利用水溶性高分子的细胞培养支架
阅读：107发布：2020-05-13
专利汇可以提供利用水溶性高分子的细胞培养支架专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及利用 水 溶性高分子的细胞培养 支架 ，作为使细胞粘附来培养的支架，其特征在于，上述支架由 纤维 网形成，上述纤维网通过使包含利用电纺丝取得的 水溶性 高分子及合成高分子的纤维蓄积来形成用于渗透培养液的多个气孔，由于上述纤维的水溶性高分子缓慢地上述培养液溶解，因而上述纤维的直径缓慢地减小，使得上述细胞生长并从上述纤维网洗脱。，下面是利用水溶性高分子的细胞培养支架专利的具体信息内容。
1.一种利用水溶性高分子的细胞培养支架，作为使细胞粘附来培养的支架，其特征在于，
上述支架由纤维网形成，上述纤维网通过使包含利用电纺丝取得的水溶性高分子及合成高分子的纤维蓄积来形成用于使培养液渗透的多个气孔，
由于上述纤维的水溶性高分子在上述培养液中缓慢溶解，因而上述纤维的直径缓慢减小，使得上述细胞生长来从上述纤维网洗脱。
2.根据权利要求1所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述纤维包含10～50重量百分比的上述水溶性高分子。
3.根据权利要求1所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述水溶性高分子包含选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚氧化乙烯、羧甲基纤维素、淀粉、聚丙烯酸及透明质酸中的一种或两种以上的混合物。
4.根据权利要求1所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述纤维的直径为100nm～10μm。
5.根据权利要求1所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述合成高分子为生物降解性高分子。
6.根据权利要求5所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述生物降解性高分子为聚乳酸、聚左旋乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚己内酯及对二氧环己酮中的一种。
7.根据权利要求1所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述纤维包含亲水处理用添加剂。
8.根据权利要求7所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述亲水处理用添加剂为聚山梨酯80、普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮中的一种。
9.根据权利要求1所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，还包括形成于上述纤维的多个微珠，以确保使上述细胞向上述纤维网的内部渗透来生长的空间。
10.根据权利要求9所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述纤维网为利用混合上述水溶性高分子、上述合成高分子及溶剂的纺丝溶液进行电纺丝而成的网，上述纺丝溶液的粘度为50～2000cps。
11.根据权利要求9所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述微珠的直径大于上述纤维的直径。
12.一种利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，包括：
第一纤维网，包含水溶性高分子及合成高分子，由形成有微珠的第一纤维蓄积而成，第二纤维网，包含水溶性高分子及合成高分子，在上述第一纤维网上由形成有微珠的第二纤维蓄积而成，
第三纤维网，包含水溶性高分子及合成高分子，在上述第二纤维网上由形成有微珠的第三纤维蓄积而成。
13.根据权利要求12所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述第二纤维的直径小于上述第一纤维及第三纤维的直径。
