发明背景

糖尿病指一种由多种致病因素引起的疾病过程，其特征在于， 在禁食状态或口服葡萄糖耐受测试期间服用葡萄糖后，血浆葡萄糖 水平升高或高血糖症。持续或失控性的高血糖与病情的过早形成和 死亡率增高相关。经常性的非正常葡萄糖体内平衡直接或间接与脂、 脂蛋白和载脂蛋白代谢性和其它代谢和血流动力性疾病有关。因此 乙型糖尿病患者大血管和微血管并发症的风险性特别高，并发症包 括冠心病、中风、未梢血管病、高血压、肾病、神经病和视网膜病。 因此，在糖尿病的临床处理和治疗上，葡萄糖体内平衡、脂代谢和 高血压的治疗性控制是极为重要的。

糖尿病有两种常见形式。在1型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病 (IDDM)中，患者很少或完全不产生胰岛素—一种调节葡萄糖利用的 激素。在2型糖尿病或非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)中，与非糖 尿病患者相比，患者的血浆胰岛素水平往往相同甚至更高；然而， 这些患者对主要的胰岛素敏感组织，指肌肉、肝和脂肪组织中的胰 岛素对葡萄糖和脂代谢的刺激作用已产生抗性，且升高的血浆胰岛 素水平不足以克服显著的胰岛素抗性。

胰岛素抗性不完全起因于胰岛素受体量的减少，而起因于尚未 知晓的后胰岛素受体结合的不足。对胰岛素响应的抗性导致肌肉内 对葡萄糖摄取、氧化和贮存的胰岛素活性的不足，以及对脂肪组织 中脂类分解和肝中葡萄糖生成和分泌的不适当的胰岛素抑制。

多年来基本未变的2型糖尿病的有效治疗方法已经承认到其的 局限。尽管体育锻炼和膳食热量摄取的减少会大大改善糖尿病的症 状，但由于完全束缚的固定不变的生活方式和过量的食物(尤其是含 大量饱和脂肪的食物)消耗，照此治疗是极为不利的。通过给与刺激 胰的β-细胞分泌更多胰岛素的磺酰脲类(例如，甲苯磺丁脲和格列吡 嗪)或美格列奈，和/或在磺酰脲类或美格列奈无效时，通过注射胰岛 素来增加血浆的胰岛素水平，可导致胰岛素浓度高到足以刺激高胰 岛素抗性组织。然而，危险的低水平的血浆葡萄糖可由给予胰岛素 或胰岛素的促分泌素(磺酰脲类或美格列奈)引起，且会出现由于更高 的血浆胰岛素水平引起的高水平的胰岛素抗性。双胍类能提高胰岛 素敏感性，从而使高血糖症有所缓和。但是，两种双胍，苯乙双胍 和二甲双胍，都可诱发乳酸中毒和恶心/腹泻。二甲双胍比苯乙双胍 副作用少，故常作为治疗2型糖尿病的处方药。

Glitazones(即，5-苄基噻唑烷-2，4-二酮)是最近公开的一类有效改 善2型糖尿病多种症状的化合物。在几种2型糖尿病的动物模型中， 这些药物基本提高了肌肉、肝和脂肪组织内的胰岛素敏感性，从而 导致部分或完全的高血浆葡萄糖水平修复而不出现高血糖症。目前 市售的Glitazones是过氧物酶体增殖剂活化受体(PPAR)(主要是 PPAR-γ亚型)的激动剂。一般认为，PPAR-γ激动作用是用Glitazones 观察到的胰岛素灵敏化提高的原因。正在测试的用于治疗II型糖尿 病的较新的PPAR激动剂是α、γ或δ亚型激动剂，或这些II型的 混合物，在许多情况下，与所述Glitazones有化学上的区别(即，它 们不是噻唑烷二酮)。某些Glitazones(例如曲格列酮)已出现严重的副 作用(例如肝中毒)。

治疗所述疾病的其它方法尚在研究中。最近已引进或还在研制 的新的生物化学方法包括用α葡萄糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖)和 蛋白酪氨酸磷脂酸酶-1B(PTP-1B)抑制剂治疗。

作为可用于糖尿病(尤其是2型糖尿病)治疗的药物的二肽基肽酶 -IV(“DP-IV”或“DPP-IV”)酶的抑制剂的化合物也在研究中。例如 参见WO 97/40832、WO 98/19998、美国专利第5,939,560，Bioorg.Med. Chem.Lett.，6(10)，1163-1166(1996)；和Bioorg.Med.Chem.Lett.，6(22)， 2745-2748(1996)。DP-IV抑制剂在治疗2型糖尿病中的用途是基于 体内DP-IV易于灭活胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和胃抑制肽(GIP)的事 实。GLP-1和GIP是肠降血糖素，产生于消化食物时。该肠降血糖 素刺激了胰岛素的产生。DP-IV的抑制作用导致肠降血糖素灭活下 降，这同样也导致通过胰脏刺激胰岛素产生中所述肠降血糖素的作 用的提高。因此DP-IV抑制作用能引起血清胰岛素水平的提高。由 于所述肠降血糖素仅当消化食物时，才由身体产生，因此不期望在 不适当的时间(例如两餐之间)DP-IV抑制作用增加胰岛素的水平，从 而导致血糖过低(低血糖症)。因此，期望DP-IV的抑制作用能增加胰 岛素而不增加低血糖症的风险，低血糖症是与胰岛素促分泌素的使 用有关的危险性副作用。

DP-IV抑制剂也具有本文讨论的其它治疗用途。目前尚未广泛研 究DP-IV抑制剂，尤其是除糖尿病外的用途。为治疗糖尿病和潜在 的其它疾病和症状，需要新的化合物以发现改良的DP-IV抑制剂。

                    发明概述

本发明涉及作为二肽基肽酶-IV酶抑制剂(“DP-IV抑制剂”)的 化合物，其在治疗和预防涉及二肽基肽酶-IV酶的疾病(例如糖尿病， 尤其是2型糖尿病)中的用途。本发明还涉及包括这些化合物的药用 组合物以及这些化合物和组合物在涉及二肽基肽酶-IV酶的疾病的预 防和治疗中的用途。

                    发明详述

本发明涉及式I化合物及其药学上可接受的盐和其各单一非对映 异构体：

其中：

Ar是未被取代或被1-5个R3取代的苯基，其中R3独立地选自：

(1)卤素，

(2)直链或支链且未被取代或被1-5个卤素取代的C1-6烷基，

(3)直链或支链且未被取代或被1-5个卤素取代的OC1-6烷基，

和

(4)CN；

X选自：

(1)N，和

(2)CR2；

R1和R2独立地选自：

(1)氢，

(2)CN，

(3)直链或支链且未被取代或被1-5个卤素取代的C1-10烷基， 或未被取代或被1-5个独立地选自卤素、CN、OH、R4、OR4、 NHSO2R4、SO2R4、CO2H和CO2C1-6烷基所取代的苯基， 其中所述CO2C1-6烷基为直链或支链的基团，

(4)未被取代或被1-5个独立地选自卤素、CN、OH、R4、OR4、 NHSO2R4、SO2R4、CO2H和CO2C1-6烷基所取代的苯基， 其中所述CO2C1-6烷基为直链或支链的基团，和

(5)饱和或不饱和的5-或6-元杂环，它包括1-4个独立地选自 N、S和O的杂原子，该杂环未被取代或被1-3个独立地 选自氧基、OH、卤素、C1-6烷基和OC1-6烷基的取代基所 取代，其中所述C1-6烷基和OC1-6烷基为直链或支链基团 并任选被1-5个卤素取代；

R4为直链或支链且未被取代或被1-5个独立地选自卤素、CO2H和CO2C1-6烷基所取代的C1-6烷基，其中所述CO2C1-6烷基为直链或 支链的基团。

本发明的另一实施方案包括式Ia化合物及其药学上可接受的盐 和其各单一非对映异构体：

其中X、Ar和R1如本文所定义。

本发明的另一实施方案包括式Ib化合物及其药学上可接受的盐 和其各单一非对映异构体：

其中Ar和R1如本文所定义。

本发明的另一实施方案包括式Ic化合物及其药学上可接受的盐 和其各单一非对映异构体：

其中Ar、R1和R2如本文所定义。

本发明中，Ar优选为未被取代或被1-5个独立地选自下列的取 代基所取代的苯基：

(1)氟，

(2)溴，和

(3)CF3。

本发明中，更优选Ar选自：

(1)苯基，

(2)2-氟代苯基，

(3)3，4-二氟代苯基，

(4)2，5-二氟代苯基，

(5)2，4，5-三氟代苯基，

(6)2-氟-4-(三氟代甲基)苯基，和

(7)4-溴-2，5二氟代苯基。

本发明中，优选R1选自：

(1)氢，和

(2)直链或支链且未被取代或被苯基或1-5个氟取代的C1-6烷 基。

本发明中，更优选R1选自：

(1)氢，

(2)甲基，

(3)乙基，

(4)CF3，

(5)CH2CF3，

(6)CF2CF3，

(7)苯基，和

(8)苄基。

本发明中，更优选R1选自：

(1)氢，

(2)甲基，

(3)乙基，

(4)CF3，和

(5)CH2CF3。

本发明中，最优选R1为氢或CF3。

本发明中，优选R2选自：

(1)氢，

(2)直链或支链且未被取代或被1-5个氟所取代的C1-6烷基，

(3)未被取代或被1-3个独立地选自氟、OCH3和OCF3的取代 基所取代的苯基。

本发明中，更优选R2选自：

(1)氢，

(2)甲基，

(3)乙基，

(4)CF3，

(5)CH2CF3，

(6)CF2CF3，

(7)苯基，

(8)(4-甲氧基)苯基，

(9)(4-三氟代甲氧基)苯基，

(10)4-氟代苯基，和

(11)3，4-二氟代苯基。

本发明中，更优选R2为CF3或CF2F3。

本发明中，优选R3为F、Br或CF3。

本发明的化合物可含有一或多个不对称中心，因而可作为外消 旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单 一非对映异构体出现。本发明的化合物在β碳原子有一个不对称中 心。根据分子中各取代基的性质，可出现其它不对称中心。这类不 对称中心各自会独立地产生两个光学异构体，本发明范围包括所有 可能的光学异构体和非对映体混合物和纯的或部分纯的化合物。本 发明包括这些化合物的所有这类异构形式。

