本发明涉及新化合物，所述化合物可以用于治疗与淀粉蛋白有关的一 组疾病和异常，例如阿尔茨海默病，也可以用于治疗与淀粉样蛋白有关的 疾病或病症。本发明还涉及含有这些化合物的药用组合物以及这些化合物 在制备药物中的用途，所述药物用于治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关 的疾病或病症。本发明也公开了治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾 病或病症的方法。

本发明化合物也可以用于治疗与视觉系统组织中病理学异常/改变有 关的眼部疾病，特别是与视觉系统组织中β-淀粉样物质相关的病理学异常/ 改变(例如神经细胞退化)有关的疾病。所述病理学异常可以产生在例如不 同的眼部组织中，例如：视觉皮层，导致皮层视觉不足；前房和视神经， 导致青光眼；水晶体，导致由于β-淀粉样物质沉积而产生的白内障；玻璃 体，导致眼部淀粉样变性；视网膜，导致原发性视网膜变性和黄斑变性，例 如老年性黄斑变性；视神经，导致视神经玻璃疣、视神经病变和视神经炎； 角膜，导致晶格营养不良。

多种老年性疾病是由于淀粉样物质或淀粉样蛋白产生而导致或与其有 关，它们的特征部分在于导致发病以及疾病进展的淀粉样物质在细胞外沉 积形成。这些疾病包括但不限于：神经疾病，例如阿尔茨海默病(AD)，特 征为认知记忆能力丧失的疾病或病症，例如，轻度认知功能损害(MCI)， 路易体痴呆，唐氏综合征，遗传性脑出血伴淀粉样变(荷兰型)，关岛帕金 森痴呆复征。其它基于淀粉样蛋白的或者与之有关的疾病为进行性核上性 麻痹、多重硬化症、克-雅氏病、帕金森病、HIV相关性痴呆、ALS(肌萎 缩侧索硬化)、包涵体肌炎(IBM)、成人发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样 变病、内分泌肿瘤和其它疾病，包括淀粉样物质相关的不同眼组织的眼病， 例如，视觉皮层，包括皮层视觉不足；前房和视神经，包括青光眼；水晶 体，包括由于β-淀粉样物质沉积而导致的白内障；玻璃体，包括眼部淀粉 样变性；视网膜，包括原发性视网膜变性和黄斑变性，特别是老年性黄斑 变性；视神经，包括视神经玻璃疣、视神经病变和视神经炎；角膜，包括 晶格营养不良。

尽管这些疾病的发病机理是不同的，但是它们的特征性沉积物通常含 有多种相同的分子构成。在很大程度上，这可能是由于促炎通路的局部活 化从而导致活化的补体成分、急性相反应物、免疫调节剂和其它炎性介质 的同时沉积。

阿尔茨海默病(AD)为神经性疾病，主要是由于脑中淀粉样斑块、蛋白 异常沉淀物的积聚而引起的。在受到影响的个体的脑中发现的淀粉样物质 的最常见的类型主要由Aβ原纤维构成。科学证据显示，斑块中β-淀粉样 蛋白产生和集聚的增加导致神经细胞死亡，这归因于AD的生长和发展。 在关键性脑区域中神经细胞的减少依次导致神经递质的减少和记忆损害。 造成斑块增加的主要蛋白包括淀粉样前体蛋白(APP)以及两种早老蛋白(早 老蛋白I和早老蛋白II)。酶β和γ分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)(在大多数 细胞中结构性表达和异化)的连续裂解导致39-43个氨基酸的Aβ肽的释 放。APPs的降解有可能增加其在斑块中集聚的倾向。特别是Aβ(1-42)片 段，由于在其C-末端上具有两个非常疏水的氨基酸残基，所以它们具有较 高的构建集聚物的倾向。因此，Aβ(1-42)片段被认为主要参与并造成了AD 中神经炎斑块形成的启动，因而具有较高的病理学潜能。因此，需要能够 靶向和扩散淀粉样斑块形成的特异分子。

AD的症状缓慢出现，最初的症状只是轻度健忘。在该阶段，个体可 能忘记近期的事件、活动、熟人的名字或事情，可能无法解决简单的数学 问题。随着疾病的发展，症状很容易被注意到，并且变得足够严重，使得 AD患者或其家庭成员需要寻求医学帮助。AD的中期阶段包括忘记如何完 成简单任务(例如修饰)并出现说、理解、读或写的问题。后期阶段的AD 患者可能变得更严重或具有进攻性，可能离家出走并最终需要完全护理。

目前，唯一确定的诊断AD的方法是在个体死亡后鉴别脑组织中的斑 块和缠结。因此，当患者仍然存活时，医生只能诊断为“可能为”或“大概 为”AD。采用目前的方法，医生只能在至多90％的时间内采用诊断“可能 为”AD的各种工具正确诊断AD。医生询问个体的一般健康情况、既往医 学问题和个体日常活动所遇到的任何困难的历史情况。记忆、问题解决能 力、注意力、计算和语言能力的行为测试以及医学检验(例如血液、尿液或 脊髓液检测)和脑扫描可以提供某些其它信息。

AD的处置包括医学和非医学治疗。目的在于改变疾病基本过程的治 疗(延缓或逆转疾病进展)到目前为止基本上是不成功的。能够在神经细胞 (神经递质)的化学信使中恢复不足(缺陷)或机能障碍的药物已经显示能够 改善症状，所述药物特别是胆碱酯酶抑制剂(ChEIs)，例如他克林和卡巴拉 汀。ChEIs能够阻止神经递质的酶降解，从而增加能够在脑中传递神经信 号的化学信使的量。

对于患有早期和中期阶段疾病的某些人而言，药物他克林 (Morris Plains，NJ)、多奈哌齐(Tokyo(东京)， JP)、卡巴拉汀(East Hanover，NJ)或加兰他敏( New Brunswick，NJ)可以在一定的时间内有助于预防某些症状变得更为严 重。另一种药物美金刚(New York(纽约)，NY)已经被批准用 于治疗中度至重度AD。药物也可以用于治疗AD的精神症状。同样，某 些药物可能有助于控制AD的行为症状，例如失眠、激动、神志恍惚、迷 失方向、焦虑和抑郁。治疗这些症状通常使得患者更舒适，并使得护理者 对其更易护理。不幸的是，尽管有意义的治疗进展显示，该类药物始终较 安慰剂好，但疾病持续进展，并且对精神机能的平均作用只是普通的。在 AD药物治疗中使用的多种药物例如ChEIs也具有副作用，包括胃肠道机 能障碍、肝毒性和体重减轻。

与淀粉样蛋白集聚和沉积有关的其它疾病为轻度认知功能损害、路易 体痴呆(LBD)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、包涵体肌炎(IBM)和黄斑变性， 特别是老年性黄斑变性(AMD)。

轻度认知功能损害(MCI)为最常定义为轻微但可度量的记忆疾病的通 用术语。MCI患者所具有的记忆问题大于由于年龄老化而通常出现的问 题，但是不会出现其它痴呆症状，例如判断和推理受损。

路易体痴呆(LBD)为在65岁以上老人中可能发生的神经退行性疾病， 它通常会导致认知(思想)受损症状和异常的行为变化。症状包括认知损害、 神经信号损害、睡眠疾病和自主神经衰竭。认知损害是大多数病例中呈现 的LBD特征。患者具有进展性恶化的精神混乱的周期性发作的特点。认 知能力的波动通常与注意力和警觉性的变化程度有关。认知损害和思想的 波动可以在分钟、小时或天内变化。

肌萎缩侧索硬化症(ALS)的特征在于为上和下运动神经元的退化。在 某些ALS患者中，可能出现痴呆或失语(ALS-D)。该痴呆为最常见的额颞 痴呆(FTD)，许多此类病例在额叶和颞叶的齿状脑回和表层的神经元中含 有泛蛋白阳性、τ-阴性的包涵物。

包涵体肌炎(IBM)为通常在超过50岁的人中发现的疾病，其中肌肉纤 维发展为炎症并开始萎缩，但是其中脑没有受到伤害，患者能够保持其完 整的智力。与淀粉样-β蛋白产生相关的两种酶被发现在患者肌肉细胞中有 所增加，所述患者患有老年人最常见的渐进性肌肉疾病，其中淀粉样物质-β 也会增加。

黄斑变性为导致斑恶化的常见眼病，所述斑为视网膜的中央区域(位于 眼睛后部的纸一样薄的组织，其中感光细胞将视觉信号传递至脑)。锐利、 清晰、“直行”的视觉通过斑处理。对斑的损害导致盲点和模糊或扭曲的视 觉的发展。老年性黄斑变性(AMD)在美国是视觉损害的主要原因，对于年 龄超过65岁的人而言，它是白种人中法定失明(legal blindness)的主要原 因。约180万年龄40岁以上的美国人患有晚期AMD，还有730万患有中 期AMD的人处于失明的显著风险中。据政府估计，到2020年将会有290 万人患有晚期AMD。AMD的受害人通常惊奇并受挫地发现该失明情况的 原因和对其治疗几乎是未知的。

有两种形式的黄斑变性：干性黄斑变性和湿性黄斑变性。其中斑细胞 缓慢开始出现问题的干性形式在85％的黄斑变性病例中被确诊。两只眼睛 通常都会受到干性AMD的影响，尽管一只眼睛可能失去视力而另一只眼 睛保持不受影响。玻璃膜疣(Drusen)(为视网膜下的黄色沉积物)为干性 AMD的常见早期信号。当玻璃膜疣的数量和体积增加时，发展为晚期干 性AMD或湿性AMD的风险增加。干性AMD可能发展并引起视力丧失 而不会转变为该病的湿性形式；然而，早期干性AMD也可能突然转变为 湿性形式。

湿性形式尽管只占病例的15％，但却导致90％的失明，被认为是晚期 AMD(无湿性AMD的早期或中期阶段)。AMD总是以该病的干性形式为 先导。当干性形式加重时，某些人开始在斑后出现异常血管生长。这些血 管非常脆弱，会渗出液体和血液(因此称为“湿性”黄斑变性)，导致斑的快 速损害。

AMD的干性形式在最初时通常引起轻微的视力模糊。然后视觉中心 特别变得模糊，当该病发展时该区域变大。当只有一只眼睛受到影响时可 能注意不到症状。在湿性AMD中，直线看起来像曲线，中央视觉损失可 能很快出现。

黄斑变性的诊断通常包括眼睛扩张测试、视敏度测试和眼后部检视， 采用称为眼底镜的方法有助于诊断AMD，如果怀疑为湿性AMD，也可以 进行荧光血管造影术。如果干性AMD达到晚期阶段，现在没有治疗方法 预防视力损害。然而，特别高剂量配方的抗氧剂和锌能够延缓或防止中期 AMD发展为晚期阶段。(哌加他尼钠注射液)、激光凝固和光动 力疗法能够控制异常的血管生长和斑中出血，这对某些患有湿性AMD的 人有帮助；然而，已经受损的视力无法通过这些技术恢复。如果视力已经 受损，低视力有助于改善生活质量。

老年性黄斑变性(AMD)的最初信号之一为细胞外沉积物的集聚，所述 沉积物已知为视网膜色素上皮组织(RPE)的基膜和Bruch膜(BM)之间的玻 璃膜疣。Anderson等最近开展的研究证实，玻璃膜含有β-淀粉样物质。 (Experimental Eye Research 78(2004)243-256)。

朊病毒导致神经退行性疾病，例如羊痒病、牛海绵状脑病和人类克- 雅氏病。病毒颗粒的唯一已知的成分为蛋白的羊痒病同种型，PrPSc。尽 管朊病毒增加，然而没有证据显示它们含有核酸。PrPSc通过转译后过程 衍生自非感染性细胞蛋白PrPC，在该过程中PrPC会产生较大的构象改 变。

羊痒病蛋白PrPSc在神经变性中具有关键作用，在疾病的发展过程中 经过如下三个阶段的转变：PrPC(蛋白的正常细胞同种型)-PrPSc：感染型 (蛋白的羊痒病同种型)-蛋白PrP27-30。

此类事件级联在下列疾病过程中发生：克-雅氏病(CJD)，Kuru，格斯 特曼-施特劳斯纳综合征(Gerstmann-Straussler-Scheinker Syndrome) (GSS)，人类致死性家族性失眠症，羊痒病，水貂脑病和牛海绵状脑病。

细胞无毒蛋白(PrPC)为分子量为33000-35000的唾液酸糖蛋白，它 主要在神经元中表达。在上述疾病中，PrPC转化为改变型(PrPSc)，它不 同于其正常同源物，它对蛋白酶的消化具有相对抗性。在受影响的动物和 个体的中枢神经系统及其蛋白酶抗性核芯中积聚的PrPSc在细胞外聚集。

淀粉样变并非单一疾病实体，而是不同类别的进行性疾病过程，特征 在于蜡样、淀粉样蛋白(称为淀粉样物质)在细胞外组织中的沉积，它在一 或多个器官或机体系统中积聚。当淀粉样沉积物积聚时，它们开始干扰器 官或机体系统的正常机能。存在至少15种不同类型的淀粉样变。主要形式 为不含已知前体的原发性淀粉样变、伴有某些其它疾病的继发性淀粉样变 和遗传性淀粉样变。

继发性淀粉样变发生于患有慢性感染或炎性疾病的人群中，例如结核、 称为家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小 肠炎症(肉芽肿性回肠炎)、霍奇金病和麻风。

青光眼为一组视神经疾病，包括视网膜神经节细胞(RGCs)损失，其特 征模式为视神经病变。青光眼通常(但不总是)伴有眼压提高，这是由于液 体或其引流阻塞而导致的。

尽管眼压提高是发展为青光眼的重要风险因素，但是导致青光眼的决 定性的眼压阈值没有被定义。

损害也可能由于重要的视神经纤维的血液供应较差、神经结构的脆弱 和/或神经纤维自身健康问题而引起。

未治疗的青光眼造成视神经的永久损害并随后造成视野的损失，这可 能发展为失明。

RGCs为将视觉信号自眼睛传递至脑的神经细胞。蛋白水解酶-3和蛋 白水解酶-8是细胞凋亡过程中的两种主要的酶，它们在导致RGCs凋亡的 过程中被激活。蛋白水解酶-3裂解淀粉样前体蛋白(APP)以产生神经毒片 段，包括β-淀粉样物质。没有APP的保护作用，淀粉样物质β在视网膜神 经节西部层中的积聚导致RGCs的死亡和视觉的不可逆损失。

不同种类的青光眼可以分为开角型青光眼(该疾病为慢性的)或闭角型 青光眼(如果急性青光眼突然发作)。青光眼通常影响两只眼睛，但是疾病 在一只眼睛中较另一只眼睛中进展可能更迅速。

慢性开角型青光眼(COAG)也称为原发性开角型青光眼(POAG)，它是 最常见类型的青光眼。COAG是由小梁网络中微小阻塞而导致的，它减少 了液体外流向输淋氏(Schlemm)管的引流，提高了眼压(IOP)。POAG通常 影响两只眼睛，它与年龄以及阳性家族史密切相关。其发生率在老年人群 中增加，因为眼部引流机制随着年龄增加而逐渐阻塞。受慢性开角型青光 眼影响的个体中眼压增加没有伴发任何症状，直到中枢视觉区域受到损害。

急性角闭锁青光眼(AACG)或闭角型青光眼是相对少见类型的青光 眼，特征在于眼压突然增加至35-80mmHg，导致严重疼痛和不可逆的视 力损害。压力的突然增加是由于过滤角的闭塞和引流管的阻塞而引起的。 窄角的个体由于角突然闭塞而风险增加。AACG通常在一只眼睛中产生， 但是风险存在于两只眼中。年龄、白内障和假性剥脱性综合征也是风险因 素，因为它们与晶状体的增大以及角的挤塞或狭窄有关。青光眼的突然发 作与严重的眼痛和头痛、眼部发炎、恶心、呕吐以及视力模糊有关。

混合或合并机制青光眼为开角型和闭角型青光眼的混合或合并。它影 响急性ACG患者(激光虹膜切开术后角开放但是仍然继续需要控制IOP的 药物治疗)以及POAG患者或假性剥脱综合性青光眼患者，后者逐渐发展 为角狭窄。

正常眼压性青光眼(NTG)也称为低眼压性青光眼(LTG)，其特征在于进 行性视神经损害和在其它类型青光眼中所见到的相似的间接视力损害；然 而，眼压在正常范围内，或者甚至低于正常。

先天性(婴儿期)青光眼是相对少见的遗传类开角型青光眼。引流区域 的发育不足导致眼压增加，由于视神经损害导致视力受损，同时眼压增加 导致眼睛变大。早期诊断和治疗对于受该疾病影响的婴儿和儿童的视力保 护是至关重要的。

继发性青光眼可能是由于目镜损伤、眼虹膜炎症(虹膜炎)、糖尿病、 白内障引起的，或者由于在甾体敏感性个体中使用甾体而引起。继发性青 光眼也可能与视网膜剥离或视网膜静脉闭合或阻塞有关。

色素性青光眼特征在于色素颗粒在虹膜剥离。所述颗粒导致眼睛引流 系统的阻塞，使得眼压升高并损害视神经。

剥脱综合性青光眼(假性剥脱综合征)特征在于薄片状物在前囊膜上和 眼角中沉积。薄片状物的积聚阻塞了引流系统并使得眼压升高。

青光眼的诊断可以采用各种实验进行。压力测量法通过测定眼表面的 紧张性或硬度而确定眼内压力。多种类型的眼压计可以用于该实验，最常 见的是压平眼压计。角膜厚度法测定了角膜的厚度，随后测定眼压。前房 角镜检查法检查过滤角和眼部引流区域。如果异常血管能够阻断水性液体 流出眼睛的引流，则前房角镜检查法也可以检查。眼膜曲率镜法检查视神 经，可以测定神经纤维层下降或视盘改变或该结构的压痕(杯痕)，这是由 于眼压升高或轴突掉出而导致的。前房角镜检查法也用于评价由于血流较 差或眼压升高而导致的神经损害。视野检查将视野绘图，它能够测定青光 眼损害至视神经的信号。这可以通过视野损失的特殊模型来代表。光学相 干断层扫描(神经纤维层损失的客观测定)根据光传递通过损害的轴突组织 的差异通过观察视神经纤维层的厚度(在青光眼中有改变)进行。

视神经玻璃疣为蛋白和钙盐的球形结石，它们可以代表通过先天性改 变的影响轴突神经纤维层的血管结构的分泌。这些积聚在外周神经纤维层 中发生，可能会直接通过压缩而损害神经纤维层，或者通过破坏供给神经 纤维层的血管而间接损害它。在受影响的个体中第一个十年后它们通常是 可见的。它们最常见的是发生在两只眼睛中，可能导致间接视力多年的轻 微损失。

视神经病变是特征在于视神经损害的疾病，该损害是由脱髓鞘、血液 供应阻塞、营养不良或毒素导致的。脱髓鞘视神经病(参见下面的视神经炎) 通常是由于脱髓鞘过程(例如多重硬化症)而导致的。血液供应的阻塞(称为 局部缺血性视神经病变)可能导致视神经细胞的死亡或功能障碍。非动脉炎 局部缺血性视神经病变通常在中年人群中发生。风险因素包括高血压、糖 尿病和动脉粥样硬化。动脉炎局部缺血性视神经病变通常在老年人中发生， 伴有动脉炎症(动脉炎)，特别是颞动脉(颞动脉炎)。视力损失可以是快速的 或者在2-7天内逐渐发展，损害可以是一只眼睛或者是两只眼睛。在由于 暴露于毒素或者营养不良而导致的视神经病变的患者中，两只眼睛通常都 会受到影响。

约40％的非动脉炎局部缺血性视神经病变患者在一段时间内会自发 改善。非动脉炎局部缺血性视神经病变可以通过控制血压、糖尿病和胆固 醇水平而加以治疗。动脉炎局部缺血性视神经病变可以采用高剂量皮质激 素类治疗以防止第二只眼睛的视力损失。

