用于局部应用的新的协同药物组合物
阅读：764发布：2024-02-06
专利汇可以提供用于局部应用的新的协同药物组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且公开了用于制备用于 预防 和 治疗 伤口、烧伤、皮移植片、压 力 性溃疡和糖尿病性足溃疡的局部制剂的新的协同药物组合物。所述协同组合物包括与一种或多种 杀菌剂 和 抑菌剂 组合的促细胞分裂蛋白。本 发明 中的促细胞分裂蛋白是重组人表皮生长因子(Bharat Biotech International Limited的rh-EGF)和/或任何其他生长因子，如rh-PDGF-BB，并且杀菌剂和抑菌剂是广谱抗生素磺胺嘧啶 银 (SSD)和 葡萄糖 酸氯己定(CHG)。除了协同组合物以外，局部制剂还包括基底成分、载体、 防腐剂 、乳化剂、润肤剂和柔肤剂以及一种或多种其他组分。新组合物产生协同效应，如更广的抗菌 覆盖 、通过rh-EGF逆转SSD的银效应、对抗烧伤中银抗性 微 生物 的效力、以及更好且更快的 伤口愈合 。新组合物可用于制备用于乳膏、凝胶或液体形式的局部制剂。新制剂具有更长的贮存期限并且在2-8℃的贮存 温度 下稳定超过两年。，下面是用于局部应用的新的协同药物组合物专利的具体信息内容。
1.一种用于制备局部制剂的药物组合物，所述局部制剂用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡，所述药物组合物包括促细胞分裂蛋白、杀菌剂和抑菌剂，所述局部制剂还包括一种或多种其他成分，其中所述促细胞分裂蛋白是重组人表皮生长因子(rh-EGF)，并且所述促细胞分裂蛋白的浓度为5μg/g wt/wt或10μg/gwt/wt；其中所述杀菌剂是广谱抗生素磺胺嘧啶银(SSD)，并且其中所述抑菌剂是广谱抗生素葡萄糖酸氯己定(CHG)，其中SSD的浓度为1％，并且CHG的浓度为0.02％。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物在2-8℃的贮存温度下稳定超过两年。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述促细胞分裂蛋白是重组人表皮生长因子(rh-EGF)。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述制剂的所述一种或多种其他成分选自PEG-30二聚羟基硬脂酸酯、异十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化钛、聚羟基硬脂酸、硬脂酸铝、矾土、硫酸镁、硬脂酸、山梨糖醇、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、氢氧化钠、EDTA二钠、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、二棕榈酰羟脯氨酸、Bois IITM、鲸蜡醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、轻质液体石蜡、pemulen TR-1、carbopol ultrez、甘露糖醇和净化水。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述局部制剂是乳膏或凝胶或液体的形式。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物有效对抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、银抗性细菌、厌氧菌、酵母和真菌，提供更好且更快的伤口愈合。
用于局部应用的新的协同药物组合物
发明领域
[0001] 本发明涉及用于局部应用的新的协同药物组合物。更具体地，本发明涉及用于制备用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病的局部制剂的新的协同药物组合物。本发明的新制剂包括一种或多种协同活性成分以及一种或多种非活性成分。协同活性成分包括与一种或多种杀菌剂和抑菌剂协同组合的促细胞分裂蛋白(生长因子)。更具体地，协同活性成分包括重组人表皮生长因子(rh-EGF)(Bharat Biotech International Limited的REGEN-DTM)和/或血小板衍生的生长因子(rh-PDGF-BB)、磺胺嘧啶银(SSD)和葡萄糖酸氯己定(CHG)，而一种或多种非活性成分可以包括载体、防腐剂、乳化剂、润肤剂和柔肤剂以及一种或多种其他组分。本发明的新组合物可用于制备用于以乳膏或凝胶形式或液体形式应用于伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病的局部制剂。
[0002] 发明背景
[0003] 烧伤是皮肤所经历的任何由热、冷、电、化学品、摩擦或辐射引起的极端情况。烧伤伤害一般伴随组织液和电解质失衡、烧伤区域的减速愈合、代谢紊乱、肌肉分解代谢和各种其他的重要器官并发症，并且还可以具有继发性并发症，如细菌和/微生物感染。这些并发症的每一种需要不同的药剂/药物来提供拯救生命时的综合烧伤管理。
[0004] 烧伤相关的伤害和死亡是东南亚的主要问题，特别是在发展中国家，如印度。根据WHO报道，东南亚区域占全球负担的近10％，仅印度每年有35,000例烧伤相关的死亡。即使在发达国际，例如美国，每年估计210万美国人寻求烧伤的医疗处理。烧伤患者死亡率的主因中的一种是严重的全身感染。这些感染的主要进入途径是未处理的烧伤表面暴露于各种细菌和病原体。各种因素，例如皮肤屏障的破坏、大的皮肤细菌负荷、正常菌群转成条件病原体的可能性以及免疫系统的严重抑制，促成烧伤受害者的败血症，其通常是威胁生命的[1]。烧伤表面和伤口缝合的早期上皮再形成的适当伤口管理是烧伤患者的治疗和预后的重要步骤。
[0005] 感染控制是在预防继发性感染以及维持适当的烧伤愈合过程中的非常重要的过程。虽然在烧伤的细菌平衡的建立中使用局部抗微生物剂是必要的，但是它伴随延迟的烧伤愈合，其中皮肤增殖和胶原沉积的过程起主要作用[2]。一些研究显示，烧伤愈合过程被延迟，这对于二级和三级烧伤是显著的，因为利用其受体的生长促进因子如重组人表皮生长因子(rh-EGF)或血小板衍生的生长因子(rh-PDGF-BB)的产生被延迟或减少。
[0006] 重组人表皮生长因子rh-EGF属于通过结合靶细胞上的受体激酶来调节细胞增殖、迁移和分化的生长因子家族[3]。对于许多细胞类型，包括平滑肌细胞，已经显示rh-EGF用作有效的促细胞分裂原，还用作分化因子[4]。动物中的实验研究已经说明，rh-EGF的局部应用加速了部分厚度伤口和二级烧伤的表皮再生速率[5]。rh-EGF是分子量为6.2kDa的53个氨基酸的蛋白，并且通过重组基因技术获得。构建了编码合成的rh-EGF多核苷酸序列的新载体，所述多核苷酸序列在大肠杆菌(E.coli)中过表达并被纯化以获得＞98％纯的蛋白[6]。