本文所述的部分化合物含有烯烃双键，除非特别说明，本发明 均包括顺式或反式几何异构体。

本文所述的部分化合物可以以互变异构体形式存在，其通过一 个或多个双键位移而具有不同的氢的连结点。例如，酮和它的烯醇 形式是酮-烯醇互变异构体。各互变异构体及其混合物都包括在本发 明的化合物中。

式I表示未优选立体化学的那类化合物的结构。式Ia表示连接 β氨基酸的氨基的碳原子上的优选立体化学，从中制备这些化合物。

通过对本文公开方法的适当改进，如本领域所知的方法，可进 行这些非对映异构体的独立合成或其色谱分离。可通过晶状产物或 晶状中间体(如必要，用含有已知绝对构型的不对称中心的试剂衍生) 的x-射线晶体学，确定他们的绝对立体化学。

如需要，可分离所述化合物的外消旋混合物，以分离所述的单 一对映异构体。可通过本领域熟知的方法进行拆分，例如使化合物 的外消旋混合物偶合至对映体纯的化合物上，以形成非对映异构体 混合物，然后通过标准方法(例如分级结晶法或色谱法)分离各非对映 异构体。采用对映体纯的酸或碱的偶合反应常常形成盐。然后通过 将所加入的手性残基裂解，可使所述非对映异构体衍生物转化为纯 的对映异构体。也可直接通过利用手性固定相的色谱法(该方法为本 领域所熟知)分离所述化合物的外消旋混合物。

另外，通过本领域熟知的方法，通过采用已知构型的光学纯原 料或试剂的立体选择性合成，可以得到化合物的任何对映异构体。

术语“药学上可接受的盐”指由药学上可接受的、非毒性碱或 酸(包括无机或有机碱和无机或有机酸)制备的盐。衍生自无机碱的盐 包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰盐、二价锰、钾、钠、 锌盐等。特别优选的是铵、钙、镁、钾和钠盐。呈固体形式的盐可 以以一种以上的晶体结构存在，且也可呈水合物形式。衍生自药学 上可接受的有机无毒性碱的盐包括伯、仲和叔胺的盐，被取代胺包 括天然存在的取代胺、环胺和碱离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜 碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、 2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡 糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴明、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡糖 胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三 乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的盐。

当本发明的化合物为碱性时，盐可由药学上可接受的、无毒性 酸(包括无机和有机酸)制备。这类酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟 脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、氢 氯酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、 硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺 酸等。特别优选柠檬酸、氢溴酸、氢氯酸、马来酸、磷酸、硫酸、 富马酸和酒石酸。

应理解本文所用的有关式I化合物也包括其药学上可接受的盐。

本领域的技术人员明白，本文所用的卤代基或卤素包括氟、氯、 溴和碘。类似地，C1-8烷基中的C1-8被定义为在直链或支链排列中具 有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的基团，因此，C1-8烷基特别 包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊 基、己基、庚基和辛基。同样地，将C0烷基中的C0定义为直接共价 键的存在。一个被表示为被取代基独立取代的基团可以独立地被多 个这类取代基所取代。本文所用的术语“杂环”包括5-或6元环系 统，其包括在下列环系：苯并咪唑基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、 苯并吡唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁二 唑基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、噌啉基、 呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、indolazinyl、吲唑基、异苯 并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、1，5-二氮杂 萘基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、吡啶并吡啶、哒嗪基、 吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、 噻二唑基、噻唑烷基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁烷基、1，4- 二氧杂环己烷基、六氢氮杂基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗 啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并 噻吩基、二氢苯并噁唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、 二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢 吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二 氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、 二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲二氧基苯甲酰基、四氢呋喃 基、四氢咪唑基、四氢异喹啉基和四氢噻吩基。

本发明的实施例是对公开于本实施例和本文中的化合物的使 用。

本发明的具体化合物包括选自公开于下列实施例中的化合物及 其药学上可接受的盐及其各非对映异构体。

本发明化合物用于抑制需要这些抑制作用的患者(例如哺乳动物) 的二肽基肽酶-IV酶的方法，该方法包括给与有效量的所述化合物。 本发明涉及作为抑制二肽基肽酶-IV酶活性抑制剂本文所公开的化合 物的用途。

除灵长目动物(例如人类)外，本发明的方法还可用于治疗多种其 它哺乳动物。例如，可以治疗的哺乳动物包括(但不限于)牛、绵羊、 山羊、马、狗、猫、豚鼠、猪、大鼠或其它牛、绵羊、马、犬、猫 科、啮齿目动物或鼠科类动物。而且，所述方法也可用于其它类动 物，例如禽类(例如，小鸡)。

本发明还涉及用于抑制人和动物的二肽基肽酶-IV酶活性的药物 的制备方法，该方法包括使本发明的化合物与药用载体或稀释剂相 结合。

本发明方法的治疗对象通常为需要抑制二肽基肽酶-IV酶活性的 哺乳动物，优选人类，男性或女性。术语“治疗有效量”指由研究 者、兽医、主治医生或其它临床医师所寻求的将引起组织、系统、 动物或人体的生物学或医学反应的所用化合物的量。

本文所用的术语“组合物”包括含特定量的特定成分的产物和 任何由特定量的特定成分的组合的直接或间接得到的产物。涉及药 用组合物的这类术语包括含有所述活性成分和充当载体的惰性成分 的产物，和任何由任何两种或多种成分的组合、络合或聚集，或由 一种或多种成分的离解，或由一种或多种成分的其它类型的反应或 相互作用的直接或间接得到的产物。因此，本发明的药用组合物包 括使本发明化合物和药学上可接受的载体混合而制备的任何组合 物。“药学上可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的 其它成分相容而不能有害于其受体。

术语“化合物的给与”和/或“给与化合物”应被理解为向需要 治疗的个体提供本发明的化合物或本发明的化合物的前药。

通过本领域已知的方法可证明本发明的化合物作为二肽基肽酶- IV酶活性抑制剂的用途。如下确定抑制常数。采用通过DP-IV裂解 底物Gly-Pro-AMC而释放荧光AMC离去基团的荧光分析法进行。 描述该反应的动力学参数为：Km＝50μM；kcat＝75s-1；kcat/Km＝1.5× 106M-1s-1。在100μl总反应体积中，典型反应含约50pM酶、50μM Gly-Pro-AMC和缓冲溶液(100mM HEPES，pH7.5，0.1mg/ml BSA)。 采用360nm激发波长和460nm发射波长，在96孔板荧光仪中连续 监测AMC的释放。在此条件下，25℃下，30分钟内产生约0.8μM AMC。用于这类研究的酶是在杆状病毒表达系统(Bac-To-Bac，Gibco BRL)中产生的可溶性(跨膜域和细胞质扩散除外)人体蛋白。发现 Gly-Pro-AMC和GLP-1的水解动力学常数与天然酶的文献值相符。 为测量化合物的解离常数，向含有酶和底物(DMSO最终浓度为1％) 的反应物中加入抑制剂的DMSO溶液。采用上述标准反应条件，于 室温下进行所有实验。为确定解离常数(Ki)，通过非线性回归将反应 速率拟合至竞争抑制作用的Michaelis-Menton方程中。重现所述解离 常数的误差一般低于两倍。

尤其是，下列实施例的化合物在上述试验中具有抑制二肽基肽 酶-IV酶的活性，一般其IG50小于1μM。这一结果表明了所述化合物 用作二肽基肽酶-IV酶活性抑制剂的固有的活性。

二肽基肽酶-IV酶(DP-IV)是一种涉及多种生物学功能的细胞表面 蛋白。它具有广泛的组织分布(肠、肾、肝、胰脏、胎盘、胸腺、脾、 上皮细胞、血管内皮、淋巴和髓细胞、血清)和清晰的组织以及细胞 类型表达水平。DP-IV被确定为T型细胞激活标志物CD26，它能在 体外裂解大量免疫调节的、内分泌的和神经病学的肽。这表明这种 肽酶在人体或其它动物的各种疾病过程中的潜在作用。

因此，所述化合物可用于下列疾病、病症和症状的预防和治疗 的方法中。

II糖尿病和相关疾病：现完全确认肠降血糖GLP-1和GIP可被 DP-IV在体外快速灭活。对DP-IV(-/-)-有缺陷的小鼠的研究和初期临 床试验表明：DP-IV抑制作用能增加GLP-1和GIP的稳定态浓度， 从而提高了葡糖耐受性。与GLP-1和GIP类似，其它涉及到葡糖调 节的高血糖素系列肽也可被DP-IV(例如PACAP，高血糖素)灭活。 这些肽被DP-IV灭活也可在葡萄糖体内平衡方面发挥作用。

因此，本发明的DP-IV抑制剂可用于治疗II型糖尿病和治疗和 预防伴随着II型糖尿病的大量病症，包括代谢综合征X、反应性低 血糖和糖尿性异常脂血症(diabetic dyslipidemia)。下文讨论的肥胖症 是经常发现伴随着II型糖尿病的另一种症状，它对本发明的化合物 的治疗有响应。

下列疾病、病症和症状与2型糖尿病有关，因此可通过采用本 发明化合物的治疗方法来治疗、控制或在某些情况下预防：(1)高血 糖症，(2)低葡萄糖耐受性，(3)抗胰岛素性，(4)肥胖症，(5)质脂疾病， (6)异常脂血症，(7)高脂血症，(8)高甘油三酯血症，(9)高胆固醇血症， (10)低HDL水平，(11)高LDL水平，(12)动脉粥样硬化及其后遗症， (13)血管再狭窄，(14)肠易激惹综合征，(15)肠炎，包括Crohn氏病 和溃疡性结肠炎，(16)其它炎症，(17)胰腺炎，(18)腹部肥胖症，(19) 神经变性病，(20)视网膜病，(21)肾病，(22)神经病，(23)X综合征， (24)卵巢的雄激素过多症(多囊性卵巢综合征)及其它具抗胰岛素性的 疾病。