14.根据权利要求12所述的利用水溶性高分子的细胞培养支架，其特征在于，上述第一纤维网及第三纤维网的厚度小于上述第二纤维网的厚度。
利用水溶性高分子的细胞培养支架
技术领域
背景技术
[0004] 像这样的细胞培养需要用于提供与体内相似的培养环境的培养支架。
[0005] 在培养支架上培养的细胞以粘附的状态生长，可通过提高细胞对培养支架的粘附性，来提高细胞的生存率。
[0006] 因此，目前不断研究及开发新培养支架，以提高细胞的粘附性，并使细胞的培养环境进一步优化。
[0007] 韩国公开专利公报第2007-0053443号公开了通过对纤维纺丝原液进行电纺丝工序，来由三维结构的海绵形态的纤维形成的支架的制造方法，但支架的纤维层具有规定直径的线形状，支架的气孔定义为在多个纤维之间存在的气孔。
[0008] 因此，由于细胞难以通过支架的微细气孔渗透到支架的内部来生长，因而仅允许细胞的二维生长，来使细胞以优选的形状和骨架生长受到限制，并且由于细胞粘附支架来生长，而存在细胞生长后难以为分化而从支架分离细胞的缺点。
发明内容
[0009] 技术问题
[0010] 本发明是鉴于上述情况而提出的，本发明的目的在于，提供细胞粘附于支架后，水溶性高分子在培养液中缓慢溶解来使生长的细胞从纤维网洗脱的利用水溶性高分子的细胞培养支架。
[0011] 本发明的另一目的在于，提供使所培养的细胞向纤维网内部渗透来生长而使细胞以不变形形状及骨架的状态生长的利用水溶性高分子的细胞培养支架。
[0012] 解决问题的方案
[0013] 用于实现上述目的的本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架的特征在于，由纤维网形成，上述纤维网通过使包含利用电纺丝取得的水溶性高分子及合成高分子的纤维蓄积来形成用于使培养液渗透的多个气孔，由于上述纤维的水溶性高分子在上述培养液中缓慢溶解，因而上述纤维的直径缓慢减小，使得上述细胞生长来从上述纤维网洗脱。
[0014] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述纤维可包含10～50重量百分比的上述水溶性高分子。
[0015] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述水溶性高分子可包含选自聚乙烯醇(PVA，polyvinyl alcohol)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP，polyvinyl pyrrolidone)、聚氧化乙烯(PEO，polyethylene oxide)、羧甲基纤维素(CMC，carboxyl methyl cellulose)、淀粉(starch)、聚丙烯酸(PAA，polyacrylic acid)及透明质酸(Hyaluronic acid)中的一种或两种以上的混合物。
[0016] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述纤维的直径可以为100nm～10μm。
[0017] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述合成高分子可以为生物降解性高分子。
[0018] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述生物降解性高分子可以为聚乳酸(PLA)、聚左旋乳酸(PLLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)及对二氧环己酮(PDO)中的一种。
[0020] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述亲水处理用添加剂可以为聚山梨酯80(Tween80)、普朗尼克(Pluronic)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)中的一种。
[0021] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，还可包括形成于上述纤维的多个微珠，以确保使上述细胞向上述纤维网的内部渗透来生长的空间。