视神经炎与一或二只眼睛中轻微或严重的视力损失有关，它可能由于 下列原因引起：系统性脱髓鞘过程(参见上面)、病毒感染、疫苗接种、脑 膜炎、梅毒、多重硬化症和眼内炎症(眼色素层炎)。眼动可能会痛，视力 可能由于反复发作而恶化。诊断包括瞳孔反应的检查，确定视神经乳头盘 是否肿胀。磁共振成像(MRI)可以证实多重硬化症，或者很少用于证实压 迫视神经的肿瘤，在该情况下，一旦肿瘤压力减轻，则视力可以改善。视 神经炎的大多数病例即使不治疗也可能在数个月期间得到改善。在某些情 况下，采用静脉内注射皮质激素类治疗可能是必须的。

白内障是在眼晶状体中或其包膜中发展而成的浑浊。白内障通常引起 渐进性视力损失，如果不治疗可能导致失明。在Morgagnian白内障中， 白内障皮层渐进性地液化形成奶白色液体，如果晶状体囊破裂和泄漏，可 能会导致严重的炎症。如果不治疗，白内障也可能引起白内障膨胀期继发 青光眼(phacomorphic glaucoma)。白内障可能在性质上是先天的，或者可 能由下列情况引起：遗传性因素、老龄化、长期暴露于紫外线、暴露于辐 射、糖尿病、眼伤或身体外伤。

外囊(ECCE)手术是治疗白内障的最有效的治疗方法。在手术中，摘除 晶状体，但是绝大部分晶状体囊保持完整。晶状体乳化法(角膜一侧的小切 开手术)通常在摘除前用于使得晶状体破损。

眼部淀粉样变为与I型家族性淀粉样多神经变(FAP)有关的遗传性疾 病，其特征在于结膜管异常、干燥性角膜结膜炎、瞳孔异常，在某些情况 下，特征还包括玻璃体浑浊和继发性青光眼。I型FAP与转甲状腺素蛋白 (TTR)(一种在肝脏中合成的四聚体血浆蛋白(前清蛋白))、视网膜色素上皮 组织2和脑脉络丛的突变有关。不同的突变使得转甲状腺素蛋白聚合为淀 粉样物质原纤维褶状结构，导致遗传性淀粉样变。最常见的突变为 TTR-met303，其中蛋氨酸在转甲状腺素蛋白的30位上代替缬氨酸。

IV型FAP与格子状角膜营养不良(LCD)有关。格子状角膜营养不良为 遗传性、原发性、常见双侧角膜淀粉样变，其特征在于角膜基质中存在双 轮廓折射格子线。LCD I型(Biber-Haab-Dimmer)为常染色体显性、双侧 对称的角膜疾病，其特征在于中枢基质表层和中层中存在许多具有白色斑 点和模糊阴霾的半透明纤细格子线。该症状在生命的第一个或第二个十年 开始，引起渐进性视力损失。大多数患者在40岁时需要角膜移植。LCD II 型与系统性淀粉样变(Meretoja综合征)有关，其特征在于角膜缘、角膜中 央和基质中存在厚格子线。视力直到生命后期都不会受到影响。LCD III 型对中年人有影响，其特征在于存在自角膜缘到角膜缘延伸的厚格子线。 LCD III型A的特征在于淀粉样物质沉积物在基质中的积聚以及在基质和 Bowman层之间淀粉样物质带的存在，LCD III型A与LCD III型不同， 因为其存在角膜糜烂、出现白带以及常染色体显性遗传模式。

唐氏综合征(DS)或三体性21是最常见的遗传性疾病，在新生婴儿中发 生率约1∶700，通常与各种先天性异常有关。该疾病与额外染色体21的存 在有关，与斑块形成β-蛋白淀粉样物质的过早沉积以及中年阿尔茨海默病 的发展有关。另外，受DS影响的许多人患有先天性青光眼。因为淀粉样 物质前体蛋白基因(它能够裂解形成β-淀粉样物质)位于人染色体21的长臂 上，在唐氏综合征中该基因的过度表达可能导致淀粉样物质前体蛋白和淀 粉样物质沉积物的水平增加。

青光眼尚无好的治疗方法。治疗青光眼的药物包括：降低眼中水性体 液的产生的药物，例如β阻断剂(噻吗洛尔(Timoptic)、倍他洛尔(Betoptic))、 碳酸酐酶抑制剂(杜塞酰胺(Trusopt)、Azopt)和α激动剂(Alphagan， Iopidine)；改变眼睛后部水性体液引流方向或使其通过不同路径的药物， 例如前列腺素(Xalatan)。激光手术包括小梁成形术，有助于水性体液更容 易地离开眼睛的方法。根据青光眼基金会的报道，将近80％的患者对延缓 或避免进一步手术的方法反应良好。然而，根据国家眼科研究所(the National Eye Institute)的报道，激光手术后2年内，一半患者的眼中压力 再次增加。如果药物和最初的激光治疗无法成功降低眼压，则可以进行切 口手术。一种类型的手术(小梁切除术)在眼帘上切口以便于水性体液能够 流出。然而，根据青光眼基金会的报道，约三分之一的小梁切除术患者在 5年内形成白内障。如果小梁切除术失败，其它切口手术包括：将导液管 置于眼中角膜和虹膜之间，使用激光或冷冻治疗以破坏能够产生水性体液 的眼组织。手术可以挽救患者的剩余视力，但是无法提高视力。手术后视 力实际上可能会变得更糟。

老年性黄斑变性(AMD)为年龄超过65岁的白种人失明的主要原因。 尽管黄斑变性研究最近已经有了长足发展，但是尚无避免在该疾病过程中 所发生的神经细胞死亡的治疗方法。对于与β-淀粉样物质相关神经细胞退 化有关的其它眼病也没有明确的治疗方法，例如皮层视觉不足、视神经玻 璃疣、视神经病变、视神经炎、眼睛淀粉样变和晶格营养不良。

淀粉样物质沉积物通常含有三种成分。淀粉样蛋白原纤维(约占淀粉样 物质的90％)包含数种不同类型蛋白的一种。这些蛋白能够折叠成所谓的 “β-折叠”纤维，一种具有刚果红结合位点的特有蛋白构型，刚果红能够使 得淀粉样蛋白呈现特有的着色性。另外，淀粉样物质沉积物与淀粉样物质 P(五边形)成分(AP)密切相关，它是一种与正常血清淀粉样物质P(SAP)有 关的糖蛋白，还与硫酸化的粘多糖(GAG)、结缔组织的复合碳水合物密切 相关。

对阿尔茨海默病和朊病毒疾病治疗的一项进展是分子设计，所述分子 能够与Aβ和PrP的异常β-折叠构型分别结合，从而防止这些分子的积聚。 肽的β-折叠构型的特征在于相邻氨基酸链之间正常模式中形成氢键。该排 列产生了稳定的三维结构。H-键接受体(C＝O基团)和H-键供体(NH基团) 在天然存在的β-折叠肽中与被结合的原子(基本上在一个链中)互相交替。 在每一个氨基酸链中，相邻H-键供体和H-键接受体之间的距离应当在特 定的范围内。特别的是，在一个氨基酸残基中的H-键供体(NH基团)和H- 键接受体(C＝O基团)中间的距离为3.5-一个氨基酸残基的H-键接 受体(C＝O基团)和下列参与链内结合的氨基酸残基的H-键供体(NH基团) 之间的距离为2.6-换句话说，在一个氨基酸链中相邻的H-键供体 和H-键接受体之间的距离可以在下列范围内交替：

用于与β-折叠完美结合的配体具有的H-键供体和H-键接受体的顺序 应当与β-折叠的氨基酸链中H-键供体和H-键接受体的顺序互补。

在WO 03/095429和Rzepecki等，Synthesis(2003)12，1815-1826中描 述了合成的分子，据报道它们能够结合β-构型的Aβ或PrP，从而防止其积 聚。为此目的，合成了某些分子，它们含有两个或多个氨基吡唑基团，该 基团通过含有羰基的连接基团连接，所述连接基团例如“AmpOx“和 “Trimer”。

公开于WO 03/095429中的某些分子据报道在两种生物物理研究中对 Aβ积聚的形成具有抑制作用。根据Rzepecki等，Synthesis(2003)12，1815 -1826，其中所述的分子之一能够减少重组体PrPc在溶液中积聚。然而， 在这些研究中没有调查物理化学性质。

物理化学性质在通过神经病疗法穿透血脑屏障中起到了关键性作用。 与CNS药物的成功有关的因素已经有综述报道(H.Pajouhesh和G.R. Lenz，NeuroRx(R)：J.Am.Soc.Exp.Neurother.(2005)第2卷，541)。这些 因素包括水和正辛醇之间的分配系数(LogP)，即从本质上讲是化合物的亲 脂性。在WO 03/095429和Rzepecki等，Synthesis(2003)12，1815-1826 中描述的化合物具有不适宜的计算获得的LogP，因此，预期它们无法通 过血脑屏障。特别的是，“AmpOx”的计算获得的LogP低于0。

在上述文件中描述的其它化合物的特性使其不适合于给药于患者，因 为它们具有有害的副作用。例如，“Trimer”具有致突变性、致癌性并且在 代谢上不稳定。

本发明目的是提供能够用于治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾 病或病症(包括淀粉样变)的化合物。所述化合物能够通过血脑屏障。而且， 它们是可药用的，尤为特别的是，它们不应当具有致突变性、致癌性并且 不应当在代谢上不稳定。

本发明的另一个目的是为受眼病影响的个体提供了改良的治疗选择， 所述眼病与视觉系统组织中病理学异常/改变有关，特别是与视觉系统组织 中β-淀粉样物质相关病理学异常/改变有关，例如神经细胞退化。所述病理 学异常可以例如在不同眼组织中发生，例如：发生于视觉皮层，导致皮层 视觉不足；发生于前房和视神经，导致青光眼；发生于晶状体，导致由于 β-淀粉样物质沉积而产生的白内障；发生于玻璃体，导致眼部淀粉样变性； 发生于视网膜，导致原发性视网膜变性和黄斑变性，例如老年性黄斑变性； 发生于视神经，导致视神经玻璃疣、视神经病变和视神经炎；发生于角膜， 导致晶格营养不良。

本发明者惊奇地发现这些目的可以通过下文中所述的通式(II)化合物 获得。

因此，本发明涉及通式(II)化合物。

另一方面，本发明涉及含有通式(II)化合物的药用组合物。

本发明的另一方面涉及通式(II)化合物在制备用于治疗与淀粉样物质 或淀粉样蛋白有关的疾病或病症(包括淀粉样变)的药物中的用途。

本文也公开了治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病或病症的方 法，该方法包括给于需要此类治疗的个体有效量的通式(II)化合物。

本发明的另一方面涉及通式(I)化合物在制备药物中的用途，所述药物 用于治疗或缓解与视觉系统组织中病理学异常/改变有关的眼病的影响。

本文也公开了治疗或缓解与视觉系统组织中病理学异常/改变有关的 眼病的影响的方法，该方法包括给于需要此类治疗的个体有效量的通式(I) 化合物。

与视觉系统组织中病理学异常/改变有关的眼病特别与视觉系统组织 中β-淀粉样物质相关病理学异常/改变有关，例如神经细胞退化。所述病理 学异常可以例如在不同眼组织中发生，例如：发生于视觉皮层，导致皮层 视觉不足；发生于前房和视神经，导致青光眼；发生于晶状体，导致由于 β-淀粉样物质沉积而产生的白内障；发生于玻璃体，导致眼部淀粉样变性； 发生于视网膜，导致原发性视网膜变性和黄斑变性，例如老年性黄斑变性； 发生于视神经，导致视神经玻璃疣、视神经病变和视神经炎；发生于角膜， 导致晶格营养不良。

另一方面，本发明涉及混合物(例如药用组合物)，它含有本发明化合 物和任选的至少一种其它生物学活性化合物和/或可药用的载体和/或稀释 剂和/或赋形剂。其它生物学活性物质可以是已知的化合物，该化合物用于 由淀粉样物质或淀粉样蛋白导致或与之相关的疾病和病症(包括淀粉样变) 的药物治疗，还可以用于与淀粉样物质或淀粉样物质蛋白(例如阿尔茨海默 病中所包含的Aβ)蛋白有关的一组疾病和病症的药物治疗。

其它生物学活性物质或化合物可以通过如本发明化合物相同或相似机 制发挥其生物学作用，或通过无关的作用机制或通过多样性的相关和/或无 关作用机制发挥其生物学作用。

在样本或患者中收集用于淀粉样物质相关疾病或病症的诊断的数据的 方法也进行了公开，它包括：

(a)使得疑似含有淀粉样蛋白的样本或特定机体部分或机体部位与本 发明化合物接触；

(b)使得该化合物与淀粉样蛋白结合；

(c)测定与蛋白结合的化合物；

(d)任选将样本或特定机体部分或部位中存在或不存在与淀粉样蛋白 结合的化合物与存在或不存在淀粉样蛋白进行相关性分析。

本发明的另一个实施方案为在组织和/或体液中测定淀粉样蛋白前体 斑块负荷量的方法，它包括：

(a)提供能够代表待研究组织和/或体液的样本；

(b)用本发明化合物对样本中含有淀粉样蛋白进行测试；

(c)测定与淀粉样蛋白结合的化合物的量；并且

(d)计算组织和/或体液中斑块负荷。

另一方面涉及收集在患者中用于测定淀粉样物质相关疾病或病症的倾 向的数据的方法，它包括在样本中或在位测定本发明化合物与淀粉样蛋白 的特异结合，包括下列步骤：

(a)使得疑似含有淀粉样蛋白的样本或特定机体部分或机体部位与本 发明化合物接触，该化合物特异性地与淀粉样蛋白结合；

(b)使该化合物与淀粉样蛋白结合形成化合物/蛋白复合物；

(c)测定化合物/蛋白复合物的形成；

(d)任选将样本或特定机体部分或部位中存在或不存在的化合物/蛋白 复合物与存在或不存在的淀粉样蛋白进行相关性分析；并且

(e)任选将化合物/蛋白复合物的量与正常对照值比较。

本发明的另一方面为在患者中收集用于监测采用抗体或疫苗组合物治 疗后微小残留病的数据的方法，其中所述方法包括：

(a)使得疑似含有淀粉样蛋白的样本或特定机体部分或机体部位与本 发明化合物接触，该化合物特异性地与淀粉样蛋白结合；

(b)使该化合物与淀粉样蛋白结合形成化合物/蛋白复合物；

(c)测定化合物/蛋白复合物的形成；

(d)任选将样本或特定机体部分或部位中存在或不存在的化合物/蛋白 复合物与存在或不存在的淀粉样蛋白进行相关性分析；并且

(e)任选将化合物/蛋白复合物的量与正常对照值比较。

也公开了收集预测患者采用抗体或疫苗组合物进行治疗的响应性的数 据的方法，该方法包括：

(a)使得疑似含有淀粉样蛋白的样本或特定机体部分或机体部位与本 发明化合物接触，该化合物特异性地与淀粉样蛋白结合；

(b)使该化合物与淀粉样蛋白结合形成化合物/蛋白复合物；

(c)测定化合物/蛋白复合物的形成；

(d)任选将样本或特定机体部分或部位中存在或不存在的化合物/蛋白 复合物与存在或不存在的淀粉样蛋白进行相关性分析；并且

(e)任选将化合物/蛋白复合物的量与正常对照值比较。

本发明的另一方面为检测和诊断淀粉样物质相关疾病或病症的检验试 剂盒，它含有本发明化合物。

在第一个实施方案中，本发明涉及通式(II)化合物：

独立代表单键或双键。很明显的是，选择两个能够获得用 于药物用途的具有足够稳定性的化合物。因此，在第一个优选的选择方案 中，一个为双键，另一个为为单键，或者在第二个优选的选择 方案中，两个均为单键。可以理解，第一个优选的选择方案(其中一 个为双键，另一个为为单键)包括其中两个均为芳族体系 一部分的实施方案。

p为1、2或3。

每一个连接基团K独立为C1-3亚烷基，它任选被一或多个C1-4烷基取 代。优选每一个连接基团K为-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-。

每一个B独立为5-或6-元饱和或不饱和的杂环，其中杂环B任选被一 或多个(优选1或2个)选自下列的取代基取代：C1-4烷基、C1-4烷氧基、单 -和二-C1-4烷基氨基、C3-7环烷基氨基和5-或6-元饱和杂环基，或者两个取 代基可以结合形成饱和的、不饱和的或芳族5-7元环，该环与杂环B稠合， 其中杂环B除了含有单位V和W外，还可以含有一或多个(优选1或2个) 选自N、NR、S和O的杂原子，其中R选自H和C1-4烷基。

5-或6-元饱和杂环基团含有碳原子和一或多个(优选1或2个)选自N、 NH、O和S的杂原子。所述氮和硫原子可以任选被氧化。5-或6-元饱和杂 环基团可以与其侧链在任何杂原子或碳原子上连接。5-或6-元饱和杂环基 团的实例包括但不限于吡咯烷基、哌啶基和吗啉基。

优选每一个杂环B独立选自任选取代的二氢吲哚、任选取代的亚吡唑 基、任选取代的亚吡啶基、任选取代的2-亚吡啶酮基、任选取代的2-亚哌 啶酮基、任选取代的亚噻唑基和任选取代的异亚噻唑基。更优选每一个杂 环B独立选自下列基团：

这些基团不需要在指定的方向结合，而是也可以在相反的方向结合。 例如，

也可以结合为然而，优选它们在指定的 方向结合。

R1选自-H、-卤素、-C1-4烷基、-NH2、-NH-C1-4烷基、-C1-4亚烷基-NH2、 -C1-4亚烷基-NH-C1-4烷基、-芳基、-芳基-R3、-C1-4亚烷基-芳基、-C1-4亚烷 基-芳基-R3、-杂芳基、-杂芳基-R3、-NH-C1-4亚烷基-芳基、-NH-C1-4亚烷 基-芳基-R3、-OH和-O-C1-4烷基。R1优选为-H、-CH3、-NH-C1-4烷基或 -CH2-NH-CH3。

R3为C1-4烷基、卤素、OH或O-C1-4烷基。

R2为-H、-芳基、-C1-4烷基或下式基团：

其中B、V、W和K如上文所定义，q为0或1，且r为0或1。

优选R2为H或芳基。

每一个单位W独立为H-键接受体。优选每一个单位W独立为N或 C＝O。

每一个单位V独立为可任意选择的，并且如果存在的话，独立为H- 键供体。每一个单位V优选为NH。

芳基优选为5-7元芳基，例如苯基。

杂芳基优选为5-7元杂芳基(优选5-元杂芳基)，它包含至少一个选自 O、S或N的杂原子。实例为：

卤素优选为F或Cl。

在一个实施方案中，式(II)化合物具有式(II’)结构：

独立代表单键或双键。很明显的是，选择两个使得能够获 得具有足够稳定性的用于药物用途的化合物。因此，在第一个优选的选择 方案中，一个为双键，另一个为为单键，或者在第二个优选的 选择方案中，两个均为单键。可以理解，第一个优选的选择方案(其 中一个为双键，另一个为为单键)包括其中两个均为芳族 体系一部分的实施方案。

p为2或3。

每一个连接基团K独立为C1-3亚烷基，它任选被一或多个C1-4烷基取 代。优选每一个连接基团K为-CH2-或-CH2CH2-。

每一个B独立为5-或6-元杂环，其中杂环B任选被一或多个(优选1 或2个)选自下列的取代基取代：C1-4烷基、C1-4烷氧基、单-和二-C1-4烷基 氨基、C3-7环烷基氨基和5-或6-元饱和杂环基，或者两个取代基可以结合 形成饱和的、不饱和的或芳族5-7元环，该环与杂环B稠合，其中杂环B 除了含有单位V和W外，还可以含有一或多个(优选1或2个)选自N、 NR、S和O的杂原子，其中R选自H和C1-4烷基。

