％)用于洗涤容器并再过滤。一旦过滤，则使用方法2通过HPLC分析母液的浓度和纯度。将固体用(2)10mL 2-丙醇洗涤，并通过HPLC分析洗液的浓度和纯度。然后在通过XRPD和HPLC进行分析之前，在真空下将固体在环境温度下干燥约4小时。

[0203] 实施例2

[0204] 用Panalytical X’pert pro进行X射线粉末衍射(XRPD)XRPD分析，在3和35°2θ之间扫描样品。轻轻研碎材料并装载在具有Kapton或麦拉聚合物膜的多孔板上以支撑样品。用Panalytical X’pert pro进行XRPD分析，在3和35°2θ之间扫描样品。轻轻研碎材料并装载在具有Kapton或麦拉聚合物膜的多孔板上以支撑样品。然后将多孔板装载到以透射模式运行的Panalytical衍射仪中，并使用以下实验条件进行分析。

[0205] 原始数据源：XRD测量(*.XRDML)

[0206] 扫描轴：角度

[0207] 起始位置[°2θ]：3.0066

[0208] 结束位置[°2θ]：34.9866

[0209] 步长[°2θ]：0.0130

[0210] 扫描步进时间[s]：18.8700

[0211] 扫描类型：连续

[0212] PSD模式：扫描

[0213] PSD长度[°2θ]：3.35

[0214] 偏离量[°2θ]：0.0000

[0215] 发散狭缝类型：固定

[0216] 发散狭缝大小[°]：1.0000

[0217] 测量温度[℃]：25.00

[0218] 负极材料：Cu

[0219] K-Alpha1 1.54060

[0220] K-Alpha2 1.54443

[0221] K-Beta 1.39225

[0222] K-A2/K-A1比率：0.50000

[0223] 发电机设置：40mA，40kV

[0224] 测角器半径[mm]：240.00

[0225] 远焦-发散狭缝[mm]：

[0226] 91.00入射光束单色器：否

[0227] 旋转：否

[0228] 然后将多孔板装载到以透射模式运动的Panalytical衍射仪中，并进行分析。结果示于图1-15中，制成表的峰高度列于表1-15中。

[0229] IRDye 800BK，图谱1

[0230] 表1A.IRDye 800BK的XRPD峰表(批号Lot VE759-42-1)，图谱1

[0231]

[0232] IRDye 800BK，图谱1

[0233] 表1B IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱1

[0234] 表-IRDye 800BK(批号：RP-794-66)

[0235]

[0236]

[0237] IRDye 800BK，图谱2

[0238] 表2.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱2

[0239]

[0240] IRDye 800BK，图谱3

[0241] 表3.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱3

[0242]

[0243] IRDye 800BK，图谱4

[0244] 表4 IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱4

[0245]

[0246] IRDye 800BK，图谱5

[0247] 表5.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱5

[0248]

[0249] IRDye 800BK，图谱6

[0250] 表6.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱6

[0251]

[0252] IRDye 800BK，图谱7IRDye 800BK，图谱7—实施例1

[0253] 表7IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱7(实施例#1)

[0254]

[0255] IRDye 800BK，图谱7-实施例2

[0256] 表8.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱7(实施例#2)

[0257]

[0258]

[0259] IRDye 800BK，图谱7-实施例3

[0260] 表9 IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱7(实施例3)

[0261]

[0262] IRDye 800BK，图谱8

[0263] 表10.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱8

[0264]

[0265]

[0266] IRDye 800BK，图谱9

[0267] 表11IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱9

[0268]

[0269] IRDye 800BK，图谱10

[0270] 表12.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱10

[0271]

[0272]

[0273] IRDye 800BK，图谱11

[0274] 表13.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱11

[0275]

[0276]

[0277] IRDye 800BK，图谱12

[0278] 表14.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱12

[0279]

[0280] IRDye 800BK，图谱13

[0281] 表15.IRDye 800BK的XRPD峰表，图谱13

[0282]

[0283]

[0284] 根据以下，使用实施例1中的结晶方法可获得本实施例中的图谱。表中的顶行是在收集XRPD数据之前干燥固体多晶型物的小时数。

[0285] 4小时 24小时 48小时 72小时 80小时 90小时 100小时 140小时
结晶1 图谱13 图谱13 图谱13
结晶2 图谱11 图谱1 图谱1
结晶3 图谱13 图谱13 图谱13
结晶4 图谱11
结晶5 图谱11 图谱13
结晶6 图谱11 图谱11
结晶7 图谱9 图谱11
结晶8 图谱11 图谱13
结晶9 图谱1