[0022] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述纤维网可以为通过利用混合上述水溶性高分子、上述合成高分子及溶剂的纺丝溶液进行电纺丝而成的网，上述纺丝溶液的粘度可以为50～2000cps。
[0023] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述微珠的直径可大于上述纤维的直径。
[0024] 用于实现本发明的另一目的的利用水溶性高分子的细胞培养支架的特征在于，包括：第一纤维网，包含水溶性高分子及合成高分子，由形成有微珠的第一纤维蓄积而成，第二纤维网，在上述第一纤维网包含水溶性高分子及合成高分子，由形成有微珠的第二纤维蓄积而成，第三纤维网，在上述第二纤维网包含水溶性高分子及合成高分子，由形成有微珠的第三纤维蓄积而成。
[0025] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述第二纤维的直径可小于上述第一纤维及第三纤维的直径。
[0026] 在根据本发明的一实施例的利用水溶性高分子的细胞培养支架中，上述第一纤维网及第三纤维网的厚度可小于上述第二纤维网的厚度。
[0027] 发明的效果
[0028] 本发明具有如下的优点，即，将包含水溶性高分子的纤维网用作细胞培养支架，以使细胞粘附于支架后，水溶性高分子在培养液中缓慢溶解，来使生长的细胞从纤维网洗脱。
[0029] 即，在本发明的细胞培养支架中，细胞生长后自发洗脱，从而不需要为了分化而将细胞从支架分离的工序，还可防止从支架分离细胞时所产生的细胞受损。
[0030] 本发明通过由具有与人体的细胞外基质(ECM，Extra Cellular Matrix)最相似的结构的纤维网实现利用水溶性高分子的细胞培养支架，来对细胞培养提供熟悉且适合的培养环境，从而可使细胞的生存率极大化。
[0031] 本发明具有如下的优点，即，通过形成挂在纤维网的纤维上的多个微珠，来在微珠与纤维之间以及微珠与微珠之间提供扩大的空间，以使所培养的细胞向纤维网内部渗透来生长，从而使细胞以不变形的形状及骨架的状态生长。
[0032] 本发明可提供如下的支架，即，以三层层叠的纤维网结构来实现细胞培养支架，来使细胞容易地粘附，细胞可向层叠结构内部渗透来生长，通过防止向层叠结构内部渗透来生长的细胞从层叠结构的底面逸出，使细胞以优选的形状及骨架来进行生长。附图说明
[0033] 图1为示意性示出在本发明的利用水溶性高分子的细胞培养支架培养的细胞被洗脱的状态的图。
[0034] 图2a、图2b、图2c为示意性示出本发明的由随着时间的流逝而被溶解的水溶性高分子，而状态被改变的细胞培养支架的图。
[0035] 图3为用于说明在本发明的利用水溶性高分子的细胞培养支架形成有微珠的状态的立体图。
[0037] 图5为示意性示出本发明中向细胞培养支架的内侧生长的细胞所渗透的状态的图。
[0038] 图6为用于说明制造本发明的利用水溶性高分子的细胞培养支架的电纺丝装置的示意图。
[0039] 图7为本发明的层叠的细胞培养支架的剖视图。
[0040] 图8为用于说明本发明的层叠结构的细胞培养支架的制造方法的示意性剖视图。
具体实施方式
[0041] 以下，参照附图对用于实施本发明的具体内容进行说明。
[0042] 本发明的特征在于实现如下的支架，即，将形成有多个气孔的纤维网用作细胞培养支架，上述纤维网是利用混合水溶性高分子、合成高分子及溶剂的纺丝溶液进行电纺丝而成的，以使细胞粘附于支架后，水溶性高分子在培养液中缓慢溶解，来使生长的细胞从纤维网洗脱。
[0043] 并且，本发明具有如下的结构特征，即，将形成有多个气孔的纤维网用作用于培养细胞的支架，上述纤维网是使包含利用电纺丝取得的水溶性高分子及合成高分子的纤维蓄积而成的，在纤维网的纤维形成有多个微珠(bead)，以形成使所培养的细胞可向纤维网内部渗透来生长的空间。
[0044] 参照图1，本发明的利用水溶性高分子的细胞培养支架由形成有多个气孔的纤维网形成，上述纤维网由利用混合水溶性高分子、合成高分子及溶剂的纺丝溶液进行电纺丝取得的纤维蓄积而成。
[0045] 本发明的细胞培养支架中粘附有细胞，浸渍于培养液的状态下培养细胞，由于水溶性高分子被培养液缓慢地溶解，因而纤维的直径减小，使得生长的细胞从培养支架洗脱。