5-或6-元饱和杂环基团含有碳原子和一或多个(优选1或2个)选自N、 NH、O和S的杂原子。所述氮和硫原子可以任选被氧化。5-或6-元饱和杂 环基团可以与其侧链在任何杂原子或碳原子上连接。5-或6-元饱和杂环基 团的实例包括但不限于吡咯烷基、哌啶基和吗啉基。

优选每一个杂环B独立选自任选取代的亚吡唑基、任选取代的亚吡啶 基、任选取代的2-亚吡啶酮基、任选取代的2-亚哌啶酮基、任选取代的亚 噻唑基和任选取代的异亚噻唑基。更优选每一个杂环B独立选自下列基团：

R1选自H、C1-4烷基、NH2、NH-C1-4烷基、C1-4亚烷基-NH2、C1-4亚 烷基-NH-C1-4烷基、OH和O-C1-4烷基。R1优选为H、CH3、NH-CH3或 CH2-NH-CH3。

R2为H或下式基团：

其中B、V、W和K如上文所定义，且q为0或1。

优选R2为H。

每一个单位W独立为H-键接受体。优选每一个单位W独立为N或 C＝O。

每一个单位V独立为任意选择基团，并且如果存在的话，它独立为 H-键供体。每一个单位V优选为NH。

优选的化合物总结于下表：

在本发明化合物中，H-键供体和H-键接受体优选以与介绍部分中所述 的β-折叠结构氨基酸链中存在的H-键供体和H-键接受体模式基本上互补 的模式排列。特别的是，本发明化合物中相邻H-键供体和H-键接受体之 间的距离优选在2.6-或3.5-的范围内。

本发明化合物中相邻H-键供体和H-键接受体之间的距离可以例如通 过该化合物的Dreiding模型直接测定。或者，可以采用分子建模计算机程 序例如MacroModel 7.2测定该距离。

本发明化合物不仅以能够促进其与β-折叠结构氨基酸链结合的H-键 供体/受体模型为特征，而且它们也具有有助于其作为神经病治疗用途的有 益的物理化学性质。特别的是，它们的亲脂性应当在有助于增强其血脑屏 障通透性的范围内。优选本发明化合物在水和正辛醇之间的计算的分配系 数(milogP)在0-4的范围内，更优选在1-3的范围内。

milogP值可以根据获自世界互联网(http://www.molinspiration.com) 的软件计算，该软件由Novartis Pharma AG的P.Ertl提供。软件副本也 可以获自本申请人。

除了亲脂性外，分子的极性表面积(PSA)是确定化合物作为神经病治 疗药物的适宜性的重要因素(H.Pajouhesh等，J.Am.Soc.Exp. Neurother.(2005)第2卷，541)。PSA定义为氮和氧以及与之相连的极性氢 所占据的表面积()。它很好地反映了氢结合能力和极性。尽管将PSA考 虑进分子的三维结构中，但是拓扑PSA(TPSA)是基于相应的二维结构。尽 管PSA和TPSA提供了相似的结果，但是由于TPSA 在计算上不具有那么强的二维特征，所以TPSA能够具有明显更大的通量 (throughput)。本发明化合物的TPSA通常能够有助于化合物穿过血脑屏 障。优选本发明化合物的TPSA等于或低于

TPSA值可以根据获自世界互联网(http://www.molinspiration.com)的 软件计算，该软件由Novartis Pharma AG的P.Ertl提供。软件副本也可 以获自本申请人。

通式(II)化合物可以通过肽键的形成逐步制备，随后采用硼烷二甲基硫 化物复合物还原获得伯胺。

尽管本发明化合物能够单独给药，但是优选根据标准制药准将其制备 为药用组合物。因此，本发明也提供了药用组合物，它含有治疗有效量的 式(II)化合物以及可药用赋形剂。

该可药用的赋形剂是制药领域中众所周知的，描述于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第15版，Mack Publishing Co.，New Jersey(1991)。该药用赋形剂可以根据预期给药途径以及标准制药准则选 择。该赋形剂在对其受者无害的情况下一定是可接受的。

在本发明的药用组合物的制剂中可以使用的药用赋形剂可以包括例如 载体、赋形剂、稀释剂、溶剂(例如一元醇类(例如乙醇、异丙醇)和多元醇 类(例如二元醇)以及可食用油类(例如豆油、椰子油、橄榄油、红花油、棉 籽油)，油性酯类(例如油酸乙酯、豆蔻酸异丙基酯))、粘合剂、辅助剂、增 溶剂、增稠剂、稳定剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、缓冲剂、乳化剂、润 湿剂、混悬剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、包衣剂、防腐剂、抗氧剂、加 工助剂、药物传递改良剂以及增强剂，例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、 寡糖类、二糖类、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、 葡萄糖、羟丙基-β-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡类和离子交换树脂。

本发明化合物的给药(传递)途径包括但不限于下列一或多种：口服(例 如，以片剂、胶囊或可摄食溶液形式)、局部、粘膜(例如，以鼻用喷雾剂 或吸入用气溶胶)、鼻腔、肠胃外(例如，通过可注射用形式)、胃肠道、脊 柱内、腹膜内、肌肉内、静脉内、子宫内、眼内、皮内、颅内、气管内、 阴道内、脑室内、大脑内、皮下、眼睛(包括玻璃体内或前房内)、透皮、 直肠、颊内、硬膜外和舌下。

例如，化合物可以以片剂、胶囊、胚珠(ovules)、酏剂、溶液剂或混悬 剂的形式给药，它们可以含有矫味剂或着色剂，可以用于速释、延释、改 进的释放、缓释、脉冲释放或控释应用。

片剂可以含有赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、 磷酸二钙和甘氨酸，崩解剂，例如淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯 淀粉)、羟乙酸淀粉钠、交联羟甲纤维素钠和某些硅酸复合物，颗粒形成粘 合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素 (HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，还可以包括润滑剂，例如硬脂酸 镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石粉。相似类型的固体组合物也可以用作 明胶胶囊的填充剂。这方面的优选赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖 (milk sugar)或高分子量聚乙二醇。对于水性混悬液和/或酏剂而言，各成 分可以与下列成分混合使用：各种甜味剂或矫味剂、着色剂或染料，乳化 剂和/或混悬剂以及稀释剂，例如水、乙醇、丙二醇和甘油及其组合。

如果本发明化合物经胃肠外给药，则此类给药的实例包括下列一或多 种：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内(intrasternally)、 颅内、肌内或皮下给于化合物；和/或输注技术。对于肠胃外给药而言，化 合物最好以无菌水溶液的形式使用，该水溶液可以含有其它物质，例如， 足量的盐或葡萄糖以使得该溶液与血液等渗。如果需要，该水溶液可以经 过适当缓冲(优选缓冲至pH为3-9)。无菌条件下适当的胃肠外制剂的制 备通过本领域技术人员熟知的标准制药准则可以容易地完成。

如上所述，本发明化合物可以经鼻腔给药或者通过吸入给药，可以以 干粉吸入器的形式方便传递，或者以使用适宜的抛射剂的加压容器、泵、 喷雾器或雾化器中含有的气溶胶喷雾形式传递，所述抛射剂例如二氯二氟 甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟链烷(例如1，1，1，2-四氟乙烷 (HFA134AT)或1，1，1，2，3，3，3-庚烷氟丙烷(HFA 227EA))、二氧化碳或其它适 当的气体。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可以通过阀门所传递的计量 的量而确定。加压容器、泵、喷雾器或雾化器可以含有化合物的溶液或混 悬液，例如采用乙醇和作为溶剂的抛射剂的混合物，它们可以另外含有润 滑剂，例如脱水山梨醇三油酸酯。在吸入器或吹入器中使用的胶囊和药筒 (cartridges)(例如由明胶制备)可以制备为含有化合物和适当粉末基质(例如 乳糖或淀粉)的粉末混合物。

或者，本发明化合物可以以栓剂或阴道栓的形式给药，或者它可以以 凝胶、水凝胶、洗剂、溶液剂、乳膏或粉剂(dusting powder)的形式局部应 用。本发明化合物也可以经皮或透皮给药，例如通过使用皮肤贴剂给药。

它们也可以通过肺部或直肠途径给药。它们也可以通过眼睛途径给药。 对于眼部使用而言，化合物可以在等渗的、pH调节的、无菌盐水中制备 为微粉化的混悬液，或者优选在等渗的、pH调节的、无菌盐水中制备为 溶液，任选其还含有防腐剂，例如苯扎氯铵。或者，它们可以制备为软膏， 例如凡士林。

对于皮肤局部应用而言，本发明化合物可以制备为适当的软膏，它含 有混悬于或溶于例如由下列一或多种成分组成的混合物中的活性化合物： 矿物油、液体石蜡油、白石蜡、丙二醇、乳化的蜡和水。或者，它们可以 制备为适当的洗剂或霜剂，混悬于或溶于例如由下列一或多种成分组成的 混合物中：矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、吐温 60、十六烷基酯蜡、十六烷醇、2-辛基十二醇、苄醇和水。

通常，医师可以确定最适合个体患者的实际剂量。任何特定个体的特 殊剂量水平和给药频率可以改变，取决于多种因素，包括：使用的特定化 合物的活性，化合物的代谢稳定性和作用时间长短，年龄，体重，一般健 康情况，性别，饮食，给药模式和时间，排泄频率，药物组合应用，特定 病症的严重程度以及个体所经过的治疗。

对于人类(体重约70Kg)给药而言，本发明化合物的建议剂量是每单位 剂量为0.1mg至1g(优选1mg至500mg)的活性成分。该单位剂量可以每 天给药例如1-4次。剂量取决于给药的途径。可以理解的是，必须根据患 者的年龄和体重以及待治疗疾病的严重程度对剂量进行日常调节。精确的 剂量和给药途径最好要由主治医师或兽医师判断。

本发明化合物也可以与其它治疗成分组合应用。当本发明化合物与第 二种治疗活性成分组合应用以对抗相同疾病时，每一个化合物的剂量可以 与该化合物单独使用的剂量有所不同。

上述组合应用可以方便地以药物制剂的形式使用。此类组合应用的各 个成分可以通过任何便利的途径分别顺序或同时给药或以组合的药物制剂 给药。当顺序给药时，本发明化合物或第二种治疗成分可以首先给药。当 同时给药时，该组合可以以相同或不同的药用组合物给药。当在相同制剂 中组合时，可以理解，两种化合物必须是稳定的并且彼此以及与制剂中的 其它成分相容。当分别制成制剂时，它们可以是任何适当的制剂形式，此 类化合物的适当的此类制剂形式在本领域中是已知的。

本发明药用组合物可以根据本领域技术人员所共知的方法制备，例如 描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences，第15版，Mack Publishing Co.，New Jersey(1991)。

可以采用本发明化合物治疗的疾病可能与异常蛋白结构的形成有关， 特别是与异常β-折叠结构有关。在本发明的范围内，异常蛋白结构为当蛋 白或肽自三维结构(健康个体中通常存在的结构)再摺起形成不同的三维结 构而产生的蛋白结构，它与病理状况有关。同样，本发明范围内的异常β- 折叠结构为当蛋白或肽自三维结构(健康个体中通常存在的结构)再摺起形 成β-折叠结构而产生的β-折叠结构，它与病理状况有关。

特别的是，在一个实施方案中，可以采用本发明化合物治疗的疾病为 与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病或病症。

该组疾病和病症包括神经疾病例如阿尔茨海默病(AD)，特征在于认知 记忆能力损伤的疾病或病症，例如轻度认知功能损害(MCI)，路易体痴呆， 唐氏综合征，遗传性脑出血伴淀粉样变(荷兰型)；关岛帕金森痴呆复征。 与淀粉样蛋白有关的其它疾病为进行性核上性麻痹，多重硬化症，克-雅氏 病，帕金森病，HTV-相关痴呆，ALS(肌萎缩侧索硬化)，包涵体肌炎(IBM)， 成人发病型糖尿病，老年性心脏淀粉样变病，内分泌肿瘤及其它疾病，包 括在眼睛不同组织中发生的淀粉样物质-相关眼病，例如在视觉皮层中，包 括皮层视觉不足；在前房和视神经中，包括青光眼；在晶状体中，包括由 于β-淀粉样物质沉积而导致的白内障；在玻璃体中，包括眼部淀粉样变性； 在视网膜中，包括原发性视网膜变性和黄斑变性，特别是老年性黄斑变性； 在视神经中，包括视神经玻璃疣、视神经病变和视神经炎；在角膜中，包 括晶格营养不良。

在优选的实施方案中，本发明化合物可以用于治疗阿尔茨海默病，轻 度认知功能损害(MCI)，路易体痴呆(LBD)，肌萎缩侧索硬化(ALS)，包涵 体肌炎(IBM)和老年性黄斑变性(AMD)。在特别优选的实施方案中，本发 明化合物可以用于治疗阿尔茨海默病。

化合物抑制Aβ积聚的性能可以例如采用描述于下列文献中的荧光相 关谱测定：Rzepecki等，J.Biol.Chem.，2004，279(46)，47497-47505，或者 通过采用硫黄素T荧光分析法测定。

在另一个实施方案中，本发明化合物可以用于治疗或减轻与视觉系统 组织中病理异常/改变有关的眼病作用，特别是与视觉系统组织中β-淀粉样 物质相关病理异常/改变有关的眼病，例如，神经细胞退化。所述病理异常 可以发生例如在不同的眼组织中，例如发生在视觉皮层中导致皮层视觉不 足；发生在前房和视神经中导致青光眼；发生在晶状体中导致由于β-淀粉 样物质沉积而产生的白内障；发生在玻璃体中导致眼部淀粉样变性；发生 在视网膜中导致原发性视网膜变性和黄斑变性，例如老年性黄斑变性；发 生在视神经中导致视神经玻璃疣、视神经病变和视神经炎；发生在角膜中 导致晶格营养不良。

本发明化合物也可以以混合物的形式提供，所述混合物含有至少一种 其它生物学活性化合物和/或可药用的载体和/或稀释剂和/或赋形剂。化合 物和/或其它生物学活性化合物优选以治疗有效量存在。

其它生物学活性化合物的性能取决于该混合物的预期使用。其它生物 学活性物质或化合物可以通过与本发明化合物相同或相似的作用机制发挥 其生物学作用，或者通过无关的作用机制或通过多重性的相关和/或无关作 用机制而发挥作用。

通常，其它生物学活性化合物可以包括神经传递促进剂，精神治疗药 物，乙酰胆碱酯酶抑制剂，钙-通道阻断剂，生物胺类，苯并二氮杂镇静 剂，乙酰胆碱合成、储存或释放促进剂，乙酰胆碱突触后受体激动剂，单 胺氧化酶-A或-B抑制剂，N-甲基-D-天冬氨酸盐谷氨酸盐受体拮抗剂，非 甾体抗炎药，抗氧剂和血清素激活受体拮抗剂。特别的是，其它生物学活 性化合物可以选自下列一组化合物：用于治疗淀粉样变性病的化合物，对 抗氧化应激的化合物，抗凋亡化合物，金属螯合剂，DNA修复抑制剂(例 如哌仑西平和代谢产物)，3-氨基-1-丙磺酸(3APS)，1，3-丙二磺酸盐 (1，3PDS)，α-分泌酶激活剂，β-和γ-分泌酶抑制剂，τ蛋白，神经递质，β- 折叠分裂剂，β-淀粉样物质清除/消耗细胞成分诱导剂，N-末端截去β-淀粉 样物质(包括焦谷氨酸盐化的β淀粉样物质3-42)的抑制剂，抗炎分子或胆 碱酯酶抑制剂(ChEIs)(例如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐和/或加兰他敏)， M1激动剂，其它药物包括任何淀粉样物质或τ调节药物以及营养性补充剂， 抗体(包括任何功能性相同抗体或其功能部分)，含有源自Aβ肽的N-末端部 分的多个相邻氨基酸残基的单一或重复延伸的Aβ抗原肽片段。

在另一个实施方案中，本发明混合物可以含有烟酸或美金刚以及本发 明化合物，还含有任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。

在另一个实施方案中，提供了本发明混合物，它含有其它生物学活性 化合物“非典型抗精神病药”，例如氯氮平、齐拉西酮、利培酮、阿立哌唑 或奥氮平，用于治疗阳性和阴性精神病症状，包括幻觉、妄想、思想疾病(明 显的语无伦次、游离、词不达义)和怪异或行为紊乱以及兴致缺乏、情感冷 漠、情感淡漠和社交退缩，它还含有本发明化合物以及任选的可药用载体 和/或稀释剂和/或赋形剂。

可以适合用于与本发明化合物组合的混合物中的其它化合物描述于例 如WO 2004/058258(特别参见第16和17页)，包括治疗药物靶(第36-39 页)，链烷磺酸和链烷醇硫酸(第39-51页)，胆碱酯酶抑制剂(第51-56页)， NMDA受体拮抗剂(第56-58页)，雌激素类(第58-59页)，非甾体抗炎 药(第60和61页)，抗氧剂(第61和62页)，过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPAR)激动剂(第63-67页)，降胆固醇药物(第68-75页)，淀粉样物质 抑制剂(第75-77页)，淀粉样物质形成抑制剂(第77-78页)，金属螯合剂 (第78和79页)，抗精神病和抗抑郁药物(第80-82页)，营养补充剂(第83 -89页)和提高脑内生物学活性物质有效性的化合物(参见第89-3页)和前 药(第93和94页)，这些文献均在此引入作为参考。

在一个优选的实施方案中，其它生物学活性化合物为包含任何功能性 相当抗体或其功能部分的抗体。该抗体可以优选为单克隆抗体、嵌合抗体 或人源化抗体。

本发明的另一方面，除了本发明化合物外，混合物还含有抗体(包括其 功能部分)，或者，更具体地讲，还含有单克隆抗体(包括其功能部分)，它 能够识别并与β-淀粉样物质(Aβ)结合，特别是天然构象的β-淀粉样物质， 也就是淀粉样物质低聚物和纤维，但是不与非线性化的淀粉样物质种类结 合。

特别的是，所述抗体能够在体外和体内抑制产生淀粉样物质的单体肽 聚集为高分子聚合淀粉样物质原纤维或丝状体，特别是β-淀粉样物质单体 肽，例如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但是特别是Aβ1-42单 体肽。通过抑制产生淀粉样物质的单体肽的积聚，这些抗体能够防止或降 低淀粉样物质斑块的形成，特别是淀粉样物质形式(1-42)的形成，已知其通 过二级构象的改变而变得不溶，是患病动物或人类脑中淀粉样物质斑块的 主要部分。

在本发明的另一方面，该混合物含有抗体，当与预成型的高分子聚合 淀粉样物质原纤维或丝状物(由淀粉样物质单体肽的积聚形成，特别是β- 淀粉样物质单体肽，例如，Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但 是特别是Aβ1-42单体肽)共同温育时，它们能够解聚所述高分子聚合淀粉样 物质原纤维或丝状物。通过解聚产生淀粉样物质的聚合原纤维或丝状体， 这些抗体能够防止或降低淀粉样物质斑块的形成，这能够使得与疾病相关 的症状缓解并能够延迟或逆转其进展。

在本发明的另一方面，该混合物含有抗体，但是特别是单克隆抗体或 其功能部分，该抗体为双功能化的或者双特异性的，从而其具有本文中前 面所定义的积聚抑制特性以及解聚特性，特别是具有高度构象敏感性。

在一个实施方案中，该混合物含有抗体，它能够识别并与构象表位结 合，特别是在β淀粉样肽物质的N-末端部分中存在的构象表位，尤其是嵌 入β淀粉样肽物质的N-末端部分的下列核芯区域的那些：

Val-His-His-GIn-Lys-Leu-Val-  Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-

12  13  14  15   16  17   18   19   20  21  22  23

特别是表位位于氨基酸残基12-24之间的β-淀粉样蛋白区域，特别是 残基14-23之间，更特别在氨基酸残基14-20之间，包含3个明显的识 别和结合位点，该残基以绝对优势参与了β-淀粉样蛋白的结合，分别位于 16、17位，19和20位以及14位。