[0007] 在伤口愈合过程中，通过EGF受体由rh-EGF肽提供了细胞增殖信号。EGF受体具有酪氨酸激酶跨膜结构域以及胞质结构域和胞外结构域，其参与rh-EGF结合。这导致EGF受体二聚化、该受体的自体磷酸化和其他蛋白的酪氨酸磷酸化。这激活了促细胞分裂原激活的蛋白激酶(MAP激酶)途径，最终引起转录因子(例如C-Fs)磷酸化以产生促进增殖的AP-1和ELK-1。JAK激酶响应于rh-EGF的对STAT-1和STAT-3转录因子的激活促成增殖信号传导。而且，由rh-EGF活性蛋白激酶C诱导的磷脂酰肌醇信号传导和钙释放是EGF信号传导的另一组成部分。上述过程吸引细胞进入伤口并刺激其增殖，提高肉芽组织的形成速率并增加胶原生成[7，8]。
[0008] 尽管生长因子(如rh-EGF)帮助愈合烧伤，但重要的是预防烧伤管理期间引起的感染。重组人表皮生长因子rh-EGF(REGEN-D，BharatBiotech International Limited)被克隆并在大肠杆菌中过表达，通过显著减少愈合持续时间而显示了增强的烧伤愈合。但是烧伤相关风险是微生物感染入侵。这是抗微生物剂在烧伤管理中发挥重要作用的地方。
[0010] 杆菌肽是有效对抗革兰氏阳性球菌和杆菌的多肽抗生素。杆菌肽还可增强伤口的上皮再形成，尽管它对角质形成细胞增殖没有影响。抗性菌株的发生率不可能增加，因为杆菌肽对细菌质膜的性质起作用，而不对分子合成起作用[9]。
[0011] 硫酸多粘菌素B是有效对抗革兰氏阴性生物的简单的碱性肽抗生素。硫酸多粘菌素B引起角质形成细胞增殖的更大减少[10]。
[0012] 新霉素是广谱抗生素，并且对于革兰氏阴性生物特别有效。然而，使用新霉素更频繁地出现副作用，如过敏反应、特别是皮疹[11]。
[0013] 聚维酮碘是有效对抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的杀菌剂。已经显示临床浓度的聚维酮碘体外对于人成纤维细胞和角质形成细胞是毒性的。还报道了聚维酮碘被伤口渗出液失活。该局部药剂可能硬化而非软化伤口焦痂，因此增加了伤口清创的难度和不适[1]。
[0014] 醋酸磺胺米隆是甲基化的局部磺胺化合物。该药物具有宽范围的抗细菌活性，对抗大部分革兰氏阴性和革兰氏阳性病原体。然而，磺胺米隆的使用可能抑制上皮再形成。磺胺米隆抑制多形核白细胞(PMN)和淋巴细胞活性[16]。
[0015] 硝基糠腙化合物是有效对抗金黄色葡萄球菌(S.aureus)、肠杆菌(Enterobactor)和大肠杆菌的广谱抗细菌剂，但是对铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)效力较差，并且没有显著的杀真菌活性。已经显示硝基糠腙对在培养物中的角质形成细胞的生长和迁移具有有害作用[17]。美国的烧伤中心不常使用硝基糠腙。
[0016] 艮他霉素对于革兰氏阴性微生物非常有效。可能产生对艮他霉素的抗性，并且该抗性必然限制该药物治疗的使用。已经显示艮他霉素抑制PMN的活性。已经报道了艮他霉素的皮肤过敏性[20]。
[0017] 磺胺嘧啶银(SSD)是作为1％水混溶乳膏制备的硝酸银和磺胺嘧啶钠的局部磺胺化合物。磺胺嘧啶银有效对抗大范围的菌系，特别是革兰氏阴性细菌(如大肠杆菌、肠杆菌、克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌)和革兰氏阳性细菌(如金黄色葡萄球菌和白色念珠菌(Candida albicans))。
[0018] 在可用于烧伤的各种局部抗微生物剂中，以上指出的那些中的一些，磺胺衍生物近年来在革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌感染所感染的不同程度烧伤的治疗中享有当之无愧的声誉，同时有效对抗酵母。在磺胺类药中，在大多数烧伤患者中被选择用于预防和治疗的药物是磺胺嘧啶银(SSD)。SSD是有效的广谱抗微生物剂，通常加入用于烧伤的局部乳膏。事实上，最近五十年以来，SSD已经常规用于治疗微生物感染的不同程度烧伤。
[0019] 过去的研究显示，SSD抑制对其他抗微生物剂抗性的细菌，并且该化合物优于许多其他抗微生物剂。它作用于微生物的细胞膜和细胞壁以产生其杀细菌作用。银从制剂中以选择性地对细菌有毒性的浓度缓慢释放。银还损伤细菌细胞的DNA。磺胺嘧啶，如其他磺胺类药，通过与对氨基苯甲酸(PABA)竞争而抑制细菌的二氢叶酸的合成。它不对人类细胞起作用。
[0020] 另一种抗微生物剂，即葡萄糖酸氯己定(CHG)是强大的相对无毒的杀菌剂，其在目前的临床实践中被广泛认可[18]。CHG是重要的杀菌剂、消毒剂、抗细菌牙洗剂和防腐剂。它具有宽的抗微生物谱，并且有效对抗革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌、病毒和真菌。CHG结合细菌细胞壁和胞质组分，导致改变的渗透平衡和胞质组分沉淀。在低浓度下，氯己定是抑菌剂；在高浓度下，它是杀菌剂。葡萄糖酸氯己定是结合角质层的二双胍(bisbiguanide)，提供了持续的杀细菌和杀真菌活性。它在有机材料(例如全血)存在下不失去其效力。CHG被吸附至微生物的细胞壁，引起吸收材料从多种细菌的泄漏，并且影响蛋白结构，抑制例如膜结合的ATP酶[19]，改变蛋白构型并促进细胞对多粘菌素的摄取。
[0021] 尽管SSD是最近五十年以来用于烧伤的标准治疗，但是一些研究显示，该化合物延迟了伤口愈合过程，这对于二级和三级烧伤是显著的，因为利用其受体的生长促进因子的产生被延迟或减少。而且，从烧伤处吸收银导致银毒性，这导致皮肤再生的损害和皮肤组织机械强度降低。针对人皮肤成纤维细胞的几项体外研究显示了随递增浓度的SSD和醋酸磺胺米隆而累进的细胞毒性。在相同研究中，人皮肤成纤维细胞预先暴露于EGF、碱性成纤维细胞生长因子或血小板衍生的生长因子导致了人类皮肤成纤维细胞对抗SSD效应的细胞保护[29]。
[0022] 已经报道了细菌对银耐受的案例。Cason等人早在1966年报道了烧伤中革兰氏阴性杆菌中的这种案例[21]。在20世纪70年代末，出现耐受SSD的革兰氏阴性分离株(阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、斯氏普罗威登斯菌(Providencia stuartii)和铜绿假单胞菌)对烧伤感染或定殖的爆发的几个报道。显然，暴露于银可以选择抗性微生物，并且这可以在其中广泛使用银时在固有银抗性细菌的优势中发挥重要作用。
[0023] Li等人报道了通过在体外反复暴露于递增浓度而使细菌发展对高浓度银(＞1024ppm)的耐受性[27]。
