一种果蝇培养基及其配制与分装方法
阅读：129发布：2023-03-03
专利汇可以提供一种果蝇培养基及其配制与分装方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种果蝇培养基及其配制与分装方法，涉及果蝇培养基技术领域，优化了果蝇培养基配方中各种营养成分的比例，同时在培养基中添加对羟基苯 甲酸 甲酯 防腐剂 ，防腐能 力 增强，优化了果蝇培养基中琼脂的含量，优化了其硬度，使其更适合果蝇生长，添加了青霉素与 链霉素 两种抗生素，有效抑制细菌类 微 生物 的生长，提高培养基的抗菌性能，性能测试数据显示，本发明制备的果蝇培养基的每对果蝇产下了74.6个子代即74.6只/对，远高于现有的43.4只/对。，下面是一种果蝇培养基及其配制与分装方法专利的具体信息内容。
1.一种果蝇培养基，其特征在于，包括如下含量成分：
琼脂粉7～13g/L，玉米粉65～80g/L，酵母粉18～28g/L，白糖20～40g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.1～1.8g/L，丙酸1.5～3mL/L，抗生素0.08～0.12g/L。
2.根据权利要求1所述的果蝇培养基，其特征在于，包括如下含量成分：
琼脂粉10g/L，玉米粉74g/L，酵母粉24g/L，白糖30g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.5g/L，丙酸
2mL/L，抗生素0.1g/L。
3.根据权利要求1所述的果蝇培养基，其特征在于，所述抗生素为青霉素和链霉素的混合物。
4.一种权利要求1～3任一所述的果蝇培养基的配制方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)前期准备：将配置培养基所需要的培养管、密封件进行灭菌、干燥，同时将盛放培养基的容器清洗干净；
2)成分配制：按配方称取各成分，并将玉米粉、酵母粉、白糖和抗生素分别加冷水搅拌至完全溶解，得玉米液、酵母液、白糖水和抗生素液，同时将对羟基苯甲酸甲酯溶于乙醇溶液，制得对羟基苯甲酸甲酯溶液；
3)培养基配制：向盛放培养基的容器中加入冷水，然后加入琼脂粉并加热搅拌至煮沸完全溶解，得琼脂粉液，然后向琼脂粉液依次加入玉米液、酵母液、白糖水并搅拌均匀，加水定容，搅拌加热至煮沸后，保温搅拌煮25～40min，停止保温，依次接入羟基苯甲酸甲酯溶液、丙酸和抗生素液并搅拌混合3～10min，得果蝇培养基。
5.根据权利要求4所述的果蝇培养基的配制方法，其特征在于，所述灭菌的温度为115～130℃，时长20～30min。
6.根据权利要求4所述的果蝇培养基的配制方法，其特征在于，所述干燥的温度为45～
60℃。
7.根据权利要求4所述的果蝇培养基的配制方法，其特征在于，所述玉米液、酵母液、白糖水、抗生素液和对羟基苯甲酸甲酯溶液的浓度分别为0.74g/mL，0.24g/mL，0.5g/mL，
0.05g/mL和0.21g/mL。
8.根据权利要求4所述的果蝇培养基的配制方法，其特征在于，所述琼脂粉液的浓度为
0.05g/mL。
9.一种权利要求1～3任一所述的果蝇培养基的分装方法，其特征在于，包括：如下步骤：
1)将搅拌器(C)、蠕动泵(G)接通电源，检测其运行状况，同时，向容器(B)内加入少量水，将分装细直管(E)一端放入容器(B)内，另一端通过硅胶软管(F)与所述蠕动泵(G)进料口连通，所述蠕动泵(G)出料口通过硅胶软管(F)与分装小管(J)连通，启动蠕动泵(G)，用清水疏通和清洁管道；
2)然后将配置好的果蝇培养基倒入容器(B)内，并设定蠕动泵(G)的流速为300～
350mL/min，将配置的果蝇培养基分装到分装小管(J)中，然后将分装小管(J)室温放置6～
8h，塞上塞子后，冷藏保存。
10.根据权利要求9所述的果蝇培养基的分装方法，其特征在于，所述冷藏温度为4℃。
一种果蝇培养基及其配制与分装方法
技术领域
[0001] 本发明涉及果蝇培养基技术领域，特别是指一种果蝇培养基及其配制与分装方法。
背景技术