在特殊的实施方案中，本发明的混合物除了本发明化合物外还含有抗 体，特别是双功能抗体，特别是单克隆抗体，尤其是双功能单克隆抗体， 包括任何功能性相同的抗体或其功能部分，该抗体具有由杂交瘤细胞系产 生的抗体的特性，所述细胞系分别选自：2005年12月1日和2005年12 月9日以DSM ACC2752、DSM ACC 2750和DSM ACC2751保藏 (deposited)的FP 12H3、FP 12H3-C2和FP 12H3-G2，2005年12月8日以 DSM ACC2755保藏的ET 7E3，2005年12月8日以DSM ACC2756保藏 的EJ 7H3。

更特别的是，本发明涉及抗体，包括由杂交瘤细胞系产生的任何功能 相当的抗体或其功能部分，所述细胞系分别选自：2005年12月1日和2005 年12月9日以DSM ACC2752、DSM ACC 2750和DSM ACC2751保藏的 FP 12H3、FP 12H3-C2和FP 12H3-G2，2005年12月8日以DSM ACC2755 保藏的ET 7E3，2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的EJ 7H3。

上述抗体描述于公开的国际申请WO 2007/068412，它在此引入作为 参考。

另一方面，本发明混合物中含有的抗体为嵌合抗体或其片段，或者为 人源化抗体或其片段。适用于本发明混合物的这些和其它抗体描述于例如 2007年7月13日提交的国际申请PCT/US2007/073504。

如果抗体为人源化抗体，它优选具有国际申请号PCT/US2007/073504 的SEQ ID No.2和SEQ ID No.4中所描述的轻链和重链，或具有国际申 请号PCT/US2007/073504的SEQ ID No.1和SEQ ID No.3中所描述的轻 链可变区以及重链可变区。这些序列也列示于随附的序列表中。

在本发明的另一方面，除了本发明化合物以及本文中前面所述的化合 物外，混合物还含有源自Aβ肽的N-末端部分的肽片段，特别是由源自Aβ 肽的N-末端部分的13-15个相邻氨基酸残基的单一或重复延伸的Aβ肽片 段，特别是由选自下列的氨基酸残基组成的Aβ肽片段：源自Aβ肽的N- 末端部分的残基1-15、1-14和1-13，更特别是残基1-15，包括其功 能性相同的片段，尤其是本文中前面所述的Aβ肽片段，它能够附着于、 结合于或重组于载体颗粒/辅助剂，例如脂质体。该肽片段可以包含在疫苗 组合物中。特别是，该肽抗原经过亲脂性部分或疏水性部分的修饰，这有 助于插入脂质体载体/免疫辅助剂的脂质双层，特别是通过作为脂质体双层 中肽锚钩的亲脂性部分或疏水性部分的修饰，其大小能够使得该肽被定位 并在接近脂质体的表面稳定。

在本发明的另一个实施方案中，亲脂性部分或疏水性部分为脂肪酸、 甘油三酯或磷脂，特别是脂肪酸、甘油三酯或磷脂。特别的是，疏水性部 分为棕榈酸，脂质体制剂可以另外含有辅助剂，例如脂质A、明矾、磷酸 钙、白介素1和/或多糖和蛋白的微囊，特别是脱毒类脂A，例如单磷酰基 或二磷酰基类脂A或明矾。

可以适用于本发明混合物中的这些和其他组合物描述于例如公开的国 际申请WO 2007/068411。

患者中淀粉样物质相关疾病或病症的诊断或者患者中淀粉样物质相关 疾病或病症倾向的诊断可以通过测定本发明化合物与淀粉样蛋白在样本中 或在位特异结合而进行，它包括使得疑似含有淀粉样物质抗原的样本或特 定机体部分或机体区域与能够结合淀粉样蛋白的本发明化合物结合，使得 本发明化合物与淀粉样蛋白结合形成化合物/蛋白复合物，测定化合物/蛋 白复合物的形成，将样本或特定机体部分或区域中存在或不存在的化合物/ 蛋白复合物与存在或不存在的淀粉样蛋白进行相关性分析，任选将所述化 合物/蛋白复合物的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比较的 所述聚集体的量可以说明所述患者是否患有淀粉样物质相关疾病或病症或 者是否处于发展为淀粉样物质相关疾病或病症的风险中。

采用本发明化合物或混合物治疗后患者中微小残留病的监测可以通过 测定本发明化合物与淀粉样蛋白在样本中或在位特异结合而进行，它包括 使得疑似含有淀粉样物质抗原的样本或特定机体部分或机体区域与能够结 合淀粉样蛋白的本发明化合物结合，使得该化合物与淀粉样蛋白结合形成 化合物/蛋白复合物，测定化合物/蛋白复合物的形成，将样本或特定机体 部分或区域中存在或不存在的化合物/蛋白复合物与存在或不存在的淀粉 样蛋白进行相关性分析，任选将所述化合物/蛋白复合物的量与正常对照值 进行比较，其中与正常对照值相比较的所述聚集体的量可以说明所述患者 是否仍然患有微小残留病。

患者对于本发明化合物或组合物或混合物的应答性的预测可以通过测 定本发明化合物与淀粉样蛋白在样本中或在位特异结合而进行，它包括使 得疑似含有淀粉样蛋白的样本或特定机体部分或机体区域与能够结合淀粉 样蛋白的本发明化合物结合，使得该化合物与淀粉样蛋白结合形成化合物/ 蛋白复合物，测定化合物/蛋白复合物的形成，将样本或特定机体部分或区 域中存在或不存在的化合物/蛋白复合物与存在或不存在的淀粉样蛋白进 行相关性分析，任选比较治疗前和治疗开始后所述化合物/蛋白复合物的 量，其中所述聚集体的量的增加可以说明所述患者是否对治疗具有高响应 性。

用于淀粉样物质相关疾病或病症诊断或者用于淀粉样物质相关疾病或 病症倾向诊断或者用于患者微小残留病监测或者用于患者对本发明化合物 或组合物或混合物治疗应答性预测的以及如本文中前面所述的生物学样本 为例如：体液，例如血清、血浆、唾液、胃分泌液、脑脊液、淋巴液等或 获自有机体的组织或细胞样本，例如神经、脑、心脏或血管组织。为了测 定样本中淀粉样蛋白的存在与否，可以采用本领域技术人员已知的任何免 疫测定方法(参见Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual(抗 体：实验室手册)(Cold Spring Harbor Laboratory(冷泉港实验室)，纽约， 1988，555-612)，例如，利用间接检验方法采用第二种试剂测定的分析方法， ELISA分析方法以及免疫沉淀和凝聚分析方法。这些分析方法的详细描述 例如参见Maertens和Stuyver的WO96/13590、Zrein等(1998)和 WO96/29605。

对于在位诊断而言，本发明以及如上所述的化合物或组合物或混合物 可以给药于根据本领域已知方法诊断的有机体，例如，可以采用静脉内、 鼻腔内、腹膜内、脑内、动脉内注射给药，从而使得本发明化合物与淀粉 样物质抗原之间的特异性结合可以发生。化合物/蛋白复合物可以通过与化 合物结合的标记物测定。

在诊断应用中使用的或者或者在淀粉样物质相关疾病或病症倾向诊断 应用中使用的或者在监测患者微小残留病中使用的或者在患者对本发明化 合物或组合物或混合物治疗应答性预测中使用的以及如本文中前面所述的 免疫分析方法通常有赖于用于测定的标记的抗原、抗体或第二种试剂。这 些蛋白或试剂可以采用本领域技术人员通常已知的化合物标记，所述化合 物包括酶、放射性同位素以及荧光性、冷光性和发色物质，包括染色的颗 粒，例如胶体金和乳胶珠。其中，放射活性标记可以用于几乎所有类型的 分析，并且可以进行最大化的变通。当必须避免放射活性时，或者当需要 快速获得结果时，酶-共轭的标记物特别适用。尽管它们使用时需要昂贵的 设备，但是荧光色素提供了非常敏感的测定方法。在这些分析中使用的抗 体包括单克隆抗体、多克隆抗体和亲和性纯化的多克隆抗体。

或者，本发明化合物可以通过与标记物反应而间接标记，所述标记物 对免疫球蛋白具有亲和性，例如蛋白A或G或第二抗体。抗体可以与第二 种物质共轭，可以采用对与抗体共轭的第二种物质具有亲和性的标记的第 三种物质进行测定。例如，该抗体可以与生物素共轭，该抗体-生物素共轭 物可以采用标记的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白测定。同样，该抗体 可以与半抗原共轭，该抗体-半抗原共轭物可以采用标记的抗-半抗原抗体 测定。

本领域技术人员了解这些和其它适当的本发明中所使用的标记物。这 些标记物与抗体或其片段的结合可以采用本领域技术人员所共知的标准技 术完成。典型技术描述于Kennedy，J.H.等1976(Clin.Chim.Acta 70：1-31) 和Schurs，A.H.W.M.等1977(Clin.Chim Acta 81：1-40)。

后面所述偶合技术为戊二醛方法、高碘酸盐方法、二马来酰亚胺法等， 所有这些方法在此引入作为参考。

目前的免疫测定方法采用测定分析物存在的双抗体方法，其中抗体通 过与第二种抗体的反应性而间接标记，所述第二种抗体采用可检测标记物 进行标记。第二种抗体优选能够与动物抗体结合的抗体，单克隆抗体衍生 自该动物抗体。换句话说，如果该单克隆抗体为鼠抗体，则标记的、第二 种抗体为抗-鼠抗体。对于下面所述分析中使用的单克隆抗体而言，该标记 物优选为抗体包被的珠，特别是磁珠。对于本文中所述的免疫测定方法中 使用的多克隆抗体而言，标记物优选为可检测的分子，例如放射活性物质、 荧光物质或电化学发光物质。

可供选择的双抗体系统通常是指快速格式系统(fast format systems)， 因为它们适合于快速测定分析物的存在，该系统也可以应用在本发明的范 围内。该系统要求抗体和分析物之间存在高亲和性。根据本发明的一个实 施方案，淀粉样物质抗原的存在可以采用抗体对测定，每一个均对淀粉样 物质抗原具有特异性。所述抗体对中的一个在本文中称为“检测抗体”，所 述抗体对中的另一个在本文中称为“捕获抗体”。所述单克隆抗体可以用作 捕获抗体或者用作检测抗体。所述单克隆抗体在单一分析中既可以用作捕 获抗体也可以用作检测抗体。因此，本发明的一个实施方案使用双抗体夹 层法测定生物体液样本中的淀粉样物质抗原。在该方法中，分析物(淀粉样 物质抗原)位于检测抗体和捕获抗体之间，捕获抗体不可逆地固定在固体载 体上。检测抗体含有可检测的标记，从而可以鉴别抗体-分析物夹层的存在， 因而可以测定分析物的存在。

典型的固相物质包括但不限于微量板、聚苯乙烯试管、磁珠、塑料珠 或玻璃珠以及载玻片，它们在放射免疫分析和酶分析中是众所周知的。将 抗体偶合至固相的方法也是本领域技术人员所熟知的。近来，多种多孔材 料已经被用作固体载体，例如尼龙、硝基纤维素、乙酸纤维素、玻璃纤维 和其它多孔聚合物。

在组织和/或体液(例如患有眼病的动物特别是哺乳动物尤其是人类的 视网膜神经节细胞层，所述眼病与视觉系统组织中的病理异常/改变有关， 特别是与视觉系统组织中的β-淀粉样物质相关病理异常/改变有关)中的斑 的量可以根据本领域已知方法计算，所述方法例如公开于Ding，J.-D.等， “靶向阿尔茨海默病伴发的老年性黄斑变性的免疫疗法：抗-b-淀粉样物质 抗体减少老年性黄斑变性小鼠模型中的病理学改变(Targeting age-related macular degeneration with Alzheimer’s disease based immunotherapies： Anti-amyloid-b antibody attenuates pathologies in an age-related macular degeneration mouse model)”，Vision Research(2007)，doi：10.1016/j.visres. 2007.07.025。

本发明化合物也可以组合为用于检测淀粉样蛋白的检测试剂盒。该检 测试剂盒通常包括盛放一或多种本发明化合物的容器以及如何使该化合物 与淀粉样蛋白结合形成化合物/蛋白复合物结合并检测化合物/蛋白复合物 的形成的说明书，从而将化合物/蛋白的存在与否与淀粉样蛋白的存在与否 相关联。

术语“检测试剂盒”通常是指本领域中已知的任何诊断试剂盒。更具体 地讲，后面的术语是指Zrein等(1998)所述的诊断试剂盒。

实施例

本发明通过下列非限定性实施例进行阐明。

2a的制备：

5-对-甲苯基-N-((5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)甲基)-1H-吡唑-3-胺二盐 酸盐

将乙酰氯(6.16mL，86.60mmol)滴加至5-氨基-3-(4-甲基苯基)吡唑(5g， 28.86mmol)和碳酸钾(14g，101.03mmol)的无水MeCN(100mL)悬浮液中。 将反应混合物回流16hrs。蒸发溶剂，将残留物再悬浮于氯仿中，用1N HCl、 sat.aq.NaHCO3、H2O和盐水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶剂，粗品N-(1- 乙酰基-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)乙酰胺无需进一步纯化可以直接用于下 一步骤。

将粗品N-(1-乙酰基-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)乙酰胺溶于含有2滴 33％氨溶液的MeOH/THF/H2O(2∶2∶1，150mL)混合物中。将反应混合物搅 拌16hrs，然后蒸发溶剂，粗品N-(5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)乙酰胺无需 进一步纯化可以直接用于下一步骤。MS(ESI)：m/z：216.29[MH+]。

将粗品N-(5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)乙酰胺(28.86mmol)、3，4-二氢 -2H-吡喃(6.7mL，72.15mmol)和三氟乙酸(43μL，0.58mmol)在无水 MeCN(60mL)中混合物回流16hrs。蒸发溶剂，将残留物再悬浮于 CH2Cl2(50mL)，用H2O和盐水，硫酸钠干燥。蒸发溶剂，粗品N-(5-甲苯 基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺无需进一步纯化可以直接 用于下一步骤。MS(ESI)：m/z：300.33[MH+]。

将粗品N-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺 (28.86mmol)溶于EtOH/H2O(2∶3，100mL)和氢氧化钾(11g，202mmol)，将 其回流16hrs.将反应混合物浓缩，然后用CHCl3萃取。合并的有机层用 盐水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶剂并经硅胶柱色谱纯化(PE-EtOAc，7∶3至 3∶7)获得5-甲苯基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-胺(2.99g区域异构体 A和4.39g区域异构体B，4步收率99％)。

区域异构体A：

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝7.63(d，J＝7.7Hz，2H)，7.16(d，J＝8.6Hz，2H)，5.81 (s，1H)，5.38(dd，J＝8.9Hz，J＝2.6Hz，1H)，4.01(bm，3H)，3.68(dt，J＝11.5Hz，J＝2.6Hz， 1H)，2.38(m，1H)，2.35(s，3H)，2.03-2.14(m，2H)，1.62-1.71(m，3H).

MS(ESI)：m/z：258.37[MH+]

区域异构体B：

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝7.36(d，J＝8.0Hz，2H)，7.24(d，J＝8.0Hz，2H)，5.69 (s，1H)，5.03(dd，J＝10.2Hz，J＝2.5Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.69(bs，2H)，3.54(dt，J＝12.0 Hz，J＝2.5Hz，1H)，2.46(m，1H)，2.41(s，3H)，1.70-1.79(m，2H)，1.50-1.59(m，3H).

MS(ESD：m/z：258.37[MH+].

将5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸(250mg，1.24mmol)和硫酸(120μL， 1.48mmol)的甲醇(5mL)溶液加热至回流16hrs。蒸发溶剂，将残留物再悬 浮于CH2Cl2。将残留物过滤，滤液用水和盐水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶 剂，将白色固体与先前收集的沉淀物合并。获得为白色固体的5-对-甲苯基 -1H-吡唑-3-甲酸甲酯(224mg，84％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)： (ppm)＝7.56(d，J＝7.6Hz，2H)，7.22(d，J＝8.0Hz，2H)，7.02(s，1H)，3.91(s，3H)，2.36(s， 3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)＝129.61，125.45，105.03，52.02，21.19.

将5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(224mg，1.03mmol)、3，4-二氢-2H- 吡喃(190μL，2.07mmol)和三氟乙酸(2μL，0.02mmol)在无水MeCN(3mL)中 的混合物回流2hrs。蒸发溶剂。将残留物再悬浮于CH2Cl2(50mL)，用水 和盐水洗涤。经硫酸钠干燥后，蒸发溶剂，经硅胶柱色谱纯化(PE-EtOAc， 6∶4)，获得1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(363mg， 68％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝7.40(d，J＝8.0Hz，2H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，6.82 (s，1H)，5.25(d，J＝10.0Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.92(s，3H)，3.57(t，J＝10.8Hz，1H)，2.61 (m，1H)，2.41(s，3H)，2.03(m，1H)，1.82(d，J＝8.06Hz，1H)，1.58-1.52(m，3H).

将1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(363mg， 0.70mmol)溶于MeOH/THF/H2O(1∶2∶1，4mL)的混合物中。加入氢氧化锂， 将反应混合物搅拌16hrs。反应混合物用水稀释，用DCM洗涤。蒸发水 相。获得为白色固体1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸 (205mg，定量)，它无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝7.13(d，J＝6.8Hz，2H)，7.04(d，J＝6.8Hz，2H)，6.60 (s，1H)，4.92(d，J＝9.6Hz，1H)，3.89(d，J＝8.4Hz，1H)，3.35(t，J＝10.8Hz，1H)，2.40(m， 1H)，2.31(s，3H)，1.75(m，1H)，1.54(m，2H)，1.25(m，2H).

将5-甲苯基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-胺(化合物A，81mg， 0.31mmol)加至1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸 (100mg，0.34mmol)、2-氯-1-甲基吡啶碘化物(122mg，0.47mmol)和N，N′-二 异丙基乙基胺(163μL，0.94mmol)的DCM(10mL)溶液中。将反应混合物于 室温下搅拌16hrs。将反应混合物用水稀释，用DCM萃取。有机层用盐 水洗涤，硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物经硅胶柱色谱纯化(PE-EtOAc，9∶1)， 获得1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡 唑-3-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺(70mg，43％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝9.37(s，0.5H)，9.34(s，0.5H)，7.43(m，4H)，7.28(m， 4H)，6.95(s，0.5H)，6.94(s，0.5H)，6.90(s，1H)，5.24(m，2H)，4.15(m，2H)，3.60(m，2H)，2.45 (m，2H)，2.42(s，6H)，1.80(m，2H)，1.56(m，4H)，1.25(m，4H).

将1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H- 吡唑-3-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺(142mg，0.27mmol)悬浮于无水 THF(10mL)中，滴加硼烷二甲基硫复合物(177μL，1.86mmol)。反应混合物 于回流下搅拌16hrs。然后将反应混合物冷却至0℃，加入MeOH(500μL)。 然后将混合物搅拌10分钟。加入浓盐酸(12N)直到pH＜2，将获得的混合 物于回流下搅拌16hrs。将混合物冷却至室温，过滤沉淀物，将其加至氢 氧化钠水溶液(1M)中。水相用DCM萃取(3×10mL)，有机层用硫酸钠干 燥，蒸发溶剂。残留物经硅胶柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)，获得为白色 固体的5-对-甲苯基-N-((5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)甲基)-1H-吡唑-3-胺。

将5-对-甲苯基-N-((5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)甲基)-1H-吡唑-3-胺 (27mg，0.078mmol)在甲醇制HCl(3N，1mL)中重结晶。过滤固体，用乙醚 洗涤，真空干燥，获得白色固体。Mp＝132℃。

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝7.73(d，J＝8.0Hz，2H)，7.62(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33(d， J＝8.0Hz，2H)，7.22(d，J＝8.0Hz，2H)，6.63(s，1H)，6.30(s，1H)，4.42(s，2H)，2.36(s，3H)， 2.31(s，3H).

