一种用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物Braf蛋白
阅读：933发布：2024-02-18
专利汇可以提供一种用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物Braf蛋白专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提出了一种 微波 辐射 致脑损伤的 生物 标志物。 发明人 发现，相比与微波辐射前，微波辐射后大鼠海 马 组织Braf蛋白的表达量显著升高，Braf蛋白可作为微波辐射致脑损伤的生物标志物。，下面是一种用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物Braf蛋白专利的具体信息内容。
1.一种用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物，其特征在于，具有下列序列的至少之一：
(1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
(2)与(1)具有至少70％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少80％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少85％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少90％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少95％同一性的氨基酸序列，更优选地，具有至少99％同一性的氨基酸序列。
2.Braf作为检测微波辐射致脑损伤的生物标志物的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一。
4.一种试剂盒，其特征在于，包括：特异性检测Braf的试剂；
任选地，所述试剂包括选自特异性检测Braf的抗体、引物和探针的至少之一；
任选地，所述引物具有SEQ ID NO:2～3所示的核苷酸序列。
5.特异性检测Braf的试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测微波辐射致脑损伤；
任选地，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一；
任选地，所述试剂包括选自特异性检测Braf的抗体、引物和探针的至少之一；
任选地，所述引物具有SEQ ID NO:2～3所示的核苷酸序列。
6.Braf功能促进剂在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防微波辐射致脑损伤。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一；
任选地，所述微波辐射的辐射强度为10mW/cm2，辐射波段为S波段、L波段或S和L波段微波复合，辐射时间为6分钟；
任选地，所述药物的用药时间为微波辐射后的第6小时或第7天；
任选地，所述Braf功能促进剂包括选自特异性过表达Braf的试剂、Braf激活剂的至少之一。
8.一种检测微波辐射致脑损伤的方法，其特征在于，包括：
将海马组织进行微波辐射处理；
基于微波辐射后所述海马组织中Braf蛋白的表达水平，确定微波辐射是否导致脑损伤。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，微波辐射后所述Braf蛋白的表达水平高于微波辐射前所述Braf蛋白的表达水平，是微波辐射导致脑损伤的指示。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述微波辐射处理是在微波辐射强度为
10mW/cm2，辐射波段为S波段、L波段或S和L波段微波复合的条件下进行6分钟；
优选地，基于微波辐射后第6小时和/或第7天所述海马组织中Braf蛋白的表达水平，确定微波辐射是否导致脑损伤；
任选地，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一。
一种用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物Braf蛋白
技术领域