[0024] 与使用SSD治疗烧伤相关的缺点导致Bharat Biotech InternationalLimited(BBIL)开发了包含SSD和rh-EGF的制剂。该组合有助于rh-EGF的延长时期的释放和对于最佳伤口愈合效果必需的银递送的限制。该SSD和rh-EGF组合的最重要功能是rh-EGF针对SSD的细胞保护作用，并且还通过EGF的合作补充来帮助逆转受损烧伤愈合过程。结果确立了该组合通过加快烧伤患者的伤口愈合过程来帮助逆转银在那里的细胞毒效应。但已经提出了对临床样本中报道的由于渗透屏障导致的对发展SSD的细菌抗性和银抗性生物的可能性的担忧。
[0025] 使用BBIL的rh-EGF和SSD的组合进行有关EGF进入血流的渗透性的研究，结果发现为阴性，这清楚地表明，在BBIL产生的rh-EGF不进入血流。SSD与BBIL的rh-EGF的组合在烧伤患者中的试验显示了应用rh-EGF对皮肤和皮下烧伤的愈合过程的加速效力，这样导致皮肤具有与正常皮肤相同的外观、弹性和颜色并且主要成就是没有肥大性疤痕。这些证据显示rh-EGF对愈合的作用，可能是由于其促细胞分裂效应。
[0026] 虽然rh-EGF和SSD的组合照顾了通过逆转SSD效应延迟伤口愈合的问题，在该制剂最重要的缺点在于，由于SSD的不可渗透能力而常发现磺胺抗性。尽管存在使用银离子管理感染的医疗益处，但已经提出对发展细菌抗性的可能性的担忧，并且已经暗示与抗生素交叉抗性的关联。已经在临床和环境样本中报道了银抗性生物。SSD与EGF的组合只能防止由于银的细胞毒效应并帮助逆转受损的伤口愈合过程。但这种组合不能有效对抗微生物由于渗透屏障对SSD的抗性。这种组合不足以阻止抗银微生物的感染，并且这可能会导致继发性感染的起因，继发性感染可能延长伤口愈合过程，而且还严重威胁烧伤。
[0027] 现有技术中已经测试并使用了大量的抗微生物剂。其中最常见药剂之一是磺胺嘧啶银(SSD)，它已经单独或以与其他抗微生物剂(如葡萄糖酸氯己定(CHG))的组合或以SSD与rh-EGF的组合(如Bharat BiotechInternational Limited所使用的)使用。
[0029] 发明目的：
[0030] 本发明的主要目的是提供用于制备局部制剂的广谱药物组合物，所述局部制剂将用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病。
[0031] 本发明的另一个目的是提供包括抗微生物剂/抗细菌剂和促细胞分裂蛋白的新的局部药物制剂，其具有更广的抗细菌/抗微生物谱并且有效对抗SSD抗性微生物而没有或具有可忽略的副作用。
[0032] 本发明另一个目的是提供含有任何一种生长因子的具有更好和更快伤口愈合性质的新的局部药物制剂。
[0033] 本发明另一个目的是提供乳膏、凝胶或液体形式的新的广谱局部药物制剂，其具有更长的稳定性和贮存期限。
[0034] 发明概述：
[0035] 公开了用于制备用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病的局部制剂的新的协同广谱药物组合物，其中所述制剂可以是乳膏、凝胶或液体形式。
[0036] 本发明的新的协同组合物包括至少三种协同活性成分和一种或多种非活性成分。协同活性成分包括一种或多种广谱杀菌剂、一种或多种广谱抑菌剂和促细胞分裂生长因子。
[0037] 非活性成分被用来为制剂提供基底、渗透性和稳定性，并且包括载体、防腐剂、乳化剂、润肤剂和柔肤剂和一种或多种其他组分。
[0038] 在本发明的一个优选实施方案中，促细胞分裂蛋白 是Bha ra t BiotechInternational Limited开发的重组人表皮生长因子(rh-EGF)(REGEN-DTM)或血小板衍生的生长因子(rh-PDGF-BB)。
[0039] 杀菌剂和抑菌剂选自由以下组成的组：杆菌肽、磺胺嘧啶银(SSD)、硝基糠腙、葡萄糖酸氯己定(CHG)、硫酸多粘菌素B、新霉素、聚维酮碘、磺胺米隆、硝基糠腙和艮他霉素。
[0040] 在本发明的优选实施方案中，广谱杀菌剂是磺胺嘧啶银(SSD)，并且广谱抑菌剂是葡萄糖酸氯己定(CHG)。
[0041] 制剂的协同非活性成分选自由以下组成的组：PEG-30二聚羟基硬脂酸酯、异十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化钛、聚羟基硬脂酸、硬脂酸铝、矾土、硫酸镁、硬脂酸、山梨糖醇、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、氢氧化钠、EDTA二钠、丙烯酰二甲基牛磺TM酸铵/VP共聚物、二棕榈酰羟脯氨酸、Bois II 、鲸蜡醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、轻质液体石蜡、pemulen TR-1、carbopol ultrez、甘露糖醇和净化水。
[0042] 本发明的新的协同组合物具有协同效应，如更广的抗微生物和/或抗细菌谱、对抗SSD抗性微生物的效力、更好且更快的伤口愈合、SSD细胞毒性的逆转、具有持续抗细菌/抗微生物活性的制剂的更长的稳定性和贮存期限。
[0043] 各种试验和测试结果已经显示，该组合物最适合不同程度的烧伤，并且该新的协同组合物还可用于其他适应症，如伤口、皮移植片、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡。
[0044] 研究结果清楚指示，所述的新制剂在不同程度烧伤中非常有效，并且还用于烧伤的快速愈合而无任何感染。对这些新制剂进行稳定性研究，该新制剂的实时和加速时间稳定性研究显示，该组合是稳定的，且在无任何感染的烧伤的快速愈合中更有效。
[0045] 包含rh-EGF、磺胺嘧啶银(SSD)和葡萄糖酸氯己定(CHG)的制剂的新的协同组合物阻止微生物对银的抗性作用，并帮助银在烧伤中的渗透。制剂中即使低浓度的CHG也帮助银在烧伤中的渗透，从而增强银针对抗性微生物的效力。
[0046] BBIL的rh-EGF、SSD和CHG的这种协同组合的选择原理是，磺胺抗性经常是归因于渗透屏障，并且公知氯己定能够影响该屏障，其次是该组合在烧伤治疗中具有与SSD相当的预防性质，并且在前者中的任何一个均未形成抗性，并且使用制剂的三种药剂比单独使用rh-EGF+SSD的伤口愈合过程更快。
[0047] 该新的协同组合帮助rh-EGF逆转银效应，并且还有效对抗广谱的对银抗性的微生物，其中通过添加低浓度的CHG而增加银渗透来阻止该抗性。由于CHG和SSD之间的协同相互作用，获得了组合物的协同结果。制剂的CHG增加了SSD的抗细菌效力。而且，对极高浓度SSD抗性的微生物也可以在SSD与本发明制剂中CHG组合使用时被杀伤。假单胞杆菌和葡萄球菌菌株的一些菌种对磺胺的抗性是由于以上段落中解释的屏障机制。但是对于CHG和SSD组合，结论是CHG没有充分改变膜以允许含氮碱基、核苷酸或核苷外流，改变足以允许磺胺嘧啶(sulphadizine)分子进入，从而使烧伤中的微生物彻底减少。
[0048] 因此，CHG和SSD与本发明新制剂中BBIL的rh-EGF的协同效应通过局部预防作用提供了对烧伤感染的最有效控制，并且用于治疗。
[0050] 图1是显示制剂中使用不同浓度rh-EGF的就动物数目而言的伤口愈合百分比的几何表示。