2c的制备：

N5-丙基-N2-((6-((6-(丙基氨基)吡啶-3-基)甲基氨基)吡啶-3-基)甲基)吡 啶-2，5-二胺

试剂：i)2-氯-1-甲基吡啶碘化物，ii)KOH/EtOH/H2O，iii)5/2-氯-1- 甲基吡啶碘化物，iv)n-丙基胺/回流，16h，v)BMS/THF/32h

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(2.99g，10mmol)和DIPEA(3mL)加至6-氨基 烟酸甲酯1(760mg，5mmol)和6-溴代烟酸2(1g，5mmol)的THF(150mL)混 合物中。将反应混合物于室温下搅拌4天。当反应结束时，将反应混合物 浓缩至其原体积的1/3，过滤沉淀的产物。浓缩滤液，用氯仿稀释(100mL)， 用水和盐水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶剂获得粗品黄色产物，将其在EtOAc 中结晶，获得6-(6-溴烟酰氨基)烟酸甲酯3，为白色固体(1g，65.4％)。Mp. 234-235℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝11.5(s，1H)，8.96(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(s，1H)，8.36(dd， J＝2.0Hz，J＝8.0Hz，1H)，8.33(d，J＝12Hz，1H)，8.28(dd，J＝2.4Hz，J＝8.0Hz，1H)，7.83 (d，J＝8.4Hz，1H)，3.88(s，3H).

MS(ESI)：m/z＝338(M+2H)

将KOH颗粒(5g)加至6-(6-溴烟酰氨基)烟酸甲酯3(5g，14.8mmol)在 甲醇和水(150/50mL)的混悬液中。将反应混合物搅拌4小时。然后蒸发溶 剂，将pH调节至2以下。过滤白色固体，用冷水洗涤，真空干燥，获得 6-(6-溴烟酰氨基)烟酸4(1.8g，37％)。Mp.270-272℃。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝11.52(s，1H)，8.95(s，1H)，8.91(s，1H)，8.29(m，3H)， 7.83(d，J＝8.0Hz，1H).MS(ESI)：m/z＝322(M+).

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(2.37g，18.6mmol)加至6-(6-溴烟酰氨基)烟 酸4(2g，6.21mmol)和2-氨基-5-溴吡啶5(1.07g，6.21mmol)在THF(100mL) 的悬浮液中，随后加入DIPEA(2.4g，18.6mmol)。将反应混合物于室温下搅 拌4天。过滤悬浮液，用水(25ml)洗涤。浓缩滤液，氯仿稀释，用水和盐 水洗涤，然后经硫酸钠干燥。在蒸发中产物形成沉淀，真空干燥获得6-溴 -N-(5-(5-溴吡啶-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)烟酰胺6，为黄色固体(400mg， 14％)。Mp.245-247℃。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝11.1(br s，1H)，10.8(br s，1H)，9.0(s，1H)，8.7(s，1H)， 8.53(s，1H)，8.41(d，J＝8.4Hz，1H)，8.30(d，J＝8.8Hz，1H)，8.21(d，J＝8.4Hz，1H)，8.1(d， J＝9.2Hz，1H)，8.01(d，J＝8.8Hz，1H)，7.32(br s，1H)，6.51(d，J＝8.8Hz)，3.2(d，J＝6.0 Hz，4H)，1.57(q，J＝7.2Hz，4H)，0.92(t，J＝7.2Hz，6H)

MS(ESI)：m/z＝478(M+H).

将6-溴-N-(5-(5-溴吡啶-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)烟酰胺6(350mg， 0.73mmol)溶于纯正丙胺。将反应混合物于回流下加热3天。然后蒸发溶 剂获得粗品产物，将其在EtOAc中结晶获得6-(丙基氨基)-N-(5-(5-(丙基氨 基)吡啶-2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)烟酰胺7(122mg，收率38％)，为白色 固体。Mp.249-250℃。

1H-NMR(400MHz，D2O+DMSO-d6)：δ＝8.95(d，J＝2.0Hz，1H)，8.68(d，J＝2.0Hz，1H)， 8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，8.36(dd，J1＝2.2，J2＝8.8Hz，1H)，8.24(d，J＝8.8Hz 1H)，8.15(d，J ＝8.8Hz，1H)，8.06(dd，J1＝2.2，J2＝9.2Hz，1H)，7.96(dd，J1＝1.6，J2＝8.8Hz 1H)，6.51(d，J ＝8.8Hz，1H)，3.25(t，J＝4.0Hz，4H)，1.54(m，4H)，0.90(t，J＝7.3Hz，6H).

MS(ESD：m/z＝457(M+Na).

将BMS(129μL 1.73mmol)加至6-(丙基氨基)-N-(5-(5-(丙基氨基)吡啶 -2-基氨基甲酰基)吡啶-2-基)烟酰胺7(75mg，0.173mmol)的THF(15mL)溶 液中。将反应混合物回流过夜并冷却，然后加入MeOH，再加入浓HCl。 将混合物再次回流16hrs。然后将反应混合物浓缩，残留物在水(5mL)中稀 释，采用NaOH溶液将pH调节至14。水层用氯仿萃取(50ml×3)，合并 的有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥。蒸发溶剂获得残留物，将 其经硅胶色谱纯化(2∶98，MeOH∶EtOAc)，获得棕色粘稠物(5mg，7％)。然 后将其用HCl/MeOH处理获得N5-丙基-N2-((6-((6-(丙基氨基)吡啶-3-基)甲 基氨基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2，5-二胺盐酸盐8(5mg)，为胶状物。

1H-NMR(400MHz，D2O+DMSO-d6)：δ＝8.48(s，3H)，7.88(d，J＝8.8Hz 3H)，6.33(d，J＝ 8.8Hz，3H)，6.08(brs，2H)5.04(brs，2H)，3.42(m，2H)，3.27(m，2H)，1.63(m，4H)，1.03(m， 6H)

MS(ESI)：m/z＝408(M+3H)

2h的制备：

N-苄基-5-((5-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(0.55g，2.2mmol)、DIEA(0.37g，2.9mmol)和 5-对-甲苯基噻唑-2-胺(0.27g，1.44mmol)加至2-溴噻唑-5-甲酸(0.30g， 1.44mmol)的DMF(5mL)悬浮液中。将获得的溶液于室温下搅拌直到反应 完成。然后将混合物用AcOEt稀释，用水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。粗 品产物经柱色谱纯化(30％，AcOEt/PE)，获得为固体的2-溴-N-(5-对-甲苯 基噻唑-2-基)噻唑-5-甲酰胺(250mg，46％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：8.19(s，1H)，7.6(d，J＝8Hz，2H)，7.15(d，J＝8Hz， 2H)，7.04(s，1H)，2.31(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：157.89，149.44，147.77，144.33，143.16，141.99，138.10， 137.38，131.07，129.32，125.87，107.34，20.93.

MS(ESI)：m/z(％)：379.87[MH+].

将苄基胺(0.143mL，1.32mmol)加至2-溴-N-(5-对-甲苯基噻唑-2-基)噻 唑-5-甲酰胺(250mg，0.66mmol)的DMF(4mL)溶液中。将反应混合物于回流 下搅拌2hrs。然后将其用AcOEt稀释，用水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。 粗品产物经沉淀纯化(AcOEt/PE)，获得为固体的2-(苄基氨基)-N-(5-对-甲 苯基噻唑-2-基)噻唑-5-甲酰胺(190mg，71％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：8.85(bs，1H)，8.25(s，1H)，7.80(d，J＝8Hz，2H)，7.46 (s，1H)，7.35(m，3H)，7.28，(m，2H)，7.23(d，J＝8Hz，2H)，4.53(s，1H)，2.33(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：172.44，158.89，148.82，145.74，145.06，137.99， 136.75，131.58，128.97，128.15，127.19，126.92，125.46，118.98，106.83，47.44，20.49.

MS(ESI)：m/z(％)：407.36[MH+].

于室温下，将BMS(0.2mL，2.1mmol)加至2-(苄基氨基)-N-(5-对-甲苯 基噻唑-2-基)噻唑-5-甲酰胺(170mg，0.42mmol)的THF(6mL)溶液中。将获 得的溶液于回流下搅拌过夜。然后将反应物用MeOH(2mL)淬灭，加入1N HCl直到pH达到2。于回流下将反应混合物搅拌12hrs后，蒸发有机溶 剂，水溶液用1N NaOH中和，用氯仿萃取，经硫酸钠干燥并浓缩。粗品 产物经柱色谱纯化(AcOEt)，获得N-苄基-5-((5-对-甲苯基噻唑-2-基氨基) 甲基)噻唑-2-胺(30mg，18％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.59(d，J＝8Hz，2H)，7.23(m，5H)，7.11(d，J＝8Hz， 2H)，6.93(s，1H)，6.58(s，1H)，4.40(s，2H)，4.32(s，2H)，3.41(bs，2H)，2.29(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：197.01，170.75，151.05，137.39，137.26，137.03， 131.82，129.07，128.48，127.48，127.41，125.75，121.99，100.46，49.30，41.95，20.99.

MS(ESI)：m/z：393.28[MH+].

将N-苄基-5-((5-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺(20mg， 0.05mmol)溶于甲醇制HCl(3N，1mL)，加入CHCl3/AcOEt。通过倾析过滤 沉淀的固体，真空干燥，获得N-苄基-5-((5-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基) 噻唑-2-胺二盐酸盐，为白色固体(11mg，10％)。Mp.105-106℃。

2j的制备：

N-苄基-5-((4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2j根据2h所述方法制备，采用4-对-甲苯基噻唑-2-胺和2-溴 噻唑-5-甲酸作为原料：(3.5mg，59％)。Mp.106-108℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.61(d，J＝8Hz，2H)，7.28(m，5H)，7.13(d，J＝8Hz， 2H)，6.95(s，1H)，6.60(s，1H)，4.42(s，2H)，4.34(s，2H)，3.01(bs，2H)，2.31(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：170.68，168.62，151.11，138.15，137.48，137.23， 131.86，129.12，128.55，127.56，127.74，125.80，122.076，100.53，49.33，40.07，21.07.

MS(ESI)：m/z(％)：393.29[MH+].

2k的制备：

N-苄基-5-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(0.84g，3.3mmol)、DIPEA(0.78mL，4.4mmol) 和3-氨基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-甲酸叔-丁基酯(0.5g，2.2mmol)加至2-溴 噻唑-5-甲酸(0.45g，2.2mmol)的DMF(6mL)溶液中。将获得的溶液于室温下 搅拌直到反应完成。然后将混合物用AcOEt稀释，用水洗涤，经硫酸钠干 燥并浓缩。粗品产物经柱色谱纯化(50％-100％AcOEt/PE梯度洗脱)，获得 3-(2-溴噻唑-5-甲酰氨基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-甲酸叔-丁基酯(160mg， 20％)，为白色固体。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：11.39(s，1NH)，8.56(s，1H)，7.79(t，J＝7Hz，2H)， 7.31(t，J＝8.6Hz，2H)，6.96(s，1H)，1.71(s，9H).

将苄基胺(0.1mL，0.87mmol)加至3-(2-溴噻唑-5-甲酰氨基)-5-(4-氟苯 基)-1H-吡唑-1-甲酸叔-丁基酯(160mg，0.43mmol)的二氧六环(3mL)溶液 中。将获得的溶液于85℃搅拌24hrs。蒸发溶剂，粗品产物经柱色谱纯化 (0-10％MeOH/AcOEt梯度洗脱)，获得2-(苄基氨基)-N-(5-(4-氟苯基)-1H- 吡唑-3-基)噻唑-5-甲酰胺(180mg，90％)，为白色固体。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.85(s，1H)，7.64(s，2H)，7.34-7.27(m，5H)，7.08(t，J ＝8.6Hz，2H)，6.71(s，1H)，4.51(s，2H)，4.39(s，2H).

MS(ESI)：m/z：394.37[MH+].

将BMS加至2-(苄基氨基)-N-(5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基)噻唑-5-甲酰 胺(50mg，0.13mmol)的THF(1mL)溶液中。将获得的溶液于室温下搅拌过 夜。然后将反应物通过MeOH(0.5mL)淬灭，加入1N HCl直到pH＝2。 将反应混合物于室温下搅拌3hrs后，蒸发有机溶剂，水溶液用饱和的 NaHCO3水溶液中和，用AcOEt萃取，经硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物经 柱色谱纯化(0-2％MeOH/AcOEt梯度洗脱)，获得N-苄基-5-((5-(4-氟苯 基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)噻唑-2-胺(59mg，98％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)：(ppm)：7.49(s，2H)，7.30-7.27(m，5H)，7.03(t，J＝8 Hz，2H)，6.94(s，1H)，5.82(s，1H)，4.35(s，2H)，4.28(s，2H).

MS(ESI)：m/z：380.34[MH+].

将N-苄基-5-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)噻唑-2-胺(59mg， 0.13mmol)溶于甲醇制HCl(3N，1mL)，加入AcOEt。通过倾析过滤沉淀的 固体，真空干燥，获得N-苄基-5-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基) 噻唑-2-胺二盐酸盐，为黄色固体(14mg，25％)。Mp.78-80℃。

2n的制备：

N-甲基-5-((4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2n根据2w所述方法制备，采用4-对-甲苯基噻唑-2-胺和2-(甲 基(四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲醛作为原料：(28mg，80％)。Mp.1 14-116℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.97(t，J＝5.6Hz，1H)，7.75(d，J＝8Hz，2H)，7.33(m， 1H)，7.18(d，J＝8Hz，2H)，6.99(s，1H)，6.96(s，1H)，4.46(d，J＝5.6Hz，2H)，2.76(d，J＝4.3 Hz，3H)，2.30(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：169.73，167.45，149.76，137.43，136.43，132.15， 128.97，125.53，121.96，100.52，40.52，30.62，20.76.

MS(ESI)：m/z：317.24([MH+].

2o的制备：

N-甲基-5-((5-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2o根据2w所述方法制备，采用5-对-甲苯基噻唑-2-胺和2-(甲 基(四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲醛作为原料：(70mg，78％)。Mp.没 有测定(它在140℃以上分解)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.97(t，J＝5.6Hz，1H)，7.75(d，J＝8Hz，2H)，7.33(m， 1H)，7.19(d，J＝8Hz，2H)，7.00(s，1H)，6.96(s，1H)，4.46(d，J＝5.6Hz，2H)，2.75(d，J＝5 Hz，3H)，2.31(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：170.65，168.37，150.68，138.36，137.35，133.08， 129.89，126.45，122.89，101.45，41.44，31.55，21.68.

MS(ESI)：m/z：317.38([MH+].

2p的制备：

N-(吡啶-2-基)-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺三盐酸盐

于0℃，将DIBAL-H(1M的己烷溶液，16.88mL，16.88mmol)加至2-溴 噻唑-5-甲酸乙酯(2g，8.44mmol)的CH2Cl2(16mL)溶液中。将混合物于室温 下搅拌6hrs。采用MeOH(6mL)淬灭后，加入Et2O和Rochelle盐的饱和 溶液，搅拌反应混合物直到两相明显分开。干燥有机相，浓缩并经柱色谱 纯化(30％-100％AcOEt/PE梯度洗脱)，获得(2-溴噻唑-5-基)甲醇(1.44g， 88％)，为油状物。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.25(s，1H)，4.93(bs，1H)，4.69(s，2H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：144.25，139.58，136.89，57.19.

MS(ESI)：m/z：193.83[MH+].

将MnO2(3.8g，37.10mmol)加至(2-溴噻唑-5-基)甲醇(1.44g，7.42mmol) 的CHCl3(20mL)溶液中。将获得的混合物于室温下搅拌3天。然后将溶液 通过硅藻土过滤并浓缩。获得2-溴噻唑-5-甲醛(870mg，61％)，为白色固体。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：9.95(s，1H)，8.16(s，1H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：180.93，150.47，145.48，142.91.

MS(ESI)：m/z：192.31([MH+]).

将2-溴噻唑-5-甲醛(150mg，0.78mmol)和2-氨基-噻唑(78mg， 0.78mmol)的甲苯(7mL)溶液和分子筛于回流下搅拌过夜。然后将相应 的亚胺的深黄色溶液倒入NaBH4(147mg，3.9mmol)的热EtOH(50mL)溶液 中。过滤无色溶液，浓缩并经柱色谱纯化(30％AcOEt/PE)，获得为固体的 N-((2-溴噻唑-5-基)甲基)噻唑-2-胺(110mg，51％)。

1H-NMR(400MHz，CD3OD/CDCl3)：(ppm)：7.33(s，1H) 6.95(d，J＝3.7Hz，1H)，6.40(d，J ＝3.7Hz，1H)，4.49(s，2H)，2.9(bs，1H).

13C-NMR(100MHz，CD3OD/CDCl3)：(ppm)：169.00，140.64，139.95，138.38，136.27， 107.53，41.29.

MS(ESI)：m/z：276.30([MH+]).

将2-氨基吡啶(0.150g，1.6mmol)加至NaH(64mg，1.6mmol)的 THF(4mL)悬浮液中。将获得的溶液于65℃搅拌45分钟。然后加入N-((2- 溴噻唑-5-基)甲基)噻唑-2-胺(110mg，0.4mmol)，将反应混合物于65℃搅拌 过夜。将反应物用水淬灭，反应混合物用AcOEt萃取。有机相干燥，浓缩 并经柱色谱纯化(AcOEt)。采用CHCl3沉淀处理以除去过量的2-氨基吡啶。 获得为浅黄色固体的N-(吡啶-2-基)-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺 (15mg，14％)。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：(ppm)：11.12(bs，1H)，8.24(d，J＝4.4Hz，1H)，7.97(s，1H)， 7.67(t，J＝8Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.05(d，J＝3.2Hz，1H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，6.88(t，J ＝5.6Hz，1H)，6.64(d，J＝4.4Hz，1H)，4.53(d，J＝4.8Hz，2H).

13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)：(ppm)：168.17，159.06，151.41，146.15，138.34，137.51， 135.44，126.24，115.52，110.34，106.35，39.96.

MS(ESI)：m/z：290.32([MH+].

将N-(吡啶-2-基)-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺(15mg，0.05mmol) 溶于甲醇制HCl(3N，1mL)，加入Et2O。通过倾析过滤沉淀的固体，真空 干燥，获得N-(吡啶-2-基)-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺三盐酸盐 (14mg，2％，HPLC测定纯度为95.5％)。Mp.分解＞145℃。

2q的制备：

N-苄基-5-((5-氟吡啶-2-基氨基)甲基)吡啶-2-胺

试剂：i)2-氯-1-甲基吡啶碘化物/DIPEA/THF/24h RT，ii)苄基胺 /140℃，iii)BMS/THF/回流，24h，iv)MeOH/HCl/RT/1h

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(2.2g，9.8mmol)和DIPEA(1mL)加至5-氟吡 啶-2-胺1(554mg，4.9mmol)和6-溴烟酸2(1g，4.9mmol)的THF混合物中。 将反应混合物于室温下搅拌2天。反应结束时，将反应混合物浓缩至其原 体积的1/3，过滤沉淀的产物。浓缩滤液，用氯仿(100mL)稀释，用水和盐 水洗涤，然后经硫酸钠干燥。蒸发溶剂获得粗品黄色产物，将其在EtOAc 结晶获得6-溴-N-(5-氟吡啶-2-基)烟酰胺3(1.05g，71％)，为白色固体。Mp. 173-174℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝11.27(s，1H)，8.94(s，1H)，8.43(s，1H)，8.27(d，J＝8.0Hz， 1H)，8.2(d，J＝12Hz，1H)，7.83(m，2H).

MS(ESI)：m/z＝(297，M+H).

