一种乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析
方法
技术领域
[0001] 本
发明涉及一
农药检测领域，具体涉及乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析方法。
背景技术
[0002] 乙酰甲胺磷是一种内吸性低毒
杀虫剂，具有胃毒和触杀作用，可杀卵，并有一定熏蒸作用，其杀虫谱广，可防治100多种
害虫，药效高，持效期适中，适用于粮食、叶菜、果树等作物害虫的防治。乙酰甲胺磷为甲胺磷的乙酰化产物，其毒性比甲胺磷低30多倍，在
植物组织中的
半衰期为5～10天。
[0003] 甲胺磷是是一种杀虫谱广、杀虫效果好、使用成本低、抗性发展缓慢的高毒有机磷杀虫剂。由于其高毒性，易造成农产品污染，危害人畜安全，已被禁用。目前，甲胺磷已被乙酰甲胺磷取代，其中30％、40％的乙酰甲胺磷
乳油被用于田间叶菜。由于乙酰甲胺磷为甲胺磷的乙酰化产物，因此其制剂中有少量甲胺磷存在，同时乙酰甲胺磷在降解过程中能代谢出甲胺磷，而甲胺磷是不允许在叶菜上使用和检出的高毒农药。
[0004] 在近几年叶菜农药残留检测监管中发现，叶菜中甲胺磷残留超标仍时有发生，并出现乙酰甲胺磷和甲胺磷同时超标的情况，而最终执法只能按乙酰甲胺磷超标进行处理，很难鉴定施用过乙酰甲胺磷的叶菜是否存在违规使用甲胺磷的现象。就目前国内外研究情况来看，在乙酰甲胺磷和甲胺磷同时检出或超标的情况下，无法判断是否全部由施用乙酰甲胺磷造成，对农产品
质量安全监管和执法带来极大困难。
发明内容
[0005] 本发明提出
一种乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析方法，分析乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的降解规律及主要影响因素，从而为合理使用乙酰甲胺磷，避免对后茬敏感作物造成残留
药害和确定叶菜种植时间提供科学依据。
[0006] 本发明的技术方案是这样实现的，一种乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析方法，包括如下步骤：
[0007] (1)试验布局：
[0008] 设置露天和大棚两个区域，每个区域至少设有一个空白对照区和三个试验区，各小区交界处设有隔离区，分别种植叶菜；
[0009] (2)乙酰甲胺磷施药处理：
[0010] 选择浓度为99％的乙酰甲胺磷溶液稀释倍数C1、C2、C3分别为稀释500、1000、1500倍的三个浓度，分别对不同试验区进行喷雾施药，C1、C2、C3施药次数均为2次，施药间隔时间均为7天，施药在上午10点完成，且分别于施药后1、3、5、7、10、14、17、21、30、45d采集取样；空白对照区不施加药物，且仅在0、7、21d取样；首次
采样时间均为施药后2-3小时，第二次采样时间为次日上午10点，其余采样时间选在上午，每区取样25.0g；
[0011] (2)提取：
[0012] 分别准确称取25.0g试验区样品和空白对照区样品放入匀浆机中，各加入50.0mL提取液，在匀浆机中高速匀浆后用
滤纸过滤，收集滤液并添加5～7g
氯化钠，剧烈震荡后在室温下静置，使提取液和
水相分层，吸取10.00mL提取液，置于离心管中，管内缓缓通入氮气或空气流，
蒸发近干，用
净化液定容至5.0mL，混匀，分别得到样品溶液和基质标液，再分别移入两个2mL自动进样器样品瓶中，供色谱测定；
[0013] (3)空白标液配置：
[0014] 将5-7g氯化钠充分溶于50.0mL提取液中，吸取10.00mL置于离心管中，管内缓缓通入氮气或空气流，蒸发近干，用净化液定容至5.0mL，混匀，得到空白标液；
[0015] (4)测定：
[0016] 精确配制质量浓度为0.05，0.25，0.1，0.5，1.0mg/L的乙酰甲胺磷和甲胺磷标准溶液，分别进样1μL，获得气相色谱的响应值，以浓度-峰面积绘制乙酰甲胺磷标准溶液曲线和甲胺磷标准溶液曲线；
[0017] (5)添加回收率和相对标准偏差：将乙酰甲胺磷和甲胺磷设定添加0.08，0.12和0.16mg/kg三个浓度的混合标准溶液，进行添加回收试验，分别得到乙酰甲胺磷和甲胺磷的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)；
[0018] (6)采用气相色谱法检测出乙酰甲胺磷和甲胺磷的最小检测量；