[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物Braf蛋白及其应用，更具体地，本发明涉及用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物、Braf作为检测微波辐射致脑损伤的生物标志物的用途、试剂盒、特异性检测Braf的试剂在制备试剂盒中的用途、Braf功能促进剂在制备药物中的用途以及检测微波辐射致脑损伤的方法。
背景技术
[0002] 微波技术广泛应用于通讯、医疗、工业、军事等方面，微波辐射损伤已成为社会关注的热点问题。研究表明，脑是微波辐射损伤的敏感靶器官，海马是学习和记忆功能的重要脑区，微波辐射可引起学习和记忆功能障碍、脑电活动紊乱及海马组织结构和超微结构损伤。目前，随着定量蛋白质组学技术的发展，可实现对大鼠脑组织中蛋白的精确定量，但缺乏微波辐射致脑损伤的敏感生物标志物。因此，需要寻找用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物。
发明内容
[0004] 发明人采用微波辐射大鼠海马组织后，常规喂养的第7天，提取大鼠的海马组织(n＝3/组)总蛋白，并进行定量蛋白质组学GO分析，惊喜地发现Braf蛋白为敏感的差异蛋白，微波辐射后大鼠海马组织Braf蛋白的表达量相比于微波辐射前显著升高。
[0005] 为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种用于检测微波辐射致脑损伤的生物标志物。根据本发明的实施例，所述生物标志物具有下列序列的至少之一：(1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；(2)与(1)具有至少70％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少80％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少85％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少
90％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少95％同一性的氨基酸序列，更优选地，具有至少99％同一性的氨基酸序列。
90％同一性的氨基酸序列，优选地，具有至少95％同一性的氨基酸序列，更优选地，具有至少99％同一性的氨基酸序列。
[0006]MAALSGGGGSSSGGGGGGGGGGGGGGGGGAEQGQALFNGDMEPEAGAGAAASSAADPAIPEEVWNIKQMIKLTQEHIEALLDKFGGEHNPPSIYLEAYEEYTSKLDALQQREQQLLESLVFQTPTDVSRNNPKSPQKPIVRVFLPNKQRTVVPARCGVTVRDSLKKALMMRGLIPECCAVYRIQDGEKKPIGWDTDISWLTGEELHVEVLENVPLTTHNFVRKTFFTLAFCDFCRKLLFQGFRCQTCGYKFHQRCSTEVPLMCVNYDQLDLLFVSKFFEHHPVPQEEAFSAETTLPSGCSSAPPSDSIGPQILTSPSPSKSIPIPQPFRPADEDHRNQFGQRDRSSSAPNVHINTIEPVNIDEKFPEVELQDQRDLIRDQGFRGDGAPLNQLMRCLRKYQSRTPSPLLHSVPSEIVFDFEPGPVFRGSTTGLSATPPASLPGSLTNVKALQKSPGPQRERKSSSSSSSTEDRSRMKTLGRRDSSDDWEIPDGQITVGQRIGSGSFGTVYKGKWHGDVAVKMLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRKTRHVNILLFMGYSTKPQLAIVTQWCEGSSLYHHLHIIETKFEMIKLIDIARQTAQGMDYLHAKSIIHRDLKSNNIFLHEDLTVKIGDFGLATVKSRWSGSHQFEQLSGSILWMAPEVIRMQDKNPYSFQSDVYAFGIVLYELMTGQLPYSNINNRDQIIFMVGRGYLSPDLSKVRSNCPKAMKRLMAECLKKKRDERPLFPQILASIELLARSLPKIHRSASEPSLNRAGFQTEDFSLYACASPKT PIQAGGYGEF AAFK(SEQ ID NO:1)。
[0007] 发明人发现，微波辐射后大鼠海马组织Braf蛋白的表达量相比与微波辐射前，表达量显著升高，作为微波辐射致脑损伤的一种负反馈调节产物，可作为微波辐射致脑损伤的生物标志物。
[0008] 在本发明的第二方面，本发明提出了Braf作为检测微波辐射致脑损伤的生物标志物的用途。如前所述，微波辐射后大鼠海马组织Braf蛋白的表达量相比与微波辐射前，表达量显著升高，作为微波辐射致脑损伤的一种负反馈调节产物，可作为微波辐射致脑损伤的生物标志物。