[0051] 图2是显示制剂中使用不同浓度rh-PDGF-BB的就动物数目而言的伤口愈合百分比的几何表示。
[0052] 图3是显示使用不同制剂组合物的烧伤患者的伤口愈合百分比的几何表示。
[0053] 图4是显示通过ELISA方法评估新制剂中rh-EGF含量的几何表示。
[0054] 图5是新制剂对金黄色葡萄球菌的动力学比较的图解表示。
[0055] 图6是本发明制剂的加速稳定性研究的几何表示。
[0056] 图7是本发明制剂的实时稳定性研究的几何表示。
[0057] 详述：
[0058] 本文公开了本发明的详细实施方案，然而要理解，公开的实施方案仅是本发明的示例，本发明可以各种形式实施。因此，本文公开的具体结构和功能细节不应当被解释为限制性的，而仅仅作为权利要求的基础并作为教导本领域技术人员以基本上任何适当详细结构不同地利用本发明的代表性基础。而且，本文使用的术语和短语意图不是限制性的，而是提供本发明的可理解的描述。
[0059] 本发明涉及用于制备用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病的乳膏或凝胶或液体形式的局部制剂的新的协同广谱药物组合物。
[0060] 本发明的新的协同组合物包括至少三种协同活性成分和一种或多种非活性成分。协同活性成分包括一种或多种广谱杀菌剂、一种或多种广谱抑菌剂和促细胞分裂生长因子。
[0061] 非活性成分被用来为制剂提供基底、渗透性和稳定性，并且包括载体、防腐剂、乳化剂、润肤剂和柔肤剂和一种或多种其他组分。
[0062] 在本发明的一个优选实施方案中，促细胞分裂蛋白 是Bha ra t BiotechInternational Limited开发的重组人表皮生长因子(rh-EGF)(REGEN-DTM)或生长因子，如血小板衍生的生长因子(rh-PDGF-BB)。
[0063] 杀菌剂和抑菌剂选自由以下组成的组：杆菌肽、磺胺嘧啶银(SSD)、硝基糠腙、葡萄糖酸氯己定(CHG)、硫酸多粘菌素B、新霉素、聚维酮碘、磺胺米隆、硝基糠腙和艮他霉素。
[0064] 在本发明的优选实施方案中，选择的广谱杀菌剂是磺胺嘧啶银(SSD)，并且广谱抑菌剂是葡萄糖酸氯己定(CHG)。
[0065] 制剂的协同非活性成分选自由以下组成的组：PEG-30二聚羟基硬脂酸酯、异十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化钛、聚羟基硬脂酸、硬脂酸铝、矾土、硫酸镁、硬脂酸、山梨糖醇、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、氢氧化钠、EDTA二钠、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、二棕榈酰羟脯氨酸、Bois IITM、鲸蜡醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、轻质液体石蜡、pemulen TR-1、carbopol ultrez、甘露糖醇和净化水。
[0066] 在本发明的一个优选实施方案中，新的协同组合物以产生协同效应的期望比例包括促细胞分裂蛋白(rh-EGF)、杀菌剂(SSD)和抑菌剂(CHG)，所述协同效应如更广的微生物和/或细菌覆盖、对抗银微生物的效力、更好且更快的伤口愈合、SSD细胞毒性的逆转、SSD对银效应的逆转、具有持续抗细菌/抗微生物活性的制剂的更长的贮存期限。
[0067] 重组人表皮生长因子(rh-EGF)(Bharat Biotech International Limited的REGEN D)是公知的生长因子，其已经用于治疗和管理诸如伤口、皮移植片、烧伤、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡的适应症。rh-EGF属于生长因子家族，已知其调节细胞增殖、迁移和分化。还已知rh-EGF用作促细胞分裂原，并且还作为许多细胞类型的分化因子。虽然rh-EGF帮助伤口愈合，但重要的是防止烧伤管理期间的感染。
[0068] SSD是烧伤的标准治疗。但一些研究显示，该化合物延迟伤口愈合过程(这对于二级和三级烧伤是显著的)，因为利用其受体的生长促进因子的产生被延迟或减少。
[0069] 为了防止银抗性微生物的效应并帮助银针对抗性微生物的渗透，开发了本发明的新制剂，其中向SSD和rh-EGF的组合添加额外药剂CHG。组合背后的原理是，即使低浓度的CHG也帮助银针对烧伤中抗性微生物的渗透，从而帮助银针对抗性微生物的效力。
[0070] 葡萄糖酸氯己定是结合角质层的二双胍，提供了经6小时的持续杀细菌和杀真菌活性，即使当从区域擦去时。它在有机材料(例如全血)存在下不失去其效力，它是重要的抗菌剂、消毒剂、抗细菌牙洗剂和防腐剂。它具有对抗革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌、病毒和真菌的抗微生物谱。CHG结合细菌细胞壁和胞质组分，导致改变的渗透平衡和胞质组分沉淀。
[0071] 使用该新的协同组合物确立的结果显示了通过添加rh-EGF防止银的细胞毒性而逆转银效应。CHG的添加使得该新组合通过增加银针对抗性微生物的渗透性而有效对抗广谱的微生物。
[0072] 该新的协同制剂还显示了以其组合在体外分析中对微生物减少的效应，其中该协同组合有效对抗广谱的抗生素抗性微生物。结果确立，该新的协同组合物是高度稳定的，具有超过两年的贮存期限，其用作用于治疗由烧伤引起的不同程度的伤口以及用于其他适应症(如伤口、皮移植片、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡)的局部药物制剂。
[0073] 在本发明中，使用标准的可用方法测量制剂中每种组分的浓度。通过用从5μg、10μg和15μg开始的不同浓度的rh-EGF并维持SSD和CHG在最佳浓度进行动物试验[实施例1]并在烧伤患者中进行试验[实施例3]来确定rh-EGF的效力。
[0074] 通过用从1μg、3μg和5μg开始的不同浓度的rh-PDGF-BB并维持SSD和CHG在最佳浓度进行动物试验[实施例2]来确定rh-PDGF-BB的效力。
[0075] 通过验证的ELISA方法来估计rh-EGF浓度[实施例4]。
[0076] 为了估计新制剂中的SSD，基于美国药典中可用的测定方法来进行测定。这些估计的结果显示，可以估计向乳膏中添加的SSD的精确量[实施例5]。
[0077] 为了估计新制剂中的CHG，基于英国药典中可用的测定方法来进行测定[实施例5]。
[0078] 含有rh-EGF、SSD和CHG的这种新的协同制剂还显示以其组合在体外分析中对微生物减少的效应，其中如果该协同组合首次有效对抗广谱的抗生素抗性微生物，则动力学起作用[实施例6]。
[0079] 在本发明中，对包含SSD、CHG和rh-EGF的新制剂进行加速和实时稳定性研究，并且结果清楚显示这三种成分是稳定的，在所有制剂的添加的组合物中没有任何减少或降低，并且该新制剂稳定超过两年。实施例