[0046] 即，随着包含在细胞培养支架的纤维的水溶性高分子缓慢地被溶解，从而细胞对于纤维的粘附力降低，当从由水溶性高分子及合成高分子形成的纤维溶解并逸出大部分水溶性高分子时，细胞可从纤维隔开并被洗脱。
[0047] 水溶性高分子和合成高分子的总重量中，优选地，包含10～50重量百分比的水溶性高分子，换言之，在由水溶性高分子和合成高分子形成的纤维中，包含10～50重量百分比的水溶性高分子。
[0048] 其中，在纤维中，在包含小于10重量百分比的水溶性高分子的情况下，存在因被培养液中溶解的纤维的含量少，而使细胞难以从纤维分离，从而不被洗脱的缺点，当水溶性高分子的含量大于50重量百分比的情况下，存在因被培养液溶液的纤维的含量过多，而使纤维网的形态变形，从而成为难以再培养细胞的状态的缺点。
[0049] 而且，优选地，纤维网的纤维的直径为100nm～10μm。
[0050] 水溶性高分子可包含选自聚乙烯醇(PVA，polyvinyl alcohol)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP，polyvinyl pyrrolidone)、聚氧化乙烯(PEO，polyethylene oxide)、羧甲基纤维素(CMC，carboxyl methyl cellulose)、淀粉(starch)、聚丙烯酸(PAA，polyacrylic acid)及透明质酸(Hyaluronic acid)中的一种或两种以上的混合物。
[0051] 合成高分子作为可进行电纺丝的，可以为电纺丝而溶解于有机溶剂，只要是可利用电纺丝而形成纤维的树脂，不做特殊限制。例如，可列举聚偏二氟乙烯(PVdF)、聚偏氟乙烯-六氟丙烯共聚物(poly(vinylidene fluoride co-hexafluoropropylene))、全氟高分子(perfluoro polymer)、聚氯乙烯(polyvinyl chloride)、聚偏二氯乙烯(polyvinylidene chloride)或其共聚物、包含聚乙二醇二烷基醚(polyethylene glycol dialkyl ether)及聚乙二醇二烷基酯(polyethylene glycol dialkyl ester)的聚乙二醇(polyethylene glycol)衍生物、包含聚(甲醛-寡-氧乙烯)(poly(oxymethylene-oligo-oxyethylene))、聚氧化乙烯(polyethylene oxide)及聚环氧丙烷(polypropylene oxide)的多氧化物(polyoxide)、包含聚醋酸乙烯酯(polyvinyl acetate)、乙烯基吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物(poly(vinylpyrrolidone-vinyl acetate))、聚苯乙烯(polystyrene)及聚苯乙烯丙烯腈共聚物(Polystyrene acrylonitrile copolymer)、聚丙烯腈(PAN，polyacrylonitrile)、聚丙烯腈甲基丙烯酸甲酯共聚物(polyacrylonitrile methyl methacrylate copolymer)的聚丙烯腈共聚物(polyacrylonitrile copolymer)、聚甲基丙烯酸甲酯(polymethyl methacrylate)、聚甲基丙烯酸甲酯共聚物(Polymethyl methacrylate copolymer)或其混合物。
[0052] 并且，可使用的合成高分子包括聚酰胺(polyamide)、聚酰亚胺(polyimide)、聚酰胺-酰亚胺(polyamideimide)、聚(间苯二甲酰间苯二胺)(poly(meta-phenylene isophthalamide))、聚砜(polysulfone)、聚醚酮(polyether ketone)、聚醚酰亚胺(polyetherimide)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate)、聚对苯二甲酸丙二醇酯(polytrimethylene terephthalate)、聚萘二甲酸乙二酯(polyethylene naphthalate)等的芳香族聚酯(aromatic polyester)、聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene)、聚二苯氧基磷腈(polydiphenoxy