肥胖症：DP-IV抑制剂可用于治疗肥胖症。这是基于观察到的 GLP-1和GLP-2对食物摄入和对胃的排空的抑制作用。对人体的 GLP-1的外源性给予能明显降低食物摄取和减慢胃的排空(Am.J. Physiol.277，R910-R916(1999))。对大鼠和小鼠的GLP-1的ICV给药 对食物摄入也产生明显的效果(Nature Medicine 2，1254-1258 (1996))。在GLP-1R(-/-)小鼠中并没有观察到这种进食抑制，这表明这 些作用是通过脑GLP-1受体诱发的。与GLP-1类似，GLP-2也受DP-IV 调节。类似于用GLP-1观察到的效果，GLP-2的ICV给药也抑制食 物的摄入(Nature Medicine 6，802-807(2000))。

生长激素缺乏症：基于生长激素释放因子(GRE)一种刺激生长 激素从垂体前叶释放的肽，在体内被所述的DP-IV酶裂解(WO 00/56297)的假说，DP-IV抑制作用可用于生长激素缺乏症的治疗。 下列资料提供了GRF是内源性底物的证据：(1)GRE在体外被有效裂 解生成失活产物GRF[3-44](BBA1122，147-153(1992))；(2)GRF在 血浆中快速降解成GRF[3-44]；其可被DP-IV抑制剂diprotin A抑制； 和(3)在人体GRE转基因猪的血浆中发现GRF[3-44](J.Clin.Invest.83， 1533-1540(1989))。因此，DP-IV抑制剂可用于生长素的促分泌剂所 被认定的相同征状范围。

肠损伤：研究表明高血糖素类肽-2(GLP-2)，一种可能内源性的 DP-IV的底物，可对肠上皮呈现出营养性作用(Regulatory Peptides 90， 27-32(2000))，此结论说明采用DP-IV抑制剂治疗肠损伤的可能性。 GLP-2的给予引起啮齿动物小肠质量的增加，并减轻了结肠炎和小 肠炎的啮齿动物模型中的肠损伤。

免疫抑制作用：基于有关T细胞激活和趋化因子合成中的DP-IV 酶的研究和体内病症模型中DP-IV抑制剂的效果，DP-IV抑制作用 可用于调节免疫应答。己表明DP-IV被确定为CD26，一种活化免疫 细胞的细胞表面标记物。通过免疫细胞的分化和活化状态调节CD26 的表达。一般认为在T细胞活化的体外模型中，CD26起共同刺激分 子的作用。大量趋化因子在其倒数第二的位置上都含有脯氨酸，估 计可能是保护其免于被非特异性氨基肽酶降解。己表明许多这些趋 化因子被DP-IV体外处理。在几种情况下(RANTES、LD78-β、MDC、 eotaxin、SDF-1α)，裂解导致趋药性和信号测定方面的活性的变化。 在某些情况下，受体的选择性也可被改变(RANTES)。在体外细胞培 养系统内己证实有大量趋化因子的多个N末端去尾形式，包括预期 到的DP-IV水解产物。

己表明DP-IV抑制剂是移植和关节炎的动物模型中的有效的免 疫抑制剂。普罗地平(Pro-Pro-二苯基-磷酸盐)，一种DP-IV的单向抑 制剂，被证明能将大鼠心脏同种异体移植后7-14日的成活率增倍 (Transplantation 63，1495-1500(1997))。已在大鼠的胶原和烷基二胺诱 发的关节炎中测试了DP-IV抑制剂，结果表明在所述模型中后爪的 抖动非常显著地减弱(Int.J.Immunopharmacology 19，15-24(1997)， Immunopharmacology 40，21-26(1998))。在许多自身免疫疾病，包括 类风湿性关节炎、多发性硬化、毒性弥漫性甲状腺肿和甲状腺炎中， DP-IV被上调(Immunology Today 20，367-375(1999))。

HIV感染：DP-IV抑制作用可用于HIV感染或AIDS的治疗或 预防，因为许多抑制HIV细胞进入的趋化因子是DP-IV的潜在底物 (Immunology Today 20，367-375(1999))。对于SDF-1α，裂解能降低 抗病毒活性(PNAS 95，6331-6(1998))。因此，期望通过抑制DP-IV 稳定SDF-1α而减少HIV感染。

血细胞生成：因为DP-IV可能涉及血细胞生成，所以DP-IV抑 制作用可用于治疗或预防血细胞生成。在环磷酰胺诱发的中性白细 胞减少的小鼠模型中，一种DP-IV抑制剂(Val-Boro-Pro)能刺激血细 胞生成(WO 99/56753)。

神经元疾病：因为许多与各种神经元过程相关的肽被DP-IV体 外裂解，所以DP-IV抑制作用可用于治疗或预防各种神经元病或精 神病。因而，DP-IV抑制剂在治疗神经元疾病方面可能具有治疗作用。 Endomorphin-2、β-casomorphin和P物质己被证明都是DP-IV的体 外底物。所有情况下，体外裂解都是高效的，Kcat/Km约为106M-1s-1 或更大。在大鼠的痛觉缺失电击跳跃测试模型中，DP-IV抑制剂表现 出显著的作用，该作用与外源性endomorphin-2的出现无关(Brain Research 815，278-286(1999))。

肿瘤侵入和转移：因为在正常细胞向恶性表型的转化过程中， 已经观察到几种外肽酶(包括DP-IV)的表达的增加或减少，所以DP-IV 抑制作用可用于治疗或预防肿瘤侵入和转移(J.Exp.Med.190，301- 305(1999))。这些蛋白的上调或下调表明为组织和细胞类型的特异 性。例如，已经在T细胞淋巴瘤、T细胞急性原始淋巴细胞的白血 病、细胞衍生的甲状腺癌、基底细胞癌和乳腺癌上已观察到增加的 CD26/DP-IV表达。因此，DP-IV抑制剂可用于这类癌症的治疗。

良性前列腺肥大：因为在BPH患者的前列腺组织中观察到增加 的DP-IV活性，所以DP-IV抑制作用可用于良性前列腺肥大的治疗 (Eur.J.Clin.Chem.Clin.Biochem 30，333-338(1992))。

精液能动性/男性避孕：因为在精液中，前列腺衍生的、对精液 能动性起重要作用的细胞器prostatosomes具有非常高水平的DP-IV 活性，所以DP-IV抑制作用可用于改变精液能动性和用于男性避孕 (Eur.J.Clin.Chem.Clin.Biochem 30，333-338(1992))。

龈炎：因为在龈缝流体和某些与牙周病严重性相关的研究中发 现DP-IV活性，所以DP-IV抑制作用可用于龈炎的治疗。

骨质疏松症：因为GIP受体存在于成骨细胞中，所以DP-IV抑 制作用可用于骨质疏松症的治疗或预防。

本发明化合物可用于治疗或预防一种或多种下列病症或疾病：(1) 高血糖症，(2)低葡萄糖耐受性，(3)抗胰岛素性，(4)肥胖症，(5)质脂 疾病，(6)异常脂血症，(7)高脂血症，(8)高甘油三酯血症，(9)高胆固 醇血症，(10)低HDL水平，(11)高LDL水平，(12)动脉粥样硬化及 其后遗症，(13)血管再狭窄，(14)肠易激惹综合征，(15)肠炎，包括Crohn 氏病和溃疡性结肠炎，(16)其它炎症(17)胰腺炎，(18)腹部肥胖症，(19) 神经变性病，(20)视网膜病，(21)肾病，(22)神经病，(23)X综合征， (24)卵巢雄激素过多症(多囊性卵巢综合征)，(25)II型糖尿病，(26)生 长激素缺乏症，(27)中性白细胞减少，(28)神经元疾病，(29)肿瘤转 移，(30)良性前列腺肥大、(32)牙龈炎、(33)高血压、(34)骨质疏松症， 及其它可通过抑制DP-IV治疗或预防的疾病。

所述化合物还可与其它药物联合，用于上述疾病、紊乱和症状 的预防或治疗的方法中。

本发明的化合物可与一种或多种其它药物联合，用于式I化合物 或所述其它药物可发挥作用的疾病或症状的治疗、预防、抑制或缓 解，其中所述药物联合比单一药物更安全或更有效。可将这些其它 药物与式I化合物同时或相继通过一种途径并以其常用量给药。当式 I化合物与一种或多种其它药物同时给药时，优选为含所述其它药物 和式I化合物的单位剂量形式的药用组合物。然而，所述的联合治疗 也可包括其中将式I化合物和一种或多种其它药物在不同的交错疗程 中给药的疗法。还计划在与一种或多种其它活性成分联合用药时， 可使用比各自单独用药时的更低剂量的本发明的化合物和所述其它 活性成分。因此，本发明的药用组合物包括除含式I化合物外还含一 种或多种其它活性成分的组合物。

可与式I化合物联合用药及或分别给药或在同一药用组合物中给 药的其它活性成分的实例包括，但不限于：

(a)其它二肽基肽酶IV(DP-IV)抑制剂；

(b)胰岛素敏化物包括(i)PPARγ激动剂例如glitazones (例如曲格列酮、吡格列酮、恩格列酮、MCC-555、罗西格列酮等)和 其它PPAR配体，包括PPARα/γ双效激动剂，例如KRP-297，和PPAR α激动剂例如非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁酯、非诺贝特和苯 扎贝特)，(ii)双胍类，例如二甲双胍和苯乙双胍，和(iii)蛋白酪氨酸 磷酸酯酶-1B(PTP-1B)抑制剂；