[0080] 实施例1：选择不同浓度的rh-EGF来测试在动物模型中的效力
[0081] 对于新的协同制剂组合SSD、CHG和添加第三药剂，即BBIL的rh-EGF，从5μg、10μg和15μg变化，以选择这三种药剂的最佳组合。对这些新制剂进行稳定性研究。在设计的动物模型中应用稳定的制剂以检查这些新制剂的效力。
[0082] 对于新制剂的效力，在动物模型中测试8种组合的制剂：
[0083] 1.1％磺胺嘧啶银乳膏
[0084] 2.1％磺胺嘧啶银+rh-EGF10μg/g乳膏
[0085] 3.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF5μg/g乳膏
[0086] 4.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF10μg/g乳膏
[0087] 5.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF15μg/g乳膏
[0088] 6.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF5μg/g凝胶
[0089] 7.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF10μg/g凝胶
[0090] 8.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF15μg/g凝胶
[0091] 选择共计96只大鼠[48只雄性和48只雌性]来测试rh-EGF的新协同制剂的效力。将总动物群体分成两个主要组，作为测试组的组I和作为对照组的组II。每组再分为8个亚组，其中这8组应用上述组合的8种不同的制剂，所述制剂具有从5μg/g、10μg/g和15μg/g开始的不同浓度rh-EGF乳膏和凝胶。
[0092] 表1：新制剂和动物数目数据。
[0093]
[0094] 动物模型中的烧伤产生：
[0095] 使用测试和对照组动物来产生烧伤。使用特制黄铜棒来在大鼠中产生烧伤。黄铜棒在75±2℃热水浴中维持15±1min。在实验开始前一天，给动物剃出2x2x2cm大小的区域。从水浴取出黄铜棒并在大鼠皮肤上放置15-20秒的短时段，然后立即拿开。以当棒触碰动物皮肤时应该产生约1cm伤口的方式选择棒直径。对于每只动物，使用单独无菌棒来预防动物中可能存在的任何感染或从一只动物到另一只动物的任何传染(transferof infection)。
在大鼠上产生烧伤30分钟之后，应用上述五种新的基于乳膏的制剂。用无菌棉拭子将研究制剂和对照均匀涂布在烧伤区域，每天两次，直至伤口愈合，或者直至六周结束时。在应用之前，对动物进行任何可能的基本烧伤管理。
在大鼠上产生烧伤30分钟之后，应用上述五种新的基于乳膏的制剂。用无菌棉拭子将研究制剂和对照均匀涂布在烧伤区域，每天两次，直至伤口愈合，或者直至六周结束时。在应用之前，对动物进行任何可能的基本烧伤管理。
[0096] 该研究的主要目的是愈合持续时间，组I病例中的愈合持续时间与组II相比显著减少超过40％。与对照组相比，在新制剂组中观察到上皮形成的次要终点(secondary end point)。乳膏和凝胶制剂之间的效力差异很小。乳膏制剂与凝胶制剂相比更有效，并且这些乳膏和凝胶制剂都优于其他两种正常制剂。在3至8新制剂亚组中观察到没有显著的疤痕增生或任何色素沉积变化。所有新制剂动物的烧伤愈合持续时间不相似，但是愈合时间百分比与对照组动物相比超过50％。
[0097] 表2：新制剂队列数据。
[0098]
[0099] 用这些新制剂试验的96只动物中，所有新制剂动物的烧伤愈合持续时间不相似，但是结果清楚显示这些制剂促进了愈合时间比其对照组更快。
[0100] 表3：新制剂队列数据。
[0101]
[0102]
[0103] 基于上述愈合时间百分比，得出结论：包括1％SSD+0.02％CHG+10μg/g rh-EGF乳膏的组合物的局部制剂是用于烧伤患者的最佳制剂。制剂经历了加速时间和实时稳定性研究，所述组合物分别对于加速时间是在+25℃±2℃的温度下而对于实时是在5℃±3℃温度下，并且结果确立了该组合在+2℃至8℃的贮存温度下高度稳定超过两年。
[0104] 参考图1，其显示了制剂中使用不同组成的活性成分(即rh-EGF、SSD和CHG)在动物中伤口愈合的百分比。乳膏制剂的结果显示，当制剂中使用仅1％SSD时伤口愈合百分比仅为约60％。使用1％SSD和10μg/g rh-EGF的组合使伤口愈合提高至约78％。使用1％SSD、0.02％CHG和5μg/g rh-EGF的组合的伤口愈合百分比是约95％。然而，使用包含1％SSD、
0.02％CHG和10μg/g rh-EGF的制剂的伤口愈合百分比将近100％。当与具有相同组成的乳膏和凝胶制剂相比较时，结果显示，乳膏制剂具有比凝胶制剂略高的愈合速率。
0.02％CHG和10μg/g rh-EGF的制剂的伤口愈合百分比将近100％。当与具有相同组成的乳膏和凝胶制剂相比较时，结果显示，乳膏制剂具有比凝胶制剂略高的愈合速率。
[0105] 实施例2：选择不同浓度的rh-PDGF-BB测试在动物模型中的效力：
[0106] 对于新的协同制剂组合SSD、CHG和添加的第三药剂，即rh-PDGF-BB，从1μg/g、3μg/g和5μg/g变化，以选择这三种药剂的最佳组合。通过进行上文解释的烧伤产生，在设计的动物模型中应用这些制剂以检查这些新制剂的效力。
[0107] 对于新制剂的效力，在动物模型中测试5种组合的制剂：
[0108] 1.1％磺胺嘧啶银乳膏
[0109] 2.1％磺胺嘧啶银+rh-PDGF-BB5μg/g乳膏
[0110] 3.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-PDGF-BB1μg/g乳膏
[0111] 4.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-PDGF-BB3μg/g乳膏
[0112] 5.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-PDGF-BB5μg/g乳膏
[0113] 选择共计60只大鼠[30只雄性和30只雌性]来测试rh-PDGF-BB的新协同制剂的效力。将总动物群体分成两个主要组，作为测试组的组I和作为对照组的组II。每组再分为5个亚组，其中这5组应用上述组合的5种不同的制剂，所述制剂具有从1μg/g、3μg/g和5μg/g乳膏开始的不同浓度rh-PDGF-BB。
[0114] 表4：新制剂和动物数目数据。
[0115]
[0116] 该研究的主要目的是愈合持续时间，组I病例中的愈合持续时间与组II相比显著减少超过30％。所有新制剂动物的烧伤愈合持续时间不相似，但是愈合时间百分比与对照组动物相比超过30％。