将6-溴-N-(5-氟吡啶-2-基)烟酰胺3(500mg，1.68mmol)溶于苄基胺 (2mL)，于140℃加热48h。然后将反应混合物浓缩。将产物在乙酸乙酯和 石油醚中重结晶，获得为白色固体的6-(苄基氨基)-N-(5-氟吡啶-2-基)烟酰 胺4(500mg，92％)。Mp.167-168℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝10.5(s，1H)，8.69(s，1H)，8.36(s，1H)，8.17(s，1H)，7.79(s， 1H)7.24-7.70(m，7H)，6.57(d，J＝8.0Hz，1H)4.18(s，2H).

MS(ESI)：m/z＝(323，M+H)

将BMS(400μL)加至6-(苄基氨基)-N-(5-氟吡啶-2-基)烟酰胺4的 THF(20mL)溶液中。将反应混合物回流16hrs。然后将反应混合物冷却至 室温。加入MeOH(2mL)，随后加入浓HCl。将反应混合物回流8hrs， 浓缩并用水(2mL)稀释。将pH调节至14，反应混合物用氯仿萃取(50mL ×2)。所有的有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶剂获得粗品产物， 将其经硅胶纯化(1∶1，EtOAc∶石油醚)获得N-苄基-5-((5-氟吡啶-2-基氨基) 甲基)吡啶-2-胺5。将其用HCl/MeOH处理获得相应的盐(50mg，13％)，为 白色固体。Mp.166-168℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.11(d，J＝1.6，1H)7.99(d，J＝2.8，1H)7.46(dd，J＝2.4， J＝8.4Hz，1H)7.33-7.37(m，3H)，7.28(m，3H)，7.20(dt，J＝3.2，J＝8.0Hz，1H)6.35-6.40(m， 2H)4.96(brs，1H)4.61(s，1H)，4.53(d，J＝6.0Hz，2H)，4.34(d，J＝5.2Hz 2H)

MS(ESI)：m/z＝(309，M+H)

2s的制备：

试剂：i)2-氯-1-甲基吡啶碘化物/DIPEA/RT/3天，ii)苄基胺/110℃/过 夜，iii)BMS/THF/MeOH/HCl，iv)MeOH/HCl

向5-(4-氟苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-甲酸1(400mg， 1.37mmol)和2-氯-1-甲基吡啶碘化物(524mg，2.0mmol)的THF(20mL)悬浮 液中加入DIPEA(0.46mL)，随后加入6-溴吡啶-2-胺2(237mg，1.37mmol)。 将悬浮液搅拌72hrs。然后将反应混合物浓缩，在水(10mL)中稀释，用二 氯甲烷萃取(50ml×2)。所有的有机相用水和盐水洗涤，硫酸钠干燥并浓缩。 残留物经硅胶柱纯化(EtOAc∶石油醚1∶4)，获得为白色固体N-(6-溴吡啶-2- 基)-5-(4-氟苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺3(180mg)。Mp. 151-152℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝9.53(s，1H)，8.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.83(dd，J＝5.2，J＝8.8 Hz，2H)，7.64(t，J＝8.0Hz，2H)，7.30(m，2H)7.13(t，J＝9.2Hz，2H)，6.04(dd，J＝2.4Hz，J ＝10Hz，1H)，4.26(d，J＝11.0Hz，1H)，3.86(t，J＝11.6Hz，1H)，2.52-2.60(m，1H)，2.11 2.16 (m，2H)，1.27-1.57(m，2H).

将N-(6-溴吡啶-2-基)-5-(4-氟苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3- 甲酰胺3(300mg，0.67mmol)溶于苄基胺(3mL)。将反应混合物于130℃加热 24h。然后反应混合物经硅胶柱纯化(1∶5 EtOAc∶石油醚)，获得为白色固体 的N-(6-(苄基氨基)吡啶-2-基)-5-(4-氟苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡 唑-3-甲酰胺4(187mg，59％)。Mp.139-140℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝7.79(brs，2H)，7.18-7.39(m，8H)，7.09(t，J＝7.6Hz，2H)， 6.94(s，1H)，6.84(d，J＝8.0Hz，1H)，6.43(d，J＝8.0Hz，1H)，5.98(d，J＝9.6Hz，1H)，4.64(s， 2H)，3.96(d，J＝10.8Hz，1H)，3.54(t，J＝10.4Hz，1H)，2.54(m，1H)，2.02-2.10(m，2H)， 1.56-1.67(m，3H).

将硼烷二甲基硫(50μL)加至N-(6-(苄基氨基)吡啶-2-基)-5-(4-氟苯 基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺4(180mg，0.38mmol)的 THF(10mL)溶液中。将反应混合物回流过夜并冷却。加入MeOH，随后加 入浓HCl，将反应混合物加热5hrs。然后将反应混合物真空浓缩，用水 (5mL)稀释，用氯仿萃取(50ml×2)。合并的有机层用水和盐水洗涤，然后 经硫酸钠干燥并减压浓缩。粗品产物经硅胶纯化(50％EtOAc∶石油醚)，获 得为油状物的N2-苄基-N6-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基)甲基)吡啶-2，6-二胺 5(20mg)，将其采用甲醇制盐酸处理2hrs。减压蒸发溶剂获得胶状物(20mg)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝7.75(dd，J＝5.6Hz，J＝8.4Hz，2H)，7.28-7.37(m，8H)， 7.11(t，J＝8.8Hz，2H)，6.44(s，1H)，3.93(s，2H)，3.87(s，2H).

MS(ESI)：m/z＝374(M+H)

2t的制备：

N-苄基-6-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)吡啶-2-胺

试剂：i)2-氯-1-甲基吡啶碘化物/DIPEA/RT/3天，ii)苄基胺/110℃/过 夜，iii)BMS/THF/MeOH/HCl

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(950mg，3.7mmol)和DIPEA(0.7mL)加至6- 溴吡啶甲酸2(500mg，2.47mmol)的无水DCM/DMF(30/5mL)溶液中。将反 应混合物搅拌1hr。加入3-氨基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁基酯 1(650mg，2.47mmol)。将获得的黄色反应混合物搅拌3天。然后将反应混 合物减压浓缩，残留物在氯仿中稀释，用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干 燥。获得的粗品混合物经硅胶纯化(EtOAc∶石油醚，1∶3)，获得为白色固体 的6-溴-N-(5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺3(450mg，50％)。Mp. 245-247℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝10.3(s，1H)，8.15(d，J＝7.6Hz，1H)，8.02(t，J＝7.6Hz，1H)， 7.95(d，J＝8.0Hz，1H)，7.82(dd，J＝5.2Hz，J＝8.0Hz，2H)，7.32(t，J＝8.8Hz 1H)，7.05(s， 1H).

MS(ESI)：m/z＝361(M+H).

将6-溴-N-(5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺3(200mg，0.55mmol) 溶于纯苄基胺(5mL)。将反应混合物加热24hrs。然后蒸发溶剂，残留物经 硅胶纯化(EtOAc∶石油醚，1∶4)，获得6-(苄基氨基)-N-(5-(4-氟苯基)-1H-吡唑 -3-基)吡啶酰胺4(180mg，84％)。Mp.185-187℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.1(brs，1H)，7.81(d，J＝5.6，J＝8.4Hz，2H)，7.60(t，J＝7.6 2H)，7.44(d，J＝7.2Hz 2H)，7.28-7.36(m，5H)，7.23(t，J＝7.2Hz 1H)，7.02(brs，1H)，6.79(d， J＝8.4Hz 1H)，4.58(s，2H).

MS(ESI)：m/z＝388(M+H).

将硼烷二甲基硫(50mg，0.66mmol)加至6-(苄基氨基)-N-(5-(4-氟苯 基)-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺4(150mg，0.37mmol)的溶液中。将反应混合物 回流16hrs。将反应混合物冷却至室温后，加入MeOH(2mL)，随后加入浓 HCl。将反应混合物再回流12hrs。将反应混合物浓缩，用水(4mL)稀释， 采用NaOH溶液将pH调节至12。反应混合物用氯仿萃取(40×3mL)。然 后所有的有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，粗品产物经硅胶柱纯化 (100％EtOAc)，获得油状物(40mg，27％)，然后将其用HCl/MeOH处理， 获得N-苄基-6-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)吡啶-2-胺盐酸盐 6(20mg，39％)。Mp.133-134℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.88(br，1H)7.82(brs，2H)，7.40(m，5H)，6.99(d，J＝5.2 Hz 1H)，6.87(brs，1H)，6.2(brs，1H)，5.76(brs，1H)，4.69(brs，2H)，4.52(brs，2H).

MS(ESI)：m/z＝374(M+H).

2u的制备：

3-(2，3-二氢噻吩-2-基)-N-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-1H-吡唑 -5-胺(7)

试剂：i)EtOH，H2SO4/回流16h，ii)DHP/TFA/THF/回流16h，iii) LiOH/H2O/MeOH

试剂：i)2-氯-1-甲基吡啶碘化物/DCM/DIPEA，ii)BMS/THF/回流， iii)HCl/MeOH

将3-4滴浓H2SO4加至5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸1的EtOH溶液 中。将反应混合物回流2天。将反应混合物浓缩，用氯仿(100mL)稀释， 用饱和的NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，硫酸钠干燥。真空蒸发溶剂获得 5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯2，为棕色固体(1.05g，93％)。 Mp.148-150℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝7.77(dd，J＝5.6Hz，J＝8.4Hz，2H)，7.13(t，J＝8.4Hz， 2H)，7.06(s，1H)，4.41(q，J＝7.2Hz，2H)，1.40(t，J＝7.2Hz，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：δ164.5，162.1，160.6，127.9，127.8，116.3，116.1，105.8，61.8， 14.6.

MS(ESI)：m/z＝235(M+H).

将DHP(20.4mmol，1.7mL)加至5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯 2(800mg，3.4mmol)的无水THF(50mL)溶液中，随后加入催化量的 TFA(20μL)。然后将反应混合物回流2天。将反应混合物浓缩，用氯仿 (100mL)稀释，用水和盐水洗涤，硫酸钠干燥。粗品产物在硅胶上纯化(石 油醚∶EtOAc，9∶1)，获得为白色固体的5-(4-氟苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2- 基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯3(600mg，55.5％)。Mp.95-96℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝7.84(dd，J＝5.6，J＝8.4Hz，2H)，7.15(s，1H)，7.10(t，J＝ 8.8Hz，2H)，6.33(dd，J＝2.4，J＝9.6Hz，1H)，4.40(q，J＝7.2Hz 2H)，4.09-4.16(m，2H)， 3.75-3.80(m，1H)，2.56-2.61(m，1H)，2.15(m，1H)，2.0(d，J＝12.8Hz，1H)，1.56-1.78(m， 2H)，1.42(t，J＝7.2Hz，3H).

将LiOH(120mg，5mmol)加至5-(4-氟苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H- 吡唑-3-甲酸乙酯3(1.1g，3.4mmol)的THF/H2O(1∶1，5mL)溶液中。将反应混 合物搅拌过夜。将澄清的溶液浓缩，悬浮于氯仿(25mL)中，过滤固体，真 空干燥，获得为白色固体的5-(4-氟苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3- 甲酸4(987mg，99％)。Mp.188-190℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝7.88(dd，J＝5.6Hz，J＝8.8Hz，2H)，7.20(t，J＝8.8Hz，2H)， 6.82(d，J＝8.8Hz，1H)，6.71(s，1H)，3.90(d，J＝11.2Hz，1H)，3.55(m，1H)，2.31(m，1H)， 2.02(d，J＝12Hz，1H)，1.76(d，J＝12.8Hz，1H)，1.52-1.65(m，2H).

MS(ESI)：m/z＝291(M+).

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(650mg，2.5mmol)加至5-(4-氟苯基)-1-(四氢 -2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-甲酸4(500mg，1.72mmol)的THF/DMF(20/2mL) 溶液中，随后加入DIPEA(0.5mL)。将反应混合物搅拌30分钟，然后加入 3-氨基-5-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-1-甲酸叔-丁基酯5(456mg，1.72mmol)。将反 应混合物搅拌2天。将反应混合物浓缩，用氯仿(100mL)稀释，用水和盐 水洗涤，硫酸钠干燥并蒸发溶剂。将粗品产物充分干燥，溶于THF(10mL)， 随后加入BMS(0.3mL)。将反应混合物加热过夜并冷却，然后加入MeOH 和浓HCl。将反应混合物再加热5hrs。将反应混合物冷却，浓缩并用水 (5mL)稀释，用NaOH颗粒将pH调节至14，用氯仿萃取(50ml×2)。所有 的有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发溶剂。粗品产物经硅胶柱 纯化(4∶1，EtOAc∶石油醚)，获得N-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-5-(噻 吩-2-基)-1H-吡唑-3-胺7(66mg，总收率11％)。Mp.128-130℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝4.76(s，2H)，6.33(s，2H)，7.02-7.06(m，3H)，7.28-7.50(m， 2H)，7.73-7.74(m，2H).

MS(ESI)：m/z＝340(M+H)

2w的制备：

N-甲基-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

于室温下，将TFA(22μL，0.3mmol)和DHP(3.9mL，43.5mmol)加至2- 氨基噻唑-5-甲酸乙酯(5g，29mmol)的CH3CN(40mL)悬浮液中。将获得的混 合物于回流下搅拌过夜。将反应混合物浓缩并溶于AcOEt/PE，于4℃放置 过夜。将获得的白色固体过滤，用PE洗涤，获得2-(四氢-2H-吡喃-2-基氨 基)噻唑-5-甲酸乙酯(4.73g，64％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.85(s，1H)，6.69(bs，1H)，4.75(t，J＝3.5Hz，1H)，4.29 (q，J＝4.5Hz，2H)，3.97(m，1H)，3.60(m，1H)，1.96(m，2 H)，1.58(m，4H)，1.34(t，J＝4.5 Hz，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：173.26，161.98，145.98，117.41，83.63，65.19，60.82， 30.39，24.88，21.62，14.33.

MS(ESI)：m/z(％)：257.31([MH+]，100％)

于0℃，将2-(四氢-2H-吡喃-2-基氨基)噻唑-5-甲酸乙酯(4.73g， 18.5mmol)加至NaH(740mg，18.5mmol)的THF(20mL)悬浮液中，随后加入 甲基碘(1.15mL，18.5mmol)。将获得的混合物于回流下加热3hrs。用水淬 灭后，用AcOEt萃取，粗品产物经柱色谱纯化(50％AcOEt/PE)，获得为 油状物的2-(甲基(四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲酸乙酯(2.02g，40％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.89(s，1H)，5.29(t，J＝3.8Hz，1H)，4.29(q，J＝4.5 Hz，2H)，4.07(d，J＝7.3Hz，1H)，3.65(td，J＝7Hz，2Hz，1H)，3.09(s，3H)，1.96(m，1H)， 1.75-1.55(m，5H)，1.34(t，J＝4.5Hz，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：174.19，162.02，147.40，116.83，87.06，68.37，60.61， 32.47，28.69，24.97，23.03，14.30.

MS(ESI)：m/z(％)：271.38([MH+]，100％).

于0℃，将LiAlH4(425mg，11.20mmol)以小份量加至2-(甲基(四氢-2H- 吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲酸乙酯(2.02g，7.47mmol)的THF(20mL)溶液中。 于0℃搅拌30分钟后，反应物通过H2O(1mL)、5％NaOH(3mL)并再次用 H2O(5mL)缓慢淬灭。然后加入AcOEt。反应混合物经硫酸钠干燥并通过 硅藻土过滤。滤液浓缩，经柱色谱纯化(30％-50％AcOEt/PE梯度洗脱)， 获得为油状物的(2-(甲基-(四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-基)甲醇(1.5g， 93％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.00(s，1H)，5.16(m，1H)，4.65(s，2H)，4.06(d，J＝7 Hz，1H)，3.63(td，J＝7.3Hz，2Hz，1H)，3.46(s，1H)，3.04(s，3H)，1.95-1.52(m，6H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：171.68，137.27，126.45，87.64，68.308，57.61，32.34， 28.91，25.11，23.30.

MS(ESI)：m/z(％)：229.29([MH+]，100％).

将MnO2(3g，34.82mmol)加至(2-(甲基(四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑 -5-基)甲醇(1.59g，6.96mmol)的CHCl3(50mL)溶液中。将获得的混合物于室 温下搅拌2天。然后将溶液通过硅藻土过滤并浓缩，获得为黄色油状物的 2-(甲基-(四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲醛(1.5g，96％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：9.70(s，1H)，7.88(s，1H)，5.35(t，J＝3.8Hz，1H)，4.08 (d，J＝7Hz，1H)，3.65(td，J＝7.3Hz，2Hz，1H)，3.12(s，3H)，1.97-1.55(m，6H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：180.21，175.18，152.36，128.35，86.66，67.92，32.38， 28.11，24.44，22.44.

MS(ESI)：m/z(％)：227.31([MH+]，100％).

将2-(甲基(四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲醛(250mg，1.10mmol)和 2-氨基噻唑(110mg，1.10mmol)的甲苯(11mL)溶液和分子筛于回流下搅 拌过夜。将相应的亚胺的深黄色溶液倒入NaBH4(212mg，5.61mmol)的热 EtOH(80mL)溶液中。将无色溶液过滤，浓缩并经柱色谱纯化，获得为固 体的N-甲基-N-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺 (50mg，17％)。

1H-NMR(400MHz，CD3OD/CDCl3)：(ppm)：7.11(d，J＝2.5Hz，2H)，6.50(d，J＝2.3Hz， 1H)，5.73(bs，1H)，5.14(dd，J＝5.8Hz，1.8Hz，1H)，4.50(s，2H)，4.03(d，J＝7.3Hz，1H)， 3.61(td，J＝7.0Hz，2Hz，1H)，3.02(s，3H)，1.97-1.52(m，6H).

13C-NMR(100MHz，CD3OD/CDCl3)：(ppm)：171.31，169.33，138.83，138.08，122.57， 106.98，87.54，68.32，42.34，32.31，28.89，25.11，23.28.

MS(ESI)：m/z(％)：311.35([MH+]，100％).

将N-甲基-N-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺 (50mg，0.16mmol)在10％TFA的CHCl3(5mL)中的溶液于室温下搅拌过夜。 蒸发溶剂后，将残留物溶于MeOH，用碳酸钠中和，氯仿萃取。有机相干 燥，浓缩并经柱色谱纯化，获得为固体的N-甲基-5-((噻唑-2-基氨基)甲基) 噻唑-2-胺(28mg，77％)。

1H-NMR(400MHz，CD3OD/CDCl3)：(ppm)：7.02(d，J＝2.3Hz，1H)，6.92(s，1H)，6.44(d， J＝2.3Hz，1H)，4.38(s，2H)，3.37(bs，2 H)，2.84(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CD3OD/CDCl3)：(ppm)：171.95，169.74，138.18，137.23，121.48， 106.87，42.08，31.6.

MS(ESI)：m/z(％)：227.29([MH+]，100％).

将N-甲基-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺(28mg，0.12mmol)溶于甲 醇制HCl(3N，1mL)，加入Et2O。通过倾析过滤沉淀的固体，真空干燥， 获得N-甲基-5-((噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐，为白色固体 (29mg，79％)。Mp.128-130℃。

2y的制备：

N2-((6-(苄基氨基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2，6-二胺

试剂：i)Mukayama试剂/THF/DIPEA/RT 2天，ii)苄基胺/140℃ 16h， iii)BMS/THF/24h，iv)HCl/MeOH/RT/3h

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(2.18g，9.8mmol)和DIPEA(2.1ml 11.5mmol)加至6-溴吡啶-2-胺1(1g，5.7mmol)和6-溴烟酸2(1.16g，5.7mmol) 的THF混合物中。将反应混合物于室温下搅拌2天。反应完成时，将反 应混合物浓缩，用氯仿(150mL)稀释，用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干 燥。蒸发溶剂获得粗品黄色产物，将其在EtOAc结晶，获得为白色固体的 6-溴-N-(6-溴吡啶-2-基)烟酰胺3(1.1g，54％)。Mp.171-173℃。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝8.94(d，J＝2.0Hz，1H)，8.26(dd，J＝2.4，J＝8.0Hz， 2H)，7.80-7.84(m，2H)，7.45(d，J＝7.6Hz，1H).