[0009] 根据本发明的实施例，上述用途还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：
[0010] 根据本发明的实施例，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一。发明人通过实验发现，微波辐射后学习和记忆功能减退，脑电频率降低，脑电α波功率降低，脑电β波功率降低，脑电θ波功率升高，脑电δ波功率升高，而Braf蛋白的表达量在微波辐射后显著升高是上述微波辐射后脑损伤的负反馈产物，Braf蛋白可作为上述脑损伤的敏感和特异性的生物标志物。
[0011] 在本发明的第三方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括：特异性检测Braf的试剂。如前所述，Braf的表达量升高是微波辐射后脑损伤的负反馈产物，Braf可作为微波辐射后脑损伤的敏感和特异性的生物标志物。根据本发明实施例的试剂盒包括检测Braf的试剂，能够检测Braf的表达量，进而利用根据本发明实施例的试剂盒可特异性检测或确定微波辐射后是否导致脑损伤。
[0012] 根据本发明的实施例，上述试剂盒还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：
[0013] 所述试剂的种类不受特别显著，只要能够实现特异性检测Braf的表达量即可，本领域技术人员可以理解的是，“表达量”既可指绝对表达量也可指相对表达量，可以以对照样本中Braf表达量作为基准，相对表示待测样本中Braf的表达量，也可以以管家基因的表达量为基准，相对表示Braf的表达量。根据本发明的具体实施例，所述试剂包括选自特异性检测Braf的抗体、引物和探针的至少之一。例如，当采用特异性检测Braf的抗体对Braf进行检测时，可以通过蛋白质印迹法、流式细胞术等方法进行检测，当采用特异性检测Braf的引物对Braf进行检测时，可以通过实时定量PCR的方法检测Braf的mRNA的表达量，当采用特异性检测Braf的探针对Braf进行检测时，可采用Northern blot的方法检测Braf的mRNA的表达量。
[0014] 根据本发明的实施例，所述引物具有SEQ ID NO:2～3所示的核苷酸序列。
[0015] GTGGGGATGGAGCCCCTTTGAA(SEQ ID NO:2)。
[0016] ACACTGGGCCAGGCTCAAAATCA(SEQ ID NO:3)。
[0017] 在本发明的第四方面，本发明提出了特异性检测Braf的试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测微波辐射致脑损伤。如前所述，Braf的表达量升高是微波辐射后脑损伤的负反馈产物，Braf可作为微波辐射后脑损伤的敏感和特异性的生物标志物。特异性检测Braf的试剂所制备的试剂盒能够检测Braf的表达量，进而利用该试剂盒可特异性检测或确定微波辐射后是否导致脑损伤。
[0018] 根据本发明的实施例，上述用途还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：
[0019] 根据本发明的实施例，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一。
[0020] 根据本发明的实施例，所述试剂包括选自特异性检测Braf的抗体、引物和探针的至少之一。
[0021] 根据本发明的实施例，所述引物具有SEQ ID NO:2～3所示的核苷酸序列。进而采用实时定量PCR，可实现对Braf mRNA表达量的实时监测。
[0022] 在本发明的第五方面，本发明提出了Braf功能促进剂在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防微波辐射致脑损伤。如前所述，Braf的表达量升高是微波辐射后脑损伤的负反馈产物，Braf的表达量升高是机体在受到微波辐射后一种保护性负反馈调节。Braf功能促进剂，如可促进Braf的表达或激活Braf的试剂可用于制备治疗或预防微波辐射致脑损伤的药物。
[0023] 根据本发明的实施例，上述用途还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：
[0024] 根据本发明的实施例，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一。
