一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法
专利汇可以提供一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种基于发光材料Ru@MOF-5为基底，构建用于检测降 钙 素原(PCT)的双电位比率型免疫 传感器 的制备方法，本发明属于新型功能材料与 生物 传感技术领域。具体是以孔隙率高、 稳定性 好的 金属-有机骨架 复合物(MOF)材料MOF-5负载Ru(bpy)32+合成新型发光材料Ru@MOF-5作为传感器基底，此发光材料具有稳定高效的ECL输出，当PBS缓冲溶液中存在K2S2O8时，发光材料Ru@MOF-5分别在 阴极 (-1.5 V）和 阳极 (1.5 V)产生双 信号 ，此外将 复合材料 AgNCs-Sem-AuNPs作为二抗标记物，用于增强基底的阴极信号，降低阳极信号，以此构建的比率型电致 化学发光 免疫传感器灵敏特异检测PCT。，下面是一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中，并在-0.2 0.6 V电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；
~
（2）将8 μL，1 5 mg/mL Ru@MOF-5复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
~
（3）将8 μL，1 2 μg/mL PCT抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多~
余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1 2% BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，~
干燥之后使用PBS洗去多余BSA，室温下干燥；
（5）将8 μL，0.00005 100 ng/mL一系列不同浓度的PCT抗原标准溶液滴加于电极上，~
室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗原，室温下干燥；
（6）将8 μL，2 6 mg/mL AgNCs-Sem-AuNPs复合物溶液滴加于电极上，室温下干燥后，~
用PBS清洗，除去多余二抗，室温下干燥。
2.如权利1所述的一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其所述的Ru@MOF-5材料的制备步骤如下：
(1) MOF-5的制备
将1 ~ 3 mmol Zn(NO3)2·6H2O与1 ~ 3 mmol对苯二甲酸(H2BDC)溶解于200 ~ 300 mmol 的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌使其溶解，后将7 9 mmol三乙胺(TEA)加入混合~
溶液中，连续搅拌2 4 h，离心洗涤数次，将获得的白色沉淀放置于60 ˚C真空干燥箱中干~
燥24 h，得到MOF-5；
(2) Ru@MOF-5的制备
称取100 200 mg的MOF-5溶解于DMF中，加入20 40 mg三(2,2'-联吡啶)二氯化钌，~ ~
70 ˚C油浴加热12 h，后通过离心洗涤收集沉淀，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到Ru@MOF-5。
3.如权利1所述的一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其所述的AgNCs-Sem-AuNPs材料的制备步骤如下：
(1) AgNCs的制备
将0.15 0.18 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用20 25 mL乙二醇(EG)溶解，然后将3 5 ~ ~ ~
mL的AgNO3(1 mM，溶解于EG中)，和2 ~ 5 mL的FeCl3(0.6 mM，溶解于EG中)依次加入PVP溶液中，然后将混合物倒入50 mL的高压釜中，140 ˚C反应1 h，离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，得到AgNCs；
(2) AuNPs的制备
首先将100 mL质量分数为0.01 0.03%的氯金酸(HAuCl4) 130 ˚C油浴加热至沸腾，然~
后将2 3 mL质量分数为1 3%的柠檬酸钠在搅拌条件下逐滴加入到上述溶液中，溶液颜~ ~
色由淡黄色变为红棕色，即为AuNPs，冷却至室温后避光保存以备使用；
(3) AgNCs-Sem-AuNPs的制备
在搅拌下将200 300 μL氨基脲(Sem, 10 mM)溶液加入到上述合成的300 500 μL ~ ~
AuNCs溶液(1 mg/mL)中，搅拌12 h以获得AgNCs-Sem，用去离子水洗涤两次后，收集沉淀并分散在去离子水中，然后，将200 400 μL制备的AuNPs溶液(1 mg/mL)加入AgNCs-Sem溶液~
中，搅拌12 h，然后离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，获得AgNCs-Sem-AuNPs。
4.如权利1所述的一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其特征在于，用于PCT的检测，检测步骤如下：