MS(ESI)：m/z＝(357M+H)

将6-溴-N-(6-溴吡啶-2-基)烟酰胺3(650mg，1.8mmol)溶于苄基胺 (2mL)，于140℃加热24hrs。然后将反应混合物浓缩，将产物在乙酸乙酯 和石油醚中重结晶，获得为白色固体的6-(苄基氨基)-N-(6-(苄基氨基)吡啶 -2-基)烟酰胺4(450mg，62％)。Mp.132-133℃。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝8.72(bs，1H)，8.54(s，1H)，7.86(s，1H)，7.61(d，J＝8.4 Hz，1H)，7.61(s，1H)7.23-7.32(m，11H)，6.53(d，J＝8.8Hz 1H)，4.53(s，2H)，4.44(s，2H).

MS(ESI)：m/z＝410(M+H).

将BMS(2.2mmol，165μL)(400μL)加至6-溴-N-(6-溴吡啶-2-基)烟酰胺 4(300mg，0.73mmol)的THF(20mL)溶液中。将反应混合物回流16hrs。然 后将反应混合物冷却至室温，加入MeOH(2mL)，随后加入浓HCl，将反 应混合物回流8hrs。将反应混合物浓缩，用水(2mL)稀释，将pH调节至 14，反应混合物用氯仿萃取(50ml×2)。合并的有机相用盐水洗涤，硫酸钠 干燥。蒸发溶剂获得粗品产物，将其经硅胶纯化(1∶1，EtOAc∶石油醚)获得 白色固体，将其用MeOH/HCl处理，获得为白色固体的N2-((6-(苄基氨基) 吡啶-3-基)甲基)吡啶-2，6-二胺5，盐酸盐(50mg，49％)。Mp.261-262℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝9.62(brs，1H)，8.1(s，1H)，7.86(brs，1H)，7.54(m，2H)， 7.28-7.37(m，7H)，6.89(brs，1H)，4.61(brs，2H)，4.13(brs，2H)，4.06(brs，2H).

MS(ESI)：m/z＝304(M+H).

2z的制备：

N-(吡啶-2-基)-5-((4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺三盐酸盐

化合物2z根据2p所述方法制备，采用2-溴噻唑-5-甲醛和4-对-甲苯 基噻唑-2-胺作为原料：(29mg，38％)。Mp.169-170℃。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：(ppm)：11.13(s，1H)，8.19(d，J＝4.83Hz，1H)，8.09(t，J＝ 6.4Hz，1H)7.79(d，J＝8Hz，2H)，7.67(t，J＝8Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.20(d，J＝8Hz，2H)， 7.05(s，1H)，7.02(s，1H)，6.88(t，J＝6.4Hz，1H)，4.60(d，J＝4.8Hz，2H)，2.33(s，3H).

MS(ESI)：m/z(％)：380.34([MH+]，100％).

2aa的制备：

4-(4-氯代苯基)-N-((2-(甲基氨基)噻唑-5-基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2aa根据2w所述方法制备，采用2-(甲基-(四氢-2H-吡喃-2-基) 氨基)噻唑-5-甲醛和4-(4-氯代苯基)噻唑-2-胺作为原料：(30mg，77％)。Mp. 122-123℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.65(d，J＝8Hz，1H)，7.27(d，J＝8Hz，2H)，6.93(s，1 H)，6.63(s，1H)，4.43(s，2H)，2.8(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：172.03，168.77，149.84，136.63，133.19，133.11， 128.52，127.13，121.69，101.67，41.84，31.65.

MS(ESI)：m/z(％)：337.38([MH+]，100％).

2ab的制备：

N5-丙基-N2-((6-(丙基氨基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2，5-二胺

试剂：i)2-氯-1-甲基吡啶碘化物/DIPEA/RT/4天，ii)正丙基胺 THF/DMSO/60-70℃/2d，iii)BMS/THF/HCl 24小时，iv)MeOH/HCl rt/3h

将DIPEA(5.5mL，29mmol)和2-氯-1-甲基吡啶碘化物(8g，26mmol)加 至5-溴吡啶-2-胺1(2.56g，14.8mmol)和6-溴烟酸2(3g，14.8mmol)的 THF(150mL)溶液中。将反应混合物于室温下搅拌4天。然后过滤沉淀物。 浓缩滤液，将其溶于氯仿(250mL)，用水和盐水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发 溶剂获得粗品产物，将其在乙酸乙酯中重结晶，获得为白色固体的6-溴 -N-(5-溴吡啶-2-基)烟酰胺3(4.3g，81％)。Mp.204-205℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝11.33(s，1H)，8.93(s，1H)，8.54(s，1H)，8.25(d，J＝8.8Hz 1H)，8.17(d，J＝8.8Hz 1H)，8.11(d，J＝6.4Hz，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz 1H).

MS(ESI)：m/z＝357(M+)

将6-溴-N-(5-溴吡啶-2-基)烟酰胺3(1.1g，3.0mmol)的正-丙基胺(纯， 5mL)溶液于80℃加热2天。然后蒸发溶剂，获得为白色固体的6-(丙基氨 基)-N-(5-(丙基氨基)吡啶-2-基)烟酰胺4(880mg，91％)。Mp.134-135℃。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝10.6(s，1H)，8.69(d，J＝2.4Hz，1H)，8.47(d，J＝2.4Hz， 1H)，8.16(d，J＝8.8Hz，1H)，8.03(dd，J1＝2.4，J2＝8.8Hz，1H)，7.97(d，J＝8.8Hz，1H)， 7.67(brs，2H)，7.30(t，J＝5.2Hz，1H)，6.5(d，J＝8.8Hz，1H)，3.27(q，J＝6.8Hz，2H)，2.74(t， J＝7.2Hz，2H)，1.54(m，4H)，0.91(t，J＝5.6Hz，6H).

MS(ESI)：m/z＝335(M+Na)

将BMS(215μL)加至4(180mg，0.575mmol)的THF(10mL)溶液中。将 反应混合物于回流下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温。然后缓慢加入 甲醇(2mL)，随后加入浓HCl(3mL)。将反应混合物再回流5hrs。然后将反 应混合物冷却，减压浓缩，用冷水稀释，采用KOH颗粒将pH调节至14， 用氯仿萃取(50ml×3)。有机相用盐水溶液洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶剂获 得粗品产物，将其经硅胶柱纯化(EtOAc∶PE，80∶20)获得产物(10mg，6.3％)。 Mp.129-130℃。

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝8.14(d，J＝1.6Hz，1H)，8.0(s，1H)，6.42(d，J＝8.8Hz， 1H)，6.32(d，J 8.8Hz，1H)，5.0(br s，1H)，4.9(br s，1H)，4.33(d，J＝5.2Hz，2H)，3.25(q，J ＝6.4Hz，4H)，1.66(q，J＝7.2Hz，4H)，1.01(t，J＝7.2Hz 6H).

MS(ESI)：m/z＝321(M+Na).

2ac的制备：

N-苄基-6-((5-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)吡啶-2-胺(5)的制 备：

试剂：i)2-氯-1-甲基吡啶碘化物/DIPEA/RT/3天，ii)苄基胺/120℃/16h， iii)BMS/THF/MeOH/HCl，iv)HCl/MeOH

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(580mL，2.2mmol)和DIPEA(0.4mL)加至6- 溴吡啶甲酸2(304mg，1.5mmol)在无水DCM/DMF(20/2mL)混合物中的溶 液中。将反应混合物搅拌1hr，然后加入3-氨基-5-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-1- 甲酸叔-丁基酯1(400mg，1.5mmol)。将获得的黄色反应混合物搅拌3天。 然后将反应混合物减压浓缩。残留物在氯仿中稀释，用水和盐水洗涤，硫 酸钠干燥。蒸发溶剂后，粗品产物经硅胶柱纯化(EtOAc∶石油醚，1∶1)，获 得6-溴-N-(5-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺3(307mg，58％)。

MS(ESI)：m/z＝349(M+H)350.8(M+2H)

将6-溴-N-(5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺3(307mg，0.88mmol) 溶于纯苄基胺(3mL)，没有进行其它鉴定。将反应混合物于130℃加热 24hrs。然后蒸发溶剂，残留物经硅胶纯化(EtOAc∶石油醚，1∶4)，获得为粘 性固体的6-(苄基氨基)-N-(5-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺4(200mg， 58％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝10.1(s，1H)，7.59(m，2H)，7.33(m，5H)，7.09(s，1H)，6.64 (d，J＝8.0Hz，1H)，5.11(brs，1H)，4.60(s，2H).

MS(ESI)：m/z＝376(M+H).

将硼烷二甲基硫(85μL，1.06mmol)加至6-(苄基氨基)-N-(5-(4-氟苯 基)-1H-吡唑-3-基)吡啶酰胺4(200mg，0.53mmol)的溶液中。将反应混合物 回流16hrs。将反应混合物冷却至室温，加入MeOH(2mL)，随后加入浓 HCl(2mL)，将反应混合物再回流4hrs。将反应混合物浓缩，用水(4mL) 稀释，用NaOH溶液将pH调节至14，随后将反应混合物用氯仿萃取(40ml ×3)。所有的有机层用水和盐水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶剂后，粗品产 物在EtOAc和石油醚中结晶，获得N-苄基-6-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基 氨基)甲基)吡啶-2-胺(80mg，41％)。Mp.117-118℃。

然后将20mg该组合物采用HCl/MeOH处理，获得5，N-苄基-6-((5-(4- 氟苯基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)吡啶-2-胺盐酸盐。Mp.120-122℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝7.23-7.42(m，8H)7.06(d，J＝1.6Hz，1H)，6.63(d，J＝6.8 Hz，1H)，6.30(d，J＝8.0Hz，1H)，5.79(s，1H)，5.11(brs，1H)，4.74(brs，1H)，4.52(brs，2H)， 4.30(s，2H).

MS(ESI)：m/z＝362(M+H)

2ad的制备：

N-丙基-5-((5-((4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-基氨基)甲基) 噻唑-2-胺三盐酸盐

将DMAP(35mg，0.29mmol)、Et3N(16mL，116mmol)和二碳酸二-叔-丁 基酯(13mL，58mmol)加至2-氨基噻唑-5-甲酸乙酯(10g，58.1mmol)的 THF(100mL)溶液中。将获得的溶液于室温下搅拌直到反应完成。蒸发溶 剂，粗品产物采用PE沉淀纯化，获得为白色固体的2-(叔-丁氧基羰基氨 基)噻唑-5-甲酸乙酯(14.2g，90％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：8.03(s，1H)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H)，1.597(s，9H)， 1.35(t，J＝6.8Hz，3H).

MS(ESI)：m/z(％)：273.37[MH+].

将2-(叔-丁氧基羰基氨基)噻唑-5-甲酸乙酯(5g，18.36mmol)和 KOH(10.3g，184mmol)的EtOH/H2O(1∶1)(60mL)溶液于室温下搅拌12hrs。 将溶液采用1N HCl酸化，过滤沉淀物并干燥，获得为白色固体的2-(叔- 丁氧基羰基氨基)噻唑-5-甲酸(3.84g，86％)。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：(ppm)：12.0(bs，1H)，7.94(s，1H)，1.5(s，9H).

MS(ESI)：m/z(％)：245.35[MH+].

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(0.47g，1.84mmol)、DIEA(0.44mL，2.5mmol) 和4-对-甲苯基噻唑-2-胺(0.24g，1.23mmol)加至2-(叔-丁氧基羰基氨基)噻唑 -5-甲酸(0.30g，1.23mmol)的DMF(5mL)溶液中。将获得的溶液于室温下搅 拌直到反应完成。反应混合物然后用AcOEt稀释，用水洗涤，硫酸钠干燥 并浓缩。粗品产物经柱色谱纯化(100％AcOEt)，获得为固体的5-(4-对-甲 苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)噻唑-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(80mg，17％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：10.8(bs，2H)，7.76(s，1H)，7.61(d，J＝8Hz，2H)，7.15 (d，J＝8Hz，2H)，7.09(s，1H)，2.35(s，3H)，1.42(s，9H).

MS(ESI)：m/z(％)：417.32[MH+].

将TFA(0.100mL)加至5-(4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)噻唑-2-基 氨基甲酸叔-丁基酯(80mg，0.19mmol)的CHCl3(1mL)溶液中。将获得的溶 液于室温下搅拌过夜。然后蒸发溶剂，将粗品产物溶于水中。采用碳酸氢 钠饱和水溶液中和后，将其用AcOEt萃取，干燥并浓缩。经柱色谱纯化 (100％AcOEt)，获得为白色固体的2-氨基-N-(4-对-甲苯基噻唑-2-基)噻唑 -5-甲酰胺(40mg，67％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)：(ppm)：7.67(s，1H)，7.47(d，J＝8Hz，2H)，6.97(d，J＝ 8Hz，2H)，6.87(s，1H)，2.13(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3/CD3OD)：(ppm)：173.92，159.45，158.36，149.58，143.45， 137.53，131.35，129.00，125.59，119.89，106.58，20.60.

MS(ESI)：m/z(％)：317.33[MH+].

将2-氯-1-甲基吡啶碘化物(0.048g，0.18mmol)、DIEA(0.045mL， 0.25mmol)和2-氨基-N-(4-对-甲苯基噻唑-2-基)噻唑-5-甲酰胺(0.04g， 0.126mmol)加至2-溴噻唑-5-甲酸(26mg，0.126mmol)的DMF(1mL)溶液中。 将获得的溶液于室温下搅拌直到反应完成。然后采用AcOEt沉淀固体，通 过离心分离固体，获得为固体的2-溴-N-(5-(4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基甲酰 基)噻唑-2-基)噻唑-5-甲酰胺(20mg，30％)，它无需进一步纯化可以直接用于 下一步骤。

1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：(ppm)：8.65(s，1H)，7.95(s，1H)，7.82(d，J＝8Hz，2H)， 7.61(s，1H)，7.25(d，J＝8Hz，2H)，2.33(s，3H).

将2-溴-N-(5-(4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)噻唑-2-基)噻唑-5-甲 酰胺(15mg，0.03mmol)的纯丙基胺(0.5mL)溶液于回流下搅拌24hrs。蒸发 溶剂，粗品产物经柱色谱纯化(0％-5％MeOH/AcOEt)，获得2-(丙基氨 基)-N-(5-(4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)-噻唑-2-基)噻唑-5-甲酰胺 (15mg，17％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)：(ppm)：8.12(s，1H)，7.86(s，1H)，7.56(d，J＝8Hz，2 H)，7.08(d，J＝8Hz，2H)，6.98(s，1H)，3.63(bs，1H)，3.13(t，J＝6.4Hz，2H)，2.23(s，3H)， 1.55(q，J＝6.4Hz，2H)，0.86(t，J＝6.4Hz，3H).

MS(ESI)：m/z(％)：485.33[MH+].

于室温下，将BMS(0.015mL，0.15mmol)加至2-(丙基氨基)-N-(5-(4-对- 甲苯基噻唑-2-基氨基甲酰基)噻唑-2-基)噻唑-5-甲酰胺(15mg，0.03mmol)的 THF(1mL)溶液中。将获得的溶液于室温下搅拌过夜。然后将反应物用 MeOH(0.5mL)淬灭。加入1N HCl直到pH＝2。将反应混合物于室温下搅 拌12hrs后，蒸发有机溶剂，水溶液用碳酸氢钠饱和水溶液中和，用AcOEt 萃取，硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物经柱色谱纯化(0％-5％MeOH/AcOEt)， 获得N-丙基-5-((5-((4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-基氨基)甲基) 噻唑-2-胺(5mg，32％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)：(ppm)：7.68(d，J＝8Hz，2H)，7.17(d，J＝8Hz，2H)， 7.05(s，1H)，6.96(s，1H)，6.66(s，1H)，4.52(s，2H)，4.42(s，2H)，3.41(bs，1H)，3.15(t，J＝6.4 Hz，2H)，2.34(s，3H)，1.62(m， 2H)，0.96(t，J＝6.4Hz，3H).

MS(ESI)：m/z(％)：457.29[MH+].

将N-丙基-5-((5-((4-对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-基氨基)甲 基)-噻唑-2-胺(5mg，0.01mmol)溶于甲醇制HCl(3N，0.5mL)，加入Et2O。通 过倾析过滤沉淀的个体，真空干燥，获得为白色固体的N-丙基-5-((5-((4- 对-甲苯基噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺三盐酸盐 (1.6mg，32％)。

Mp.＞135℃分解。

2ae的制备：

4-苄基-N-((2-(苄基氨基)噻唑-5-基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2ae根据2h所述方法制备，采用4-苄基噻唑-2-胺和2-溴噻唑 -5-甲酸作为原料：(10mg，29％)。Mp.78-79℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)：(ppm)：7.34-7.20(m，10H)，6.99(s，1H)，5.99(s，1H)， 4.42(s，4H)，3.88(s，2H).

MS(ESI)：m/z(％)：393.30([MH+]，100％).

2af的制备：

4-苄基-N-((2-(甲基氨基)噻唑-5-基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2af根据2w所述方法制备，采用4-苄基噻唑-2-胺和2-(甲基(四 氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲醛作为原料：(50mg，46％)。Mp. 126-127℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.19-7.13(m，5H)，6.85(s，1H)，5.87(s，1H)，4.28(s， 2H)，3.81(s，2H)，3.76(s，2H)，2.78(s，2H).

MS(ESI)：m/z(％)：317.30([MH+]，100％).

2ag的制备：

5-苄基-N-((2-(苄基氨基)噻唑-5-基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2ag根据2h所述方法制备，采用5-苄基噻唑-2-胺和2-溴噻唑 -5-甲酸作为原料：(25mg，69％)。Mp.96-97℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)：(ppm)：7.27-7.14(m，10H)，6.88(s，1H)，6.73(s，1H)， 4.33(s，2H)，4.29(s，2H)，3.88(s，2H).

MS(ESI)：m/z(％)：393.30([MH+]，100％).

2ah的制备：

5-苄基-N-((2-(甲基氨基)噻唑-5-基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2ah根据2w所述方法制备，采用5-苄基噻唑-2-胺和2-(甲基-(四 氢-2H-吡喃-2-基)氨基)噻唑-5-甲醛作为原料：(55mg，69％)。Mp.76-77℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.20-7.13(m，5H)，6.84(s，1H)，6.71(s，1H)，4.28(s，2 H)，3.85(s，4H)，2.78(s，3H).

13C-NMR(100MHz，CDCl3)：(ppm)：171.79，168.97，139.47，136.87，134.74，128.30， 128.08，126.35，125.83，121.50，41.65，33.01，31.38.

MS(ESI)：m/z(％)：317.30([MH+]，100％).

2ai的制备：

5-对-甲苯基-N-((5-((5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)甲基氨基)-1H-吡唑-3- 基)甲基)-1H-吡唑-3-胺三盐酸盐

1.1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-胺的合成：

1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-胺根据化合物2a所述 方法制备。

1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸根据前面2a所述 方法制备。

2.5-对-甲苯基-N-((5-((5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)甲基氨基)-1H-吡唑 -3-基)甲基)-1H-吡唑-3-胺三盐酸盐的合成

将5-硝基-3-吡唑-甲酸(8g，50.90mmol)和硫酸(5mL，1.48mmol)的甲醇 (200mL)加热至回流4hrs。蒸发溶剂，将残留物再悬浮于CH2Cl2，用水和 盐水洗涤，硫酸钠干燥。获得为白色固体的5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯 (7.5g，86％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝7.40(s，1H)，4.00(s，3H)。

将5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(7.5g，43.8mmol)、3，4-二氢-2H-吡喃 (8mL，87.7mmol)和三氟乙酸(65μL，0.9mmol)的无水MeCN(100mL)溶液回 流16hrs。蒸发溶剂，将残留物再悬浮于CH2Cl2(50mL)，用水和盐水洗涤。 硫酸钠干燥后，蒸发溶剂并经硅胶柱色谱纯化(PE-EtOAc，9∶1)，获得1-(四 氢-2H-吡喃-2-基)-5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(3.71mg，33％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝7.41(s，1H)，6.35(dd，J＝9.2Hz，J＝2.4Hz，1H)， 4.01(d，J＝9.6Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.73(t，J＝8.0Hz，1H)，2.43(m，1H)，2.13(m，1H)，2.01 (m，1H)，1.74-1.62(m，3H).