[0286] 实施例3：小鼠尿液

[0287] 据信，肾系统是式I的化合物的主要消除途径。在该实施例中，小鼠通过注射接收式I的化合物或吲哚菁绿。从接受以下的小鼠获得尿液：式I的化合物或ICG(对照)二者均无、式I的化合物、或接受ICG的小鼠。用乙腈:甲醇混合物萃取尿液，并在Odyssey CLx成像仪(LI-COR生物科学)上成像。

[0288] 对照和ICG不可见荧光信号。ICG被肝消除，因此没有信号被预期。存在式I的化合物的荧光信号。

[0289] 实施例4：离体器官评估

[0290] 对于式I的化合物，在24小时和72小时检查各种器官的荧光信号强度。所包括的被检查器官：心脏(Ht)、肺(Ln)、肾(Kd)、肝(Lv)、脾(Spl)、肠(Int)、脑(Br)和肌肉(Ms)。在24小时，在肝和肾中仍然存在一些信号，但是在72小时后信号基本上被削弱。

[0291] 实施例5：小鼠中的消除途径

[0292] 该实施例的测试染料为800CW和式I的化合物。在该研究中，用以下来注射总共12个裸鼠(每个治疗组3个)：(1)无探针(对照组)；(2)800CW；或(3)式I的化合物。将两种探针(800CW–1091.1g/mol和800式I-1113.14g/mol)溶解在PBS中。当稀释到1nmol/100μL的注射剂量时，进行两个探针的斑点测试以检测荧光信号。800CW的荧光稍微高于式I的化合物的荧光。

[0293] 小鼠通过尾静脉注射接收1nmol的染料。IV注射后在24小时内对小鼠连续成像：注射后5分钟、1小时、2小时、4小时、6小时和24小时。将所有数据归一化为相同的LUT。对照小鼠(无探针)用作参考(无信号对照)。使用 Trilogy成像系统进行成像。

[0294] 处死小鼠，收获其器官和组织(即，肝、肾、肺、脾和肌肉)。对器官成像以检测荧光。在用探针处理的动物中，肾和肝具有可检测的信号。除了800CW治疗外，在治疗中不可见肌肉或肺组织。经肾分泌800CW和式I的化合物。

[0295] 在三个LUT标度下对器官成像；每个标度在被覆盖的信号范围内逐渐变小。每个渐进标度的较低水平被扩展以覆盖全红至蓝色范围。非常少的信号保留在任何目标器官中，诸如肝、肾、肺和肌肉。对于800CW和式I的化合物，在肾中发现类似的信号强度。在肝中，式I的化合物与800CW相比具有更高的信号。结果表明，与800CW相比，本发明化合物在肝中具有更长的保留时间。

[0296] 本实施例表明，清除从整个身体到胆系统是快速的(在肝中具有非常短的停留时间)，并且还是快速排泄进入肠。

[0297] 实施例6：在子宫切除术或结肠切除术期间的输尿管可视化

[0298] 用5mL盐水(0.9％氯化钠)将式I的药物配方溶解在小瓶(25mg)中，并在外科手术开始之前15分钟以5mg/mL的浓度经由快速浓注施用给患者。用于该手术的医疗装置是PINPOINT 内窥镜荧光成像系统(Novadaq,Mississauga,Ontario,Canada)。在手术期间的任何时间点，当外科医生需要识别输尿管时，将装置的模式切换到近红外检测成像，并且外科医生经由医疗装置的监视器或显示器来可视化输尿管。输尿管的这种识别在监视器上被可视化为重叠影象，其中外科医生可以用白光成像同时定位输尿管。

[0299] 实施例7：胆囊切除术期间的胆管可视化

[0300] 用5mL盐水(0.9％氯化钠)将式I的化合物的药物配方溶解在小瓶(25mg)中，并在外科手术开始之前15分钟以5mg/mL的浓度经由快速浓注施用给患者。用于该手术的医疗装置是da Vinci Firefly外科手术系统(Intuitive Surgical,Sunnyvale CA)。在手术期间，当外科医生需要识别胆道时，装置的模式切换到近红外检测成像，并且外科医生根据需要通过在白光图像和近红外图像之间切换来经由医疗装置的监测器或显示器识别胆管。

[0301] 实施例8：X射线粉末衍射(XRPD)图谱的比较

[0302] XRPD分析是在Panalytical X’pert pro上进行的，对于图谱1和图谱11，在3和35°2θ之间扫描样品。结果示于图16中。图17是在图谱1上方覆盖图谱11的图。

[0303] 应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅仅是出于说明目的，并且鉴于其的各种修改或改变将被建议给本领域技术人员并且包括在本申请的精神和权界内以及所附权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请通过引用整体并入本文以用于所有目的。

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