（1）使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为800 V，循环伏安扫描电位范围为-1.5 1.5 ~
V，扫描速率为0.1 V/s；
（2）在10 mL、 pH 6.0 ~ 8.5的含浓度为50 mmol/L ~ 100 mmol/L K2S2O8的PBS缓冲溶液中通过电化学发光方法，检测对不同浓度的PCT标准溶液产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
（3）将待测PCT样品溶液代替PCT标准溶液进行测定。
一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备
方法
技术领域
背景技术
发明内容
（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中，并在-0.2 0.6 V电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；
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（2）将8 μL，1 5 mg/mL Ru@MOF-5复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
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（3）将8 μL，1 2 μg/mL PCT抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多~
余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1 2% BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，~
干燥之后使用PBS洗去多余BSA，室温下干燥；
（5）将8 μL，0.00005 100 ng/mL一系列不同浓度的PCT抗原标准溶液滴加于电极上，~
室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗原，室温下干燥；
（6）将8 μL，2 6 mg/mL AgNCs-Sem-AuNPs复合物溶液滴加于电极上，室温下干燥后，~
用PBS清洗，除去多余二抗，室温下干燥。
将1 ~ 3 mmol Zn(NO3)2·6H2O与1 ~ 3 mmol对苯二甲酸(H2BDC)溶解于200 ~ 300 mmol 的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌使其溶解，后将7 9 mmol三乙胺(TEA)加入混合~
溶液中，连续搅拌2 4 h，离心洗涤数次，将获得的白色沉淀放置于60 ˚C真空干燥箱中干~
燥24 h，得到MOF-5；
(2) Ru@MOF-5的制备
称取100 200 mg的MOF-5溶解于DMF中，加入20 40 mg三(2,2'-联吡啶)二氯化钌，~ ~
70 ˚C油浴加热12 h，后通过离心洗涤收集沉淀，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到Ru@MOF-5。
将0.15 0.18 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用20 25 mL乙二醇(EG)溶解，然后将3 5 ~ ~ ~
mL的AgNO3(1 mM，溶解于EG中)，和2 ~ 5 mL的FeCl3(0.6 mM，溶解于EG中)依次加入PVP溶液中，然后将混合物倒入50 mL的高压釜中，140 ˚C反应1 h，离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，得到AgNCs；
(2) AuNPs的制备
首先将100 mL质量分数为0.01 ~ 0.03%的氯金酸(HAuCl4) 130 ˚C油浴加热至沸腾，然后将2 3 mL质量分数为1 3%的柠檬酸钠在搅拌条件下逐滴加入到上述溶液中，溶液~ ~
颜色由淡黄色变为红棕色，即为AuNPs，冷却至室温后避光保存以备使用；
(3) AgNCs-Sem-AuNPs的制备
在搅拌下将200 300 μL氨基脲(Sem, 10 mM)溶液加入到上述合成的300 500 μL ~ ~
AuNCs溶液(1 mg/mL)中，搅拌12 h以获得AgNCs-Sem，用去离子水洗涤两次后，收集沉淀并分散在去离子水中，然后，将200 400 μL制备的AuNPs溶液(1 mg/mL)加入AgNCs-Sem溶液~
中，搅拌12 h，然后离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，获得AgNCs-Sem-AuNPs。
V，扫描速率为0.1 V/s；
（2）在10 mL、 pH 6.0 ~ 8.5的含浓度为50 mmol/L ~ 100 mmol/L K2S2O8的PBS缓冲溶液中通过电化学发光方法，检测对不同浓度的PCT标准溶液产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
（3）将待测PCT样品溶液代替PCT标准溶液进行测定。
5具有较高且稳定的发光信号，将Ru@MOF-5作为传感器基底材料，在共反应剂K2S2O8存在时可产生阴极(-1.5 V)和阳极(1.5 V)双电位信号，有效提高传感器的灵敏度；