[0019] (7)根据乙酰甲胺磷和甲胺磷在气相色谱中的峰高与浓度的相应关系，以叶菜中乙酰甲胺磷和甲胺磷按最低添加浓度添加样品在仪器上相应值大于仪器3倍
信号噪声，得到乙酰甲胺磷和甲胺磷在叶菜中的最低检测浓度。
[0020] 本发明所述的乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析方法，结合乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷的降解特性研究，以及方法过程及参数的调整，实现对乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析，并分析在不同浓度小的降解规律及主要影响因素，从而为合理使用乙酰甲胺磷，避免对后茬敏感作物造成残留药害和确定叶菜种植时间提供科学依据。
[0021] 优选地，所述叶菜为大白菜、甘蓝、菠菜、芹菜、油菜、香菜、生菜、荠菜、苋菜、茼蒿、乌塌菜、茴香，韭菜、蒜苗菊苣芽、荞麦芽、萝卜芽、佛手瓜嫩梢。
[0022] 优选地，所述空白对照区和试验区的面积相等且不小于15m2，以保证测死结果的准确性。
[0023] 优选地，所述提取液为乙腈匀浆。
[0025] 优选地，方法中还设有分析测定质量控制与保证措施；每批分析样品需要1个空白样品，以确认
试剂及容器的清洁程度；每批分析样品需带2～3个平行样品，以确认测试结果的再现性。
[0026] 优选地，步骤(4)中所述测定过程中，进样顺序为空白标液→基质标液→3个平行样品溶液→基质标液→空白标液。
[0027] 优选地，所述气相色谱法的色谱条件为：
[0028] 仪器：Agilent GC 7890A气相色谱仪(Agilent，美国)，配有火焰光度检测器(FPD磷滤光片)，自动进样器，分流/不分流进样口；
[0029] 色谱柱：DB-17(30m×0.32mm×0.25μm)；
[0030] 程序升温：起始柱温80℃，维持2min后以8℃·min-1速率升至250℃，维持6min至样品中的组分全部流出；
[0031]
温度：检测器温度250℃；进样口温度220℃；
[0032] 进样方式：不分流进样；
[0033] 进样量：1μL；
[0034] 载气：99.999％高纯氮气，流量3.0mL·min-1；空气：100mL·min-1；氢气：75mL·-1min 。
[0035] 本发明的有益效果：
[0036] (1)本发明所述的乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析方法，结合乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷的降解特性研究，以及方法过程及参数的调整，实现对乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析，并分析在不同浓度小的降解规律及主要影响因素，从而为合理使用乙酰甲胺磷，避免对后茬敏感作物造成残留药害和确定叶菜种植时间提供科学依据；
[0037] (2)通过改进前处理方法和优化气相色谱仪器条件，采用空白基质匹配标准溶液和前后标准溶液平均值校准法，改善色谱峰形、消除基质效应，从而提高了检测灵敏度和准确度；通过对叶菜上乙酰甲胺磷农药及其
代谢物甲胺磷的降解规律的研究，了解了乙酰甲胺磷及其代谢物甲胺磷的在降解过程中的变化规律，同时获得了农药安全间隔期，为指导农业生产和农产品质量安全监管执法提供了技术
支撑。
附图说明
[0038] 图1是乙酰甲胺磷的标准曲线图；
[0039] 图2是代谢物甲胺磷的标准曲线图；
[0040] 图3是乙酰甲胺磷及其代谢物甲胺磷气相色谱图谱。
具体实施方式
[0041] 下面将结合本发明的
实施例的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0042] 本发明公开了一种乙酰甲胺磷及其代谢物甲胺磷在叶菜中的检测方法，该方法所采用的主要仪器和化学试剂有：
[0043] 试剂：乙腈(色谱纯)、丙酮(分析纯，重蒸)、氯化钠(分析纯)，上述3种标准溶液，纯度均大于96％，
溶剂均为丙酮。
[0044] 仪器：Agilent GC 7890A气相色谱仪(Agilent，美国)，配有火焰光度检测器(FPD磷滤光片)，自动进样器，分流/不分流进样口。
[0045] 实施例1
[0046] 一种乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析方法，包括如下步骤：