[0002] 果蝇(Fruit fly)是双翅目小型昆虫，为完全变态发育类型，生活史包括卵、幼虫、蛹及成虫4个发育时期。果蝇具有容易饲养、生活周期短、繁殖率高、突变性状多且容易观察的特点，是一种优良的研究生命活动调控机制的模式生物，被广泛用于遗传学、神经生物学和发育生物学等生命科学的许多研究领域。在研究过程中，高质量地饲养好果蝇是实验正常进行的基本保证。果蝇作为实验材料具有非常多的优点：一是培养基配制和饲养都相对简单；二是体积小，所占饲养空间小，容易获得大量的实验材料；三是世代周期短，繁殖能力强，25℃培养条件下10天左右即繁殖一代；四是具有多种易于识别的性状，例如眼睛的颜色、翅膀的形状及刚毛的长短等等，便于直接观察与实验操作；五是果蝇变异类型多，已经拥有了许多的基因突变体类型，为遗传学研究提供了丰富的实验材料。
[0003] 果蝇培养基的碳源类成分主要有：玉米粉、标准面粉、全麦粉、米粉、麦麸和蔗糖等，红糖和葡萄糖有时也作为补充的碳源，土豆、香蕉和苹果也可作为提供碳源的培养物。构成果蝇培养基的氮源类成分主要有：酵母浸粉和活酵母等。酵母类物质除了提供丰富的蛋白质外，还含有B族维生素、脂肪、糖和多种矿物质等成分。有时，也可通过添加鸡蛋黄(富含卵磷脂等脂类)为培养基提供脂类营养物质。一般来说，一次性会配制较多的培养基，为了延长培养基的保存时间还需要添加防腐剂类成分，常用的防腐剂有：丙酸、苯甲酸、乙醇、对羟基苯甲酸甲酯(俗名为尼泊金甲酯)和苯甲酸钠等。为了使培养基有一定的硬度，便于果蝇取食和短暂栖息，一般需要添加固化剂，常使用的有琼脂条和琼脂粉等。对配制培养基的水质要求不是太高，饮用级别的自来水即可。培养基的成分类型是决定培养基质量的一方面，各种成分的含量又是影响培养基优劣的另一方面。除了培养基的配方，培养基的配制方法也影响着培养基的质量。不同实验室配制方法不相同。如张会宜2005报道：先取部分水，加入琼脂和糖，煮沸使充分溶解；再取部分水，加入玉米粉搅匀，加热调成糊状，最后加入苯甲酸钠等防腐剂；最后将上述两者混合，煮沸，待稍冷后加入酵母粉，充分调匀，分装小瓶。蔡梅红等2009报道：先将糖和琼脂加入部分水煮沸溶解；再取部分水加入玉米粉，加热搅拌均匀后，再加入酵母粉溶解成浆糊状；最后将上述两者混合，加热成糊状，加入丙酸，搅拌均匀，分装小管。
[0004] 申请人发现，上述培养基的配方成分与配制方法等都有待进一步优化。其次，培养基含水量(或硬度)较高易于粘死果蝇，含水量太低又会影响果蝇的生长和产卵。此外，现有的果蝇培养基成本高，抗菌性和培养效果较差，且分装时靠手工分装，繁琐、耗时且不均匀。
发明内容
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提出一种果蝇培养基及其配制与分装方法，以解决现有技术中果蝇培养基存在的全部或者部分不足。
[0006] 基于上述目的本发明提供的一种果蝇培养基，包括如下含量成分：
[0007] 琼脂粉7～13g/L，玉米粉65～80g/L，酵母粉18～28g/L，白糖20～40g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.1～1.8g/L，丙酸1.5～3mL/L，抗生素0.08～0.12g/L。
[0008] 在一些可选实施例中，所述果蝇培养基包括如下含量成分：
[0009] 琼脂粉10g/L，玉米粉74g/L，酵母粉24g/L，白糖30g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.5g/L，丙酸2mL/L，抗生素0.1g/L。
[0011] 从上面所述可以看出，本发明提供的一种果蝇培养基，优化了果蝇培养基配方中各种营养成分的比例；调整了果蝇培养基中琼脂的含量，优化了其硬度，使其更适合果蝇生长；添加了对羟基苯甲酸甲酯、青霉素与链霉素(双抗)等防腐物质，提高了培养基抵抗细菌等微生物生长的能力，增强防腐性能。
[0012] 一种果蝇培养基的配制方法，包括如下步骤：
[0013] 1)前期准备：将配置培养基所需要的培养管、密封件进行灭菌、干燥，同时将盛放培养基的容器清洗干净；
[0014] 2)成分配制：按配方称取各成分，并将玉米粉、酵母粉、白糖和抗生素分别加冷水搅拌至完全溶解，得玉米液、酵母液、白糖水和抗生素液，同时将对羟基苯甲酸甲酯溶于乙醇溶液，制得对羟基苯甲酸甲酯溶液；