（2）本发明采用的AgNCs-Sem-AuNPs具有高效的阴极信号发射，与二抗标记后可增强Ru@MOF-5的阴极信号，降低阳极信号，以阴极信号/阳极信号的比值绘制工作曲线，能高效灵敏的检测PCT含量，构建的超灵敏比率型电致化学发光免疫传感器，可大大提高检测的准确度和特异性；
（3）本发明构建的超灵敏比率型电致化学发光免疫传感器，应用于PCT的检测，具有操作简单，检测快速，信号线性范围宽（0.00005 ng/mL 100 ng/mL）和检出限低（0.02 pg/~
mL）的优点。
具体实施方式
将1 mmol Zn(NO3)2·6H2O与2 mmol对苯二甲酸(H2BDC)溶解于200 mmol 的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌使其溶解，后将7 mmol三乙胺(TEA)加入混合溶液中，连续搅拌3 h，离心洗涤数次，将获得的白色沉淀放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到MOF-5；
(2) Ru@MOF-5的制备
称取150 mg的MOF-5溶解于DMF中，加入20 mg三(2,2'-联吡啶)二氯化钌，70 ˚C油浴加热12 h，后通过离心洗涤收集沉淀，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到Ru@MOF-5。
将2 mmol Zn(NO3)2·6H2O与1 mmol对苯二甲酸(H2BDC)溶解于260 mmol 的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌使其溶解，后将7.91 mmol三乙胺(TEA)加入混合溶液中，连续搅拌2 h，离心洗涤数次，将获得的白色沉淀放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到MOF-5；
(2) Ru@MOF-5的制备
称取100 mg的MOF-5溶解于DMF中，加入30 mg三(2,2'-联吡啶)二氯化钌，70 ˚C油浴加热12 h，后通过离心洗涤收集沉淀，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到Ru@MOF-5。
将3 mmol Zn(NO3)2·6H2O与3 mmol对苯二甲酸(H2BDC)溶解于300 mmol 的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌使其溶解，后将9 mmol三乙胺(TEA)加入混合溶液中，连续搅拌4 h，离心洗涤数次，将获得的白色沉淀放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到MOF-5；
(2) Ru@MOF-5的制备
称取200 mg的MOF-5溶解于DMF中，加入40 mg三(2,2'-联吡啶)二氯化钌，70 ˚C油浴加热12 h，后通过离心洗涤收集沉淀，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到Ru@MOF-5。
将0.15 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用20 mL乙二醇(EG)溶解，然后将4 mL的AgNO3(1 mM，溶解于EG中)，和2 mL的FeCl3(0.6 mM，溶解于EG中)依次加入PVP溶液中，然后将混合物倒入50 mL的高压釜中，140 ˚C 反应1 h，离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，得到AgNCs；
(2) AuNPs的制备
首先将100 mL质量分数为0.02%的氯金酸(HAuCl4) 130 ˚C油浴加热至沸腾，然后将2 mL质量分数为1.5%的柠檬酸钠在搅拌条件下逐滴加入到上述溶液中，溶液颜色由淡黄色变为红棕色，即为AuNPs，冷却至室温后避光保存以备使用；
(3) AgNCs-Sem-AuNPs的制备
在搅拌下将250 μL氨基脲(Sem, 10 mM)溶液加入到上述合成的300 μL AuNCs溶液(1 mg/mL)中，搅拌12 h以获得AgNCs-Sem，用去离子水洗涤两次后，收集沉淀并分散在去离子水中，然后，将250 μL制备的AuNPs溶液(1 mg/mL)加入AgNCs-Sem溶液中，搅拌12 h，然后离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，获得AgNCs-Sem-AuNPs。
将0.16 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用22 mL乙二醇(EG)溶解，然后将3 mL的AgNO3(1 mM，溶解于EG中)，和2.5 mL的FeCl3(0.6 mM，溶解于EG中)依次加入PVP溶液中，然后将混合物倒入50 mL的高压釜中，140 ˚C 反应1 h，离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，得到AgNCs；
(2) AuNPs的制备
首先将100 mL质量分数为0.01%的氯金酸(HAuCl4) 130 ˚C油浴加热至沸腾，然后将
2.5 mL质量分数为1%的柠檬酸钠在搅拌条件下逐滴加入到上述溶液中，溶液颜色由淡黄色变为红棕色，即为AuNPs，冷却至室温后避光保存以备使用；
(3) AgNCs-Sem-AuNPs的制备