[0025] 根据本发明的实施例，所述微波辐射的辐射强度为10mW/cm2，辐射波段为S波段、L波段或S和L波段微波复合，辐射时间为6分钟。根据本发明实施例的药物对辐射强度为10mW/cm2，辐射波段为S波段、L波段或S和L波段微波复合，辐射时间为6分钟所致的脑损伤的治疗或预防的效果更佳显著。
[0026] 根据本发明的实施例，所述药物的用药时间为微波辐射后的第6小时或第7天。发明人发现，大鼠海马组织在辐射强度为10mW/cm2，辐射波段为S波段、L波段或S和L波段微波复合，辐射时间为6分钟时，Braf的表达量在辐射后第6小时或第7天增高显著，根据本发明实施例的药物在辐射后第6小时或第7天给药，其治疗或预防效果更加显著。
[0027] 根据本发明的实施例，所述Braf功能促进剂包括选自特异性过表达Braf的试剂、Braf激活剂的至少之一。
[0028] 如无特别说明，本申请所述的“Braf功能促进剂”是指能够实现Braf过表达或功能增强的试剂，如用于特异性过度表达Braf的试剂是指能够实现Braf在目标细胞特异性过表达的试剂，如Braf激活剂是指能够实现Braf功能的增强或活化的试剂。
[0029] 在本发明的第六方面，本发明提出了一种检测微波辐射致脑损伤的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将海马组织进行微波辐射处理；基于微波辐射后所述海马组织中Braf蛋白的表达水平，确定微波辐射是否导致脑损伤。如前所述，微波辐射后Braf蛋白的表达量在微波辐射后会发生显著的变化，而微波辐射后会有脑损伤，因此，Braf蛋白可作为微波辐射后脑损伤的敏感而特异的生物标志物。检测微波辐射后海马组织中Braf蛋白的表达水平，可准确确定微波辐射是否导致脑损伤。
[0030] 根据本发明的实施例，上述方法还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：
[0031] 根据本发明的实施例，微波辐射后所述Braf蛋白的表达水平高于微波辐射前所述Braf蛋白的表达水平，是微波辐射导致脑损伤的指示。
[0032] 根据本发明的实施例，所述微波辐射处理是在微波辐射强度为10mW/cm2，辐射波段为S波段、L波段或S和L波段微波复合的条件下进行6分钟。发明人在实验中发现，大鼠海马组织在微波辐射强度为10mW/cm2，辐射波段为S波段、L波段或S和L波段微波复合的条件下进行6分钟，Braf蛋白的表达水平升高显著，因此，海马组织在上述微波辐射条件下进行辐射后，检测Braf蛋白的表达量以反映是否发生了脑损伤，其灵敏性、准确性、可信度会显著提高。
[0033] 根据本发明的实施例，基于微波辐射后第6小时和/或第7天所述海马组织中Braf蛋白的表达水平，确定微波辐射是否导致脑损伤。发明人在实验中同时发现，大鼠海马组织微波辐射后的第6小时或第7天，Braf蛋白的表达水平升高显著，因此，检测微波辐射后第6小时或第7天的Braf蛋白的表达水平以反映是否发生了脑损伤，其灵敏性、准确性、可信度会显著提高。
[0034] 根据本发明的实施例，所述微波辐射致脑损伤包括选自微波辐射致学习和记忆功能减退、微波辐射致脑电频率降低、微波辐射致脑电α波功率降低、微波辐射致脑电β波功率降低、微波辐射致脑电θ波功率升高、微波辐射致脑电δ波功率升高的至少之一。
[0036] 图1是根据本发明实施例的10mW/cm2的L和S波段微波复合辐射后6小时各组海马组织结构的变化示意图，
[0037] 其中：A为假辐射组大鼠海马组织结构，Scale bars＝50μm，
[0038] B为S组大鼠海马组织结构，示固缩深染神经元增多，Scale bars＝50μm，[0039] C为L组大鼠海马组织结构，示固缩深染神经元增多，Scale bars＝50μm，[0040] D为SL组大鼠海马组织结构，示损伤最重，并伴有血管周间隙增宽，Scale bars＝50μm；
[0041] 图2是根据本发明实施例的10mW/cm2的L和S波段微波复合辐射后7天各组海马组织结构的变化示意图，
[0042] 其中：A为假辐射组大鼠海马组织结构，Scale bars＝50μm，
[0043] B为S组大鼠海马组织结构，示固缩深染神经元显著增多，Scale bars＝50μm，[0044] C为L组大鼠海马组织结构，示固缩深染神经元显著增多，Scale bars＝50μm，[0045] D为SL组大鼠海马组织结构，示损伤最重，并伴有血管周间隙明显增宽，Scale bars＝50μm；
[0046] 图3是根据本发明实施例的10mW/cm2的L和S波段微波复合辐射后大鼠海马组织Braf蛋白的表达示意图，
[0047] 其中：A为辐射后6小时和7天大鼠海马组织Braf蛋白表达水平，
[0048] B为Braf蛋白表达的统计结果。