[0015] 3)培养基配制：向盛放培养基的容器中加入冷水，然后加入琼脂粉并加热搅拌至煮沸完全溶解，得琼脂粉液，然后向琼脂粉液依次加入玉米液、酵母液、白糖水并搅拌均匀，加水定容，搅拌加热至煮沸后，保温搅拌煮25～40min，停止保温，依次接入羟基苯甲酸甲酯溶液、丙酸和抗生素液并搅拌混合3～10min，得果蝇培养基。
[0016] 在一些可选实施例中，所述灭菌的温度为115～130℃，时长20～30min。
[0017] 在一些可选实施例中，所述干燥的温度为45～60℃。
[0018] 在一些可选实施例中，所述玉米液、酵母液、白糖水、抗生素液和对羟基苯甲酸甲酯溶液的浓度分别为0.74g/mL，0.24g/mL，0.5g/mL，0.05g/mL和0.21g/mL。
[0019] 在一些可选实施例中，所述琼脂粉液的浓度为0.05g/mL。
[0020] 从上面所述可以看出，本发明提供的一种果蝇培养基的配制方法，先将部分成分进行溶解，然后再进行混合，提高培养基的混合均匀性，同时在培养基定容后，进行熬制25～40min，一方面有利于杀菌，另一方面促使培养基熟化，营养更加丰富。
[0021] 一种所述的果蝇培养基的分装方法，包括：如下步骤：
[0022] 1)将搅拌器(C)、蠕动泵(G)接通电源，检测其运行状况，同时，向容器(B)内加入少量水，将分装细直管(E)一端放入容器(B)内，另一端通过硅胶软管(F)与所述蠕动泵(G)进料口连通，所述蠕动泵(G)出料口通过硅胶软管(F)与分装小管(J)连通，启动蠕动泵(G)，用清水疏通和清洁管道；
[0023] 2)然后将配置好的果蝇培养基倒入容器(B)内，并设定蠕动泵(G)的流速为300～350mL/min，将配置的果蝇培养基分装到分装小管(J)中，然后将分装小管(J)室温放置6～
8h，塞上塞子后，冷藏保存。
8h，塞上塞子后，冷藏保存。
[0024] 在一些可选实施例中，所述冷藏温度为4℃。
[0025] 从上面所述可以看出，本发明提供的一种果蝇培养基的分装方法，设计了一套集加热、搅拌和半自动分装的系统，同时采用流体蠕动泵分装培养基，达到半自动分装，分装均匀，工序简单，提高分装的效率。附图说明
[0026] 图1为本发明实施例果蝇培养基配制与分装装置结构示意图。
[0027] A-电磁炉，B-容器，C-搅拌器，D-搅拌桨，E-分装细直管，F-硅胶软管，G-蠕动泵，H-蠕动泵转头，I-复合橡胶泵管，J-分装小管，K-培养基配制桌面，①、②-培养流动的方向；③-蠕动泵转头旋转的方向。
具体实施方式
[0028] 为下面通过对实施例的描述，本发明的具体实施方式如所涉及的制造工艺及操作使用方法等，作进一步详细的说明，以帮助本领域技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
[0029] 涉及的原料、试剂与器材：
[0030] 1)玉米粉(御源牌)：精细级，山东滕州市兴龙食品有限公司；
[0031] 2)蔗糖(A100355)：生工生物工程(上海)股份有限公司；
[0032] 3)酵母粉(安琪牌)：安琪酵母股份有限公司；
[0033] 4)琼脂粉(A100637)：生工生物工程(上海)股份有限公司；
[0034] 5)丙酸(A601757)：生工生物工程(上海)股份有限公司；
[0035] 6)对羟基苯甲酸甲酯(A601186)：生工生物工程(上海)股份有限公司；
[0036] 7)95％乙醇(A507050)：生工生物工程(上海)股份有限公司；
[0037] 8)青霉素(A606248)：1000U/mg，生工生物工程(上海)股份有限公司；
[0038] 9)链霉素(A610494)：生工生物工程(上海)股份有限公司；
[0039] 10)野生型果蝇品系：该品系的货号：BL2376，购买自美国Bloomington果蝇中心库；
[0040] 11)野生型果蝇：是相对于突变体果蝇来说的；指从大自然中获得的，不带有人工诱变的基因突变称为野生型；它所携带的就是野生型的基因组。
[0041] 12)成蛹：果蝇等变态发育的动物从幼虫变成茧状的蛹的过程，也称为蛹化。
[0042] 13)羽化：果蝇等变态发育的动物从由蛹变为成虫的过程称作羽化。
[0043] 14)SPSS软件：一种统计分析软件。可用于计算不同组数据之间的差异程度等。(具体见文献：申希平,丁建生,李娟生等.在SPSS中利用均数和标准差做两独立样本t检验[J].现代预防医学,2007,34(21):4066-4067.)