[0047] (1)试验布局：
[0048] 设置露天和大棚两个区域，每个区域设置一个空白对照区和三个试验区，空白对照区和三个试验区的面积均为15m2，各小区交界处设有隔离区，分别在上述区域种植大白菜；
[0049] (2)乙酰甲胺磷施药处理：
[0050] 选择浓度为99％的乙酰甲胺磷溶液稀释倍数C1、C2、C3分别为稀释500、1000、1500倍的三个浓度，分别对不同试验区进行喷雾施药，C1、C2、C3施药次数均为2次，施药间隔时间均为7天，施药在上午10点完成，且分别于施药后1、3、5、7、10、14、17、21、30、45d采集取样；空白对照区不施加药物，且仅在0、7、21d取样；首次采样时间均为施药后2小时，第二次采样时间为次日上午10点，其余采样时间选在上午，每区取样25.0g；
[0051] (2)提取：
[0052] 分别准确称取25.0g试验区样品和空白对照区样品放入匀浆机中，各加入50.0mL乙腈溶液，在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤，收集滤液并添加5g氯化钠，剧烈震荡后在室温下静置30min，使提取液和水相分层，再吸取10.00mL提取液，置于10.0ml的离心管中，管内缓缓通入氮气，蒸发近干，用丙酮定容至5.0mL，混匀，分别得到样品溶液和基质标液，再分别移入两个2mL自动进样器样品瓶中，供色谱测定；
[0053] (3)空白标液配置：
[0054] 将5g氯化钠充分溶于50.0mL提取液中，吸取10.00mL置于离心管中，管内缓缓通入氮气或空气流，蒸发近干，用净化液定容至5.0mL，混匀，得到空白标液；
[0055] (4)测定：
[0056] 精确配制质量浓度为0.05，0.25，0.1，0.5，1.0mg/L的乙酰甲胺磷和甲胺磷标准溶液，利用高效液相色谱仪对上述标准溶液进行检测，并且根据空白标液→基质标液→3个平行样品溶液→基质标液→空白标液的进样顺序分别进样1μL，获得气相色谱的响应值，分别别以上述五个不同浓度的乙酰甲胺磷面积与甲胺磷峰面积的比值作为标准曲线方程的纵坐标y，以上述标准工作液中的乙酰甲胺磷浓度与内标工作液中的乙酰甲胺磷浓度的比值为作为标准曲线方程的横坐标x，将所得到的五组x和y数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b，如图1、图2所示，乙酰甲胺磷的标准曲线方程为y＝10819.27R2+41.68(R2＝0.9984)，代谢产物甲胺磷的标准曲线方程为y＝5511.83R2-29.05(R2＝0.9993)；
[0057] (5)添加回收率和相对标准偏差：将乙酰甲胺磷和甲胺磷设定添加0.08，0.12和0.16mg/kg三个浓度的混合标准溶液，进行添加回收试验，分别得到乙酰甲胺磷和甲胺磷的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)，其中乙酰甲胺磷及其代谢物甲胺磷的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)表如表1所示，乙酰甲胺磷在白菜中添加浓度为0.08，0.12，0.16mg/kg时，平均回收率分别为93％，97％和101％，相对标准偏差分别为7.4％，5.6％和4.7％；甲胺磷在白菜中添加回收浓度分别为0.08，0.12，0.16mg/kg是，平均回收率分别为91％，93％和
98％，相对标准偏差分别为6.4％，6.6％和8.9％；
[0058] 表1
[0059] 乙酰甲胺磷及其代谢物甲胺磷的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)表。
[0061]
[0062]
[0063] (6)采用气相色谱法检测出乙酰甲胺磷和甲胺磷的最小检测量；
[0064] (7)根据乙酰甲胺磷和甲胺磷在气相色谱中的峰高与浓度的相应关系，以叶菜中乙酰甲胺磷和甲胺磷按最低添加浓度添加样品在仪器上相应值大于仪器3倍信号噪声，得到乙酰甲胺磷和甲胺磷在叶菜中的最低检测浓度。
[0065] 本实施例中气相色谱仪的色谱条件为：
[0066] 仪器：Agilent GC 7890A气相色谱仪(Agilent，美国)，配有火焰光度检测器(FPD磷滤光片)，自动进样器，分流/不分流进样口；
[0067] 色谱柱为DB-17(30m×0.32mm×0.25μm)；
[0068] 程序升温：起始柱温80℃，维持2min后以8℃·min-1速率升至250℃，维持6min至样品中的组分全部流出；