(c)胰岛素或胰岛素模拟物；

(d)磺酰脲类和其它胰岛素促分泌剂，例如甲苯磺丁脲和格 列吡嗪、美格列奈和相关药物；

(e)α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如acarbose)；

(f)高血糖素受体拮抗剂，例如公开于WO 98/04528、WO 99/01423、WO 00/39088和WO 00/69810的化合物；

(g)GLP-1、GLP-1模拟物和GLP-1受体激动剂例如WO 00/42026和WO 00/59887公开的化合物；

(h)GIP和GIP模拟物(例如WO 00/58360公开的化合物)和GIP 受体激动剂；

(i)PACAP、PACAP模拟物和PACAP受体3激动剂例如WO 01/23420公开的化合物；

(j)胆固醇降低剂，例如(i)HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他 汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、rivastatin、伊伐 他汀、罗苏伐他汀和其它他汀类药物)，(ii)螯合剂(考来烯胺、考来 替泊和交联右旋糖酐的二烷基氨基烷基衍生物)，(iii)烟醇、烟酸或 其盐，(iv)PPARα激动剂，例如非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁 酯、非诺贝特和苯扎贝特)，(V)PPARα/γ双效激动剂，例如KRP-297， (vi)胆固醇吸收抑制剂，例如β-谷甾醇和依泽替米贝，(vii)乙酰基 CoA：胆固醇酰基转移酶抑制剂，例如阿伐麦布，和(Vii)抗氧化剂， 例如普罗布考；

(k)PPARδ激动剂，例如公开于WO 97/28149的化合物；

(1)抗肥胖症化合物，例如芬氟拉明、右芬氟拉明、芬特明、 西布曲明、奥利司他、神经肽Y5抑制剂和β3肾上腺素能受体激动 剂；

(m)回肠胆汁酸转运蛋白抑制剂；和

(n)用于炎症的药剂，例如阿斯匹林、非类固醇消炎药、糖皮 质类固醇、柳氮磺吡啶和环氧酶2选择抑制剂。

上述联合包括本发明的化合物不仅与一种其它活性化合物而且 与两种或多种其它活性化合物的联合。非限定性实例包括具有式I的 化合物与两种或多种选自双胍、磺酰脲类、HMG-CoA还原酶抑制剂、 PPAR激动剂、PTP-1B抑制剂、其它DP-IV抑制剂和抗肥胖症化合 物的活性化合物的联合。

同样地，本发明的化合物可与用于治疗/预防/抑制或缓解本发明 的化合物可起作用的疾病或症状的其它药物联合用药。可将这些其 它药物通过某种途径并以常用量与本发明的化合物同时或相继给 药。当本发明的化合物与一种或多种其它药物同时使用时，优选除 本发明化合物之外还含有这类其它药物的药用组合物。因此，本发 明的药用组合物包括除本发明化合物之外还含一种或多种其它活性 成分的那些。

本发明化合物与第二种活性成分的重量比可以变化，其取决于 各种成分的有效剂量。一般说来，将采用各自的有效剂量。因此， 例如，当本发明的化合物与其它药物联合用药时，本发明化合物与 其它药物的重量比一般在约1000∶1到约1∶1000之间，优选约200∶1 到约1∶200之间。本发明化合物和其它活性成分的联合用药一般也会 在上述范围内，但在每一情况下，应使用各活性成分的有效剂量。

在所述联合用药中，可将本发明化合物和其它活性成分分别或 同时给药。另外，可将一种成分先于、同时于、或相继于其它试剂 的给药时给药。

本发明化合物可经口服、肠胃外(例如肌内、腹腔内、静脉内、 ICV、脑池内注射或输液、皮下注射或植入)、通过吸入喷雾、鼻腔、 阴道、直肠、舌下或局部给药途径给药，也可单独或一起制成含适 于各种给药途径的、常用无毒的、药学上可接受的载体、辅剂和介 质的合适剂型的制剂。除治疗温血动物例如小鼠、大鼠、马、黄牛、 绵羊、狗、猫、猴等外，本发明化合物也可用效地用于人体。

用于本发明化合物给药的药用组合物一般为单位剂型形式，并 可通过制药领域内熟知的任何方法制备。所有方法都包括使所述活 性成分与由一种或多种辅助成分组成的载体混合的步骤。一般说来， 通过将所述活性成分与液体载体或分散均匀的固体载体或两者均匀 和紧密地混合，然后如果需要，将所述产物制成所需要的剂型形状， 而制备所述药用组合物。在所述药用组合物中，所述活性目标化合 物的量足以对疾病的病程和症状起到所要求的效果。本文所用的术 语“组合物”包括含有特定量的特定成分的产物以及任何直接或间 接得自于特定量的特定成分的组合的产物。

含所述活性成分的药用组合物可以是适于口服的形式，例如， 片剂、药片、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散性粉末剂或颗粒剂、 乳剂、硬或软胶囊或糖浆剂或酏剂。可根据药用组合物制备领域任 何已知的方法制备用于口服的组合物，这类组合物可含有选自甜味 剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的一种或多种试剂，以提供药学上优 良和可口的制剂。片剂含有所述的活性成分，并与适用于片剂制备 的、无毒的、药学上可接受的赋形剂相混合。这些赋形剂可为例如 惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒 剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿 拉伯胶，和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。所述片剂可 不包衣或可通过已知技术包衣，以延缓在胃肠道中的崩解和吸收， 从而提供较长期的持续作用。例如，可以使用延时原料，例如硬脂 酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。还可通过美国专利4,256,108、4,166,452 和4,265,874中描述的技术包衣以形成缓释的渗透泵片剂。

口服制剂也可为硬明胶胶囊，其中将所述活性成分与惰性固体 稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)相混合，或为软明胶胶囊， 其中将所述活性成分与水或油性介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄 油)相混合。

水溶性悬液含有与适于制备水溶性悬浮液的赋剂剂相混合的所 述活性药物。这些赋形剂为悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤 维素、羟基-丙甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、黄芪胶和 阿拉伯胶；分散剂或湿润剂可为天然磷酯，例如卵磷酯或环氧烷与 脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂 肪醇(例如十七乙烯氧基鲸蜡醇)的缩合产物，或环氧乙烷与衍生自脂 肪酸和己糖醇的部分酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸 酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的部分酯的缩合产物， 例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。所述水溶性悬浮液也可含一种或 多种防腐剂，例如，乙基或正丙基的对羟基苯甲酸酯，一种或多种 着色剂，一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。

可通过使所述活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝 麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中配制油性悬浮液。所述油 性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入如上 所述甜味剂和矫味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可通过加 入抗氧化剂(例如抗坏血酸)保护。

适用于经加水制备水溶性悬浮液的可分散性粉末剂和颗粒剂包 含所述活性成分，并与分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐 剂相混合。适用的分散剂或湿润剂和悬浮剂可通过上述提及的那些 来举例说明。也可出现其它赋形剂，例如甜味剂，矫味剂和着色剂。

本发明的药用组合物也可为水包油乳化剂形式。所述油相可为 植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或这些油的混 合物。适用的乳化剂可为天然胶(例如阿拉伯胶或黄芪胶)、天然磷脂 (例如大豆、卵磷酯，和衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或部分酯)(例 如山梨糖醇酐单油酯)和所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物(例如聚乙 烯山梨糖醇酐单油酸酯)。所述乳剂也可含有甜味剂和矫味剂。

糖浆剂和酏剂可用甜味剂，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗 糖配制。这些制剂也可含有缓和剂、防腐剂和矫味剂以及着色剂。

所述药用组合物可为灭菌注射用水溶性或油溶性悬浮液形式。 根据已知的工艺，采用上述那些适用的分散剂或湿润剂和悬浮剂， 可配制这种悬浮液。所述灭菌注射制剂也可为在无毒、胃肠道外可 接受的稀释剂或溶剂中的灭菌注射溶液剂或悬浮剂，例如1，3-丁二醇 中的溶液。可使用的可接受的介质和溶剂中，有水、林格氏溶液和 等渗氯化钠溶液。另外，灭菌、精馏油也常用作溶剂或悬浮介质。 包括合成单-或二脂酰甘油酯在内的任何温和的、精馏油都可用于此 目的。另外，脂肪酸(例如油酸)可用于注射剂的制备中。

本发明的化合物也可以以栓剂形式进行药物的直肠给药。通过 将所述药物与适当的非刺激性赋形剂混合制备这些组合物，该赋形 剂在常温下为固体，而在直肠温度下为液体，因而会在直肠中溶解 以释放出所述药物。这类原料有可可脂和聚乙二醇。

对局部用药，可用含有本发明化合物的霜剂、软膏剂、凝胶剂、 溶液剂或悬浮剂等。(为此，局部用药还应包括口腔洗涤剂和漱口剂。)

本发明的药用组合物和方法还包括其它有治疗活性的上述化合 物，它们一般用于上述病理学症状的治疗中。

在治疗或预防需要抑制二肽基肽酶-IV酶活性的症状中，适用的 剂量每天每公斤患者体重水平通常为约0.01-500mg之间，可以单剂 量或多剂量给药。所述剂量水平优选在每日约0.1-250mg/kg；更优 选在每日约0.5-100mg/kg。适用的剂量水平可为每日约0.01-250 mg/kg、每日约0.05-100mg/kg，或每日约0.1-50mg/kg。在此范围内， 所述剂量可为每日0.05-0.5、0.5-5或5-50mg/kg。对口服给药，优选 提供片剂形式的组合物，其含1.0-1000毫克所述活性成分，根据要 治疗的患者的症状调整剂量，具体为1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、 50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、 750.0、800.0、900.0和1000.0毫克的所述活性成分。可按每日1-4 次的安排，优选每日一到两次给予所述化合物。