phosphazene)、聚比二(二甲氧基乙氧基)磷腈(poly{bis[2-(2-methoxyethoxy)phosphazene]})等的聚磷腈(polyphosphazene)类、包含聚氨酯(polyurethane)及聚醚聚氨酯丙烯酸酯(polyether urethane)的聚氨酯共聚物(polyurethane copolymer)、醋酸纤维素(cellulose acetate)、乙酸丁酸纤维素(cellulose acetate butyrate)、醋酸丙酸纤维素(cellulose acetate propionate)等。
[0053] 溶剂可使用选自由二甲基乙酰胺(DMAc，N,N-Dimethyl acetoamide)、二甲基甲酰胺(DMF，N,N-Dimethylformamide)、甲基吡咯烷酮(NMP，N-methyl-2-pyrrolidinone)、二甲基亚砜(DMSO，dimethyl sulfoxide)、四氢呋喃(THF，tetra-hydrofuran)、碳酸乙烯酯(EC，ethylene carbonate)、碳酸二乙酯(DEC，diethyl carbonate)、碳酸二甲酯(DMC，dimethyl carbonate)、碳酸甲乙酯(EMC，ethyl methyl carbonate)、碳酸丙烯酯(PC，propylene carbonate)、水、醋酸(acetic acid)、蚁酸(formic acid)、三氯甲烷(Chloroform)、二氯甲烷(dichloromethane)、丙酮(acetone)及异丙醇(isopropylalchol)组成的组中的一种以上。
[0054] 像这样，由利用混合水溶性高分子、合成高分子及溶剂的纺丝溶液进行电纺丝取得的纤维网蓄积形成并具有多个气孔的细胞培养支架在细胞粘附后，在浸渍在培养液的状态下培养细胞。
[0055] 此时，如图1所示，水溶性高分子在培养液中缓慢溶解，来使生长的细胞151、152从形成细胞培养支架100的纤维网110洗脱。
[0056] 即，如图2a所示，在浸渍于培养液的状态下，细胞粘附于纤维网110的纤维121，随着时间的流逝，细胞进行生长且包含在纤维121的水溶性高分子溶解于培养液，从而成为图2b所示的具有直径d2的纤维122，其中直径d2小于最初细胞粘附的状态下的纤维121的直径d1。
[0057] 之后，随着时间进一步流逝，细胞进一步生长且大部分包含在纤维121的水溶性高分子溶解于培养液，如图2c所示，纤维123中几乎不残留水溶性高分子，仅残留合成高分子，使得纤维123的直径d3最大限度地被减少，致使粘附于纤维123的细胞被洗脱。
[0058] 像这样，粘附于本发明的细胞培养支架100来生长的细胞中，由于纤维121、122、123中的水溶性高分子溶解于培养液，从而对细胞培养支架100的细胞的粘附性降低，使细胞以从细胞培养支架100漂浮的状态，即，洗脱的状态进行生长。
[0059] 另一方面，在本发明中，可将生物降解性高分子用作合成高分子。生物降解性高分子可使用聚乳酸、聚左旋乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚己内酯及对二氧环己酮中的一种。
[0060] 即，将具有通过使利用混合水溶性高分子、生物降解性高分子及溶剂的纺丝溶液进行电纺丝取得的纤维蓄积来形成的多个气孔的纤维网用作细胞培养支架，在细胞培养中，水溶性高分子被溶解，由生物降解性高分子形成的细胞培养支架100在培养细胞后，移植到体内并帮助细胞的分化，其结束后，可分解来从体内排出体外，因此本发明可实现移植在体内并被分解的细胞培养支架。
[0061] 生物降解性高分子可定义为由自然界中存在的细菌、藻类、霉菌等的微生物完全分解为水和二氧化碳或水和甲烷气体的高分子。可以说，是所谓的腐烂性塑料，其物理性、化学性结构由自然界中的细菌等的有机物质改变。
[0062] 像这样的生物降解性高分子具有按照高分子的种类，其生物降速度大有变化的特性，可通过较快分解的高分子和缓慢分解的高分子的组成比率来调节分解速度，因此，本发明还存在如下的优点，即，将已培养细胞的细胞培养支架移植到体内后，可按照细胞的分化速度来控制细胞培养支架的分解速度。