[0117] 表5：新制剂队列数据。
[0118]
[0119]
[0120] 参考图2，其显示了制剂中使用不同组成的活性成分(即rh-PDGF-BB、SSD和CHG)在动物中伤口愈合的百分比。含有5μg/grh-PDGF-BB、SSD和CHG乳膏制剂的结果显示当与其他组相比时更好的伤口愈合百分比。
[0121] 实施例3：烧伤患者中新制剂的安全性和效力
[0122] 已经将几种生长因子，如EGF、FGF和TGF，鉴定为调节蛋白，其协调愈合过程并参与细胞增殖、分化和器官生长的调节。已经进行了各种人类研究以评价用rh-EGF软膏局部应用的烧伤愈合的加速。对于新制剂的效力，在烧伤患者中测试了5种组合的制剂：
[0123] 1.1％磺胺嘧啶银(对照)
[0124] 2.1％磺胺嘧啶银+rh-EGF10μg/g(组I)
[0125] 3.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF5μg/g(组II)
[0126] 4.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF10μg/g(组III)
[0127] 5.1％磺胺嘧啶银+0.02％葡萄糖酸氯己定+rh-EGF15μg/g(组IV)
[0128] 在本研究中，进行新协同制剂对比研究以评价这些制剂与对照组在烧伤患者的浅表(一级-仅影响皮肤外层)和部分厚度(二级-影响皮肤外层和下层)中的安全性和效力。包括男性和女性的总计50名患者被招募至两组-40名患者的组I至组IV(新组合)和10名患者的对照组。为了评价和对比测试组与对照组中完全伤口闭合的受试者的比例，在烧伤患者中，使用以下参数：
[0129] (a)愈合速率(通过测量伤口愈合)。
[0130] (b)完全伤口闭合所需的时间(天数)。
[0131] 将灭菌的透明片放在伤口上并使用记号笔描记其周边。描记在上层片上进行；与伤口接触的下层片在使用后丢弃。将透明物放在公制方格纸上，公制方格纸计数1mm2方块的数量。研究药物，即测试和对照，被提供于乳膏基底中。用无菌棉拭子将研究药物和对照均匀涂布在烧伤区域，每天两次，直至伤口愈合，或者直至六周结束时。在应用之前，对动物进行任何可能的基本烧伤管理护理，如清除腐皮或脓液。以平均值(±SD)提供数量变量，并且以不同方式分析对照和治疗组之间的其他特征。
[0132] 将总计50名患者招募入对照组和测试组。研究队列在表6。主要目的，即愈合持续时间，在组III(SSD+CHG+rh-EGF10μg/g)中与对照组相比显著减少超过50％。对照和测试组(SSD+CHG+rh-EGF10μg/g)中任何患者的烧伤表面积不超过20％总体表面积。测试组中的平均愈合时间是5天，而对照组是12天。
[0133] 第二目的，即上皮形成的质量，通过完全愈合之后进行的创面活组织检查术来观察，其显示组III(SSD+CHG+rh-EGF10μg/g组)与对照组相比更好的上皮形成。与对照区域相比，附属器(adenexal)再生和胶原成熟也更好。组III(SSD+CHG+rh-EGF10μg/g)中存在一例伤口表面刺激，其在24小时内在没有任何药物治疗的情况下消退。在该组中注意到没有显著的疤痕增生或色素变化。
[0134] 表6：烧伤患者研究队列数据。
[0135]
[0136] 表7：伤口愈合的烧伤患者研究数据
[0137]
[0138]
[0139] 表8：研究中烧伤患者的伤口愈合百分比范围
[0140]
[0141] 根据上述结果，显然，新协同制剂(SSD+CHG+rh-EGF10μg/g)加速了浅表和部分厚度烧伤的上皮形成，这导致更快的烧伤伤口闭合、减少的住院和烧伤患者中更好的预后。越来越多的证据表明，外源性生长因子是组织修复所必需的。它们可以用作内源性生长因子及其基因表达的诱导剂，或者用作在加速伤口愈合中的组织修复细胞的刺激剂。在最近流行的逐渐增加的烧伤事件情况中，预期涉及增强临床愈合的生长因子(例如rh-EGF)的先进疗法在未来发挥重要作用。
[0142] 图3是表8所示结果的几何表示，显示了烧伤患者中伤口愈合的百分比(人类数据)。图3的几何表示证实，由于增强彼此的抗微生物和伤口愈合性质的成分的协同相互作用，使用包含SSD+CHG+rh-EGF的制剂获得了最佳伤口愈合结果。
[0143] 该新的协同制剂组合的主要优点是防止由于细菌侵入在烧伤处引起的感染，且同时rh-EGF愈合烧伤而无细菌感染侵入，实现烧伤的快速愈合。除了防止感染，最重要的优点是逆转由于SSD效应而受损的伤口愈合，通过使细胞在生长因子rh-EGF存在下暴露以再生组织至最佳水平。该新的协同制剂组合物在减少感染方面更有效，从而实现快速的伤口愈合速率和由烧伤引起的伤口的愈合。组合背后的原理是，即使低浓度的葡萄糖酸氯己定也帮助银在烧伤中的渗透，从而帮助银针对抗性微生物的效力。
[0144] 实施例4：新制剂中rh-EGF的评估
[0145] 使用固相夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)来评估rh-EGF。已经将对人rh-EGF特异性的多克隆抗体涂布至微量滴定条的孔上。将样品吸取进入这些孔，包括rh-EGF的标准品，对照。主要原理是在第一孵育期间，rh-EGF抗原结合至一个位置上的固定(捕获)抗体。洗涤之后，添加对rh-EGF特异性的生物素化单克隆抗体。在第二孵育期间，该抗体结合第一孵育期间捕获的固定rh-EGF。去除过量第二抗体之后，添加链霉亲和素-过氧化物酶(酶)。其结合生物素化抗体。在第三孵育和洗涤以去除所有未结合酶之后，添加底物溶液，结合的酶作用于底物而产生颜色。该有颜色的产物的强度与原始样品中存在的rh-EGF的浓度成正比。使用该方法评估上述新制剂中rh-EGF的含量。结果清楚显示，添加的rh-EGF含量与说明书相同，并且蛋白是活性的。
[0146] 图4是显示通过以上段落实施例3中解释的ELISA方法评估新制剂中的rh-EGF含量的几何表示。
[0147] 实施例5：新制剂中磺胺嘧啶银的评估和新制剂中葡萄糖酸氯己定的评估[0148] 按照USP27第1740-1741页中规定的方法进行SSD测定。这些评估的结果显示，可以评估添加至乳膏的SSD的精确量。
[0149] 还根据BP2005，BP第III卷，Formulation preparations：SpecificMonographs Lidocaine and Chlorhexidine gel(制剂制备：专题利多卡因和氯己定凝胶)中规定的方法进行CHG测定。这些评估的结果显示，可以评估添加至乳膏的CHG的精确量。
[0150] 实施例6：新制剂的协同机制的动力学