当治疗或预防糖尿病和/或高血糖或高甘油三酯血症或本发明化 合物可治疗的其它疾病时，当本发明化合物以约0.1毫克-约100毫 克每公斤动物体重的日剂量给药，优选单剂量给药或一日二至六次 的分剂量给药，或以缓释形式给药时，可得到基本满意的结果。对 最大的哺乳动物，总日剂量约为1.0毫克到约1000毫克的范围，优 选约1毫克到约50毫克范围。对70kg的成年人，总日剂量一般约 为7毫克到350毫克。可调整该剂量方案以产生最佳治疗应答。

然而，应理解任何特定患者的具体剂量水平和给药次数可以变 化，这取决于多种因素，包括所用的具体化合物的活性、该化合物 的代谢稳定性和该化合物的作用持续时间、宿主年龄、体重、总体 健康情况、性别、膳食、给药的方式和时间、排泄速度、联合用药 情况、具体症状的严重性和宿主经历的治疗等。

下列流程和实施例说明本发明化合物的几种制备方法。起始原 料可根据本领域已知或本文所述的方法制备。

采用标准肽偶合条件，随后去保护，可从β-氨基酸中间体(例如 式II化合物)和取代杂环中间体(例如式III化合物)，制备本发明化合 物。这些中间体的制备描述于下列流程中。

其中Ar、X和R1如上文定义，P为适当的氮保护基，例如叔-丁氧 基羰基、苄氧基羰基或9-芴基甲氧基羰基。

                    流程1

式II化合物是市售可提供的、文献中已知的化合物或可通过本 领域技术人员熟悉的各种方法方便地制备。流程1列出了一种常用 的路线。酸1可由市售提供或经由对应的氨基酸通过用例如碳酸氢 二叔丁酯(P＝Boc)、羰基苯甲氧基(P＝Cbz)或N-(9-芴基甲氧基羰基 氧基)琥珀酰亚胺(P＝Fmoc)保护方便地制备，可将酸1用氯甲酸异丁 基酯和碱(例如三乙胺或二异丙基乙胺)处理，接着再用重氮甲烷处 理。然后在溶剂(如甲醇或二噁烷水溶液)中，将得到的重氮酮用苯甲 酸银处理，然后按Sewald等，Synthesis，837(1997)的方法进行超声处 理，得到β氨基酸II。本领域的技术人员明白，为制备对映体纯的β 氨基酸II，可用对映体纯的α氨基酸 l。在下列综述中可找到这些化 合物的其它制备路线：E.Juaristi，Enantioselective Synthesis ofβ- AminoAcids，Ed.，Wiley-VCH，New York：1997，Juaristi等， AldrichimicaActa，27，3(1994)，Cole等，Tetrahedron，32，9517(1994)。

                        流程2

化合物III可由市售提供、文献中已知的化合物或用各种本领域 技术人员所熟悉的方法方便地制备。流程2表示一种方便的方法。 例如通过用氢气和催化剂(例如披钯碳或氧化铂)在溶剂(例如甲醇或 乙醇)中处理，还原不饱和衍生物 2，以提供化合物III。

                     流程3

流程2中的中间体 2本身可由市售获得，文献中了解，或通过 本领域技术人员所熟悉的各种方法方便地制备。流程3说明当X为 CR2时的一种此类方法。用2-卤代酮(例如2-溴代酮 4)在溶剂(例如甲 醇或乙醇)中处理氨基吡嗪 3，得到中间体 2a。另外，为制备其中(R2 为H的中间体 2a，可用2-溴代二甲基乙缩醛 5和催化量的酸(例如盐 酸)代替中间体 4。

                    流程4

流程4说明其中X为N的中间体 2b的方便的制备方法。用肼 处理氯代吡嗪 6，得到肼基吡嗪 7。可使化合物7与原酸酯(例如三乙 基原酸酯)缩合得到 2b，或与羧酸 9在多聚磷酸中在升高的温度下缩 合生成 2b。

                        流程5

流程5说明其中X为N的化合物IIIb的另一种制备路线。根据 以上所列的方法，用二氯代吡嗪 10代替氯代吡嗪 6制备化合物 12。 然后用催化剂(例如氧化铂)将化合物12催化氢化，得到其单盐酸盐 形式的化合物IIIb。

                        流程6

流程6表示：在标准肽偶合条件下，例如用1-乙基-3-(3-二甲基 氨基丙基)碳化二亚胺(EDC)、1-羟基苯并三唑(HOBT)和碱(一般为二 异丙基乙胺)在溶剂(例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或二氯甲烷)中， 在室温下，使中间体II和III偶合3-48小时，生成中间体 13。例如 保护基为Boc情况下，使用例如三氟乙酸或甲醇氯化氢，然后除去 所述保护基，生成所需的胺I。如需要，通过重结晶、研磨、制备性 薄层色谱法、W.C.Still等在J.Org.Chem.，43，2923(1978)所述的硅 胶快速色谱法或HPLC，从不需要的副产物中提纯所述产物。经HPLC 提纯的化合物被分离成相应的盐。用同样的方法提纯中间体。

在某些情况下，在除去保护基团前，可通过例如将X或R1上取 代基处理，而将得自流程6中所述的偶合反应的中间体 13进一步修 饰。这些处理可包括(但不限于)本领域的技术人员普遍知道的还原、 氧化、烷基化、酰基化和水解反应。

在某些情况下，可改变前述反应流程的顺序，以促进所述反应 进行或避免不需要的反应产物。为更完全地理解本发明，提供下列 实施例。这些实施例只用做说明，而不应构成对本发明的任何限制。

                      中间体1

(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酸 步骤A.(R，S)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，5-二氟代苯基丙氨酸

向0.5g(2.49mmol)2，5-二氟代-DL-苯基丙氨酸的5mL叔丁醇溶 液中，相继加入1.5mL 2N氢氧化钠水溶液和543mg碳酸氢二叔丁 酯。室温下，搅拌所述反应物16小时，然后用乙酸乙酯稀释。用1N 盐酸和盐水顺次洗涤有机相，经硫酸镁干燥，然后真空浓缩。经快 速层析法(硅胶，二氯甲烷∶甲醇∶乙酸为97∶2∶1)纯化粗产物，得到671 mg的目标化合物。MS 302(M+1)。

步骤B.(R，S)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-1-重氮基-4-(2，5-二氟代 苯基)丁-2-酮

0℃下，向2.23g(7.4mmol)(R，S)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，5- 二氟代苯基丙氨酸的100mL乙醚溶液中，顺次加入1.37mL(8.1mmol) 三乙胺和0.931mL(7.5mmol)氯甲酸异丁酯，并在此温度下搅拌所 述反应物15分钟。然后加入冷却的重氮甲烷的乙醚溶液，直到得到 持续黄色溶液，然后再搅拌16小时。经逐滴加入乙酸使该过量重氮 甲烷猝灭，用乙酸乙酸稀释所述反应物，并顺次用5％盐酸、饱和碳 酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，然后真空浓缩。经快速 层析法(硅胶，己烷∶乙酸乙酯为4∶1)纯化，得到1.5g重氮酮。1H NMR (500MHz，CDCl3)δ7.03-6.95(m，1H)，6.95-6.88(m，2H)，5.43(bs， 1H)，5.18(bs，1H)，4.45(bs，1H)，3.19-3.12(m，1H)，2.97-2.80(m，1H)， 1.38(s，9H)。

步骤C.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酸

-30℃下，向2.14g(6.58mmol)(R，S)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)- 氨基]-1-重氮基-4-(2，5-一氟代苯基)丁-2-酮的100mL甲醇溶液中顺次 加入3.3mL(19mmol)二异丙基乙胺和302mg(1.32mmol)苯甲酸银。 将该反应物搅拌90分钟，然后用乙酸乙酯稀释，再相继用2N盐酸、 碳酸氢钠饱和水溶液和盐水洗涤。经硫酸镁干燥有机相，真空浓缩， 经制备性手性HPLC(Chiralpak AD柱，5％乙醇的己烷溶液)分离出对 映异构体，首先洗脱出的是550mg所需的(R)-对映异构体。使该物 质溶解于50mL四氢呋喃∶甲醇∶1N氢氧化锂水溶液(3∶1∶1)的混合物 中，并于50℃下搅拌4小时。冷却所述反应物，用5％稀盐酸酸化， 然后用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤混合有机相，经硫酸镁干燥，然 后真空浓缩，生成360mg为白色泡沫状固体的目标化合物。1H NMR (500MHz，CDCl3)δ7.21(m，1H)，6.98(m，2H)，6.10(bs，1H)，5.05(m， 1H)，4.21(m，1H)，2.98(m，2H)，2.60(m，2H)，1.38(s，9H)。

                        中间物2

(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-[2-氟-4-(三氟代甲基)苯基]丁 酸

步骤A.(2R，5S)-2，5-二氢-3，6-二甲氧基-2-(2’-氟-4’-(三氟代甲基)苄基)- 5-异丙基吡嗪

-70℃下，向3.32g(18mmol)市售提供的(2S)-2，5-二氢-3，6-二甲 氧基-2-异丙基吡嗪的100mL四氢呋喃溶液中，加入12mL(19mmol) 的1.6M丁基锂的己烷溶液。此温度下搅拌20分钟后，加入5g(19.5 mmol)的2-氟-4-三氟代甲基苄基溴的20mL四氢呋喃溶液，并继续搅 拌3小时，然后将所述反应物加热至室温。用水猝灭所述反应物， 真空浓缩，再用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机相，干燥， 然后真空浓缩。经快速层析法纯化(硅胶，0-5％乙酸乙酯的己烷溶液)， 得到5.5g目标化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.33-7.25(m， 3H)，4.35-4.31(m，1H)，3.75(s，3H)，3.65(s，3H)，3.60(t，1H，J＝3.4Hz)， 3.33(dd，1H，J＝4.6，13.5Hz)，3.03(dd，1H，J＝7，13.5Hz)，2.25-2.15 (m，1H)，1.0(d，3H，J＝7Hz)，0.66(d，3H，J＝7Hz)。