将1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(500mg， 0.70mmol)溶于MeOH/THF/H2O(1∶2∶1，20mL)的混合物中。加入氢氧化锂 (56.3mg，2.35mmol)，将反应混合物搅拌16hrs。反应混合物用水稀释，用 DCM洗涤。水相蒸发，获得为白色固体的1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-硝基 -1H-吡唑-3-甲酸(300mg，64％)，它无需进一步纯化可以直接用于下一步 骤。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝7.22(s，1H)，6.61(dd，J＝9.2Hz，J＝2.4Hz，1H)， 3.94(d，J＝11.2Hz，1H)，3.65(t，J＝10.4Hz，1H)，2.35(m，1H)，2.09(m，1H)，1.92(m，1H)， 1.71-1.54(m，3H).

将5-甲苯基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-胺(97mg，0.38mmol)加 至1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸(100mg，0.41mmol)、2-氯 -1-甲基吡啶碘化物(145mg，0.56mmol)和N，N′-二异丙基乙基胺(193μL， 1.13mmol)的DCM(10mL)溶液中。将反应混合物于室温下搅拌16hrs。反 应物用水稀释，用DCM萃取。有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。 粗品产物经硅胶柱色谱纯化(PE-EtOAc，8∶2)，获得5-硝基-1-(四氢-2H-吡 喃-2-基)-N-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑 -3-甲酰胺(60mg，33％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝9.50(s，0.5H)，9.39(s，0.5H)，7.43(d，J＝6.4Hz，2H)， 7.38(s，0.5H)，7.34(s，0.5H)，7.28(d，J＝8.0Hz，2H)，6.87(s，1H)，6.16(dd，J＝10.0Hz，J＝ 2.4Hz，1H)，6.14(dd，J＝10.0Hz，J＝2.0Hz，1H)，5.17(d，J＝10.4Hz，1H)，5.16(d，J＝8.4 Hz，1H)，3.80(m，2H)，3.60(m，2H)，2.42(s，3H)，2.13(m，2H)，1.78-1.56(m，8H).

将甲醇(5mL)和Pd/C加至5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(1-(四氢 -2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(183mg， 0.38mmol)的THF溶液中。然后将烧瓶抽空并充入氢气。将反应混合物搅 拌16hrs。在硅藻土上过滤催化剂，将溶液浓缩并干燥，获得5-氨基-1-(四 氢-2H-吡喃-2-基)-N-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3- 基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(170mg，定量)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝8.94(s，0.5H)，8.83(s，0.5H)，7.43(d，J＝6.8Hz，2H)， 7.28(d，J＝8.0Hz，2H)，6.95(s，1H)，6.41(s，1H，1H)，6.06(m，2H)，5.17(d，J＝10.0Hz，2H)， 3.73(m，2H)，3.59(t，J＝11.2Hz，2H)，2.42(s，3H)，2.05(m，2H)，1.80-1.54(m，8H).

MS(ESI)：m/z：45 1.32[MH+].

将5-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯 基-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(102mg，0.23mmol)加至1-(四氢-2H-吡 喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酸(59mg，0.20mmol)、2-氯-1-甲基吡啶 碘化物(79mg，0.31mmol)和N，N′-二异丙基乙基胺(105μL，0.62mmol)的 DCM(10mL)溶液中。将反应混合物于室温下搅拌16hrs。将反应混合物用 水稀释，用DCM萃取。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥并浓缩。粗品产 物经硅胶柱色谱纯化(PE-EtOAc，7∶3)获得1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(1-(四 氢-2H-吡喃-2-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基氨 基甲酰基)-1H-吡唑-5-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺(25mg，15％)。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)＝9.42(s，1H)，9.40(s，1H)，7.43(m，4H)，7.37(s，0.5H， 0.5H)，7.28(m，4H)，6.93(s，1H)，6.88(s，1H)，5.20(m，3H)，4.14(m，3H)，3.77(t，J＝11.2 Hz，1H)，3.62(t，J＝11.6Hz，1H)，3.59(t，J＝10.0Hz，1H)，2.43(s，6H)，2.06(m，3H)，1.74 (m，3H)，1.54(m，6H)，1.24(m，6H).

MS(ESI)：m/z：719.39[MH+].

将1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(1-(四氢-2H-吡 喃-2-基)-5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-基)-5-对-甲苯 基-1H-吡唑-3-甲酰胺(28mg，0.04mmol)悬浮于无水THF(500μL)中，滴加硼 烷二甲基硫复合物(26μL，0.27mmol)。反应混合物于回流下搅拌16hrs。然 后将反应混合物冷却至0℃，加入MeOH(50μL)，将混合物搅拌10分钟。 加入浓盐酸(12N)直到pH＜2。将获得的混合物于50℃搅拌16hrs。将混合 物冷却至室温，蒸发溶剂。将残留物再悬浮于THF，过滤沉淀物，用冷 THF洗涤。获得为白色固体的5-对-甲苯基-N-((5-((5-对-甲苯基-1H-吡唑-3- 基)甲基氨基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-1H-吡唑-3-胺。

将5-对-甲苯基-N-((5-((5-对-甲苯基-1H-吡唑-3-基)甲基氨基)-1H-吡唑 -3-基)甲基)-1H-吡唑-3-胺(10mg，0.023mmol在甲醇制HCl(3N，0.5mL)中重 结晶。过滤固体，用乙醚洗涤，真空干燥获得白色固体。Mp.＝167℃。

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝7.68(d，J＝8.0Hz，2H)，7.60(d，J＝8.0Hz，2H)，7.29(d， J＝8.0Hz，2H)，7.21(d，J＝8.0Hz，2H)，6.57(s，1H)，6.23(s，1H)，5.80(s，1H)，4.40(s，2H)， 4.34(s，2H)，2.34(s，3H)，2.31(s，3H).

MS(ESI)：m/z：439.36[MH+].

2ak的制备：

N-苄基-5-((4-(4-氯代苯基)噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2ak根据2h所述方法制备，采用4-(4-氯代苯基)噻唑-2-胺和 2-溴噻唑-5-甲酸作为原料：(31mg，49％)。Mp.105-106℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.64(d，J＝8Hz，2H)，7.27-7.24(m，7H)，6.91(s，1 H)，6.63(s，1H)，4.42(s，2H)，4.33(s，1H)，4.21(bs，4H).

MS(ESI)：m/z(％)：413.35([MH+]，100％).

2al的制备：

N-苄基-5-((4-(噻吩-2-基)噻唑-2-基氨基)甲基)噻唑-2-胺二盐酸盐

化合物2al根据2h所述方法制备，采用4-(噻吩-2-基)噻唑-2-胺和2- 溴噻唑-5-甲酸作为原料：(6mg，50％)；Mp.97-99℃。

1H-NMR(400MHz，CDCl3)：(ppm)：7.29-7.25(m，6H)，7.17(d，J＝4.8Hz，1H)，6.98(d，J＝ 5.2Hz，2H)，6.56(s，1H)，4.42(s，2H)，4.36(s，2H).

MS(ESI)：m/z(％)：385.38([MH+]，100％).

2am的制备：

N-丁基-6-((5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基氨基)甲基)吡啶-2-胺

化合物2am根据2s所述方法合成(59％)。Mp.93-94℃。

1H-NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝7.57(dd，J＝7.0Hz，J＝11Hz 2H)，7.40(t，J＝10.5Hz， 1H)，7.05(t，10.5Hz，2H)，6.58(d，J＝9.0Hz，1H)，6.58(d，J＝9.0，1H)，6.26(d，J＝10.5Hz， 1H)，5.81(s，1H)，4.72(brs，1H)，4，29(s，2H)3.22(m，2H)，1.60(m，2H)，1.43(m，2H)，0.95 (t，J＝9.5Hz 3H).

MS(ESI)：m/z＝340(M+H)

实施例1

各个化合物的milogP和TPSA值列示于表1。milogP和TPSA值根 据获自世界互联网软件计算(http://www.molinspiration.com)，该软件由 Novartis Pharma AG的P.Ertl提供。

表1

    化合物     milogP     TPSA     2a     4.56     69.39     2c     3.40     86.78     2h     5.16     49.84     2j     4.92     49.84     2k     4.08     65.63     2n     3.52     49.84     2o     3.77     49.84     2p     2.63     62.73     2q     2.99     49.84     2s     4.35     65.63     2t     3.96     65.63     2u     3.61     69.39     2w     1.40     49.84     2y     2.48     75.86     2z     4.75     62.73     2aa     3.75     49.84     2ab     3.04     61.86     2ac     3.58     65.63     2ad     4.95     74.76     2ae     4.99     49.84     2af     3.60     49.84     2ag     4.99     49.84     2ah     3.60     49.84     2ai     4.56     110.10     2aj     4.44     61.87     2ak     5.15     49.84     2al     4.25     49.84     2am     4.00     65.63

实施例2：

采用硫黄素T荧光分析法，测定多种小分子对β-淀粉样物质(Aβ)1-42 肽积聚的抑制性能。

(Aβ)肽膜的制备

Aβ1-42冻干粉末(Bachem)在六氟异丙醇(HFIP)中重构至1mM。将该 肽溶液于室温下超声15分钟，搅拌过夜，等份置于非硅化微量离心管中。 然后在氩气气流中蒸发HFIP。获得的肽膜真空干燥10分钟，密封储存于 -80℃直到使用。

Aβ1-42积聚的抑制

为了分析小分子-介导的Aβ1-42积聚的抑制，在每一次实验之前将小 分子溶于无水二甲基亚砜(DMSO，Sigma-Aldrich)，使其浓度达到7.4mM。 将Aβ1-42肽膜溶于DMSO，使其浓度达到400μM。在非硅化的培养管中 制备分析溶液的PBS缓冲液，使其达到下列浓度：330μM小分子，33μM Aβ1-42，10μM硫黄素T(ThT)和12.8％DMSO。因此，小分子与Aβ1-42 的最终摩尔比为10∶1。制备不含小分子的阳性对照测定最大RFU。制备每 一个小分子的不含Aβ1-42的阴性对照。在所有的分析中测试3-氨基吡唑 三聚体(Trimer)以确定每个独立实验之间的重现性。将溶液于37℃温育 24hrs，采用Perkin-Elmer FluoroCount荧光色谱仪，在黑色384-孔分析 板(Perkin-Elmer)中一式六份读取荧光色谱(相对荧光单位；RFU)。根据下 列方程，积聚的抑制以抑制平均百分率％或±1标准差(SD)表示：

功能性分子选择的截止标准(Cut-off criterium)设定义为50％的抑制 性能。

结果

在ThT分析中，对小分子抑制Aβ1-42积聚的性能进行了研究。这些 分子的结果总结于下表。合成的所有小分子在ThT分析中均能够在一定程 度上抑制Aβ1-42，多种实验分子被证实抑制性能超过50％。

    化合物     ％抑制     2a*     65.3±2.6     2c     77.0±5.3     2h     31.9±10.1     2j     70.7±6.8     2k     81.2±7.3     2n     27.8±9.9     2o     39.6±2.8     2p     43.6±2.1     2q     45.0±8.3     2s*     55.1±6.4     2t     86.8±2.9     2u     55.3±1.0     2w     13.9±12.9     2y     57.0±15.9     2z     58.7±3.0     2aa     41.5±9.6     2ab     1.7±11     2ac     78.5±1.3     2ad     82.1±2.2     2ae     51.2±1.5     2af     41.3±9.2     2ag     34.2±1.6     2ah     35.7±5.6     2ai     84.8±0.0     2ak     37.2±14.8     2al     66.1±15.4     2am     68..2±9.7

＊不含β-淀粉样物质1-42的荧光性化合物

表：小分子对Aβ1-42积聚的抑制和预成型Aβ1-42纤维的解聚

当小分子与Aβ1-42摩尔比为10∶1时，评价小分子调节Aβ1-42积聚 抑制的性能。

实施例3

采用5nM Oregon Green标记的Aβ-肽的FCS-分析

为了分析化合物的解聚性能，使用预成型的聚集物，该预成型的聚集 物在FCS-测定之前通过使用去离子水将500nM Oregon Green标记的 Aβ1-42的DMSO-储备溶液稀释为1∶1而直接诱导。Oregon Green标记的 Aβ-肽在1×PBS和3％DMSO中的最终浓度为5nM。为了提高测定的重 现性，所有样本的浓度以四份制备。

表：FCS-测定：相对于不添加化合物的对照反应的“峰数”值的百分比。

  化合物     200nM    100nM   2t     67.2    nd   2c     51.2    29.4

nd：没有进行

表：FCS-测定：相对于不添加化合物的对照反应的“峰×高”值的百分 比。

化合物    200nM     100nM 2t    53.3     nd 2c    45.1     26.6

nd：没有进行

实施例4

本发明化合物对培养的视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的作用

为了评价本发明化合物在体外降低与眼病相关的视网膜神经节细胞 (RGC)死亡的性能，所述眼病与视觉系统组织中病理异常/改变有关，特别 是与视觉系统组织中β-淀粉样物质相关病理异常/改变有关，例如，神经细 胞退化，使用获自大鼠和小鼠的培养的RGCs。

为分离细胞，麻醉处死动物，移除其眼睛，剥离视网膜，在2mg/ml 木瓜酶溶液中于37℃培养25分钟以使得细胞外基质分裂。在处理后，将 细胞采用含有蛋白酶抑制剂的RCG介质洗涤3次以中止木瓜酶反应。然 后，通过在Pasteur吸管中快速上上下下的移动研磨该组织直到细胞分散。 采用得自商业的Coulter计数仪测定细胞悬浮液中的细胞密度，然后在 95％空气/5％CO2中于37℃培养细胞。

为了模仿与视觉系统组织中病理异常/改变有关的眼病所导致的损害， 特别是与视觉系统组织中β-淀粉样物质相关病理异常/改变有关的，例如， 神经细胞退化，评价本发明化合物的预防作用，将细胞采用含有或不含有 本发明化合物的L-谷氨酸盐培养3天。将在缓冲液中单独培养的细胞作为 对照。

为测定RGC存活，在培养阶段的后期将细胞采用3.7％甲醛的磷酸盐 缓冲的生理盐水(PBS)溶液于室温下固化30分钟，在PBS中冲洗3次，在 含有RGC特异性标记物Thy 1.1或NF-抗体的PBS中培养1小时。然后 通过除去抗体，将细胞与荧光标记的二级抗体羊抗-鼠IgG、羊抗-兔IgG 或兔抗-羊IgG一起培养30分钟。在培养的末期，洗涤细胞，采用DAPI 溶液染色5分钟并冲洗。存活的RGCs通过荧光显微镜计数。

实施例5

本发明化合物在体内对视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的作用

为评价本发明化合物在个体中体内降低由眼病所影响的视网膜神经节 细胞(RGC)死亡的性能，所述眼病与视觉系统组织中病理异常/改变有关， 特别是与视觉系统组织中β-淀粉样物质相关病理异常/改变有关，例如，神 经细胞退化，采用大鼠和小鼠进行2-16周的诱导眼内压(IOP)实验。在实 验的末期，通过体内成像和组织学终点分析(histological endpoint analysis) 测定视网膜神经节细胞死亡。

为模仿与某些眼病(所述眼病与视觉系统组织中病理异常/改变有关， 特别是与视觉系统组织中β-淀粉样物质相关病理异常/改变有关，例如，神 经细胞退化，特别是青光眼)有关的眼内压增加，首先采用腹内给于克他命 (75mg/kg)和甲苯噻嗪(5mg/kg)将动物麻醉并局部给于丙美卡因1％滴眼 剂。然后采用两种可选择的方法人工提高大鼠和小鼠一只眼睛(一侧)中的 IOP。在第一种方法中，采用532nm的二极管激光器以垂直于小梁和平行 于虹膜小梁虹的裂隙灯处理房水流出区域，对麻醉的动物进行小梁的激光 诱导损伤。该动物接受的初始处理为50-μm大小的40-50个斑点，0.4W， 0.6秒的时间。在人工增加IOP的第二种方法中，采用微针以刚刚足以刺 穿静脉的力度注射给于麻醉动物的一只眼睛中的虹膜静脉50μl高渗盐水 溶液。

为测定IOP，采用得自商业的handheld tonomer(Tonopen XL-VET)。 当动物处于麻醉情况下，在开始激光处理之前、1天后、实验期间每周， 测定10次读数的平均值。在一周间隔期间，如果动物两只眼睛之间的IOP 差异小于6mm Hg，则该动物不再包含在实验中。

为了评价本发明化合物对RGC凋亡的预防作用，在IOP升高期间， 接受IOP诱导处理的一半动物接受玻璃体内或静脉内注射本发明化合物。 一半动物用作对照。在IOP诱导升高的2、4、8和16周，通过体内成像 和组织学终点分析测定RGCs的数量。RGCs体内凋亡分析通过DARC方 法进行。DARC方法包括玻璃体内给于动物荧光团-共轭的Annexin 5(它特 异性地与凋亡细胞结合)，肉眼观察RCGs体内凋亡过程。如果需要，该方 法可以与SCN的视神经的后部标记(backlabelling)结合使用以确定存活的 RCGs，它不再具有完整的轴突并失去了与其它靶位的连通性。

另外，为了测定RCGs的总数，在处死时进行视网膜和视神经的终点 组织学分析。将动物的视网膜在4％多聚甲醛中固定并切片染色，或者采 用RGC特异性标记物进行整体封固，所述标记物例如Thy 1.1、NF-L和 SMI 32以及对细胞凋亡过程具有特异性的抗体。在这些方法的每一个中， 在手术升高IOP后的2、4、8和16周后测定RGCs的总数。

为测定IOP升高后视神经中保留的RGC轴突数量，将动物的视神经 剥离，将神经在4％的多聚甲醛中固定，切片，采用甲苯胺蓝染色进行分 析。

序列表

<110>AC免疫有限公司

<120>用于治疗与淀粉样物质或淀粉样蛋白有关的疾病的新化合物

<130>M3150 PCT

<150>EP 06024427.4

<151>2006-11-24

<160>4

<170>PatentIn版本3.3

<210>1

<211>112

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>来源

<223>/注释＝″人工(*)序列描述：人工人源化C2 HuVK 1可变轻链″

<400>1

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

                85                  90                  95

Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>2

<211>219

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>来源

<223>/注释＝″人工(*)序列描述：人工人源化C2轻链″

<400>2

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

                85                  90                  95

Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

        115                 120                 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

    130                 135                 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145                 150                 155                 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

                165                 170                 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

            180                 185                 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

        195                 200                 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210                 215

<210>3

<211>112

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>来源

<223>/注释＝″人工(*)序列描述：人工人源化C2 HuVK AF 4可变重链″

<400>15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

            20                  25                  30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

        35                  40                  45

Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

            100                 105                 110

<210>4

<211>439

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>来源

<223>/注释＝″人工(*)序列描述：人工人源化C2重链″

<400>4

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

            20                  25                  30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

        35                  40                  45

Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

            100                 105                 110

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

        115                 120                 125

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

    130                 135                 140

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

145                 150                 155                 160

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

                165                 170                 175

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

            180                 185                 190

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

        195                 200                 205

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

    210                 215                 220

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

225                 230                 235                 240

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

                245                 250                 255

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

            260                 265                 270

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

        275                 280                 285

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

    290                 295                 300

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

305                 310                 315                 320

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

                325                 330                 335

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

            340                 345                 350

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

        355                 360                 365

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

    370                 375                 380

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

385                 390                 395                 400

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

                405                 410                 415

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

            420                 425                 430

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

        435