在搅拌下将200 μL氨基脲(Sem, 10 mM)溶液加入到上述合成的500 μL AuNCs溶液(1 mg/mL)中，搅拌12 h以获得AgNCs-Sem，用去离子水洗涤两次后，收集沉淀并分散在去离子水中，然后，将200 μL制备的AuNPs溶液(1 mg/mL)加入AgNCs-Sem溶液中，搅拌12 h，然后离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，获得AgNCs-Sem-AuNPs。
将0.18 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用25 mL乙二醇(EG)溶解，然后将5 mL的AgNO3(1 mM，溶解于EG中)，和5 mL的FeCl3(0.6 mM，溶解于EG中)依次加入PVP溶液中，然后将混合物倒入50 mL的高压釜中，140 ˚C 反应1 h，离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，得到AgNCs；
(2) AuNPs的制备
首先将100 mL质量分数为0.03%的氯金酸(HAuCl4) 130 ˚C油浴加热至沸腾，然后将3 mL质量分数为3%的柠檬酸钠在搅拌条件下逐滴加入到上述溶液中，溶液颜色由淡黄色变为红棕色，即为AuNPs，冷却至室温后避光保存以备使用；
(3) AgNCs-Sem-AuNPs的制备
在搅拌下将300 μL氨基脲(Sem, 10 mM)溶液加入到上述合成的400 μL AuNCs溶液(1 mg/mL)中，搅拌12 h以获得AgNCs-Sem，用去离子水洗涤两次后，收集沉淀并分散在去离子水中，然后，将400 μL制备的AuNPs溶液(1 mg/mL)加入AgNCs-Sem溶液中，搅拌12 h，然后离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，获得AgNCs-Sem-AuNPs。
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（2）将8 μL，1 mg/mL Ru@MOF-5复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将8 μL，1.5 μg/mL PCT抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1.5% BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA，室温下干燥；
（5）将8 μL，0.00005 100 ng/mL一系列不同浓度的PCT抗原标准溶液滴加于电极上，~
室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗原，室温下干燥；
（6）将8 μL，2 mg/mL AgNCs-Sem-AuNPs复合物溶液滴加于电极上，室温下干燥后，用PBS清洗，除去多余二抗，室温下干燥。
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（2）将8 μL，2 mg/mL Ru@MOF-5复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将8 μL，1 μg/mL PCT抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1% BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA，室温下干燥；
（5）将8 μL，0.00005 100 ng/mL一系列不同浓度的PCT抗原标准溶液滴加于电极上，~
室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗原，室温下干燥；
（6）将8 μL，5 mg/mL AgNCs-Sem-AuNPs复合物溶液滴加于电极上，室温下干燥后，用PBS清洗，除去多余二抗，室温下干燥。
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（2）将8 μL，5 mg/mL Ru@MOF-5复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将8 μL，2 μg/mL PCT抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为2% BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA，室温下干燥；
（5）将8 μL，0.00005 100 ng/mL一系列不同浓度的PCT抗原标准溶液滴加于电极上，~
室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗原，室温下干燥；
（6）将8 μL，6 mg/mL AgNCs-Sem-AuNPs复合物溶液滴加于电极上，室温下干燥后，用PBS清洗，除去多余二抗，室温下干燥。
V，扫描速率为0.1 V/s；
（2）在10 mL、 pH 6.0 8.5的含浓度为50 mmol/L 100 mmol/L K2S2O8的PBS缓冲溶~ ~
液中通过电化学发光方法，检测对不同浓度的PCT标准溶液产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
（3）将待测PCT样品溶液代替PCT标准溶液进行测定；
（4）PCT检测的线性范围是0.00005 ng/mL 100 ng/mL，检测限是0.02 pg/mL。
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