步骤B.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-氟-4-三氟代甲基)苯基-丙氨 酸甲酯

向5.5g(15mmol)(2R，5S)-2，5-二氢-3，6-二甲氧基-2-(2’-氟-4’-(三 氟代甲基)苄基)-5-异丙基吡嗪的50mL乙腈∶二氯甲烷(10∶1)的混合物 溶液中，加入80mL 1N三氟乙酸水溶液。搅拌所述反应物6小时， 真空除去有机溶剂。加入碳酸钠直到溶液呈碱性(＞pH8)，然后用100 mL四氢呋喃稀释所述反应物，加入10g(46mmol)碳酸氢二叔丁酯。 搅拌所生成的浆状物16小时，真空浓缩，然后用乙酸乙酯萃取。用 盐水洗涤合并的有机相，干燥，真空浓缩。经快速层析法纯化(硅胶， 20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到5.1g目标化合物。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ7.38-7.28(m，3H)，5.10(bd，1H)，4.65-3.98(m，1H)， 3.76(s，3H)，3.32-3.25(m，1H)，3.13-3.05(m，1H)，1.40(s，9H)。

步骤C.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-氟-4-三氟代甲基)苯基 丙氨酸

于50℃下，将5.1g(14mmol)的(R，S)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰 基)-2-氟-4-三氟代甲基)苯基丙氨酸甲酯的350mL四氢呋喃∶甲醇∶1N 氢氧化锂(3∶1∶1)混合物的溶液搅拌4小时。冷却该反应物，用5％稀 盐酸酸化，再用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机相，经硫酸 镁干燥，真空浓缩，得到4.8g目标化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD) δ7.45-7.38(m，3H)，4.44-4.40(m，1H)，3.38-3.33(m，1H)，2.98(dd，1H， J＝9.6，13.5Hz)，1.44(s，9H)。

步骤D.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-[2-氟-4-(三氟代甲基)- 苯基]丁酸

0℃下，向3.4g(9.7mmol)步骤C的产物的60mL四氢呋喃溶液 中，顺次加入2.3mL(13mmol)的二异丙基乙胺和1.7mL(13mmol) 氯甲酸异丁基酯，并在此温度下搅拌所述反应物30分钟。再加入冷 却的重氮甲烷的乙醚溶液，直到维持黄色溶液，继续搅拌16小时。 逐滴加入乙酸使过量重氮甲烷猝灭，用乙酸乙酯稀释该反应物，顺 次用5％盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，真 空浓缩。经快速层析纯化(硅胶，己烷∶乙酸乙酯为9∶1)，得到0.5g重 氮酮。于0℃，向0.5g(1.33mmol)溶于100mL甲醇的重氮酮溶液中 相继加入0.7mL(4mmol)二异丙基乙胺和32mg(0.13mmol)苯甲酸 银。将该反应物2小时搅拌，然后用乙酸乙酯稀释再相继用2N盐酸、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。经硫酸镁干燥有机相，真空浓缩， 然后溶于50mL四氢呋喃∶甲醇∶1N氢氧化锂水溶液(3∶1∶1)的混合物， 再于50℃搅拌3小时。冷却所述反应物，用5％稀盐酸酸化，然后用 乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机相，经硫酸镁干燥，真空浓 缩，得到410mg为白色泡沫状固体的目标化合物。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ7.47-7.33(m，3H)，4.88(bs，1H)，4.26-3.98(m，1H)， 3.06-3.01(m，1H)，2.83-2.77(m，1H)，2.58-2.50(m，2H)，1.29(s，9H)。

                        中间物3

(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酸 步骤A.(2S，5R)-2，5-二氢-3，6-二甲氧基-2-异丙基-5-(2’，4’，5’三氟代苄 基)-吡嗪

用中间物2步骤A所述的制备方法，由3.42g(18.5mmol)的 (2S)-2，5-二氢-3，6-二甲氧基-2-异丙基吡嗪制备目标化合物(3.81g)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.01(m，1H)，6.85(m，1H)，4.22(m，1H)， 3.78(m，3H)，3.64(m，3H)，3.61(m，1H)，3.20(m，1H)，2.98(m，1H)，2.20 (m，1H)，0.99(d，3H，J＝8Hz)，0.62(d，3H，J＝8Hz)。

步骤B.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，4，5-三氟代苯基丙氨酸甲酯

向3.81g(11.6mmol)(2S，5R)-2，5-二氢-3，6-二甲氧基-2-异丙基-5- (2’，4’，5’三氟代-苄基)吡嗪的20mL乙腈溶液中，加入20mL2N盐酸。 搅拌所述反应物72小时，然后真空浓缩。使残余物溶于30mL二氯 甲烷中，然后加入10mL(72mmol)三乙胺和9.68g(44.8mmol)碳酸 氢二叔丁酯。搅拌反应物16小时，用乙酸乙酯稀释，然后相继用1N 盐酸和盐水洗涤。经硫酸钠干燥有机相，真空浓缩，经快速层析(硅 胶，己烷∶乙酸乙酯9∶1)纯化，得到2.41g目标产物。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ6.99(m，1H)，6.94(m，1H)，5.08(m，1H)，4.58(m，1H)， 3.78(m，3H)，3.19(m，1H)，3.01(m，1H)，1.41(s，9H)。

步骤C.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，4，5-三氟代苯基丙氨酸

采用中间物2步骤C所述的方法，由2.41g(7.5 mol)(R)-N-(1，1- 二甲基乙氧基羰基)-2，4，5-三氟代苯基丙氨酸甲酯制备目标化合物 (2.01g)。MS(M+1)-BOC 220.9。

步骤D.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)- 丁酸

-20℃下，向0.37g(1.16mmol)(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)- 2，4，5-三氟代苯基丙氨酸的10mL乙醚溶液中，顺次加入0.193mL(1.3 mmol)的三乙胺和0.18mL(1.3mmol)的氯甲酸异丁基酯，并在此温 度下搅拌该反应物15分钟。然后加入冷却的重氮甲烷的乙醚溶液直 到保持黄色溶液，再继续搅拌1小时。经逐滴加入乙酸使过量重氮 甲烷猝灭，用乙酸乙酯稀释该反应物，然后顺次用饱和碳酸氢钠水 溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，真空浓缩。经快速层析(硅胶，己 烷∶乙酸乙酯3∶1)纯化，得到0.36g重氮酮。向溶于12mL1，4-二噁烷∶ 水(5∶1)的0.35g(1.15mmol)重氮酮溶液中，加入26mg(0.113mmol) 苯甲酸银。将所生成的溶液超声振荡2小时，然后用乙酸乙酯稀释， 顺次用1N盐酸和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩。快速层析(硅 胶，二氯甲烷∶甲醇∶乙酸97∶2∶1)纯化，得到401mg目标化合物。1H NMR (500MHz，CDCl3)δ7.06(m，1H)，6.95(m，1H)，5.06(bs，1H)，4.18(m， 1H)，2.98(m，2H)，2.61(m，2H)，1.39(s，9H)。

                        中间体4

(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(4-溴-2，5-二氟代苯基)丁酸 步骤A.4-溴-2，5-二氟代苄基溴

向2g(8.44mmol)4-溴-2，5-二氟代苯甲酸(根据Ishikawa等，Kogyo Kagaku Zasshi，第972-979页，1970的方法制备)的20mL四氢呋喃 溶液中，加入40mL 1M硼烷-四氢呋喃复合物溶液。回流加热该反 应物64小时，冷却到室温，然后加入100mL甲醇。再加热该反应 物2小时，冷却并真空浓缩。经快速层析(硅胶，己烷∶乙酸乙酯9∶1) 纯化，得到1.6g 4-溴-2，5-二氟代苄基醇。0℃下，向1.3g(5.6mmol) 的4-溴-2，5-二氟代苄基醇的20mL二氯甲烷溶液中，加入2.27g(6.7 mmol)四溴化碳和1.8g(6.7mmol)三苯膦。此温度下搅拌该反应物2 小时，真空除去溶剂，用100mL乙醚搅拌所述残余物。过滤所述溶 液，真空浓缩，经快速层析法纯化(硅胶，己烷∶乙酸乙酯9∶1)，得到 1.5g目标化合物。

步骤B.(2S，5R)-2，5-二氢-3，6-二甲氧基-2-异丙基-5-(4’-溴-2’，5’-二氟代 苄基)吡嗪

采用中间体2步骤A所述的方法，由0.865g(4.7mmol)(2S)-2，5- 二氢-3，6-二甲氧基-2-异丙基吡嗪和1.5g(5.2mmol)4-溴-2，5-二氟代苄 基溴制备目标化合物(1.61g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.21(m， 1H)，6.97(m，1H)，4.25(m，1H)，3.78(s，3H)，3.70-3.64(m，4H)，3.25-3.18 (m，1H)，2.96-2.90(m，1H)，2.25-2.16(m，1H)，1.01(d，3H，J＝8Hz)，0.65 (d，3H，J＝8Hz)。

步骤C.(R)-N-1，1-二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸甲 酯

向1.61g(4.14mmol)(2S，5R)-2，5-二氢-3，6-二甲氧基-2-异丙基-5- (4’-溴-2’，5’-二氟代苄基)吡嗪的10mL乙腈溶液中，加入10mL 2N盐 酸。搅拌该反应物16小时，真空浓缩。使残余物溶解于30mL二氯 甲烷，然后加入5.6mL(40mmol)三乙胺和2.2g(10mmol)碳酸氢二 叔丁酯。搅拌该反应物16小时，用乙酸乙酯稀释，然后顺次用饱和 碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。经硫酸镁干燥有机相，真空浓缩，经 快速层析法纯化(硅胶，己烷∶乙酸乙酯9∶1)，得到1.22g目标化合物。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27-7.15(m，1H)，6.98-6.93(m，1H)， 5.08(bs，1H)，4.61-4.55(m，1H)，3.78(s，3H)，3.23-3.18(m，1H)，3.05- 2.95(m，1H)，1.41(s，9H)。