[0044] 为了解决现有技术中培养基的成分、配置方法和分装的不足之处，本发明实施例提供的一种果蝇培养基，包括如下含量成分：
[0045] 琼脂粉7～13g/L，玉米粉65～80g/L，酵母粉18～28g/L，白糖20～40g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.1～1.8g/L，丙酸1.5～3mL/L，抗生素0.08～0.12g/L。
[0046] 优化了果蝇培养基配方中各种营养成分的比例，同时在培养基中添加对羟基苯甲酸甲酯防腐剂，防腐能力增强，优化了果蝇培养基中琼脂的含量，优化了其硬度，使其更适合果蝇生长，添加了青霉素与链霉素(双抗)两种抗生素，有效抑制细菌类微生物的生长，提高培养基的抗菌性能。
[0047] 其次，本发明实施例提供的一种所述的果蝇培养基的配制方法，包括如下步骤：
[0048] 1)前期准备：将配置培养基所需要的培养管、密封件进行灭菌、干燥，同时将盛放培养基的容器清洗干净；
[0049] 2)成分配制：按配方称取各成分，并将玉米粉、酵母粉、白糖和抗生素分别加冷水搅拌至完全溶解，得玉米液、酵母液、白糖水和抗生素液，同时将对羟基苯甲酸甲酯溶于乙醇溶液，制得对羟基苯甲酸甲酯溶液；
[0050] 3)培养基配制：向盛放培养基的容器中加入冷水，然后加入琼脂粉并加热搅拌至煮沸完全溶解，得琼脂粉液，然后向琼脂粉液依次加入玉米液、酵母液、白糖水并搅拌均匀，加水定容，搅拌加热至煮沸后，保温搅拌煮25～40min，停止保温，依次接入羟基苯甲酸甲酯溶液、丙酸和抗生素液并搅拌混合3～10min，得果蝇培养基。
[0051] 先将部分成分进行溶解，然后再进行混合，提高培养基的混合均匀性，同时在培养基定容后，进行熬制25～40min，一方面有利于杀菌，另一方面促使培养基熟化，营养更加丰富。
[0052] 同时，本发明液提供的一种所述的果蝇培养基的分装方法，包括：如下步骤：
[0053] 1)将搅拌器(C)、蠕动泵(G)接通电源，检测其运行状况，同时，向容器(B)内加入少量水，将分装细直管(E)一端放入容器(B)内，另一端通过硅胶软管(F)与所述蠕动泵(G)进料口连通，所述蠕动泵(G)出料口通过硅胶软管(F)与分装小管(J)连通，启动蠕动泵(G)，用清水疏通和清洁管道；
[0054] 2)然后将配置好的果蝇培养基倒入容器(B)内，并设定蠕动泵(G)的流速为300～350mL/min，将配置的果蝇培养基分装到分装小管(J)中，然后将分装小管(J)室温放置6～
8h，塞上塞子后，冷藏保存。
8h，塞上塞子后，冷藏保存。
[0055] 设计了一套集加热、搅拌和半自动分装的系统，同时采用流体蠕动泵分装培养基，达到半自动分装，分装均匀，工序简单，提高分装的效率。
[0056] 在一些可选实施例中，本发明提供的一种果蝇培养基，包括如下含量成分：琼脂粉10g/L，玉米粉74g/L，酵母粉24g/L，白糖30g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.5g/L，丙酸2mL/L，抗生素0.1g/L，其中，抗生素为青霉素和链霉素的混合物。
[0057] 其中，抗生素为青霉素和链霉素的混合物。
[0058] 本发明实施例提供的一种果蝇培养基的配制方法，包括如下步骤：
[0059] 1)前期准备：将配置培养基所需要的玻璃培养管、海绵塞子密封件进行清洗干净，控干水分，用牛皮纸包扎玻璃培养管和海绵塞子，在温度121℃下进行高压蒸汽灭菌30min，灭菌完取出玻璃培养管与海绵塞子置于电热鼓风干燥箱中，在温度55℃下至烘干；同时，将盛放培养基的容器清洗干净；
[0060] 2)成分配制：按配制5L体积的培养基进行计算和称量如下：
[0061] 称取50g琼脂粉待用；称取370g玉米粉于1L的烧杯中，加500mL冷水，用玻璃棒搅拌使其无团块，直至全部溶解，得玉米液；称取120g酵母粉于1L的烧杯中，加500mL冷水，搅拌使其无团块，直至全部溶解，得酵母液；称取150g白糖于500mL的烧杯中，加300mL冷水，溶解得白糖水；称取7.5g对羟基苯甲酸甲酯于100mL的烧杯中，加入95％乙醇35mL，溶解得对羟基苯甲酸甲酯溶液；丙酸10mL；称取0.5g青霉素和链霉素混合物，盛放于50mL烧杯中，加入10mL水，溶解得抗生素液；