[0063] 因此，本发明的利用基于生物降解性高分子的水溶性高分子的细胞培养支架可使细胞容易地粘附，可无副作用地移植到体内，并且在移植到体内后，分化到所需功能的脏器或器官后，可进行分解。
[0064] 并且，在本发明中，用作细胞培养支架的纤维网具有与人体的细胞外基质(ECM，Extra Cellular Matrix)最相似的结构，因而由该纤维网形成的支架可对细胞培养提供熟悉且适合的培养环境，因此可使细胞的生存率极大化。
[0065] 参照图3，根据本发明的细胞培养支架100作为使细胞粘附来培养的支架，包括：纤维网110，由包含水溶性高分子及合成高分子的纤维120蓄积而成，形成有多个气孔125；以及形成于上述纤维120的多个微珠130，以确保使上述细胞向上述纤维网110的内部渗透来生长的空间。
[0066] 在图3中观察纤维网110的A区域的扩大图，包含水溶性高分子及合成高分子的纤维120不均匀地蓄积来形成平板形状的纤维网110，在蓄积的纤维120之间形成有多个气孔125。
[0067] 其中，在纤维120形成有多个微珠130。
[0068] 而且，微珠130的直径大于纤维120的直径，微珠130可定义为由生物降解性高分子所凝聚的块。此时，在所有纤维120分别形成有至少一个微珠130，或在所有纤维120中的部分纤维120形成有至少一个微珠130。
[0069] 在本发明中，混合水溶性高分子、合成高分子及溶剂来制备纺丝溶液，利用该纺丝溶液在后述的纺丝装置的喷嘴进行电纺丝，形成挂有微珠130的纤维120，并通过蓄积该纤维120来制造用于细胞培养支架100的纤维网110。
[0070] 此时，本发明的特征在于，为了实现具有微珠的纤维，将混合水溶性高分子、合成高分子及溶剂的纺丝溶液的粘度设为50～2000cps。
[0071] 其中，当纺丝溶液的粘度小于50cps时，由于纺丝溶液的流动性高，因而从纺丝装置的喷嘴喷射液滴(droplet)，当纺丝溶液的粘度大于2000cps时，因纺丝溶液中的有机溶剂量减少，而具有低流动性，从而从纺丝装置的喷嘴仅纺丝纤维。
[0072] 本发明的发明人通过实验确认了在从纺丝喷嘴电纺丝而成的纤维120形成微珠与纺丝溶液的粘度有密切的关联。
[0073] 即，排除水溶性高分子，并且作为合成高分子应用分子量为130000的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，以使粘度成为2100cps的方式对聚乳酸-羟基乙酸共聚物和溶剂进行混合并进行电纺丝，其结果，如图4a所示，制造出仅由纤维形成纤维网，但也可以通过以使粘度成为260cps的方式对混合聚乳酸-羟基乙酸共聚物和溶剂的纺丝溶液进行电纺丝，来制造如图4b所示的具有微珠的纤维蓄积的纤维网。
[0074] 因此，在本发明中，由包含水溶性高分子及合成高分子的纤维网来实现细胞培养支架，并形成挂在纤维网的纤维上的多个微珠，来对微珠与纤维之间以及微珠与微珠之间提供扩大的空间(大气孔)，因而如图5所示，具有在纤维网110上培养的细胞150向纤维网110的内部渗透来进行三维生长的优点。
[0075] 即，仅由纤维蓄积而成的纤维网在纤维之间形成微细气孔，但作为本发明的细胞培养支架来使用的纤维网则在微珠与纤维之间以及微珠与微珠之间形成气孔。因此，存在微珠的本发明的纤维网的气孔大于不存在微珠的纤维网的纤维之间形成的微细气孔，从而使生长的细胞150易于渗透。
[0076] 另一方面，在本发明中，为对形成细胞培养支架的纤维网的纤维及微珠赋予亲水性，通过混合水溶性高分子、合成高分子、亲水处理用添加剂及溶剂来制备纺丝溶液，并利用该纺丝溶液进行电纺丝，且通过使形成有具有亲水性的微珠的纤维进行蓄积，来制造纤维网。
[0077] 其中，亲水处理用添加剂可以为聚山梨酯80、普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮中的一种。
[0078] 细胞培养支架浸渍于培养液，粘附于细胞培养支架的细胞从培养液吸收营养素来生长。由于细胞很好地粘附于亲水性优秀的支架来进行生长，因而在本发明中，通过在纤维及微珠包含亲水处理用添加剂，来实现亲水性强的纤维网，从而具有使细胞容易地粘附的优点。
[0079] 图6为用于说明制造本发明的细胞粘附性及移动性得到改善的培养支架的电纺丝装置的示意图。