步骤D.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸

采用中间物2步骤C所述的方法，由1.4g(3.5mmol)(R)-N-(1，1- 二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸甲酯制备目标化合物 (1.34g)。MS(M+1)380.3和382.3。

步骤E.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(4’-溴-2’，5’-二氟代 苯基)丁酸

采用中间物3步骤D所述的方法，由0.6g(1.57mmol)(R)-N-(1，1- 二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸制备目标化合物(0.36 g)。MS(M+1)394.1和396.1。

实施例1

7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四 氢咪唑并[1，2-a]吡嗪，二盐酸盐

步骤A.2-(三氟代甲基)咪唑并[1，2-a]吡嗪

向2-氨基吡嗪(5.25g，55.2mmol)的乙醇(120mL)溶液中加入1-溴- 3，3，3-三氟代乙酮(5.73mL，55.2mmol)。回流加热下，搅拌反应物20 小时。溶剂蒸发后，将残留物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之 间分配。用乙酸乙酯萃取含水层(三次)。用盐水洗涤合并的有机相， 经硫酸镁干燥，然后浓缩。经快速层析(硅胶，乙酸乙酯∶己烷1∶1， 然后100％的乙酸乙酯)纯化，得到2.35g固体的目标产物。1H NMR (500MHz，CDCl3)δ8.02(m，2H)，8.13(m，1H)，9.22(s，1H)。ESI-MS 188(M+1)。

步骤B.2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪

向2-(三氟代甲基)咪唑并[1，2-a]吡嗪(2.0g，10.46mmol，来自步骤 A)的甲醇(100mL)溶液中加入10％披钯碳(400mg)。在常压氢气及室 温下，搅拌所述混合物14小时。通过硅藻土过滤该混合物，然后用 甲醇洗涤(三次)。浓缩滤液，然后经快速层析法(硅胶，10％甲醇的乙 酸乙酯溶液，然后用带有1％氢氧化铵水溶液的15％甲醇的氯仿溶液) 纯化，得到1.33g固体的目标化合物。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ 1.93(bs，1H)，3.26(t，2H，J＝5.5Hz)，3.99(t，2H，J＝5.5Hz)，4.10(s，1H)， 7.16(s，1H)。ESI-MS192(M+1)。

步骤C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基) 丁酰基]-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪

0℃下，向2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪(64.3mg， 0.34mmol，得自步骤B)和(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4- 二氟代苯基)丁酸(105.9mg，0.34mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入 HOBT(54.5mg，0.42mmol)。0℃下，搅拌该反应物10分钟，再加入 EDC(96.6mg，0.50mmol)。移去冰浴后，于室温下搅拌所述反应物14 小时。浓缩该混合物，经HPLC(Gilson；YMC-Pack Pro C18柱，100 ×20mm I.D.；溶液梯度从10％乙腈、90％水和0.1％三氟乙酸至90％ 乙腈、10％水和0.1％三氟乙酸)纯化，得到115mg泡沫状固体的目 标化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.36(s，9H)，2.62(m，2H)， 2.86(m，2H)，3.34(bs，1H)，3.86(m，1H)，4.05(m，4H)，4.85(m，1H)，5.30- 5.38(m，1H)，6.97(m，3H)，7.28(m，1H)。LC/MS 489(M+1)。

步骤D.7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-2-(三氟代甲基)- 5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪，二盐酸盐

向7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-[3，4-二氟代苯基]丁 酰基]-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪(110.8mg，0.226 mmol，得自步骤C)中，加入2mL用氯化氢饱和的甲醇。室温下搅 拌所述反应物1小时。浓缩得到89.5mg泡沫状固体目标化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ2.97-3.10(m，4H)，3.91-4.34(m，5H)，4.90- 5.04(m，2H)，7.16-7.33(m，2H)，8.01-8.08(m，1H)。ESI-MS 389 (M+1)。

实施例2

7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁酰基]-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四 氢咪唑并[1，2-a]吡嗪，二盐酸盐

步骤A.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基) 丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪

除其提纯方法外，采用类似于实施例1的步骤C中所述的方法， 由2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪(277mg，1.45mmol， 得自实施例1的步骤B)、(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5- 二氟代苯基)丁酸(中间物1，416mg，1.32mmol)、DIPEA(226mg，1.58 mol)、HOBT(216mg，1.98mol)和HATU(753mg，1.98mol)在DMF 溶液(6ml)中制备目标化合物。用制备性TLC(硅胶，先用20％己烷 的乙酸乙酯溶液，再用10％甲醇的二氧甲烷溶液)纯化，得到360mg的 泡沫状固体的目标化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.35(s，9H)， 2.62(m，2H)，2.88(m，2H)，3.88-4.16(m，5H)，4.73(s，1H)，4.85(m，1H)， 5.26-5.39(m，1H)，6.90(bs，1H)，7.06(m，2H)，7.24(m，1H)。ESI-MS 489 (M+1)。

步骤B.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁酰基-5，6，7，8-四氢咪唑 并[1，2-a]吡嗪，二盐酸盐

采用类似于实施例1步骤D所述的方法，由用氯化氢饱和的1.5 mL甲醇中的7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，5-二氟代 苯基)丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪(349.8mg，0.72mol，得自 步骤A)制备目标化合物。蒸发溶剂，得到299mg泡沫状固体目标 化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)：δ3.10-3.17(m，2H)，2.89-2.99 (m，2H)，3.94-4.22(m，4H)，4.33(m，1H)，4.91-5.48(m，2H)，7.07-7.23(m， 3H)，8.05(m，1H)。ESI-MS 389(M+1)。

                       实施例3

7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四 氢咪唑并[1，2-a]吡嗪，二盐酸盐

步骤A.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯 基)丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪

采用类似于实施例1的步骤C所述的方法，由2-(三氟代甲基)- 5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪(31.7mg，0.166mmol，得自实施例1的 步骤B)、(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基) 丁酸(中间体3，57mg，0.166mmol)、HOBT(26.9mg，0.199mmol)和 EDC(47.8mg，0.249mol)的4mL二氯甲烷溶液制备目标化合物。用 制备性TLC(硅胶，先用100％乙酸乙酯，再用10％甲醇的二氯甲烷 溶液)纯化，得到40mg的泡沫状固体的目标化合物。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ1.35(s，9H)，3.00(m，2H)，3.30(m，2H)，3.93(m，1H)， 4.04-4.24(m，2H)，4.23(s，1H)，4.35(m，1H)，4.97-5.48(m，2H)，7.22(m， 1H)，7.44(m，1H)，8.04(m，1H)。ESI-MS 507(M+1)。

步骤B.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑 并[1，2-a]吡嗪，二盐酸盐

采用类似于实施例1的步骤D所述的方法，由用氯化氢饱和的 1.5mL甲醇中的7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三 氟代苯基)丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪(38mg，0.075mmol， 得自步骤A)制备目标化合物。蒸发溶剂，得到34mg泡沫状固体目 标化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)：δ2.59-2.66(m，2H)，2.92(m， 2H)，3.89-4.16-4.22(m，5H)，4.70-4.84(m，2H)，5.42(m，1H)，6.86(m， 1H)，7.06(m，1H)，7.24(m，1H)。ESI-MS 407(M+1)。

                        实施例4

7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a] 吡嗪，二盐酸盐

步骤A.咪唑并[1，2-a]吡嗪

向2-氨基吡嗪(2.0g，21.03mmol)的乙醇(40mL)溶液中加入2-溴- 1，1-二甲氧基乙烷(2.5mL，21.03mmol)，再滴入5滴浓盐酸。回流14 小时后，蒸发溶剂。将所述残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶 液之间分配。用乙酸乙酯萃取含水层(三次)。用盐水洗涤合并的有机 相，经硫酸镁干燥，浓缩。经快速层析(100％乙酸乙酯，10％甲醇的 乙酸乙酯溶液，然后10％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到536g固 体的目标产物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.70(bs，1H)，7.82(bs， 1H)，7.89(d，1H，J＝4.4Hz)，8.10(d，1H，J＝4.6Hz)，9.12(s，1H)。

步骤B.5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪

采用类似于实施例1步骤B所述的方法，由咪唑并[1，2-a]吡嗪(500 mg，4.20mmol，得自步骤A)和氧化铂(250mg)在甲醇(50mL)中制备目 标化合物。浓缩得到粘性油状物的目标化合物(512mg)。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ3.37(t，1H，J＝5.5Hz)，4.18(t，2H，J＝5.6Hz)，4.88(s， 1H)，7.27(d，J＝1.6Hz，1H)，7.33(d，1H)。

步骤C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基) 丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪

采用类似于实施例1步骤C所述的方法，由5，6，7，8-四氢咪唑并 [1，2-a]吡嗪(31.3mg，0.254mmol，得自步骤B)、(3R)-3-[(1，1-二甲基乙 氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁酸(80mg，mmol)、DIPEA(32.8 mg，0.254mmol)、HOBT(41.2mg，0.305mmol)和EDC(73mg，0.381 mmol)的5mL二氯甲烷溶液制备目标化合物。经HPLC(Gilson； YMC-Pack Pro C18柱，100×20mm I.D.；溶液梯度从10％乙腈、90％ 水和0.1％三氟乙酸至90％乙腈、10％水和0.1％三氟乙酸)纯化，得到 75 mg粘性油状物的目标化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.38 (s，9H)，2.05(bs，1H)，2.62(m，2H)，2.89(m，2H)，3.81-4.04(m，5H)，4.64- 4.88(m，2H)，5.38(m，1H)，6.88(m，2H)，7.05(m，3H)。ESI-MS 421 (M+1)。

步骤D.7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑 并[1，2-a]吡嗪，二盐酸化物

采用类似于实施例1步骤D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲 基乙氧基羰基)-氨基]-4-[3，4-二氟代苯基]丁酰基]-5，6，7，8-四氢咪唑并 [1，2-a]吡嗪(72mg，0.171mmol，得自步骤C)在用氯化氢饱和的1.5mL 甲醇中制备目标化合物。浓缩得到66mg泡沫状固体目标化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ2.96-3.13(m，4H)，3.93(m，1H)，4.13(m， 2H)，4.26-4.38(m，2H)，4.26-4.38(m，2H)，4.90-5.04(m，2H)，7.19-7.36 (m，3H)，7.58(m，1H)。ESI-MS 321(M+1)。