具体实施方式
[0049] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0050] 实施例1对大鼠进行微波辐射
[0051] 将80只体重为220±20克的二级雄性Wistar大鼠(军事医学研究院)，随机分为4组(C、S、L和SL)，C组置于辐射盒中不予辐射，S、L和SL组分别暴露于10mW/cm2的S波段、L波段和S和L波段微波复合辐射，辐射时间为6分钟。
[0052] 实施例2大鼠学习和记忆功能检测
[0053] 采用SLY-WMS Morris水迷宫测试系统(购自北京硕林苑科技有限公司，主要由不锈钢圆形水池、摄像机、软件组成，不锈钢圆形水池内壁为深色，直径120cm，高50cm，水深20cm，水温控制在23±2摄氏度)，将水池分为4个象限，分别定为1、2、3、4象限，每个象限池壁的中间位置标明4个入水点，任选其中1个象限，正中放置1个直径12cm，高19cm的深色平台。迷宫上方安有摄像机，通过和电脑连接，自动录入大鼠游泳轨迹以进行分析。
[0054] 各组大鼠于微波辐射前训练2天，将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中，如果大鼠在60秒内找到平台，让其在平台上停留20秒，然后再进行下一个象限。如果60秒内未找到平台，由实验者将其引至平台，让其停留20秒，再进行下一象限。每只大鼠4个象限做完，再放回笼中。
[0055] 采用Morris水迷宫检测大鼠的学习和记忆能力的改变。于辐射后恢复常规喂养的第6小时、1天、2天和7天进行定位航行实验。每组15只动物。将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中，记录其在60秒内寻找到平台的时间(逃避潜伏期)，以平均逃避潜伏期(average escape latency，AEL)作为观察指标。如果大鼠在60秒内未能找到平台，则记为60秒，继续进行下一象限实验。结果见下表1。
[0056] 表1：10mW/cm2的L和S波段微波复合辐射后大鼠水迷宫实验平均逃离潜伏期(s)[0057]组别 辐射后6小时 辐射后1天 辐射后2天 辐射后7天
C 23.53±8.33 20.24±7.34 17.60±0.95 17.37±3.74
S 26.03±7.64 24.05±4.35 23.38±5.17* 24.44±4.63*
L 34.30±9.34** 30.39±9.51* 23.25±5.92* 21.78±8.96
SL 33.89±5.88** 31.54±4.24* 24.28±5.42* 25.91±3.64**
C 23.53±8.33 20.24±7.34 17.60±0.95 17.37±3.74
S 26.03±7.64 24.05±4.35 23.38±5.17* 24.44±4.63*
L 34.30±9.34** 30.39±9.51* 23.25±5.92* 21.78±8.96
SL 33.89±5.88** 31.54±4.24* 24.28±5.42* 25.91±3.64**
[0058] 注：与C组相比，*示P<0.05,**示P<0.01。
[0059] 由上表1可见，于辐射后恢复常规喂养的第6小时和1天，可见L及SL组大鼠的平均逃避潜伏期较C组明显延长(P＜0.01)，于辐射后恢复常规喂养的第2天，S、L及SL组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05)，于辐射后恢复常规喂养的第7天，S和L组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05或P<0.01)。
[0060] 实施例3大鼠脑电活动的检测
[0061] 每组选取5只大鼠，经腹腔注射1％戊巴比妥钠0.5mL/100g，5分钟后大鼠处于轻度麻醉(有痛觉反射)状态，采用BIOPAC公司产MP-150多导生理记录及分析系统，于辐射后恢复常规喂养的第6小时对大鼠脑电图(EEG)进行检测。具体操作过程如下：用理发器去头顶部的毛发，消毒去脂，在头顶正中部左右各放1个电极，用针式电极固定于头皮，参比电极插在同侧耳垂边缘处，电极连接EEG放大器，并将EEG的图形分为Alpha(α)、Beta(β)、Theta(θ)、delta(δ)，灵敏度为2000Hz，连续记录EEG的改变，最后对α、β、θ、δ脑电波的功率和脑电总体频率进行统计分析，结果见下表2。
[0062] 表2：10mW/cm2的L和S波段微波复合辐射后大鼠脑电频率变化(Hz)
[0063]
[0064] 注：与C组相比，*示P<0.05，**示P<0.01。