[0151] 通过分析该新组合物对测试生物的生长的培养物的效应，体外研究了BBIL的rh-EGF与SSD和CHG的协同机制。使用OD600值为0.1至0.2的金黄色葡萄球菌的过夜培养物。通过将温度条件维持在37℃来进行完整实验程序。将具有三种组分(即BBIL的rh-EGF、SSD和CHG)的新的协同组合物与BBIL的rh-EGF和SSD组合相比较。接种时间作为零时，在将组合添加入培养物之后，以规律的时间间隔读取读数。为了测量新的协同制剂的动力学，以培养物光密度与时间绘制曲线。根据结果得出结论：具有三种组分(即BBIL的rh-EGF、SSD和CHG)的新组合物与BBIL的rh-EGF和SSD组合相比在减少微生物计数方面更有效。该结果清楚指示了BBIL的rh-EGF、SSD和CHG的这种新的协同组合的优点，其可用于烧伤。
[0152] 参考图5，是新制剂对实施例6中解释的金黄色葡萄球菌的动力学比较的几何表示，使用了对照制剂(1％SSD)、BBIL的rh-EGF+SSD的组合、以及BBIL的rh-EGF+SSD+CHG的组合。
[0153] 实施例7：使用磺胺嘧啶银、葡萄糖酸氯己定和rh-EGF的组合的新制剂的稳定性研究
[0154] 在实时和加速稳定性条件下评价了包含SSD、葡萄糖酸氯己定和rh-EGF乳膏的新制剂的稳定性。实时研究在+2℃至+8℃的贮存温度下进行24个月，并且加速研究在+25℃±2℃的贮存温度和60％RH±5％下进行6个月。该稳定性研究背后的原理是确立包含SSD、葡萄糖酸氯己定和rh-EGF乳膏的新制剂的贮存期限在2-8℃的贮存温度下持续24个月。
[0155] 根据结果得出结论，作为用于烧伤的药物组合物制备的新制剂在2-8℃的贮存温度下稳定超过两年。
[0156] 图6是显示包含SSD+CHG+rh-EGF的本发明新组合物的制剂的加速稳定性研究的几何表示。加速稳定性测试显示，含有本发明组合物的制剂即使在六个月结束之后仍具有95％rh-EGF活性。这些结果确立了新制剂在上述实施例7中解释的加速研究条件下稳定，具有95％或更高的rh-EGF活性。
[0157] 参考图7，是制剂中使用SSD+CHG+rh-EGF的新组合物进行的实时稳定性研究的几何表示。测试结果显示，新制剂即使在上述实施例7中解释的贮存条件下24个月之后仍具有95％或更高的rh-EGF活性。因此，新制剂更稳定并且具有更长的贮存期限。
[0158] 实施例8：使用本发明的新组合物制备用于局部应用的不同制剂。
[0159] 可以使用例如在本文之前段落中描述的包含rh-EGF、SSD和CHG的本发明新组合物制备不同的局部乳膏制剂，用于在伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡中应用。可以使用新组合物来制备局部制剂，其中可以根据要求添加作为基底、载体、防腐剂、乳化剂、润肤剂、柔肤剂和皮肤软化剂等的其他成分。以下是可以使用与本发明新组合物组合的不同成分制备的乳膏制剂的几个实例。
[0160] 应该理解，下表中给出的乳膏制剂仅仅是为了本领域技术人员更好的理解以及为了示例说明目的，仅显示了本发明的不同实施方案。权利要求的范围不应仅限于这些乳膏制剂，因为若干其他乳膏制剂也可以与本发明的新组合物组合制备，而不偏离本发明的精神和范围。
[0161] 乳膏制剂-1
[0162]
[0163] 乳膏制剂-2
[0164]
[0165] 乳膏制剂-3
[0166]
[0167]
[0168] 乳膏制剂-4(SLVRGENTM，含有包含rh-EGF+SSD+CHG的本发明新组合物的乳膏制剂的实例)
[0169]
[0170] 参考文献：
[0171] 1.Kucan JO .Robson MC，Heggers JP.等人.Comparison of silversulfadiazine，povidoneiodine and physiologic saline in the treatment ofchronic pressure ulcers.JAmGeriatr Soc.1981：29：232-235.
[0172] 2.McCauley RL，Li YY，Chopra V，Herndon DN，Robson MC.Cytoprotection of human dermal fibroblasts against silver sulfadiazine usingrecombinant growth factors.J Surg Res.1994年4月；56(4)：378-84.
[0173] 3.Vijay Viswanathan，MD，PhD；Sharad Pendsey，MD，MDDG；N.Sekar，MS，MNAMS，MCh，FICS；G.S.R.Murthy，PhD.A Phase III Study toEvaluate the Safety and Efficacy of Recombinant Human Epidermal GrowthFactor(REGEN-DTM150)in healing Diabetic Foot ulcers.Wounds2006；18(7)：186-196.
[0174] 4.Lev-Ran A，Hwang DL：Epidermal growth factor and platelet-derivedgrowth factor in blood in diabetes mellitus.Acta Endocrinol(copenh)1990；123(3)(九月)：326-330.
[0175] 5.Brown G L，Nannoy L B，Gritten J，Cramer A B，Yancey JM，Curtsinger LJ3rd等人.Enhancement of wound healing by topical treatmentwith Epidermal growth factor.N Eng J Med1989；321(2)(七月(13))：76-9.
[0176] 6.K.Sharma，P.V.Cherish Babu，P.Sasidhar，V.K.Srinivas，V.KrishnaMohan，Ella Krishna.Recombinant human epidermal growth factor inclusionbody solubilization and refolding at large scale using expanded-bedadsorption chromatography from Escherichia coli，Protein Expression andPurification，2008，60，7-14.
[0177] 7.Greenhalgh，DG.The Role of Growth Factors in Wound Healing.Journal of Trauma-Injury Infection&Critical Care1996；41(1)：159-7.
[0178] 8.Buckley A，Davidson JM，Kamerath CD，Woodward SC.Epidermalgrowth factor increases granulation tissue formation dose dependently.J.SurgRes.1987；43(4)322-328.