[0069] 检测器温度250℃；进样口温度220℃；
[0070] 进样方式：不分流进样；
[0071] 进样量：1μL；
[0072] 载气：99.999％高纯氮气，流量3.0mL·min-1；空气：100mL·min-1；氢气：75mL·min-1。
[0073] 气相色谱对乙酰甲胺磷、甲胺磷的最低检测量为3×10-10g。
[0074] 如图3所示，根据乙酰甲胺磷、甲胺磷在气相色谱仪上的相应情况，以叶菜中乙酰甲胺磷，甲胺磷最低添加浓度0.08mg/kg的样品在仪器上响应值均大于气相色谱的3倍噪音，计算的乙酰甲胺磷和甲胺磷的最低检测浓度均为0.08mg/kg。
[0075] 因此，该方法完全满足农药残留分析中对准确度，精
密度和灵敏度的要求。
[0076] 实施例2
[0077] 一种乙酰甲胺磷及代谢产物甲胺磷在叶菜中的动态降解分析方法，包括如下步骤：
[0078] (1)试验布局：
[0079] 设置露天和大棚两个区域，每个区域设置一个空白对照区和三个试验区，空白对照区和三个试验区的面积均为20m2，各小区交界处设有隔离区，分别在上述区域种植荠菜；
[0080] (2)乙酰甲胺磷施药处理：
[0081] 选择浓度为99％的乙酰甲胺磷溶液稀释倍数C1、C2、C3分别为稀释500、1000、1500倍的三个浓度，分别对不同试验区进行喷雾施药，C1、C2、C3施药次数均为2次，施药间隔时间均为7天，施药在上午10点完成，且分别于施药后1、3、5、7、10、14、17、21、30、45d采集取样；空白对照区不施加药物，且仅在0、7、21d取样；首次采样时间均为施药后3小时，第二次采样时间为次日上午10点，其余采样时间选在上午，每区取样25.0g；
[0082] (2)提取：
[0083] 分别准确称取25.0g试验区样品和空白对照区样品放入匀浆机中，各加入50.0mL乙腈溶液，在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤，收集滤液并添加8g氯化钠，剧烈震荡后在室温下静置30min，使提取液和水相分层，再吸取10.00mL提取液，置于10.0ml的离心管中，管内缓缓通入氮气，蒸发近干，用丙酮定容至5.0mL，混匀，分别得到样品溶液和基质标液，再分别移入两个2mL自动进样器样品瓶中，供色谱测定；
[0084] (3)空白标液配置：
[0085] 将8g氯化钠充分溶于50.0mL提取液中，吸取10.00mL置于离心管中，管内缓缓通入氮气或空气流，蒸发近干，用净化液定容至5.0mL，混匀，得到空白标液；
[0086] (4)测定：
[0087] 精确配制质量浓度为0.05，0.25，0.1，0.5，1.0mg/L的乙酰甲胺磷和甲胺磷标准溶液，利用高效液相色谱仪对上述标准溶液进行检测，并且根据空白标液→基质标液→3个平行样品溶液→基质标液→空白标液的进样顺序分别进样1μL，获得气相色谱的响应值，分别别以上述五个不同浓度的乙酰甲胺磷面积与甲胺磷峰面积的比值作为标准曲线方程的纵坐标y，以上述标准工作液中的乙酰甲胺磷浓度与内标工作液中的乙酰甲胺磷浓度的比值为作为标准曲线方程的横坐标x，将所得到的五组x和y数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b，其中，乙酰甲胺磷的标准曲线方程为y＝10819.27R2+41.68(R2＝0.9984)，代谢产物甲胺磷的标准曲线方程为y＝5511.83R2-29.05(R2＝0.9993)；
[0088] (5)添加回收率和相对标准偏差：将乙酰甲胺磷和甲胺磷设定添加0.08，0.12和0.16mg/kg三个浓度的混合标准溶液，进行添加回收试验，分别得到乙酰甲胺磷和甲胺磷的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)；
[0089] (6)采用气相色谱法检测出乙酰甲胺磷和甲胺磷的最小检测量；
[0090] (7)根据乙酰甲胺磷和甲胺磷在气相色谱中的峰高与浓度的相应关系，以叶菜中乙酰甲胺磷和甲胺磷按最低添加浓度添加样品在仪器上相应值大于仪器3倍信号噪声，得到乙酰甲胺磷和甲胺磷在叶菜中的最低检测浓度。
[0091] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡是在本发明的精神和原则之内，所作的任何
修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