[0080] 参照图6，在用于制造本发明的细胞培养支架的电纺丝装置中，用于供给搅拌的纺丝溶液的搅拌罐20与纺丝喷嘴40相连接，在与纺丝喷嘴40隔开的下部配置有按规定速度移动的输送机形态的接地收集器50，纺丝喷嘴40与高电压发生器相连接。
[0081] 其中，利用搅拌器30对水溶性高分子、合成高分子及溶剂进行混合来制备纺丝溶液。此时，可不在搅拌器30进行混合，而是在投入电纺丝装置之前使用预先混合的纺丝溶液。
[0082] 之后，若对收集器50与纺丝喷嘴40之间施加静电力，则在纺丝喷嘴40将纺丝溶液制造成超细纤维210并向收集器50进行纺丝，在收集器50蓄积纤维210，从而形成细胞培养支架的纤维网200。
[0083] 更具体地说，从纺丝喷嘴40排出的纺丝溶液一边通过借助高压发生器带电的纺丝喷嘴40，一边向纤维210纺丝，来在按规定速度移动的输送机形态的接地收集器50的上部依次层叠纤维210，从而形成细胞培养支架的纤维网200。
[0084] 另一方面，根据本发明的细胞培养支架100由水溶性高分子、合成高分子的纤维蓄积而成，并且能够以多个纤维上形成有多个微珠的纤维网110层叠的层叠结构来实现。
[0085] 作为一例，层叠结构的细胞培养支架100，如图7所示，包括：第一纤维网111，由形成有微珠的第一纤维蓄积而成，第二纤维网112，在第一纤维网111由形成有微珠的第二纤维蓄积而成，第三纤维网113，在第二纤维网112由形成有微珠的第三纤维蓄积而成。
[0086] 在这种三层结构的细胞培养支架100中，优选地，第二纤维具有小于第一纤维及第三纤维的直径。
[0087] 即，第三纤维网113层叠在第二纤维网112的上部，细胞粘附于第三纤维网113来培养，此时，使第三纤维网113的第三纤维的直径小于第二纤维网112的第二纤维的直径，来使细胞的粘附表面积变大，从而使细胞更好地粘附。
[0088] 并且，在本发明中，优选地，第一纤维网111及第三纤维网113的厚度小于第二纤维网112的厚度。
[0089] 而且，由于第二纤维网112的第二纤维的直径大于第三纤维网113的第三纤维的直径，因而与第三纤维网113的空间相比，第二纤维网112的空间更宽，从而向第二纤维网112生长的细胞灵活地进行渗透，由于第一纤维网111的第一纤维的直径小于第二纤维网112的第二纤维的直径，因而与第二纤维网112的空间相比，第一纤维网111的空间更窄，可防止向第二纤维网112渗透来生长的细胞向第二纤维网渗透并在第一纤维网111的底面进行生长。
[0090] 因此，由于根据本发明的细胞培养支架100由层叠三层纤维网的结构实现，因而存在如下的优点，即，使细胞容易地粘附，并使细胞向层叠结构内部渗透来生长，防止向层叠结构内部渗透来生长的细胞从层叠结构的底面逸出，防止细胞的形状及骨架歪曲，使细胞具有优选的形状及骨架。
[0091] 图8为用于说明本发明的层叠结构的细胞培养支架的制造方法的示意性剖视图。
[0092] 层叠结构的细胞培养支架由具有从第一纺丝喷嘴41、第二纺丝喷嘴42及第三纺丝喷嘴43排出的微珠的纤维蓄积而成。
[0093] 混合水溶性高分子、合成高分子及溶剂的纺丝溶液供给至第一纺丝喷嘴41、第二纺丝喷嘴42及第三纺丝喷嘴43，来排出具有微珠的纤维，第一纺丝喷嘴41、第二纺丝喷嘴42及第三纺丝喷嘴43依次配置于上述电纺丝装置的按规定速度移动的收集器50的上部。
[0094] 首先，从第一纺丝喷嘴41排出形成有微珠的第一纤维来形成第一纤维网111后，当第一纤维网111移动到第二纺丝喷嘴42的下部时，从第二纺丝喷嘴42向第一纤维网111的上部排出形成有微珠的第二纤维，来层叠第二纤维网112。
[0095] 之后，当第二纤维网112移动到第三纺丝喷嘴43的下部时，从第三纺丝喷嘴43向第二纤维网112的上部排出形成有微珠的第三纤维，来层叠第三纤维网113。
[0096] 在上述记载中，虽然参照本发明的优选实施例来说明了本发明，但本发明并不局限于上述的实施例，本发明所属技术领域的普通技术人员可在不脱离本发明的精神的范围内，对本发明进行多种变更及修正。
[0097] 产业上的可利用性
[0098] 本发明适用于可洗脱生长的细胞，对细胞培养提供熟悉且适合的培养环境，来使细胞的生存率极大化，并且能够使细胞以优选的形状及骨架生长的利用水溶性高分子的细胞培养支架。
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