[0179] 9.Eaglstein WH，Mertz PM，Alvarez OM.Effect of topically appliedagents on healing wounds.Clin Dermatol.1984；2：112-115.
[0180] 10.Brown MRW，Wood SM.Relation between cation and lipid contentof cell walls of Pseudomonas aen～ginosa，P roteus～′trlgaris.and KlebsieNaaerogenes and their sensitivity to polymyxin B and other antibacterial agents.JPharm Pharmacol.1972；24：215-228.
[0181] 11.Cooper ML，Boyce ST，Hansbrough JF，等人.Cytotoxicity tocultured human keratinocytes of topical antimicrobial agents.J SurgRes.1990；48：190-195，
[0182] 12.Monafo W W，W est MA.Current treatment recommendations fortopical bum therapy.Drugs.1990；40：364-373.
[0183] 13.Lineaweaver W，McMorris S，Soucy D，Howard R.Cellular andbacterial toxicities of topical antimicrobials.Plast Reconstr Sulg.1985：75：394-j96.[0184] 14.Cooper ML.Laxer JA，Hansbrough JF.The cytotoxic effects ofcommonly used topical antimicrobial agents on human fibroblasts andkeratinocytes.J Trauma.1991；31：775-784.
[0185] 15.McCauley RL，Linares HA，Pelligrini V，等人.In vitro toxicity oftopical antimicrobial agents to human fibroblasts.J SUT Res.1989；46：267-274.
[0186] 16.Lindberg RB，Moncrief JA，Mason AD Jr.Control of experimentaland clinical burn wound sepsis by topical application of sulfamyloncompounds.Ann NYAcad Sci.1968；150：950-960.
[0187] 17.Taddonio TE，Thomson PD，Smith DJ Jr，Prasad JK.A survey ofwound monitoring and topical antimicrobial therapy practices in the treatmentof burn injury.J Bum Care Rehabil.1990；11：423-427.
[0188] 18.LOWBURYE，.J.L.，LILLEYH，.A.&BULL，J.P.1960Disinfection of the skin of operation sites.British Medical Journal 2，1039-1044.
[0189] 19.HAROLD，F.M.，BAARDAJ，.R.，BARON，C.&ABRAMS，A.1969Dio9and chlorhexidine；Inhibition of membrane-bound ATPase and ofcation transport in Streptococcus faecalis.Biochemica et Biophysica Acta 183，129-136.
[0190] 20.Hansbrough JF，Zapata-Sirvent RL，Cooper ML.Effects of topicalantimicrobial agents on the human neutrophil resp～ratoryb urst.Arch Sulg.1991；126：603-608.
[0191] 21.Cason JS，Jackson DM，Lowbury EJ，Ricketts CR.Antiseptic andaseptic prophylaxis for burns：use of silver nitrate and of isolators.BrMed J1966；2(525)：1288-94.
[0192] 22 .Gayle WE，Mayhall CG，Lamb VA，Apollo E，Haynes BW.ResistantEnterobacter cloacae in a burn center：the ineffectiveness of silversulfadiazine.J Trauma1978；18(5)：317-23.
[0193] 23.Wenzel RP，Hunting KJ，Osterman CA，Sande MA.Providenciastuartii，a hospital pathogen：potential factors for its emergence andtransmission.Am JEpidemiol1976；104(2)：170-80.
[0194] 24.Klasen HJ.A historical review of the use of silver in the treatment ofburns.II.Renewed interest for silver.Burns2000；26(2)：131-8.[0195] 25.Bridges K，Lowbury EJ.Drug resistance in relation to use of silversulphadiazine cream in a burns unit.J Clin Pathol1977；30(2)：160-4.[0196] 26.Silver S.Bacterial silver resistance：molecular biology and uses andmisuses of silver compounds.FEMS Microbiol Rev2003；27(2-3)：341-53.[0197] 27.Li XZ，Nikaido H，Williams KE.Silver-resistant mutants ofEscherichia coli display active efflux of Ag+and are deficient in porins.JBacteriol1997；179(19)：6127-32.
[0198] 28.Fuller FW，Parrish M，Nance FC.A review of the dosimetry of 1％silver sulfadiazine cream in burn wound treatment.J Burn Care Rehabil1994；15(3)：213-23
[0199] 29.Ae-Ri Cho Lee，Hyunju Leem，Jaegwan Lee，Kyung Chan Park.Reversal of silver sulfadiazine-impaired wound healing by epidermal growthfactor.Biomaterials2005；26：4670-4676
[0200] 30.HUGO，W.B.&LONGWORTHA，.R.1964Some aspects of themode of action of chlorhexidine.Journalof Pharmacy and Pharmacology16，655-662.
[0201] 31.Annear DI，Mee BJ，Bailey M.Instability and linkage of silverresistance，lactose fermentation，and colony structure in Enterobacter cloacaefrom burn wounds.J Clin Pathol.1976；29(5)：441-443.
[0202] 32.Carr HS，Rosenkranz HS.R factor in Enterobacter cloacae resistantto silver sulfadiazine.Chemotherapy.1975；21(1)：41-44.
[0203] 3 3 .Be ll y R T ，Ky dd G C .S il ve r re s is ta nc e i n microorganisms.DevelopIndustrial Microbiol.1982；23：567-577.
[0204] 34.Choudhury P，Kumar R.Multidrug-and metal-resistant strains ofKlebsiella pneumoniae isolated from Penaeus monodon of the coastal watersof deltaic Sundarban.CanJMicrobiol.1998；44(2)：186-189.
[0205] 35.Robb EC，Fitz DG，Nathan P.Delivery of topical antimicrobialagents silver sulfadiazine，gentamicin and nystain to infected burn wounds inrats from preloaded synthetic dressings.Trans Am Soc Artif Inter Organs1980；26：533-6.
[0206] 36.Robb EC，Nathan P.Control of experimental burn wound infection：comparative delivery of antimicrobial agent(silver sulfadiazine)either from acream base or from a solid synthetic dressing.J Trauma1981；21：889-93.[0207] 前文对实施方案的详细描述参考附图、实施例和表格，其示例说明本发明的具体实施方案。具有不同制剂和组合物的其他实施方案不脱离本发明的范围。术语“本发明”或类似用语根据本说明书中提出的申请人的发明的许多可选的方面或实施方案的某些具体实施例来使用，并且其使用或其不存在都不意图限制申请人的发明范围或权利要求的范围。仅为了读者方便，将本说明书分成多个部分。标题不应该被解释为限制本发明的范围。
定义意图作为本发明说明书的一部分。要理解，本发明各个细节可以改变而不脱离本发明的范围。而且，前文的“参考文献”和说明书仅为了示例说明的目的，而不是限制目的。
定义意图作为本发明说明书的一部分。要理解，本发明各个细节可以改变而不脱离本发明的范围。而且，前文的“参考文献”和说明书仅为了示例说明的目的，而不是限制目的。
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