实施例5

7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-3-乙基-5，6，7，8-四氢-1，2，4- 三唑并[4，3-a]吡嗪，二盐酸盐

步骤A.8-氯-3-乙基-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪

3-氯-2-肼基吡嗪(向采用类似于文献(Huynh-Dinh等，J.Org.Chem. 1979，44，1028)所述方法由2，3-二氯吡嗪和肼制备)(3.0g，20.75 mmol) 中，加入8mL邻丙酸三乙酯。回流加热10小时后，使反应液冷却 到室温，然后过滤沉淀。经快速层析(先用100％乙酸乙酯，再用10％ 甲醇的乙酸乙酯溶液)提纯所述固体，得到2.73g固体的目标产物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.54(t，3H，J＝7.6Hz)，3.16(q，2H，J＝7.8 Hz)，7.70(d，1H，J＝4.5Hz)，7.83(d，1H，J＝4.8Hz)。

步骤B.3-乙基-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，盐酸盐

在paar振荡器中，氢气下(50psi)由8-氯-3-乙基-1，2，4-三唑并[4，3-a] 吡嗪(2.70g，14.8mmol，得自步骤A)和氧化铂(0.4g)在200mL甲醇中 反应14小时，制备目标化合物。经硅藻土过滤后，再浓缩得到固体 状目标化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.36(t，3H，J＝6.0Hz)， 2.84(q，2H，J＝6.0Hz)，3.70(t，2H，J＝8.0Hz)，4.28(t，2H，J＝8.0Hz)，4.06 (s，2h)。ESI-MS153(M+1)。

步骤C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基) 丁酰基]-3-乙基-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪

采用类似于实施例1步骤C所述的方法，由3-乙基-5，6，7，8-四氢 -1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪盐酸盐(400mg，2.12mmol，得自步骤B)、 (3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁酸(668mg， 2.12mmol)、DIPEA(1.1mL，4.24mmol)、HOBT(343.8mg，2.54mmol) 和EDC(609.6mg，3.18mmol)在20mL二氯甲烷中制备所述标题化合 物。经HPLC(Gilson；YMC-Pack Pro C18柱，100×20mm I.D.；溶液 梯度从10％乙腈、90％水和0.1％三氟乙酸至90％乙腈、10％水和0.1％ 三氟乙酸)提纯该粗产物，得到366.3mg粘性油状物的目标化合物。 1HNMR(500 MHz，CDCl3)δ1.31-1.34(m，12H)，2.67-2.92(m，6H)， 4.03-4.12(m，4H)，5.03-5.31(m，3H)，6.93(s，1H)，7.05(m，2H)。ESI- MS 450(M+1)。

步骤D.7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-3-乙基-5，6，7，8-四 氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，二盐酸盐

采用类似于实施例1步骤D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲 基乙氧基羰基)-氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-3-乙基-5，6，7，8-四氢- 1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(30mg，0.067mmol，得自步骤C)在用氯化氢 饱和的1.5mL甲醇中制备目标化合物。蒸发溶剂得到28mg粘性油 状物的目标化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.45(t，3H)，2.93- 3.07(m，6H)，3.90-4.31(m，5H)，5.08(m，2H)，7.16(s，1H)，7.31(m， 2H)。ESI-MS 350(M+H)。

                        实施例6

7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四 氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，盐酸盐

步骤A.3-(三氟代甲基)-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪

搅拌下，将用类似于文献(P.J.Nelson和K.T.Potts，J.Org.Chem. 1962，27，3243，除将粗产物萃取入10％甲醇/二氯甲烷中，过滤，浓 缩滤液，再采用硅胶、以100％乙酸乙酯再用10％甲醇的二氯甲烷作 为洗脱液，快速层析提纯之外)所述方法由2-氯代吡嗪和肼制备的2- 肼基吡嗪(820mg，7.45mmol)、TFA(2.55 ，22.4mmol)和多聚磷酸(10 mL)的混合物加热至140℃18小时。将该溶液加入到冰中，然后通过 加入氢氧化铵中和。用乙酸乙酯萃取该含水溶液(3次)，用盐水洗涤， 然后经无水硫酸镁干燥。浓缩后，经快速层析(硅胶，己烷∶乙酸乙酯 1∶1，然后用100％乙酸乙酯)，得到固体的目标产物(861mg)。1H NMR (500MHz，CDCl3)δ8.17-8.20(m，2H)，9.54(s，1H)。LC/MS(M+1) 189。

步骤B.3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪

在室温下，在常压氢气下，用10％Pd/C(200mg)作为催化剂， 在乙醇(10mL)中，将3-(三氟代甲基)-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(540mg， 2.87mmol，得自步骤A)氢化18小时。经Celite过滤后，浓缩得到深 色油状物。向上述油状物中加入二氯甲烷，滤出不溶性的黑色沉淀。 浓缩该滤液，得到油状物的目标化合物(495mg)。1H NMR(500MHz， CDCl3)δ2.21(br，1H)，3.29(t，2H，J＝5.5Hz)，4.09(t，2H，J＝5.5Hz)， 4.24(s，2H)。LC/MS(M+1)193。

步骤C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基) 丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪

采用类似于实施例1步骤C所述的方法，由(3R)-3-[(1，1-二甲基 乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酸(中间物1，50mg，0.16 mmol)和3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(30mg， 0.16mmol)制备所述标题化合物。经制备性TLC(硅胶，先用100％乙 酸乙酯，再用10％甲醇/二氯代甲烷(2遍))纯化粗产物，得到固体状 的目标化合物(38.1mg)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.38(s，9H)， 2.57-3.05(m，4H)，3.85-4.30(m，5H)，4.90(s，1H)，4.95-5.15(m，1H)， 5.22-5.40(br，1H)，6.86-7.24(m，3H)。LC/MS(M+1-t-Boc)390。

步骤D.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)- 5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，盐酸盐

采用类似于实施例1步骤D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲 基乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)- 5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(19.1mg，0.039mmol，得自步骤 C)制备目标化合物。浓缩得到固体的目标化合物(16.1mg)。1H NMR (500MHz，CD3OD)δ2.75-3.16(m，4H)，3.86-4.35(m，5H)，4.95-5.05 (m，2H)，7.03-7.20(m，3H)。LC/MS(M+1)390。

                            实施例7

7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四 氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，盐酸盐

步骤A.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯 基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪

采用类似于实施例1步骤C所述的方法，由(3R)-3-[(1，1-二甲基 乙氧基羰基)氨基]4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酸(中间物3，50.1mg，0.15 mmol)和3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(39.2 mg，0.20mmol)制备目标化合物。经制备型TLC(硅胶，100％乙酸 乙酯)纯化粗产物，得到固体的目标产物(29mg)。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ1.37(s，9H)，2.61-3.00(m，4H)，3.92-4.30(m，5H)，4.93 (s，1H)，4.95-5.12(m，1H)，5.22-5.35(br，1H)，6.83-6.95(m，1H)，7.02- 7.12(m，1H)。LC/MS(M+1-t-Bu)452。

步骤B.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲 基)-5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，盐酸盐

采用类似于实施例1步骤D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲 基乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)- 5，6，7，8-四氢-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(22mg，0.039mmol，得自步骤A) 制备目标化合物。浓缩得到固体的目标化合物(16.5mg)。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ2.75-3.15(m，4H)，3.82-4.35(m，5H)，4.90-5.05(m， 2H)，7.16-7.25(m，1H)，7.30-7.42(m，1H)。LC/MS(M+1)408。

基本按照实施例1-7所述的方法，制备列于表1中的化合物。

表1

  实施例  R3  X  R1  MS(M+1)     8  2-F  C-Et  H  331     9  3-F，4-F  C-Et  H  349     10  2-F  CH  H  303     11  2-F  C-CF3  H  371     12  3-F，4-F  C-(4-F-Ph)  H  415     13  3-F，4-F  C-Ph  H  397     14  3-F，4-F  C-(4-OMe-Ph)  H  427     15  3-F，4-F  C-(3-F，4-F-Ph)  H  433     16  3-F，4-F  C-(4-OCF3-Ph)  H  481     17  3-F，4-F  C-C2F5  H  439     18  2-F  N  Et  352     19  3-F，4-F  N  Et  336     20  2-F  N  Me  318     21  2-F，5-F  N  Et  350     22  2-F  N  H  304     23  3-F，4-F  N  H  322     24  3-F，4-F  N  CF3  390     25  2-F，4-CF3  N  CF3  440     26  3-F，4-F  N  CH2CF3  404     27  2-F，5-F  N  CH2CF3  404     28  2-F  CH  CH2Ph  393     29  2-F  CH  Ph  379     30  2-F，4-CF3  C-CF3  H  439     31  2-F，4-F，5-F  C-CF2CF3  H  379     32  4-Br，2-F，5-F  C-CF3  H  467，469     33  4-Br，2-F，5-F  N  CF3  468，470

尽管己通过本发明的某些具体实施方案描述和说明了本发明， 但本领域的技术人员理解，在不背离本发明的精神和范围下，可对 本发明的方法和方案进行各种修改、变化、修饰、替换、减少或增 加。例如，可将有效剂量(而不是本文前面提出的具体剂量)看作是用 上述本发明的化合物来治疗哺乳动物的任何所述症状的响应的变量 结果。根据并依据所选的具体活性化合物或是否含有药物载体以及 所用的制剂形式和用药方式，可观察到具体药理学响应会变化，而 且这些结果中所预期的变化或差别与本发明的目的和实现一致。因 此，计划通过后面的权利要求书来定义本发明，并对本权利要求书 作合理的广义理解。