[0065] 由上表2可见，于辐射后恢复常规喂养的第6小时和7天，与C组比较，S、L及SL组大鼠脑电频率明显降低(P＜0.01或P＜0.05)；于辐射后恢复常规喂养的第6小时和7天，S、L及SL组大鼠的脑电α波功率明显降低(P＜0.01或P＜0.05)；于辐射后恢复常规喂养的第6小时，SL组大鼠的脑电β波功率明显降低(P＜0.05)，于辐射后恢复常规喂养的第7天，S和SL组大鼠的脑电β波功率明显降低(P＜0.05或P<0.01)；于辐射后恢复常规喂养的第6小时，SL组大鼠的脑电θ波功率明显升高(P＜0.05)，于辐射后恢复常规喂养的第6小时和7天，S和SL组大鼠的脑电θ波功率明显升高(P＜0.05或P<0.01)；于辐射后恢复常规喂养的第6小时，S及SL组大鼠的脑电δ波功率明显升高(P＜0.01或P＜0.05)，提示微波辐射可致大鼠脑电反应异常。
[0066] 实施例4大鼠海马组织光镜观察
[0067] 将各组大鼠分别于辐射后恢复常规喂养的第6小时和7天采用腹腔注射1％戊巴比妥钠(30mg/kg)对大鼠进行麻醉后，取脑组织，并用10％缓冲福尔马林固定1周后，采用梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚度为3米，脱蜡至蒸馏水，Harris苏木素染核，70％盐酸乙醇分化，1％乙醇伊红染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，光镜观察并摄像。结果见图1和图2。
[0068] 由图1可见，于辐射后恢复常规喂养的第6小时，C组大鼠脑组织呈正常形态结构，神经元轮廓清晰，多呈圆形，细胞核大而圆，着色较浅，位于细胞中央，胞质弱嗜酸性；S、L及SL组大鼠海马组织组织水肿、疏松，神经元呈轻度的变性、坏死，主要表现为锥体细胞核固缩成三角形蓝色质块，胞体皱缩呈梭形，血管周间隙增宽。
[0069] 由图2可见，于辐射后恢复常规喂养的第7天，病变进行性加重，神经元胞体变小，胞核呈三角形和梭形，血管周间隙明显增宽。上述改变表现为SL组较S组和L组损伤较重，S和L波段微波复合效应主要表现为协同致伤效应。
[0070] 实施例5微波辐射后大鼠海马组织定量蛋白质组学检测
[0071] 于辐射后恢复常规喂养的第7天，取C、S、L和SL组大鼠的海马组织(n＝3/组)，提取总蛋白，并对蛋白进行酶解。收集酶解消化后的肽段溶液，进行iTRAQ标记，并在高pH条件下进行反相色谱分离，后采用纳升级反相色谱-Q Exactive进行蛋白质分析。最后进行生物信息学分析，采用Uniprot中下载的大鼠蛋白质组全库。iTRAQ的质谱分析是由Thermo Q-Exactive型质谱完成，产生的质谱原始文件采用Thermo公司的配套商用软件Proteome Discoverer1.4处理。
[0072] L和S波段微波复合照射大鼠海马组织定量蛋白质组学GO分析见下表3。
[0073] 表3：L和S波段微波复合照射大鼠海马组织定量蛋白质组学GO分析
[0074]
[0075]
[0076] 综上，C、S、L及SL组大鼠海马组织定量蛋白质组学结果进行汇总，结合微波辐射损伤的病理生理学特点，对信号通路中复集到的蛋白质进行逐一分析，选择与脑损伤密切相关的学习记忆功能、长时程改变、突触囊泡循环、钙信号通路等信号通路，确定待验证蛋白，本研究发现S波段及S和L波段微波复合照射均发现Braf蛋白可能为敏感的差异蛋白。
[0077] 其中，Braf蛋白的基因名称，生物学过程，分子功能及细胞定位见下表4。
[0078] 表4：L和S波段微波复合照射大鼠海马组织差异蛋白的注释
[0079]
[0080] 实施例6大鼠海马组织中Braf蛋白表达的验证
[0081] 于辐射后恢复常规喂养的第6小时和7天，对各组大鼠海马组织蛋白经SDS-PAGE电泳及Western Blot检测Braf蛋白表达。具体过程为制胶(8％分离胶，5％基层胶)-上样-电泳-转膜-封闭-一抗孵育(anti-Braf，1:1000，Abcam，USA)-二抗孵育(HRP-conjugated anti-rabbit，1:5000，Zhongshan Biotechnology,China)-显影-图像分析。结果见图3。
[0082] 由图3可见，与C组比较，于辐射后恢复常规喂养的第6小时，S、L及SL组大鼠海马组织Braf含量显著增高(P<0.01)，于辐射后恢复常规喂养的第7天，S组及SL组大鼠海马组织Braf蛋白含量显著增高(P<0.05)。
[0083] 在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
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