[0062] 3)培养基配制：向盛放培养基的容器中加入1L冷水，然后加入琼脂粉并一边加热一边搅拌直到煮沸完全溶解，要一直搅拌防止粘锅底，得琼脂粉液，然后向琼脂粉液依次加入玉米液、酵母液、白糖水一边加入一边搅拌，加水定容至5L，不需要非常准确，粗略定容即可，搅拌加热至煮沸后，开锅后100℃保温，煮30min，保温期间一直搅拌，防止粘锅底；然后停止保温，依次接入羟基苯甲酸甲酯溶液、丙酸和抗生素液并搅拌混合5min，得果蝇培养基。
[0063] 本发明实施例提供的一种所述的果蝇培养基的分装方法，包括：如下步骤：
[0064] 1)组装装置，按图1所示的顺序将半自动分装系统进行连接组装，同时，向容器(B)内加入少量水，然后将搅拌器(C)、蠕动泵(G)接通电源，检测其运行状况，将分装细直管(E)一端放入容器(B)内，另一端通过硅胶软管(F)与所述蠕动泵(G)进料口连通，所述蠕动泵(G)出料口通过硅胶软管(F)与分装小管(J)连通，启动蠕动泵(G)，用清水疏通和清洁管道；
[0065] 2)然后将配置好的果蝇培养基倒入容器(B)内，开启蠕动泵(G)，设定参数为：流速320mL/min，工作时间1s，停止时间1s。按照这样的参数运行蠕动泵(G)，每次每个分装小管(J)的培养基约为5.5-6.0mL，直到所有培养基分装至灭菌烘干后的分装小管(J)内，盖上纱布，室温放置6～8H以便散去管子内的水汽，塞上塞子，可用于果蝇培养，或装盒后置于4℃冰箱2周内保存备用。
[0066] 本发明提供的另一个实施例中，果蝇培养基包括如下含量成分：
[0067] 琼脂粉7g/L，玉米粉6g/L，酵母粉18g/L，白糖20g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.1g/L，丙酸1.5mL/L，抗生素0.08g/L。
[0068] 本发明提供的第三个实施例中，果蝇培养基包括如下含量成分：
[0069] 琼脂粉13g/L，玉米粉80g/L，酵母粉28g/L，白糖40g/L，对羟基苯甲酸甲酯1.8g/L，丙酸3mL/L，抗生素0.12g/L。
[0070] 培养基培养效果的检测：用制备的果蝇培养基在25℃条件下培养野生型果蝇品系。取12个分装有本专利培养基的空玻璃小管，收集8h内羽化且未交配的野生型果蝇，每个分装小管放入雌雄果蝇各10只(10对)，作为亲本置于培养箱中25℃培养。待子代果蝇幼虫成蛹、羽化与转变为成虫后，每天统计并记录子代果蝇的数量，直至无子代爬出为止。12个分装小管内爬出的子代成虫果蝇的数量如下表所示。
[0071]编号(管) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
野生型果蝇(只) 720 735 658 672 721 719 831 803 736 718 815 27
野生型果蝇(只) 720 735 658 672 721 719 831 803 736 718 815 27
[0072] 通过计算，野生型果蝇每个管子爬出子代果蝇的平均数为746只，因每个管子接入的亲本果蝇为10对，故平均每对果蝇产下了74.6个子代(74.6只/对)。而据报道，野生型果蝇在其它培养基上培养的子代产生率为43.4只/对(邓接楼,晏燕花,付国良等.不同培养基培养果蝇的效果差异研究[J].上饶师范学院学报,2010,30(6):69-72.)。利用SPSS统计分析软件分析，本专利培养基的培养结果(74.6只/对)与已报道结果(43.4/对)之间存在显著差异(P<0.01)，表明本专利培养基能够显著促进果蝇的子代繁殖和提高果蝇的种群数量。
[0073] 所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
[0074] 本发明的实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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